Métodos analíticos

Mtodos Analticos Adecuados a su Propsito
Gua EURACHEM

Gua de Laboratorio para Validacin de Mtodos y Tpicos Relacionados
Traduccin libre por: Q. Martha Elba Pedrero Izquierdo CENTRO NACIONAL DE METROLOGIA CENAM-MXICO
Primera Edicin en Ingls 1.0 - 1998
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PREFACIO
El presente documento es una traduccin de la obra original en ingls The Fitness for Purpose of Analytical Methods resultado del esfuerzo de la Direccin de Metrologa de Materiales por llevar la informacin al pblico interesado de habla hispana y crear un foro de discusin sobre la validacin de mtodos, de acuerdo a la poltica del CITAC (Co-Operation on International Traceability in Analytical Chemistry). Se agradece la colaboracin especial de la Q.M. Rocio Arvizu Torres, el M. En C. Antonio Salas Tellez y el M. En C. Alejandro Prez Castorena quienes durante su estancia en el Centro Nacional de Metrologa, participaron activamente en esta traduccin. Gracias al Dr. Yoshito Mitani Nakanishi, Director del rea de Metrologa de Materiales, miembro activo del CITAC, por impulsar el desarrollo de este trabajo. En especial, agradecemos al Dr. Hctor Nava Jaimes, Director del Centro Nacional de Metrologa, por los comentarios y sugerencias realizados a este documento. Se agradece al comit ejecutivo de EURACHEM por permitirnos traducir este documento.
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MTODOS ANALTICOS ADECUADOS A SU PROPSITO Contenido
1. 2. 3. 4. (a) (b) 5. 6. (a) (b) (c) (d) (e) (f) 7. 8. 9. 10.
Prefacio Introduccin Qu es la validacin de un mtodo? Por qu es necesaria la validacin de un mtodo? La importancia de la medicin analtica El deber profesional del qumico analtico Cundo deben ser validados los mtodos? Cmo deben ser validados los mtodos? Quin lleva acabo la validacin de un mtodo? Decidiendo que grado de validacin es requerido El requisito analtico Desarrollo del mtodo Diferentes parmetros de desempeo de un mtodo y lo que muestran Las herramientas de la validacin Utilizando mtodos validados Utilizando datos de validacin para disear el control de calidad Documentacin de mtodos validados Implicaciones de los datos de validacin para estimar resultados y para informarlos
11.
Referencias y bibliografa
Anexo A
Definiciones
Anexo B
Protocolo de documentacin del mtodo
Anexo C
Grupo de trabajo de EURACHEM
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MTODOS ANALTICOS ADECUADOS A SU PROPSITO Gua del Laboratorio para la Validacin de Mtodos y Tpicos Relacionados 1. Prefacio En el Reino Unido una iniciativa para promover la buena prctica de laboratorio en las mediciones analticas, ha identificado 6 principios de la prctica analtica los cuales, tomados en conjunto, constituyen la mejor prctica. Los seis principios han sido descritos con ms detalle en otra gua (1) y son: 1. Las mediciones analticas deben realizarse para satisfacer un requisito establecido ( i.e. para un objetivo definido). 2. Las mediciones analticas deben realizarse utilizando mtodos y equipos que han sido probados para asegurar que son adecuados para el propsito establecido. 3. El personal que realiza las mediciones analticas deber ser calificado y competente para emprender la tarea asignada (y demostrar que pueden desempear el anlisis apropiadamente). 4. Deber existir una evaluacin peridica e independiente del desempeo tcnico del laboratorio. 5. Las mediciones analticas hechas en un laboratorio deben ser consistentes con aquellas que se realicen en cualquier otro laboratorio. 6. Las organizaciones que hacen mediciones analticas deben tener un sistema de control de calidad definido y procedimientos de aseguramiento de calidad. Estos principios son igualmente relevantes para los laboratorios que trabajan aisladamente como para aquellos que producen resultados los cuales necesitan ser comparados con los de otros laboratorios. La intencin principal de este documento es apoyar a los laboratorios en la implementacin del principio 2, al dar una gua en la evaluacin de los mtodos de prueba con la finalidad de demostrar que son adecuados a su propsito.
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2. Introduccin 2.1 La validacin de un mtodo es un requisito importante en la prctica del anlisis qumico. Sin embargo, a pesar de su importancia, porque debe hacerse y cuando, y exactamente que se necesita hacer, parece ser lo menos importante entre los qumicos analticos. Existen muchas referencias relacionadas a la validacin de mtodos en la literatura tcnica, especialmente relacionada a mtodos en particular, pero en la gran mayora de las veces es sub-utilizada. Algunos analistas ven la validacin de mtodo como algo que solo puede ser hecho al colaborar con otros laboratorios y por consiguiente no lo realizan. 2.2 El propsito de esta gua es discutir los aspectos relacionados a la validacin de mtodo e incrementar el entendimiento de los lectores de lo que est involucrado, porque es importante, y dar alguna idea de como puede ser logrado. 2.3 Se espera que esta gua sea del mayor uso para a) gerentes de laboratorio quienes son responsables de asegurar que los mtodos, bajo su responsabilidad, estn adecuadamente validados y b) los analistas responsables de llevar a cabo estudios en mtodos con propsitos de validacin. Algn otro miembro del personal puede encontrar la gua como fuente de informacin de soporte, personal antiguo desde un punto de vista gerencial y personal nuevo desde un punto de vista tcnico. 2.4 La gua est dirigida a los laboratorios que necesitan validar mtodos pero que trabajan aislados, sin una posibilidad inmediata de participar en esquemas de intercolaboracin. Esto permite dirigir al lector hacia los protocolos establecidos donde estos existen y donde no, dando una introduccin sencilla al proceso involucrado en la validacin y suministrando algunas ideas bsicas que permitan al lector disear sus propias estrategias de validacin. Esto incluye las referencias a material bibliogrfico adicional en aspectos tcnicos especficos de la validacin. 2.5 La gua evita con gran nfasis el uso de indudablemente aquellos con experiencia prctica encontrarn el proceso de la validacin del mtodo e implementar. Donde es apropiado, las frmulas definiciones en el Anexo A. la estadstica aunque de estadstica sencilla ms fcil para entender se han incluido con las
2.6 El entendimiento del analista sobre la validacin del mtodo est inhibido por el hecho de que muchos trminos tcnicos utilizados en los procesos para evaluar mtodos varan en los diferentes sectores de las mediciones analticas, tanto en trminos de su significado cuanto tambin en la forma que son determinados. Esta gua no puede decir cuando un trmino se usa
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correcta o incorrectamente aunque pretende proporcionar alguna clarificacin. El mejor consejo cuando se usa un trmino sujeto a malinterpretacin, es establecer que acuerdo se ha usado, as se evita cualquier confusin por quienes estn usando los datos. 2.7 Notas en el uso de esta gua : 2.7.1 Los trminos ms importantes utilizados en la gua se definen en el Anexo A. Las definiciones de ISO e IUPAC se han proporcionado siempre que ha sido posible. Los usuarios deben notar que no hay un acuerdo universal en la definicin de algunos de los trminos utilizados en la validacin de mtodo. 2.7.2 En el captulo 6, los cuadros sombreados proporcionan un consejo en referencia rpida para determinar el desempeo de cada parmetro en el mtodo. Sin embargo, se reconoce que en muchos casos los laboratorios no tendrn el tiempo ni los recursos para realizar los experimentos con tal detalle. Llevando a cabo las operaciones descritas en los cuadros y utilizando menos replicas que las sugeridas, an as se obtendr informacin til y esto es ciertamente mejor que hacer ningn trabajo. Aunque, la informacin obtenida ser menos confiable que si una replicacin completa ha sido utilizada.
1. Que es la validacin del mtodo ? 3.1 La definicin ISO de validacin se da en el Anexo A. Se puede interpretar la validacin del mtodo como el proceso de definicin de las necesidades analticas y la confirmacin de que el mtodo en cuestin ha considerado capacidades consistentes con las que la aplicacin requiere. Est implcito que ser necesario evaluar las capacidades de desempeo del mtodo. Esto concuerda con la interpretacin de la definicin ISO por Morkowski(2). El juicio de la aptitud del mtodo es importante; en el pasado la validacin del mtodo tenda a concentrarse en el proceso de evaluacin de los parmetros de desempeo. 3.2 Est implcito en el proceso de validacin del mtodo que el estudio para determinar los parmetros de desempeo se realiza usando equipos dentro de especificaciones, trabajando correctamente y que se encuentre adecuadamente calibrado. De la misma forma el operador que realiza los estudios debe ser tcnicamente competente en el campo de trabajo bajo estudio y debe poseer suficiente conocimiento sobre el trabajo a realizar con el fin de que sea capaz de tomar decisiones apropiadas de las observaciones hechas mientras progresa el estudio.
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3.3 La validacin del mtodo generalmente se considera que esta relacionada estrechamente con el desarrollo del mtodo, de hecho no es posible determinar exactamente donde termina el desarrollo del mtodo y cuando empieza la validacin. Muchos de los parmetros de desempeo del mtodo que estn asociados a su validacin y por lo general son evaluados, por lo menos aproximadamente, como parte del desarrollo del mtodo. 4. Por qu es necesaria la validacin de un mtodo? (a). Importancia de las mediciones analticas 4.1 Millones de mediciones analticas se realizan diariamente en miles de laboratorios alrededor del mundo. Hay innumerables razones para realizar estas mediciones, por ejemplo: como una forma de evaluar bienes para propsitos de comercio, apoyo a la salud, verificar la calidad del agua potable para su consumo humano, anlisis de la composicin elemental de una aleacin para confirmar su conveniencia para usarse en la construccin de aeronaves, anlisis forenses de fluidos corporales en investigaciones criminales. Virtualmente cada aspecto de la sociedad est apoyada de algn modo por las mediciones analticas. 4.2 El costo de realizar estas mediciones es elevado y costos adicionales surgen de las decisiones hechas en base a los resultados. Por ejemplo, si las pruebas muestran que algn alimento no es adecuado para su consumo pueden resultar demandas por compensacin; pruebas que confirmen la presencia de drogas prohibidas podran ocasionar multas, encarcelamiento o an en algunos pases, la ejecucin. Claramente es importante determinar el resultado correcto y ser capaz de demostrar que lo es. (b). El deber profesional del qumico analtico 4.3 Si el resultado de una prueba no es confiable entonces tiene poco valor y la prueba no tuvo porque haberse realizado as. Cuando un cliente encarga un trabajo analtico a un laboratorio, se presume que el laboratorio tiene un conocimiento experto que el cliente no tiene por s mismo. El cliente espera confiar en los resultados reportados y por lo general solo los cuestiona cuando surge una disputa. As el laboratorio y su personal tienen una clara responsabilidad para justificar la confianza del cliente proporcionando la respuesta correcta a la parte analtica del problema, en otras palabras, resultados demostrables que son adecuados para su propsito. Esto lleva implcito que las pruebas realizadas son apropiadas para la parte analtica del problema que el cliente desea resolver, y que el informe final presenta los datos analticos de tal manera que el cliente puede entenderlos rpidamente y sacar conclusiones apropiadas. La validacin del mtodo permite a los qumicos demostrar que el mtodo es adecuado para su propsito.
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4.4 Para que un resultado analtico concuerde con el propsito requerido, debe ser lo suficientemente confiable para que cualquier decisin basada en l pueda tomarse con confianza. As, el desempeo del mtodo debe ser validado y la incertidumbre del resultado, a un nivel de confianza dado, estimada. La incertidumbre deber ser evaluada y establecida de una forma que sea ampliamente reconocida, consistente de forma interna y fcil de interpretar. La mayor parte de la informacin requerida para evaluar la incertidumbre se puede obtener durante la validacin del mtodo. Este tpico se estudia brevemente en la seccin 6; se listan referencias adicionales en la bibliografa. 4.5 Concerniente a que tan bueno es un mtodo y con cuanta habilidad se ha usado, un problema analtico puede ser resuelto mediante el anlisis de las muestras, slo si stas son apropiadas al problema. La toma adecuada de las muestras es un trabajo que requiere de gran habilidad, requiere entender el problema y su relacin con la qumica. Un laboratorio, como parte de la atencin al cliente, debe, siempre que sea posible, aconsejarlo sobre la forma de tomar las muestras. Obviamente habr ocasiones cuando el laboratorio no pueda por el mismo tomar o influenciar en la toma de las muestras. En estas ocasiones los resultados de anlisis tendrn que ser reportados en base a como se recibieron las muestras, y el informe debe indicar esta distincin claramente. 5. Cundo deben ser validados los mtodos? 5.1. Un mtodo debe ser validado cuando sea necesario verificar que sus parmetros de desempeo son adecuados para el uso en un problema analtico en particular. Por ejemplo : un nuevo mtodo desarrollado para un problema en particular un mtodo establecido revisado para incorporar mejoras o extenderlo a un nuevo problema cuando el control de calidad indica que un mtodo establecido est cambiando con el tiempo un mtodo establecido usado en un laboratorio diferente o con diferentes analistas o con diferente instrumentacin para demostrar la equivalencia entre dos mtodos : i.e. un nuevo mtodo y un mtodo de referencia. 5.2. El alcance de la validacin o la revalidacin requerida depender de la naturaleza de los cambios hechos al aplicar nuevamente un mtodo a diferentes laboratorios, en la instrumentacin, en los operadores y en las circunstancias en las cuales el mtodo va a ser utilizado. Algn grado de validacin siempre es apropiado an cuando se usan mtodos de referencia publicados aparentemente bien caracterizados. Este aspecto se considera con ms detalle en la seccin 7.
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6. Cmo deben ser validados los mtodos? (a) Quin lleva a cabo la validacin del mtodo ? 6.1 El laboratorio que utiliza un mtodo es responsable de asegurar que est validado adecuadamente, y si es necesario de llevar a cabo trabajo adicional que complemente los datos ya existentes. Por ejemplo, cuando un mtodo ha sido validado por una organizacin de certificacin, como la AOAC internacional, el usuario normalmente necesitar nicamente establecer los datos de desempeo del mtodo para su propio uso. 6.2 Se ha publicado ampliamente lo concerniente a la validacin de mtodos mediante estudios de colaboracin. Existe un gran nmero de protocolos relacionados con este tipo de validacin(3-7). Si un mtodo en proceso de desarrollo tendr un amplio uso, quiz como un procedimiento de referencia publicado, entonces el estudio de colaboracin involucrando un grupo de laboratorios es, probablemente, la forma preferida de llevar a cabo la validacin. Sin embargo, esto no es siempre una opcin adecuada para los laboratorios industriales. La aplicacin para la cual el mtodo es requerido puede ser esotrico al punto tal de que ningn otro laboratorio se interese en colaborar. Aquellos que puedan estar interesados podrn ser competidores. Siempre que sea imposible o inconveniente para un laboratorio entrar a un estudio de colaboracin, surgirn preguntas tales como: Los laboratorios por ellos mismos pueden validar los mtodos?, Cmo? Los mtodos validados de esta forma sern reconocidos por otros laboratorios? Qu clase de reconocimiento puede esperarse para mtodos internos utilizados en un ambiente de normalizacin? 6.3 Trabajando aisladamente se reduce inevitablemente la cantidad de datos de validacin que pueden ser adquiridos para un mtodo. Principalmente se restringe el tipo de informacin de la comparabilidad interlaboratorios. Esta informacin no siempre se requiere por lo que no es un problema. De ser necesario, es posible obtener una idea de la comparabilidad de los resultados de las mediciones de cualquier mtodo dado con otros obtenidos de otro lugar mediante la medicin de materiales de referencia certificados o comparar el mtodo contra uno para el cual la validacin se ha realizado. 6.4 La aceptacin o no de los mtodos validados por un solo laboratorio con propsitos legales depender en cualquier directriz que cubra el rea de la medicin concerniente. Sera normalmente posible obtener una clara declaracin de la poltica del cuerpo regulatorio apropiado. El siguiente ejemplo
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ha sido sustrado de las guas de Inspeccin de Agua Potable del Reino Unido(8). Un laboratorio que emplea un mtodo analtico que no est referenciado a un mtodo completamente validado se esperar que demuestre que el mtodo ha sido bien documentado y probado con la referencia actual recomendada por el mtodo de referencia autorizado. Deber demostrar que se ha establecido lo siguiente : a. las tolerancias requeridas para todas las mediciones realizadas dentro del mtodo (volumen, temperatura, masas etc.) ; b. las formas medidas del determinante, incluyendo la especiacin; c. el efecto de las interferencias ha sido ampliamente identificado y cuantificado; d. las fuentes significativas de error y los medios adecuados para controlarlas han sido identificados. 6.5 La Asociacin Oficial de Qumicos Analticos (Association of Official Analytical Chemists - AOAC International) siempre ha sido un partidario de las pruebas interlaboratorio como el medio preferido para la validacin de mtodos. Recientemente ha introducido su Programa de Verificacin de Mtodos por pares (Peer Verified Method Program)(9)Ypara la validacin de mtodos por laboratorios trabajando nicamente con uno u otros dos. (b) Decidiendo que grado de validacin es requerido 6.6 El laboratorio tiene que decidir cul de los parmetros de desempeo del mtodo necesita ser caracterizado con el fin de validar el mtodo. La caracterizacin del desempeo del mtodo es un proceso caro e inevitable y estar sujeto por consideraciones de costo y de tiempo. Empezando con una especificacin analtica considerada cuidadosamente se tiene una buena base sobre la cual planear el proceso de validacin, pero es reconocido que en la prctica esto no siempre es posible. El laboratorio deber hacer lo mejor que pueda con las limitantes impuestas, tomando en cuenta los requisitos del cliente, la experiencia existente en el mtodo y la necesidad de compatibilidad con otros mtodos similares que ya estn en uso por el laboratorio o usados por otros laboratorios. Algunos de los parmetros podrn ser determinados durante la etapa de desarrollo del mtodo. A menudo un grupo particular de experimentos proporcionar informacin de diferentes parmetros, as que,
Nota del traductor: Se hace la traduccin de revisin por pares (peer review), considerando un panel de revisin de un mximo de tres autoridades en la materia, por medio de la cual dos de ellas hacen una revisin exhaustiva de la otra para luego intercambiar papeles. 16
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con una planeacin cuidadosa el esfuerzo requerido para obtener la informacin necesaria puede ser minimizado.
6.7 Las implicaciones de las limitaciones discutidas anteriormente son particularmente crticas cuando el mtodo no va a ser usado rutinariamente. La validacin de los mtodos que sern usados rutinariamente es un proceso comparativamente sencillo. Sin embargo, debe el mismo proceso de validacin ser aplicado a un anlisis ad-hoc?. Claramente los mismos principios aplican que a una prueba de rutina. Es necesario que sea capaz de tener un adecuado nivel de confianza en los resultados producidos, de otra forma, el trabajo no tiene ningn valor. Es difcil encontrar el balance entre las limitantes de costo y tiempo, y la necesidad del mtodo. En algunas circunstancias ser ms adecuado destinar el trabajo a otro laboratorio donde ste pueda ser desarrollado en fundamentos de rutina.
Los requisitos de validacin pueden ser especificados en guas dentro de un sector particular de mediciones relevantes al mtodo y es recomendable que donde se encuentren disponibles se realicen. Por ejemplo, la validacin de un mtodo para anlisis de alimentos debe concordar con la estrategia de validacin usada por AOAC. Esto asegurar que la terminologa particular de validacin junto con la estadstica empleada se interpretan de una manera consistente dentro del sector relevante. El reconocimiento oficial de un mtodo puede requerir la caracterizacin empleando un estudio de colaboracin. requisitos de regulacin podrn requerir que un mtodo en particular sea seguido al pie de la letra an cuando el laboratorio lo considere inexacto o inapropiado. La validacin adicional ser necesaria para confirmar el desempeo satisfactorio del analista.
(c) Requisitos Analticos 6.9. Enfrentado un problema analtico particular, idealmente, el laboratorio debera estar de acuerdo en primer instancia con el cliente acerca de las caractersticas analticas que definen los requisitos de desempeo que un mtodo debe tener para ser adecuado al momento de resolver el problema analtico. En respuesta a este requisito, el laboratorio puede evaluar si los mtodos existentes son adecuados y si es necesario desarrollar un nuevo mtodo. Este proceso iterativo de desarrollo y evaluacin contina hasta que el mtodo es capaz de igualarse con el requisito; un desarrollo posterior no es necesario y el trabajo analtico puede proceder. Este proceso de evaluacin del criterio de desempeo y la confirmacin de que el mtodo es adecuado se ilustra en la figura 1, es la validacin del mtodo. La tabla 1 muestra la clase de preguntas que pueden presentarse al formalizar una solicitud analtica (columna 1), y los correspondientes parmetros de desempeo del mtodo los cuales pueden necesitar ser caracterizados (columna 2).
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Problema que requiere del anlisis qumico: establecimiento de las necesidades analticas
Desarrollo del mtodo
Evaluar si el mtodo cumple al propsito como se utiliza en el laboratorio
SI
Desarrollo posterior factible?
SI
Identificar la existencia del mtodo o desarrollo de un muevo mtodo un nuevo mtodo
NO
NO
Se atena el requisito analtico?
NO SI
Procede el trabajo analtico
Incapacidad para hacer el trabajo: subcontratar?
Notas : La validacin del mtodo consiste de esta etapa de evaluacin, junto con cualquier parmetro de desempeo que pueden ser evaluado en el desarrollo del mtodo. Adecuado para su propsito.. Sin tener en cuenta de que datos de desempeo existentes se disponen para el mtodo, el ajuste a su propsito ser determinado por como el mtodo se desempea cuando es utilizado por un analista designado con el equipo e infraestructura disponibles.
Requisitos analticos reestablecidos en trminos de lo que se ha completado
FIN
Figura 1: Eleccin, desarrollo y evaluacin de mtodos.
6.10 En la realidad una solicitud analtica raramente es acordada formalmente con anticipacin. Ms an, si est establecida, se har retrospectivamente. Por lo general los clientes definen sus requisitos en trminos de costo y/o tiempo y raramente conocen que tanto los mtodos necesitan desempearse, a pesar de que los requisitos de desempeo para los mtodos pueden ser especificados cuando los mtodos apoyen un requisito regulatorio o conformen a una especificacin. Comnmente, se deja a la discrecin del analista el decidir qu desempeo se requiere del mtodo y a menudo esto significa establecer un requisito analtico a la par con la capacidad conocida del mtodo. Las limitantes financieras pueden determinar que el desarrollo de un mtodo, que satisface un requisito analtico en particular no es econmicamente viable; en tal caso, debe tomarse una decisin ya sea para que el requerimiento de la solicitud se encuentre a un nivel ms asequible, o bien, para retomar la justificacin del anlisis.
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Tabla 1:
Elementos de los requisitos analticos y caractersticas de desempeo relacionadas Elementos de los requisitos caractersticas de .. con la Notas analticos desempeo seccin relacionadas... 6.13-6.19 Qu clase de respuesta se Confirmacin de la requiere- cuantitativa o cualitativa? identidad, 6.20-6.23 selectividad/especificidad 6.24-6.25 Limite de deteccin Limite de cuantificacin El analito esta dispersado o a) localizado? Si el analito est presente en ms Confirmacin de identidad 6.13-6.19 de una forma, Est interesado en Recuperacin 6.46-6.47 el analito extrable, libre o total? Cules son los analitos de inters Confirmacin de identidad 6.13-6.19 6.20-6.23 y en que niveles estn presentes? Limite de deteccin 6.24-6.25 Limite de cuantificacin (%, gg-1, ngg-1, etc.)? 6.26-6.29 Intervalos de trabajo y lineales b) 6.45-6.46 Qu tan precisa y exacta debe ser Recuperacin 6.30-6.36 Exactitud/ veracidad la respuesta? / Qu grado de 6.37-6.39 Precisin de la incertidumbre es permitido y como 6.37-6.38, repetibilidad se va a expresar? 6.40 Precisin de la reproducibilidad Cul es la naturaleza qumica, a) fsica y biolgica de la matriz? Cules son las interferencias ms Selectividad/especificidad 6.13-6.19 probables al analito(s)? a) Se requiere de muestreo y submuestreo (y ser realizado por el laboratorio)? a) Cules son, si existen, las restricciones en la muestra tamao/ disponibilidad? Aplican las limitantes de recursos, a) personal, tiempo, dinero, equipo y reactivos, infraestructura del laboratorio? Necesitan compararse los Robustez 6.45 resultados con los de otros Precisin de la 6.37-6.38, laboratorios? reproducibilidad 6.40 Necesitan compararse los Exactitud 6.30-6.36 resultados con especificaciones Precisin de la 6.37-6.38, externas? reproducibilidad 6.40
Notas: a) No todos los elementos de los requisitos analticos estn directamente relacionados a los requisitos de validacin del mtodo. Algunos de ellos indicarn de forma general a las tcnicas en que son aplicables. Por ejemplo, diferentes tcnicas sern aplicadas de acuerdo a que si el analito est disperso a travs de la muestra o aislado en la superficie. b) Un elemento esencial de los requisitos analticos es que debe ser posible si un mtodo es adecuado o no para su propsito inicial y por consiguiente debe incluir la incertidumbre requerida expresada, como incertidumbre estndar o bien como incertidumbre expandida.
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(d) Desarrollo del Mtodo 6.11 El desarrollo del mtodo puede tomar varias formas, por un lado puede involucrar el adaptar un mtodo existente, realizando cambios menores de tal manera que sea adecuado a su nueva aplicacin. Por ejemplo, un mtodo requerido para determinar tolueno en agua puede ser adaptado de un mtodo establecido para benceno en agua. La matriz es la misma y los dos analitos tienen propiedades generales similares. Es probable que los mismos principios de aislamiento, identificacin y cuantificacin que son aplicados al benceno tambin puedan aplicarse el tolueno. Por otro lado, un mtodo se requiere para determinar benceno en suelo la adaptacin del mtodo de benceno en agua puede no ser la mejor opcin. La adaptacin de algunos otros mtodos para determinar compuestos orgnicos en el suelo puede ser un mejor punto de partida.
6.12 En otro extremo, el qumico analtico puede iniciar con algunas ideas burdas y aplicar su experiencia y su pericia para disear el mtodo ms adecuado. Esto puede involucrar una innovacin importante basada en una exploracin novedosa de las propiedades conocidas del analito o mensurando. Claramente esto involucra una gran cantidad de nuevo trabajo e inicialmente un cierto grado de duda de cuando el mtodo final ser exitoso. No es raro que para el desarrollo de un mtodo se debe trabajar con diferentes ideas simultneamente y eventualmente escoger la mejor. (e) Los diferentes parmetros de desempeo de un mtodo y que muestran Confirmacin de la identidad y la selectividad/especificidad (Ver anexo A para definiciones) 6.13 En general se dice que los mtodos analticos consisten en etapas de mediciones las cuales pueden o no proceder de una etapa de separacin. Es necesario establecer que la seal producida en la etapa de medicin, o alguna otra propiedad medida, que ha sido atribuida al analito es debida nicamente al l y no a la presencia de algo qumico o fsicamente similar o que sea el resultado de una coincidencia. Esta es la confirmacin de la identidad. La interferencia de otros compuestos con la medicin del analito, depender de que tan efectiva es la etapa de separacin y la selectividad/especificidad de la etapa de medicin. La selectividad y la especificidad son mediciones que garantizan la confiabilidad de las mediciones en la presencia de interferencias. La especificidad se considera generalmente que es el 100 % de la selectividad pero el acuerdo no es universal. Cuando la etapa de la medicin no es especfica, es posible establecer que ciertos analitos no interfieren, habiendo primero revisado que este es el caso. Es bastante difcil establecer que nada interfiere ya que siempre existe la posibilidad de encontrar alguna interferencia
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no reconocida hasta el momento del anlisis. Habr casos en donde las interferencias qumicas puedan ser identificadas para un mtodo en particular pero que sean improbables las oportunidades de encontrarlas en la vida real. El analista debe decidir en qu punto es razonable terminar de buscar interferencias. Estos parmetros se aplican al anlisis cuantitativo y cualitativo. 6.14 Si las interferencias estn presentes y no pueden ser separadas del analito de inters o si el analista no esta consciente de las interferencias presentes, entonces stas tendrn varios efectos. Dependiendo de qu tanto la identidad del analito se establezca, las interferencias podrn inhibir la confirmacin, por ejemplo, al distorsionar la seal que surja del analito. stas tambin pueden tambin tener el efecto de incrementar aparentemente la concentracin del analito al contribuir a la seal atribuida a l, (o contrariamente suprimir la concentracin del analito s contribuyen con una seal negativa). Las interferencias por lo general afectarn la pendiente de la curva de calibracin de una forma diferente a la que lo hara el analito de inters, es as que la pendiente de la curva de calibracin del mtodo de adiciones de estndar puede afectar la linealidad de la curva. Este efecto tiene el potencial para indicar la posible presencia de una interferencia oculta, pero no es til si la curva de recuperacin es, inherentemente, no lineal.
6.15 La selectividad de un mtodo, comnmente se investiga mediante el estudio de su capacidad para medir el analito de inters en porciones de prueba en las cuales interferencias especficas se han introducido deliberadamente (aquellas que se creen que estn presentes en las muestras). Cuando no se est seguro de que las interferencias estn presentes, la selectividad de un mtodo se puede investigar estudiando su capacidad al medir el analito comparado con otros mtodos o tcnicas independientes. 6.16 Ejemplos: 6.16.1 Un pico en un cromatograma puede ser identificado como el analito de inters basado en que el material de referencia contenido el analito genera una seal en el mismo punto del cromatograma. Pero La seal se debe al analito o a algo ms que coincidentemente co-eluya ?. Puede ser una de ellas o ambas. La identificacin del analito por este nico medio no es confiable y algn tipo de evidencia de apoyo es necesaria. Por ejemplo, la cromatografa puede repetirse utilizando una columna de diferente polaridad para ver si la seal de la muestra y la seal generada por el material de referencia an aparece al mismo tiempo. Cuando el pico se debe a ms de un compuesto, una columna de diferente polaridad ser un buen medio de separar los compuestos. Si se cuenta con una cromatografa de gases con deteccin de espectrometra de masas se podr confirmar la identidad del analito o mostrar la mezcla presente. Algunos detectores pueden monitorear la pureza del pico.
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6.16.2 En la espectrometra de infrarrojo, la identificacin de compuestos desconocidos puede realizarse comparando las absorbancias (i.e. picos) en el espectro del analito con aquellos espectros de referencia almacenados en una biblioteca espectral. Una vez que se cree que la identificacin correcta se ha realizado, un espectro de un material de referencia del analito deber registrarse exactamente bajo las misma condiciones que para la muestra de prueba. Si se requiere que la comparacin sea ms exacta (Por ejemplo, el mayor nmero de absorbancias que se requieren para que coincidan el analito y el material de referencia) lo mejor es que se tenga confianza de que es una correcta identificacin. Para asegurarse de un buen ajuste entre el analito y el material de referencia, se necesita registrar los espectros bajo condiciones similares y tambin podra de gran utilidad examinar qu tan dependiente es la forma del espectro con respecto a que tan cuidadosamente el analito fue separado y preparado para el anlisis de Infrarrojo (I.R.). Por ejemplo, si el espectro fue registrado como un disco de sal, la distribucin del tamao de partcula de la porcin prueba en el disco puede influir en la forma del espectro.
6.17 El uso de tcnicas confirmatorias pude ser til como un medio de verificar identidades y cantidades del analito, mientras ms evidencia se pueda obtener es mejor. Inevitablemente existe una relacin entre los costos y el tiempo tomado para la identificacin del analito y la confianza en la cual se puede decidir que la identificacin se ha hecho correctamente.
6.18 Algunos protocolos de validacin confunden la confirmacin de identidad con repetibilidad. Mientras que la evaluacin de repetibilidad requiere que la medicin se realice varias veces por una tcnica, la confirmacin (i.e. la identidad del analito) requiere que la medicin se realice por varias tcnicas de preferencia independientes. La confirmacin aumenta la confianza en la tcnica bajo estudio y es especialmente til cuando las tcnicas de confirmacin operan con principios significativamente diferentes. En algunas aplicaciones, por ejemplo, el anlisis de compuestos orgnicos desconocidos por cromatografa de gases, el uso de tcnicas de confirmacin es esencial. Cuando la tcnica bajo evaluacin sea especfica, no ser necesario el uso de otras tcnicas de confirmacin. 6.19 Otro aspecto de la selectividad que debe ser considerado es cuando el analito puede existir en la muestra en ms de una forma tal que: ligado o desligado, inorgnico u organometlico, o en diferentes estado de oxidacin.
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Confirmacin de la identidad y selectividad/especificidad - Referencia Rpida

Qu hace ?
Anlisis de muestra y materiales de referencia mediante
..Cuntas veces ? 1
Calcular / determinar Use los resultados de las tcnicas confirmatorias para asegurar la habilidad del mtodo para confirmar la identidad del analito y su habilidad para medirlo solo de otras interferencias. Examine el efecto de las interferencias -la presencia de la interferencia incrementa o inhibe la deteccin o cuantificacin del mensurando?
Comentarios Decidir que tanta evidencia de apoyo es razonable para dar suficiente confiablidad.
mtodos candidatos y otros mtodos independientes Anlisis de muestras conteniendo varias interferencias sospechadas en la presencia del analito de inters
Si la deteccin o cuantificacin se inhibe por las interferencias, un desarrollo posterior del mtodo ser requerido.
Limite de Deteccin (Ver anexo A para definiciones) 6.20 Cuando las mediciones se realizan para niveles bajos del analito o sus propiedades, i.e. en anlisis de trazas, es importante conocer cual es la concentracin ms pequea del analito o el valor de propiedad que puede ser confiablemente detectada por el mtodo. La importancia al determinar esto y los problemas asociados a ello se elevan del hecho que la probabilidad de deteccin no cambia repentinamente de cero a la unidad ya que un umbral se est cruzando. Los problemas han sido investigados con detalle y se ha propuesto un criterio de decisin. Confusiones extras surgen debido a que no existe un acuerdo universal actual de la terminologa aplicada. El lmite de deteccin o la deteccin del lmite no es aceptado ampliamente aunque se usa en ciertos documentos. (9,10). ISO utiliza como trmino general valor mnimo detectable del estado variable neto el cual puede ser traducido para los qumicos como la concentracin mnima neta detectable. (11). IUPAC es cautelosa en el uso del lmite de deteccin prefiriendo el valor (verdadero) mnimo detectable (12). 6.21 Para propsitos de validacin es suficiente proporcionar una indicacin del nivel al cual la deteccin resulta problemtica. Para este propsito la aproximacin que dice el blanco + 3s es suficiente. Cuando el trabajo est como apoyo para un acuerdo de regulacin o especificacin que requiere algo de mejor exactitud, el criterio descrito por IUPAC (12) y varios otros(13-14) es apropiado. Se recomienda a los usuarios citar cualquier acuerdo que han utilizado cuando se establece el lmite de deteccin.
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Limite de Deteccin (LoD)- Referencia Rpida
Qu se analiza? a) 10 muestras de blancos independientes medidos cada uno una vez b) 10 blancos independientes fortificados a la menor concentracin aceptable medidos cada uno una vez
Qu calcular de los resultados? Desviacin estndar de la muestra (s) de a) valores de los blancos, o b) valores de los blancos de muestra fortificados. LoD expresa la concentracin del analito correspondiente a: a), el valor promedio de los blancos de muestra + 3s o b) 0 + 3s
Este enfoque asume que una seal ms 3s sobre el valor del blanco podra surgir del blanco menos de 1% de las veces, y por lo tanto es probable de que haya surgido de algo ms, como del mensurando. El inciso a) slo es til cuando el blanco da una desviacin estndar diferente de cero. Y obtener un blanco verdadero puede ser difcil. c) 10 blancos independientes fortificados a la concentracin ms baja aceptable, medidos uno a la vez. Desviacin estndar de la muestra s de los valores de los blancos fortificados LoD expresa la concentracin del analito correspondiente al valor del blanco de muestra+4.65s (derivado de la prueba de hiptesis) La concentracin ms baja aceptable se considera que es la mnima concentracin para la cual se puede alcanzar un grado aceptable de incertidumbre. Se asume como una prctica normal evaluar la muestra y el blanco por separado y corregir con el blanco mediante la sustraccin de la concentracin del analito correspondiente a la seal del blanco de la concentracin correspondiente a la seal de la muestra.
Si las mediciones se han realizado bajo condiciones de repetibilidad, esto tambin da una medida de la precisin correspondiente de la repetibilidad. (Anexo A, A20)
6.22 Ntese que la media y la desviacin estndar del blanco son dependientes de la matriz del blanco. El lmite de deteccin del blanco, consecuentemente, ser dependiente de la matriz. Similarmente cuando este criterio se use para tomar decisiones crticas, los valores de precisin relevantes necesitarn determinarse nuevamente a la par el desempeo actual de operacin.
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Lmite de Deteccin (LoD) - Mediciones Cualitativas - Referencia Rpida
Qu analizar ? Blancos de muestra con adicin del analito a niveles de concentracin en un intervalo. A cada nivel de concentracin, ser necesario medir aproximadamente 10 rplicas independientes. Las medidas de las rplicas a varios niveles deben ser aleatorias.
Qu calcular de los datos ? Se deber construir una curva de respuesta de resultados de % positivos (o negativos) contra la concentracin a partir de la cual ser posible determinar mediante inspeccin la concentracin del umbral a la cual la prueba no es confiable.
6.23 Para mediciones cualitativas, es posible estar en el umbral de la concentracin por debajo de la cual la especificidad se vuelve poco confiable. El umbral puede variar si el experimento se repite en otro tiempo con diferentes reactivos, fortificaciones, materiales para adicin (spiking), etc., en el ejemplo mostrado en la Tabla 2, la identificacin positiva del analito deja de ser 100 % confiable por debajo de los 100 g.g-1. Tabla 2: Anlisis Cualitativo. Ilustracin de la determinacin de la concentracin lmite (umbral).
Concentracin/ gg-1 No. de replicas
Resultados positivos/negativos
200 100 75 50 25
10 10 10 10 10
10/0 10/0 5/5 1/9 0/10
Lmite de Cuantificacin (ver anexo A para definiciones) 6.24 El lmite de cuantificacin (LoQ) estrictamente es la concentracin ms baja de analito que puede ser determinada con un nivel aceptable de precisin de repetibilidad y de veracidad. Tambin se define a travs de diversas convenciones como la concentracin del analito correspondiente al valor del blanco ms 5, 6 10 desviaciones estndar de la media del blanco. Algunas veces esto es conocido como lmite de determinacin. LoQ es un valor indicador y no deber ser usado en la toma de decisiones. 6.25 Observe que ni el LoD o el LoQ representa los niveles a los cuales la cuantificacin es imposible, simplemente, es el tamao de la comparacin de las incertidumbres asociadas con el resultado actual en la regin del LoD.
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Limite de Cuantificacin (LoQ) - Referencia Rpida
Qu se analiza ? a) 10 muestras de blancos independientes medidos una vez
Qu calcular de los resultados ? Desviacin estndar de los blancos de muestra (s) LoD expresa la concentracin del analito correspondiente a los valores del blanco de muestra ms : i)5s, ii)6s, iii)10s
Obtener un blanco verdadero puede ser difcil. b) Fortificar alcuotas del blanco a varias concentraciones del analito cercanas al LoD. Medir, una vez, 10 rplicas independientes a cada nivel de concentracin. Calcular la desviacin estndar s de los valores del analito a cada concentracin. Graficar s contra la concentracin y asignar un valor al LoQ mediante inspeccin. LoQ se expresa como la concentracin mnima del analito que puede ser determinada con un nivel aceptable de incertidumbre.
Normalmente LoQ forma parte del estudio para determinar el intervalo de trabajo. ste no deber determinarse por extrapolacin debajo de la concentracin ms baja del blanco fortificado. Si las mediciones se han realizado bajo condiciones de repetibilidad, tambin da esto una medida de la precisin de repetibilidad a esta concentracin.
Intervalo de trabajo e intervalo lineal (Ver anexo A para definiciones)
6.26 Para cualquier mtodo cuantitativo es necesario determinar el intervalo de las concentraciones analticas o los valores de las propiedades sobre los cuales el mtodo va a ser aplicado. Note que esto se refiere al intervalo de concentraciones o valores de las propiedades de las soluciones medidos recientemente ms que de las muestras originales. Al trmino menor del intervalo de concentracin, los factores limitantes son los valores del lmite de deteccin y/o cuantificacin. Al trmino superior del intervalo de concentracin, las limitaciones quedarn impuestas por varios efectos que dependern del sistema de respuesta del instrumento.
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6.27 Dentro del intervalo de trabajo puede existir un intervalo de respuesta lineal, en el que, la seal de respuesta tendr una relacin lineal con la concentracin del analito o el valor de la propiedad. La determinacin del intervalo puede ser establecida durante la evaluacin del intervalo de trabajo. Note que los clculos de la regresin por ellos mismos, son insuficientes para establecer la linealidad. Para hacer esto, una inspeccin visual de la lnea y los residuales puede ser suficiente. Existen pruebas subjetivas tales como las pruebas de bondad de ajuste que continan siendo los mejores(15-17). En general las revisiones de linealidad requieren puntos de al menos 10 diferentes concentraciones o valores de la propiedad.
6.28 La evaluacin de intervalos lineales y de trabajo puede tambin ser til para la planeacin del grado de calibracin que es requerido cuando se utiliza el mtodo de forma rutinaria. Es aconsejable investigar la varianza a travs del intervalo de trabajo. Dentro del intervalo lineal, un punto de calibracin puede ser suficiente para establecer la pendiente de la curva de calibracin pero en el intervalo de trabajo la calibracin con varios puntos (preferentemente ms de 6) ser necesaria. La relacin entre la respuesta del instrumento a la concentracin del analito no tiene que ser perfectamente lineal para que un mtodo sea efectivo pero la curva debe repetirse da con da. Observe que el intervalo de trabajo y el lineal puede no ser el mismo para diferentes tipos de matrices de acuerdo con el efecto de las interferencias que aparezcan de la matriz de la muestra.
6.29 Cuando el mtodo utiliza alguna una clase de instrumentacin ser til considerar la sensibilidad, la resolucin, el umbral de la resolucin, y el tiempo de respuesta (ver Anexo A).
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Intervalo de trabajo e intervalo lineal. Referencia Rpida
Qu se analiza? 1.Blanco ms el material de referencia o los blancos de muestra fortificados a varias concentraciones Se necesitan al menos 6 concentraciones ms el blanco. 2. Materiales de referencia o blancos de muestra fortificados al menos de 6 diferentes concentraciones dentro del intervalo lineal.
Rplicas 1
Qu calcular de los datos ? Grafique la respuesta de medicin (eje y) contra la concentracin medida(eje x) Visualmente examinar para identificar el intervalo de lineal aproximado y los lmites superiores e inferiores del intervalo de trabajo.
Comentarios Idealmente las diferentes concentraciones debern prepararse independientemente, y no de alcuotas de la misma solucin madre. Esto dar una confirmacin visual si el intervalo de trabajo es lineal o no. En esta etapa es necesaria probar un intervalo de trabajo que se piensa que es lineal y donde se pretende usar un slo punto de calibracin. Es inseguro remover los puntos extremos sin verificar primero con otras determinaciones a concentraciones cercanas. Si la varianza de las rplicas es proporcional a la concentracin entonces utilice un clculo de regresin de peso en lugar de uno sin l. En ciertas circunstancias puede ser mejor tratar de ajustar los datos a una curva no lineal. Las funciones mayores que las cuadrticas por lo general no se recomiendan. Trabaje con concentraciones bajas sucesivamente hasta que la exactitud y la precisin sean aceptables.
Despus vaya a 2 Grafique la respuesta de medida (eje y ) contra la concentracin del mensurando (eje x) Visualmente examine los puntos extremos (outliers) los cuales pueden no ser reflejados en la regresin. Calcule el coeficiente de regresin apropiado. Calcule y grafique valores residuales (diferencia entre el valor actual de y y el valor predicho por la lnea recta, para cada valor de x). La distribucin aleatoria de la lnea recta confirma la linealidad. Tendencias sistemticas indican la no-linealidad
despus vaya a 3. 3. Repita el procedimiento para LoQ (b) Repita el procedimiento para LoQ efectivamente forma el trmino menor del intervalo de trabajo.
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Exactitud (ver Anexo A para definiciones) 6.30 La exactitud expresa la cercana de un resultado al valor verdadero (La definicin de ISO 3534-1 se ha asumido en esta gua). La validacin de un mtodo busca cuantificar la exactitud probable de los resultados mediante el establecimiento de efectos sistemticos y aleatorios en los resultados. Normalmente la exactitud se estudia como dos componentes: la veracidad y la precisin. La veracidad (de un mtodo) es una expresin de que tan cercana se encuentra la media de un conjunto de resultados (producidos por el mtodo) del valor real. La veracidad normalmente se expresa en trminos de sesgo. La precisin es una medida de que tan cercanos estn los resultados unos con respecto a los otros y por lo general se expresa mediante mediciones tal como la desviacin estndar la cual describe la dispersin de los resultados. Adicionalmente una expresin comn de exactitud es la medicin de la incertidumbre, la cual proporciona una forma simple de expresin de exactitud. Estos tres diferentes parmetros sern discutidos en su momento Veracidad 6.31 La asignacin prctica de la veracidad se fundamenta en la comparacin de los resultados promedio de un mtodo con valores conocidos, esto es, la veracidad se asigna contra un valor de referencia (i.e. un valor verdadero o un valor verdadero convencional). Se dispone de dos tcnicas : la revisin con respecto a los valores de referencia de un material caracterizado o de otro mtodo caracterizado. Los valores de referencia son idealmente trazables a los estndares internacionales. Los materiales de referencia certificados por lo general se aceptan que proporcionan valores trazables y por lo tanto, el valor de referencia es el valor certificado del MRC. Observe que los valores de referencia, certificados u otros pueden ser absolutos (trazables al SI) o convencionales, esto es, acordes para un fin en particular. 6.32 Para probar la veracidad utilizando un material de referencia, determine la media y la desviacin estndar de una serie de replicas de prueba y compare con el valor caracterizado del material de referencia. El material de referencia ideal a emplearse sera uno certificado de matriz natural, lo ms similar a las muestras de inters. Claramente la disponibilidad de estos materiales es limitada. Los materiales de referencia para una validacin pueden ser : Preparados a travs de adicionar materiales tpicos como materiales de referencia de pureza certificada. materiales tpicos bien caracterizados, verificados internamente para estabilidad y conservados para el control de calidad interno. 6.33 La validacin requiere la adecuacin a un propsito por lo tanto, la seleccin de un material de referencia est basada en el propsito de la validacin. El material de referencia debe ser apropiado para este uso. Para un trabajo de
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regulacin es relevante el empleo de un material de referencia certificado e idealmente con una matriz similar. Para mtodos que se utilizarn por largos periodos de tiempo, deber utilizarse un material interno de referencia que sea estable. Para corto plazo o para un trabajo no crtico un estndar preparado o la adicin de material de referencia es suficiente por lo general. 6.34 Para verificar con respecto a un mtodo alternativo, compare los resultados de los dos mtodos empleados para la medicin de la muestra o muestras. La (s) muestra (s) pueden ser materiales de referencia certificados, materiales de referencia preparados internamente o simplemente, muestras tpicas. Existen ventajas cuando se usan los MRC puesto que tienen una estabilidad y una homogeneidad conocidas; adicionalmente muestran el sesgo con respecto a los estndares internacionales. Pero por otra parte los MRC son caros y pueden no ser representativos de las muestras.
Nota : Puede ser necesario repetir la verificacin de la veracidad cuando se encuentra que los materiales tienen matrices radicalmente diferentes o que tienen diferentes niveles de concentracin del analito con respecto a aquellos inicialmente revisados.
Interpretando mediciones de sesgo 6.35 La figura 2 muestra dos componentes del sesgo, referido aqu como el sesgo de los componentes del mtodo y del laboratorio. El sesgo del mtodo surge de los errores sistemticos inherentes al mtodo cualquiera que sea el laboratorio que lo usa. El sesgo del laboratorio surge de errores sistemticos caractersticos que son del laboratorio y de la interpretacin que ste hace del mtodo. Particularmente un laboratorio solo puede estimar el sesgo combinado, sin embargo, en la verificacin del sesgo, es importante estar al tanto de las convenciones vigentes para el propsito presente. Por ejemplo en muchas de las regulaciones para alimentos, los lmites de regulacin son establecidos en trminos del resultado obtenido por el mtodo de referencia. Por lo tanto el sesgo surge nicamente del mtodo particular (ver Figura 2) y se compensa y se compara con otros laboratorios utilizando el mismo mtodo de inters especial. El sesgo total determinado por un laboratorio particular durante la validacin debe ser comparado con cualquier sesgo proveniente del mtodo de regulacin. 6.36 Sin embargo, para la mayora de los propsitos, la aceptacin del sesgo debe decidirse sobre la base del sesgo total medido contra los materiales apropiados o los mtodos de referencia, tomando en cuenta la precisin del mtodo, cualquier incertidumbre en los valores de los materiales de referencia y la exactitud requerida para el uso final. Se recomiendan las pruebas estadsticas de significacin.
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Valor medido (Media del laboratorio)
Valor verdadero
Sesgo Total
M edia de la prueba de intercomparacin
Sesgo de laboratorio
Sesgo del mtodo
N o t a : E l s es go del laboratorio y el del m todo s e m u e s t r a n afectando el valor en la m i s m a direccin. En realidad
este no es siempre el caso.
Figura 2. Tipos de sesgo.
Exactitud y Veracidad - Referencia Rpida

Anlisis a) El blanco reactivo y el material de referencia usando el mtodo candidato No de veces 10 Clculos El valor promedio del analito proveniente del material de referencia y restarle el valor promedio del blanco. Comparar con el valor verdadero o aceptado del material de referencia Da una medicin del sesgo del mtodo. El valor promedio proveniente del material de referencia/ material de prueba restarle el valor promedio del blanco. Comparar con mediciones similares obtenidas con un mtodo independiente con un mtodo primario. Da una medicin del sesgo del mtodo relativo al mtodo independiente/ primario. Comentarios Sujeto a la incertidumbre del blanco de que en realidad sea un blanco verdadero, caracterizacin del material de referencia.
b) El blanco reactivo y el material de referencia/ material de prueba usando un mtodo candidato y un mtodo independiente, (preferentemente un mtodo primario).
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El mtodo independiente puede tener sesgo por el mismo y por consecuencia no se puede tener una medicin absoluta de la exactitud. El mtodo primario idealmente no tiene sesgo por lo que es una mejor forma de medir la exactitud.
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Precisin (ver anexo A para definiciones) 6.37 La precisin se determina normalmente para circunstancias especficas las cuales en la prctica pueden ser muy variadas. Las medidas de precisin ms comunes son la repetibilidad y la reproducibilidad. Ellas representan las dos medidas extremas de precisin que pueden obtenerse. La repetibilidad ( la precisin ms pequea esperada) dar una idea de la clase de variabilidad esperada cuando un mtodo se desarrolla por un solo analista, con equipo en un periodo corto de tiempo, por ejemplo es la clase de variabilidad que se espera entre resultados si las muestras se analizan por duplicado. Si la muestra se analiza por varios laboratorios para fines comparativos, entonces una medicin de precisin ms significativa a usar es la reproducibilidad (esto es la medida de precisin ms grande encontrada, a pesar de que formalmente se excluye la variacin con respecto del tiempo). Puede ser posible que para algunos casos particulares sea ms til la medicin de la precisin intermedia, por ejemplo la precisin medida entre diferentes analistas, en horarios prolongados dentro de un slo laboratorio. Esto algunas veces se conoce como precisin intermedia, pero las condiciones exactas deben ser establecidas. La precisin se establece por lo general en trminos de la desviacin estndar o desviacin estndar relativa. La reproducibilidad y la repetibilidad comnmente dependen de la concentracin del analito y deben determinarse a un nmero de concentraciones y, de ser relevante, establecer la relacin entre la precisin y la concentracin del analito. La desviacin estndar relativa ser ms til en este caso puesto que la concentracin ha sido evaluada en diferentes concentraciones, lo que significa de debe ser constante sobre el intervalo de inters proporcionado. 6.38 Observe estas afirmaciones de precisin relacionada al anlisis cuantitativo. El anlisis cualitativo puede tratarse de una forma ligeramente diferente. El anlisis cualitativo es efectivo en mediciones de pasa o no pasa a un umbral dado de concentracin del analito. Para mtodos cualitativos la precisin no puede expresarse como la desviacin estndar o la desviacin estndar relativa, pero puede expresarse con tasas de falso y verdadero positivas (y negativas). Estas tasas o relaciones deben ser determinadas a un nmero de concentraciones por debajo y por encima del nivel del umbral. Los datos provenientes de una comparacin con un mtodo de confirmacin debern usarse si se dispone de un mtodo apropiado. Si no se dispone de tal mtodo, se puede usar en su lugar blancos sin fortificar y fortificados. % falsos positivos = falsos positivos x 100/total de negativos conocidos % falsos negativos = falsos negativos x 100/total de positivos conocidos Note que el qumico analtico biolgico y microbiolgico trata falsos positivos y falsos negativos de forma ligeramente diferente, haciendo uso de los trminos de selectividad y especificidad de un modo que contradice el uso qumico.
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Precisin de Repetibilidad y de Reproducibilidad- Referencia Rpida

Analizar Referencias, materiales de referencia o muestras de blanco fortificadas a varias concentraciones en el intervalo de trabajo. a) El mismo analista, equipo, laboratorio y un periodo corto de tiempo b) Diferentes analistas, equipos, mismo laboratorio, con un periodo largo de tiempo 10 Determinar la desviacin estndar (s) a cada concentracin Determinar la desviacin estndar de la repetibilidad a cada concentracin.
Repeticiones
(independientes
Qu calcular de los datos?
Comentarios
10
Determinar la desviacin estndar (s) a cada concentracin
Determinar la desviacin estndar de la reproducibilidad interlaboratorio a cada concentracin
c) Diferentes analistas, equipos, laboratorios, y periodos largos de tiempo.
10
Determinar la desviacin estndar (s) a cada concentracin
Determinar la desviacin estndar de la reproducibilidad intralaboratorio a cada concentracin Requiere de un estudio de colaboracin.
Repetibilidad (Ver Anexo A para definiciones) 6.39 De la desviacin estndar de la repetibilidad r, o sr, es til calcular el lmite de repetibilidad r, el cual permite al analista decidir si es significativa la diferencia entre el anlisis de duplicados de la muestra determinados bajo condiciones de repetibilidad. Reproducibilidad (Ver Anexo A para definiciones) 6.40 De la desviacin estndar de la reproducibilidad R, o sR, es til calcular el lmite de reproducibilidad R, el cual permite al analista decidir si es significativa la
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diferencia entre el anlisis de duplicados de la muestra determinados bajo condiciones de reproducibilidad. Incertidumbre de la Medicin (Ver Anexo A para definiciones) 6.41 No es el objetivo de esta gua dar una completa discusin acerca de la incertidumbre. Se pueden encontrar exposiciones detalladas en diversas fuentes.(18-20) La medicin de la incertidumbre es un parmetro simple (usualmente una desviacin estndar o un intervalo de confianza) expresando el intervalo de posibles valores sobre la base de la medicin del resultado. La estimacin de la incertidumbre de medicin considera todos los efectos reconocidos que influyen en el resultado, las incertidumbres asociadas a cada efecto son combinados de acuerdo a procedimientos bien establecidos. La estimacin de la incertidumbre en la qumica analtica debe considerar : La precisin total del mtodo en un periodo largo de tiempo. El sesgo y su incertidumbre, incluyendo la incertidumbre estadstica asociada en las mediciones del sesgo y la incertidumbre del material de referencia o del mtodo. Ser necesario incrementar la estimacin donde se detecte sesgo sin corregirlo.(20) Incertidumbres de Calibracin. Cuantas ms calibraciones de equipo existan ms pequeas sern las incertidumbres, comparadas con la precisin total y la incertidumbre en el sesgo, por lo que solo se necesitar verificarse. Cualquier efecto significativo que opere junto con lo anterior, por ejemplo la temperatura o los intervalos de tiempo permitidos por el mtodo puede no ser ampliamente practicado en un ejercicio de validacin y su efecto puede necesitar agregarse. Dichos efectos pueden ser cuantificados por estudios de robustez o estudios relacionados que establecen la medida de un efecto determinado sobre el resultado. 6.42 Cuando la contribucin de efectos individuales sea importante, por ejemplo para los laboratorios de calibracin, ser necesario considerar las contribuciones individuales de los efectos separadamente. 6.43 Sujeto a consideraciones adicionales sobre efectos externos en las pruebas colaborativas, note que la desviacin estndar de la repoducibilidad forma un estimado de la medicin de la incertidumbre proveniente del sesgo de los laboratorios, medida sobre materiales relevantes, y es pequea en comparacin con la desviacin estndar de la reproducibilidad, la precisin de repetibilidad interna, es comparable a la repetibilidad del mtodo de referencia y la precisin intermedia del laboratorio no es tan grande como la desviacin estndar de la reproducibilidad publicada.
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Sensibilidad (ver Anexo A para definiciones) 6.44 Esto es efectivamente el gradiente de la respuesta de la curva, i.e. el cambio en la respuesta del instrumento que corresponde a un cambio en la concentracin del analito. Cuando la respuesta se ha establecido como lineal con respecto a la concentracin, i.e. cuando se ha determinado el intervalo lineal de un mtodo y la intercepcin de la curva de respuesta, la sensibilidad es un parmetro til para calcularse y usarse en frmulas para la cuantificacin. La sensibilidad algunas veces se usa para referirse al lmite de deteccin pero este uso no esta aprobado generalmente. Robustez (ver Anexo A para definiciones) 6.45 Una medida de la efectividad del mtodo analtico significa que tan buen desempeo se ha mantenido a casi una implementacin perfecta. En cualquier mtodo habr ciertas etapas las cuales, si no se llevan al cabo con suficiente cuidado, tendrn un efecto severo en el desempeo del mtodo y mucho de los resultados no funcionarn del todo. Estas etapas deben identificarse, usualmente como parte del desarrollo del mismo y si es posible evaluar su influencia en el desempeo del mtodo mediante el uso de pruebas de robustez. Esto involucra realizar variaciones deliberadas al mtodo y estudiar el subsecuente efecto en el desempeo. De esta manera es posible identificar las variables en el mtodo que tiene el efecto ms significativo y en base a ello controlarlas cuando se aplica el mtodo. Cuando se requiere mejorar el mtodo, las mejoras se pueden realizar sobre aquellas partes que se conocen como crticas. La robustez por lo general se evala durante el desarrollo del mtodo, comnmente por el laboratorio que lo origina antes de la colaboracin con otros laboratorios. Una tcnica establecida para la robustez se describe por AOAC(21). Las pruebas de robustez se aplican normalmente para investigar su efecto en la precisin y en la exactitud del mtodo.
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Pruebas de Robustez Referencia Rpida

Analizar Identificar las variables las cuales pueden tener un efecto significativo en el desempeo del mtodo. Establecer experimentos (analizando materiales de referencia, muestras de composicin conocida o material de referencia certificado) para monitorear el efecto en la exactitud y en la precisin del cambio sistemtico de las variables. No de veces Analizar una vez cada grupo de condiciones experimentales Calcular Determinar el efecto de cada cambio de las condiciones sobre la media Ordene las variables en orden del mayor al menor efecto en el desempeo del mtodo. Comentarios Designar el control de calidad para controlar las variables crticas. Concentrarse en estas variables para mejorar el mtodo.
Recuperacin (ver Anexo A para definiciones)
6.46 Los mtodos analticos no siempre miden todo el analito de inters presente en la muestra. Los analitos pueden estar presentes en una gran variedad de formas qumicas en las muestras, no todas ellas, de inters para el analista. El mtodo debe ser designado deliberadamente para determinar solo una forma particular del analito. Sin embargo una falla para determinar todo el analito puede ser el reflejo de un problema inherente en el mtodo. De cualquier forma, es necesario asegurar la eficiencia del mtodo al determinar todo el analito presente. 6.47 Debido a que no es usual conocer cuanto de un analito particular est presente en una porcin de prueba, es difcil estar seguros de que tan exitoso ha sido el mtodo al extraer el analito de la matriz. Una forma de determinar la eficiencia de la extraccin es adicionar porciones de prueba con el analito a varias concentraciones, despus se extraen las porciones fortificadas y se mide la concentracin del analito. El problema inherente es que el analito introducido de este modo no estar tan fuertemente unido como aquel que esta naturalmente presente en la porcin de prueba de la matriz y por consiguiente la tcnica dar una impresin alta irreal de la eficiencia de extraccin. Sin embargo, esta es la forma ms comn de determinar la eficiencia de recuperacin y es reconocido como una forma aceptable de hacerlo. Sin embargo los inconvenientes de la tcnica deben tenerse en cuenta.
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Alternativamente es posible realizar estudios de recuperacin de materiales de referencia, si estos se encuentran disponibles. Estos se han producido a travs de la caracterizacin de materiales naturales ms que por la caracterizacin de materiales sintticos donde el analito ha sido adicionado, de esta forma el estudio de recuperacin deber representar exactamente la extraccin de porciones de pruebas reales.
(f) Las herramientas de la validacin : 6.48 Blancos : Usar varios tipos de blancos permite asegurar que tanto de la seal medida se atribuye al analito y que tanto se debe a otras causas. Varios tipos de blanco estn disponibles al usuario. 6.48.1 Blancos reactivos: Los reactivos usado durante el proceso analtico ( incluyendo solventes usados para la extraccin y la disolucin) se analizan aisladamente con el fin de ver si contribuyen o no a la seal de medicin. La seal de medicin surge del analito que puede ser corregida.
Recuperaciones Referencia Rpida

Analizar
Blancos de matriz o muestras no fortificadas con el analito de inters en un intervalo de concentraciones
Repeti ciones
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Qu calcular de los datos?

Determinar la recuperacin del analito a varios niveles de concentracin. Recuperacin (%) =(C1-C2)/C3 X 100 Donde C1=concentracin determinada en la muestra fortificada C2=concentracin determinada en la muestra no fortificada C3=Concentracin de la fortificacin. Determine la recuperacin del analito relativa al valor certificado
Comentarios
Las muestras fortificadas debe ser comparadas con la misma muestra no fortificada para establecer la recuperacin de la fortificacin. La recuperacin de las muestras fortificadas o blancos de matriz usualmente ser mejores que en las muestras reales en las cuales el analito est ms enlazado a la matriz. Dependiendo de como el material de referencia certificado fue producido y caracterizado, es posible obtener un porcentaje de recuperacin >100 %.
Materiales de referencia certificados (MRC)
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6.48.2 Blancos de las muestras: Estas son esencialmente matrices sin analito. Son difciles de obtener pero son necesarios para obtener un estimado estadstico de las interferencias que pueden encontrarse en el anlisis de las muestras.
6.49 Muestras/ materiales de prueba: los materiales de prueba tomados de muestras reales son tiles debido a la informacin que proporcionan sobre las interferencias etc., las cuales pueden ser encontradas en la realidad con el trabajo diario. Si el contenido verdadero del analito de un material es conocido exactamente puede utilizarse para asignar la exactitud del mtodo. Sin embargo el contenido real del analito difcilmente se determina a menos que exista la posibilidad de usar otros mtodos los cuales se conoce que muestran un sesgo insignificante. 6.50 Materiales/ soluciones fortificadas: estos son materiales o soluciones que han sido fortificados con el (los) analito (s) de inters. La fortificacin se realiza por adicin (spiking). Estos materiales o soluciones contienen el analito de inters y se debe tener cuidado de adicionar niveles de concentracin total dentro del intervalo de aplicacin del mtodo. La fortificacin con una cantidad conocida del analito permite el incremento de la respuesta del instrumento proveniente del analito a ser medido y se calcula en trminos de la cantidad agregada (asumiendo 100% de recuperacin), a pesar de que no se conocen las cantidades absolutas del analito que estn presentes en la muestra antes y despus de la fortificacin. Observe que la mayora de los mtodos de fortificacin adicionan el analito de modo que no este tan unido a la matriz como si estuviera naturalmente presente. Se recomienda tener cuidado con las determinaciones de recuperacin obtenidas por fortificacin, tomando en cuenta las formas qumicas del analito a ser analizado, para que sean ptimas. 6.51. Materiales adicionados: Estos son similares a los materiales fortificados, de hecho en algunos casos los trminos son intercambiables. La adicin o el spiking no debe estar, necesariamente, restringido por el analito de inters. Puede incluir la adicin de cualquier analito con la finalidad de medir el efecto de la adicin. Por ejemplo la muestra puede ser adicionada con diferentes cantidades de una interferencia en particular para juzgar a que concentracin la determinacin del analito fue afectada. La naturaleza del analito adicionado (spike) debe ser identificada. 6.52. Materiales con inclusiones: Estos son materiales en los que el analito de inters esencialmente es ajeno, pero ha sido introducido a todo el material en algn punto previo a que el material sea muestreado. El analito consecuentemente est ms unido a la matriz que si se hubiera aadido por adicin (spiking). El valor del analito depender de las cantidades del analito en contacto con el material, la relacin de perdida y de captura por la naturaleza de la matriz y otras prdidas debida al metabolismo. El valor de la muestra con
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incurrencias para propsitos de calibracin depende de que tan bien el valor del analito pueda ser caracterizado. Los siguientes son ejemplos de materiales con inclusiones:
1. Herbicidas en harina de cereal rociado con herbicidas durante su crecimiento. 2. Promotores de crecimiento en carne derivados de la alimentacin del animal con alimentos que contienen promotores. 3. Ingredientes activos en formulaciones farmacuticas adicionadas en la etapa de formulacin.
6.53 Materiales caracterizados independientemente: es difcil determinar el sesgo de un mtodo sin conocer el contenido real del analito en el material de prueba. Si un material se ha caracterizado por otros medios, por ejemplo mediante un mtodo que se sabe que posee un sesgo despreciable, entonces este puede ser usado como un material de referencia, se puede realizar entonces una comparacin y asignar mediante un anlisis el sesgo del mtodo.
6.54 Patrones (Mediciones) : Cuando el trmino es usado para referirse a una sustancia usada para propsitos de calibracin o identificacin, es conveniente referirse a ellos como Materiales de referencia de medida o calibracin. Tradicionalmente se piensa que son soluciones de una sola sustancia, pero en la prctica puede ser cualquier material en el que un parmetro o propiedad particular se ha caracterizado al punto de que puede ser usado para propsitos de calibracin o de referencia. El trmino patrn incluye accesorios en lo cuales un amplio intervalo de parmetros fsicos pueden ser calibrados (e.g. termmetros calibrados por ejemplo). Estrictamente estos son patrones fsicos.* ______________
*Nota del traductor: En espaol el sentido Measurement Standard se utiliza el trmino patrn de medicin, mientras que para standard Methods se utiliza el trmino de normas. Dentro de los patrones de medicin se distinguen los materiales de referencia aquellos patrones de medicin que se consumen en cada medicin o que tienen caducidad. Los materiales de referencia certificados por el NIST se llaman SRM.
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6.55 Materiales de referencia. Es algo comn que se confunda el trmino materiales de referencia con materiales de referencia certificados(22) (ver Anexo A). Los materiales de referencia pueden ser virtualmente cualquier material tomado como base para referencia y puede incluir reactivos de laboratorio de pureza conocida, qumicos industriales u otros artefactos. La propiedad o el analito de inters debe ser estable y homogneo pero no necesita tener un alto grado de caracterizacin o trazabilidad y certificacin asociados a los materiales de referencia certificados. 6.56 Materiales de referencia certificados: la caracterizacin del parmetro de inters en un material de referencia certificado generalmente es controlada ms estrictamente que para un material de referencia, y adicionalmente el valor se certifica con una incertidumbre establecida por una institucin reconocida. La caracterizacin normalmente se realiza usando varios mtodos* para que, tanto como sea posible, cualquier sesgo en la caracterizacin se reduzca o se elimine. 6.57 Estadstica : Es til para el anlisis de la variabilidad inherente en las mediciones analticas. Los analistas deben familiarizarse, con al menos, los elementos ms bsicos en teora estadstica, tales como: la evaluacin de la exactitud, precisin, intervalo lineal, lmites de deteccin y cuantificacin y mediciones de la incertidumbre. Un amplio nmero de libros de introduccin a la estadstica para qumica analtica se listan en la bibliografa. 6.57.1 Replicacin : Propiamente usado da al analista ms informacin sobre la estadstica de una medicin en particular. Los experimentos que involucran anlisis de rplicas deben designarse para considerar todas las variaciones en condiciones de operacin las cuales pueden ser esperadas durante un uso rutinario del mtodo. El objetivo debe ser el de determinar la variacin tpica y no la variacin mnima. Utilizacin de mtodos validados 7.1 Cuando se usa el mtodo de alguien ms sea uno desarrollado dentro de un laboratorio, uno publicado o bien hasta un mtodo de regulacin o de referencia, se deben considerar dos aspectos. Primero : La validacin de los datos existentes es adecuadas para el propsito requerido o se necesita de una validacin posterior? y segundo, si los datos existentes son adecuados El laboratorio es capaz de alcanzar el nivel de desempeo que el mtodo requiere como posible?. En otras palabras El analista es suficientemente competente?, Son adecuadas las facilidades y el equipo est disponible?. Si el mtodo se ha validado mediante pruebas extensivas bajo todas las condiciones de operacin extremas, entonces un nuevo analista competente operar satisfactoriamente dentro de los datos de desempeo existentes aunque actualmente es ms relevante verificar el desempeo del analista contra lo que es requerido por la especificacin analtica preferentemente que contra los datos publicados
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existentes. Sin embargo, esto deber al menos verificarse. Esto es, el nivel de desempeo que el analista puede alcanzar con el mtodo es ms importante que la comparacin con el nivel de desempeo que los otros analistas han alcanzado en el pasado. 7.2 Usualmente, los mtodos de referencia se producen generalmente a partir de estudios de colaboracin y de grupos de referencia, frecuentemente estos ltimos tienen expertos en estadstica que ayudan a asegurar que los estudios de la validacin estn correctamente diseados, desempeados y evaluados. El nivel de validacin de los mtodos se est mejorando pero es peligroso asumir que nicamente por ser un mtodo de referencia se puede tomar por hecho que su validacin publicada ser adecuada. 7.3 Similarmente, es comn asumir que los mtodos de referencia pueden usarse sin prembulos para obtener inmediatamente datos de desempeo como los publicados cuando cualquier persona realiza el mtodo. Esta no es una afirmacin segura, pues an en el caso donde alguien familiarizado o experto en un campo de la qumica que abarca el mtodo necesitar practicar antes de convertirse en alguien competente. Esto se detallar a continuacin. 7.4 Cuando se usan mtodos validados (o cualquier mtodo) se recomienda que se sigan las siguientes reglas para asegurar que se alcanza un desempeo aceptable. 7.4.1 Inicialmente el analista por el mismo debe estar completamente familiarizado al nuevo mtodo antes de usarlo por primera vez. Idealmente el mtodo debe ser demostrado al analista por alguien experto en su uso. El analista entonces debe iniciar bajo supervisin cercana, trabajando con materiales de referencia o muestras de prctica. El nivel de supervisin disminuir hasta que el analista muestre que es suficientemente apto para hacerlo por el mismo. Por ejemplo la aptitud debe establecerse en trminos de la habilidad del analista para alcanzar los niveles de desempeo establecidos en el mtodo, tales como la repetibilidad, el lmite de deteccin, etc. Es tpico que alguien a ser entrenado para usar un nuevo mtodo y procedimientos de entrenamiento de un laboratorio se designe a mediciones objetivas en lugar de probar la aptitud a intervalos durante el entrenamiento. En cualquier caso, el analista deber haber ledo el mtodo y familiarizarse con la teora detrs de las mediciones, ensayando mentalmente las diferentes etapas, identificando los puntos donde se puede tomar un descanso y las partes del proceso donde el analista se deber comprometer a trabajar continuamente. Cundo se necesitan preparar los reactivos?, Qu tan estables son una vez preparados?, Necesitan prepararse con anticipacin ?. Una dificultad clsica consiste en pasar varias horas preparando un nmero de muestras. As mismo involucra una sntesis complicada el encontrar la preparacin del reactivo requerido para la siguiente etapa del trabajo. Mientras tanto las muestras se estn degradando...
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7.4.2 Segundo, se requiere de la evaluacin de cuntas muestras pueden ser manipuladas a un tiempo. Es mejor analizar pocas muestras pero bien, que tratar de analizar un gran nmero de muestras y tener que repetir la mayora de ellas. 7.4.3 Finalmente se debe asegurar que se tiene todo lo que se necesita antes de iniciar el trabajo. Esto involucra buscar en conjunto el tipo adecuado de equipo, los materiales de referencia y los reactivos (Con cualquier preparacin establecida) y quiz la reserva de espacio para equipos de extraccin etc. 7.5 Si es necesario adaptar o cambiar algn otro mtodo validado, la revalidacin ser necesaria. Dependiendo de su naturaleza, los cambios pueden hacer obsoleta la validacin original. 8. Utilizacin de datos de validacin para designar el control de calidad 8.1 El control de calidad y el aseguramiento de calidad (23) son trminos cuyo significado vara de acuerdo al contexto. En trminos prcticos el aseguramiento de calidad se refiere a todas las mediciones realizadas por el laboratorio para asegurar y regular la calidad, mientras que el control de calidad describe las mediciones individuales que se relacionan al monitoreo y control de operaciones analticas particulares. 8.2 La validacin de un mtodo da una idea de las capacidades de desempeo y las limitaciones del mtodo las cuales son experimentadas durante el uso rutinario cuando el mtodo se encuentra en control. Para uso cotidiano, los controles necesitan aplicarse al mtodo para verificar que contina bajo control, por ejemplo que se est desempeando de acuerdo a lo esperado. Durante la etapa de validacin el mtodo fue aplicado a un gran nmero de muestras de contenido conocido. Una vez que el mtodo se usa rutinariamente para muestras de contenido desconocido, es posible aplicar un control adecuado mediante la medicin de muestras de contenido conocido, de esta forma se permite al analista decidir cuando la gran variedad de respuestas obtenidas realmente reflejan la diversidad de las muestras analizadas o cuando los cambios inesperados e indeseados ocurren en el desempeo del mtodo. En la prctica estas muestras conocidas deben medirse con cada lote de muestras como parte del proceso del control de calidad.
8.3 La clase de revisiones hechas depender de su naturaleza, la frecuencia, lo crtico del anlisis, el tamao del lote, el grado de automatizacin, la dificultad de la prueba as como tambin las lecciones aprendidas durante el proceso de desarrollo y validacin. El control de calidad puede tomar una gran variedad de formas, tanto dentro del laboratorio (internamente) como entre laboratorios y otros laboratorios (externamente).
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8.4 Control de calidad interno: Este control incluye la utilizacin de: blancos, calibrantes qumicos, muestras adicionadas (con spike), muestras ciegas, replicado de anlisis y muestras de control de calidad(21). Se recomienda el uso de cartas de control particularmente para el monitoreo de los resultados de las muestras de control para el control de calidad. 8.5. Los tipos de control de calidad adoptados deben ser demostrados suficientemente para asegurar la validez de los resultados. Pueden usarse diferentes clases de control de calidad para monitorear diferentes tipos de variacin dentro del proceso. Las muestras de control de calidad analizadas a intervalos en un lote analtico indicar la desviacin o desplazamiento (drift) del sistema; el uso de varios tipos de blanco indicarn cuales son las contribuciones a la seal del instrumento de aquellas del analito, los anlisis por duplicado verificarn la repetibilidad. 8.6 Las muestras de control de calidad son muestras tpicas las cuales en un periodo de tiempo son suficientemente estables y homogneas para dar el mismo resultado ( sujetas a variaciones aleatorias en el desempeo del mtodo analtico) as como tambin se dispondr de suficiente cantidad de muestra para realizar suficientes rplicas. Sobre este periodo de tiempo la variacin aleatoria en el desempeo del mtodo analtico puede ser monitoreado a travs de monitorear la muestra de control de calidad, por lo general se utiliza una carta de control. (25-26) Se establecen lmites en la carta (convencionalmente lmites de control colocados a 2 (2s) del valor de la media y lmites de accin se colocan a 3 (3s) del valor de la media. Ver el Anexo A, A28 para la informacin sobre y s). Una vez graficados los valores de control de calidad con los lmites asignados segn las reglas existentes, podr observarse si el control de calidad es satisfactorio. Mientras que el valor para la muestra de control sea aceptable es probable que los resultados que se encuentren en el mismo lote que esta muestra sean considerados como confiables. La aceptabilidad del valor obtenido con la muestra de control de calidad se deber verificar desde el inicio del proceso analtico para que en el caso de un problema solo se invierta un poco de tiempo en lugar de desperdiciar tiempo en anlisis poco confiables de las muestras.
8.7 Con el fin de establecer lmites reales en las cartas de control, los clculos iniciales de la media y de la desviacin estndar deben reflejar la forma en que el mtodo pretende usarse diariamente. De este modo las lecturas deben imitar todas la posible variaciones en las condiciones de operacin: diferente analista, variaciones en la temperatura del laboratorio, etc. Si no se hace esto, la desviacin estndar ser irrealmente pequea, resultando en lmites en la carta que no sern posibles de obtener en el uso normal.
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8.8 El uso de varios tipos de blanco permite al analista asegurar que los clculos hechos para el analito pueden corregirse para remover cualquier contribucin de la respuesta que no se le atribuya al analito. 8.9 Las rplicas de anlisis proporcionan un medio de verificar los cambios en la precisin del proceso analtico, los cuales podran afectar el resultado de forma adversa. Las replicas pueden estar anexas al lote (para verificar la repetibilidad) o pueden analizarse aleatoriamente (para verificar el desplazamiento). 8.10 Los anlisis ciegos son una forma efectiva de realizar anlisis repetidos y proporcionan una ruta para verificar la precisin. Consiste en analizar porciones de prueba por duplicado dentro de un lote analtico, dadas posiblemente por el laboratorio supervisor. Se llaman de esta forma debida a que el analista no esta advertido de la identidad de las porciones de prueba o que son rplicas, por lo que de esta forma el analista no tendr ideas preconcebidas acerca de resultados particulares con los que la muestra pueda estar relacionada. 8.11 Los calibrantes qumicos y los materiales de referencia situados en intervalos dentro de un lote analtico permiten verificar que la respuesta del analito durante el proceso analtico es estable. 8.12 Es responsabilidad de la gerencia del laboratorio establecer y justificar un nivel apropiado de control de calidad basado sobre una evaluacin de riesgo, tomando en consideracin la confiablidad del mtodo, lo crtico del trabajo y la facilidad en repetir el anlisis si no se trabaja adecuadamente la primera vez. Es ampliamente aceptado que para un anlisis de rutina, un nivel de control de calidad interno del 5% es razonable, por ejemplo por cada 20 muestras analizadas deber existir una muestra de control, sin embargo para mtodos de rutina robustos con un gran nmero de muestras un nivel menor de muestras de control puede ser razonable. Para procedimientos ms complejos un nivel del 20% no es usual y en ocasiones hasta el 50% puede requerirse. Para anlisis poco frecuentes un sistema de validacin completo debe realizar en cada ocasin. Esto puede involucrar el uso de materiales de referencia que contengan una cantidad certificada o conocida del analito, seguida de rplicas de anlisis de la muestra y la muestra con adicin de material de referencia (spike) (una muestra con una cantidad conocida del analito que intencionalmente se ha agregado). Aquellos anlisis realizados con frecuencia debern ser objeto de procedimientos sistemticos de control de calidad incorporando el uso de cartas de control de calidad o muestras de control. 8.13 Control de calidad Externo: Pruebas de Aptitud Las pruebas de aptitud tcnica (conocidas tambin como evaluaciones de calidad externa). Una forma reconocida por un laboratorio para monitorear su desempeo contra sus requisitos propios y contra la norma de laboratorios similares es mediante la participacin peridica en esquemas de pruebas de aptitud. Estas pruebas ayudan a resaltar el desempeo de la reproducibildad
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entre los laboratorios y entre los errores sistemticos, por ejemplo el sesgo. Tambin pueden usarse para determinar la repetibilidad aunque tambin puede verificarse de manera efectiva usando controles internos. Las pruebas de aptitud y otros tipos de intercomparacin se aceptan como medios importantes de monitoreo de la trazabilidad a niveles nacionales e internacionales. Los grupos de acreditacin reconocen el beneficio de estos esquemas y alientan a los laboratorios para que participen en pruebas de aptitud como parte integral de sus protocolos de aseguramiento de calidad. Es importante monitorear los resultados de estas pruebas como una forma de verificar el aseguramiento de calidad y tomar las acciones necesarias. En ciertos casos los grupos de acreditacin pueden especificar la participacin en un esquema de prueba de aptitud en particular como un requisito de acreditacin. El valor de las pruebas es tan bueno como los esquemas mismos. A menudo puede que no existan esquemas disponibles que sean relevantes a los tipos de anlisis que el laboratorio desea verificar, especialmente si se est trabajando aisladamente.
9. Documentacin de los mtodos validados 9.1 Una vez que el proceso de validacin est completo es importante documentar los procedimientos para que el mtodo pueda ser implementado claramente y sin ambigedades. Existe un gran nmero de razones para hacerlo, las diversas evaluaciones del mtodo realizadas durante el proceso de validacin asumen que cuando se use el mtodo ser usado de la misma forma cada vez. De no ser as, el desempeo actual del mtodo no corresponder a aquel predicho por la validacin de los datos. De esta forma, la documentacin debe limitar su visin de introducir variaciones accidentales al mtodo. Adems la documentacin adecuada es necesaria para propsitos de auditora y de evaluacin y puede requerirse para propsitos contractuales o regulatorios. 9.2 La documentacin apropiada del mtodo ayudar a asegurar la aplicacin del mtodo de manera constante cada vez que se use. 9.3 Puesto que la calidad de documentacin de un mtodo tiene un efecto directo en que tan consistentemente puede aplicarse, en consecuencia, tiene tambin efecto en la reproducibilidad y con la estimacin de la incertidumbre asociada a ella. De hecho la contribucin de la incertidumbre asociada con mtodos documentados inapropiadamente puede ser tan grande que haga que el mtodo se invalide. Cualquier anomala en la documentacin se debe resolver antes de obtener un estimado propio de la incertidumbre que puede obtenerse. 9.4 No es sencillo documentar un mtodo apropiadamente. La informacin debe aparecer en un orden de acuerdo a lo que el usuario espera que necesitar. Un fallo comn es asumir que cualquiera entender la mecnica del mtodo de la misma forma que una persona que ha desarrollado y documentado el mtodo. Esta afirmacin de conocimientos puede ser peligroso. Una forma til de probar
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si la documentacin es para un colega de trabajo competente es la forma descrita anteriormente. Si el mtodo corresponde a su intencin entonces deber ser establecido para el uso de una gran variedad de analistas y para entregar resultados constantes, pero si este no es el caso se requerir de un reajuste para describir los procedimientos mas detalladamente y reducir la ambigedad. 9.5 Varias normas de referencia proporcionan una gua de que clase de informacin debe incluirse cuando se documenta un mtodo. Desde el punto de vista qumico probablemente las ms tiles son las series ISO 78 las cuales describen la documentacin para diferentes tipos de mtodos de anlisis qumicos (los grupos de regulacin producen, validan y documentan un gran nmero de mtodos cada ao produciendo estos estndares para el beneficio de sus propios comits). ISO 78/2(27) aconseja el mtodo de documentacin para mtodos qumicos generales. Un diagrama basada en esta norma se incluye en el anexo B. la norma indica un orden lgico del material con encabezados recomendados y sugiere la clase de informacin que debe aparecer en cada encabezado. Cuando se utilicen estas normas el lector deber notar la necesidad de ser flexibles para que haya la consistencia. Mientras que es deseable que todos los mtodos deban tener el mismo formato de documentacin, tambin ser reconocido que no todos los mtodos garantizan el mismo grado de detalle y frecuentemente ser apropiado omitir algunas de las secciones recomendadas de la documentacin. 9.6 Un laboratorio que documenta sus propios mtodos puede verse beneficiado al desarrollar su propio estilo. As como tambin al presentar informacin relevante de un modo lgico y sencillo, esto tambin permite que un mtodo de escritura complicada pueda difundirse a diversos autores. El esquema generado por varios autores puede ser revisado por su consistencia utilizando una solo autoridad de revisin. 9.7 Los mtodos documentados forman una parte importante del sistema de calidad de un laboratorio y deben ser objeto de un grado de control de documentacin apropiado. El propsito de esto es de asegurar que solo los mtodos y procedimientos que han sido autorizados como convenientes para su uso son de hecho utilizados. Por lo tanto como parte del proceso de documentacin se debe elaborar la informacin que permita al usuario juzgar en que momento el mtodo se ha autorizado para su uso y cuando est completo. Otra clase de informacin que debe estar disponible es la concerniente al nmero de versin y fecha del mtodo, el autor, cuntas copias existen y las restricciones del copiado. 9.8 Con el tiempo los mtodos requerirn actualizacin. Por ejemplo, la tecnologa que sostiene el procedimiento puede haber sido mejorada pero su documentacin necesita arreglos. El control de la documentacin permite un fcil retiro de los mtodos obsoletos y la edicin de mtodos revisados. En estos das el proceso de control de documentacin es ampliamente simplificado
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usando un procesador de palabras. Los cambios pueden realizarse solo si se autoriza. Esto puede verse controlado en el procesamiento de palabras donde los archivos relevantes pueden difundirse con acceso de lectura nicamente y limitar el acceso a la escritura.
10. Implicaciones de la validacin de los datos para calcular resultados y para realizar informes. 10.1 Es importante que el analista sea capaz de interpretar los datos generados durante el anlisis de las muestras al usar un mtodo validado, en respuestas que se relacionen directamente con los problemas del cliente. Las caractersticas del desempeo establecidas durante el proceso de validacin ayuda a hacer esto. Los datos de precisin para la repetibilidad y para la reproducibilidad pueden usarse para establecer si las diferencias encontradas durante el anlisis son significativas. Los controles de calidad basados en la validacin de los datos pueden usarse para confirmar que el mtodo esta bajo control y que se estn produciendo resultados significativos. La estimacin de la incertidumbre de las mediciones est asociada con el desempeo del mtodo y permite la expresin del resultado en un intervalo de valores en los cuales el valor verdadero de la medicin puede decirse que se encuentra en un nivel de confianza aceptado. 10.2 Es importante que el analista tenga acceso a los datos de validacin que pueden usarse para apoyar la validez de los resultados. Aunque esta informacin sea proporcionada o no al cliente. Muy a menudo el cliente no tiene las habilidades tcnicas para apreciar el significado de los datos, en tales circunstancias quiz sea ms seguro dar los datos a solicitud. 10.3 Los mtodos de validacin, la variabilidad y la incertidumbre de medicin necesitan tratarse cuidadosamente en ciertas circunstancias, por ejemplo en contextos legales o forenses. Puede ser mejor estar abierto a la existencia de incertidumbre aunada a la medicin y estar preparados para justificar las mediciones hechas bajo el amparo de que se conoce una incertidumbre. 10.4 Se debe tener cuidado cuando se trata de usar un resultado analtico con su incertidumbre inherente para tratar de decidir cuando la consigna original a partir de la cual la muestra fue tomada, cumple o no con la especificacin o el lmite. Tales decisiones pueden no ser responsabilidad del analista. Sin embargo el analista puede necesitar proporcionar un consejo tcnico para asistir en el proceso de toma de decisiones. 10.5 Cuando se reportan los resultados el analista debe decidir cuando se debe corregir por cualquier sesgo que haya sido afectado o cuando informar resultados sin correcciones pero con el conocimiento de la existencia de un sesgo.
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10.6 Se debe tener cuidado cuando se reportan resultados como no detectados. Este enunciado en si no proporciona informacin y debe ser acompaado de una explicacin de lo que es el lmite de deteccin en esa instancia. Algunas veces es apropiado informar un valor numrico a pesar de que este puede estar por debajo del lmite de deteccin. 10.7 Como se ha explicado mucha de la informacin requerida para evaluar la incertidumbre se obtiene a partir del proceso de validacin. Se asume que antes de que el mtodo sea usado sobre muestras desconocidas, el laboratorio debe demostrar que puede alcanzar los parmetros de desempeo establecidos en el mtodo, que tiene datos de control de calidad satisfactorios y que posee resultados satisfactorios de los materiales de referencia. En cada caso los factores extras que se necesiten tomarse en cuenta en la evaluacin de la incertidumbre del resultado de una medicin de muestra desconocida son cualquier diferencia de la composicin en la matriz y de la muestra usada en la validacin de un mtodo. Esto debe incluir diferencias que afectarn en la recuperacin del analito o la produccin de interferencias que afectarn el resultado de la medicin. 10.8 Cuando se requiere declarar la incertidumbre con los resultados es conveniente citar una incertidumbre expandida aplicando un factor de cobertura apropiado. Por ejemplo un factor de 2, se aproxima a un nivel de confianza del 95%.
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11.
Referencias y Bibliografa (a) Referencias citadas en el texto
1.
The Managers Guide to VAM, UK Department of Trade and Industry, Valid Analytical Measurement Programme Characterisation and Validation of Test Methods, J.S. Morkowski, paper presented at the EUROLAB Symposium, Berlin, 5-7 June 1996. Guidelines for Collaborative Study - Procedures to Validate Characteristics of a Method of analysis, AOAC International, revised May 1994, originally published J. Assoc. Off. Anal. Chem. 72, 694-704 (1989). Note 3, 4, & 6 are effectively the same text but differ slightly editorially.
2.
3.
4.
Harmonised Protocols for the Adoption of Standardised Analytical Methods and for the presentation of their Performance Characteristics, (IUPAC), Pure & Appl. Chem., 1990, 62(1), pp. 149-162. Pocklington, W.D., Guidelines for the development of standard methods by collaborative trial, LGC, 5th Edition, 1990. ISBN 0 948926 03 1. Protocol for the Design, Conduct and Interpretation of Method-Performance Studies, (IUPAC), Pure & Appl. Chem., 1995, 67(2), pp. 331-343. ASTM E 1060 - 85: Standard Practice Spectrochemical Methods of Analysis. for Interlaboratory Testing of
5.
6.
7.
8. 9.
UK Drinking Water Inspectorate (DWI) Information Letter 8/93. AOAC Peer Verified Methods Program - Manual on policies and procedures, AOAC International, Arlington VA 22201-3301, USA International Conference on Harmonisation, Draft Guideline on Validation of Analytical Procedures: Definitions and Terminology, Federal Register, Volume 60, pp.11260, March 1 1995. ISO 11843-1:1997. Capability of detection - Part 1 Terms and definitions. Nomenclature in evaluation of analytical methods, including detection and quantification capabilities (IUPAC Recommendations 1995). Pure & appl. Chem., 1995, 67, 1699 - 1723. Detection in analytical Chemistry - Importance, Theory, and Practice. L. A. Currie, ACS Symposium Series 361, American Chemical Society, Washington, DC 1988. Various chapters are recommended, particularly Ch4 (Kirchmer
49
10.
11. 12.
13.
Gua EURACHEM
C.J.) and Ch 16 (Kurtz D.A. et al.). 14. Analytical Methods Committee, Recommendations for the Definition, Estimation and Use of the Detection Limit, The Analyst, 1987, 112, 199-204. Sahai, H., Singh, R.P., The Use of R2 as a Measure of Goodness of Fit: An Overview, Virginia Journal of Science, 1989, 40(1), 5-9. Analytical Methods Committee, Uses (Proper and Improper) of Correlation Coefficients, The Analyst, 1988, 113, 1469-1471. Miller, J.N., Basic Statistical Methods for Analytical Chemistry Part 2. Calibration and Regression Methods, A Review, The Analyst, 1991, 116, 3-14. ISO/IEC (with BIPM, IFCC, IUPAC, IUPAP, OIML): Guide to the expression of uncertainty in measurement, 1993. ISBN 92 67 10188 9. Quantifying Uncertainty in Analytical Measurement, 1st Ed, 1995, EURACHEM Ellison, S.L.R., Williams, A., Measurement Uncertainty: the Key to the Use of Recovery Factors?, from The Use of Recovery Factors in Trace Analysis, edited by Parkany, M., pub. Royal Society of Chemistry, 1996. ISBN:0-85404736-0. Youden, W. J., and Steiner, E. H., "Statistical Manual of the AOAC", Association of Official Analytical Chemists, 1975. ISO/IEC Guide 30:1992. reference materials. Terms and definitions used in conjunction with
15.
16.
17.
18.
19. 20.
21.
22
23. 24.
ISO 8402:1994. Quality - Vocabulary . Harmonised guidelines for internal quality control in analytical chemistry laboratories, (IUPAC), Pure & Appl. Chem., 1995, 67(4), pp.649-666, ISO 7870:1993. Control charts - General guide and introduction. British Standard BS 5700:1984, + AMD 5480:1987. "Guide to process control using quality control chart methods and cusum techniques". (complements BS 5701:1980 and BS 5703:1980). ISO 78-2:1982. Layouts for standards - Part 2: Standard for chemical analysis (under revision).
25. 26.
27.
50
Gua EURACHEM
(b) Bibliografa relacionada al desarrollo y validacin del mtodo en sectores especficos. Sector A Manual on Analytical Quality Control for the Water Anlisis de agua en el Industry, NS30, Water Research Centre, UK, 1989, ISBN ambiente. 0 902156 85 3 AOAC International Program. AOAC Peer-verified Methods Anlisis de comida
ASTM D 2777 - 86: Standard Practice for Determination Anlisis ambiental, of Precision and Bias of Applicable Methods of Committee precisin, sesgo. D-19 on Water. Codex Alimentarius Commission on Methods of Analysis Anlisis de comida and Sampling (CX/MAS 95/3; 1995); Criteria for evaluating acceptable methods of analysis for Codex purposes. Green, J.M., A Practical guide to Analytical Method Farmacuticos Validation, Analytical Chemistry News & Features, 1/5/96, pp305A - 309A. Guideline for Submitting Samples and Analytical Data for Farmacuticos Methods Validation, Food and Drug Administration, 1987. Reviewer Guidance, Validation of Chromatographic Farmacuticos Methods, Center for Drug Evaluation and Research, Food and Drug Administration, 1994. ICH Topic Q2 Validation of Analytical Methods, The Farmacuticos European Agency for the Evaluation of Medicinal Products: ICH Topic Q 2 A - Definitions and Terminology (CPMP/ICH/381/95) ICH Topic Q 2 B - Methodology (CPMP/ICH/281/95) USA - Environment Protection Agency - Report on General QA Anlisis ambiental Minimum Criteria to Assure Data Quality, July 1989. Validation of methods for the analysis of soils from Anlisis ambiental potential contaminated land. Recommendations of the Working group on Soil Analysis, UK Department of the Environment
51
Gua EURACHEM
(c) Otras referencias y bilbiografa Relevancia Analytical Methods Committee, Uncertainty of measurement: Implications of its use in analytical science, The Analyst, 1995, 120, 2303-2308. Association of Public Analysts, "A Protocol for Analytical Quality Assurance in Public Analysts' Laboratories", APA, London, 1986. ASTM C-26 Proposal P 207. Proposed Terminology Relating to Precision and Bias Statements in Test Method Standards.
Incertidumbre de la Medicin
General QA
Terminologa, precisin, sesgo
ASTM C 1009 - 83: Standard guide for Establishing a General QA Quality Assurance Program for Analytical Chemistry Laboratories Within the Nuclear Industry. ASTM D 4210 - 89: Standard Practice for Intra laboratory Control de calidad Quality Control Procedures and a Discussion on reporting (CC) Low-level Data. ASTM D 4621 - 92b: Standard Guide for Accountability QA, CC and Quality Control in the Coal Analysis Laboratory. ASTM D 4697 - 87: Standard Guide for Maintaining Test QA, CC Methods in the User's Laboratory. ASTM E 1212 - 92: Standard Practice for Establishment General QA, CC and Maintenance of Quality Control Systems for nondestructive Testing Agencies. ASTM E 882 - 87: Standard Guide for Accountability and CC Quality Control in the Chemical Analysis Laboratory. BS 4778:Part 2:1991. Quality vocabulary, part 2 - Quality Terminologa concepts and related definitions. Caulcutt, R., Boddy, R., Statistics for Analytical Chemists, Chapman and Hall, London, 1991.
Estadstica
Compendium of Chemical Technology (IUPAC Terminologa Recommendations), Blackwell Scientific, 1987, ISBN 0632-01767-8.
52
Gua EURACHEM
Dell, D., Views on method validation, Methodol. Surv. Validacin del mtodo. Biochem. Anal., 1990, Vol. 20, pp. 9-22. Dietrich, C. F., Uncertainty, calibration and probability, 2nd edition 1991, Adam Hilger, London. Dux, J. P., "Handbook of Quality Assurance for the Analytical Chemistry Laboratory", Van Nostrand Reinhold, New York, 1986.
Incertidumbre de la Medicin General QA
Relevancia EAL-G4 - Accreditation for Chemical Laboratories Guidance on the interpretation of the EN 45000 series of Standards and ISO/IEC Guide 25, edition 1, 4/93 (originally EURACHEM/ WELAC GD1/WGD2). Estimating uncertainties in testing - A guide to estimating and reporting uncertainties of measurement in testing 1st edition, October 1994 - British Measurement and Testing Association (BMTA). Garfield, F. M., "Quality Assurance Principles for Analytical Laboratories", Association of Official Analytical Chemists", Arlington VA, 1992.
General QA
General QA
General Guidelines for use with a Protocol for Quality General QA Assurance of Trace Analysis (2nd draft), UK DTI VAM Programme. Gnzler, H., Accreditation and Quality Assurance in Analytical Chemistry, Pub. Springer Verlag, 1994. ISBN 3-540-60103-1. ISO VIM (International vocabulary of basic and general terms in metrology), 2nd edition, 1993. ISO 3534-1:1993. Statistics - Vocabulary and symbols Part 1: Probability and general statistical terms. ISO 3534-2:1993. Statistics - Vocabulary and symbols Part 2: Statistical quality control. ISO 3534-3:1985. Statistics - Vocabulary and symbols Part 3: Design of experiments.
General QA incluyendo captulo en la validacin de los mtodos. Terminologa
Estadstica, terminologa Estadstica, terminologa Estadstica, terminologa
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ISO 5725-1:1994. Accuracy (trueness and precision) of measure-ment methods and results - Part 1. General principles and definitions. ISO 5725-2:1994. Accuracy (trueness and precision) of measure-ment methods and results - Part 2. Basic methods for the determination of repeatability and reproducibility of a standard measurement method. ISO 5725-3:1994. Accuracy (trueness and precision) of measure-ment methods and results - Part 3. Intermediate measures of the precision of a standard measurement method. ISO 5725-4:1994. Accuracy (trueness and precision) of measure-ment methods and results - Part 4. Basic methods for the determination of the trueness of a standard measurement method.
Terminologa, exactitud
Exactitud
Exactitud
Exactitud
ISO 5725-6:1994. Accuracy (trueness and precision) of Exactitud measure-ment methods and results - Use in practice of accuracy values. ISO 7873:1993. Control charts for arithmetic average with warning limits. ISO 7966:1993. Acceptance control charts. ISO 8258:1991. Shewhart control charts.
Estadstica, CC
Estadstica, CC Estadstica, CC
ISO/CD 5725-5. Accuracy (trueness and precision) of Exactitud measurement methods and results - Part 5. Alternative methods for the determination of the precision of a standard measurement method. Relevancia ISO/DIS 11095 (April 1993). Linear calibration using reference materials. ISO/IEC Guide 2:1991. General terms and their definitions concerning standardisation and related activities.
Materiales de referencia y para calibracin, Terminologa
ISO/IEC Guide 32 (in preparation). Calibration of chemical Materiales de referencia y para analyses and use of certified reference materials.
calibracin
ISO/IEC Guide 33:1989.
Uses of certified reference Materiales de

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materials.
Referencia
ISO/TAG4/WG3:1993. Guide to the Expression of Incertidumbre de la Medicin Uncertainty in Measurement. Kateman, G., Buydens, L., Quality Control in Analytical Chemistry, J Wiley & Sons, 1991. Mesley, R. J., Pocklington, W. D., Walker R. F., "Analytical Quality Assurance - A Review", Analyst, 1991, 116 (10), 975-1092. Miller, J. C., and Miller, J. N., "Statistics for Analytical Chemistry", Ellis Horwood, Chichester, 1988. Murdoch, J., "Control Charts", Macmillan 1979. NATA - Technical Note #17 - Requirements for the Format and Content of Test Methods and Recommended Procedures for the Validation of Test Methods. Nomenclature for the Presentation of Results of chemical analysis (IUPAC Recommendations 1994), Pure & Appl. Chem., 1994, 66(3), pp. 595-608,.
General QA, CC
General QA
Estadstica
Estadstica, CC Documentacin de mtodos, validacin general de mtodos Terminologa, Estadstica
Parkany, M., Quality Assurance for Analytical General QA Laboratories. Special publication 130, Royal Society of Chemistry, UK. ISBN 0-85186-705-7 Prichard, E., Quality in the Analytical Chemistry Laboratory, ACOL, Wiley. Taylor, B. N., Kuyatt, C. E., Guidelines for evaluating and expressing uncertainty in NIST measurement results, NIST technical note 1297, 1994, National Institute of Standards and Technology. Taylor, J. K., "Quality Assurance of Chemical Measurements", Lewis Publishers, Michigan, 1987. ISBN 0-87371-097-5 Validation of test methods - General principles and concepts (sic), Committee paper EAL/GA(96)58, European Accreditation of Laboratories, Oct. 1996 WECC Document 19 1990.
General QA
General QA
Validacin mtodo
del
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ANEXO A- Definiciones Contenido A1 Exactitud ... de un instrumento de medicin A2 Sesgo A3 Curva de Calibracin A4. Reactividad cruzada A5 Discriminacin ... Umbral A6 Error ... de medicin Aleatorio Sistemtico A7 Falsos Negativos/Positivos A8 El ajuste al propsito A27 Sensibilidad A9 Media limitante A28 Especificidad A10 Lmite de Deteccin Concentracin neta detectable Lmite de Decisin Lmite de Determinacin A11 Lmite de Cuantificacin Lmite reportable A12 Linealidad A13 Mensurando A14 Medicin ... Procedimiento Mtodo de ... A15 Precisin Intremedia A16 Prueba de aptitud A17 Calidad ... Aseguramiento ... Control Control de calidad interno A18 Intervalo de medicin y de trabajo A19 Recuperacin 56 mnima A29 Desviacin Estndar A30 Trazabilidad A20 Material de referencia Certificado... A21 Repetibilidad ... de los Resultados de las Mediciones ..De un instrumento de medicin .. Desviacin Estndar .. Lmite r A22 Reproducibilidad ...Desviacin estndar ...Lmite R A23 Tiempo de respuesta A24 Resultado de una medicin A25 Pruebas de Robustez A26 Selectividad ... en anlisis
A31 Veracidad A32 Incertidumbre (de las mediciones) Incertidumbre Estndar Incertidumbre Estndar Combinada Incertidumbre Expandida
Factor de cobertura
A33 Validacin Mtodo... A34 Valor De Referencia Aceptado Verdadero Verdadero convencional A35 Verificacin
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A1
Exactitud Es la proximidad de concordancia entre el resultado de una medicin y el resultado del valor de referencia aceptado. Nota: El trmino exactitud cuando se aplica a un grupo de resultados de prueba, involucra la combinacin de componentes aleatorios y errores sistemticos comunes o componentes del sesgo. [ISO 3534-1] La cantidad referida a las diferencias entre la media de un grupo de resultados o un resultado individual y el valor el cual se acepta como el valor verdadero o correcto para la cantidad medida. [IUPAC Compendium of Chemical Technology, 1985]
A1.1 Exactitud (de un Instrumento de Medicin) Aptitud de un instrumento de medicin para dar respuestas cercanas al valor verdadero. Nota: A2 Sesgo: El valor esperado de los resultados de prueba y el valor de referencia aceptado. Note: El sesgo es un error total sistemtico en contraste con el error aleatorio. Puede existir uno o ms componentes del error sistemtico que contribuyen al sesgo. Una mayor diferencia sistemtica con respecto del valor de referencia aceptado es reflejada por un valor de sesgo ms grande. [ISO 3534-1] Caracteriza el error sistemtico en un procedimiento analtico dado y es la desviacin (positiva o negativa) de la media de los resultados analticos del valor verdadero (conocido o asumido). [IUPAC Compendium of Chemical Technology, 1985] La diferencia entre la media limitante () y el valor verdadero (); i.e., = - . [IUPAC Orange Book] A3 Curva de Calibracin: En este contexto la exactitud es un concepto cualitativo. [IUPAC Orange Book]
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Representacin grfica de la seal de medicin con una funcin de la cantidad del analito. [AOAC - PVMC] A4 Reactividad cruzada: Respuesta (del mtodo) a anlogos, metabolitos, u otros componentes no requeridos que pueden estar presentes en la matriz (ces). [AOAC - PVMC] A5 Discriminacin La habilidad de un instrumento de medicin para responder a pequeos cambios en el valor del estmulo o seal de entrada. [VIM 1984] A5.1 Umbral de discriminacin: El cambio ms pequeo en un estmulo o seal de entrada que produce un cambio perceptible en la respuesta de un instrumento de medicin. Nota: El umbral de discriminacin puede depender de, por ejemplo, el ruido (interno o externo), la friccin, la humedad, la inercia, etc. [VIM 1984] A6 Error (de Medicin): El resultado de una medicin menos un valor verdadero del mensurando.
Nota: Puesto que no puede ser determinado un valor verdadero, en la prctica se utiliza el valor convencionalmente verdadero.
[VIM 1993] El valor de un resultado menos el valor verdadero. [IUPAC Compendium of Chemical Technology, 1985] A6.1 Error Aleatorio: Resultado de una medicin menos la media que resultar de un nmero infinito de mediciones del mismo mensurando realizadas bajo condiciones de repetibilidad. Nota: El error aleatorio es igual al error menos el error sistemtico. Debido a que solo se puede realizar un nmero finito de mediciones, es posible determinar solo un estimado del error aleatorio. [VIM 1993]
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La diferencia entre el valor observado (xi) y la media limitante (); i.e. = xi - . [IUPAC Orange Book] A6.2 Error Sistemtico: Media que resultara de un nmero infinito de mediciones del mismo mensurando llevadas a cabo bajo condiciones de repetibilidad menos un valor verdadero del mensurando. Nota: El error sistemtico es igual al error menos el error aleatorio. De forma parecida, el valor verdadero, el error sistemtico y sus causas no pueden ser conocidas. [VIM 1993] A7 Falsos Negativos / Positivos: Para mtodos cualitativos la relacin de los falsos positivos/negativos puede ser determinada. Los datos de un mtodo de comparacin confirmatorio debern proporcionarse si tal mtodo(s) se aplica a la(s) misma (s) matriz (ces) e intervalo(s) de concentracin. En la ausencia de un mtodo de comparacin, poblaciones de muestras fortificadas negativas y positivas deben ser analizadas. Los falsos positivos/negativos pueden determinarse de la siguiente forma : Relacin de falsos positivos (%) = falsos positivos X 100/Negativos totales conocidos Relacin de falsos negativos (%) = falsos negativos X 100/Positivos totales conocidos [AOAC Research Institute - Performance tested Methods Programme, Procedure] A8 Adecuacin al propsito: Grado al cual los datos producidos por un proceso de medicin permiten al usuario el realizar decisiones correctas tcnica y administrativamente para un propsito establecido. [IUPAC Orange Book] A9 Media limitante: El valor asinttico o media poblacional de la distribucin que caracteriza la cantidad medida; el valor que es alcanzado mientras el nmero de observaciones se aproxima al infinito. [IUPAC Orange Book]
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A10
Limite de Deteccin: El menor contenido que puede ser medido con una certeza estadstica razonable. [AOAC - PVMC] La menor concentracin del analito en una muestra que puede detectarse, pero no necesariamente cuantificarse bajo las condiciones establecidas de la prueba. [NATA Tech Note#13] El lmite de deteccin, expresado como concentracin cL, o como cantidad qL, se deriva de la medicin ms pequea xL, que puede ser detectada con certeza razonable para un procedimiento analtico dado. El valor de xL est dado por la ecuacin: xL = xbl + ksbl donde xbl es la media de las mediciones del blanco y sbl la desviacin estndar de las mediciones del blanco, y k es un factor numrico elegido de acuerdo al nivel de confianza deseado. [IUPAC Compendium of Chemical Technology, 1985] Tambin puede conocerse como Concentracin neta mnima detectable, o Lmite de Determinacin /Limite de Decisin, las cuales se definen como: La concentracin neta verdadera o la cantidad del analito en el material a analizarse la cual llevar con una probabilidad de (1-), a la conclusin de que sobre la concentracin del analito en el material analizado es mayor que la del blanco matriz. [ ISO/DIS 11843-1] y El menor contenido de analito, si est presente, que ser detectado y que puede ser identificado. [AOAC - PVMC] Este tema es tratado con gran detalle por IUPAC [12].
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A11
Lmite de Cuantificacin: (El contenido) igual o mayor que el menor punto de concentracin en la curva de calibracin. [AOAC - PVMC] Tambin se conoce como Lmite Reportado: La menor concentracin de un analito que puede ser determinada con una precisin aceptable (repetibilidad) y exactitud bajo las condiciones establecidas de la prueba. [NATA Tech Note #13] Conocida tambin como Lmite de Cuantificacin: Los lmites de Cuantificacin son caractersticas del desempeo que marcan la habilidad de un proceso de medicin analtica para cuantificar adecuadamente un analito. Nota: La habilidad para cuantificar se expresa generalmente en trminos de la seal valor(verdadero) del analito que producir estimados teniendo desviacin estndar relativa (RSD) especificada, comnmente del 10%. As: LQ = kQ Q
Donde LQ es el Lmite de Cuantificacin, Q es la desviacin estndar en ese punto, y kQ es el multiplicador cuyos recprocos igualan la RSD seleccionada y cuantificada. . La IUPAC da un valor para kQ de 10, en falta de mejores aproximaciones. [IUPAC Orange Book] A12 Linealidad: Define la habilidad del mtodo para obtener resultados de la prueba proporcionales a la concentracin del analito. Nota: Se infiere que el intervalo lineal es el intervalo de concentraciones del analito sobre las cuales el mtodo da resultados de pruebas proporcionales a la concentracin del analito. [AOAC - PVMC]
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A13
Mensurando: Magnitud particular sujeta a medicin. Nota: La especificacin de un mensurando puede requerir indicaciones acerca de magnitudes tales como tiempo, temperatura y presin. [VIM 1993]
A14
Medicin:
Conjunto de operaciones que tienen por objeto determinar el valor de una magnitud. [VIM 1993] A14.1 Procedimiento de Medicin: Conjunto de operaciones, descritas especficamente, para realizar mediciones particulares de acuerdo a un mtodo determinado. Nota: Un procedimiento de medicin es usualmente descrito con ese nombre, tiene suficientes detalles que permiten al operador efectuar una medicin sin informacin adicional. [VIM 1993] A14.2 Mtodo de Medicin: Secuencia lgica de operaciones, descrita genricamente, utilizada en el desarrollo de las mediciones. [VIM 1993] A15.1 Precisin: Es la proximidad de concordancia entre los resultados de pruebas independientes obtenidos bajo condiciones estipuladas. Nota: La precisin depende slo de la distribucin de los errores aleatorios y no los relaciona al valor verdadero o el valor especificado. La medida de la precisin generalmente se expresa en trminos de imprecisin y calculada como una desviacin estndar de los resultados de la prueba. Una menor precisin se refleja por una desviacin estndar grande. Los resultados de prueba independientes significan los resultados obtenidos de tal forma que no son influenciados por cualquier otro resultado previo sobre el mismo o similar objeto de prueba. Las mediciones cuantitativas de la precisin dependen en forma crtica de las condiciones estipuladas. Las condiciones de Repetibilidad y
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Reproducibilidad son series particulares de condiciones extremas estipuladas. [ISO 3534-1] Una medicin de la reproducibildad de las mediciones dentro de un grupo , esto es la dispersin de un grupo con respecto a su valor central [IUPAC Compendium de Chemical Technology, 1985] A15.2 Precisin Intermedia: La precisin Intermedia se expresa con la variacin de los laboratorios: diferentes das, diferentes analistas, diferente equipo, etc. [ICH Q2A, CPMP/ICH/381/95] A16 Pruebas de aptitud: La evaluacin peridica del desempeo de los laboratorios individuales y grupos de laboratorios que se logra mediante la distribucin de materiales tpicos otorgados por un organismo de prueba independiente, para que los participantes realicen su anlisis sin supervisin. [IUPAC Orange Book] A17 Calidad: *
La totalidad de rasgos y caractersticas de un producto o servicio que se refieren a su capacidad para satisfacer necesidades declaradas o implcitas [ISO 8402:1994] A17.1 Aseguramiento de la Calidad : Todas aquellas actividades sistemticas planeadas dentro del sistema de calidad, demostradas como necesarias que proporcionan una confianza adecuada para que una entidad satisfaga sus requisitos de calidad. [ISO 8402:1994] A17.2 Control de Calidad: Las tcnicas operacionales y actividades que son usadas para satisfacer los requisitos de calidad. [ISO 8402:1994] A17.3 Control de Calidad Interno: Establecimiento de procedimientos que debe seguir un laboratorio para el monitoreo continuo de operaciones y los resultados de las mediciones con el fin de decidir si los resultados de las mediciones son lo suficientemente confiables para ser publicados. [IUPAC Orange Book]
________________ *Nota del traductor
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Segn la publicacin Tcnica CNM-MMD-PT-003 la calidad se define por Conjunto de caractersticas de un elemento que le confiere aptitud para satisfacer necesidades explcitas e implcitas
A18
Intervalo (Medicin - Trabajo): Conjunto de valores del mensurando para los cuales el error de un instrumento de medicin esta supuestamente comprendido dentro de ciertos lmites. [IUPAC Orange Book]
A19
Recuperacin: La fraccin de analito adicionada a una muestra de prueba (fortificada o con spike) previa al anlisis, muestras fortificadas y sin fortificar, el porcentaje de recuperacin (%R) se calcula de la siguiente manera: %R = [(CF-CU)/CA] x 100 Donde CF es la concentracin de analito medida en la muestra fortificada; CU es la concentracin de analito medida en la muestra sin fortificar; CA es la concentracin de analito adicionada (valor medido, no determinado por el mtodo) en la muestra fortificada. [AOAC-PVMC]
A20
Material de Referencia (MR): Material o substancia en la cual uno o ms valores de sus propiedades son suficientemente homogneas y bien definidas, para ser utilizadas para la calibracin de aparatos, la evaluacin de un mtodo de medicin o para asignar valores a los materiales. El trmino material de referencia describe materiales que a menudo se llaman patrones de medicin, por ejemplo sustancias qumicas utilizadas para fines de calibracin o identificacin. Se deben tomar precauciones cuando se utiliza el trmino standard ya que se utiliza en dos contextos diferentes. El trmino puede referirse a measurement standard en el sentido de material de referencia o puede referirse a las normas escritas tales como Standard Methods Es importante asegurar que la distincin este siempre clara.
*Nota del traductor: En espaol el sentido Measurement Standard se utiliza el trmino patrn de medicin, mientras que para standard Methods se utiliza el trmino de normas. Dentro de los patrones de medicin se distinguen los materiales de referencia aquellos patrones de medicin que se consumen en cada medicin o que tienen caducidad. Los materiales de referencia certificados por el NIST se llaman SRM.
[ISO/IEC Guinde 30 - 1992, 2.1]
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A20.1 Material de Referencia Certificado(MRC): Material de referencia acompaado de un certificado, en el cual uno o ms valores de las propiedades estn certificados por un procedimiento que establece trazabilidad a una realizacin exacta de la unidad en la cual se expresan los valores de la propiedad y en el que cada valor certificado se acompaa de una incertidumbre con un nivel declarado de confianza. [ISO/IEC Guide 30 - 1992, 2.2] A21 Repetibilidad: Precisin en condiciones de repetibilidad, i.e. condiciones bajo las cuales se obtienen resultados independientes de una prueba con el mismo mtodo, con los mismos accesorios de laboratorio, en el mismo laboratorio, por el mismo operador usando el mismo equipo en intervalos de tiempo cortos. [ISO 3534-1] A21.1 Repetibilidad (de resultados de mediciones): La proximidad de la concordancia entre los resultados de mediciones sucesivas del mismo mensurando realizadas bajo las mismas condiciones de medicin. [IUPAC Orange Book] A21.2 Repetibilidad (de un instrumento de medicin): Aptitud de un instrumento de medicin para proporcionar indicaciones prximas entre s por aplicaciones repetidas del mismo mensurando bajo las mismas condiciones de medicin. [IUPAC Orange Book] A21.3 Desviacin Estndar de la Repetibilidad: La desviacin estndar de los resultados de una prueba obtenidos bajo condiciones de repetibilidad Note: Es una medida de la de dispersin de la distribucin de los resultados de prueba bajo condiciones de repetibilidad. Similarmente la varianza de repetibilidad y coeficiente de variacin de la repetibilidad puede definirse y utilizarse como la medicin de la dispersin de resultados de una prueba bajo condiciones de repetibilidad. [ISO 3534-1] A21.4 Lmite de Repetibilidad r :
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El valor menor que o igual que, al cual la diferencia absoluta entre los dos resultados de pruebas individuales obtenidos bajo condiciones de repetibilidad se espera exista con una probabilidad de 95% La repetibilidad (lmite de) se da por la frmula: r = t 2 r donde t es el valor de t de Student de dos colas para = a una confianza dada (El nivel de confianza normalmente establecido es de 95% donde el valor es 1.96), y r es la desviacin estndar medida bajo condiciones de repetibilidad (Vase A20.3). [ISO 3534-1] A22 Reproducibilidad: Precisin en condiciones de reproducibilidad, i.e. condiciones bajo las cuales los resultados de prueba se obtienen con el mismo mtodo, en un material idntico, en diferentes laboratorios por diferentes operadores usando diferentes equipos. Nota: Una afirmacin vlida de reproducibilidad requiere de la especificacin de las condiciones modificadas. La reproducibilidad puede ser expresada cuantitativamente en trminos de la dispersin de los resultados. [ISO 3534-1]
A22.1 Desviacin Estndar de la Reproducibilidad: La desviacin estndar de los resultados de prueba condiciones de reproducibilidad obtenidos bajo
Nota: Es una medida de la de dispersin de la distribucin de los resultados de prueba bajo condiciones de reproducibilidad. Similarmente la varianza de reproducibilidad y coeficiente de variacin de la reproducibilidad puede definirse y utilizarse como la medicin de la dispersin de resultados de una prueba bajo condiciones de reproducibilidad. [ESO 3534-1] A22.2 Lmite de Reproducibilidad R: El menor valor que o igual a, al cual la diferencia absoluta entre dos resultados de pruebas individuales obtenidos bajo condiciones de reproducibilidad puede esperarse con una probabilidad de 95% La reproducibilidad (lmite de) se da por la frmula :
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R = t 2 R donde t es el valor de t de Student de dos colas para = a una confianza dada (El nivel de confianza normalmente establecido es de 95% donde el valor es 1.96), y R es la desviacin estndar medida bajo condiciones de reproducibilidad (vase A21). [ISO 353 4-1] A23 Tiempo de Respuesta: El intervalo de tiempo que comprende el instante en el cual una seal de entrada es sometida a un cambio brusco especificado y el instante en el cual la seal de salida alcanza dentro de lmites especificados un valor en rgimen estable y sostenido. [VIM 1984] A24 Resultado de una Medicin Valor atribuido a un mensurando, obtenido por medicin Nota: Cuando se proporciona un resultado, se debe aclarar si se refiere a: la indicacin, al resultado no corregido, al resultado corregido y si se trata de una media obtenida a partir de varias mediciones. Una expresin completa del resultado de una medicin incluye informacin acerca de la incertidumbre de la medicin. [VIM 1993] A25.1 Prueba de Robustez: Estudio intra-laboratorio para estudiar el comportamiento de un proceso analtico cuando se efectan pequeos cambios en el ambiente y/o en las condiciones de operacin, similares a aquellas que pudieran surgir en los diferentes ambientes de prueba. La prueba de robustez permite obtener informacin de los efectos de cambios menores de una forma rpida y sistemtica. [AOAC - PVMC] A25.2 (Robustez): La robustez de un procedimiento analtico es una medida de su capacidad de permanecer inalterado por variaciones pequeas pero deliberadas en los parmetros del mtodo y proporciona una indicacin de su confiabilidad durante su uso normal. [ICH Q2A, CPMP/ICH/381/95] A26 Selectividad (o Especificidad):
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La habilidad de un mtodo para determinar exactamente y especficamente el analito de inters en la presencia de otros componentes en la matriz bajo condiciones establecidas de la prueba. [NATA Tech Note #13] A26.1 Selectividad (en un anlisis): Selectividad Cualitativa- Hasta que punto otras sustancias interfieren en la determinacin de una sustancia de acuerdo a un procedimiento dado. [IUPAC Compendium de Chemical Terminology, 1987] Selectividad Cuantitativa - Un trmino usado en conjuncin con otros sustantivos (i.e. constante, coeficiente, ndice, factor, nmero) para la caracterizacin cuantitativa de interferencias [IUPAC Compendium de Chemical Terminology, 1987] A27 Sensibilidad: El cambio en la respuesta de un instrumento de medicin dividido por el correspondiente cambio del estmulo. Nota: El estmulo puede ser por ejemplo la cantidad del mensurando presente. La sensibilidad puede depender del valor de estmulo. Aunque esta definicin se aplica claramente al instrumento de medicin, tambin puede aplicarse al mtodo analtico en conjunto, tomando en cuenta otros factores como el efecto de los pasos para una concentracin. [VIM 1984 y IUPAC Orange Book] A28 Especificidad : La habilidad de un mtodo de medir solo lo que se espera que mida [AOAC - PVMC]. La especificidad es la capacidad de determinar el analito inequvocamente en la presencia de componentes los cuales se espera que estn presentes. Comnmente puede incluir impurezas, degradantes, matriz, etc. [ICH Q2A, CPMP/ICH/381/95] A29 Desviacin Estndar:
Es una medicin del grado de dispersin de los valores al rededor de su media en una distribucin de valores. La desviacin estndar de la poblacin para n valores esta dada por :
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(x
i =1
En la prctica generalmente se analiza una muestra y no toda la poblacin. La desviacin estndar s para la muestra est dad por:
s=
(x
i =1
x)
n 1
A30
Trazabilidad: Propiedad del resultado de una medicin o del valor de un patrn por la cual pueda ser relacionado a referencias determinadas, generalmente patrones nacionales o internacionales, por medio de una cadena ininterrumpida de comparaciones teniendo todas incertidumbres determinadas.
[ISO/IEC Guide 30 - 1992, 3.8] A31 Veracidad: Es la proximidad de concordancia entre el valor promedio obtenido de una serie de resultados de prueba y un valor de referencia aceptado. Note: La medida de la veracidad se expresa por lo general en trminos de sesgo. La referencia a la veracidad como exactitud de la medida no se recomienda normalmente. [ISO 3534-1] A32 Incertidumbre (de Medicin) : Parmetro asociado al resultado de una medicin, que caracteriza la dispersin de los valores que podran ser razonablemente atribuido al mensurando. Nota: El parmetro puede ser, por ejemplo, una desviacin estndar ( o un mltiplo dado de ella), o la mitad de un intervalo de confianza determinado. La incertidumbre de la medicin comprende, en general, de muchos componentes. Algunos de estos pueden ser evaluados a partir de las distribucin estadstica de los
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resultados de series de mediciones y pueden ser caracterizados por desviaciones estndar experimentales. Los otros componentes, que tambin pueden ser caracterizados por las desviaciones estndar, son evaluados a partir de distribuciones de probabilidad supuestas, basadas en la experiencia u otra informacin. Se entiende que el resultado de una medicin es el mejor estimada del valor del mensurando y que todos los componentes de la incertidumbre, incluyendo aquellos provenientes de efectos sistemticos, tales como los componentes asociados con correcciones y patrones de referencia, contribuyen a la dispersin. [VIM 1993] A32.1 Incertidumbre Estndar u(xi) - La incertidumbre del resultado de una medicin expresada como una desviacin estndar. [ISO GUM] A32.2 Incertidumbre Estndar Combinada : uc(y) - La incertidumbre estndar de los resultados de una medicin cuando el resultado es obtenido a partir de los valores de un nmero de otras magnitudes, igual a la raz cuadrada positiva de trminos, siendo stos las varianzas o covarianzas de estas otras cantidades ponderadasde acuerdo a como varan los resultados de la medicin con estas cantidades. [ISO GUM] A32.3 Incertidumbre Expandida U - Magnitud que define un intervalo alrededor del resultado de una medicin que puede esperarse para abarcar una fraccin grande de la distribucin de los valores que podran ser razonablemente atribuidos al mensurando. Nota 1 La fraccin puede ser relacionada con la probabilidad de cobertura o nivel de confianza del intervalo. Nota 2 Par asociar un nivel especfico de confianza con el intervalo definido por la incertidumbre expandida, se requiere hacer suposiciones explcitas o implcitas con respecto a la distribucin de probabilidad caracterizada por el resultado de medicin y su incertidumbre estndar combinada. El nivel de confianza que puede ser atribuidos este intervalo slo puede conocerse para el alcance al cual tales suposiciones sean justificadas.
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Nota 3. Una incertidumbre expandida U es calculada a partir de una incertidumbre estndar combinada uc y un factor de cobertura k usando: U = k x uc [ISO GUM] A32.4 Factor de Cobertura k - Factor numrico usado como multiplicador de la incertidumbre estndar para obtener una incertidumbre expandida. Nota: El factor de cobertura se encuentra tpicamente en el intervalo de 2 a 3. [ISO GUM] A33.1 Validacin: Confirmacin, mediante examinacin y suministro de evidencia objetiva, de que los requisitos particulares para un uso especfico de inters son satisfechos. [ISO 8402:1994] A33.2 Validacin de un Mtodo: 1. El proceso de establecimiento de para establecer las caractersticas de desempeo y limitaciones de un mtodo y la identificacin de las aquellas influencias que podrn modificar estas caractersticas y a que grado. Qu analitos puede determinar el mtodo?, En qu matrices en la presencia de qu interferencias?. Dentro de estas condiciones que niveles de precisin y exactitud pueden alcanzarse. 2. El proceso de verificacin de que un mtodo es apropiado a su propsito, por ejemplo para resolver un problema analtico particular. Nota: 1.Es aplicable cuando un mtodo se desarrolla sin tener en mente un problema analtico en particular. 2 es aplicable cuando el mtodo se est desarrollando con un propsito especfico. En qumica analtica otro uso comnmente encontrado del trmino de validacin es en el contexto de instrumentacin. La Validacin de Instrumentos se usa para describir el proceso de establecer que un instrumento a cualquier momento dado es capaz de desempearse de acuerdo a la especificacin de su diseo. Estos procesos podrn alcanzarse mediante calibraciones o verificaciones de desempeo. A34 Valor:
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A34.1 Valor de Referencia Aceptado: Valor que sirve como referencia en concordancia para comparaciones y se deriva como: a) Un valor terico o establecido basado en principios cientficos; b) Un valor asignado o certificado, basado en trabajo experimental de algunas organizaciones nacionales o internacionales; c) Un valor de consenso o certificado basado en trabajo experimental en colaboracin bajo el auspicio de un grupo cientfico o de ingeniera. d) Cuando a), b), y c) no estn disponibles, la experimentacin de la cantidad (mensurable), i.e. la media de una poblacin especfica de medidas. [ISO 3534-1] A34.2 Valor verdadero: Valor consistente con la definicin de una determinada magnitud particular. Nota: Este es un valor que sera obtenido de una medicin perfecta. Por naturaleza, los valores verdaderos son indeterminados. El artculo indefinido un preferido en lugar del artculo definido el, es utilizado en conjunto con valor verdadero porque puede haber muchos valores consistentes con la definicin de una cantidad particular dada. [VIM 1993] A34.3 Valor verdadero convencional: Valor atribuido a una cantidad particular y aceptada, algunas veces por convencin, como tener una incertidumbre apropiada para un propsito dado. Nota: Valor Verdadero Convencional algunas veces es denominado como valor asignado, mejor estimado del valor, valor convencional o valor de referencia. Frecuentemente, un nmero de resultados de las mediciones de una cantidad es usado para establecer un valor verdadero convencional. [VIM 1993] Un Valor Verdadero Convencional (de una cantidad) es un valor atribuido a una cantidad particular y aceptada algunas veces por convencin como tener una incertidumbre apropiada para un propsito dado. Nota: A35 No debe confundirse con el valor de referencia [IUPAC Orange Book]
Verificacin:
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Gua EURACHEM
Confirmacin mediante examinacin y suministro de evidencia objetiva, de que los requisitos especficos se han cumplido. [ISO 8402:1994]
ANEXO B. PROTOCOLO DE DOCUMENTACIN DEL MTODO La adecuada documentacin de los mtodos es discutida en el captulo 9 de esta gua. El siguiente formato se incluye como referencia como un despliegue conveniente. Esta basado en ISO 78-2(27), pero contiene sugerencias adicionales sobre la calibracin, el control de calidad y control de la documentacin. B0 RESUMEN DE ACTUALIZACIN Y REVISIN Esta seccin tiene un doble propsito. Primero pretende disminuir los cambios menores a ser realizados al texto del mtodo sin la necesidad de una revisin exhaustiva y una reimpresin del mtodo. Segundo, es recomendado que cada mtodo debiera ser revisado peridicamente para ver si contina siendo adecuado a su propsito y el resumen sirve como un recordatorio para que esto sea realizado. Este resumen debe ser situado antes que el mtodo justo en la portada.
B0.1 ACTUALIZACIONES Cualquier cambio escrito a mano al texto del mtodo deber aceptarse como cambios proporcionados cuando tambin se encuentre escrito en la tabla siguiente (la escritura a mano se considera aceptable), propiamente autorizada. Quedar implcito que la autorizacin respalda el hecho que los efectos de los cambios en la validacin del mtodo han sido investigados y no causan problemas y que los cambios se han hecho a todas las copias del mtodo.
# 1
Seccin 3.4
Naturaleza del cambio Cambio en la tasa del flujo de 1.2 ml.min-1
Fecha 8/2/96
Autorizacin DGH
B0.2 REVISIN
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En cualquier momento determinado se espera que la fecha a la cual el mtodo fue previsto para estar en uso, est entre las fechas de revisin y de prxima revisin como se muestra en la tabla. Un tiempo de dos aos se ha sugerido como un intervalo adecuado.
Fecha de revisin Observaciones de la revisin Fecha siguiente de revisin Autorizacin
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B1 TTULO Formato preferido: Determinacin de A (analito o mensurando) (en presencia de B [interferencia]) en C (matriz) usando D (principio). B2 ALCANCE Esta seccin permite al usuario potencial examinar rpidamente si el mtodo es o no adecuado para la aplicacin deseada. Se debern cubrir los siguientes aspectos: El (los) analito(s) que pueden determinarse por este mtodo; La forma en que el (los) analito(s) son determinados- especiacin, total/disponible etc.; La (s) matriz (ces) de la muestra entre las que el (los) analito (s) pueden ser determinados; El intervalo de concentraciones con las cuales se puede usar el mtodo Las interferencias conocidas que previenen o limitan el trabajo del mtodo; Las tcnicas utilizadas por el mtodo El tamao mnimo de muestra.
B3 PRECAUCIONES DE ADVERTENCIA Y SEGURIDAD

Las precauciones detalladas pueden establecerse en las secciones relevantes, pero se debe hacer hincapi en la existencia de materiales peligrosos y la necesidad de precauciones. Incluya devoluciones nulas. Proporcione advertencias adecuadas de cualquier peligro involucrado con: Manipulacin de la muestra; Manipulacin o preparacin de solventes, reactivos, materiales de referencia u otros materiales; Operacin del equipo; Requisitos para ambientes de manipulacin especiales (por ejemplo campanas de extraccin) Consecuencias de escalamientos de experimentos (lmites de explosin)
B4 DEFINICIONES Defina cualquier trmino poco usual, utilice definiciones ISO siempre que sea posible. Cite las fuentes. Las estructuras analticas deben incluirse si son relevantes.
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B5 PRINCIPIO Sobresalte el principio por el cual la tcnica analtica opera. Un diagrama de flujo puede ayudar. Esta seccin debe ser escrita de tal forma que con un vistazo al resumen se pueda entender como funciona el mtodo. Incluya una explicacin de los principios de los clculos. Cuando sea apropiado clarificar el trabajo del mtodo o los clculos, incluya detalles relevantes de cualquier reaccin qumica relevante (por ejemplo, esto puede ser importante cuando una derivacin est involucrada o en una titulacin) e.g. La concentracin proviene de una curva de calibracin de 6 puntos mediante, la lectura de la concentracin correspondiente a la absorbancia de las muestra, la correccin con el valor del blanco y la multiplicacin por el factor de concentracin. B6 REACTIVOS Y MATERIALES Liste todos los reactivos, materiales, blancos, muestras de control de calidad, patrones y materiales de referencia certificados requeridos para el proceso analtico, enumerados para una referencia posterior. Liste: Detalles de cualquier material peligroso, incluyendo instrucciones para su depsito; Grado analtico; La necesidad de calibracin y materiales de control de calidad provenientes de lotes independientes; Detalles en la preparacin, incluyendo la necesidad de prepararse anticipadamente. Requisitos de contencin y almacenamiento Vida en almacn de un material puro y de reactivos preparados; Concentracin requerida, notaciones sobre p/v, p/p, o v/v Requisitos de etiquetado: Disposicin de residuos peligrosos.
B7 APARATOS Y EQUIPO Describa el equipo individual y como estn conectados con suficiente detalle para evitar instalaciones dudosas. Liste los requisitos mnimos de desempeo y verificacin, las referencias cruzada para la seccin de calibracin y cualesquiera manuales relevantes del instrumento. Numrelos para una referencia posterior. Para uso de vidrio incluya el grado cuando sea aplicable (tenga en mente que el uso de un grado en particular puede requerir justificacin y una prueba de cumplimiento puede ser requerida). Incluya los requisitos ambientales (campanas de extraccin etc.). Los diagramas simples y de flujo pueden ayudar a que sea esto ms claro.
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B8 MUESTREO Y MUESTRAS Esta seccin no pretende incluir la seleccin de muestras, las cuales probablemente se describirn por separado en un plan de muestras. Incluya suficiente detalle para describir como se recibe la porcin de prueba con la muestra por el laboratorio. Incluya los detalles del almacenamiento, las condiciones y los detalles de depsito. Esta etapa es particularmente complicada por lo que puede justificarse una seccin separada del mtodo. B9 CALIBRACIN Identifique las partes crticas del proceso analtico. stas tendrn que controlarse con operaciones cuidadosas y calibraciones. Las referencias cruzadas a las secciones relevantes anteriores. Incluya el equipo de calibracin- Qu necesita ser calibrado?, Cmo?, Con qu?, Cada cuanto tiempo?. Considere la trazabilidad apropiada para los calibrantes. B10 CONTROL DE CALIDAD Explique que forma de control de calidad consider, la frecuencia de las revisiones del control de calidad durante el anlisis de los lotes, criterio de aceptacin y rechazo, acciones a tomar en el caso de un rechazo. Las referencias cruzadas a las secciones relevantes anteriores. B11 CALIBRACIN Describa el procedimiento analtico, las referencias cruzadas de las secciones previas incluyendo el nmero de reactivos, aparatos e instrumentacin. Cuando los parmetros son expresados (tiempo, temperatura) que sean crticos al sistema, mencione tambin la referencia cruzada de la parte relevante de la seccin de calibracin. Indique en que parte del procedimiento analtico del control de calidad deben desempearse los procedimientos de control de calidad y procedimientos de calibracin. B12. CLCULOS Exponer las frmulas para calcular los resultados asegurndose de que todos los trminos estn claramente identificados y derivados. Indique los requisitos de revisin y de referencia cruzada para el control de calidad.
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B13 REPORTE DE PROCEDIMIENTOS INCLUYENDO LA EXPRESIN DE LOS RESULTADOS
Indique como se deben reportar los resultados, incluyendo cifras decimales, unidades finales, la incertidumbre, el intervalo de confianza, etc. B14 REFERENCIAS NORMATIVAS Cualquier referencia que de un respaldo fundamental al mtodo. Utilice el formato CHEMABS. B15 (APNDICE EN) VALIDACIN DEL MTODO Dependiendo del volumen de los datos que apoyen la validacin, ser apropiado listarla o proporcionar la referencia en un archivo por separado. Por ejemplo: Para un intervalo lineal como se establece en la seccin 3 alcances debern haber datos antecedentes, ya sea en este apndice o en un documento por separado que mostraran como se obtuvo este intervalo. B16. (APNDICE EN) INCERTIDUMBRE DE LA MEDICIN Las fuentes principales de incertidumbre relacionadas al mtodo debern identificarse y los valores asignados listados. Aquellas contribuciones que no se usaron en los clculos finales porque se consideraron insignificantes debern ser mencionadas. La incertidumbre total se deber listar junto con la explicacin de cmo fue obtenida. Un tratamiento ms detallado deber estar en un documento de referencia cruzada.
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ANEXO C. GRUPO DE TRABAJO DE EURACHEM

Este documento se ha realizado por el grupo de trabajo de EURACHEM de un borrador original producido por LGC. Los miembros del grupo EURACHEM son:
Prof P de Bievre Dr D Bttger Dr C Eastwood Prof J Hlavay Mr M Holmgren Dr W Horwitz Dr M Lauwaars Dr B Lundgren Prof L Massart Prof J Miller Dr J Morkowski Dr B te Nijenhuis Ms B Nyeland Dr R Philipp Dr P Radvila Prof J Smeyers-Verbeke Dr R Stephany Dr M Suchanek Ms C Vandervoorst Dr H Verplaetse Ms H Wallien Dr M Walsh Prof W Wegscheider Dr D Westwood Mr H J van de Wiel IRMM, Blgica Hoechst AG, Alemania Zeneca Specialties, UK University of Veszprem, Hungra SP, Suecia (Eurolab Secretariat) Food and Drug Administration, USA AOAC International, The Netherlands SP, Suecia Vrije Universiteit Brussel, Blgica University of Loughborough, UK EMPA, Suiza Working Party on Analytical Chemistry (Secretary), The Netherlands National Environment Research Institute, Dinamarca BAM, Alemania EMPA St Gallen, Suiza Vrije Universiteit Brussel, Blgica RIVM, The Netherlands Prague Institute of Chemical Technology, Repblica Checa Dr L Willems Instituut vzv, Blgica Ministry of Economic Affairs - Central Laboratory, Blgica VTT, Finlandia The State Laboratory, Irlanda Leoben University of Mining & Metallurgy, Austria Environment Agency, UK RIVM, The Netherlands
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Primera Edicin en Ingls 1.0 - 1998

Mtodos Analticos Adecuados a su Propsito

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MTODOS ANALTICOS ADECUADOS A SU PROPSITO Contenido

1. 2. 3. 4. (a) (b) 5. 6. (a) (b) (c) (d) (e) (f) 7. 8. 9. 10.

Protocolo de documentacin del mtodo

Grupo de trabajo de EURACHEM

Mtodos Analticos Adecuados a su Propsito

Mtodos Analticos Adecuados a su Propsito

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Desarrollo del mtodo

Evaluar si el mtodo cumple al propsito como se utiliza en el laboratorio

Identificar la existencia del mtodo o desarrollo de un muevo mtodo un nuevo mtodo

Se atena el requisito analtico?

Incapacidad para hacer el trabajo: subcontratar?

Requisitos analticos reestablecidos en trminos de lo que se ha completado

Figura 1: Eleccin, desarrollo y evaluacin de mtodos.

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Confirmacin de la identidad y selectividad/especificidad - Referencia Rpida

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Limite de Deteccin (LoD)- Referencia Rpida

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Lmite de Deteccin (LoD) - Mediciones Cualitativas - Referencia Rpida

10/0 10/0 5/5 1/9 0/10

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Limite de Cuantificacin (LoQ) - Referencia Rpida

Qu se analiza ? a) 10 muestras de blancos independientes medidos una vez

Intervalo de trabajo e intervalo lineal (Ver anexo A para definiciones)

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Intervalo de trabajo e intervalo lineal. Referencia Rpida

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Valor medido (Media del laboratorio)

M edia de la prueba de intercomparacin

Sesgo del mtodo

N o t a : E l s es go del laboratorio y el del m todo s e m u e s t r a n afectando el valor en la m i s m a direccin. En realidad

este no es siempre el caso.

Figura 2. Tipos de sesgo.

Exactitud y Veracidad - Referencia Rpida

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Mtodos Analticos Adecuados a su Propsito

Precisin de Repetibilidad y de Reproducibilidad- Referencia Rpida

Qu calcular de los datos?

Determinar la desviacin estndar (s) a cada concentracin

Determinar la desviacin estndar de la reproducibilidad interlaboratorio a cada concentracin

c) Diferentes analistas, equipos, laboratorios, y periodos largos de tiempo.

Determinar la desviacin estndar (s) a cada concentracin

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