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TESIS
PRESENTA
Ana Luca Baeza Durn
ORIZABA, VER.
NOVIEMBRE, 2011
Agradecimientos
A Dios por haberme brindado vida, fuerza, constancia, ganas y bienestar para terminar
mis estudios de manera exitosa y digna de contar, pidiendo mucho ms de esto, para
poder ejercer mi ttulo con tica y profesionalismo, y seguir adquiriendo todos los
conocimientos para mi superacin personal.
A mis directores de trabajo M.C. Ana Bertha Durn Gonzlez y M.C Jos Felipe
Velzquez Hernndez, y mis sinodales; los antes mencionados y el M.C Antonio
Rodrguez Ruz y al Dr. Carlos Daz por su apoyo incondicional a mi trabajo.
Dedicatorias
En primer lugar a mi familia; mi abuela Ana Mara que nos brind toda su vida a
nosotros, con su amor y dedicacin, y que s que an me cuida en donde quiera que est.
A mi hermano, Marcos Antonio que es y ser mi acompaante favorito toda la vida y
que siempre ser parte de mis logros. A mi mam, Luca Marina, por darme la vida, a mi
Ta Ana Bertha, por ser una madre ms, a las dos, por darme su apoyo, dedicacin, por
la educacin y las oportunidades que con su esfuerzo de todos los das lograron
brindarme, por todos los regaos y los buenos ratos que me han formado como la
persona que soy, gracias por su amor.
A mis amigos de universidad que siempre me acompaaron, Nadia Gamboa, por ser mi
mam universitaria, que siempre me apoyo y me escuch cuando lo necesitaba, Lizeth
Rojas, por siempre estar ah conmigo y escucharme, Karem Prez, por ser la hermana
que da un apoyo incondicional, acompandome siempre, Marco Tulio, siempre me
escuchaste y me regalaste un buen humor, Jaime Mndez, siempre brindndome una
sonrisa y un abrazo cuando quisiera, Sara Garca, incondicional, escuchndome,
apoyndome, acompandome siempre,
apoyo, Ana Laura Luna por el apoyo a mi persona y en mi carrera y la buena compaa,
Luis Alberto Quezada por escuchar, por ayudarme siempre y acompaarme. A todos,
Gracias por ser parte de una de mis mejores historias.
A mis amigos, Janai Hernndez, por acompaarme y apoyarme a lo largo de esto siendo
parte de mi logro, Anglica Gaspern, Naymar Flores, Mnica Tress, Suyin Lee, Gely
Ortiz, Mara Jos Mrquez, Lejos, cerca, mucho o poco siempre fueron parte de este
proyecto en este tiempo de mi vida, Gracias.
LOS AMO A TODOS
NDICE GENERAL
PGINA
NDICE GENERAL
NDICE DE FIGURAS
NDICE DE GRFICAS
NDICE DE TABLAS
RESUMEN
IV
VI
VII
IX
1. INTRODUCCIN
2. MARCO TERICO
24 de gestacin
2.1.4 La mdula sea, principal rgano hematopoytico postnatal
2.3 Hemoglobina
2.3.2 Produccin de Hb
8
I
11
12
13
15
16
2.7 Hierro
17
19
21
22
23
23
24
24
25
28
2.11 Talasemias
29
31
34
35
36
36
3.2 Justificacin
37
4. HIPTESIS Y OBJETIVOS
38
4.1 Hiptesis
38
38
38
II
5. METODOLOGA
5.1 Materiales y mtodos
6. DISCUSIN Y RESULTADOS
39
41
46
6.1 Resultados
46
6.2 Discusin
57
58
7. CONCLUSIONES
59
8. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
60
9. ANEXOS
64
64
67
III
NDICE DE FIGURAS
FIGURA
PGINA
Figura 2. Hematopoyesis
Figura 5. Eritropoyesis
10
10
11
14
14
20
26
30
32
32
34
40
49
53
IV
NDICE DE GRFICAS
GRFICA
Grfica 1. Relacin de biometras hemticas encontradas con hipocromia
PGINA
44
y microcitosis.
45
microcitosis e hipocromia.
46
de hierro.
57
NDICE DE TABLAS
TABLA
PGINA
18
18
35
Talasemia
Tabla 4. Reactivo para la determinacin de hierro srico
42
43
48
48
48
49
50
50
51
52
52
52
53
54
54
55
55
56
56
57
VI
Alfa
Beta
Gamma
Delta
Epsiln
Micro
CFC E
CFC GM
CH
Citometra hemtica
CTFT
CTH, CPH
fL
Femtolitros
g/dL
Gr
Hb
Hemoglobina
Hb de Barts
Hemoglobina de Barts
HbA
Hemoglobina A
HbA1
Hemoglobina A1
HbA2
Hemoglobina A2
HbC
Hemoglobina C
HbD
Hemoglobina D
HbF
Hemoglobina F
HbG
Hemoglobina G
HbH
Hemoglobina H
HbO
Hemoglobina O
HbS
Hemoglobina S
VII
HbW
Hemoglobina W
HFE
Hephaestina
HGCM, CMHG
HGM
Hto, Htc
Hematocrito
INEGI
IST
M.O.
Mdula sea
M-H
Microctica-hipocrmica
Millones/L
mL
Mililitro
mm
Milmetros
Mmol/L
M-N
Macroctica-normocrmica
mRNA
NK
N-N
Normoctica-normocrmica
OMS
pg
Picogramos
QFBs
SCF
TGF-
VGM,VCM
VIII
Resumen
La Talasemia refiere a un grupo de trastornos hereditarios hematolgicos presentados con
ms frecuencia en personas de Asia del Sur y ascendencia mediterrnea. La Talasemia
incluye una serie de anemias microcticas-hipocrmicas que son clasificadas tanto por
manifestaciones clnicas y genticas. Los dos tipos principales son y -Talasemia,
dependiendo de la cadena de hemoglobina en que se presente la falla.
Hoy en da, la talasemia deja de ser un padecimiento mediterrneo, pues debido al gran
movimiento migratorio de la actualidad, se ha visto que se ha propagado rpidamente en
muchas zonas, tomando como ejemplo la ciudad de Crdoba, Ver., en donde tiempo atrs la
prevalencia de estos sndromes era nula. Y siendo el propsito de este trabajo dar a conocer
una posible cifra de habitantes talasmicos en la zona, se logra comprobar que existe
poblacin talasmica en esta regin de Crdoba-Veracruz. Y as se invita al Qumico
Farmacutico Bilogo a contemplar esta poblacin, para ya no pasar por alto este nmero
de personas que posiblemente estn en aumento, y que deben de ser tratadas con
precaucin.
IX
1. INTRODUCCIN
En la actualidad, la anemia microctica se define comnmente por la disminucin en el volumen
corpuscular medio (VCM). La Organizacin Mundial de la Salud (OMS) identifica como anemia
a la disminucin en la concentracin de la hemoglobina intraeritrocitaria. La misma vara segn
el gnero, la edad y las condiciones ambientales (27). El correcto diagnstico requiere de una
buena historia clnica y del hallazgo de parmetros especficos de laboratorio (28). Las formas
ms frecuentes se deben a deficiencia de hierro y sndromes talasmicos.
La talasemia se considera la alteracin gentica ms comn del mundo. Aproximadamente el 3%
de la poblacin mundial (150 millones de habitantes) es portadora de alguna de las mutaciones.
Son particularmente prevalentes en el rea del Mediterrneo en donde alcanza una incidencia del
34% (29). Los cambios tnicos surgidos de las distintas migraciones hacen que la distribucin a
lo largo de todo el mundo est cambiando (30).
En el siguiente trabajo se presenta la investigacin de este sndrome mediante el uso de mtodos
de determinacin, como son: a citometra hemtica, recuento de reticulocitos y cuantificacin de
hierro srico como parte inicial, y la electroforesis de hemoglobina para realizar la correcta
diferenciacin de stas anemias microcticas-hipocrmicas, ya que en la regin de CrdobaVeracruz; hay una significante poblacin que presenta sndromes talasmicos.
Con base en la problemtica de que la mayora de los casos, la razn de una anemia microctica
hipocrmica sea por deficiencia de hierro, el tratamiento de eleccin ser la administracin del
mismo; y dado que los pacientes talasmicos no presentan deficiencia de hierro, su
administracin prolongada podra ser an ms perjudicial que el padecimiento mismo.
Es necesario para los QFBs interesarse en la identificacin de estos tipos de anemias; se realiz
una investigacin con un total de 1,000 muestras en la regin de Crdoba-Veracruz, en donde,
considerando a los pacientes que presentaron anemias microcticashipocrmicas, se encontraron
exitosamente casos positivos y presenciales de sujetos de observacin con Talasemia sin haber
iniciado un tratamiento, y personas con Talasemia con tratamiento de administracin de hierro
con las complicaciones que esto conlleva.
2. MARCO TERICO
Ectodermo
(en
rosa):
Tejido nervioso; epidermis y
sus derivados (pelo, cabello,
uas, esmalte dental).
Mesodermo
(en
amarillo):
Esqueleto,
musculatura,
tejido
conectivo,
aparato
cardiovascular y renal.
Saco
Vitelino
Las clulas tronco del saco vitelino pueden diferenciarse hacia otros elementos hematopoyticos
distintos de los eritroides cuando se exponen a los factores de crecimiento apropiados; en el saco
vitelino, sin embargo, no se encuentran granulocitos, posiblemente por la accin moduladora
local de sustancias tales como el factor transformante de crecimiento beta (Transforming Growth
Factor-beta TGF-) que inhibe a maduracin granuloctica.
Las clulas tronco del saco vitelino no son sensibles a la eritropoyetina, aunque requieren de
factor de crecimiento de clulas tronco (Stem Cell Factor, SCF), que se encuentra presente
localmente, para su proliferacin.
A partir de la semana seis se encuentran tambin megacariocitos en el saco vitelino, adems
clulas eritroides. Alrededor de la semana 11 termina la hematopoyesis en el saco vitelino,
aunque ya se ha iniciado en otros rganos.
tejidos anormales (mieloptisis), el hgado, el bazo y otros tejidos pueden re asumir su papel
hematopoytico (1).
Las clulas precursoras de los eritrocitos se identifican normalmente en la mdula sea (Figura
4).Los proeritroblastos son clulas grandes y poseen un ncleo que ocupa mayor parte del
dimetro celular, la cromatina es fina, los nuclolos, aunque presentes no son muy prominentes, y
el contorno nuclear es circular, por otra parte el citoplasma es muy basfilo. (11)
A. Eritroblasto basfilo
B. Eritroblasto policromatfilo con
cuerpo de howell-joly
C. E. ortocromtico con cuerpo de
howell-joly
D. E. policromatfilo con abundante
citoplasma y cromatina fina
E. Eritroblastos ortocromticos con
abundante citoplasma y ncleos
irregulares.
Las molculas de Hb estn constituidas por tres componentes fundamentales. La molcula est
constituida por cuatro cadenas de globina, cuatro molculas de protoporfirina y cuatro tomos de
hierro (Figura 6).
Grupo HEME
Hierro
Cadena
Glbulo Rojo
Cadena
Cadena
Cadena
Forma elptica de la
molcula de polipptido
Las cadenas globnicas se sintetizan, como cualquier otra protena en los ribosomas
citoplasmticos. La sntesis de globinas se inicia en la etapa de proeritroblasto. Los tomos de
hierro, unidos a la transferrina, son captados por receptores especficos en la membrana y
endocitados por medio de vesculas recubiertas, posteriormente son transportados al interior de
las mitocondrias.
Las molculas de protoporfirina se sintetizan en tres fases, la primera de ellas intramitocondrial,
la segunda en la matriz citoplasmtica y la tercera, incluyendo su unin con un tomo de hierro,
nuevamente intramitocondrial. La sntesis de protoporfirina y de grupo HEME, se inician en la
etapa de eritroblasto basfilo; en sta etapa se inicia tambin la unin de cuatro grupos heme con
cuatro cadenas de globina para formar la molcula de hemoglobina completa (10).
2.3 Hemoglobina
2.3.1 Sntesis de Globinas
La sntesis de las cadenas de pptidos de la globina sucede en los polirribosomas en el
citoplasma. El tipo de cadena sintetizada est bajo control gentico. La mayor parte de las clulas
producen cadenas y para la formacin de HbA, la principal Hb del adulto.
El HEM (o HEME) es insertado en la bolsa hidrofbica cerca de la superficie de cada cadena de
globina. Las cadenas de globina y se combinan para formar el dmero . Dos dmeros se
combinan para formar un tetrmero estable de globina 22.
2.3.2 Produccin de Hb
Los polipptidos de y son traducidos en su respectivos mRNA al unirse al HEM, la protena
se dobla en su estructura tridimensional original (Figura 8). La unin entre las subunidades de Hb
y se facilita por atraccin electrosttica. Un complejo de unin inestable intermedio puede
reacomodarse para formar el dmero estable. Los dmeros se combinan para formar el
tetrmero funcional 22.
Estructura primaria
Estructura secundaria
Estructura terciaria
Estructura cuaternaria
10
% de Hemoglobina total
electrofortica.
Edad gestacional
Nacimiento
Edad postnatal
Figura 12. Tipos de cadenas de la hemoglobina que se forman durante la vida embrionaria y el
primer ao de vida (36)
11
12
Fraccin de HB de Bart
La Hb de Bart est formada por homotetrmeros que se sintetiza durante el periodo fetal. Esta
Hb es incapaz de transportar oxgeno. En la 0 talasemia se observa la presencia de esta Hb.
13
15
Existen varias clasificaciones de las anemias, entre las que se incluyen el curso de la enfermedad
(Agudas o crnicas), las de tipo geogrfico (Anemias africanas, del mediterrneo, etc.) y las de
etiologa conocida o desconocida. Sin embargo hay dos clasificaciones de mucha utilidad para el
esclarecimiento de la probable etiologa del citado trastorno. Una de ellas es la clasificacin
etiopatognica y la otra es la clasificacin morfolgica.
En la primera es el clnico que trata de establecer la causa.
Etiopatologa de las anemias:
1. Por falla medular (anemia aplsica, infiltracin medular, etc.).
2. Por falta d elementos nutricionales antianmicos (anemias carenciales).
3. Por prdida (hemorragias).
4. Por aumento en la destruccin (anemias hemolticas)
Y en la segunda, y para fines prcticos se pueden clasificar casi todas las anemias en tres grandes
grupos morfolgicos que son los siguientes:
I. Anemias hipocrmicas (generalmente microcticas)
II. Anemias normocticas normocrmicas
III. Anemias macrocticas normocrmicas
I. Anemias hipocrmicas (generalmente tambin microcticas) (CMHG, HGM, VGM).
Causas:
Deficiencia de hierro (absoluta o relativa)
Anemias sideroblsticas (deficiencia hereditaria de enzimas para sintetizar protoporfirina,
intoxicacin por plomo, alcohol, isioniazida y otras).
Talasemias (defectos hereditarios en la sntesis de las globinas)
16
III.
2.7 Hierro
La deficiencia de hierro puede ser absoluta (la anemia clsica) o relativa (la anemia de los
<padecimientos crnicos>).
Normalmente el hierro en el organismo est distribuido en varios compartimientos, que incluyen:
Hierro unido a la hemoglobina
Hiero unido a citocromos y otras protenas
Hierro circulante unido a transferrina
Hierro en las reservas, dentro de macrfagos, unido a la protena apoferritina formando
ferritina.
Tanto en la anemia sideropnica como en la anemia de los padecimientos crnicos, los niveles de
hierro circulante son bajos y por lo tanto el diagnstico diferencial no puede establecerse con la
sola determinacin de hierro srico, es necesario determinar, adems la capacidad total de
fijacin de la transferrina (CTFT), el ndice de saturacin de la de transferrina (IST), la ferritina
circulante y en ocasiones realizar una tincin para hierro aspirados o biopsias de mdula sea.
17
En los otros dos tipos de anemias hipocrmicas, las sideroblsticas y las talasemias, el hierro no
se utiliza debido a la deficiencia en la sntesis de protoporfirina o de cadena globnicas,
respectivamente. El hierro es normal o alto, la transferrina y por lo tanto la CTFT son normales y
el ndice de saturacin es normal o elevado, pudiendo encontrarse una saturacin de transferrina
hasta del 100%. Como los niveles de hierro en los almacenes son normales o altos, tambin los
niveles de ferritina (Tabla 2).
Hierro
Anemia Sideropnica
Anemia de los
Padecimientos Crnicos
Talasemia o
Sideroblstica
Normal o
CTFT
Normal
IST
< 10%
10 20 %
Ferritina
< 12 %
20 200
Hemosiderina
+ a ++++
>20 %
>50%
Normal o
50 150 g/dL
300 360 g/dL
20 25 %
50 200 g/L
+++ (apreciativo)
18
Es muy importante realizar estas determinaciones en una anemia hipocrmica antes de iniciar el
tratamiento, pues aunque la deficiencia de hierro es la causa ms frecuente, los pacientes con
otras enfermedades no se benefician con la administracin de hierro e incluso ste puede causar
problemas; por ejemplo, en las talasemias y en las anemias sideroblsticas el hierro no utilizado
aumenta en la circulacin y se deposita en los tejidos causando daos que pueden ser muy
severos.
19
20
Numero de eritrocitos por mm3 (L): Se mide en millones por microlitro (millones/L). Su valor
normal depende tambin de los factores sealados para los otros dos parmetros eritrocticos (Hb
y Hct). Para la altura del altiplano mexicano, los valores de referencia en adultos son: varones 5.0
a 6.3 millones/L. El empleo actual de contadores de partculas por citometra de flujo permite
21
calcular con gran exactitud este parmetro eritroctico. Normalmente existen alrededor de 5 x 106
eritrocitos / L (4).
de eritrocitosis hay
22
Las anemias que cursan con cifras anormalmente altas de VGM, tambin llamadas anemias
macrocticas, pueden deberse a eritropoyesis acelerada a eritropoyesis megaloblstica (carencia
de folatos o de vitamina B12), a
eritroctico, de gran confiabilidad cuando se usan citmetros de flujo, debe ser el nico empleado
para definir si una anemia es microctica, normoctica o macroctica.
El VGM se obtiene a partir del hematocrito y del # de eritrocitos/ L. La frmula simplificada
para obtenerlo es:
Hematocrito x 10 / millones de eritrocitos.
El VGM normal es de 92 9 fL.
Si en una anemia el VGM es menor de 83 fL, la anemia es microctica, si est entre 83 y 101 la
anemia es normoctica y si est por arriba d 101 la anemia es macroctica. (2)
23
24
eritrocitos normocrmicos tienen una porcin clara central que ocupa aproximadamente la tercera
parte del dimetro celular. En los eritrocitos hipocrmicos, en los que existe menos hemoglobina
de la esperada para el volumen de la clula la porcin clara central ocupa un dimetro mayor.
La hipercroma indica en ciertos casos que se encuentra ms hemoglobina de la esperada para el
volumen, por ejemplo en esferocitos, en eritrocitos fragmentados (esquizocitos) y tpicamente en
la xerocitosis hereditaria en la que los eritrocitos estn deshidratados.
La hipocroma y la hipercroma son visibles en el frotis cuando son severas. La concentracin
media de hemoglobina globular, es la medida de la hipocroma, normocromia o hipercroma. (2)
Los reticulocitos son hemates jvenes (sin ncleo). Su presencia en la sangre perifrica traduce
la funcin de la mdula sea. El porcentaje de reticulocitos en referencia al total de hemates en
sangre perifrica es del 1% al 2%. Las anemias que presentan elevacin en el nmero de
reticulocitos reciben el nombre de anemias regenerativas, y el prototipo de dichas anemias es la
hemlisis o el sangrado agudo. Las anemias que no elevan el nmero de reticulocitos en la sangre
o lo presentan descendido reciben el nombre de anemias hiporregenerativas (o arregenerativas), y
el prototipo es la aplasia medular. En general, un nmero no elevado de reticulocitos suele
traducir una enfermedad de la propia mdula sea o bien un trastorno carencial, que impide que
la mdula sea sea capaz de formar clulas sanguneas. En este sentido, una excepcin sera la
invasin de la mdula sea por metstasis (anemia mieloptsica), en cuyo caso los reticulocitos
pueden estar incrementados a pesar de presentar la mdula sea una enfermedad.
25
Los reticulocitos (Figura 16) poseen movimientos citoplasmticos que les permiten salir de la
mdula sea a la sangre perifrica, su forma irregular de estas clulas es consecuencia de los
movimientos activos para realizar esto. Generalmente este contorno irregular no se observa en el
frotis aunque es posible encontrarlo en condiciones de eritropoyesis aumentada.
Los reticulocitos, -a diferencia de los eritrocitos- todava poseen algunos ribosomas distribuidos
difusamente en su citoplasma; sin embargo la gran cantidad de hemoglobina presente, que se tie
con eosina, impide visualizar la escasa basofilia producida por los ribosomas. (13)
El azul de cresil brillante o el nuevo azul de metileno son colorantes que simultneamente tien a
los ribosomas y los aglutinan, aunque los ribosomas tienen un tamao muy pequeo- los cmulos
de cientos o miles de ellos son resueltos como pequeos o fibrillas basfilos. El retculo que da el
nombre a la clula no existe en realidad, es un artificio til pues permite distinguir a los
reticulocitos de los eritrocitos maduros.
Como los glbulos rojos salen de la mdula sea en esta etapa de reticulocitos, el nmero de
stos es un indicador muy fiel de la magnitud de la eritropoyesis eficaz. Los eritrocitos maduros
tienen forma de disco bicncavo, los reticulocitos no.
La forma bicncava se produce al armarse dentro de la clula adyacente a la porcin
citoplasmtica de la membrana plasmtica- una red de protenas que forman el esqueleto
submembranoso del eritrocito.
El recuento de reticulocitos se puede ver afectado si la persona a analizar ha recibido alguna
transfusin en los ltimos tres meses.
El recuento de reticulocitos es la prueba ms sencilla para evaluar la actividad eritropoytica.
26
(19)
siguientes consideraciones:
Anemias hipocrmicas, generalmente microcticas (CMHG, HGM, VGM) con reticulocitos
normales o bajos:
Deficiencia de hierro.
Anemias sideroblsticas.
Anemias hipocrmicas microcticas (CMHG, HGM, VGM) con reticulocitos elevados:
Talasemias
Deficiencia de hierro o sideroblsticas que estn respondiendo adecuadamente a tratamiento
especfico.
Anemias normocticas normocrmicas (VGM, CMHG y HGM normales) con reticulocitos
normales o bajos:
Anemias por deficiente produccin de eritrocitos
27
En el caso de las anemias microcticas e hipocrmicas, los eritrocitos son de menos tamao y su
contenido de Hb est disminuido, el VGM o (VCM) es inferior a 80 fL, y la Hb corpuscular
media (HCM) es menor de 27 pg. Se produce cuando en la mdula sea hay deficiencias en la
produccin de la Hb, en alguno de sus componentes ya sea el HEM o en la globina, causada por
dficit de hierro o por la inhabilidad para usarlo, como es en el caso de la anemia ferropnica,
anemia sideroblstica, talasemias y algunas hemoglobinopatas (5).
Caractersticamente la morfologa eritrocitaria se modifica y se produce poiquilocitosis con
presencia de clulas con disposicin anormal de la Hb (como los codocitos) y otras con
hipocroma (como los leptocitos, eliptocitos, dacriocitos y los anulocitos, que se observan en
casos graves). Ayuda a diferenciar o a subdividir los procesos microcticos hipocrmicos en
respondedores o no respondedores del hallazgo de la policromatofilia, que es caracterstico de las
anemias sideroblsticas, hemoglobinopatas y talasemias.
28
Cuando nos encontramos frente a una anemia hipocrmica debemos de considerar las siguientes
posibilidades:
Deficiencia de hierro (Anemias sideropnicas).
Deficiente sntesis de protoporfirina (Anemias sideroblsticas).
Deficiente sntesis de globinas (talasemias, hemoglobinas Lepore y hemoglobinopatas E) (8).
2.11 Talasemias
Las talasemias son un grupo polifactico de trastornos heredados, causados por mutaciones
genticas que disminuyen o anulan por completo la sntesis de una o ms de las cadenas de
globina del tetrmero de la hemoglobina. Cooley y Lee describieron por primera vez una forma
grave de anemia asociada con esplenomegalia y alteraciones seas que se encontraba en los nios
pequeos. La enfermedad luego se denomin talasemia (del griego talassa, que significa mar),
porque los primeros casos se observaron en individuos cuyos antepasados eran originarios de las
tierras que bordean el Mediterrneo. La enfermedad descrita por Cooley y Lee, Tambin
conocida como anemia de Cooley, es el estado homocigoto para el gen autosmico anormal que
codifica la sntesis de la cadena beta de la globina, que se conoce como talasemia mayor. Los
estados heterocigotos, asociados con alteraciones hemticas mucho ms leves, se conocen como
talasemia menor.
Las formas ms leves, sobre todo heterocigotas, son el defecto gentico ms frecuente de los
seres humanos, en tanto que las formas ms graves pueden causar morbilidad y mortalidad
elevadas. La talasemia no es una sola enfermedad, si no un grupo de trastornos que pueden
definirse como una afeccin en la que una disminucin de la tasa de sntesis de una o ms de las
cadenas de globina conduce a un desequilibrio de la sntesis de las cadenas, a la produccin de
una hemoglobina defectuosa y al deterioro de los eritrocitos o sus precursores por el aumento de
la cadena de globina que se produce en exceso. Por lo general est deteriorada la sntesis de la
cadena alfa o beta de la hemoglobina A. Las talasemias se denominan segn la cadena afectada
(21)
Dos genes situados en el cromosoma 16 codifican la cadena globina, mientras que los otros
dos genes situados en el cromosoma 11 codifican la cadena . Las talasemias son anemias
29
producidas por mutaciones gnicas que afectan a la sntesis de una de las cadenas de globina
(Figura 17). La Hb producida es cuantitativamente menor aunque de estructura normal.
(14)
30
La -Talasemia suele deberse a delecin, mientras que la -Talasemia suele deberse a mutacin
puntual.
Todas las talasemias tienen en comn los siguientes datos:
a) Descenso en la sntesis de Hb: hemates hipocrmicos y microcticos. El VGM est bajo
pero a diferencia de la anemia ferropnica, el nmero de hemates es alto para la cifra de
Hb.
b) Desequilibrio de cadenas /, con lo que las cadenas acumuladas precipitan por la
formacin de agregados insolubles (sobre todo en la - talasemia) que producen
eritropoyesis ineficaz en la mdula sea y hemlisis en sangre (anemia).
c) Eritropoyesis compensadora en mdula sea (alteraciones seas), bazo, hgado.
d) Alteraciones en el espectro electrofortico de la Hb.
(32)
31
Figura 19. Frotis de sangre perifrica de un paciente con talasemia menor (41)
32
33
Figura 20. Precipitados de cadenas en una tincin con azul de cresil brillante (41)
34
Tipos de -Talasemia
Genotipo
Fenotipo
Delecin
Talasemia + heterocigota
-/
Portador silente
Talasemia 0 heterocigota
--/
Rasgo talasmico
Talasemia + homocigoto
-/-
Rasgo talasmico
Enfermedad de la HbH
Enfermedad fetal por Hb Bart (0
talasemia homocigoto)
(-/--)
(--/--)
Enfermedad de la HbH
Hidropsia fetal por Hb Bart
No delecin
Mutaciones que afectan a:
Procesamiento del ARNm y la
transcripcin
'/, '/'
-/ ', --/'
El portador
35
Se constituye como una enfermedad prevalente en pases subdesarrollados, ligada a una mala
alimentacin, pero sobre todo ligada a la desinformacin o poco inters de las causas que pueden
originar una baja de hemoglobina en las personas.
Al no identificar adecuadamente la etiologa de la anemia, se pone en peligro la salud del
paciente al prescribir medicamentos que no necesitan y que en algunos casos pueden originar
daos irreversibles orgnicos, presentando no solo el deterioro de la salud fsico si no tambin
nos conlleva un impacto psicolgico y social.
Por lo anterior descrito, es necesario dar a conocer que existen otros padecimientos que originan
anemias microcticas hipocrmicas, y que entre estas enfermedades encontramos a las
Talasemias.
Es muy importante realizar como parte del diagnostico de cualquier anemia microctica
hipocrmica la determinacin de hierro srico, la capacidad total de captacin de hierro srico,
ndice de saturacin de hierro srico, ferritina, determinacin de reticulocitos, aunque la
deficiencia de hierro es la causa ms frecuente de este tipo de anemias, los pacientes con otras
enfermedades no se benefician con la administracin del hierro e incluso puede causar
problemas, tal es el caso de las Talasemias y las anemias sideroblsticas en las que el hierro no
utilizado aumenta en la circulacin y se deposita en los tejidos de diversos rganos causando
daos que pueden ser muy severos.
36
3.2 Justificacin
En las talasemias se presenta un gran problema al no ser diagnosticadas de una manera adecuada,
ya que el tratamiento de eleccin seria la administracin de hierro, con lo cual el paciente no
muestra mejora, sino que la administracin crnica de esta sustancia sera contraproducente ya
que el paciente acumulara un hierro que no necesita en los macrfagos del organismo, y como
estos se encuentran en rganos importantes (hgado, bazo, corazn, medula sea) los daa al paso
del tiempo y sobre todo con una ingesta crnica de hierro, produciendo patologas irreversibles
como en el caso del hgado que sera cirrosis, reduciendo la expectativa de vida de quienes la
padecen.
la
educacin gentica debe ser muy importante en las personas que la padecen.
As que su correcta identificacin, con el uso de los parmetros de apoyo como son el hierro
srico y los reticulocitos, como fuente inicial, puede ser de mucha utilidad para disminuir la
problemtica antes mencionada, en una poblacin pequea, pero significante como lo es en la
regin de CrdobaVeracruz.
37
4. HIPTESIS Y OBJETIVOS
4.1 Hiptesis
H1: El sndrome talasmico presente en una poblacin aleatoria en la regin de CrdobaVeracruz, es mayor a 0. Y su identificacin est basada en la citometra hemtica, recuento de
reticulocitos y determinacin de hierro srico.
1. Realizar una investigacin en la zona de Crdoba, Ver., que identifique anemias microcticas
hipocrmicas, no causadas por deficiencia de hierro como las Talasemias
2. Comprobar que el uso de los anlisis complementarios, (hierro srico y recuento de
reticulocitos) ayudaran a la correcta clasificacin de estos padecimientos.
3. Realizar evaluacin de pacientes candidatos de electroforesis de hemoglobina.
38
5. METODOLOGA
Este trabajo se realiz con el apoyo del Laboratorio de Investigaciones Bioclnicas, en la zona de
Crdoba, Ver, tomando como marco de referencia a todos los pacientes que acudieron al
laboratorio y presentaron anemia microctica-hipocrmica.
Teniendo como voluntarios a los pacientes de la zona antes mencionada, se excluyeron a todos
aquellos que presentaron enfermedades que pudieran alterar los resultados de diagnostico, tales
como pacientes cirrticos, insuficientes renales, etc.
Aquellos pacientes que cumplieron con los criterios de inclusin establecidos para el estudio
fueron citados para empezar a realizar estudios adicionales. Dicho protocolo fue realizado de la
siguiente manera:
1. Se tom muestras sanguneas por venopuncin para la realizacin de Citometras Hemticas
Completas, y en caso necesario para hierro srico, con el sistema extraccin mltiple al vaco.
2. En aquellos pacientes con anemia microctica hipocrmica, se realiz un conteo manual de
reticulocitos con la tincin de azul de cresil brillante
3. Cuando el conteo de reticulocitos fue elevado se prosigui a realizar la determinacin de
hierro srico.
4. Con el recuento de reticulocitos elevados y un hierro srico normal o elevado, el siguiente
paso consisti en realizar una electroforesis de hemoglobina, con el fin de corroborar
talasemia.
Una vez identificado el sujeto de observacin con este tipo de enfermedad (talasemia), se
estudi a su respectiva familia, con el fin de localizar el posible origen gentico, en dicha familia
con el fin de crear un rbol genealgico lo ms apegado a la herencia de la alteracin que dio
principio a esta enfermedad. Se tratara de llegar a los parientes ms alejados que sobrevivan en
este momento. Empleando la siguiente metodologa:
Se capto mediante un consentimiento informado por escrito, la autorizacin para esta
investigacin. as como sus huellas dactilares y fotografa si es posible.
Se realiz los anlisis clnicos correspondientes de la manera antes mencionada.
Se determin a los candidatos para las pruebas avanzadas de diagnostico.
39
INICIO
Citometra Hemtica Completa
Clasificacin morfolgica
Anemia N-N
Anemia M-H
Anemia M-N
Excluido
Excluido
Recuento de Reticulocitos
Si
Determinacin de hierro srico
No
Recuento de
Reticulocitos
alto
Si
Excluido
Hierro
srico alto
o normal
No
Electroforesis de
hemoglobina
Estudio en la Familia
para buscar un posible
rbol genealgico con
el padecimiento.
Excluido
FIN
40
Transcurrido este tiempo, se toma una pequea gota de la suspensin y se extiende sobre un
portaobjetos.
4. Se observa al microscopio.
41
5. Se cuentan los 1,000 eritrocitos y se anotan los reticulocitos que se observan en estos 1,000
eritrocitos. Se calcula el porciento y el valor absoluto de los reticulocitos de la siguiente
manera: reportar a bitcora correspondiente para su reporte final.
6. Reticulocitos en porcentaje:
1,000 eritrocitos
------------------
100 %
X= No. de ret. en %
Reticulocitos en valores absolutos:
No. de eritrocitos/ mL --------------------- 100 %
X
--------------------------------
% de ret. contados
Reactivo 2
Compuesto
Tampn de acetato, pH 4.80
Hidrocloruro de guanidina
Tiourea
cido ascrbico
Cantidad
100 mmol/L
4.5mmol/L
52.5
4g
Reactivo 3
Estndar
Ferrozina
Hierro
41 mmol/L
100 g/Dl
1mg/L
17.9 mol/l
Desarrollo:
Longitud de onda
Temperatura
37 C
Cubeta
1 cm de paso de luz
42
Blanco
1 mL
200uL
-
Estndar
1mL
200 uL
-
Muestra
1mL
200 uL
Od1
Od2
50 uL
50uL
50uL
A continuacin, aadir
R3
Od3
Od4
Clculo
o
OD4 OD2
XN
o
OD3 OD1
N=concentracin estndar
N=100 ug/dL
N=1mg/L
N=17.9Umol/L
Electroforesis de hemoglobina:
Apoyo de laboratorio de Maquila CARPERMOR en la ciudad de Mxico para la realizacin de
Electroforesis de hemoglobinas
43
6. RESULTADOS Y DISCUSIN
6.1 Resultados
Durante el periodo enero-junio del 2011, se realiz un total de 1,000 Citometras Hemticas,
tomando como referencia a los pacientes que llegaron al Laboratorio de Investigaciones
Bioclnicas de la ciudad de Crdoba Veracruz. Dichas citometras fueron realizadas en el
equipo automatizado ACT5 DIFF de COULTER. Durante la elaboracin de las citometras se
fueron seleccionando las
44
A stas 157 muestras que mostraron hipocromia y microcitosis se les realiz recuento de
reticulocitos de forma manual, para posteriormente ocupar solo las muestras que mostraron
valores elevados de reticulocitos.
De las cuales, slo 10 mostraron este parmetro, y fueron stas mismas a las cuales se les realiz
la determinacin de hierro srico y electroforesis de hemoglobina (Grafica 2).
Recuento de reticulocitos
A todos los pacientes talasmicos se les realiz la electroforesis de Hb para corroborar la cadena
globnica afectada y dar una correcta clasificacin de estas.
45
Descartando as las 147 muestras restantes por presentar una anemia microctica-hipocrmica
por la ms comn de las causas: Deficiencia de hierro (Grfica 3).
Hipocromia y Microcitosis
Los diez casos talasmicos encontrados fueron antecedidos por tres pacientes iniciales que
desencadenaron la investigacin sobre las familias de estos.
A los pacientes iniciales (o en su defecto a los tutores de los mismos en caso de que fuera menor
de edad) se les solicit el consentimiento para realizar el rbol genealgico ms prximo al
padecimiento.
46
Una vez con su consentimiento, se cit a los familiares de los pacientes iniciales para realizar las
pruebas correspondientes que seran:
BH
Reticulocitos
Hierro srico
Electroforesis de Hb en caso de ser necesaria (solo pacientes talasmicos).
Una vez realizados los estudios correspondientes a los familiares de los pacientes iniciales, se
encontr que:
A continuacin se relatan cada uno de los casos encontrados (omitiendo nombres de pacientes
por confidencialidad), dando los resultados de sus estudios, as como su rbol genealgico del
padecimiento hereditario.
47
CASO No. 1:
exclusivamente una CH, debido a que anteriormente se le haba detectado en otro laboratorio una
anemia ya catalogada por deficiencia de hierro, y requiri confirmacin.
Los resultados del paciente inicial fueron los siguientes (Tabla 5 y 6):
98.0 %
0.0 %
0.0 %
2%
48
Siendo este el caso se le solicito a los familiares del nio (Figura 23), a ser participes del
seguimiento del padecimiento, realizndose mismos estudios y de la misma forma, se logr
encontrar lo siguiente.
Paciente inicial
Familiar sano
Familiar talasmico
Familiar sin analizar
De modo que se los datos finales del paciente inicial se concluan en (Tabla 8):
Tabla 9. Datos finales de paciente inicial caso 1.
Datos del Paciente Inicial
31/01/11
Fecha de ingreso
10 aos
Edad
Masculino
Gnero
Anemia por Deficiencia de hierro
Diagnstico preliminar
Sin tratamiento
Tratamiento
3
Familiares con el padecimiento
-Talasemia
Sndrome talasmico
Los resultados de los familiares del nio fueron los siguientes (Tabla 9-11):
49
50
51
CASO No. 2:
Llega al laboratorio una paciente con un cuadro de cirrosis, el mdico le pide CH entre otros
estudios para su valoracin, su CH presenta los siguientes resultados (Tabla 12 y 13):
94.8 %
0.0 %
0.0 %
5.2 %
Se cita a la paciente, y refiere que ella haba estado hace aos con tratamiento de administracin
de hierro por 15 aos, ya que aos atrs se le haba clasificado en otro laboratorio su anemia por
deficiencia de hierro.
La paciente se automedicaba sin receta alguna, hierro va oral.
Con la autorizacin de la paciente y de sus familiares se prosigui a realizar los estudios
correspondientes a los mismos (Figura 24).
52
Paciente inicial
Familiar sano
Familiar talasmico
Familiar sin analizar
Obteniendo por resultado, que todos los hijos de la paciente inicial, eran pacientes con sndrome
talasmico (Tabla 15).
Tabla 16. Datos finales del paciente inicial caso 2.
Datos del Paciente
Fecha de ingreso
Edad
Gnero
Diagnstico preliminar
Tratamiento
Familiares con el padecimiento
Sndrome talasmico
30/05/11
68 aos
Femenino
Cirrosis
Administracin de Hierro por 15 aos
4
talasemia
Los resultados de los familiares de nuestra paciente fueron los que se presentan en la tabla (Tabla
16-19):
53
54
55
CASO No. 3:
Se presenta al laboratorio una paciente de 45 aos, sin diagnstico aparente, solicitando BH entre
su lista de estudios a realizar (Tabla 20).
Obteniendo los siguientes resultados:
94.2 %
0.0 %
0.0 %
5.8 %
Se le solicito a la paciente se nos permitiera analizar a sus familiares, sin embargo, la paciente
refiere que no tuvo descendencia alguna, y sus padres eran finados.
Los datos del paciente inicial del caso 3 se reportaron de la siguiente manera (Tabla 22):
56
Crdoba - Veracruz
1%
Sndrome Talasmico
Y considerando que, segn los datos, de posible consulta, ms actuales del Censo de Poblacin y
Vivienda de la INEGI (17), la ciudad de Crdoba-Veracruz cuenta con 196, 541 habitantes, se
57
puede estimar, que nuestra poblacin talasmica actual podra ser hasta de 1,965 habitantes
actualmente.
6.2.1 Comprobacin de hiptesis
Siendo estos nuestros resultados, podemos comprobar la hiptesis establecida anteriormente bajo
la siguiente regla:
H0:
p=0.0
H1:
p>0
0.01
Realizando la ecuacin:
p0
p0 (1 p0 )
n
Donde:
P0= 0.01
n = 1000
Z = Estadstica Z
Z= 3.17820863
Y, tomando en cuenta que nuestro valor de Z crtico, es de 1.96 (constante establecida), podemos
decir que:
Como 3.17820863 > 1.96, entonces, no se puede aceptar H0, aceptando como consecuencia H1.
58
7. CONCLUSIONES
59
8. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
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Octubre 2011
63
9. ANEXOS
9.1 Observaciones y hemogramas realizados en cada paciente
Paciente inicial caso 1
Familiar 3 caso 1
Familiar 4 caso 2
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
79
80
81
82