El CO2 es un producto de desecho del organismo .

Todos al respirar metemos aire en el cuerpo cargadito de oxgeno (en unos lugares ms que en otros) y expulsamos aire cargadito de dixido de carbono. Por qu? Porque al llevarse a cabo todos los procesos metablicos, se produce una buena cantidad de CO2, como si furamos chimeneas que echamos humo, y hace falta expulsarlo para que no nos afecte. Y qu tiene de malo el CO2 para nosotros para querer echarlo? Principalmente, que el CO2 que va en la sangre, cuando llega a una zona del cerebro denominada centro respiratorio, localizada en el bulbo raqudeo, se deprima (dicho de otra manera, que disminuya su rendimiento, su forma de actuar) y que como consecuencia, empecemos a respirar ms levemente y la frecuencia cardiaca aumente, ya que el cuerpo nota qu e hay ms CO2 de la cuenta que es llevado por los glbulos rojos de manera que no tienen capacidad para llevar mucho oxgeno (es como si un glbulo rojo llevara un bolso petadito de dixido de carbono y tuviera poco espacio para llevar el oxgeno), con lo que se intenta llevar ms rpidamente el poco oxgeno que se consigue a las clulas y as cubrir sus necesidades. Y hay sntomas y signos de la excesiva cantidad de CO2 en el organismo? Pues s: dolor de cabeza, sensacin de asfixia, palpitaciones, sudoracin y visin borrosa, todo eso acompaado de piel blanco-azulada. Como podis comprobar, no es muy bueno que digamos para la salud. Metabolismo El metabolismo es el conjunto de reacciones bioqumicas y procesos fsico-qumicos que ocurren en una clula 1 y en el organismo. Estos complejos procesos interrelacionados son la base de la vida a escala molecular, y permiten las diversas actividades de las clulas: crecer, reproducirse, mantener sus estructuras, responder a estmulos, etc. El metabolismo se divide en dos procesos conjugados: catabolismo y anabolismo. Las reacciones catablicas liberan energa; un ejemplo es la gluclisis, un proceso de degradacin de compuestos como la glucosa, cuya reaccin resulta en la liberacin de la energa retenida en sus enlaces qumicos. Las reacciones anablicas , en cambio, utilizan esta energa liberada para recomponer enlaces qumicos y construir componentes de las clulas como lo son las protenas y los cidos nucleicos. El catabolismo y el anabolismo son procesos acoplados que hacen al metabolismo en conjunto, puesto que cada uno depende del otro. La economa que la actividad celular impone sobre sus recursos obliga a organizar estrictamente las reacciones qumicas del metabolismo en vas o rutas metablicas, donde un compuesto qumico (sustrato) es transformado en otro (producto), y este a su vez funciona como sustrato para generar otro producto, siguiendo una secuencia de reacciones bajo la intervencin de diferentes enzimas (generalmente una para cada sustrato-reaccin). Las enzimas son cruciales en el metabolismo porque agilizan las reacciones fsico-qumicas, pues hacen que posibles reacciones termodinmicas deseadas pero "desfavorables", mediante un acoplamiento, resulten en reacciones favorables. Las enzimas tambin se comportan como factores reguladores de las vas metablicas, modificando su funcionalidad y por ende, la actividad completa de la va metablica en respuesta al ambiente y necesidades de la clula, o segn seales de otras clulas. El metabolismo de un organismo determina qu sustancias encontrar nutritivas y cules encontrar txicas. Por ejemplo, algunas procariotas utilizan sulfuro de hidrgeno como nutriente, pero este gas es venenoso para 2 los animales. La velocidad del metabolismo, el rango metablico, tambin influye en cunto alimento va a requerir un organismo. Una caracterstica del metabolismo es la similitud de las rutas metablicas bsicas incluso entre especies muy diferentes. Por ejemplo: la secuencia de pasos qumicos en una va metablica como el ciclo de Krebs es universal entre clulas vivientes tan diversas como la bacteria unicelular Escherichia coli y organismos 3 pluricelulares como el elefante. Esta estructura metablica compartida es muy probablemente el resultado de la alta eficiencia de estas rutas, y de su temprana aparicin en la historia evolutiva.

Catabolismo El catabolismo es el conjunto de procesos metablicos que liberan energa. Estos incluyen degradacin y oxidacin de molculas de alimento, as como reacciones que retienen la energa del Sol. El propsito de ests reacciones catablicas es proveer energa, poder reductor y componentes necesitados por reacciones anablicas. La naturaleza de estas reacciones catablicas difiere de organismo en organismo. Sin embargo, estas diferentes formas de catabolismo dependen de reacciones de reduccin-oxidacin que involucran transferencia de electrones de molculas donantes (como las molculas orgnicas, agua, amonaco, sulfuro de hidrgeno e iones ferrosos), a aceptores de dichos electrones como el oxgeno, el nitrato o el sulfato.
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En los animales, estas reacciones conllevan la degradacin de molculas orgnicas complejas a otras ms simples, como dixido de carbono y agua. En organismos fotosintticos como plantas y cianobacteria, estas transferencias de electrones no liberan energa, pero son usadas como un medio para almacenar energa solar.
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El conjunto de reacciones catablicas ms comn en animales puede ser separado en tres etapas distintas. En la primera, molculas orgnicas grandes como las protenas, polisacridos o lpidos son digeridos en componentes ms pequeos fuera de las clulas. Luego, estas molculas pequeas son llevadas a las clulas y convertidas en molculas an ms pequeas, generalmente acetilos que se unen covalentemente a la coenzima A, para formar la acetil-coenzima A, que libera energa. Finalmente, el grupo acetil en la molcula de acetil CoA es oxidado a agua y dixido de carbono, liberando energa que se retiene al reducir la coenzima nicotinamida adenina dinucletido (NAD ) en NADH. Energa de compuestos orgnicos El catabolismo de carbohidratos es la degradacin de los hidratos de carbono en unidades menores. Los carbohidratos son usualmente tomados por la clula una vez que fueron digeridos en monosacridos. transformados en piruvato y algunas molculas de ATP son generadas.
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Una vez

dentro de la clula, la ruta de degradacin es la gluclisis, donde los azcares como la glucosa y la fructosa son El piruvato o cido pirvico es un intermediario en varias rutas metablicas, pero la mayora es convertido en acetil CoA y cedido al ciclo de Krebs. Aunque ms ATP es generado en el ciclo, el producto ms importante es el NADH, sintetizado a partir del NAD por la oxidacin del acetil-CoA. La oxidacin libera dixido de carbono como producto de desecho. Una ruta alternativa para la degradacin de la glucosa es la ruta pentosa-fosfato, que reduce la coenzima NADPH y produce azcares de 5 carbonos como la ribosa, el azcar que forma parte de los cidos nucleicos. Las grasas son catalizadas por la hidrlisis a cidos grasos y glicerol. El glicerol entra en la gluclisis y los cidos grasos son degradados por beta oxidacin para liberar acetil CoA, que es luego cedido al nombrado ciclo de Krebs. Debido a sus proporciones altas del grupo metileno, los cidos grasos liberan ms energa en su oxidacin que los carbohidratos, ya que los carbohidratos como la glucosa tienen ms oxgeno en sus estructuras. Los aminocidos son usados principalmente para sintentizar protenas y otras biomolculas; slo los excedentes son oxidados a urea y dixido de carbono como fuente de energa.
46 +

Esta ruta oxidativa empieza

con la eliminacin del grupo amino por una aminotransferasa. El grupo amino es cedido al ciclo de la urea,

dejando un esqueleto carbnico en forma de cetocido. transformados en glucosa mediante gluconeognesis. Anabolismo

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Los aminocidos glucognicos pueden ser

El anabolismo es el conjunto de procesos metablicos constructivos en donde la energa liberada por el catabolismo es utilizada para sintetizar molculas complejas. En general, las molculas complejas que dan lugar a estructuras celulares son construidas a partir de precursores simples. El anabolismo involucra tres facetas. Primero, la produccin de precursores como aminocidos, monosacridos, isoprenoides y nucletidos; segundo, su activacin en reactivos usando energa del ATP; y tercero, el conjunto de estos precursores en molculas ms complejas como protenas, polisacridos, lpidos y cidos nucleicos. Los organismos difieren en cuntas molculas pueden sintetizar por s mismos en sus clulas. Los organismos auttrofos, como las plantas, pueden construir molculas orgnicas complejas y protenas por s mismos a partir molculas simples como dixido de carbono y agua. Los organismos hetertrofos, en cambio, requieren de una fuente de sustancias ms complejas, como monosacridos y aminocidos, para producir estas molculas complejas. Los organismos pueden ser clasificados por su fuente de energa: Fotoauttrofos y fotohetertrofos, que obtienen la energa del Sol. Quimiohetertrofos y quimioauttrofos, que obtienen la energa mediante reacciones oxidativas.

Fijacin del carbono La fotosntesis es la sntesis de glucosa a partir de energa solar, dixido de carbono (CO 2) y agua (H2O), con oxgeno como producto de desecho. Este proceso utiliza el ATP y el NADPH producido por los centros de reaccin fotosintticos para convertir el CO2 en 3-fosfoglicerato, que puede ser convertido en glucosa. Esta reaccin de fijacin del CO 2 es llevada a cabo por la enzima RuBisCO como parte del ciclo de Calvin.
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Se dan

tres tipos de fotosntesis en las plantas; fijacin del carbono C3, fijacin del carbono C4 y fotosntesis CAM. Estos difieren en la va que el CO2 sigue en el ciclo de Calvin, con plantas C3 que fijan el CO 2 directamente, mientras que las fotosntesis C4 y CAM incorporan el CO 2 en otros compuestos primero como adaptaciones para soportar la luz solar intensa y las condiciones secas.
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En procariotas fotosintticas, los mecanismos de la fijacin son ms diversos. El CO2 puede ser fijado por el ciclo de Calvin, y asimismo por el Ciclo de Krebs inverso, inorgnicos para llevar a cabo la reaccin.
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o la carboxilacin del acetil-CoA.

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Los

quimioauttrofos tambin pueden fijar el CO2 mediante el ciclo de Calvin, pero utilizan la energa de compuestos

Metodos de Analisis 7.1 Principios generales El mtodo elegido para el anlisis deber ser adecuado al fin para el que se requieren los resultados. Cuando se aplique un mtodo de anlisis a materiales de ensayo, debern conocerse sus caractersticas de rendimiento en el laboratorio. Todo mtodo de anlisis aplicado a materiales de ensayo deber vigilarse de modo constante y llevar asociados procedimientos de control de calidad. El analista que aplique un mtodo de anlisis a materiales de ensayo deber haber demostrado su competencia al respecto. Deber haber pruebas documentales de que todos estos principios se respetan. 7.2 Eleccin del mtodo El anlisis de alimentos puede ser necesario para diversos fines, como por ejemplo: 1. Control de sustancias prohibidas encuestas aplicacin de normas 2. Control de sustancias permitidas encuestas aplicacin de normas 3. Normas sobre composicin encuestas autenticidad aplicacin de normas 4. Composicin de alimentos 5. Ingesta alimentaria encuestas encuestas

Todos los mtodos de anlisis entraan incertidumbre en cuanto a los resultados que producen, lo cual ha de tenerse en cuenta al seleccionar el mtodo que habr de utilizarse con un determinado fin. Esta incertidumbre puede tener consecuencias importantes cuando se ha de adoptar una medida en relacin con un nivel particular de analito. No deber haber equvocos entre el cliente y el analista con respecto al modo en que han de utilizarse los datos para que ofrezcan resultados de "calidad" ("idneos para el fin a que estn destinados"). La situacin merece un examen ms detenido, por lo que a continuacin se analizan algunos de los principales factores indicados en el ejemplo. Tomemos un mtodo que, con un nivel de analito de 100 mg/kg, haya mostrado una desviacin estndar (DE) de 20 mg/kg durante su aplicacin en el laboratorio. Desde el punto de vista estadstico, existe una confianza del 95 por ciento de que mediciones repetidas con un material de ensayo que contenga 100 mg/kg estarn situadas dentro de 2xDE del valor verdadero, es decir entre 60 y 140 mg/kg. Por consiguiente, y para tener una

confianza del 95 por ciento de identificar todos los materiales de ensayo que contengan como mnimo 100 mg/kg, deber considerarse que todos los resultados incluidos en el intervalo entre 60 y 100 mg/kg proceden posiblemente de material que tena de hecho como mnimo 100 mg/kg. - Si se juzga la autenticidad de un producto por un contenido mnimo de 100 mg/kg de un componente especfico, cualquier material de ensayo que arroje un resultado incluido en el intervalo entre 60 y 100 mg/kg podr ser un "falso negativo", es decir que, si se examina ms detenidamente, podr demostrarse que contiene como mnimo 100 mg/kg. - A la inversa, deber reconocerse que cualquier resultado incluido en el intervalo entre 100 y 140 mg/kg procede posiblemente de un material que contena de hecho menos de 100 mg/kg. - Si el nivel mximo permitido de un aditivo es de 100 mg/kg, cualquier resultado incluido en el intervalo entre 100 y 140 mg/kg podr ser un "falso positivo", es decir que, si se examina ms detenidamente, podr demostrarse que procede de un material que contiene realmente menos de 100 mg/kg. - Cuanto menor sea la desviacin estndar, menor ser el intervalo de los resultados que exigen un anlisis ms detenido para evitar "falsos positivos" o "falsos negativos", por ejemplo con una DE de 10 el intervalo de confianza del 95 por ciento es de 80-120 mg/kg. - Es importante conocer el rendimiento actual del mtodo en el laboratorio: si se supone que la DE es 20, cuando de hecho es slo 10, se estn derrochando los esfuerzos con un nivel de reexamen del material de ensayo innecesariamente elevado, pero si la DE es en realidad 30, puede que algunos materiales se consideren aceptables cuando de hecho no lo son. - En el caso de sustancias prohibidas o con niveles mximos permitidos, puede que sea necesario tener en cuenta las consecuencias de tolerar falsos negativos; si una nica ingestin de alimentos contaminados entraa un riesgo considerable para el consumidor, una confianza del 95 por ciento de detectar positivos podr ser insuficiente y habr que considerar la posibilidad de escoger un parmetro analtico ms riguroso, pero si se fija un nivel mximo permitido, como en el caso de casi todos los aditivos y residuos, en una concentracin que pueda consumirse durante toda la vida sin riesgos apreciables, se podr aceptar un criterio pragmtico al establecer el nivel de confianza para detectar todos los "positivos". - Para los fines de una encuesta, los requisitos podrn ser menos estrictos. En tal caso, dado que no se adoptar ninguna medida atenindose a unos resultados aislados, y siempre que el mtodo de anlisis permita obtener, como promedio, el valor verdadero (es decir, no haya un sesgo sistemtico en lo que respecta a los datos, y el nmero de falsos positivos sea igual al de falsos negativos), el valor efectivo de la DE no tendr una importancia tan decisiva como para las actividades con fines de aplicacin de normas, ni tampoco ser tan importante conocer con tanta exactitud su valor actual. 7.2.1 Requisitos de rendimiento Los mtodos de anlisis han de elegirse teniendo en cuenta su rendimiento en relacin con los requisitos convenidos, los ms importantes de los cuales, desde el punto de vista tcnico, son los siguientes:

Exactitud

Falta de error sistemtico; grado en que los resultados medios de varias determinaciones se aproximaran al valor verdadero, en particular cuando se aproximaran a la concentracin en la que podra adoptarse una medida o, en el caso de una encuesta, por encima del intervalo de las concentraciones previstas.

Precisin

Grado de coincidencia entre repetidas determinaciones independientes realizadas con el mismo material de ensayo, en particular en concentraciones prximas a aquellas en las que podra adoptarse una medida o, en el caso de una encuesta, por encima del intervalo de las concentraciones previstas.

Lmite deteccin

de Especificado en funcin de un nivel dado de confianza en detectar la presencia de una sustancia que no debera estar presente o como una concentracin que debe ser, como mnimo, un factor de 3 por debajo del nivel en que podra ser necesaria una decisin.

Lmite determinacin: Sensibilidad

de Especificado en funcin del nivel ms bajo en el que pueda cuantificarse la concentracin con un grado dado de confianza. Cambio en la respuesta por unidad de concentracin, habitualmente especificada en concentraciones prximas a aqullas en las que podra adoptarse una medida.

Especificidad Ambito aplicacin Propiedades prcticas Fiabilidad

Grado en que otras sustancias (conocidas) pueden dar origen a una seal perturbadora. de Intervalo de matrices a las que se aplican las caractersticas de rendimiento.

Variedad de usos, pertinencia.

Resistencia, independencia relativa respecto de la destreza del analista.

Otras caractersticas que tal vez sea necesario tener en cuenta son la sencillez, rapidez v costo 7.2.2 Mtodos de referencia/oficiales Estos mtodos podrn ser especificados por los organismos reglamentarios con fines de aplicaciones de normas o estipulados por organizaciones comerciales como base para resolver diferencias. Ser necesario someterlos a un amplio proceso de ensayos entre laboratorios y documentar perfectamente sus caractersticas de rendimiento. La precisin de estos mtodos (es decir, la coincidencia entre los resultados obtenidos en momentos diferentes, por analistas diferentes o en laboratorios diferentes) es muy importante. Es posible que a veces estos mtodos no sean excesivamente exactos, es decir pueden estar sujetos a un error sistemtico que d lugar a un resultado incorrecto, pero que afecte a todos los laboratorios del mismo modo y no influya en la validez de la comparacin entre los resultados. Tambin puede haber procedimientos que den un resultado para un componente alimentario no tipificado, como por ejemplo la fibra diettica, que dependa del mtodo aplicado. Su caracterstica mas importante es su capacidad de producir resultados comparables en cualquier laboratorio competente. En estos casos, el mtodo ha de especificarse detalladamente y aplicarse con gran cuidado. Cualquier discrepancia con respecto al mtodo prescrito podra dar lugar a un error sistemtico que introducira un sesgo en todos los resultados de ese anlisis.

7.2.3 Mtodos ordinarios/oficiales Tambin estos mtodos pueden ser estipulados por organizaciones comerciales o por organismos reglamentarios; son mtodos que pueden aplicarse cotidianamente al trabajo ordinario. Se habrn sometido a numerosos ensayos comparados entre laboratorios, y aunque no suelen tener las mismas caractersticas de alto rendimiento que los mtodos de referencia, son ms rpidos, ms prcticos y menos costosos, y tienen una precisin y exactitud suficientes para la mayora de los materiales de ensayo. Deben presentar un grado aceptable de coincidencia con el mtodo de referencia en lo que respecta al valor "verdadero" del parmetro medido, en particular cuando ste est prximo a un nivel utilizado en la aplicacin de normas. Cuando quepan dudas sobre un determinado resultado, deber analizarse de nuevo el material de ensayo aplicando el mtodo de referencia. 7.2.4 Mtodos ordinarios/internos Puede tratarse de mtodos de anlisis elaborados en el laboratorio; aunque es posible que algunos sean mtodos nuevos, lo ms frecuente es que se basen en un mtodo oficial que se ha simplificado de algn modo para que resulte ms fcil, rpido, barato y cmodo de aplicar. Normalmente no se han sometido a ensayos entre laboratorios, pero muestran caractersticas de rendimiento (distintas de la reproducibilidad entre laboratorios) que son comparables a las del mtodo oficial. Al igual que otros mtodos ordinarios, debern coincidir perfectamente con el mtodo de referencia en lo que respecta a los valores prximos a un nivel utilizado en la aplicacin de normas, y si es probable que se ponga en duda un resultado, se aplicar el mtodo de referencia en un nuevo anlisis. 7.2.5 Mtodos de seleccin Cuando se prevea que el nivel del analito contenido en la mayora de los materiales de ensayo no tendr ulterior inters, podr utilizarse un mtodo de "seleccin" para seleccionar las muestras que merecen un examen ms detenido. Estos mtodos suelen basarse en una tcnica muy distinta de la utilizada en el mtodo de referencia. El mtodo de seleccin ser rpido, sencillo, resistente y prctico para el nmero (habitualmente) muy reducido de matrices en las que se utiliza ampliamente y, como indica su nombre, proporcionar un medio muy fiable para distinguir entre unos pocos materiales de ensayo en los que la concentracin de analito podra aproximarse al nivel en que han de adoptarse medidas (o superarlo) y un gran nmero de materiales en los que no se aproxima. Las caractersticas de rendimiento por las que ha de juzgarse que un mtodo de seleccin produce resultados de calidad sern por tanto muy distintas de las asociadas con un mtodo de referencia. Los criterios de la "idoneidad para los fines a los que est destinado" difieren notablemente, pero en ambos casos es igualmente importante, por lo que respecta a la garanta de la calidad, un buen conocimiento de las caractersticas de rendimiento que determinan la idoneidad de uno y otro para sus fines respectivos. 7.2.6 Procedimientos operativos estndar La expresin "procedimientos operativos estndar" (POE) se ha utilizado con anterioridad para describir sobre todo procedimientos administrativos y financieros, pero ahora se emplea cada vez ms en relacin con la documentacin de mtodos de anlisis con fines de garanta de la calidad. En este ltimo sentido, describe todos los aspectos de un mtodo de anlisis (utilizando a menudo un formato prescrito por la ISO) que permitir a otro analista repetir el anlisis en el futuro. Suele comprender secciones tales como Introduccin, Principios,

Seguridad, Ambito de aplicacin, Toma de muestras, Reactivos, Patrones, Aparatos, Procedimientos, Clculo y Control de calidad. En la medida en que forman parte del programa de GC, todos los mtodos de anlisis del laboratorio debern documentarse como POE. En el Manual de Calidad se establecer el procedimiento para aprobar un nuevo POE; de ordinario esto requerir un examen de la documentacin sobre el procedimiento y su validacin en el laboratorio por el jefe de seccin y el Director de Calidad. Deber ser fcil conseguir una lista de los POE utilizados en ese momento y las fuentes de otros mtodos documentados (por ejemplo, los de BSI, FIL, AOAC International) que se aplican en el laboratorio; cuando haya ms de una versin de un mtodo publicado, en la lista deber quedar claro qu versin se .utiliza en ese momento. 7.2.7 Autorizacin para modificar los mtodos Los analistas debern disponer de copias escritas de los mtodos utilizados y aplicar el mtodo exactamente como figura en ellas. No podrn efectuar modificaciones importantes en los mtodos sin estar autorizados para ello, y debern hacer constar las variaciones de poca importancia. La decisin de aplicar una versin diferente de un mtodo publicado corresponder al jefe de seccin y al Director de Calidad, quienes aprobarn tambin las variaciones en los POE del laboratorio, incluidos posibles cambios en el procedimiento o su ampliacin para abarcar nuevos alimentos. El proceso de aprobacin comprender un examen del grado en que es necesaria una revalidacin del mtodo, as como del resultado de cualquier revalidacin que sea necesaria. 7.3 Validacin de los mtodos de anlisis 7.3.1 Validacin inicial Todos los mtodos debern someterse a una validacin en el laboratorio antes de su utilizacin en el anlisis de un material de ensayo, debindose especificar en el programa de GC lo que esto representa. Los mtodos elaborados externamente debern comprobarse para demostrar que producen resultados fiables en las condiciones existentes en el laboratorio, aun cuando hayan sido objeto ya de un amplio proceso de validacin entre laboratorios por parte de organismos especializados. La finalidad ser verificar si las caractersticas de rendimiento conseguidas en el laboratorio son coherentes con las establecidas en la validacin entre laboratorios. El jefe de seccin y el Director de Calidad aprobarn el proceso que habr de seguirse para validar en el laboratorio un mtodo ensayado en colaboracin, el cual ser normalmente ms breve que el de validacin de un mtodo interno y podr limitarse a una evaluacin por parte de un solo analista. Este proceso incluir los siguientes aspectos: Exactitud Juzgada por el resultado obtenido con un material de referencia y por la "recuperacin" obtenida a partir de una muestra "marcada". Precisin Juzgada por un nmero convenido de muestras replicadas y anlisis mltiples en diferentes das con el mismo material de ensayo. Especificidad Juzgada por la ausencia de seales perturbadoras en un "campo" en blanco de la matriz prevista. Lmite deteccin de Juzgado o bien por determinaciones mltiples en un campo en blanco, o bien, si resulta y/o ms conveniente, en un campo en blanco marcado a un nivel considerablemente por debajo

determinacin Sensibilidad

del nivel de accin previsto. Juzgada por la capacidad de distinguir entre concentraciones muy similares en la regin del nivel de accin.

Ambito posibilidad aplicacin

y Si un mtodo ha de utilizarse en una matriz distinta de aqulla en la se haba validado de originalmente, deber comprobarse su rendimiento en la matriz prevista. Los mtodos pueden diferir en su rendimiento con matrices aparentemente muy similares; por ejemplo, estn bien documentadas las diferencias entre cereales, as como las diferencias entre especies en el caso de la carne.

La validacin de un mtodo elaborado en el propio laboratorio debe identificar adems los factores que normalmente se revelan en el ensayo entre laboratorios, por consiguiente incluir una demostracin de la robustez del mtodo (es decir, de su capacidad de funcional igualmente bien en manos de diversos analistas) y la identificacin de todos los aspectos de: mtodo que tienen una importancia decisiva para su capacidad de producir datos correctos, como por ejemplo la calidad de los reactivos, las precauciones contra las prdidas, el rendimiento de la columna (prdida progresiva de poder de resolucin, picos "fantasmas", contaminacin cruzada). 7.3.2 Validacin sobre la marcha Es necesario algn tipo de comprobacin sobre la marcha de que el mtodo sigue funcionando debidamente. La naturaleza y frecuencia de estas comprobaciones dependern de la complejidad del mtodo, el grado de pericia necesario, el "historial" de fiabilidad del mtodo, el nmero de muestras analizadas, la modalidad de utilizacin (sobre la marcha o espordica) y la calidad de los datos necesarios. Para los fines de la garanta de la calidad, las comprobaciones sobre la marcha de la validez del mtodo debern ser acordadas por el jefe de la seccin y el Director de Calidad y ser documentadas en el POE para que los usuarios del mtodo estn al tanto de los requisitos. Las comprobaciones sobre la marcha suelen revestir la forma de algunos de los procedimientos de GC que se examinan a continuacin, o de todos ellos. 7.4 Procedimientos de control de calidad Estos procedimientos tienen como finalidad comprobar sistemticamente la validez de cada serie de resultados; la forma que asuman depender de factores como los indicados en el prrafo anterior. En general, su objetivo ser mostrar que se est logrando el rendimiento previsto del mtodo, que la contaminacin no constituye un problema, que la recuperacin del material aadido alcanza el nivel previsto, que el grado de coincidencia entre las rplicas y entre los anlisis mltiples es satisfactorio y que los resultados analticos estn en consonancia con los previstos. Ser necesario aplicar algunas o la totalidad de las medidas de control que se indican a continuacin, las cuales debern figurar en el POE relativo al mtodo. 7.4.1 Controles del muestreo En algunos casos puede ser importante comprobar que la porcin de ensayo es representativa del material recibido; ser necesario demostrar que se ha tenido en cuenta la posibilidad de una distribucin desigual del analito en la matriz (por ejemplo, aflatoxina en nueces e higos secos, o plaguicidas en algunas frutas y

hortalizas de hoja) y que los resultados de una serie de porciones de ensayo extradas del mismo material de ensayo coinciden en la medida que caba prever por las caractersticas conocidas de repetibilidad del mtodo. 7.4.2 Determinaciones replicadas Cuando es costumbre notificar los resultados sobre la base de una nica determinacin, de vez en cuando se debern incluir en una serie analtica determinaciones replicadas del mismo material de ensayo. Es preferible que las rplicas se seleccionen al azar en la serie, y lo ideal sera que el analista no estuviera informado de su presencia. 7.4.3 Controles positivos Cuando se prev que la mayora de las porciones de ensayo no contendrn cantidades significativas del analito, es importante analizar una porcin de ensayo a la que se haya aadido analito y demostrar que el anlisis produce el resultado previsto. Este procedimiento puede utilizarse para comprobar la eficacia de los ensayos de seleccin, en anlisis de presencia/ausencia o para comprobar la capacidad de identificar correctamente porciones de ensayo que contienen analito al nivel de accin. Podr aplicarse para evaluar la incidencia de falsos negativos. 7.4.4 Controles negativos En el caso contrario, cuando casi todas las porciones de ensayo contienen cantidades significativas del analito, es importante incluir cierto nmero de porciones de ensayo que estn prcticamente exentas de analito con el fin de proporcionar confianza en que los niveles de contaminacin del laboratorio son aceptables. Este empleo del "campo en blanco" - muestra de la matriz que est prcticamente exenta de analito - es especialmente importante en los anlisis de trazas de aditivos, residuos y contaminantes; es preferible a los reactivos en blanco - que no contienen matriz de ensayo - ya que, adems de vigilar la contaminacin durante el anlisis, permite evaluar la especificidad del mtodo para discriminar los compuestos que interfieren en la matriz. Los resultados obtenidos con los "campos en blanco" suelen servir tambin de base para determinar los lmites de deteccin y de determinacin. En la otra forma de control negativo se emplean materiales de ensayo de los que se sabe que contienen analito en niveles ligeramente por debajo del nivel de accin, cuyos resultados permiten comprobar la incidencia de los falsos positivos. 7.4.5 Patrones internos Cuando han de efectuarse numerosos anlisis similares durante un cierto perodo de tiempo, es til comprobar la coherencia entre los datos mediante el uso de patrones internos. Para ello se homogeneza una cantidad relativamente grande de la matriz que contiene el analito en un nivel apropiado, la cual se homogeneza y se conserva en unas condiciones en que el analito se mantiene estable. A intervalos especificados, se incluye en una serie normal de anlisis una porcin de ensayo extrada de este patrn interno. Es posible as comprobar si el mtodo produce datos coherentes durante un perodo de tiempo y estimar la precisin a largo plazo que se est consiguiendo. En la Seccin 7.4.7 se examinan posibles modos de utilizar los datos sin elaborar con fines de garanta de la calidad.

La realizacin de un gran nmero de anlisis mltiples con el patrn interno durante un breve perodo permite calcular la precisin (repetibilidad) del mtodo. Si ste se ha sometido a un ensayo en colaboracin, podr compararse la precisin del laboratorio con la conseguida por los laboratorios colaboradores. 7.4.6 Materiales de referencia certificados Se trata de materiales de ensayo homogneos en los que el analito ha sido determinado cuidadosamente, normalmente por una serie de laboratorios especializados y preferiblemente utilizando una serie de tcnicas analticas diferentes, cuyos datos se utilizan para certificar los materiales en funcin de la concentracin del analito y la incertidumbre que plantea esta cifra. Analizando peridicamente un material de referencia certificado (MRC) es posible comprobar la exactitud de los resultados que se estn obteniendo. El patrn interno demuestra la precisin (coherencia) de los datos que se estn obteniendo, mientras que los MRC demuestran la exactitud, es decir el grado en que los resultados se aproximan al valor correcto. Aunque en principio podran utilizarse MRC para ambos fines, no es habitual hacerlo, en primer lugar porque los MRC slo estn disponibles en cantidades limitadas y deben reservarse para el fin al que estn destinados, y en segundo lugar porque es raro encontrar un MRC que consista en el analito correcto en una concentracin pertinente en la matriz necesaria. Un MRC que no rene estos criterios es de hecho menos vlido que un patrn interno para comprobar la precisin de un mtodo. 7.4.7 Grficos de control Como se indica en la Seccin 7.4.5, el uso de un patrn interno permite obtener informacin importante acerca de la precisin de un mtodo utilizado en el laboratorio y reconocer las modificaciones introducidas en l. Llevando a cabo un gran nmero de determinaciones con un patrn cuando el mtodo parece estar funcionando correctamente es posible calcular la desviacin media y estndar de la concentracin de analito. Los resultados de los anlisis del patrn efectuados peridicamente como parte de una serie normal de anlisis permiten determinar si el mtodo est bajo control, es decir si el patrn est dando resultados coherentes con la estimacin original de la desviacin media y estndar. La informacin puede representarse visualmente de varias maneras, de las cuales la ms sencilla es utilizada es el grfico de control descrito por Garfield (Ref. 2.1). Garfield recomienda que la medicin inicial de control comprenda de 2 a 5 determinaciones efectuadas numerosas veces durante un perodo especificado. Se ha indicado que son necesarios 25 conjuntos de mediciones para las estimaciones iniciales de la media de las medias y la desviacin estndar. La media de las medias se utiliza como punto medio del grfico, mientras que los lmites de advertencia se sealan a una desviacin estndar de +2 y -2. Sobre la base de una distribucin normal, el 95,5 por ciento de las medias de los conjuntos subsiguientes de determinaciones se situar entre desviaciones estndar de +2 y -2, y el 99,7 por ciento entre desviaciones estndar de +3 y -3. En el Cuadro 7.1 infra se ofrecen algunos indicios frecuentes de que el mtodo de anlisis se est descontrolando. El procedimiento susodicho se basa en las medias de grupos de determinaciones. Sin embargo, muchos laboratorios notifican resultados basados en determinaciones aisladas, por lo que deberan utilizar grficos de control basados en puntos que representan determinaciones aisladas; si es as, el clculo inicial de la desviacin media y estndar debe basarse tambin en determinaciones aisladas. El valor absoluto de la desviacin estndar ser mayor, pero ello no afecta a la significacin estadstica de las modalidades en las observaciones.

CUADRO 7.1 GRAFICOS DE CONTROL: ALGUNOS INDICIOS Y CAUSAS DEL DESCONTROL DE UN METODO Observaciones 1 o ms puntos fuera de 3xDE Posible causa Rendimiento del analista, tcnica defectuosa, desviacin respecto del procedimiento 2 puntos consecutivos fuera de 2xDE 4 puntos consecutivos fuera de 2xDE Como en el caso anterior Como en el caso anterior

7* puntos consecutivos, todos ellos por Preparacin incorrecta de los patrones o de los reactivos, calibracin encima o por debajo media incorrecta de los instrumentos, error del analista, contaminacin

7* o ms puntos consecutivos, todos Deterioro de los patrones o de los reactivos ellos en aumento 7* o ms puntos consecutivos ellos en Evaporacin de disolvente del patrn deterioro de los reactivos disminucin, todos * una sucesin de 4 o ms puntos consecutivos puede activar una investigacin si las consecuencias de un cambio/derivacin en los resultados son graves para el cliente. 7.5 Procedimientos de garanta de la calidad 7.5.1 Rendimiento de los mtodos de anlisis En el POE para cada mtodo de anlisis se especificarn los procedimientos de control de calidad indicados en las Secciones 7.4.1 a7.4.6 . Tambin se especificar de ordinario el tamao de la partida y, cuando proceda, la frecuencia normal de: - las muestras con "reactivo en blanco", as como el valor mximo aceptable y la desviacin estndar; - las muestras con campo en blanco, as como el valor mximo aceptable y la desviacin estndar; - las muestras con campo en blanco marcadas, junto con los niveles de marcado y la magnitud de las recuperaciones aceptables en cada nivel; - las rplicas no descubiertas, y la diferencia mxima aceptable; - los patrones internos, con su valor certificado e incertidumbre; - material de referencia certificado - con su valor certificado e incertidumbre. En los POE se especificarn tambin las medidas que han de adoptarse cuando las comprobaciones del control de calidad muestran que el mtodo no satisface los criterios estipulados. Esto puede llevar a interrumpir los anlisis con materiales de ensayo hasta que se haya restablecido un rendimiento satisfactorio (de ser posible, sobre la base de una medida correctiva determinada); en casos menos extremos, podr especificarse un aumento del grado de control de calidad hasta que se hayan determinado y rectificado las causas de defectos

de poca importancia. Como en el caso de otros aspectos de la garanta de la calidad, es necesario especificar en el programa qu medidas han de adoptarse, quin debe aplicarlas y cmo se han de verificar. 7.5.2 Trazabilidad de una medicin Con el fin de proporcionar confianza en que la cifra notificada es correcta, el procedimiento analtico debe basarse en un "patrn" al que pueda retrotraerse directamente el valor medido. En muchos casos, este "patrn" ser una muestra de analito puro. As pues, la trazabilidad depende normalmente de los datos que justifican: - que la balanza en la que se ha pesado una porcin conocida de analito puro haba sido calibrada correctamente y funcionaba debidamente; - que el instrumental de vidrio (pipetas, matraces volumtricos, etc.) en que se ha preparado la disolucin patrn primaria -y se han efectuado las diluciones subsiguientes- haba sido calibrado correctamente, al igual que el utilizado para las alcuotas de las muestras "marcadas", etc.; - que, si se utiliza alguna propiedad fsica (por ejemplo, el coeficiente de extincin en una longitud de onda especfica) para verificar la pureza del patrn primario, se han verificado debidamente la calibracin de la longitud de onda del instrumental y la de la absorbencia; - que si la medicin puede verificarse mediante comparacin con la respuesta de un patrn interno o de alguna otra sustancia, se ha verificado la magnitud relativa de la seal procedente de ambas sustancias, se ha demostrado que es constante en una gama suficiente de concentraciones y se han hecho todas las mediciones analticas dentro de esta gama lineal. La exactitud (y su incertidumbre) necesaria para cada etapa del proceso de demostracin por el que se establece la trazabilidad de la medicin final debe tener en cuenta las caractersticas globales de rendimiento del mtodo de anlisis. Los criterios de trazabilidad sern mucho ms importantes en un mtodo con una desviacin estndar relativa (DER) de 0,1 por ciento en la concentracin medida que en uno con una DER de 20 por ciento. No obstante, para los fines de la garanta de la calidad la trazabilidad de una medicin debe ser siempre verificable por medio de pruebas documentales; sin una trazabilidad documentada no puede haber confianza en el resultado. En cada POE deber indicarse la va a travs de la cual los resultados pueden retrotraerse a un patrn.