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MENDELISMO: ESTUDIO DE CRUZAMIENTOS EN Drosophila melanogaster OBJETIVO A partir del contaje de la descendencia del cruzamiento entre moscas de fenotipo salvaje por moscas mutantes de color de ojos, averiguar el genotipo de los parentales implicados en el cruce, as como conocer si el gen responsable de la mutacin de ojos se encuentra en el cromosoma sexual o por el contrario en un autosoma. INTRODUCCIN Hay muchas razones que hacen de D. melanogaster (Figura 1) un organismo idneo para la experimentacin: - Es muy abundante y de fcil captura. - Se cultiva fcilmente en el laboratorio. - Produce gran cantidad de descendientes (adecuado para comprobar las proporciones mendelianas). - A 25C se completa el ciclo biolgico en 10-11 das. - Solamente posee 4 pares de cromosomas: 3 autosmicos y 1 sexual, siendo la determinacin del sexo en esta especie XX hembras, XY machos. - Se trabaja con ella desde 1905 y, por lo tanto, se dispone de una abundante bibliografa. - Hay una gran cantidad de mutantes, tanto naturales como inducidos, y muchas cepas especiales que permiten cuidadosos anlisis genticos.

Figura 1.- Macho y hembra adultos de D. melanogaster. Observacin de los individuos Para facilitar su estudio, conviene anestesiar las moscas; para ello en el laboratorio utilizamos el siguiente mtodo: - Se toma el frasco donde se encuentran los adultos y se golpea suavemente sobre un corcho para que caigan hacia el fondo. Se retira el algodn y se vuelca el frasco sobre el eterificador. El eterificador (una botella o tubo de vidrio) se tapa con un algodn impregnado de ter. Cuando las moscas estn dormidas se vuelcan sobre un papel y se observan con la lupa. El tiempo que tardan las moscas en dormirse es muy variable, y depende bastante de la edad (cuanto ms viejas son, antes se duermen). Consejos prcticos: 1.- Hay que tener cuidado, pues una exposicin prolongada al ter les puede producir la muerte (se reconoce porque las alas se disponen perpendicularmente al cuerpo). 2.- Hay que cuidar no mantener abierta la botella del cultivo, para evitar que las moscas se escapen o que entren otras y el cultivo se contamine. 3.- No dejar abierto el eterificador ni la botella de ter, ya que adems de evaporarse, por su bajo punto de ebullicin, y cargar el ambiente, hay peligro de explosin, pues es altamente inflamable. 4.- Si durante una observacin o recuento las moscas empiezan a despertarse, se pueden reeterificar.

5.- Para facilitar la observacin de los individuos es recomendable alinear todas la moscas sobre la cartulina, pasando la hilera bajo el foco de la lupa. As se pueden ir separando segn nuestro inters. Una vez finalizada la observacin, los individuos que no nos interesen se introducirn en un frasco (MORGUE) que contiene una mezcla de H2O:EtOH:ter, para evitar la descomposicin de las moscas. Diferenciacin entre sexos Esta especie presenta un claro dimorfismo sexual: Caractersticas de las hembras: 1.- Abdomen acabado en punta y ms grueso que el del macho. 2.- Dorso del abdomen con bandas transversales oscuras y separadas unas de otras hasta el final del mismo. Caractersticas de los machos: 1.- Menor tamao que las hembras. 2.- Extremo del abdomen redondeado. 3.- Las ltimas bandas transversales del abdomen estn fusionadas, lo que da una apariencia oscura al final del mismo, visible a simple vista. 4.- Poseen un peine sexual en el primer segmento tarsiano del primer par de patas (Figura 2).

Figura 2.- Pata delantera de un macho de D. melanogaster, en la que se puede apreciar el peine sexual. El ojo compuesto de Drosophila La retina se compone de alrededor de 800 unidades denominadas omatidios que miran en distintas direcciones. Fijndonos en el ojo, vemos con frecuencia una mancha negra en el centro ocular (pseudopupila). El color de

los ojos del individuo salvaje (wild) es rojo (Figura 3) debido a la interaccin entre los dos tipos de pigmentos que poseen: omocromos, o pigmentos marrones, y pteridinas o pigmentos rojos y amarillos.

Figura 3. Color de ojos: cepa salvaje (wild) Entre el enorme nmero de mutantes de ojos de Drosophila melanogaster, cabe destacar el mutante recesivo white, de color de ojos blanco (Figura 4) por la ausencia de ambos pigmentos, y el mutante recesivo Henna, de color de ojos marrn oscuro (Figura 5), por la ausencia de pigmentos rojos.

Figura 4. Color de ojos: cepa white

Figura 5. Color de ojos: cepa Henna MTODO Con la ayuda de una lupa observars la descendencia del cruzamiento entre machos de fenotipo salvaje y hembras de fenotipo mutante que tienes en tu puesto de trabajo. Debers contar los individuos de cada sexo, as como los de cada fenotipo, para contestar a las siguientes preguntas en la hoja de respuestas: 1.- Anota los fenotipos de color de ojos que observas indicando, en el caso de que haya mutantes, de qu mutante se trata (puntuacin: hasta 1,5 puntos). 2.- Indica el nmero total de individuos que has observado, as como cuntos eran machos y cuntos hembras (puntuacin: hasta 1 punto). 3.- Indica cuntos individuos has obtenido de cada fenotipo, analizando los sexos por separado (puntuacin: hasta 1,5 puntos). 4.- Cules eran los genotipos de los dos parentales a partir de los cuales se ha obtenido la descendencia? (puntuacin: hasta 3 puntos). 5.- En qu cromosoma se encuentra el mutante: en un autosoma o en el cromosoma sexual? Razona tu respuesta (puntuacin: hasta 3 puntos).

HOJA DE RESPUESTAS Cruce A B (marca con un crculo la opcin que te ha correspondido) PREGUNTA 1 FENOTIPOS MUTANTES

PREGUNTA 2

N TOTAL

N MACHOS N HEMBRAS

PREGUNTA 3

MACHOS FENOTIPO CANTIDAD

HEMBRAS FENOTIPO CANTIDAD

PREGUNTA 4

GENOTIPO MACHOS PARENTALES

GENOTIPO HEMBRAS PARENTALES

PREGUNTA 5

TIPO CROMOSOMA

RAZONAMIENTO:

Cdigo de Identificacin
4 ltimos dgitos-letra

DNI

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OBSERVACIN DE INTERCAMBIOS HDRICOS. PLASMLISIS Y TURGENCIA

La diferencia de potenciales hdricos entre dos sistemas genera, termodinmicamente, la fuerza responsable del flujo del agua. El objetivo de esta prctica es el estudio de la respuesta del tejido vegetal ante soluciones con diferentes potenciales hdricos. Material: NaCl Agua destilada Cuchara Balanza Epidermis de cebolla Material de diseccin Placas Petri (3) Rotulador permanente MTODO

Cubeta de tincin Paralelas Azul de metileno Papel de filtro Portaobjetos Cubreobjetos Microscopio

Primera fase:
! Calcula cmo prepararas 50 ml de una solucin 0,85M de NaCl. A partir de esta solucin, cmo prepararas 20 ml de una solucin 0,50M y 20 ml de una solucin 0,15M de NaCl?. Peso molecular del NaCl=58,49. 1. Realiza los clculos y anota los resultados en la siguiente tabla (puntuacin: hasta 1,5 puntos). Solucin NaCl 0,85M NaCl 0,50M NaCl 0,15M ----Cantidad de NaCl (gr) Cantidad de H2O (ml) Cantidad de solucin NaCl 0,85M (ml) ---

Puedes realizar los clculos en el reverso de esta hoja.

Segunda fase
! Prepara una serie de 3 placas Petri conteniendo cada una de ellas una de las concentraciones de NaCl (0,15, 0,50 y 0,85 M). Recuerda rotularlas adecuadamente. ! Corta tres trozos de epidermis de cebolla de aproximadamente 1 cm2 e introduce un corte de epidermis de bulbo de cebolla en cada una de las placas Petri con las soluciones de NaCl. ! Espera 15 minutos. Durante este tiempo realiza el siguiente apartado. 2. Diagnstico de preparaciones histolgicas Tienes a tu disposicin 2 preparaciones histolgicas conteniendo cortes de distintos rganos o tejidos. Cada una de ellas est identificada con una clave. Estdialas al microscopio, tratando de identificar el/los tejidos presentes, distintos tipos celulares, as como el rgano al que pertenecen. Es recomendable que comiences la observacin con el objetivo de menor

aumento (4x) y vayas subiendo progresivamente hasta el de 40x. Con ello habrs tenido la posibilidad de observar la muestra con 40, 100 y 400 aumentos; no es necesario que utilices el objetivo de 100x. Marca con una X las casillas correspondientes a las estructuras que encuentres en la columna dedicada a cada preparacin, anotando en cada caso la clave de la preparacin en la cabecera de la columna. Al final, indica el rgano de que se trata. Suerte! (puntuacin: hasta 3 puntos). Estructuras observadas Prep.: Fibras colgenas Fibras elsticas Msculo liso Msculo estriado Cartlago Epitelio monoestratificado con cilios Epitelio monoestr. con microvilli Epitelio seudoestr. Epitelio pluriestr. Capilares sanguneos Otros vasos Mltiples secciones tubulares Glomrulos Acinos secretores Clulas caliciformes Tejido conjuntivo Tejido adiposo Conductos y sistemas de Havers Clulas aisladas Hemates Clulas formando cordones radiales rgano diagnosticado

Prep.:

Ahora responde a las siguientes preguntas, rodeando la respuesta correcta (puntuacin: hasta 1 punto). 1.- Qu ocurre durante el proceso de fijacin histolgica?: a.- Las clulas se adhieren al portaobjetos b.- Los tejidos aumentan de volumen c.- Se impide la degradacin post-mortem de las estructuras celulares d.- Se alteran las estructuras para favorecer la coloracin. 2.-Por qu, en el microscopio que ests usando, un objetivo de 10x proporciona 100 aumentos a la observacin?: a.- Por los elementos pticos que lo forman b.- Por ser una lente acromtica c.- Por la funcin multiplicadora del diafragma d.- Porque 10 aumentos proporcionados por el objetivo, multiplicados por los 10 que aporta el ocular, resultan en 100 totales

Tercera fase
! Coloca sobre un portaobjetos cada una de las muestras de cebolla que previamente has colocado en las diferentes soluciones. Telas con una gota de azul de metileno y tapa con el cubreobjetos, presionando suavemente y eliminando el resto del colorante con ayuda de un papel de filtro. ! Observa las preparaciones al microscopio. Utiliza el objetivo adecuado, de forma que puedas ver claramente las clulas. 3.1 Dibuja las diferentes reacciones de las clulas en los distintos medios (puntuacin: hasta 1,5 puntos)

Observacin 1: Concentracin NaCl......................... Aumentos.........................................

Observacin 2: Concentracin NaCl......................... Aumentos.........................................

Observacin 3: Concentracin NaCl......................... Aumentos.........................................

3.2 Indica en la siguiente tabla qu sucede en los diferentes orgnulos de la clula vegetal para cada una de las soluciones a las que se ha expuesto (puntuacin: hasta 3 puntos). NaCl 0,85M La vacuola El ncleo El citoplasma La membrana plasmtica La pared celular Nombre del fenmeno osmtico NaCl 0,50M NaCl 0,15M

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IDENTIFICACIN DE POLEN Y SUS RELACIONES CON DISTINTOS TIPOS DE POLINIZACIN. USO DEL MICROSCOPIO OBJETIVOS Los objetivos de esta prctica consisten en: 1. Observar la morfologa del polen y de diversas flores, relacionndolas con distintos modos de polinizacin. 2. Observar e identificar las aperturas en el grano de polen. INTRODUCCIN Aunque la prctica totalidad de las clulas y tejidos de las plantas permanecen inmviles, arraigados y fijos, unas pocas clulas que constituyen el polen son enviadas peridicamente como emisarios a cubrir una importante misin en la reproduccin de las plantas: la polinizacin. La morfologa del polen es muy variada y est relacionada con la forma en que se produce la polinizacin; en cada especie el polen es dispersado, mediante el viento o los animales, para alcanzar el primordio seminal y producir la fecundacin. La polinizacin zofila es la realizada por animales diversos, como insectos (polinizacin entomfila), etc., que transportan el polen en su propio cuerpo y son atrados por las recompensas que ofrecen las flores, como el nctar o el propio polen. Habitualmente estas flores son de colores vivos, perfumadas, y el polen tiene la cubierta rugosa o reticulada, ornamentada a veces con microperforaciones y espinas. Cuando el vector que transporta el polen es el viento la polinizacin se denomina anemfila y las flores que utilizan este sistema no tienen nctar, ni perfume, ni son coloreadas. Con frecuencia las anteras cuelgan de largos filamentos fuera de la flor. Los estigmas son sobresalientes y plumosos, expertos en interceptar el polen, que es liso y de pequeo tamao. Muy pocas plantas utilizan la polinizacin hidrfila, es decir el agua como medio de transporte del polen.

En la pared del grano de polen existen zonas en las que la exina es delgada o no existe, son las aperturas (Figura 1). Las aperturas sirven para facilitar la germinacin del polen: la intina absorbe agua y se hincha, y a travs de las aperturas en las que la intina es delgada y elstica se puede desarrollar el tubo polnico. En general si las aperturas son alargadas se llaman colpos, si son redondeadas se llaman poros. Hay, adems, otros tipos ms complejos de aperturas. Algunos granos de polen no tienen aperturas: son inaperturados, propios de plantas ms primitivas. En las plantas se considera un carcter derivado (que procede del primitivo) la presencia de granos de polen con muchas aperturas.

exina intina

Apertura o zona de germinacin y desarrollo del tubo polnico

Clula generativa

Clula del tubo o vegetativa

Figura 1.- Dibujo esquemtico de polen bicelular Material: Flores frescas (flores 1, flores 2) Preparacin de polen (polen 3) Lanceta Pinzas Cuentagotas Placa calefactora Portaobjetos Cubreobjetos Glicerogelatina y fucsina bsica al 10% Microscopio con ocular micromtrico Lupa binocular

MTODO La primera actividad de la prctica es la extraccin de polen procedente de flores frescas mediante pinzas y aguja enmangada, observando la flor con la lupa. La segunda actividad es la observacin microscpica de polen, y para ello realizars tincin con glicerogelatina y fucsina bsica y elaborars preparaciones microscpicas con objeto de observar la forma, el tamao y las

caractersticas de la pared del grano de polen y sus aperturas. Por ltimo relacionars el tipo de flor y el tipo de polen con el tipo de polinizacin. Procedimiento 1- Observa una de las flores a travs de la lupa binocular para localizar los estambres. 2- Separa una antera, sitala encima de un portaobjetos y rmpela para que el polen se deposite sobre el cristal. 3- Tincin: aade sobre el polen una gota de glicerogelatina con fucsina bsica tibia (previamente calentada 15 en el microondas); coloca un cubreobjetos encima y efecta una suave presin. 4- Coloca la preparacin encima de la placa calefactora, espera 1 minuto y elimina con cuidado el exceso de colororante de los mrgenes del cubre con la ayuda de papel de filtro. 5- Observa la preparacin a travs del microscopio para poder responder a las preguntas que se plantean a continuacin. 6- Para calcular el tamao del grano de polen en cada caso, tienes que saber que, en la escala del ocular micromtrico, 1 divisin corresponde a 25 micras a 40 aumentos (objetivo 4x), a 10 micras a 100 aumentos (objetivo 10x) y a 2,5 micras a 400 aumentos (objetivo 40x). Repite el procedimiento con las dos muestras de flores. Observa tambin la preparacin de polen (n 3) que te hemos proporcionado, respondiendo a las cuestiones.

inaperturado

C O L P O S

P O R O S

M I X T A

Figura 2.- Tipos de plenes ms frecuentes, segn los tipos y localizacin de sus aperturas.

Cuestiones Responde a las siguientes cuestiones en la Hoja de Respuestas (Tabla 1). 1.- Dibuja e identifica, segn la Figura 2, cada uno de los plenes que has extrado, teido y observado en las dos muestras de flores frescas y en la preparacin que te hemos proporcionado (puntuacin: hasta 3 puntos). 2.- Observa la morfologa del grano de polen de las 2 muestras de flores y de la preparacin que te hemos proporcionado, e indica las caractersticas que destaquen en su cubierta (puntuacin: hasta 3 puntos). 3.- Indica, en micras, el tamao de los tres granos de polen (puntuacin: hasta 3 puntos). 4.- Indica el nmero y tipo de aperturas (colpo, poro) de cada una de las tres muestras observadas (puntuacin: hasta 3 puntos).

5.- Qu tipo de polinizacin presupones que tendrn cada una de las flores de las 2 muestras de plantas observadas y la de la preparacin que te hemos proporcionado? (puntuacin: hasta 2 puntos). Responde a las siguientes cuestiones a continuacin de la pregunta 6.- Qu aspecto presupones que tendrn las flores cuyo polen has observado en la preparacin que te hemos proporcionado (n 3) y porqu? (puntuacin: hasta 3 puntos).

7.- Relaciona e indica los caracteres del grano de polen y de la morfologa floral que te han hecho decidir qu tipo de polinizacin tiene cada una de las 2 muestras de flores y plenes que has observado (puntuacin: hasta 3 puntos). Flores 1/Polen1:

Flores 2/Polen2:

HOJA DE RESPUESTAS (Tabla 1) Dibuja e Estructuras indica el tipo de la de polen cubierta del polen Polen Flor 1 Tamao polen (dimetro en micras) Tipo y nmero de aperturas en el polen Tipo de polinizacin

Polen Flor 2

Preparacin Polen 3

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CLCULO DE LA RENTABILIDAD ENERGTICA DE LA DIETA DE Tyto alba (LECHUZA COMN)

OBJETIVO Verificar si la dieta de una lechuza de una localidad de la Comunidad Valenciana, calculada a partir del anlisis de los restos obtenidos al examinar las egagrpilas (Figura 1a), pelotas de regurgitacin que fabrican las lechuzas con los restos indigeribles de sus presas (pelos, huesos, exoesqueletos de insectos, semillas etc.), de un nico posadero, es energticamente rentable. HIPTESIS DE PARTIDA La lechuza intenta maximizar la rentabilidad de las capturas eligiendo aquellas presas que le resultan ms fciles de encontrar y le proporcionan mayor cantidad neta de energa asimilable. Material: ! Lupa ! Pinza, pincel, aguja enmangada ! Soporte para los restos ! Placa Petri con una egagrpila ! Frasco lavador ! Papel secante ! Guantes MTODO (puntuacin: hasta 2 puntos cada apartado) (ANOTA TODOS LOS RESULTADOS EN LA HOJA DE RESPUESTAS). 1.- Extrae y limpia los restos seos de la egagrpila que te ha correspondido (si est muy seca humedcela con el agua del frasco lavador) siguiendo los pasos que se observan en la Figura 1b y c. Selecciona y organiza las piezas segn se indica en la Figura 1d. Cuando finalices, llama al monitor para que te evale.

2.- Averigua el nmero de presas mediante el criterio del nmero mnimo de ejemplares. Para ello, cuenta el nmero de crneos, asignando a cada uno un par de hemimandbulas. Anota el resultado en la Tabla 1. Cuando finalices, llama al monitor para que te evale. 3.- Identifica el grupo taxonmico al que pertenece cada presa segn la Ficha 1, anotando el resultado en la Tabla 2. (Llama al monitor para que te evale). Suma tu nmero de presas al obtenido en el total de otras egagrpilas del mismo posadero y que figura en la columna Datos dieta analizados por el estudiante de la Tabla 3. Ordena de mayor a menor el nmero de presas consumidas y antalo en la Tabla 4. 4.- Utilizando los datos bibliogrficos proporcionados en la Tabla 3, calcula la rentabilidad de cada presa a partir de la siguiente frmula: Energa presa i (EPi) Energa capturar i (ECi) Rentabilidad de la presa i (RPi) = Tiempo para encontrar i (TEi) El tiempo para encontrar a i es inversamente proporcional a la abundancia relativa de cada presa (vase Tabla 3). Anota los valores obtenidos en la columna Rentabilidad relativa. Ordena estos valores de mayor a menor y antalos en la Tabla 5. 5.- Discute hasta qu punto el resultado que has obtenido del anlisis de la dieta es congruente con la hiptesis de partida: la lechuza que te ha correspondido ha elegido las presas de acuerdo a su rentabilidad energtica? Justifica tu respuesta.

Figura 1 (a) egagrpila (b) extraccin de restos

(c) restos limpios

(d) Organizacin restos

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FICHA 1 Clave dicotmica de identificacin de crneos y mandbulas 1.- Crneo o mandbula con dientes ........2 Crneo o mandbula sin dientes .......................6 2.- Diferentes tipos de dientes en crneo o mandbula (Fig. 1)........3 Dientes todos iguales en crneo o mandbula (Fig. 4).........5 3.- Con un espacio (diastema) grande entre los dientes ...................................4 Sin espacio grande entre los dientes (Fig. 1)......musaraas (INSECTVOROS) 4.- Molares con corona plana y dibujos triangulares (Fig. 2)........topillos (ROEDORES) Molares con tubrculos ms o menos redondeados (Fig. 3).........ratones (ROEDORES) 5.- Crneo ms ancho que largo (Fig. 6)...................................................ranas (ANFIBIOS) Crneo ms largo que ancho. Mandbula con dientes igual...........lagartijas (REPTILES) 6.- Crneo sin dientes (Fig. 5)...............pjaros (AVES) Mandbula sin dientes ... 7 7.- Mandbula curvada (Fig. 5)...................................................................... pjaros (AVES) Mandbula recta (Fig. 6).....................ranas (ANFIBIOS)

HOJA DE RESPUESTAS 1 pregunta (puntuacin):

2 pregunta: Tabla 1: Micromamferos N de presas 3 pregunta: Tabla 2: Presas Musaraas Topillos Ratones Aves Otros Tabla 3: PRESA Musaraas Ratones Topillos Pjaros Otros EPi 99 234 189 192 115 ECi 30 63 53 55 33 Abundancia relativa 0,40 0,30 0,10 0,15 0,05 TEi RPi Datos dieta analizada por el estudiante Resultados Total propios 15 + 23 + 5+ 8+ 1+ = = = = = N Aves Otros

Tabla 4: Ordenar la dieta analizada de mayor a menor consumo.

4 pregunta: Tabla 5: Ordenar la dieta terica de mayor a menor rentabilidad energtica relativa

5 pregunta: