TEMA 8. REGULACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA Control de la actividad enzimtica. Modulacin covalente. Enzimas alostricas. Activacin por protelisis. Zimgenos.

Isoenzimas

Regulacin de la actividad enzimtica

Existen mltiples mecanismos para el control de la actividad enzimtica y, por tanto, del metabolismo. Disponibilidad de enzima. Las concentraciones de sustrato y los productos finales. Modulacin alostrica. Modificacin covalente. Activacin por protelisis (zimgenos). Isoenzimas

ISOENZIMAS

Las concentraciones de sustrato y los productos finales

La velocidad de una reaccin enzimtica depende de la concentracin de sustrato. -La actividad enzimtica en las clulas se ajusta a las necesidades fisiolgicas, cambiantes permanentemente. - La enzima que cataliza una de las primeras etapas suele ser reguladora - A [S] bajas, la actividad es proporcional a los niveles de S. - En condiciones fisiolgicas, la [S] se encuentra por debajo o prxima a la Km, as los niveles de S, determinarn la mayor o menor actividad. A mayor [S] mayor actividad Adems, la presencia de los productos finales puede hacer que la reaccin sea ms lenta, o incluso invertir su sentido

ENZIMAS ALOSTRICAS
Regulacin por retroinhibicin o Feed- back negativo Tanto la inhibicin como la activacin son reversibles.
El agente modificador acta unindose a la enzima en un sitio diferente al sitio cataltico

Estas enzimas alostricas, adems del sitio cataltico, presentan otros sitios reguladores donde se unirn molculas que actan sobre su actividad.

Moduladores, modificadores o efectores alostricos Positivos o negativos.

Efector Homotrpico: el propio sustrato acta como efector positivo. Efector Heterotrpico: efector diferente del sustrato.

ENZIMAS ALOSTRICAS
Los enzimas alostricos se caracterizan por: Su actividad est modulada por ligandos que se unen en sitios distintos al centro activo (efectores alostricos, sitio alostrico)

Unin reversible Estimulacin (efector +) / Inhibicin (efector -) Son protenas oligomricas con mltiples sitios de unin (mn. 2) Presentan el fenmeno de cooperatividad Presentan cintica de tipo sigmoide

retroinhibicin

Los moduladores alostricos (-) no deben ser confundidos con los Inhibidores. Sus efectos cinticos son diferentes. Forma T No miden cambios conformacionales entre formas activas e inactivas de la enzima.
Forma R

Modifican la conformacin de la E

HETEROALOSTERISMO. EFECTORES HETEROTRPICOS

La principal Ventaja el control alostrico se encuentra en los efectores heteroalostricos. Si una molcula de enzima puede existir en dos formas , T y R, que difieren notablemente en la fuerza con la que se unen al sustrato (Km) o la velocidad cataltica (Vmax), su cintica puede controlarse por cualquier molcula que, al fijarse a la protena, desplace el equilibrio TR. As, los inhibidores alostricos favorecen el estado T y los activadores el estado R.

Unin no cooperativa Unin cooperativa

Cintica enzimas alostricos

REGULACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

ENZIMAS ALOSTRICAS Modificacin enzimtica inmediata Curvas sigmoideas: las enzimas con este tipo de cintica pueden regular la [S]

Modelos de alosterismo

1- Modelo de Monod, modelo concertado

2- Modelo de Koshland, modelo secuencial

Ejemplo de enzimas alostricas: Aspartato transcarbamilasa (ATCasa)

+
ATP

Aspartato transcarbamilasa

REGULACIN POR MODIFICACIN COVALENTE

REGULACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA MEDIANTE MODIFICACIN COVALENTE POR FOSFORILACIN

Adicin o eliminacin de grupos fosfato sobre residuos de Serina, Treonina o Tirosina especficos de la enzima.

ATP
QUINASA DE PROTENAS

ADP

Quinasas de protenas familia de

enzimas que catalizan reacciones de fosforilacin utilizan como dador del grupo fosfato al ATP.
ENZIMA
OH

ENZIMA
OPO3=

Fosfatasas de protenas separan

los grupos fosfatos de las enzimas fosforiladas
HPO4=
FOSFATASA DE PROTENAS

H2O

Activacin proteoltica: Activacin de zimgenos por escisin proteoltica

Algunos enzimas no se sintetizan como tales, sino como protenas precursoras sin actividad enzimtica. Estas protenas se llaman proenzimas o zimgenos. Para activarse, los zimgenos sufren un ataque hidroltico que origina la liberacin de uno o varios pptidos. El resto de la molcula proteica adopta la conformacin y las propiedades del enzima activo. Irreversible Proteasas especficas

Nombran: enz- geno o

prefijo pro-. Enzimas digestivos

Factores coagulacin

Quimiotripsingeno: 245 a.a , sin actividad. Cuando se produce la ruptura del enlace peptdico entre los a.a 15-16, se produce la -quimiotripsina, con plena actividad proteoltica. Este enzima activo a su vez acta sobre otras molculas -quimiotripsina, obtenindose -quimiotripsina, que es la forma estable del enzima. Los distintos pptidos producidos, no se liberan sino que se quedan unidos entre s mediante puentes disulfuro. Si estos enzimas se sintetizasen directamente en forma activa destruiran la propia clula que las produce. As, la tripsina pancretica (una proteasa) se sintetiza como tripsingeno (inactivo). Si por alguna razn se activa en el propio pncreas, la glndula sufre un proceso de autodestruccin (pancreatitis aguda), a menudo mortal.

pncreas

intestino

Activacin proteoltica: Coagulacin sangunea

Las cascadas enzimaticas, se utilizan normalmente en los seres vivos para controlar respuestas rpidas. De modo que en cada paso se va a producir una amplificacin de la seal. As, si en cada paso 1 enzima activa a 10 enzimas, despus de 4 etapas tenemos 105 veces de amplificacin. Este es el caso de la coagulacin sangunea en la que la forma activa de un factor de transcripcin cataliza la activacin del zimgeno siguiente. De este modo, la activacin de una pequea cantidad del factor inicial determina una respuesta fuerte y rpida al trauma. Existen dos vas de activacin de la coagulacin: la va intrnseca y la extrnseca. La intrnseca se debe a la exposicin de superficies aninicas al romperse el endotelio. Esto conduce a que se una en ese lugar los factores de coagulacin y se desencadene la cascada de activacin. En la va extrnseca la coagulacin se desencadena como consecuencia de la liberacin de sustancias debido a un trauma. Ambas rutas convergen en una secuencia comn de etapas finales, que concluyen con la formacin del cogulo constituido por molculas de fibrina.

REGULACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA POR MEDIO DE ISOENZIMAS

Algunos enzimas tienen distinta estructura molecular aunque su funcin biolgica es similar. Se llaman isozimas o isoenzimas (diferentes formas de un enzima) Catalizan la misma reaccin qumica Pueden proceder de distintos genes, o del mismo gen con modificaciones distintas Estas diferencias de estructura se traducen en ligeros cambios en sus propiedades cinticas (Km, Vmax) o reguladoras, de forma que cada isoenzima se adapta perfectamente a la funcin que debe realizar. As, podemos observar la existencia de isoenzimas en funcin de:

El tipo de tejido: Por ejemplo, la lactato deshidrogenasa presenta isoenzimas distintos en msculo y corazn.
El compartimento celular donde acta: Por ejemplo, la malato deshidrogenasa del citoplasma es distinta de la de la mitocondria.

El momento concreto del desarrollo del individuo: Por ejemplo, algunos enzimas de la glicolisis del feto son diferentes de los mismos enzimas en el adulto.

LDH
la lactato deshidrogenasa (LDH) en humanos disponemos de dos formas isoenzimticas de este enzima, la forma H que se expresa fundamentalmente en corazn y la forma M predominante en el msculo esqueltico. Entre ambas tienen un 75% de homologa. El enzima funcional es tetradrico, y se pueden encontrar todas las posibles combinaciones de formas M y H. El isozima H4 tiene mayor afinidad por los sustratos que el isozima M4. Adems, otra diferencia fundamental es su regulacin, de modo que altas concentraciones de piruvato inhiben al H4 y no al M4. Las isoformas intermedias (H3M, H2M2, etc. ) presentan cualidades intermedias entre las anteriores., que dependen de la proporcin de cada una de las cadenas. El isoenzima M4 funciona mejor en un entorno anaerobio, mientras que el H4 funciona mejor en un entorno aerobio. Esto determina que en el corazn tengamos distintas proporciones de cada isoenzima dependiendo del estado de desarrollo, conforme vamos pasando de un ambiente anaerobio a otro aerobio. Las distintas isoformas se expresan de forma diferencial en los distintos tejidos, lo que se adecua a sus necesidades.