Departamento de Microbiologa, Parasitologa e Inmunologa, Facultad de Medicina, UBA

GUIA DE TRABAJOS PRCTICOS MICOLOGA

Departamento de Microbiologa Facultad de Medicina UBA 2009

Gua de Trabajos Prcticos 2009

Departamento de Microbiologa, Parasitologa e Inmunologa, Facultad de Medicina, UBA

Observacin de escamas con micelios y levaduras. Digestin con KOH 40%. Procedimiento: Colocar una gota de KOH 40% en el centro de un portaobjetos. Agregar la muestra y cubrir con un cubreobjetos. Digerir calentando la preparacin suavemente a la llama hasta el desprendimiento de burbujas.

Micelio filamentoso hialino tabicado con artroconidios

Candida spp.

Malassezia spp.

Observacin de exmenes directos de levaduras con la Tincin de Giemsa. Procedimiento: Fijar la muestra con metanol 100% 1 minuto. Inundar el extendido con Giemsa 20 minutos. Lavar el preparado con agua y dejar secar al aire. No secar al calor.

Fase levaduriforme de Histoplasma capsulatum

Gua de Trabajos Prcticos 2009

Departamento de Microbiologa, Parasitologa e Inmunologa, Facultad de Medicina, UBA

Preparacin de LCR con tinta china (TCH) y observacin de levaduras capsuladas. Procedimiento: Centrifugar previamente la muestra (10 min a 3000 rpm). Colocar una gota del sedimento en un portaobjetos. Agregar una gota de TCH sobre la muestra, mezclar y cubrir con un cubreobjetos. Examinar con objetivo de 10, 20X y confirmar con 40X.

Cryptococcus neoformans

Cultivo de escamas observadas en la clase 1 en tubos conteniendo los medios Saboureaud/Cloranfenicol y Lactrimel/Cloranfenicol en pico de flauta. Procedimiento: Destapar el tubo cerca del mechero y flamear la boca del mismo. Utilizar un gancho previamente flameado al rojo y enfriado. Humedecerlo en medio estril y tomar las escamas. Realizar tres puntos de siembra desde el fondo hacia el pico sobre la superficie del medio. Volver a tapar el tubo previamente flameado. Incubar en estufa a 28C. Tener la precaucin de trabajar siempre cerca del mechero.

Gua de Trabajos Prcticos 2009

Departamento de Microbiologa, Parasitologa e Inmunologa, Facultad de Medicina, UBA

Descripcin de las caractersticas de las colonias de: Histoplasma capsulatum fase levaduriforme en BHI (Agar infusin cerebro corazn). Alternaria spp. en medio Sabouraud. Aspergillus fumigatus en medio Sabouraud. Rhizopus spp. en medio Sabouraud. Candida spp. en medio Sabouraud y ChromAgar Candida. Microsporum canis y Trichophytum rubrum en medio de Lactrimel. Realizar preparaciones con azul de lactofenol para la observacin microscpica. Describir las estructuras observadas. Observacin de microcultivos. Procedimiento: Tomar un portaobjeto, colocar en el centro una gota de azul de lactofenol. Con un gancho estril tomar parte del micelio y disociarlo con ayuda de una aguja sobre la gota de azul de lactofenol Colocar un cubreobjeto y observar al microscopio ptico. Trichophyton rubrum Hongo antropflo. Caractersticas macroscpicas: colonias de lento crecimiento, blanca aterciopelada, algodonosa con un pigmento rojo vinoso por el reverso. Caractersticas microscpicas: microconidios en forma de lgrima o pera (2-3 x 35 ), unidos en forma alterna a la hifa. En general los macroconidios son raros. En cepas muy esporuladas se pueden encontrar en forma de lpiz.

Gua de Trabajos Prcticos 2009

Departamento de Microbiologa, Parasitologa e Inmunologa, Facultad de Medicina, UBA

Microsporum canis Hongo zoflo. Caractersticas macroscpicas: colonias de crecimiento rpido, mostrando hacia los 10-15 das de incubacin colonias con anverso lanoso o algodonoso blanco o de color gamuza.; puede existir algn surco radiado. Reverso con pigmento amarillo limn. Caractersticas microscpicas: macroconidios fusiformes de pared externa gruesa y rugosa, con extremos afilados ligeramente curvados, con 612 septos internos. Escasos microconidios claviformes o piriformes, ssiles.

Alternaria alternata Caractersticas macroscpicas: colonias afelpadas o pulverulentas de color grisoliva. Caractersticas microscpicas: hifas septadas y pigmentadas. Conidiforos septados de longitud variable del que emerge un conidio elipsoidal grande, septado en forma transversal y longitudinal (moriforme) formando cadenas.

Gua de Trabajos Prcticos 2009

Departamento de Microbiologa, Parasitologa e Inmunologa, Facultad de Medicina, UBA

Aspergillus fumigatus Caractersticas macroscpicas: las colonias sobre agar Czapeck son blancas al principio y luego se tornan verde azulado a gris oscuro. Consiste en una densa felpa de conidiforos. Caractersticas microscpicas: conidiforo corto de pared lisa, a menudo verde en la parte superior. Cabeza conidial columnar, uniseriada, usualmente frtil sobre los dos tercios de la superficie de la vescula. Conidios verrugosos, subesfricos de 2.5 a 3 m de dimetro.

Rhizopus spp. Caractersticas macroscpicas: colonia de crecimiento rpido y vellosa. Caractersticas microscpicas: micelio cenoctico con estolones y rizoides. Esporangiforos partiendo de los rizoides. Esporangio terminal con multiesporos, con columella, la misma es de esfrica a ligeramente elipsoide. Esporangiosporos subesfricos, ornamentados.

Gua de Trabajos Prcticos 2009

Departamento de Microbiologa, Parasitologa e Inmunologa, Facultad de Medicina, UBA

Histoplasma capsulatum var. capsulatum Examen directo en materiales biolgicos con tincin de Giemsa: levaduras pequeas redondas u ovales con un brote, rodeado de una pared que no toma los colorantes, con una masa cromtica en un polo en forma de media luna de color azul oscuro y el resto del citoplasma presenta color celeste. Se lo puede observar en el interior y/o afuera de macrfagos o clulas gigantes. Cultivos a 28C en Saboureaud. Caractersticas macroscpicas: colonias de lento crecimiento (3 a 4 semanas), de aspecto granuloso a algodonoso, blancas y luego parduzcas (color canela). Reverso inicialmente de color crema y luego parduzco. Caractersticas microscpicas: microconidios hialinos, ssiles de pared lisa y delgada que salen de conidiforos cortos o a los lados de las hifas hialinas y tabicadas. Macroconidios esfricos de pared rugosa, con expansiones digitiformes, que salen de conidiforos cortos. Ambos conidios muy abundantes. Cultivos a 37C en BHI. Caractersticas macroscpicas: colonias cerebriformes de aspecto cremoso (7das). Caractersticas microscpicas: levaduras monogemantes de 2-3 x 4-5 m.

Gua de Trabajos Prcticos 2009

Departamento de Microbiologa, Parasitologa e Inmunologa, Facultad de Medicina, UBA

Gua de Trabajos Prcticos 2009