Distribucin de la cefalexina y kanamicina, en el tejido mamario despus de la administracin intramamaria en vacas en lactacin

La infusin intramamaria de medicamentos antimicrobianos (IMM) sigue siendo la forma ms comn para el tratamiento de la mastitis en el ganado lechero. Se espera altas concentraciones de frmaco en el sitio de la infeccin (Gruet et al, 2001.), Por lo tanto, la consecucin de los medios es ms eficaces para alcanzar y matar los agentes patgenos infecciosos. Esta razn debe ser impugnada porque la mayora de los patgenos localizados en la ubre no se limitan a la glndula cisterna (donde las concentraciones de frmaco son ms altas), tambin se puede encontrar profundamente en los tejidos mamarios. Adems, el comportamiento farmacocintico de la mayora de los tratamientos autorizados de mastitis IMM no estn disponibles al pblico, es decir, el grado de distribucin del frmaco desde la cisterna de la glndula en el tejido mamario con el tiempo es desconocido. Las concentraciones de la leche y de tejido rara vez son conocidos, ni si los niveles teraputicos suficientes se mantienen durante un perodo de tiempo suficiente. Con IMM combinaciones de antibiticos, especialmente cuando se espera que la actividad sinrgica, la presencia y la concentracin de cada compuesto en el sitio de la infeccin es de vital importancia. La distribucin de drogas en el tejido de la ubre puede variar sustancialmente, por ejemplo de acuerdo a sus propiedades lipoflicas (Gruet et al., 2001). La concentracin de frmaco en la leche o la sangre despus de la administracin IMM no puede ser utilizado para estimar la concentracin del frmaco en el tejido de la ubre (ehinger y Kietzmann, 2000b). Para evaluar si la actividad antibacteriana es adecuada (es decir, superior a las concentraciones mnimas inhibitorias) en el tejido glandular, las concentraciones de frmaco deben ser evaluados a partir de muestras de tejido de la ubre. No se publicaron los detalles en las investigaciones in vivo de la distribucin individual del medicament, en diferentes tiempos del trimestre. Para obtener esta informacin, se han propuesto distintos mtodos insatisfactorios in vitro (Moore & Heider, 1984; ehinger y Kietzmann, 2000a, b). Recientemente, el aislado de la ubre bovina perfundido fue propuesto como un modelo apropiado para estudiar la farmacocintica de los frmacos despus de la administracin IMM. An no est claro si refleja con exactitud la situacin in vivo (Zeitlin y Eshraghi, 2002;. Ehinger et al, 2006). Una combinacin de kanamicina y cefalexina fue autorizado recientemente en Europa para el tratamiento de la mastitis clnica (Ubrolexin, Boehringer Ingelheim Animal Health, Ingelheim, Alemania). La sinergia entre estos dos agentes contra los patgenos de mastitis fue demostrado por el tiempo de muerte mediante un anlisis cintico en la leche y el medio de cultivo Mueller -Hinton (Ganiere y Denuault, 2009). Se desconoce si las interacciones sinrgicas tambin ocurren en el tejido de la ubre, lo que implica que ambas drogas estn presentes en el mismo lugar al mismo tiempo. Este artculo se describe como un experimento original en vivo, que investig las respectivas concentraciones de cefalexina y kanamicina en diferentes niveles de la ubre de las vacas lactantes tras la administracin de la IMM. El protocolo del estudio fue aprobado por el comit de tica de la Escuela Nacional Veterinaria de Lyon (Vetagro, acuerdo de 1182). Se eligieron cuatro vacas lecheras Holstein saludables en

su segunda o tercera lactancia, entre 50 y 74 das en leche, con tamao de la ubre comparable y conformacin y cuatro pezones funcionales. El rendimiento medio de leche a la inclusin fue de 31.2 L/da. Los dos recuentos de clulas somticas mensuales anteriores (compuesto lcteo de los cuatro trimestres) estaban por debajo de 250 clulas 000/mL. Se hizo un recuento de clulas somticas de los cuatro pezones, tambin se realiz 2 das antes del tratamiento, y los valores eran todos por debajo de 119 000 clulas / ml. Justo antes del tratamiento, una prueba de Mastitis de California se realiz en leche de cada cuarto para detectar y retirar cualquier vaca con mastitis. Los animales fueron aislados 12-24-h durante el experimento. Las vacas fueron ordeadas dos veces al da con un intervalo de 12 h y tuvieron libre acceso a heno y una racin de alimento regular para vacas lactantes. Cada cuarto de ubre de la vaca fue inyectado con una suspensin IMM de 200 mg de monohidrato de cefalexina y 100 000 UI (= 133 mg) de monosulfato de kanamicina. Una sola inyeccin contenido con 10 ml (12 g) de la especialidad farmacutica (Ubrolexin, Boehringer Ingelheim Animal Health) se administr a travs del canal del pezn en la primera maana despus del ordeo completo de la ubre. Antes de cada toma de muestras de tejido, los animales recibieron una anestesia epidural caudal utilizando lidocana tras una sedacin de accin corta con romifidina (Sedivet, Boehringer Ingelheim Animal Health, 0,3-0,4 mL IV). El muestreo se llevo a cabo en los animales anestesiados en posicin vertical utilizando arneses para mantener la posicin ms fisiolgica de la ubre. Cada cuarto de la ubre se divide esquemticamente en cuatro capas horizontales superpuestas de igual tamao, que define cuatro niveles de muestreo sucesivos, desde la base de la tetina en el abdomen a aproximadamente 6 intervalos cm (Fig. 1).

FIG. 1 Descripcin de las capas de la ubre.

Las muestras de tejido fueron tomadas con una pistola de biopsia de un solo uso de 20 cm, con aguja de calibre 16 (Bard Monopty, BARD Biopsia Systems, Tempe, AZ, EE.UU.) despus de una corta incisin con bistur de la piel (5 mm). Las muestras se obtuvieron a partir de los diferentes cuartos de ubre (pezn) en cada momento. Dos vacas fueron muestreados a 1, 4, 8 y 12 h despus de la administracin de la suspensin IMM, respectivamente, mientras que los otros dos vacas fueron muestreados a 2, 6, 10 y 24 h despus del tratamiento. Las 12 y 24h de muestreos se realizaron justo antes del ordeo. En cada punto de tiempo, se tomaron biopsias

contemporneamente entre cuatro niveles diferentes de una mismo pezn. Dos biopsias se tomaron de cada capa, en dos direcciones diferentes dentro del mismo plano horizontal (uno por compuesto de frmaco). El mtodo de biopsia utilizado en la capa ms cercana a la tetina garantiz que las muestras no crucen la cisterna de la glndula, que contiene esencialmente la leche. De cada cuarto se tomaron muestras en un solo punto de tiempo. El peso de cada muestra fue de 17,05 2,56 mg (media DE). Las muestras de tejido se acondicionaron inmediatamente e individualmente en tubos Eppendorf y se congelaron a 20C hasta que se produjo la determinacin analtica. Las concentraciones de Cefalexina y kanamicina se determinaron en muestras de tejido mamario mediante una cromatografa lquida interna mtodo de acoplamiento a espectrometra de masas (LC-MS). Las referencias de las normas analticas para la cefalexina (Ref. 33989) y sulfato de kanamicina de Streptomyces kanamyceticus (Ref. K4000) se obtuvieron de Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, EE.UU.). Todos los reactivos analticos eran de LC-MS de grado. Las muestras de tejido se mezclaron con 0,5 ml de agua ultrapura que contienen cido tricloroactico a pH 1,9 en un tubo Eppendorf de 1 ml. A continuacin, la mezcla se tritura y se coloc en un bao de ultrasonidos durante 30 min. Luego, la preparacin resultante se filtr con un filtro de jeringa (fluoruro de polivinilideno, 0,45m). Una muestra de 10-l se inyect directamente en el sistema de LC-MS. paralelamente, se prepararon muestras fortificadas para la calibracin: tejido mamario libre de tratamiento en blanco se mezcl con soluciones estndar de las dos antimicrobianos preparados con agua ultrapura con contenido de cido tricloroactico (pH 1,9). Las mezclas se procesaron a continuacin como se describe previamente. El sistema LC-MS se compone de un sistema de cromatografa de lquidos (Agilent HP1100, Agilent Technologies, Inc., Santa Clara, CA, EE.UU.) con un diodo UV detector de matriz fijado a 210 nm y un simple espectrmetro de masas cudruple (Agilent MSD 1946b, Agilent Technologies Inc.) operado en el modo de ionizacin positivo. La El software de procesamiento fue adquirido de ChemStation B03.01 (Agilent Technologies Inc.). La separacin cromatogrfica se realiz en una columna estable de Bond C8 (2,1 X 50 mm, DP: 1,8m Agilent) Operado a 60 C, usando una elucin en gradiente binario. La fase mvil A consista en agua ultra-pura que contiene cido tricloroactico ATPH 1,9 y la fase mvil B consista en metanol que contiene 0,1% (v / v) de cido frmico. El gradiente de elucin comenz con un caudal de 0,4 mL/min con 20% de fase mvil B para lograr el 100% de fase mvil B en 4 min. Estas condiciones se mantuvieron durante 4 min. La velocidad de flujo se increment desde 0,4 hasta 0,6 mL/min a 1 minuto y a 13,9 min, la mezcla volvi a 20% de fase mvil B, el mantenimiento de estas condiciones hasta 16 min para devolver el sistema a las condiciones analticas iniciales. Los parmetros del detector de masas eran 12 L/min para el secado de flujo de gas, 55 psig de presin para nebulizador, 350 C para el secado de temperatura del gas y 4.000V para la tensin capilar. En el seguimiento de ion solo, la kanamicina apareci a m/z 485 [correspondiente a la de iones (M + H) +] con un fragmentador de 70 V y cefalexina aparecido a m/z 348 [correspondiente a la de iones (M + H) +] con un fragmentador de 40V. Los detalles analticos se enumeran en la Tabla 1.

Tabla 1. detalles analticos Antibitico Concentracin de calibracin (g/g) LOD (g/g) LOQ (g/g) Precisin media en QC muestras% (rango) Precisin Inter-corrido % (media) Cefalexina 0,50-50 0,30 0,50 13,5 (-15 a +18) 3,0 a 27,3 (11,9) kanamicina 1,0-80 0,7 1,0 9,9 (-14 a +24) 11,6 a 24,2 (14,4)

LOD, lmite de deteccin; LOQ, lmite de cuantificacin; QC, control de calidad.

Las concentraciones de frmaco medidos en tiempos de muestreo sucesivos en los diferentes niveles de la ubre se presentan en las figuras 2 y 3. En cada punto de tiempo, se calcularon los valores medios a partir de mediciones realizadas en dos animales diferentes. 2 horas despus del tratamiento, la concentracin de cefalexina en el tejido glandular media (un promedio de cuatro capas) aument y alcanz un pico a 25,9 9,0 g/g, disminuyendo linealmente a partir de entonces hasta el ltimo tiempo de muestreo. Ms de la mitad de la concentracin inicial todava se encontr en los tejidos a las 6 horas (13,2 5,0 g/g). Se redujo a alrededor del 17% a las 10 h (3,6 1,6 g/g). En 24 h, aproximadamente el 5% de la concentracin inicial de cefalexina fue todava medible en muestras de tejido. Aunque el nmero de muestras por capa est limitada, la disminucin en las concentraciones tisulares de cefalexina desde el pezn a los niveles superiores sigue una tendencia exponencial. A 1 h, casi la mitad de la cantidad total de cefalexina medido fue en la capa ms cercana a la teta, el 25% en la segunda capa y el resto se dividi entre las dos capas superiores. Alrededor de 2 h, un estado de equilibrio se alcanz, en donde se encontraron concentraciones comparables en cada nivel individual. De 4 h en adelante, las concentraciones ms altas se encontraron en los dos niveles ms bajos, con concentraciones acumuladas representan el 50-65% de la concentracin total de la ubre. La concentracin mxima de kanamicina en el tejido glandular tambin se midi en 2 h (44.3 10.7 g/g). La concentracin se redujo posteriormente de forma peridica, pero a un ritmo ms lento que la cefalexina, con concentraciones relativamente altas se observaron hasta 12 h (12.8 7.8 g/g). La mitad de la concentracin inicial an estaba presente en la ubre a las 24 h (12.9 5.6 LG / g). La kanamicina se distribuyo uniformemente entre las diferentes capas de la ubre, con concentraciones ligeramente ms altas observadas en los niveles inferiores. La concentracin disminuy linealmente en todas las capas en el tiempo.

Figura. 2. Concentraciones de Cefalexina en los diferentes niveles de la ubre.

Figura. 3. Concentraciones de kanamicina en los diferentes niveles de la ubre.

Este experimento tuvo como objetivo describir y cuantificar la difusin de los dos compuestos por el barrio despus de la aplicacin IMM de una combinacin de antibiticos. Biopsias de la ubre se tomaron de mltiples sitios de cuartos de cuatro vacas lactantes saludables a intervalos sucesivos. Para nuestro conocimiento, esta es la primera vez que el comportamiento farmacocintico de un frmaco en la glndula mamaria se ha investigado de tal manera. Franklin et al. (1986) estudio las concentraciones de la penicilina, la estreptomicina y la espiramicina en lquidos de tejido de la ubre de la especie bovina a travs de la canulacin de vasos linfticos del parnquima superficiales. Concentraciones de ceftiofur en el tejido mamario se analizaron en biopsias tanto de lados no infectadas e infectados preliminarmente con Staphylococcus aureus (Owens et al., 1990). En este ltimo estudio, las muestras de tejido fueron tomadas de slo dos zonas de cada lado; profunda y parnquima cisternal en diversos

momentos despus de la administracin de antibiticos. Una metodologa similar se utiliz para determinar la concentracin de penicilina y novobiocina en el tejido mamario (Owens & Nickerson, 1990). Sin embargo, slo una biopsia fue tomada en cada punto de tiempo y no se inform de su ubicacin. En los estudios realizados con el aislado ubre bovina perfundido, mltiples muestras glandulares se tomaron dorsalmente al pezn (Ehinger y Kietzmann, 2000a, b; Ehinger et al, 2006;. Kietzmann et al, 2008, 2010.). En el caso de la cloxacilina, la penicilina, oxacilina y ampicilina, se consider slo un nico tiempo de muestreo (3 o 6 h despus de la administracin de IMM), mientras que se utilizaron 3-4 tiempos de muestreo para evaluar la distribucin de la cefquinoma en la ubre de (2, 4 y 6 h) y marbofloxacina (3, 6, 12 y 24 h), respectivamente. Esto puede ser insuficiente para evaluar la distribucin de drogas con precisin a lo largo del trimestre con el tiempo, especialmente cuando se investig una combinacin de frmacos. Por razones de bienestar, es decir, a causa de la invasividad del procedimiento, el nmero de vacas experimentales y la frecuencia de los puntos de muestreo se limita voluntariamente, permitiendo de este modo ninguna interpretacin estadstica de los datos. Slo dos lados fueron considerados por punto de tiempo, que no puede compensar la variabilidad interindividual. Para reducir la variabilidad interindividual, las vacas libre de mastitis fueron seleccionados de acuerdo al tamao y conformacin de la ubre, el nmero de lactaciones y los niveles de produccin de leche. Anteriormente, algunos autores han informado sobre el impacto probable de la inflamacin y el estado de salud en la distribucin de drogas en todo el tejido de la ubre (Owens & Nickerson, 1990;. Ehinger et al, 2004; Gehring & Smith, 2006;. Cagnardi et al, 2010; Zonca et al. , 2011). Las respectivas capacidades glandulares y el nivel de secrecin de la leche de las vacas tambin pueden explicar las variaciones en la distribucin de drogas (Ehinger y Kietzmann, 2000b;. Zonca et al, 2011). Se observ una eliminacin comparativamente ms lento de frmaco IMM en vacas que producen un menor volumen de leche, pero este efecto an no est claro (Gehring & Smith, 2006). Tanto la cefalexina y kanamicina se detectaron en cada nivel de la ubre en todos los puntos de tiempo. Los dos frmacos tienen diferentes perfiles farmacocinticos: cefalexina expres una excelente capacidad de pasar de grandes conductos de la leche de los alvolos, la secrecin de los tejidos y, a continuacin an ms en el torrente sanguneo. La concentracin mxima se alcanz con relativa rapidez en cada capa y el limpiado de la cefalexina fue casi por completo del tejido de la ubre dentro de 24 h. La difusin de la cefalexina fue uniformemente a travs de la ubre con concentraciones tisulares, disminuyendo ligeramente al aumentar la distancia vertical desde la base del pezn, como se describe anteriormente para otras beta-lactamasas (Ehinger y Kietzmann, 2000a, b). Cefalexina es un cido dbil, con un alto grado de lpo-solubilidad y una baja tasa de unin a protenas. Treinta y seis por ciento de la cefalexina est presente en forma no ionizada en la leche a pH 6,8 (Ziv y Sulman, 1975). Esto es consistente con una distribucin amplia de drogas a lo largo de la ubre y en el plasma despus de la administracin IMM ( Ziv, 1980; Gruet et al, 2001.). Por el contrario, la kanamicina mostr una tasa de absorcin ms lenta, con grandes concentraciones de frmaco todava medibles 24 h despus de la administracin. Esta persistencia prolongada combinado con una distribucin uniforme a travs de las capas de la ubre indica la captacin de la droga dentro de la glndula mamaria. Este efecto se puede explicar por las caractersticas farmacolgicas de la kanamicina. La kanamicina tiene un pKa alta (7,2), por lo tanto, la mayora del frmaco se ioniza en la leche.

Adems, la kanamicina se une ampliamente a las protenas del tejido, lo que afecta la velocidad de eliminacin, prolongando de este modo la persistencia de la droga en la ubre (Gehring & Smith, 2006). Esto hace que las concentraciones altas de kanamicina, sea observable a lo largo de la ubre durante un largo perodo de tiempo. En este experimento, las concentraciones de la cefalexina y kanamicina en los tejidos glandulares fueron consistentes y dentro de la concentracin en la leche, que tambin se inform anteriormente (Ganiere y Denuault, 2009;. Pilar et al, 2009). Las concentraciones de frmaco detectado en biopsias mamarias superaron las concentraciones inhibitorias mnimas (CIM90) de los principales patgenos causantes de mastitis (Pilar et al., 2009). Aunque hay que reconocer que los tejidos estn hechos de distintos compartimentos, por ejemplo, la leche, los lquidos intersticiales, linfa, clulas en las que los medicamentos no estn distribuidos homogneamente necesariamente (Mouton et al., 2008), Se puede suponer que tanto la cefalexina y kanamicina estn presentes al mismo tiempo en cada nivel de la glndula mamaria despus de la administracin IMM. Adems, las concentraciones adecuadas tanto de la cefalexina y kanamicina para permitir que se produzca sinergismo, se logra en el tejido glandular. Se inform de interacciones sinrgicas entre cefalexina y kanamicina en medio de caldo Mueller-Hinton y la leche, lo que resulta en una actividad bactericida ms rpida y mejorada contra los principales patgenos de mastitis (Ganiere y Denuault, 2009). Bradley y Green (2009) reportaron que la administracin de la combinacin IMM kanamicina cefalexina es una cura efectiva contra; estreptococos y estafilococos, y por infecciones inducidas por coliformes. El presente experimento demostr que grandes concentraciones de ambos frmacos puede actuar en el tejido glandular durante un perodo suficientemente largo de tiempo para hacer de la combinacin kanamicina cefalexina, una opcin adecuada para el tratamiento de infecciones intramamarias, incluso en el tejido mamario ms profundo. Este es el primero estudio de investigacin de las variaciones en las concentraciones de frmaco respectivas en el tejido de la ubre despus de la infusin IMM de una combinacin de kanamicina cefalexina en vacas lactantes en vivo. La dinmica de difusin de ambos compuestos reflejan una amplia distribucin a lo largo de la ubre y la persistencia de la concentracin adecuada para permitir que la actividad sinrgica entre los dos antibiticos que deben alcanzarse en el tejido mamario. REFERENCIAS Bradley, AJ & Green , MJ ( 2009 ) Factores que afectan a la curacin en el tratamiento de la mastitis clnica bovina con las preparaciones intramamarias a base de cefalosporina . Journal of Dairy Science , 92, 1941-1953 . Cagnardi , P., Villa, R., Gallo, M , Locatelli , C., Carli , S., Moroni, P. & Zonca , A. ( 2010 ) Cefoperazona comportamiento preparacin de sodio despus de la administracin intramamaria en vacas sanas e infectadas . Journal of Dairy Science , 93, 4105-4110 . Ehinger , A. M. Y Kietzmann , M. ( 2000a ) La distribucin tisular de oxacilina y ampicilina en el aislado ubre bovina perfundido . Revista de Medicina Veterinaria. Serie A, 47 , 157-168 . Ehinger , A. M. Y Kietzmann , M. ( 2000b ) Distribucin de tejidos de bencilpenicilina despus de la administracin intramamaria en el aislado ubre bovina perfundido . Diario de Farmacologa y Teraputica Veterinaria , 23, 303-310 .

Ehinger, AM, Baumer, W., Zerbe, H., Ehinger, B. & Kietzmann, M. (2004) Distribucin de bencilpenicilina aplicados intracisternalmente en los tejidos drusos de la ubre bovina: dependencia de salud. De la Prctica Veterinaria, 32, 79-83. Ehinger , AM, Schmidt, H. & Kietzmann , M. ( 2006 ) Distribucion tisular de la cefquinoma despus de la administracin intramamaria y "sistmica'' en el aislado ubre bovina perfundido . El Veterinary Journal , 172, 147-153 . Franklin , A. , Horn af Rantzien , M., Obel , N., Ostensson , K. & Astro m , G. ( 1986 ) Las concentraciones de la penicilina, la estreptomicina y la espiramicina en los lquidos tisulares ubres bovinas. American Journal of Veterinary Research , 47, 804-807 . Ganiere , JP y Denuault , L. ( 2009 ) Las interacciones sinrgicas entre cefalexina y kanamicina en medio de caldo de Mueller- Hinton y en la leche . Journal of Applied Microbiology , 107, 117-125 . Gehring , R. & Smith , G. W. ( 2006 ) Una visin general de los factores que afectan a la disposicin de las preparaciones intramamarias que se usan para tratar la mastitis bovina. Diario de Farmacologa y Teraputica Veterinaria , 4, 237-241 . Gruet , P., Maincent , P., Berthelot , X. y Kaltsatos , V. ( 2001 ) La mastitis bovina y la administracin de frmacos por va intramamaria : balance y perspectivas. Comentarios Advanced Drug Delivery , 50 , 245-259 . Kietzmann , M. Braun , M. Schneider, M. & Pankow , R. ( 2008 ) La distribucin tisular de marbofloxacino despus de la administracin Sistmica en el aislado de la ubre bovina perfundido. the Veterinary Journal , 178, 115-118 . Kietzmann , M., Niedorf , F. & Gossellin , J. ( 2010 ) La distribucin tisular de cloxacilina despus de la administracin intramamaria en el aislado ubre bovina perfundido . Investigacin Veterinaria de BMC , 6 , 46 . Moore , G. A. Y Heider , L. E. ( 1984 ) El tratamiento de la mastitis . En las Clnicas Veterinarias de Norteamrica . Large Animal Practice , 6, 323-333 . Mouton , JW, Theuretzbacher , U., Craig, WA, Tulkens , PM, Derendorf , H. & Cars, O. ( 2008 ) Las concentraciones tisulares : alguna vez aprendemos ? Journal of Antimicrobial Chemotherapy , 61, 235-237 . Owens , W. E. Y Nickerson , SC ( 1990 ) Tratamiento de la mastitis por Staphylococcus aureus con penicilina y novobiocina : concentraciones de antibitico, y el estado bacteriolgico en la leche y el tejido mamario . Journal of Dairy Science , 1, 115-124 . Owens, W. E. , Xiang, Z.Y. , Ray, C. H. Y Nickerson , SC ( 1990 ) Determinacin de las concentraciones de ceftiofur en la leche y tejido mamario despus de la terapia intramamaria e intramuscular . Journal of Dairy Science , 12, 3.449-3.456 . Pilar, CM, gobio, L., Draghi, D., Grover, P. & Thornsberry, C. (2009) Evaluacin de la sensibilidad in vitro de los patgenos causantes de mastitis bovina a una combinacin de kanamicina y cefalexina: recomendaciones para una prueba de difusin en disco. Journal of Dairy Science, 92, 6217-6227. Zeitlin, I. J. Y Eshraghi, HR (2002) La liberacin y la accin vascular de la bradicinina en el aislado ubre bovina perfundido. Journal of Physiology, 543, 221-231. Ziv, GJ (1980) La seleccin de medicamentos y el uso en la mastitis: sistmica vs terapia local. Revista de la Asociacin Americana de Medicina Veterinaria, 15, 11091115.

Ziv, G. & Sulman, F.G. (1975) La absorcin de los antibiticos por la ubre bovina. Journal of Dairy Science, 11, 1637-1644. Zonca, A., Gallo, M., Locatelli, C., Carli, S., Moroni, P., Villa, R. & Cagnardi, P. (2011) Cefquinoma comportamiento sulfato despus de la administracin intramamaria en vacas sanas e infectadas. Journal of Dairy Science, 94, 3455-3461.