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VI.
Isidor I. Rabi (1898-1988) Nobel 1944- Llev la teora de Pauli a la prctica al hacer pasar un haz de molculas de LiCl a travs de una cmara de vaco y manipular el haz con distintos campos magnticos para estudiar cmo afectaba el campo magntico a la trayectoria de las molculas. Por sugerencia de Gorter sometieron un haz molecular a ondas de radio (seales electromagnticas dentro del intervalo de la radiofrecuencia o la radiodifusin) mientras variaban la potencia del campo magntico. Con estos experimentos descubrieron una serie de resonancias dentro de una molcula simple que les permiti "ver" cmo los tomos individuales estn unidos entre s y cmo sus ncleos se ven afectados por los tomos vecinos.
Nobel 1952- Demostraron que los ncleos de un campo magntico intenso absorben REM, como consecuencia del desdoblamiento de los niveles de energa inducido por el campo magntico de materia en estado condensado
Antecedentes
La espectroscopia RMN se desarroll con mayor impulso al inicio de la dcada de 1960. Se basa en la propiedad magntica del espn nuclear Los ncleos atmicos que lo muestran son aquellos con nmeros de masa impares: 1H, 15N, 13C, 19F, 17O, 31P
Los ncleos con nmeros atmicos impares y de masa pares como el 2H, 10B, 14N, presentan otro tipo de propiedades magnticas Aquellos tomos con nmeros atmicos y de masa pares, como el 12C, 16O, 32S, no cuentan con propiedades magnticas
Antecedentes
Los ncleos atmicos presentan espines nucleares y por tanto propiedades magnticas tiles para la RMN Sin embargo por ahora nos limitaremos al Hidrgeno o protn, pero no lo correspondiente a un hidrgeno unido covalentemente en los compuestos orgnicos ni se refiere a un hidrgeno atmico libre ni a un protn en disolucin, H+, puesto que en trminos de la RMN nos referimos al ncleo del Hidrgeno o simplemente protn
El ncleo del 1H, que sirve como representante de los otros ncleos con propiedades magnticas
Presenta una distribucin uniforme de carga
Al girar en su eje el protn genera un pequeo momento magntico nuclear (m) y se comporta como una barra magntica
Vector del m
m
N
+
Espn nuclear
=
S
2. Si una muestra conteniendo estos ncleos se coloca bajo la influencia de los polos de un imn con un poderoso campo magntico. Los ncleos adoptan posiciones especficas como la aguja de una brjula
Momentos magnticos nucleares sin campo nucleares en un magntico exterior campo magntico
Ambas orientaciones designadas a= orientada con Bo (+1/2) y b= antiparalela con Bo (-1/2), donde a es ligeramente de menor energa que b en una cantidad que depende de la fuerza del campo
Dependencia de la fuerza del campo magntico aplicado con la diferencia de energa DE entre los espines de los ncleos Existen ms ncleos en posicin a que b y es dependiente de la fuerza del campo aplicado (H0) Por tanto, entre mayor sea el campo aplicado mayor ser la diferencia energtica entre los dos estados de espn 500 MHz 200 MHz
Estado spin b
Energa
DE= hn
Por lo que los equipos requieren imanes con intensidades tan grandes como 14 T
Estado spin a
gBo gh DE hn o Bo n o 2 2
Al igual que en los otros tipos de espectroscopia las transiciones entre los niveles de energa se pueden producir por absorcin o emisin de radiacin EM de una frecuencia no que corresponda en energa a DE
Bo mb = - mz m
Con un campo aplicado Bo
gh Bo 4
mb = -
Energa
Sin campo 0
DE
gh Bo 2
Bo ma = + mz m
gh Bo 4
2. Espectrmetros de RMN
En la actualidad se utilizan dos tipos de generales de espectrmetros de RMN: A. De Onda Continua (CW) 1953 En estos instrumentos se monitoriza la seal de absorcin a medida que se barre lentamente la frecuencia de la fuente o se mantiene constante la frecuencia de la fuente mientras se vara la intensidad del campo magntico. Son ms usados para determinar la hidrogenacin del petrleo, presencia de agua en aceites, productos alimentarios y agrcolas. B. De impulsos o de transformada de Fourier (FT/RMN) 1970s En estos instrumentos la muestra se irradia con impulsos peridicos de energa RF que atraviesan la muestra perpendicularmente al campo magntico de intensidad constante, dando una seal temporal que decae en el intervalo entre impulsos, seal que por la FT se convierte en una seal del dominio de la frecuencia generando un espectro.
Los Espectrmetros de RMN constan de cuatro partes esenciales: 1. Un imn estable con un controlador que produce un campo magntico preciso 2. Un transmisor de radiofrecuencia (rf), de alta precisin 3. Un detector para medir la absorcin de energa de rf de la muestra 4. Una computadora y un registrador para analizar la informacin generada y sea transducida y traducida a un espectro de RMN
Tubo portamuestra
Oscilador de RF
Bobina osciladora
Detector de RF
Bobina detectora
Registrador
imn
imn
Bo
2. Los FT-RMN mantienen constante el campo aplicado mientras se aplican breves pulsos de rf que excita a todos los ncleos de manera simultnea. El pulso aplicado cubre un amplio rango de rf por lo que los protones absroben de manera individual la rf necesaria para entrar en resonancia.
3. A medida que dichos ncleos vuelven a su posicin original emiten rf de baja energa equivalente a la DE entre estados del espn. La intensidad disminuye a medida con el tiempo a medida que todos los ncleos regresan a sus estado original.
4. La computadora registra las absorciones y la presenta como un espectro de RMN (por ejemplo una seal de 5 mg de muestra la resuelve en 2 seg)
Un espectro de RMN es una grfica de la intensidad de seal en funcin de la frecuencia de energa electromagntica que liberan los diversos ncleos de una muestra.
Equipos de RMN
Equipos de RMN
Espectros RMN
Si todos los protones de una molcula
orgnica fueran idnticos, absorberan energa en condiciones idnticas de campo magntico y frecuencia, por tanto la RMN sera de poca o de nada til Sin embargo los compuestos orgnicos contienen tomos de hidrgeno que se encuentran en diferentes ambientes moleculares
Espectros RMN
Por ejemplo, los electrones de enlace entre C-H, O-H, o N-H generan una pantalla electrnica alrededor del ncleo esto hace que difiera el campo magntico efectivo (al aplicar Bo) de un ncleo al otro en la misma molcula y la multiplicidad de pantallas de los protones, Por tanto los protones en las molculas orgnicas muestran resonancia (absorcin de energa al cambiar los espines) a diferentes energas
CH3-CH2-OH
Campo magntico Externo, Bo
C------C-----O
Espectros RMN
La medicin de la resonancia de los dipolos magnticos
El espectro obtenido de la RMN depende mucho de la estructura de la molcula particular, debido a que la energa absorbida da informacin sobre la localizacin del ncleo dentro de la molcula.
Los ncleos adyacentes interaccionan para darnos informacin sobre cual ncleo se encuentra cerca de otro
El objetivo final de la interpretacin de espectros RMN es la identificacin de los compuestos desconocidos y su estructura, puesto que: 1. Se identifican los diferentes tipos de protones y la determinacin del nmero de cada tipo diferente presente en la molcula
2. Se determinan la estructura y desplazamiento qumico 3. Importancia del nmero de picos asociados a cada tipo diferente de protn: acoplamiento espn-espn
1. Identificacin de los diferentes tipos de protones y la determinacin del nmero de cada tipo diferente presente en la molcula a. Equivalencia protnica Similar a la identificacin de hidrgenos primarios, secundarios y terciarios En el CH4 los 4 protones son equivalentes, puesto que su distancias de enlace son iguales y su ambiente intramolecular es idntico para todos, lo mismo para el CH3-CH3 Pero en el propano, hay seis protones primarios equivalentes y dos secundarios
Todos los hidrgenos que estn en el mismo ambiente molecular absorben en la misma posicin en la escala RMN
Por tanto si hay distintas series de protones, habrn distintas series de picos en el espectro, y eso indica series no equivalentes de protones que dan lugar a distintos desplazamientos qumicos de la RMN a Br
H3C
b
CH2
Br
CH2
a
H3C
CH
Br
Br
a
CH2
Br
b. Conteo protnico
El rea bajo cada pico es directamente proporcional al nmero de protones que produce ese pico Se puede determinar manualmente o electrnicamente El proceso ms prctico y bastante certero es la integracin de picos
1. Desplazamiento qumico (d) Los protones situados en diferentes entornos electrnicos presentan grados diferentes de apantallamiento y la absorcin de resonancia ocurre a valores de campo aplicado diferentes o irradiando a frecuencias distintas
2. Acoplamiento spin-spin: es un efecto secundario del entorno y se superpone al d y se observa en la formacin de picos adicionales de la seal esperada, y est relacionada con el tipo de entorno que le rodea al protn, v.g. la cantidad de tomos de hidrgeno adyacentes al tomo al que se encuentra unido el hidrgeno/s en cuestin
Espectros RMN La fuerza del campo aplicado Bo aumenta de izquierda a derecha, por lo que se denomina direccin de campo alto El hecho de que aumente el campo magntico al ir de izquierda a derecha en el espectro significa que la energa requerida para el cambio tambin debe incrementarse al ir de izquierda a derecha La mayora de los protones se pueden localizar en el rango de 0 a 700 Hz
Direccin de la intensidad Bo Espectro generado a 60 MHz
222 Hz
Absorcin TMS
200 2
Campo bajo (Bajo apantallamiento) Alta frecuencia
100 1 Bo
0 0
Campo alto
(Alto apantallamiento) Baja frecuencia
1. Desplazamiento qumico
En la mayora de las mediciones en solventes no polares se utiliza el tetrametil silano ((CH3)4Si, TMS) (se adiciona a una concentracin del 1% al tubo que contiene la muestra con el disolvente orgnico) como patrn de referencia interno Es el patrn de doce hidrgenos equivalentes en forma de un pico agudo que se presenta en un campo ms alto que las absorciones de los protones en la mayora de los compuestos orgnicos Para muestras polares se utiliza el 2,2-dimetil (H2)-2silapentano-5-sulfnico ((CD3)3-Si-CH2CH2CH2-SO3Na DSS).
Los valores de 132 y 222 Hz en el espectro anterior reciben el nombre de desplazamientos qumicos (d) y Se miden en relacin con el patrn de referencia que en ese caso es TMS y estn a campo ms bajo con respecto a l. Se deben a los dos tipos de ncleos presentes en la molcula y dependen de la frecuencia del oscilador RF. En lugar de expresar estos valores en Hz es mejor utilizar una escala independiente de la frecuencia (ya que esta puede variar), la denominada escala delta (d):
1. Desplazamiento Qumico
Es causado por pequeos campos magnticos que se generan por el movimiento electrnico alrededor de los ncleos. Estos campos se oponen por lo general al campo aplicado (Bapl) por consecuencia los ncleos estn expuestos a un campo efectivo que es casi siempre un poco menor que el Bapl.
Cul es la relacin entre la estructura y el desplazamiento qumico? 1 El campo magntico externo se aplica de manera uniforme a toda la molcula 2 Cada tomo de hidrgeno tiene su ambiente electrnico alrededor 3 Los ncleos protegidos por el apantallamiento electrnico requieren de campos magnticos externos ms fuertes, antes de que los cambien los espines de estos ncleos de hidrgeno y aparezcan en el espectro a medida que absorben energa
4 El efecto contrario es la desproteccin, que junto con la proteccin son trminos relativos que varan entre los ncleos, en donde el pico ms lejano hacia abajo del TMS es el ms desprotegido, y el que est ms cercano al TMS ser el menos desprotegido (o ms protegido) 5 Cuando aparece ms de un grupo de picos en el espectro RMN es un reflejo de las diferencias en la fuerza del campo magntico inducido en los distintos puntos de la molcula
En general, los protones unidos a carbonos saturados con hibridacin sp3 absorben en campo mayores, mientras que los protones de carbonos con hibridacin sp2 lo hacen en campos menores; los protones unidos a carbonos enlazados a tomos electronegativos como N, O u X tambin absorben en campos menores.
1. Desplazamiento qumico En esta escala TMS tiene un d = 0 y los picos a campo bajo respecto a TMS tienen valores positivos d y los picos en campo ms alto tienen valores negativos de d Por tanto a escala d los picos del 1,3-dicloropropano se convierten :
Ejemplo: Ahora digamos que se tienen para un espectro de RMN generado a 300 MHz para el CH3-CCl2-CH2-Cl, se tienen dos seales de frecuencias de grupo, una a 669 Hz y otra a 1200 Hz por tanto, indique que desplazamientos se pueden predecir en base a estos resultados, adems indique a que grupos de protones se acoplan probablemente las seales.
Correlacin estructural Los desplazamientos de los protones son prcticamente constantes, por lo que solo ciertos rasgos particulares de ciertas molculas pueden alterarlos Los desplazamientos qumicos generan valiosa informacin de la estructura molecular de la materia, por lo que se han desarrollado tablas de la correlacin estructural con el desplazamiento qumico
La mayor parte de los desplazamientos qumicos del 1H se encuentran en el rango de 0-10 d, el cual puede seccionarse en 5 regiones:
Pronstico de los desplazamientos qumicos en los espectros de RMN-1H Ejemplo: Determine los desplazamientos qumicos de las dos seales en el espectro de RMN del 2,2-dimetilpropanoato de metilo
Recomendacin: Identifique los tipos de protones en la molcula y ntese si es alquilo, vinilo o vecino de un tomo electronegativo; pronostique donde absorbe cada uno usando la tabla 13.3 (diapositiva anterior)
CH3
Son protones de alcanos y absorben cerca de 1 d
O C O CH3
Sus protones absorben en 3.5-4.0 d porque sus protones se encuentran unidos a un carbono unido a un tomo electronegativo
H3C
C CH3
Factores que influyen en las seales de los desplazamientos qumicos (d) El lmite de la frecuencia de absorcin La intensidad del campo externo Impurezas Solventes pH
Temperatura
Concentracin del analito
Efectos de pH
Espectro de RMN 1H del ciclohexano a diferentes temperaturas, seales producto de las diferentes conformaciones del anillo aliftico
Factores que influyen en las seales de los desplazamientos qumicos (d) A. Grupos sustractores de electrones y su influencia en el desplazamiento qumico En general, la presencia de grupos sustractores de electrones (electronegativos) en una molcula causa un desplazamiento qumico hacia campo bajo (a la izquierda respecto a TMS) de los protones
El efecto inductivo es el causante principal, ya que la atraccin inductiva de los electrones de los hidrgenos hace que los ncleos queden desprotegidos
Por ejemplo: 2.2 d Cl---- C ------- H Bo Cl-CH2-CH2-CH2-Cl 3.7 d 1.43 d CH3-CH2-CH3 0.9 d C ------- H Bo
CH3-F 4.26 d
CH3-Cl 3.0 d
CH3-Br 2.82 d
CH3-I 2.16 d
Desplazamiento qumico decreciente respecto al TMS Efecto inductivo decreciente por electronegatividad y MW
Cl
Cl
Cl
Cl
Cl
Cl
7.24 d
5.28 d
3.0 d
0.9 d
Factores que influyen en las seales de los desplazamientos qumicos (d) B. Corrientes anulares
Si esta en la misma direccin los ncleos se desprotegen en esa regin y por tanto requieren de menos energa externa para que ocurra la resonancia del protn, por tanto absorben en campo menores de lo esperado Cuando el flujo esta en direccin opuesta ocurre el efecto contrario, y se requiere de un campo externo de mayor fuerza para la absorcin
B. Corrientes anulares
7.3 d 4.6 d 2.9 d
Ncleos desprotegidos
B. Corrientes anulares
Hb
H H H H H
H H
H H
H H
H H
Ha
H H H
[18]- Anuleno 18 e- , 6 hidrgenos internos (Ha): -1.9 d muy protegidos ya que estn en la corriente anular; 12 hidrgenos externos (Hb): 8.8 d desprotegidos por estar fuera de la corriente anular
Br
d= 5,5 ppm
H3C
d= 5,3 ppm
Sin embargo para molculas quirales los hidrgenos se denominan enantiotpicos dado que producen la misma seal de desplazamiento, vg. El 1-propanol al sustituir un hidrgeno del carbono 2 por un tomo de Cloro para obtener sea (R) o (S) 2-cloro-propanol las seales del hidrgeno restante es idntica en el carbono 2 para los dos ismeros, por tanto no permite distinguir ciertos casos de isomera
2. Importancia del nmero de picos asociados a cada tipo diferente de protn: desdoblamiento espn-espn y acoplamiento espn-espn Fenmeno que tiene lugar cuando el momento magntico de un ncleo interacciona con los momentos magnticos de los ncleos adyacentes ya que el campo magntico de un ncleo con espn influye sobre los electrones de sus enlaces con otros ncleos Este cambio en la distribucin electrnica genera mltiples transiciones electrnicas, este acoplamiento magntico a travs de los enlaces se denomina interaccin de polarizacin
100 Hz
CH3Absorcin Absorcin -CH2-OH
100 Hz
Campo magntico
Campo magntico
3. Importancia del nmero de picos asociados a cada tipo diferente de protn: desdoblamiento espn-espn y acoplamiento espn-espn
-CH2-
TMS
H O
H C H
H C H H
Bo
J= Constante de acoplamiento (Hz)
El acoplamiento de las seales de protones equivalentes se observa en multipletes (producto del desdoblamiento espn-espn), y la relacin de las reas de los picos se relaciona aprox. entre nmeros enteros, p.ej. El triplete del metilo muestra una relacin de 1:2:1 y el metileno un cuadruplete de 1:3:3:1. Esto se origina por el efecto de los protones del metileno sobre la resonancia de los protones del metilo y los espines pueden tener diferentes combinaciones.
Espectros de primer orden y el desdoblamiento espn-espn Los espectros de primer orden son aquellos en que el desplazamiento qumico entre los grupos de ncleos que interaccionan es grande con respecto a sus constantes de acoplamiento J, para esto la relacin J/d deber ser menor que 0,05 Ntese que el incremento del Bo aumenta d pero no J, por lo que los espectros generados por un instrumento de un elevado campo magntico es ms sencillo que los producidos por campos dbiles En general, tomando como ejemplo el etanol, el nmero de picos en una banda desdoblada en un espectro de primer orden es igual al nmero de n de protones equivalentes magnticamente en los tomos vecinos ms uno. El nmero de picos se conoce como multiplicidad
1. Los ncleos equivalentes no interaccionan entre s para dar picos de absorcin mltiples, p.ej. Los tres protones del metilo del etanol desdoblan los protones del metileno adyacente y no de si mismo. 2. Las constantes de acoplamiento disminuyen significativamente con la separacin de los grupos, y raras veces se observa acoplamiento a distancias mayores que cuatro longitudes de enlace 3. La multiplicidad de una banda se determina por el nmero n de protones equivalentes magnticamente en los tomos de vecinos y viene dada por n+1, p.ej. la multiplicidad del metil en el Metanol se determina por el nmero de protones adyacentes es (n=1) + 1=2
4. Si los protones unidos al tomo B estn afectados por los protones de los tomos A y C que no son equivalentes la multiplicidad de B es igual a (nA+1)(nC+1)
5. Las reas relativas aproximadas de un multiplete son simtricas alrededor del punto medio de la banda y son proporcionales a los coeficientes de los trminos de la serie (x+1)n, ver Tabla 1
6. La constante de acoplamiento es independiente del campo aplicado; as, los multipletes se distinguen con facilidad de los picos de desplazamiento qumico poco separados , registrando los espectros a dos intensidades de campo diferentes.
1
2 3 4 5 6 7
2
3 4 5 6 7 8
1 1
1 2 1 1 3 3 1 1 4 6 4 1 1 5 10 10 5 1 1 6 15 20 15 6 1 1 7 21 35 35 21 7 1
Ejemplo 1: Calcular el # de multipletes de cada banda y sus reas relativas para el 1,3-dicloropropano, as como sus probables d
Respuesta: Cl-CH2-CH2-CH2-Cl 1. Para los cuatro protones equivalentes de los carbonos 1 y 3 tenemos que se ven apantallados por los dos protones del carbono 2 y por tanto la multiplicidad sera calculada de n+1 = 2 + 1 = 3, por tanto se espera un triplete de proporcin 1:2:1, adems se esperara una d aproximada de 1,5 ppm pero por el efecto de la presencia del tomo de cloro por efecto inductivo da un desapantallamiento que se podra esperar finalmente a un d aprox. de 3.5. 2. Para el caso del metileno central podemos ver que se encuentra apantallado por los cuatro protones de los metilenos externos por tanto la multiplicidad sera de n+1= 4 + 1 = 5, por tanto veremos posiblemente un quintuplete de serie 1:4:6:4:1 y debido a que el apantallamiento es mayor lo esperamos ver en campo bajo a una d entre 0.5 a 1.3 (ver figura 3.1).
Figura 3.1
Espectros RMN
C2H3Cl3
Espectros RMN
C3H7NO2
Espectros RMN
C3H7NO2
Espectros RMN
El solvente
Para casos especiales se puede utilizar solventes deuterados, v.g. CDCl3 (deuterocloroformo), (CD3)2C=O (hexadeucloroacetona), y el sulfxido de dimetilo hexadeuterado (CD3)2SO; el deuterio no interfiere porque requiere condiciones distintas de fuerzas de campo aplicada y oscilatoria
Aplicaciones
Aplicaciones
1. Identificacin y caracterizacin de compuestos orgnicos acoplado a otros mtodos instrumentales
2. Anlisis cuantitativo de: mezclas multicomponentes, de grupos funcionales 3. Anlisis elemental
Aplicaciones Biomdicas
Aplicaciones en la enologa
Experimental setup used to obtain the NMR spectrum of full intact wine bottles in a horizontal bore magnetic resonance imaging magnet. The exploded views shown in (a) and (b) show the NMR probe heads used to measure 1H and 13C NMR spectra in full wine bottles, respectively. To ensure high resolution NMR spectra, the bottles are slightly tilted to prevent air bubbles from settling in the rf coil region.
Evaluacin
Fundamentos tericos Interpretacin de espectros RMN
Aplicaciones