NCh-ISO 22117-2013-043 PDF

PROYECTO DE NORMA EN CONSULTA PUBLICA - prNCh-ISO 22117
Vencimiento consulta pblica: 2013.11.15 i

Microbiologa de los alimentos para consumo humano y animal - Requisitos especficos y directrices para los
ensayos de aptitud por comparaciones interlaboratorios

Prembulo
El Instituto Nacional de Normalizacin, INN, es el organismo que tiene a su cargo el estudio y preparacin de las
normas tcnicas a nivel nacional. Es miembro de la INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR
STANDARDIZATION (ISO) y de la COMISION PANAMERICANA DE NORMAS TECNICAS (COPANT),
representando a Chile ante esos organismos.
Este proyecto de norma se estudi a travs del Comit Tcnico Anlisis microbiolgico de alimentos, para
establecer los requisitos y las directrices para la organizacin de esquemas de ensayos de aptitud destinados al
anlisis microbiolgico de: alimentos y bebidas, productos alimenticios para animales, muestreo ambiental en
produccin alimentaria y de manipulacin de alimentos y las etapas primarias de produccin.
Este proyecto de norma es idntico a la versin en ingls de la Norma Internacional ISO/TS 22117:2010
Microbiology of food and animal feeding stuffs - Specific requirements and guidance for proficiency testing by
interlaboratory comparison.
Para los propsitos de este proyecto de norma, se han realizado los cambios editoriales que se indican y
justifican en Anexo F.
La Nota Explicativa incluida en un recuadro en clusula 2 Referencias normativas y Anexo E, Bibliografa, es
un cambio editorial que se incluye con el propsito de informar la correspondencia con Norma Chilena de las
Normas Internacionales citadas en este proyecto de norma.
Los Anexos A, B, C y D no forman parte del proyecto de norma, se insertan slo a ttulo informativo.
Si bien se ha tomado todo el cuidado razonable en la preparacin y revisin de los documentos normativos
producto de la presente comercializacin, INN no garantiza que el contenido del documento es actualizado o
exacto o que el documento ser adecuado para los fines esperados por el Cliente.
En la medida permitida por la legislacin aplicable, el INN no es responsable de ningn dao directo,
indirecto, punitivo, incidental, especial, consecuencial o cualquier dao que surja o est conectado con el uso
o el uso indebido de este documento.


Vencimiento consulta pblica: 2013.11.15 1

Microbiologa de los alimentos para consumo humano y animal - Requisitos especficos y directrices para los
ensayos de aptitud por comparaciones interlaboratorios

0 Introduccin
Los requisitos generales para la organizacin de esquemas de ensayo de aptitud de todo tipo se comunican a
travs de ISO/CASCO (Committe on Conformity Assessment) en ISO 17043. Adems, existen directrices
generales disponibles a travs de la International Union of Pure and Applied Chemistry (IUPAC, ver [9]) y de
International Laboratory Accreditation Cooperation (ILAC, ver [8]). No obstante, estas recomendaciones pueden
no resultar aplicables directamente en todos los casos y se deberan interpretar de forma especfica para los
distintos sectores de laboratorios en los que se organizan esquemas de ensayos de aptitud. Por esta razn, se
necesita un documento que establezca los criterios que debe cumplir un proveedor de esquemas de ensayo de
aptitud (al igual que sus socios colaboradores) para ser reconocido como proveedor competente de esquemas de
ensayo de aptitud para el anlisis microbiolgico. Se aplica especialmente a los requisitos tcnicos especficos
necesarios para manipular microorganismos vivos, como la estabilidad y homogeneidad de la muestra, as como
la interpretacin de los ensayos de presencia/ausencia (deteccin) no contemplados en un documento existente.
Los esquemas de ensayos de aptitud para los laboratorios se utilizan principalmente para evaluar el
funcionamiento, en especial la veracidad (desviacin) y en algunos casos la precisin, de los exmenes
microbiolgicos sobre alimentos en laboratorios especficos.
De forma adicional, los datos de estos esquemas de ensayos de aptitud se pueden utilizar para:
a) proporcionar informacin a las organizaciones responsables de la aceptacin de laboratorios dentro de una
organizacin oficial de control y para permitir un seguimiento continuado;
b) colaborar en la acreditacin de los laboratorios en una estructura general de garanta de la calidad;
c) informar a los responsables de calidad de los laboratorios participantes como parte de los elementos
educativos de la evaluacin externa de la calidad sobre la veracidad (sesgo).
La informacin de los esquemas de ensayos de aptitud se pueden utilizar tambin para:
1) identificar posibles fuentes de error, en especial la desviacin de un componente de incertidumbre, para
mejorar el desempeo;
2) estimar la incertidumbre de la medicin en los mtodos de recuento, ver ISO/TS 19036 y los lmites de
deteccin en los mtodos de presencia/ausencia;
3) demostrar la competencia del personal para desarrollar un examen microbiolgico especfico;



4) evaluar o validar un mtodo determinado mediante el estudio de la veracidad y la precisin;
5) identificar la variabilidad entre laboratorios individuales;
6) asignar un valor ideal de un analito en un material para establecer un material de referencia.
Sin embargo, dichos aspectos no se incluyen especficamente en esta norma
Por lo tanto, los esquemas de ensayos de aptitud se organizan para cumplir ciertos criterios, y el programa de
ensayos (frecuencia, nmero de muestras, nmero de repeticiones, etc.) deben cumplir los requisitos
correspondientes al tipo de mtodo utilizado y al producto analizado, para alcanzar el nivel de control deseado
por todas las partes participantes.
1 Alcance y campo de aplicacin
Esta norma establece los requisitos y las directrices para la organizacin de esquemas de ensayos de aptitud
destinados al anlisis microbiolgico de:
a) alimentos y bebidas;
b) productos alimenticios para animales;
c) muestreo ambiental en produccin alimentaria y de manipulacin de alimentos;
d) las etapas primarias de produccin.
Esta norma tambin es potencialmente aplicable para el examen microbiolgico del agua, en los casos en los que
se utiliza agua para la produccin de alimentos o se considera un producto alimenticio por la legislacin
nacional.
Esta norma se relaciona con la organizacin tcnica y la implementacin de esquemas de ensayos de aptitud, as
como el tratamiento estadstico de los resultados de los exmenes microbiolgicos.
Esta norma est diseada para ser utilizada con ISO/IEC17043 e ISO 13528 y aborda solamente las reas en las
que se necesitan detalles adicionales o especficos para los esquemas de ensayos de aptitud relacionados con los
anlisis microbiolgicos, dentro de los campos indicados en el primer prrafo.
2 Referencias normativas
Los documentos siguientes son indispensables para la aplicacin de esta norma. Para referencias con fecha, slo
se aplica la edicin citada. Para referencias sin fecha se aplica la ltima edicin del documento referenciado
(incluyendo cualquier enmienda).
ISO 3534-1 Estadstica - Vocabulario y smbolos - Parte 1: Trminos estadsticos generales y
trminos empleados en el clculo de probabilidades.
ISO 3534-2 Estadstica - Vocabulario y smbolos - Parte 2: Estadstica aplicada.
ISO 5725-1 Exactitud (veracidad y precisin) de resultados y mtodos de medicin - Parte 1:
Principios generales y definiciones.
ISO 5725-5 Exactitud (veracidad y precisin) de resultados y mtodos de medicin - Parte 5:
Mtodos alternativos para la determinacin de la precisin de un mtodo de
medicin normalizado.



ISO 7218 Microbiologa de los alimentos para consumo humano y alimentacin animal -
Requisitos generales y gua para el examen microbiolgico.
ISO 13528 Mtodos estadsticos utilizados en ensayos de aptitud mediante comparaciones
interlaboratorios.
ISO/IEC 17043:2010 Evaluacin de la conformidad - Requisitos generales para los ensayos de aptitud.

NOTA EXPLICATIVA NACIONAL

La equivalencia de las Normas Internacionales sealadas anteriormente con Norma Chilena, y su grado de correspondencia es el
siguiente:

Norma Internacional Norma nacional Grado de correspondencia

ISO 3534-1 NCh2420/1:1998 La Norma Chilena NCh2420/1:1998 es una adopcin idntica
de la Norma Internacional ISO 3534/1:1993.

ISO 3534-2 NCh2420/2:1998 La Norma Chilena NCh2420/1:1998 es una adopcin
idntica de la de la Norma Internacional ISO 33534-2:1993.

ISO 5725-1 NCh2680/1:2002 La Norma Chilena NCh2680/1:2002 es una adopcin
idntica de la de la Norma Internacional ISO 5725-1:1994.

ISO 5725-5 No hay -

ISO 7218 NCh2047:1999 La Norma Chilena NCh2047:1999 es una adopcin no
equivalente de la Norma Internacional ISO 7218:1996.

ISO 13528 No hay -

ISO/IEC 17043:2010 NCh-ISO 17043:2011 La Norma Chilena NCh-ISO 17043:2011 es una adopcin
idntica de la de la Norma Internacional ISO 17043.

3 Trminos y definiciones
Para los propsitos de esta norma, se aplican los trminos y definiciones dados en ISO 3534-1, ISO 3534-2,
ISO 5725-1, ISO 13528, ISO/IEC 17043 y adicionalmente los siguientes:
NOTA 1 Algunos trminos utilizados en el texto tienen un significado diferente en microbiologa y en estadstica, como por ejemplo,
homogeneidad, heterogeneidad, ensayo, muestra o distribucin. El contexto aclara si los trminos hacen referencia a las muestras de
ensayos microbiolgicos o en las series de datos utilizadas en los anlisis estadsticos.
NOTA 2 Algunos proveedores de ensayos de aptitud utilizan el trmino de evaluacin externa de la calidad (EQA)
1)
para indicar
esquemas de una aplicacin ms amplia a todas las reas de actividad de un laboratorio y para un cometido educativo en particular. Los
requisitos de esta norma abarcan las actividades de EQA que cumplen la definicin de los ensayos de aptitud.
3.1 cepa de referencia: microorganismo obtenido directamente de una coleccin de cultivos oficial y definida
como mnimo hasta un nivel de gnero y especie, catalogado y descrito segn sus caractersticas y
preferiblemente procedente de agua o alimentos, segn corresponda
[ISO/TS 11133-1:2009, 3.3.2]
3.2 flora acompaante: microorganismos incluidos en una muestra de un ensayo de aptitud que se puede
introducir para mimetizar o competir con el microorganismo objetivo

1) En ingls: External Quality Asessment.



3.3 microorganismos objetivo: microorganismos que son el analito designado para una muestra de un ensayo de
aptitud
NOTA El trmino Target organisms tambin se conoce como organismos diana.
3.4 porcentaje de recuperacin: proporcin del valor asignado de organismo objetivo recuperada por el
participante
NOTA 1 El porcentaje de recuperacin se calcula multiplicando por 100 el nmero de unidades formadoras de colonias (cfu)
2)
recuperadas por volumen o por masa.
NOTA 2 El porcentaje de recuperacin puede ser significativamente menor que 100% cuando se producen efecto matriz y de flora
competitiva sobre una muestra de un ensayo de aptitud.
4 Propsito y diseo del esquema
4.1 Generalidades
Los requisitos generales para el diseo de esquemas ensayos de aptitud se indican en ISO/IEC 17043, en esta
clusula se mencionan slo las reas que requieren una consideracin especial en los esquemas de ensayos de
aptitud microbiolgicos dentro del marco de dichos principios generales.
4.2 Objetivos del esquema
Los objetivos bsicos de cualquier esquema de ensayos de aptitud es proporcionar informacin que permita que
los laboratorios obtengan confianza en la fiabilidad de sus resultados.
Los requisitos generales de un plan documentado para un esquema de ensayos de aptitud se tratan en
ISO ISO/IEC 17043:2010, 4.4.1.3 y el plan debera incluir tambin una referencia global a toda la legislacin
aplicable. En Anexo A se muestra un ejemplo del plan de un esquema de examen tpico en microbiologa de los
alimentos.
Los estudios necesarios para establecer un nuevo esquema de ensayos de aptitud son extensivos y se deben
definir con claridad en los objetivos del esquema. Se debera incluir como mnimo los requisitos relacionados en
clusula 5. Se deberan establecer tambin en el diseo del esquema, los requisitos para verificar series
individuales de ensayo, incluidos los ensayos de estabilidad y homogeneidad, y deben ser apropiados para los
objetivos del esquema.
4.3 Los requisitos generales referente a las instalaciones de los laboratorios adecuados para cubrir todos los
aspectos de los esquemas de ensayo de aptitud, se indican en ISO/IEC 17043:2010, 4.3.1, y los requisitos de
seguridad en ISO/IEC 17043:2010, 4.6.2.4.
En los esquemas microbiolgicos los proveedores deben poseer una capacidad poltica documentada que alerte a
los participantes sobre los riesgos, y que asegure que se proporcionan los consejos de seguridad adecuados
(ver clusula 7). Por ejemplo, los laboratorios de microbiologa de los alimentos deben poseer instalaciones
donde trabajar con microorganismos de categoras de riesgo 1, 2 y 3, segn se necesite (ver ISO 7218:2007, 3.2).
4.4 Seleccin de las matrices de ensayo
Los requisitos generales para documentar las matrices de ensayo en el plan del esquema se indican en
ISO/IEC 17043, 4.4.1.3 y la seleccin de las matrices para simular los tipos de muestra de rutina en
ISO/IEC 17043:2010, 4.4.2.3.

2) En ingls: colony forming units.



Se debera indicar las razones de la eleccin de un tipo de matriz, por ejemplo, para proporcionar unos niveles de
estabilidad y homogeneidad que son adecuados para el propsito al que est destinado el esquema.
La descripcin de los objetos de ensayo debe especificar la matriz de la muestra (natural o simulada); si presenta
una contaminacin natural o artificial; el origen y el pas de procedencia para cumplir con las normativas de
transporte internacionales; y el mtodo de conservacin utilizado, por ejemplo, liofilizado o secado al aire.
4.5 Informacin sobre los mtodos de ensayo utilizados por el proveedor de ensayos de aptitud
Los requisitos generales para los mtodos que va a utilizar un proveedor de ensayos de aptitud se indican en
ISO/IEC 17043:2010, 4.4.1.3.
Si el esquema est dirigido a uno o ms ensayos especificados o requeridos por la legislacin, los ensayos
de control de calidad de rutina sobre las muestras del esquema (es decir, la homogeneidad y la estabilidad)
se deben realizar de acuerdo a los mtodos estipulados en dicha legislacin, indicando este hecho
(ISO/IEC 17043:2010, 4.5.1).
Se debe recomendar encarecidamente, que los participantes utilicen sus propios mtodos de rutina, pero cuando
se realicen ensayos de acuerdo a la legislacin se deben proporcionar algunas indicaciones, por ejemplo, una
referencia a los mtodos ISO, a los textos legislativos o a publicaciones sometidas a revisin externa
(ISO/IEC 17043:2010,4.5.1).
4.6 Diseo estadstico
Los requisitos generales de los diseos estadsticos se indican en ISO/IEC 17043:2010, 4.4.4.
Un esquema del diseo estadstico para los esquemas de ensayos de aptitud en microbiologa debe indicar que
los ensayos estadsticos que se van a utilizar se ven afectados por el nivel de homogeneidad del material de
ensayo, que, a su vez, se ve afectada por la variacin aleatoria en la distribucin de los microorganismos.
Excepto para nmeros muy bajos, se suele esperar una distribucin log-normal en los datos de los ensayos
cuantitativos. Se deben utilizar mtodos de anlisis estadsticos adecuados para dichos datos
[ver ISO/IEC 17043:2010, B 3.1.4, tem d)]
Cuando se necesite evaluar bajos niveles, en mtodos de ensayos cuantitativos (por ejemplo, en examen de
bebidas o de agua), resulta ms aplicable un modelo de Poisson aleatorio, ya que la variacin en el nmero de
organismos entre distintas unidades de material llega a ser relativamente grande y puede enmascarar variaciones
en el funcionamiento.
La homogeneidad de la muestra debe ser suficiente, normalmente, como para no influir de forma significativa
sobre la variacin observada entre laboratorios.
Los ensayos de recuento semicuantitativos y los ensayos de deteccin cualitativa requieren mtodos estadsticos
diferentes para analizar los datos que se discuten con mayor profundidad en 8.3 y 8.4.
El plan del esquema debe aclarar las distinciones entre los anlisis de rendimiento para mtodos de deteccin y
los de recuento de microorganismos objetivo.



5 Requisitos tcnicos y directrices sobre el contenido y el diseo de las muestras
5.1 Niveles de organismos objetivo
Los organismos objetivo se deben proporcionar a unos niveles adecuados para mostrar que los mtodos de
ensayo se ajustan a los objetivos y que reflejan unos niveles que se encuentran con probabilidad en las matrices
ensayadas (ver ISO/IEC 17043:2010, 4.4.2.3). Cuando el objetivo son bacterias patognicas, los niveles tambin
deberan considerar y reflejar los niveles que puedan suponer un riesgo probable para la salud humana y, cuando
corresponda, los lmites descritos por criterios microbiolgicos.
NOTA No siempre se conoce con exactitud el nivel que supone un riesgo sobre la salud humana, y depende de la susceptibilidad de
cada individuo. El objetivo de un examen de patgenos es prevenir la enfermedad, as como detectar patgenos presentes en niveles muy
bajos, antes de que dichos patgenos puedan alcanzar un nivel mayor.
En los mtodos cuantitativos (de recuento) el nivel del microorganismo objetivo debe ser adecuado para los
niveles presentes de forma rutinaria y en base a las especificaciones reglamentarias aplicables a las matrices de
muestras utilizadas. En ocasiones, se debera utilizar tambin la diana a unos niveles prximos al lmite de
cuantificacin de los mtodos de rutina para someter a prueba el comportamiento de los participantes a lo largo
de todo el rango de aplicacin del mtodo. Sin embargo, las muestras no se deberan enviar con un nivel de
organismos tan bajo que, cuando se realizan las diluciones habituales, el nmero medio esperado de organismos
en una muestra sea menor que 10 colonias por placa.
En los mtodos cualitativos (de deteccin) se requiere por lo general que los organismos objetivo estn a un
nivel suficientemente bajo como para servir como prueba vlida de la metodologa y para proporcionar datos
para los ejercicios de validacin dirigidos a establecer o comprobar los lmites de deteccin en los laboratorios
participantes individuales.
5.2 Fuentes, caracterizacin y trazabilidad de los organismos
Las caractersticas de los organismos objetivo se deben establecer con anterioridad a su uso, para poder
determinar con seguridad su comportamiento, de forma especial en esquemas en los que se permite que los
participantes adopten metodologas diferentes.
Se deberan considerar, tanto cepas tpicas como atpicas e incluirse en el programa del esquema para poner a
prueba el comportamiento del laboratorio.
Se deberan utilizar cepas de referencia reconocidas procedentes de colecciones internacionales cuando sean las
ms adecuadas para el objetivo del esquema; no obstante, los aislados de laboratorio o las cepas "salvajes"
aisladas de las matrices utilizadas en los esquemas de ensayo de aptitud tienen utilidad para reflejar de forma
ms exacta las situaciones de rutina.
Cuando se utilicen, deberan estar suficientemente caracterizadas conforme a los mtodos de referencia de las
correspondientes Normas Internacionales, para asegurar que los organizadores detectan todo tipo de reacciones
atpicas antes de su uso.
En todos los casos, los organismos utilizados en las muestras de los esquemas de ensayos de aptitud deberan ser
trazables hasta la coleccin de cultivos correspondiente o a los datos de caracterizacin vlidos conservados por
los organizadores.



Bajo determinadas circunstancias, no es posible utilizar cultivos de referencia o materiales procedentes de
colecciones reconocidas internacionalmente o cepas de laboratorio cultivadas, por ejemplo, en esquemas de
ensayos de aptitud para organismos no cultivables como los norovirus humanos. En estas circunstancias, se
puede utilizar un material clnico para contaminar una matriz de ensayo de forma artificial, mediante inmersin,
spray o, en el caso de los moluscos bivalvos, mediante bioacumulacin. El mtodo de contaminacin artificial
debera ser lo ms parecido posible a la ruta "natural" de contaminacin. Se debera prestar un cuidado extremo
cuando se manipula material clnico humano, muestras de heces o de vmito, y se deberan rastrear en busca de
otros patgenos antes de su uso. Los virus objetivo se deberan caracterizar de forma completa hasta el nivel de
cepa mediante reaccin de la polimerasa en cadena convencional seguida de secuenciacin.
5.3 Flora acompaante y competitiva
Se debe escoger la flora completa de las muestras, contaminadas de forma natural o artificial, para determinar la
capacidad de los participantes para detectar y/o enumerar los organismos objetivo en presencia de flora de fondo
no-objetivo (tpica de la matriz de la muestra) y los presuntos organismos objetivo que, a falta de ensayos de
confirmacin adecuados, pueden causar resultados falsos positivos.
Todas las cepas utilizadas para simular a la flora de base deben cumplir los requisitos de 5.2 respecto a
caracterizacin y trazabilidad. En las muestras contaminadas de forma natural, se debe determinar el efecto de
toda la flora de base sobre los organismos objetivo.
5.4 Efectos y seleccin de la matriz
Se deben evaluar todas las matrices antes de su uso, para comprobar los efectos de las floras objetivo y de base,
por ejemplo, cuando las matrices reducen la tasa de recuperacin de los organismos contaminados
artificialmente.
Se debe alertar a los participantes sobre la naturaleza de la matriz alimentaria cuando se conozca que dichas
matrices afectan negativamente la tasa de recuperacin de microorganismos (por ejemplo, las que unen y
retienen clulas, como los materiales grasas) o tienen propiedades bactericidas o bacteriostticas. Se deben
incluir procedimientos de preparacin adecuados y validados como informacin de los participantes.
Las matrices de muestras utilizadas en esquemas de ensayos de aptitud microbiolgicos se esterilizan con
frecuencia, aunque no necesariamente, de manera previa a su uso. Cuando se distribuyen muestras naturales no
esterilizadas, los organizadores deben determinar el efecto de la microflora de base sobre las muestras.
6 Verificacin de las muestras por parte del proveedor
6.1 Generalidades
Los requisitos generales para la verificacin de las muestras se indican en ISO/IEC 17043 e ISO 13528 (para
mayor informacin, ver Bibliografa, [9]); esta clusula ampla los requisitos especficos y los problemas de los
ensayos de homogeneidad y estabilidad en materiales que contienen microorganismos vivos.
6.2 Ensayo de homogeneidad de las muestras. Consideraciones generales
(Ver ISO/IEC 17043:2010, 4.4.3 y clusula B.5).
Los ensayos de aptitud pueden suponer la preparacin de un material de ensayo a granel, que se subdivide
despus en porciones individuales, tan similares unas a otras como sea posible, para su distribucin a los
participantes. Alternativamente, las porciones de ensayo se pueden inocular de forma individual para su
distribucin.



Sea cual sea el mtodo de preparacin utilizado, se debe comprobar la homogeneidad del material de ensayo,
normalmente antes, pero tambin a la vez, que se ensayan materiales perecederos inestables.
Se debera realizar un ensayo de homogeneidad sobre cada serie de muestras, basado en principios estadsticos
relevantes (ver ISO/IEC 17043:2010, 4.4.3.2 y clusula B.5). Dichos ensayos se muestran en ISO 13528 o
alternativamente en Anexo B.
Tambin es necesario ensayar la homogeneidad si los materiales se van a almacenar durante perodos de tiempo
prolongados, para asegurar que los criterios se siguen cumpliendo antes de su uso. El nmero de muestras que se
va a ensayar de cada lote debera ser tambin, suficiente para obtener informacin actualizada sobre la
homogeneidad del lote, se recomienda utilizar 10 muestras (analizadas en duplicado si es necesario).
Un material de ensayo, de homogeneidad insuficiente, se puede llegar a utilizar en una ronda de ensayos de
aptitud (ver ISO/IEC 17043:2010, 4.4.3.1, Nota 3) siempre que se utilicen principios estadsticos adecuados que
tengan en cuenta la mayor varianza entre las muestras (ver ISO 13528). Se debera utilizar un plan estadstico
para materiales heterogneos, que incluya rplicas de anlisis de varias muestras (ver ISO 5725-5) para
minimizar los efectos de la falta de homogeneidad sobre la evaluacin del comportamiento de los participantes.
6.3 Ensayo de homogeneidad para muestras cuantitativas (recuento)
Los requisitos generales y los procedimientos de ensayo de la homogeneidad de los materiales para ensayos de
aptitud cuantitativos se indican en ISO/IEC 17043:2010, 4.4.3 y clusula B.5 y en ISO 13528.
Los materiales que muestran una variacin entre unidades suficientemente grande como para afectar
significativamente la evaluacin del comportamiento de un laboratorio no se deberan utilizar en estudios
interlaboratorios, salvo que se apliquen mtodos de procesamiento de datos y requisitos especiales, como por
ejemplo, en el caso de nmeros pequeos de microorganismos en el agua de consumo y otras muestras.
El criterio de "suficientemente homogneo" viene definido por los requisitos de la comparacin interlaboratorios
(ver ISO 13528 y Anexo B). Sin embargo, en general se considera suficientemente homogneo un material en el
que la desviacin estndar entre unidades (en la escala transformada adecuada) es menor o igual que 0,3 o
p
,
donde o
p
es la desviacin estndar ideal utilizada para evaluar el comportamiento de los laboratorios
(ver ISO 13528).
Cualquier otro ensayo alternativo de homogeneidad debera cumplir los criterios siguientes (ver Bibliografa [9]):
a) la probabilidad de rechazar un material de ensayo suficientemente homogneo debera ser menor o igual
que 5%;
b) la probabilidad de rechazar un material de ensayo en el que la variacin entre unidades es de 1,5 o
p
, siendo
o
p
la variacin entre laboratorios aceptable (expresada como desviacin estndar ideal), es mayor o igual
que 80%.
El 80% de probabilidad de rechazar un material en el que la variacin entre unidades es de 1,5 o
p
se basa en
estudios de simulacin de anlisis por duplicado de 10 unidades de ensayo utilizando un mtodo con una
desviacin estndar analtica de 0,50 o
p
(es decir, de 0,125 unidades logartmicas) y un valor crtico para I
2

(ver Anexo B) que cumpla el criterio a) del prrafo anterior. Representa lo que se puede conseguir con una
cantidad razonable de esfuerzo analtico.



Los ensayos de homogeneidad se basan en estimaciones de la varianza entre unidades y de la varianza analtica
(repetibilidad) obtenida en condiciones de repetibilidad. En Anexo B se indican mtodos adecuados para estudiar
dicha variacin.
La varianza analtica (repetibilidad) se debera estimar mediante rplicas de anlisis de las suspensiones iniciales
procedentes de las porciones de ensayo (ver Bibliografa [15] y [16]). Esta varianza analtica tambin se puede
calcular a partir del nmero de colonias contadas y de la precisin de los materiales analticos utilizados
(ver Bibliografa [10]).
En microbiologa, la varianza entre unidades se debe estimar bajo condiciones de repetibilidad
(simultneamente). Si resulta imposible, la varianza entre unidades incluye la repetibilidad interlaboratorio y
puede ocasionar tal vez un rechazo incorrecto de un material satisfactorio.
Cuando el nmero de colonias contadas es suficientemente alto (ms de 35 a 40 colonias por placa), la
desviacin estndar analtica, o
p
, suele resultar satisfactoria.
o
un
o
p
< u,S
donde o
p
es la desviacin estndar ideal. Se debera utilizar el ensayo de homogeneidad suficiente propuesto
en Bibliografa [11] (ver Anexo B). Si el nmero de colonias contadas es bajo (menos de 35 a 40 colonias por
placa), se recomienda el ensayo I
1
- I
2
(ver Anexo B).
Cuando se proporcionan rplicas de unidades de ensayo a los laboratorios participantes, el proveedor debera
examinar la variabilidad entre unidades obtenida por los participantes, para determinar la homogeneidad del
material. Aunque esta variabilidad incluye la reproducibilidad interlaboratorios, cuanto mayor sea el nmero de
laboratorios participantes mayor ser el poder estadstico del anlisis y puede ser un buen indicador para rondas
sucesivas.
Cuando el nmero de colonias contadas es bajo (menor que 20), la varianza analtica (repetibilidad) es alta. En
ese caso, el proveedor debera recomendar que los laboratorios participantes repliquen los recuentos de las
porciones de ensayo para satisfacer la condicin (ver ISO 13528):
o
n
u,So
p

en que:
o
= desviacin estndar de la repetibilidad;

o
p
= desviacin estndar ideal;
n = nmero de rplicas.
Si no resultara posible, el comportamiento del laboratorio se debera considerar con prudencia.
Cuando el material de un ensayo de aptitud contiene un nmero reducido de ufc (menor que 20) se debe medir la
variacin entre unidades (es decir, entre rplicas de muestras) para demostrar que no sobrepasa la variacin
aleatoria (de Poisson) y proporcionar una evaluacin significativa. El ensayo del ndice de dispersin realizado
sobre n muestras (donde n es un mnimo de 10) no debera sobrepasar el valor X
n-1
2
para una probabilidad de
0,05.



6.4 Ensayo de homogeneidad para mtodos cualitativos
En los ensayos de homogeneidad para mtodos cualitativos (presencia/ausencia) se aplican los mismos
principios, pero se requiere hacer una consideracin especial cuando el nivel de contaminacin artificial es bajo
(ver 8.4).
La homogeneidad de las muestras cualitativas se puede estudiar mediante un recuento del contaminante aadido.
Tambin se puede determinar el nivel de contaminacin utilizando la tcnica del nmero ms probable, NMP
3)
.
Si se puede realizar el recuento, se pueden utilizar los ensayos de homogeneidad descritos en 6.3, en funcin de
cmo se ha realizado la contaminacin artificial y cmo se realiza el recuento del contaminante aadido.
6.5 Ensayo de estabilidad realizado por el proveedor
6.5.1 Generalidades
Las muestras que se van a utilizar en ensayos de aptitud deben ser estables al menos desde el momento de su
preparacin (por parte del proveedor) hasta la fecha del estudio o el final del perodo de tiempo permitido
(ver ISO/IECD 17043:2010, 4.4.3).
Si se utiliza siempre el mismo tipo de muestra con la(s) misma(s) cepa(s) de ensayo, es suficiente realizar
solamente una comprobacin (por ejemplo, despus de la preparacin y en la fecha del estudio) sobre las
muestras subsiguientes.
El proveedor debera examinar tambin los resultados obtenidos por los laboratorios participantes, para
comprobar la estabilidad del material durante el perodo permitido para el estudio.
6.5.2 Estabilidad referida a las condiciones de almacenamiento
Para las muestras estables que se almacenan siempre a bajas temperaturas (por ejemplo -70C, -20C, 5C), la
estabilidad se debe determinar comprobando el nivel de analito y la homogeneidad de cada lote a intervalos
regulares a lo largo de su perodo de almacenamiento. El perodo mnimo del ensayo de estabilidad debera
corresponder al tiempo entre la preparacin de los materiales y la fecha indicada o el perodo de anlisis.
La frecuencia de ensayo depende de la informacin ya disponible para el lote de muestras y el perodo de tiempo
total a lo largo del cual se requiere informacin sobre la estabilidad. Si el tiempo total de almacenamiento es,
por ejemplo, solamente de dos semanas, puede ser necesario hacer un ensayo cada dos das, pero si el tiempo de
almacenamiento requerido es de un ao puede ser suficiente un ensayo mensual. Para lotes grandes de muestras,
se debera ensayar en cada ocasin un mnimo de tres muestras, para mostrar la estabilidad continuada a lo largo
de todo el lote (ver ISO 13528, Anexo B). Cualquiera que sea la frecuencia de ensayo, se debe justificar y validar
como aceptable por los organizadores del esquema.
6.5.3 Estabilidad referida a las condiciones de transporte
Adems de la informacin sobre estabilidad referida a las condiciones de almacenamiento, recogida a lo largo de
los estudios de validacin para un esquema nuevo, es importante ensayar el efecto de las "condiciones forzadas"
sobre las muestras, debidas, por ejemplo, a tiempos de transporte prolongados a temperaturas elevadas
(ver ISO/IEC 17043, 4.6.3.2).

3) En ingls: MPN, Most Probable Number.



Se debe realizar en primer lugar un ensayo de estabilidad a diferentes temperaturas para reflejar las condiciones
de transporte en el "caso ms desfavorable" y con el mximo retraso posible, para ensayar el efecto de dichas
condiciones forzadas sobre las muestras de ensayo. Por ejemplo, las muestras de un lote se almacenan a la
temperatura de almacenamiento indicada (por ejemplo -20C), pero tambin a 5C, 15C y 25C. Todos los das
se analizan cinco muestras mantenidas a cada temperatura de almacenamiento durante un perodo total de una o
dos semanas.
El diseo de dichos experimentos de estabilidad es variable, pero debera ser el adecuado para obtener
informacin sobre el efecto de las distintas temperaturas de almacenamiento sobre las muestras, y para establecer
el lmite de temperatura mxima de recepcin por parte del laboratorio. La informacin recogida se puede
utilizar para escoger las condiciones ptimas de distribucin de las muestras del esquema, por ejemplo, si es
necesario refrigerar las muestras durante el transporte con hielo seco o con paquetes de hielo, o si resulta
aceptable la distribucin a temperatura ambiente.
En el caso de distribuciones donde la temperatura es crtica, que requieren una refrigeracin controlada con
criterios de aceptacin estrictos, como los esquemas relacionados con el ensayo legislado de E. coli en moluscos
bivalvos, se recomienda incluir registradores de temperatura individuales en cada caja de muestras para registrar
la temperatura de las muestras en trnsito. La comprobacin de los datos de temperatura puede permitir que el
proveedor del esquema pueda explicar unos resultados anmalos emitidos por los participantes.
7 Manipulacin de las muestras
7.1 Generalidades
Los requisitos sobre la manipulacin de las muestras en general se describen en ISO/IEC 17043; y en esta
clusula solamente se ofrece informacin adicional relacionada con las muestras microbiolgicas.
7.2 Instrucciones a los participantes
En cada estudio, todos los laboratorios participantes deben recibir un conjunto claro de instrucciones que
incluya:
a) las condiciones de almacenamiento para las muestras de todos los tipos, en especial la informacin sobre
temperatura de almacenamiento, que debera aparecer tambin en el exterior del embalaje de transporte;
b) la temperatura mxima de las muestras al ser recepcionadas por parte del laboratorio participante, cuando
corresponda;
c) instrucciones sobre cmo manipular las muestras, si se necesita reconstituir, diluir o realizar otro tipo de
procesamiento sobre las muestras, se debera describir con claridad para cada serie y tipo de muestras:
d) documentos de datos de seguridad adecuados, que se deberan incluir dentro de cada distribucin
(en Anexo D se muestra un ejemplo del grado de detalle requerido);
e) otras instrucciones suplementarias, como:
- las fechas lmite en las que se deberan realizar los exmenes y enviar los resultados a los organizadores;
- el (los) mtodo(s) de examen (prescritos o a eleccin del participante, segn corresponda);
- cmo proporcionar el informe de resultados a los organizadores, en particular las unidades de medida;
- los organizadores pueden solicitar detalles sobre los materiales, mtodos, condiciones de incubacin,
etc. en plantillas de informe, en este caso, se deberan proporcionar instrucciones para completar dichas
plantillas.



8 Evaluaciones de rendimiento
8.1 Generalidades
Siempre que sea posible, los principios estadsticos utilizados para evaluar el comportamiento de los esquemas
de ensayos de aptitud se deberan basar en los indicados en ISO 13528 e ISO 17043:2010 (ver Bibliografa [9]
para mayor informacin), aunque los esquemas de ensayos de aptitud de microbiologa pueden adoptar
procedimientos diferentes de los utilizados normalmente en otros sectores, si resultan adecuados para sus
esquemas en particular.
8.2 Consideraciones preliminares
Los ensayos de aptitud suponen la distribucin regular de materiales de ensayo a los laboratorios participantes
para que ellos examinen mesurandos especficos (en la mayora de los casos, microorganismos) en los materiales
de ensayo. Los resultados del examen se comparan con los de otros participantes. Los ensayos de aptitud
suponen por consiguiente una forma independiente de ensayar y comparar el comportamiento individual.
Un comportamiento satisfactorio mantenido en rondas de ensayos de aptitud puede proporcionar confianza a los
participantes sobre los procesos de sus laboratorios, incluidos los mtodos de ensayo, el entrenamiento de los
analistas, el equipamiento, los reactivos, los procedimientos de control de la calidad, la interpretacin de los
resultados y las tcnicas de emisin de informes.
Sin embargo, unos resultados no satisfactorios implican que el comportamiento de un participante individual es
dbil en comparacin con el valor consenso, lo cual puede hacer surgir mltiples preguntas. Entre ellas estn:
eran iguales todas las muestras de ensayo?, cmo trabajaron otros participantes?, la metodologa puede haber
distorsionado los resultados? y se han interpretado correctamente los resultados? Por lo tanto, los organizadores
de esquemas deberan emplear sistemas adecuados de evaluacin del comportamiento para ayudar a los
participantes a resolver dichas preguntas.
Hay muchas formas diferentes de interpretar los datos de los ensayos de aptitud, pero los mtodos de
interpretacin deben ser objetivos.
La mayora de los participantes que forman parte de esquemas de ensayos de aptitud microbiolgicos no estn
familiarizados con la estadstica y deben confiar en que los procedimientos utilizados por los organizadores de
esquemas de ensayos de aptitud sean robustos.
Se deben abordar las siguientes consideraciones sobre los principios estadsticos aplicados:
a) la validez;
b) una informacin explicativa para los participantes;
c) los motivos de la seleccin;
d) la consistencia.
Se debe proporcionar una informacin clara y no sesgada a los participantes, que permita la autoevaluacin e
interpretacin de los resultados y que maximice los beneficios de la participacin.



8.3 Mtodos cuantitativos
8.3.1 Generalidades
El diseo estadstico para los esquemas de ensayos de aptitud de mtodos de recuento en microbiologa est
relacionado con el grado de homogeneidad del material de ensayo, que a su vez se ve afectado por la variacin
aleatoria en la distribucin de los organismos. Adems, es probable que aparezcan diferencias sustanciales entre
los participantes sobre la precisin requerida o esperada en un ensayo.
La eleccin del mtodo estadstico debe considerar los factores referidos en 8.1 y 8.2, junto con otras
consideraciones, como el nmero de participantes de un esquema en concreto. Los parmetros que contribuyen a
decidir qu ensayos estadsticos se van a utilizar se deberan dejar establecidos. Por ejemplo, los esquemas
especializados pueden tener menos de 30 participantes; los resultados de 30 participantes se pueden analizar de
forma diferente que los esquemas ms grandes, por ejemplo, de ms de 100 participantes.
El mtodo de anlisis estadstico escogido debe ser adecuado, no slo para el nmero de participantes que
realizan un determinado ensayo, sino tambin para el mtodo utilizado. Por ejemplo, los resultados de un ensayo
que utiliza mtodos de recuento de colonias se analizan de forma distinta que los mtodos que
necesitan determinar el NMP, debido a que la variacin inherente al mtodo de NMP tiende a ser mayor que la
de los mtodos de recuento de colonias. De hecho, se pueden necesitar distintos parmetros estadsticos para
evaluar el comportamiento de los participantes para distintos ensayos dentro de un mismo esquema
(ver ISO/IEC 17043:2010, 4.5.2). Dicha informacin se debe establecer en los documentos del diseo del
esquema y se deben hacer referencia a criterios microbiolgicos aceptados de forma universal en el plan del
esquema.
Los anlisis estadsticos adecuados y la asignacin de una calificacin a los participantes est sealada en
ISO/IEC 17043, Anexo B.
8.3.2 Distribucin de los datos
Cuando se repite varias veces un ensayo de recuento bajo condiciones de repetibilidad, se esperara que la
distribucin de la frecuencia de los resultados siguiera una forma de campana, denominada distribucin normal.
Los recuentos microbiolgicos suelen seguir una distribucin log-normal y los datos se convierten a su logaritmo
en base 10 para obtener una curva de distribucin normal. Sin embargo, si el nmero de bacterias es reducido se
puede aplicar directamente el valor del recuento o su transformacin a la raz cuadrada.



Aunque el material sometido a ensayo es el mismo, los resultados no son todos idnticos debido a que se espera
que se vayan a producir numerosas variaciones pequeas independientes durante las distintas manipulaciones
que supone la realizacin de los ensayos.
En los ensayos de aptitud los ensayos no se suelen realizar en condiciones de repetibilidad ni incluso de
reproducibilidad. Los ensayos se desarrollan por parte de analistas distintos, en distintos lugares y en momentos
diferentes, utilizando una gran variedad de equipos, medios, reactivos y mtodos analticos, lo cual resulta en
una variabilidad adicional que se podra describir como condiciones de "superreproducibilidad" o
"metarreproducibilidad", ya que el trmino reproducibilidad se utiliza normalmente en el contexto de un solo
mtodo.
A pesar de dichas variaciones en las condiciones de ensayo, se suele observar una distribucin (log)-normal de
los resultados y se debera utilizar los principios estadsticos adecuados a las distribuciones (log)-normales para
interpretar los datos, siempre que la distribucin sea aproximadamente simtrica y unimodal.
Si la distribucin de datos no presenta una apariencia (log)-normal, se deberan determinar las posibles razones y
los datos se deberan interpretar en concordancia utilizando otros ensayos adecuados.



8.3.3 Determinacin del valor asignado
El objetivo de los ensayos de aptitud es evaluar el grado de capacidad con que cuentan los participantes para
conseguir el resultado "correcto". Sin embargo, en muchos esquemas de ensayo de capacitacin no es posible
conocer el resultado "correcto", ya que numerosos analistas pueden examinar el mismo material de ensayo y
cada uno proporcionar un resultado ligeramente diferente.
Por el contrario, se debera hacer una estimacin del valor "correcto" o "verdadero", al que se hace referencia
como "valor asignado". El valor asignado se puede determinar de varias maneras, como se describe en
ISO/IEC 17043:2010, B.2 e ISO 13528.
El mtodo ms habitual en los esquemas de ensayos de aptitud microbiolgicos es el valor consensuado entre los
laboratorios participantes. El valor asignado se determina a partir de la media robusta o la mediana de los
resultados de todos los participantes. El uso de mtodos robustos tiene por objeto minimizar la influencia de los
valores discrepantes de forma que dichos resultados no se necesitan eliminar de la serie de datos porque los
discrepantes "verdaderos" pueden ser difciles de detectar.
El valor asignado presenta una incertidumbre mayor que otros mtodos, lo cual se toma en consideracin cuando
se evala el comportamiento. El valor asignado se considera acertado porque los resultados de todos los
participantes contribuyen a su clculo.
Si se obtiene una mediana global baja cuando se establecen los valores asignados a partir del consenso de los
participantes (por ejemplo, porque un gran nmero de participantes ha encontrado dificultades en aislar o
identificar un organismo en particular), los organizadores del esquema deberan discutirlo, de forma que el
comportamiento de los participantes cuyos resultados no se han visto afectados se juzguen de forma correcta.
8.3.4 Incertidumbre del valor asignado
El valor asignado representa la mejor estimacin del valor real. Viene acompaado de una incertidumbre
normalizada que indica el nivel de confianza de esta estimacin. Si la incertidumbre normalizada del valor
asignado es demasiado grande en comparacin con la desviacin estndar de la serie de ensayos, algunos
participantes recibirn evaluaciones de aviso y de accin, no por motivo de su comportamiento, sino por la gran
incertidumbre del valor asignado.
Por consiguiente, se deberan establecer los criterios de aceptacin de un valor asignado en trminos de su
incertidumbre. Existen muchos mtodos para estimar esta incertidumbre y determinar la aceptabilidad, que se
describen en ISO 13528.
8.3.5 Mtodos para evaluar el comportamiento
El organizador de un esquema de ensayos de aptitud debe determinar el valor asignado y evaluar en qu
magnitud el (los) resultado(s) de cada participante individual se desva(n) del valor asignado en comparacin con
los resultados de todos los dems participantes. Por consiguiente, el comportamiento de un participante no se
juzga respecto al resultado "correcto" sino respecto a la estimacin estadstica del resultado "correcto" obtenido a
partir de todos los datos sometidos. Cuando mayor sea el nmero de datos, mayor probabilidad de que sea ms
exacta la estimacin estadstica.
Los mtodos habituales de evaluar el comportamiento y asignar calificaciones se detallan en
ISO/IEC 17043:2010, clusula B.3 e ISO 13528.



8.3.6 Uso de los ndices-z
8.3.6.1 Generalidades
Un mtodo habitual y ampliamente aceptado utilizado en los ensayos de aptitud es el sistema del ndice-z, ya que
es relativamente sencillo de calcular e interpretar (ver ISO/IEC 17043:2010, clusula B.3). El ndice-z indica
cuntas desviaciones estndar se aleja de la media un valor determinado, es decir un ndice-z de 2 representa a
valor situado a 2 o de la media, donde o es la desviacin estndar.
Como se representa en Figura 1, los datos con una distribucin normal estandarizada contienen un 95% de sus
valores dentro de un intervalo de 2 o veces alrededor de la media, y un 99,7% dentro de un intervalo de 3 o. Los
resultados con un ndice-z mayor que 2 se consideran por lo tanto cuestionables debido a que cabe esperar que el
5% de las medidas correctas muestren esa diferencia respecto al valor asignado. Los resultados con un ndice-z
mayor que 3 se consideran no satisfactorios debido a que se espera que solamente un 0,3% de las medidas
correctas muestren esa diferencia respecto al valor asignado (ver ISO/IEC 17043:2010, clusula B.4).
8.3.6.2 La desviacin estndar objetivo para los clculos de ndice-z
El clculo de ndice-z utiliza un valor ideal de desviacin estndar. Esta desviacin estndar ideal define la
escala de variacin aceptable entre laboratorios para un ensayo en particular. Se debera utilizar la misma
desviacin estndar ideal a lo largo de rondas de ensayo sucesivas del ensayo de aptitud, de forma que las
calificaciones sean comparables de serie a serie. Hay varios mtodos para establecer la desviacin estndar ideal,
detallados en [9], ver ISO/IEC 17043:2010, clusula B.3 e ISO 13528.
8.3.6.3 Resultados mltiples en sistemas de ndice-z
Las diferencias entre los resultados de los participantes provienen de la variacin entre laboratorios as como de
la variacin entre laboratorios. La variacin dentro de un laboratorio o varianza entre laboratorios es la variacin
entre medidas realizadas en el mismo laboratorio sobre la misma muestra y es una caracterstica inherente de los
exmenes microbiolgicos. La variacin entre laboratorios se mide mediante la varianza de la repetibilidad.
Cuando un laboratorio participante proporciona mltiples resultados de un nico material de ensayo, puede
sesgar potencialmente el resto de los datos de los dems participantes. Por ejemplo, si todos los 10 analistas de
un mismo laboratorio ensayan una misma muestra que se ha diluido incorrectamente al principio, todos los
10 resultados seran incorrectos. Este nmero de resultados incorrectos se convierte en un subgrupo dentro del
global de los datos y puede sesgar todos los dems resultados. Para evitar dicho sesgo, solamente se debera
incluir un resultado de cada laboratorio para el anlisis global de los datos de una distribucin.
Cuando un laboratorio participante ha obtenido mltiples resultados de una sola muestra de ensayo de aptitud,
dichos resultados se deben proporcionar por separado y no como un valor medio. Cuando los organizadores del
esquema permiten un solo resultado por participante, el resultado individual que se va a proporcionar se debe
escoger antes de realizar el examen y conocer los resultados.
8.3.7 Otros mtodos de evaluacin del comportamiento
Aunque los ndices-z se utilizan con mucha frecuencia para la evaluacin de los resultados de esquemas de
ensayos de aptitud en los mtodos de recuento, otros mtodos de calificacin pueden resultar adecuados para
esquemas concretos.



Por ejemplo, en muestras en las que se buscan recuentos reducidos (como en el agua de consumo), la evaluacin
estadstica se puede basar en un modelo que prediga la variacin aleatoria. De esta manera, los recuentos de las
colas finales "bajas" o "altas" se definen utilizando la frmula de Poisson. Ocasionalmente se pueden encontrar
por azar unos resultados altos o bajos en cualquier laboratorio, pero una acumulacin de resultados con colas
finales indica un comportamiento deficiente. Las ventajas y desventajas de un modelo respecto a una
aproximacin de percentiles para la evaluacin estadstica se discuten en Bibliografa [17].
En el caso de esquemas en los que se esperan recuentos elevados, se puede utilizar la aproximacin de
percentiles o la regla de 0,5 log
10
pero se requiere el mtodo de la desviacin absoluta de la mediana para
esquemas con un bajo nmero de participantes. Se describen brevemente en 8.3.7.2 a 8.3.7.4.
8.3.7.2 Uso de la regla de 0,5 log
10
Se puede utilizar un sistema de calificacin basado en la regla de 0,5 log
10
para el recuento de colonias (adaptado
de Bibliografa [13). En resumen, los intervalos de confianza al 95% alrededor de un valor medio de recuento de
colonias no suelen ser mayor que 0,5 log
10
cfu. Los procedimientos de control interno de la calidad en los
laboratorios de microbiologa normalmente necesitan que las rplicas de los recuentos queden incluidas dentro
de un margen menor que 0,5 log
10
para demostrar un buen control. Esto se aplica a los resultados de los
participantes de forma que todos los resultados incluidos dentro de un intervalo de 0,5 unidades log
10
de la
mediana de los participantes se consideren aceptables y se les asigna la mxima calificacin. Esta regla permite
que las calificaciones de los participantes mejoren a lo largo del tiempo si la calidad de los recuentos de los
participantes tambin mejora.
La regla de 0,5 log
10
se basa en criterios microbiolgicos, pero tambin, es vlida estadsticamente porque si el
recuento esperado para una placa es de 10 colonias y los organismos se distribuyen de forma aleatoria, el 95% de
los resultados se deberan encontrar entre 3 y 17 colonias. En una escala logartmica decimal, el recuento medio
esperado es de 1, el lmite menor es de 0,47 y el lmite mayor de 1,23, es decir, los lmites mayores y menores
estn incluidos dentro del rango de 0,5 unidades de log
10.
Por consiguiente, un resultado incluido dentro del
rango de 0,5 unidades de log
10
del valor esperado se debera considerar aceptable.
8.3.7.3 Uso de los percentiles
Los percentiles se pueden utilizar para identificar valores de recuento discrepantes cuando hay un nmero mayor
o igual que 50 participantes que desarrollan un procedimiento de recuento de colonias. Esto permite calcular los
percentiles 5, 10, 90 y 95 de la distribucin de los resultados de los participantes (C5, C10, C90 y C95,
respectivamente). Los valores C5 y C10 se deberan redondear hacia abajo al valor ms cercano en unidades de
0,05 log
10
(por ejemplo, 2,23 se redondea a 2,20), mientras que los valores de C90 y C95 se deberan redondear
hacia arriba (por ejemplo, 3,36 se redondea a 3,40). A continuacin se representa cmo se pueden asignar las
calificaciones (para un recuento de colonias aerbicas):
- Resultados entre C10 y C90 (rango aceptable): Calificacin = 2
- Resultados entre C5 y C10 o entre C90 y C95: Calificacin = 1
- Resultados menores que C5 o mayores que C95: Calificacin = 0
La aplicacin de la regla de 0,5 log
10
puede extender el rango aceptable y por lo tanto mejorar las calificaciones
asignadas a algunos resultados en C5, C10, C90 y C95.
El mtodo de percentiles es robusto y no depende de que la distribucin real del logaritmo decimal del recuento
sea normal. Permite una interpretacin clara de la evaluacin del comportamiento.



Si el nmero de participantes de un esquema de ensayos de aptitud establecido est por debajo de 50 laboratorios
o el nmero de participantes que proporcionan resultados de recuento para un parmetro en particular cae por
debajo de 50, se deberan utilizar los valores de la desviacin absoluta de la mediana (MAD)
4)
; (ver 8.3.7.4) en
lugar de los percentiles.
8.3.7.4 Uso de los valores de desviacin absoluta de la mediana
El mtodo de MAD se utiliza para identificar valores discrepantes cuando hay menos que 50 participantes que
realizan un recuento. No se deberan utilizar los percentiles ya que menos de 50 resultados proporcionan unos
datos insuficientes como para calcular valores vlidos de C5, C10, C90 y C95. Los valores de MAD
proporcionan un mtodo robusto para calcular el rango aceptable a la hora de evaluar los resultados de los
participantes y asignar calificaciones. El anlisis requiere calcular la diferencia de la mediana respecto a la
mediana de todos los resultados, que se multiplica por 1,4826, obtenindose una estimacin robusta de la
desviacin estndar (valor MAD), o
MAD
.
A continuacin se describe un ejemplo de cmo se podran asignar las calificaciones utilizando los valores de
MAD:
- Resultados incluidos dentro de la mediana de los participantes 2 o
MAD
: Calificacin = 2
- Resultados comprendidos entre 2 o
MAD
y 2,58 o
MAD
: Calificacin = 1
- Resultados fuera de 2,58 o
MAD
: Calificacin = 0
Al igual que en el caso de los percentiles, los lmites inferiores se deberan redondear hacia abajo hasta el valor
ms cercano en unidades de 0,05 log
10
, mientras que los lmites superiores se deberan redondear hacia arriba
hasta el valor ms cercano en unidades de 0,05 log
10
.
Notar que, salvo que se aplique la regla de 0,5 log
10
, aproximadamente el 5% de los laboratorios deberan quedar
fuera del rango de 2 o
MAD
y un 1% fuera del rango de 2,58 o
MAD
(asumiendo normalidad en el logaritmo
decimal de los recuentos, sin discrepantes extremos).
El mtodo MAD se debera utilizar para nuevos esquemas de ensayos de aptitud cuando haya menos de
100 participantes.
8.3.7.5 Consideraciones especiales sobre los mtodos del nmero ms probable
El mtodo de ensayo utilizado para determinar el valor de NMP presenta una variabilidad inherente superior que
los mtodos de recuento de colonias y por lo tanto se suele considerar que es simplemente semicuantitativo. No
obstante, en ocasiones se requiere para la deteccin y estimacin de niveles cuando se esperan niveles bajos de
microorganismos, y especialmente cuando los microorganismos se han sometido a un estrs (por ejemplo, como
resultado del procesamiento o de la congelacin). Adems, la legislacin estipula mtodos de NMP o criterios
para el examen microbiolgico de ciertos productos como los productos lcteos y los moluscos bivalvos vivos y
otros mariscos.
Cualquier mtodo de evaluacin de los resultados de los participantes para determinar los valores de NMP
debera permitir la variabilidad inherente del NMP y asumir que la muestra est bien mezclada antes de su
ensayo.
En el mtodo de tres-por-cinco tubos, la desviacin estndar del resultado del log
10
NMP es aproximadamente
de 0,24, siempre que los resultados no muestren unas combinaciones de tubos "extremas", por ejemplo,
combinaciones de 3, 0, 0 a 5, 5 y 2 (ver ISO 7218).

4) En ingls: Median Absolute Deviation.



En el mtodo de tres-por-tres tubos, la desviacin estndar del resultado del NMP es aproximadamente de 0,32,
siempre que los resultados no muestren unas combinaciones de tubos "extremas", por ejemplo, combinaciones
de 2, 0, 0 a 3, 3 y 1.
Esto significa que en una situacin perfecta, sin una excesiva variabilidad entre laboratorios, un 95% de los
resultados debera quedar incluido dentro de 2 o y no ms del 99% dentro de 3 o, donde o es la desviacin
estndar.
Sin embargo, en la prctica s hay cierta variabilidad entre laboratorios. Se ha demostrado que el anlisis de
varias series de datos aumenta la varianza en un factor de aproximadamente 2,5 veces (y por consiguiente la
desviacin estndar en 1,58 veces aproximadamente).
Por consiguiente, los lmites de aceptabilidad para los resultados de los participantes en las determinaciones de
NMP se deberan aumentar a 3 o y 5 o (ver Tabla 1).
Tabla 1 - Lmites de aceptabilidad
Lmite de aceptabilidad Mtodo de tres-por-tres Mtodo de tres-por-cinco
3 o 0,96 log
10
(9,1 veces) 0,72 log
10
(5,2 veces)
5 o 1,60 log
10
(39,8 veces) 1,20 log
10
(15,8 veces)

No se debera necesitar aplicar nunca la regla de 0,5 log
10
a los resultados de NMP debido a la variabilidad
inherente del mtodo.
Para el mtodo de NMP tambin es posible comprobar que las combinaciones de tubos y diluciones indicadas
son consistentes con el NMP proporcionado basado en el uso de las tablas (ver ISO 7218).
Si el esquema de ensayos de aptitud o la legislacin en la que se basa requieren que la determinacin de
los valores de NMP se realice por duplicado, los resultados se pueden comparar y, si las combinaciones de los
tubos son de confianza, la diferencia entre los dos resultados no se deberan diferenciar, en unidades
logartmicas decimales, en ms de 2,S8 2 u,24 = u,88 para el mtodo de tres-por-cinco tubos y de
2,S8 2 u,S2 = 1,17 para el mtodo de tres-por-tres tubos.
Si se comparan dos distribuciones con dos rplicas por distribucin, las medias de las dos no se deberan
diferenciar, en unidades logartmicas decimales, en ms de 2,S8 u,24 = u,62 para el mtodo de tres-por-cinco
tubos y de 2,S8 u,S2 = u,8S para el mtodo de tres-por-tres tubos.
8.3.8 Evaluacin del comportamiento a largo plazo
La evaluacin del comportamiento en los esquemas de ensayos de aptitud por lo general queda restringida a la
evaluacin de resultados procedentes de rondas individuales, aunque hay situaciones en las que puede resultar
beneficioso la evaluacin a largo plazo. Aun cuando se aplica generalmente a los esquemas de evaluacin
externa de la calidad, se ofrecen algunas directrices para su finalizacin.
Cualquier mtodo de evaluacin del comportamiento a largo plazo debe asegurar que los laboratorios que
realizan los exmenes microbiolgicos no se identifiquen como "de comportamiento deficiente" por azar debido
al nmero de organismos en las muestras que reciben.



Los recuentos "altos" o "bajos" se deberan definir en base a reglas objetivas (por ejemplo, una definicin basada
en modelos de Poisson para recuentos bajos, percentiles u otros mtodos para recuentos altos) utilizadas para
identificar a los laboratorios que proporcionan este tipo de resultados con ms frecuencia a lo largo del tiempo de
la que se podra esperar por casualidad.
Los organizadores de esquemas deberan animar a los participantes a ejercitar su propio criterio profesional al
evaluar la informacin incluida en los informes, y por lo tanto a autoevaluar su propio comportamiento. Los
organizadores pueden sugerir a sus participantes diversas formas de realizar la autoevaluacin del laboratorio,
pero no deberan dictar criterios para la autoevaluacin por parte de un laboratorio individual; por el contrario, se
deberan establecer por parte de cada laboratorio participante individual, en base a lo que se considere
microbiolgicamente significativo en el contexto de su propia rutina de trabajo y los requisitos de sus clientes.
8.3.8.2 Evaluacin de recuentos bajos
Si el azar es el nico factor implicado, los recuentos de las "colas finales" se deberan distribuir de forma
aleatoria. Se pueden revisar los resultados para determinar la dispersin entre laboratorios de los resultados en
las colas finales a lo largo de una serie de muestras (por ejemplo, utilizando el ensayo de Cochran).
Si no se distribuyen de forma aleatoria, se puede realizar una segunda ronda de anlisis para determinar la
distribucin esperada de los recuentos en las colas finales entre todos los laboratorios que los proporcionan, si se
debe simplemente a la variacin natural entre muestras y no es efecto del comportamiento del laboratorio.
Comparando los valores esperados de laboratorios con el valor encontrado en realidad quedan sealados los
laboratorios que pueden haber sufrido problemas. En Tabla 2 se muestra un ejemplo de la evaluacin del
comportamiento para muestras que contienen valores bajos.
Tabla 2 - Valores esperados y encontrados en series de resultados que asumen una distribucin aleatoria
para resultados bajos (a partir de una distribucin de niveles bajos de Clostridium perfringens
en muestras de agua de consumo, donde la variacin en valores entre los objetos de ensayo
pueden superar necesariamente la variacin debida al comportamiento del laboratorio)
Nmero de bajos Encontrados Esperados
0 58 58
1 32 48,56
2 18 16,94
3 14 3,15
4 3 0,33
5 2 0,02
Total 127 127

Uno o dos resultados bajos se podra deber a la casualidad; tres probablemente no se deben a la casualidad; es
probable que cuatro o ms se deban a la casualidad y se deberan comprobar los procedimientos.
8.3.8.3 Evaluacin de recuentos altos
La evaluacin de recuentos altos se basa en principios semejantes, pero se espera una variacin menor en los
resultados de los participantes, debido a la variacin en el contenido de las muestras.



El comportamiento a largo plazo con, por ejemplo, el mtodo de evaluacin de percentiles, se puede evaluar para
12 muestras, permitiendo una calificacin mxima de 24 puntos. Los participantes se imponen un objetivo de
funcionamiento de como mnimo el 70%. Si no se cuenta con la regla de 0,5 log
10
y se asume que todos los
participantes son capaces de desarrollar un funcionamiento semejante, se puede demostrar mediante la teora
multinomial que la probabilidad de que un participante obtenga un ndice acumulado menor al 70% de la
mxima calificacin posible es del 5,2%. Esto significa que en esas circunstancias aproximadamente uno de cada
20 participantes puede ser identificado de forma incorrecta como "de comportamiento deficiente". En realidad, el
comportamiento no es equivalente y algunos laboratorios tienen dificultades con los exmenes que realizan, de
forma que la probabilidad de que un correcto comportamiento se asigne de forma incorrecta como "deficiente"
es muy menor. Adems, el uso de la regla de 0,5 log
10
reduce esta probabilidad a un valor menor que 0,1%.
En Anexo C se muestra un ejemplo prctico de la evaluacin a largo plazo utilizando hojas de clculo.
8.4 Evaluacin de mtodos cualitativos
8.4.1 Generalidades
En los estudios de comparacin entre laboratorios en los que se utilizan uno o ms mtodos cualitativos, los
resultados son de hecho blanco o negro, s o no, detectado o no detectado.
Los mtodos de anlisis estadsticos para este tipo de resultados son limitados, pero se han propuesto diversas
opciones, como el LOD
5,
la evaluacin de la concordancia o conformidad y la exactitud en el porcentaje; est an
considerndose la mejor opcin.
8.4.2 Funcionamiento de los laboratorios individuales
Un mtodo sencillo de autoevaluacin por parte de los laboratorios participantes es registrar el nmero de
resultados positivos y negativos hallados, junto con el nmero de resultados positivos y negativos esperados.
Esta informacin se debera asociar a los registros de niveles de los organismos objetivo en las muestras, para
evaluar el comportamiento, as como para proporcionar datos actualizados sobre el lmite de deteccin del
mtodo en los laboratorios individuales.
Como el resultado de un ensayo de presencia/ausencia es un s o no, se necesita ensayar muchas muestras para
evaluar el comportamiento de los laboratorios individuales en un esquema de ensayo de aptitud. Cada
participante debera ensayar como mnimo 18 muestras en total. Dichas 18 muestras consisten en seis rplicas de
tres niveles de contaminacin diferentes de las muestras. Los tres niveles son: negativo (comprobacin de la
aparicin de resultados falsos positivos debido, por ejemplo, a contaminacin cruzada); nivel bajo [que quiere
decir muestras contaminadas a un nivel igual o ligeramente superior al lmite de deteccin del mtodo utilizado,
que idealmente debera ser el nivel para el que el 50% de las muestras se detectan como positivas y 50%
negativas (LOD
50
)] y nivel alto (este nivel debera ser 10 veces ms alto que el nivel bajo y representa el nivel en
el que todas las muestras analizadas se deberan detectar como positivas).
La interpretacin de los datos se sencilla:
a) para las negativas: todas las muestras se deberan detectar como negativas;
b) para el nivel alto: todas las muestras se deberan detectar como positivas;
c) para el nivel bajo: se puede calcular (ver Tabla 3) utilizando la distribucin binomial y el porcentaje de
muestras que se detectan como positivas (se puede obtener a partir del valor de referencia proporcionado por
el organizador o como la estimacin ptima obtenida a partir de los resultados de todos los participantes)
para un nivel de confianza del 95%.



Tabla 3 - Posibilidad de encontrar un cierto nmero de positivos en seis muestras analizadas
en funcin del porcentaje medio de muestras positivas (distribucin binomial)
N de
positivos
entre las
muestras
Porcentaje medio positivos
10 20 30 40 50 60 70 80 90
% % % % % % % % %
0 53,1 23,2 11,8 4,7 1,6 0,4 0,1 0,0 0,0
1 35,4 39,3 30,3 18,7 9,4 3,7 1,0 0,2 0,0
2 9,8 24,6 32,4 31,1 23,4 13,8 6,0 1,5 0,1
3 1,5 8,2 18,5 27,6 31,3 27,6 18,5 8,2 1,5
4 0,1 1,5 6,0 13,8 23,4 31,1 32,4 24,6 9,8
5 0,0 0,2 1,0 3,7 9,4 18,7 30,3 39,3 35,4
6 0,0 0,0 0,1 0,4 1,6 4,7 11,8 26,2 53,1

EJEMPLO Para utilizar Tabla 3, es necesario conocer con antelacin el porcentaje medio de positivos. En este caso se asume que es del
30%, lo cual quiere decir que aproximadamente una de cada tres muestras contiene el organismo objetivo. Como solamente el 30% de las
muestras contienen el organismo objetivo, es probable que alguna de las muestras pueda no contener al objetivo cuando se ensayan, por
ejemplo, seis muestras.
La Tabla 3 muestra que la posibilidad de conseguir una serie de seis muestras consistente en cuatro positivas y dos negativas es del 6%.
Esto no es probable que ocurra, pero an llega a ser aceptable cuando se asume un nivel de confianza del 95%. La suma de las
posibilidades de encontrar 0, 1, 2, 3 o 4 positivos es del 99,0% (11,8 + 30,3 + 32,4 + 18,5 + 6,0). En este caso, el 99% es el valor menor,
que es mayor del 95% (el lmite de confianza). Dejar cuatro positivos resulta en el 93%, que es menor al lmite de confianza del 95%.
Otro razonamiento es que la posibilidad de encontrar seis de seis positivos es slo del 0,1%. Esto es muy poco probable que ocurra
simplemente por azar. Como la incertidumbre est establecida a un mximo del 5% (100% a 95% del intervalo de confianza), queda
dentro del lmite. Lo mismo ocurre con la situacin en la que se detectan como positivas cinco o seis muestras de un total de seis. La suma
de dichas posibilidades es del 1,1%, todava menor al lmite del 5%. Solamente cuando se aade la situacin en la que cuatro de seis son
positivos (6%), la incertidumbre supera el lmite del 5%. Como el mximo est establecido al 5%, la situacin de cinco o seis positivos de
un total de seis ensayos se considera como un resultado inesperado.
NOTA En el LOD
50
, el 50% de las muestras se determinan como positivas. En teora (tomando en consideracin que el mtodo
utilizado es capaz de detectar un solo microorganismo en una muestra y asumiendo una distribucin homognea de Poisson entre las
muestras) se espera que el nivel de contaminacin medio de las muestras sea de 0,7 microorganismos por muestra para alcanzar el LOD
50
.
En la prctica, no se suele alcanzar la distribucin homognea ideal y hay relativamente ms muestras que no contienen ningn
microorganismo (viable) de las que habra de esperar para una distribucin verdaderamente homognea. Para obtener un 50% de muestras
positivas, se requiere un aumento en el nivel medio de contaminacin, basado en la experiencia con el material utilizado en el estudio.
8.4.3 Comparaciones de esquemas del comportamiento de los laboratorios
Para comparar el comportamiento de un laboratorio respecto a otros laboratorios participantes, los organizadores
de esquemas pueden calcular los nmeros (o porcentajes) de positivos obtenidos para cada nivel de
contaminacin con el organismo objetivo por muestra de ensayo para cada laboratorio (enviado con un cdigo
de laboratorio). En Figura 2 se muestra un ejemplo de dichos datos. En este estudio participaron 28 laboratorios
(sealados como cdigos de laboratorio en el eje-N
L
de Figura 2). Cada laboratorio analiz 22 muestras de heces
de pollo contaminadas artificialmente con materiales de referencia que contenan dos variantes sricas diferentes
de Salmonella a cuatro niveles de contaminacin distintos (desde 10 hasta 500 cfu por muestra). En Figura 2 se
resumen los resultados para la muestra con el nivel de contaminacin bajo (n = 14). El nmero de positivos
encontrados en los laboratorios participantes oscil entre 0 y 11 muestras (eje-n
+
, de Figura 2).



Adems, de esta forma ms descriptiva de presentar los resultados, es posible calcular el grado de
especificidad, el grado de sensibilidad y el grado de exactitud referidas al nivel de contaminacin de las muestras
(ver ISO 16140 [4]). Estas propiedades se pueden calcular para cada laboratorio y para los resultados
procedentes de todos los laboratorios.

El grado de especificidad, r
SP,
viene determinado por:
r
SP
=
n
_
E(n
-tot
)
1uu%
en que:
n
-
= nmero de resultados negativos encontrados;
E(n
-tot
) = nmero total de muestras negativas esperadas.
El grado de sensibilidad, r
SE
, viene determinado por:
r
SL
=
n
+
E(n
+tot
)
1uu%
en que:
n
+
= nmero de resultados positivos encontrados;
E(n
+tot
) = nmero total de muestras positivas esperadas.



El grado de exactitud, r
AC
, viene determinado por:
r
AC
=
n
+
+ n
-
n
tot
1uu%
en que:
n
tot
= nmero total de muestras.
Esta valoracin solamente tiene significado si est asociado al nmero de organismos objetivo presentes.



Anexo A
(informativo)
Ejemplo de los detalles que se incluyen en un plan de esquema de ensayos de aptitud
Plan de esquema de ensayos de aptitud. Resumen del esquema
Nombre del esquema: Esquema de ensayos de alimentos

Tipo de esquema: Microbiologa de los alimentos
Objetivos: Proporcionar muestras de evaluacin externa de la calidad para ensayos generales
de rutina realizados por laboratorios de microbiologa de los alimentos
Criterios para la seleccin de los participantes: Laboratorios de microbiologa de los alimentos con instalaciones de laboratorio
adecuadas para la manipulacin de microorganismos patgenos de riesgos de
categora 1 y 2
Participantes objetivos: Laboratorios de microbiologa de los alimentos de los sectores pblicos y
privados
Legislacin: Regulacin UE 88212004 referida al control oficial de los productos alimenticios
Tipo de muestra: Microorganismos liofilizados en viales de vidrio a vaco
Exmenes: Presencia/ausencia:
Campylobacter spp.
Escherichia coli 0157
Salmonella spp.
Recuentos:
Recuento de colonias aerbicas
Bacillus cereus
Clostridium perfringens
Coliformes
Enterobacteriaceae
Escherichia coli
Listeria monocytogenes
Estafilococos coagulasa positivos
Criterios sobre el contenido de las muestras: Microflora real que simula a la de los alimentos reales proporcionando una
comparacin real de los procedimientos de rutina en microbiologa de los
alimentos
Nmero de participantes previstos: Ms de 200
Nmero de distribuciones por ao: Seis
Nmero de muestras por distribucin: Dos
Subcontratados externos: Ninguno
Expertos tcnicos Nombre de los individuos
Ensayo de control de calidad de lote de muestras: Nombre del laboratorio proveedor y mtodos normalizados utilizados 25
muestras de cada lote examinadas en todos los ensayos
Mtodos estadsticos: Mediana consenso (recuentos)
Percentiles para identificar discrepantes
Asignacin de calificaciones: S
(contina)



Plan de esquema de ensayos de aptitud. Resumen del esquema (conclusin)
Nombre del esquema: Esquema de ensayos de alimentos
Criterios de calificacin: Tres calificaciones asignadas para cada muestra sobre
i) ensayos patgenos;
ii) recuento de colonias aerbicas;
iii) organismos indicadores.
Evaluacin continua del comportamiento: S
Criterios para identificar el comportamiento: Menor que 70% de la mxima calificacin posible a lo largo de seis
distribuciones
Acciones proactivas de los organizadores sobre el
comportamiento deficiente:
S
Evaluacin del mtodo: Si, solamente para los indicadores

Esquema para la firma/fecha del coordinador encargado
Aprobado por el grupo de direccin: Fecha
Literatura promocional autorizada: Fecha
Costo aprobado: Fecha
Fecha de acreditacin: Fecha
Otros comentarios: Revisin en reunin del grupo director

Vencimi

B.1 Ensa
Se recom
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En Biblio
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3
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298
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Unidad:
1
2
3
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= 2 (dos rp
2
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47
8S + u,S4 +
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unidades de
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Bibliografa [
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z
11
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z
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z
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2
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2
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S
u,S4 +u,u2
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2
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1
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2
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12
=
3 z
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32
=
45 + 49)/2 =
33 + 42)/2 =
40 + 42)/2 =
- S7,S)
2
S7,S
+
(
4 +u,u24
n I([ -1) =
nivel de co
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NORMA EN
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sperados de I
I
1
I([ -1)
MR, la distrib
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= 49
= 42
= 42
94/2 = 47
75/2 = 37,5
82/2 = 41
42 -S7,S)
2
S7,S
3 (2 - 1) =
nfianza del
3, respectivam
N CONSULT

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2
I
1
y I
2
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2
(I -1
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dispersin m
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2
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41
3 grados de l
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TA PUBLICA
2
con I ([ -
los mismos q
1) sea igual q
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41
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2
1

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(B.4)
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e ser casi
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r de esta
98) sigue



z
]
= 4S +49 +SS +42 +4u +42 = 2S1

z
]
I
=
2S1
S
= 8S,7

I
2
=
(94 - 8S,7)
2
8S,7
+
(7S - 8S,7)
2
8S,7
+
(82 - 8S,7)
2
8S,7

= 1,268 + 0,904 + 0,034
= 2,206
La variacin aceptada para el lote es: I
2
/(I-1) 2
En este caso I
2
/(I-1)=2,206/(3-1)=1,103 que por lo tanto cumple los criterios de aceptabilidad de este lote.
B.2 Ensayo de homogeneidad suficiente
Se recomienda este ensayo para los casos en los que las porciones del material de ensayo presentan un alto
nmero de organismos (ms de 35 a 40 cfu por placa) y existe una desviacin estndar ideal, o
p
, que describe el
comportamiento esperado por parte de los participantes en el esquema de ensayos de aptitud. Se basa en el
ensayo de "homogeneidad suficiente" de Bibliografa [11].
Dada una serie de porciones de materiales de ensayo analizadas por duplicado con los resultados expresados en
unidades logartmicas, el ensayo queda aprobado si la varianza entre porciones de ensayo s
sum
2
, satisface la
condicin (B.5):
s
sum
2
F
1
(u,S o
p
)
2
+F
2
s
un
2

(B.5)
Donde s
un
2
es la varianza analtica. Comparado con I
1
-I
2
, es menos probable que este ensayo cause el
rechazo de un material de ensayo que no sea perfectamente homogneo (los resultados analticos siguen la
distribucin de Poisson), pero es suficientemente homogneo como para utilizarse en una ronda de ensayos de
capacitacin con una desviacin estndar ideal de o
p
. La razn es que los materiales se aceptan a no ser que se
demuestre con una alta confianza (95%) el criterio conforme a los objetivos o
sum
> 0,3 o
p
, donde o
sum
es la
desviacin estndar, de la que s
un
2
es una estimacin.



EJEMPLO
Dados los resultados cuantitativos procedentes del anlisis por duplicado de 10 porciones de material de ensayo, se calcula la diferencia
() y la suma (S) y el cuadrado de (
2
) del logaritmo decimal de cada serie de resultados (ver Tabla 1).
Porcin Anlisis 1 Anlisis 2 Log anlisis 1 Log anlisis 1 D S D
2

1 35 51 1,544 1 1,707 6 -0,163 5 3,251 6 0,026 733
2 52 46 1,716 0 1,662 8 0,053 2 3,378 8 0,002 835
3 35 33 1,544 1 1,518 5 0,025 6 3,062 6 0,000 653
4 53 38 1,724 3 1,579 8 0,144 5 3,304 1 0,020 878
5 30 40 1,477 1 1,602 1 -0,124 9 3,079 2 0,015 610
6 33 30 1,518 5 1,477 1 0,041 4 2,995 6 0,001 713
7 41 60 1,612 8 1,778 2 -0,165 4 3,390 9 0,027 346
8 35 55 1,544 1 1,740 4 -0,196 3 3,284 4 0,038 532
9 68 67 1,832 5 1,826 1 0,006 4 3,658 6 0,000 041
10 52 60 1,716 0 1,778 2 -0,062 1 3,494 2 0,003 862

Se calcula la suma de
2
y se divide por el doble del nmero de porciones. Esto corresponde a la suma media de
los cuadrados de la variacin dentro de una muestra, S
w
.
En este caso, S
w
= u,1S8
2
20
= u,uu6 91
Se calcula la varianza de S
w
y se divide por dos. Esto es igual a S
b
.
En este caso, S
b
=
0,042 24
2
= u,u21 12
Por lo tanto, s
un
2
= S
w
y s
sum
2
= (S
b
-S
w
)2
En este caso, s
un
2
= u,uu6 91 y s
sum
2
=
0,021 12-0,006 91
2
= u,uu7 1u4
Los valores para F
1
y F
2
dependen del nmero de porciones examinadas en el ensayo. Para 10 porciones,
F
1
= 1,88 y F
2
= 1,01 (en Bibliografa [11], se pueden encontrar los valores para un nmero distinto de
porciones).
Si la desviacin estndar ideal que se va a aplicar a los resultados de ensayos de capacitacin, o
p
, es igual a 0,25
unidades log
10
, entonces:
F
1
(u,S o
p
)
2
+F
2
s
un
2
= 1,88 (u,S u,2S)
2
+ 1,u1 u,uu6 91 = u,u17 SS
Este valor es mayor que s
sum
2
(0,007104). Por consiguiente, se satisface la condicin (B.5) y el material de
ensayo es suficientemente homogneo.



Anexo C
(informativo)
Mtodo prctico para evaluar el comportamiento a largo plazo de los participantes en esquemas
de ensayos de aptitud utilizando mtodos de recuento
C.1 Preparacin de los datos para su anlisis
Se requieren cuatro columnas de una hoja de clculo para analizar los resultados de un recuento.
a) el recuento, tal como lo proporciona el participante (recuento n
R
);
b) el recuento que se va a utilizar para las grficas e histogramas y/o para la calificacin (recuento n
s
);
c) el recuento para el anlisis (recuento n
A
);
d) una columna con comentarios (campo de texto) (recuento n
c
) para registrar todo tipo de notas sobre los
resultados de los participantes.
El recuento n
R
se debera introducir normalmente como un campo numrico (por ejemplo, 1 100) o como
nmero en formato cientfico (por ejemplo, 1.1e3). Si el resultado se proporciona como un valor censurado con
anotaciones, se debe utilizar un campo de texto e incluir un smbolo de "menor que" o "mayor que" delante del
nmero (por ejemplo < 10, > 1 100, etc.).
El recuento n
R
tambin se puede introducir con un texto diferente como NE (no examinado; not examined), ND
(no detectado; not detected) y UA (indeterminable; unassessable). Se deben realizar entradas para todos los
campos de la columna.
Si el recuento n
R
no se puede analizar (por ejemplo, introducido como NE), no se realiza un anlisis posterior ni
la asignacin de calificaciones.
Si el recuento de n
R
no se puede incluir en el anlisis estadstico, por ejemplo, porque el resultado se ha
proporcionado como un valor censurado con anotaciones, pero se debe asignar una calificacin y/o se va a
representar el resultado, se debe asignar un valor numrico al recuento n
s
.
Este valor debe asegurar que se asigna una calificacin correcta y que el resultado se representa de
forma correcta. Por ejemplo, no se pueden asignar calificaciones a resultados emitidos como "no detectados"
pero puede resultar til incluir dichos resultados en una grfica. En este caso, el recuento n
s
se puede incluir
como -99 y el recuento n
A
: se debera dejar en blanco.
Si se va asignar un resultado emitido, se tiene que incluir una calificacin en los clculos estadsticos; en ese
caso, recuento de n
A
= recuento n
s
.
C.2 Uso de datos censurados
Todos los resultados bajos censurados se analizan mediante una de las formas siguientes:
a) Se asigna a todos los resultados un valor en el recuento n
s
de 0,2, pero no se incluye en el anlisis (recuento
n
A
= 0). Esto ocurre cuando los informes consistentes en valores bajos censurados o los informes con valores
nulos o "no detectados" estn causados claramente por un error del laboratorio, debido a que el nivel del
grupo o del organismo diana en la muestra es relativamente alto.



b) Se asigna un recuento n
s
= 0,2
5)
a todos los valores censurados y a los resultados nulos o "no detectados", y
se incluyen en el anlisis debido a que el nivel del grupo u organismo diana era relativamente bajo y esos
resultados se pueden haber producido por casualidad (recuento n
s
= recuento n
A
= 0,2). Hay excepciones,
como cuando el valor bajo censurado proporcionado (< x) no presenta un nivel de deteccin apropiado y el
valor de x es realmente mayor que la mediana (en su clculo inicial). En estos casos excepcionales, el
recuento n
A
se debera dejar en blanco.
c) No se asignan calificaciones a los valores bajos censurados. En general, se deberan asignar calificaciones,
salvo que haya una razn microbiolgica para no hacerla. En este caso, los campos del recuento n
A
y del
recuento n
s
se dejan en blanco.
Los valores altos censurados se introducen como 1,0 log
10
por encima del mximo valor encontrado. Si, por
cualquier razn, los resultados se van a excluir de las grficas y de los anlisis y no se van a asignar
calificaciones, los campos del recuento n
A
y del recuento n
s
se deberan dejar en blanco. Si un resultado se
expresa como > x, donde el valor x es menor a la mediana, el campo del recuento n
A
se debera dejar en blanco.
C.3 Representacin de los resultados
Las grficas se basan en los valores del recuento n
s
. Hay dos tipos fundamentales de grficas utilizadas con los
resultados de esquemas de ensayos de aptitud: los histogramas (o las grficas de barras) y las grficas de
dispersin. Los aspectos a considerar cuando se escoge el tipo de grfica que se va a utilizar incluyen el tipo de
examen (NMP, recuento de colonias, etc.) y el nmero de participantes que realizan los exmenes.
Los histogramas se preparan utilizando el valor del logaritmo decimal del recuento n
R
agrupados de la manera
siguiente:
< 0, (0 a 0,05), (0,05 a 0,1), (0,1 a 0,15), (mx. log
10
del recuento n
R
), (mx. log
10
del recuento n
R
+ 0,05).
Todos los valores no numricos o los casos especiales que se van a representar (por ejemplo, -99) se deberan
disponer en su propia barra.
Alternativamente, el histograma se puede preparar utilizando el valor del logaritmo decimal del recuento n
R

redondeado al valor de 0,05 ms prximo. En este caso, los agrupamientos se realizan de la manera siguiente:
0, 0,05, 0,1, 0,15 ... mx. (log
10
del recuento n
R
).
En este caso, la barra de 0,1 incluye todos los resultados desde 0,075 hasta 0,124.
Las grficas de dispersin se pueden preparar utilizando directamente los valores del recuento n
s
y convirtiendo
el eje y a la escala logartmica decimal. Los datos no numricos se excluyen de las grficas de dispersin.
Se utilizan normalmente bloques (grupos) de un tamao de 0,05 log
10
para los histogramas, de forma que los
rangos para la asignacin de las calificaciones tambin se redondea a 0,05 log
10
.

5) Se utiliza el valor 0,2 en lugar de 0 porque no se puede calcular su logaritmo decimal.



C.4 Asignacin de calificaciones
Cuando los resultados de los esquemas de ensayos de aptitud se determinan mediante calificaciones, los criterios
de asignacin de calificaciones se deberan relacionar en los informes o protocolos de los esquemas. La
calificacin del resultado del recuento se introduce en un campo de calificacin (recuento n
c
); en caso necesario,
se pueden corregir manualmente.
Se debe notar que la calificacin final de un resultado se puede obtener mediante el recuento n
c
, pero otros
factores pueden necesitar tambin ser tomados en consideracin.



Anexo D
(informativo)
Ejemplo de una hoja de datos de seguridad
Documento de datos de seguridad para muestras de un esquema de IC en alimentos Liofilizados
Fecha efectiva: dd-mm-aa
Fecha de revisin: dd-rnm-aa
Enviado a: Todos los participantes del esquema
Identificacin de los productos y del personal
Producto: Muestras simuladas de alimentos para exmenes microbiolgicos generales
Personal: Direccin completa y detalles de los contactos del organizador del esquema
Composicin o informacin sobre los ingredientes
Viales de vidrio de material liofilizado que contienen una mezcla de bacterias de grupo de riesgo 2 segn queda
definido por la legislacin nacional e internacional. Un organismo del grupo de riesgo 2 puede causar
enfermedades a humanos y suponer un riesgo para los trabajadores del laboratorio, pero no es probable que se
extienda a la comunidad.
Identificacin de riesgos:
Riesgo fsicoqumico: No aplicable
Riesgos para la salud: Mnimo riesgo de infeccin siempre que se observen buenas prcticas de laboratorio
Riesgos ambientales: No aplicables
Medidas de primeros auxilios
Si se produce un contacto accidental con el material, el personal del laboratorio debe seguir los procedimientos
locales de primeros auxilios que se aplican normalmente tras la exposicin a una muestra de alimentos
equivalente. Tras la exposicin al material, se debe buscar atencin mdica.
Medidas de lucha contra el fuego
No aplicable.
Medidas contra una cada accidental
Se cubre la zona con material absorbente y se empapa con un desinfectante adecuado. Se debe dejar un rea
inalterada durante 30 min antes de absorber el vertido con un exceso de material absorbente. Se utiliza un
equipamiento de proteccin personal adecuado.



Manipulacin y almacenamiento
Se almacena a temperatura ambiente en la oscuridad. Las muestras se deben procesar en un entorno de
laboratorio que, segn queda definido en las directrices o normativas nacionales, resulta adecuado para la
prctica de la microbiologa.
El personal que manipula el material se debera haber capacitado en la manipulacin de material biolgico
infeccioso.
El material se debera tratar con el mismo cuidado con que el que se trataran muestras de alimentos
equivalentes. Se debera evitar todo tipo de contacto de mano-a-boca mientras se trabaje con las muestras y se
deben observar tambin con las muestras de ensayos de aptitud los procedimientos normales de lavado de manos
durante la manipulacin de muestras rutinarias.
Controles de exposicin y proteccin personal
Se emplean unas buenas prcticas de laboratorio y se utilizan protectores de ojos, guantes y batas adecuadas. La
retirada de los viales de sus envases y embalajes y su reconstitucin se debera realizar en una cabina de
proteccin con salida de gases.
Propiedades fsicas y qumicas
Material seco inerte inodoro
Estabilidad y reactividad
No es probable que el almacenamiento aumente o reduzca el riesgo de infeccin asociado con la manipulacin
del material.
Informacin toxicolgica
No aplicable.
Informacin ecolgica
No aplicable.
Consideraciones sobre eliminacin de residuos
El material utilizado se debe eliminar utilizando un autoclave, igual que para los productos alimenticios que
contienen microorganismos infecciosos y en conformidad con todas las normativas locales y nacionales.
Informacin sobre el transporte
Consultar las normativas nacionales e internacionales para el transporte de bacterias del grupo de riesgo 2
(sustancia biolgica, categora B; NU 3373, segn NCh382).
Informacin reglamentaria
EC Agente biolgico, grupo de riesgo/categora 2
PRECAUCION Este documento de datos de seguridad no constituye la declaracin propia del usuario sobre
los riesgos asociados a su lugar de trabajo, requeridas por la legislacin de seguridad y salud.



Otra informacin
Si se produce un accidente que suponga la exposicin del personal al material contenido en las muestras, se
contacta con los organizadores de esquemas de ensayo de aptitud.
Para una mayor informacin de seguridad relacionada con este producto, se aconseja a los participantes que lean
los documentos de instrucciones que acompaan a las muestras.



Anexo E
(informativo)
Bibliografa
[1] ISO 5725-2 Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results
Part 2: Basic method for the determination of repeatability and reproducibility
of a standard measurement method.
[2] ISO 5725-4 Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results
Part 4: Basic methods for the determination of the trueness of a standard
measurement method.
[3] ISO/TS 11133-1 :2009 Microbiology of food and animal feeding stuffs. Guidelines on preparation and
production of culture media - Part 1: General guidelines on quality assurance
for (the preparation of culture media in the laboratory.
[4] ISO 16140 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Protocol for the validation
of alternative methods.
[5] ISO/IEC 17025 General requirements for the competence of testing and calibration
laboratories.
[6] ISO/TS 19036 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Guidelines for the estimation
of measurement uncertainty for quantitative determinations.
[7] ISO/IEC Guide 99 International vocabulary of metrology - Basic and general concepts and
associated terms (VIM).
[8] ILAC-GI3 ILAC Guidelines for the requirements for the competence of providers of
proficiency schemes Available (2010-02-10) at:
http://www.ilac.org/documents/ILAC G13 08 2007.pdf.
[9] THOMPSON, M., ELLISON, L.R., WOOO, R. for IUPAC. The international harmonized protocol for
the proficiency testing of analytical chemistry laboratories. Pure App. Chem. 2006, 78, pp. 145-196.
Available (2010-10-08) at: http://www.iupac.org/publications/pac/2006/pdf/7801x0145 .pdf.
[10] AUGUSTIN, lC., CARLIER, V. Lessons from the organization of a proficiency testing program in food
microbiology by interlaboratory comparison: Analytical methods in use, impact of methods on bacterial
counts and measurement uncertainty of bacterial counts. Food Microbiol. 2006, 23, pp. 1-38.
[11] FEARN, T., THOMPSON, M. A new test for "sufficient homogeneity". Analyst 2001, 126, pp. 1414-1417.
[12] HEISTERKAMP, S.H., HOEKSTRA, J.A., VAN STRlJP-LOCKEFEER, N.G.W.M., HAVELAAR,
A.H., MOOIJMAN, K.A., IN 'T VELD, P.H., NOTERMANS, S.H.W., MAIER, E. A.; GRIEPINK, B.
Statistical analysis of certification trials for microbiological reference materials. Luxembourg:
Commission of the European Communities, 1993. 41 p. (Report EUR 15008 EN).



[13] JARVIS, B. Sampling for microbiological analysis. In: LUNO, B.M., BAIRD-PARKER, A.C., GOULO,
G.W., editors. The microbiological safety and quality of food, Vol. 2, pp. 1691-1734. Gaithersburg, MD:
Aspen, 2000.
[14] JARVIS, B. Statistical aspects of the microbiological examination of foods, 2nd edition. Amsterdam:
Academic Press, 2008. 306 p.
[15] JARVIS, B., HEOGES, AJ., CORRY, J.E.L. Assessment of measurement uncertainty for quantitative
methods of analysis: Comparative assessment of the precision (uncertainty) of bacterial colony counts.
Int. J. Food Microbiol. 2007, 116, pp. 44-51.
[16] JARVIS, B., CORRY, J.E.L., HEOGES, AJ. Estimates of measurement uncertainty from proficiency
testing schemes, internal laboratory quality monitoring and during routine enforcement examination of
foods. J. Appl. Microbiol. 2007, 103, pp. 462-467.
[17] TILLETT, H.E., LIGHTFOOT, N.F. EATON, S., PLACE, B.M. External quality assessment of
microbial counts from water: To score or not to score for proficiency. J Chart. Inst. Water Environ.
Manage. 2000, 14, pp. 304-308.

NOTA EXPLICATIVA NACIONAL

La equivalencia de las Normas Internacionales sealadas anteriormente con Norma Chilena, y su grado de correspondencia es el
siguiente:

Norma Internacional Norma nacional Grado de correspondencia

ISO 5725-2 NCh2680/2:2002 La Norma Chilena NCh2680/2:2002 es una adopcin idntica de la
versin en ingls de la Norma Internacional ISO 5725-2:1994.

ISO 5725-4 No hay -
ISO/TS 11133-1:2009 No hay -

ISO 16140 NCh3128:2008 La Norma Chilena NCh3128:2008 es una adopcin idntica de la
versin en ingls de la Norma Internacional ISO 16140:2003.

ISO/IEC 17025 NCh-ISO 17025:2005 La Norma Chilena NCh-ISO 17025:2005 es una adopcin idntica de
la versin en espaol de la Norma Internacional NCh-ISO 17025:2005.

ISO/TS 19036 NCh3084:2007 La Norma Chilena NCh3084:2007 es una adopcin idntica de la
versin en ingls de la Norma Internacional ISO 19036:2006.

ISO/IEC Guide 99 No hay -



Anexo F
(informativo)
Justificacin de los cambios editoriales
Tabla F.1 - Cambios editoriales
Clusula/subclusula Cambios editoriales Justificacin
En toda la norma Se reemplaza esta especificacin tcnica por
esta norma
La norma es de alcance nacional.
2 y Anexo D Se agrega Nota Explicativa Nacional. Para detallar la equivalencia y el grado de
correspondencia de las Normas Internacionales
con las Normas Chilenas.

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Vencimiento consulta pblica: 2013.11.15 i

= desviacin estndar de la repetibilidad;

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