Sunteți pe pagina 1din 18

UNIVERSITATEA TEHNIC CLU1-NAPOCA

CENTRUL UNIVERSITAR NORD


BAIA MARE
METODE CROMATOGRAFICE DE
SEPARARE
Masterand
Mayor Andreea
Metode de analiz
2013
1
UNIVERSITATEA ~BABE$-BOLYAI
FACULTATEA DE CHIMIE $I INGINERIE CHIMIC
ANALIZA UNOR ANTIOXIDANTI UTILIZATI N
COSMETIC
PRIN METODE CROMATOGRAFICE
REZUMATUL TEZEI DE DOCTORAT
CONDUCTOR TIINIFIC DOCTORAND
PROF. UNIV. DR. TEODOR HODISAN ANCA-MARIA JUNCAN
BASc., MSc., M.Pharm.,
MIM
Cl!-Na"#ca
2
$%&&
Introducere
O definiie ampl a produselor cosmetice include toate substanele i
mijloace sau procedee folosite n oricare mod, pentru a mbunti aspectul
corpului uman [1].
n momentul de fa pe pia se !sesc produse, care nu numai cur,
protejea" i #idratea", dar care i $nnoiesc%, refac i ntineresc epiderma. &a ora
actuala ma'imul de atenie este acordat utili"rii n formulrile cosmetice a
(itaminelor i a antio'idanilor. )'ist o multitudine de studii ale cror re"ultate
su!erea" beneficiul adus de aceti compusi n industria cosmetica [*].
n ultimii ani, piaa produselor cosmetice s+a mbo!it cu numeroase
produse de n!rijire a pielii, care sunt e(ideniate n primul r,nd prin prisma
efectelor i aciunii antio'idante a acestora. -ceste produse, care conin substane
cu acti(itate antiradicalic, au fost create n primul r,nd pentru a satisface cererea
unor produse n scopul tratamentelor i pre(eniei efectelor de fotombtr,nire [*].
.tili"area topic a acestora este perceput a fi foarte benefic/ c,nd aceste produse
sunt aplicate pe suprafaa pielii, compuii antio'idani se concentrea" nt,i n
stratul cornos, care este esutul cel mai e'pus stresului o'idati(. n cele mai multe
produse din aceast cate!orie caracterul i capacitatea antio'idant este dat, nu
doar de o sin!ur substan acti(, ci de o asociere de principii acti(e diferite.
O di(ersitate de substane cu structur c#imic mai mult sau mai puin
comple'e au fost identificate ca a(,nd aciune antiradicalic i au fost introduse pe
piaa pentru formularea de produse anti+a!ein! [0].
-ntio'idanii din clasa celor sintetici, ca butil#idro'itoluen 12345,
butil#idro'ianisol 123-5, sau antio'idanii naturali, ca tocoferolii 16itamina )5,
sunt definii ca orice substane care in#ib sau nt,r"ie o sc#imbare o'idati(, c,nd
concentraia acestora este mai sc"ut dec,t cea a substanei cosmetice, care este
o'idata [10].
-ntio'idanii sintetici sunt aditi(i cosmetici recunoscui, dar dispo"iii i
re!uli internaionale tind s fonde"e i s stabileasc din ce n ce mai multe
restricii pri(ind utili"area acestora i se obser( cu usurin preferinele
consumatorilor de a e(ita aditi(i sintetici, n fa(oarea celor naturali.
.nii dintre antio'idanii sintetici utili"ai n formularile cosmetice, ca de
e'emplu butil#idro'i+anisol 123-5 sau butil+#idro'i+toluen 12345 sunt
carcino!eni [178, 179], astfel nc,t utili"area e'tensi( a acestor in!rediente n
cosmetice poate repre"enta un potenial risc al sntii [129]. 23- este considerat
a fi utili"at corespun"ator i si!ur n produse cosmetice, dac concentraia total a
acestuia n formularea produsului nu depete limita de 0.02: din coninutul total
de !rsimi i uleiuri, inclu",nd coninutul de uleiuri (olatile din formulare.
3
;tudii pe termen ndelun!at au demonstrat c utili"area unor antio'idani
sintetici n produsele cosmetice poate duce la un potenial risc asupra sntii,
asociat cu in!estia acestora [130]. .n ca" particular n acest sens poate fi
repre"entat de cate!oria de produse cosmetice decorati(e, cum sunt rujurile.
<rodusele cosmetice de tip anti+mbtr,nire repre"int o clas de produse
cosmetice, care conin o compo"iie comple' de materii prime. =eterminarea
antio'idanilor din produsele cosmetice de tip anti+a!in! este adesea dificil,
datorit comple'itii matricii produsului, prin urmare o atenie deosebit trebuie
alocat de"(oltrii procedurilor i metodelor de e'tracie adec(ate i e(aluarea
fiabil a (alorilor medii de recuperare.
<rocedura utili"at pentru e'tracia antio'idanilor din matricea de produs
cosmetic depinde de natura produsului i de asemenea de caracteristicile te#nicii
analitice care este utili"at pentru determinarea substanei acti(e. =in aceast cau"
este necesar s se de"(olte metode de anali"a noi i eficiente pentru monitori"area
antio'idanilor ntr+un mod corespun"ator i pentru determinarea i utili"area
acestora n industria cosmetic.
1. Alegerea antioxidan(ilor n formulrile cosmetice
2o#em i >illiams [29] au subliniat faptul c, pe l,n! acti(itatea
antio'idant, substana ar trebui s posede anumite proprieti fi"ice i fi"iolo!ice,
dac se presupune ultili"area acestuia n practica cosmetic, farmaceutic sau
alimentar?
ar trebui s fie pe c,t posibil neutr n reacie/
ar trebui s fie uor solubil n substrat/
trebuie s fie si!ur din punct de (edere farmacolo!ic i s nu pre"inte
to'icitate pentru esuturile animale.
;pre deosebire de utili"area antio'idanilor si conser(anilor n preparate
farmaceutice i alimente, aceti compui pot fi utili"ai n preparate cosmetice, cu
meniunea ca antio'idantul trebuie s efectue"e inocuitate dermatolo!ic i s nu
pre"inte efecte primare de iritare i sensibilitate. <ielea este adesea sensibil n
afront cu aceste substane. .n ca" particular este ca"ul rujurilor, n care se
presupune o precauie deosebit n ale!erea unui compus antio'idant adec(at,
datorit faptului c acest produs ar putea a fi in!erat.
2. Aplica(ii n cosmetic: concepte yi formulri
6itaminele pot fi utili"ate n formulrile tuturor produselor cosmetice.
6itamina - 1@etinAl <almitate5, B 1-cid -scorbic5 si ) 14ocop#erol sau
8
4ocop#erAl -cetate5 sunt cei mai populari antio'idani folosii n produsele de
n!rijire a pielii. ;unt de asemenea utili"ai n aceste formulri i in!redieni
cosmetici naturali, bo!ai n antio'idani. .nii dintre acetia includ ceaiul (erde,
e'tractul de mcese, uleiul de mi!dale, uleiul de s,mburi de stru!uri, precum i
minerale, ca seleniul i "incul. Bei mai utili"ai antio'idani n formulrile
cosmetice sunt redai mai jos.
n creme i loiuni, mai precis n produsele autobron"ante, produse pentru
protecie solar i uleiuri de corp, domeniul de do"are a (itaminei ) poate fi i
ncep,nd cu 29: [2*].
3. Metode de extrac(ie a antioxidan(ilor utiliza(i n cosmetic
9
=atorit faptului c antio'idanii utili"ai n produsele cosmetice sunt prini
n matricea de produs cosmetic, e'tracia acestora din aceast matrice este dificil,
depin",nd n mare masura i de natura probei, care poate fi solid sau lic#id. <e
de alt parte fa"a de e'tracie mai depinde i de te#nica prin care aceti compui
urmea" a fi anali"ai? spectrofotometric, electroc#imic sau cromato!rafic.
)tapa de pre!tire a probei n (ederea determinrii prin metode
cromato!rafice a antio'idanilor din produsele cosmetice este necesar at,t pentru
e'tracia analiilor dintr+o matrice solid c,t i pentru preconcentrarea lor . Cai
multe abordari au fost de"(oltate n acest scop, apoi aplicate pentru determinarea
antio'idanilor i (itaminelor din diferite tipuri de probe, printre care e'tracia cu
sol(eni or!anici, e'tracia pe fa" solid i e'tracia cu fluide n stare supercritic
[3D].
n ceea ce pri(ete e'tracia antio'idanilor din matricea n care acestia se
afl e'ist dou abordri majore?
e'tracia direct a antio'idanilor fr saponificarea !rsimilor
e'tracia antio'idanilor dup saponificarea !rsimilor
4. Metode de analiz a antioxidan(ilor utiliza(i n cosmetic
n !eneral, utili"area antio'idanilor n produsele cosmetice se face n mod
combinat, asocierea mai multor antio'idani duc,nd la o cretere a puterii
antio'idati(e a acestora din urm. n acelai timp, acest lucru n!reunea"
procedeele de determinare a acestora datorit interferenelor ce pot aparea i care
duc n final la erori n re"ultatele finale.
Cetodele de anali" a antio'idanilor sunt multiple i depind de cele mai
multe ori de dotarea material a laboratoarelor de anali", precum i de
sensibilitatea ce se dorete a fi atins prin anali". Bele mai importante metode de
anali" a antio'idanilor utili"ai n cosmetic sunt?
metodele spectrofotometrice
metodele electrochimice
metodele cromatografice
Cetodele cromato!rafice de toate tipurile, ca de e'emplu cromato!rafia pe strat
subire [01], cromato!rafia de lic#ide [03+09] i de !a"e [88] au fost aplicate n
acest sens.
Bele mai utili"ate metode cromato!rafice de anali" ale antio'idanilor sunt?
+ Bromato!rafia de Ea"e
+ Bromato!rafia de &ic#ide pe ;trat ;ubire
*
+ Bromato!rafia de &ic#ide de nalt <erforman.
5. Analiza prin metode cromatografice a unor antioxidani sintetici i
naturali utilizai n produse cosmetice
Formulrile cosmetice conin amestecuri multiple de materii prime,
substane acti(e i conser(ani care aparin unor clase c#imice diferite,
caracteri"ate prin diferite !rupri funcionale [183]. <rin urmare, sunt necesare
metode de anali" multicomponente/ n acest sens, te#nicile cromato!rafice de
anali" sunt cele mai frec(ent utili"ate pentru determinarea antio'idanilor i
conser(anilor din produsele cosmetice.
<entru anali"ele ba"ate pe te#nici cromato!rafice de lic#ide sau de !a"e,
pre!atirea probelor, n funcie de natura i comple'itatea matricei, utili"ea" fie
operaii simple de diluie cu sol(eni sau amestecuri de sol(eni adec(ai, fie
operaii mai comple'e pentru e'tra!erea analitului din matricea solida. =e multe
ori este necesa i o etap suplimentar de purificare, folosind e'tracia pe fa"a
solid. <re!tirea probelor este necesara i n ca"ul determinarii conser(anilor i
antio'idanilor din matrici comple'e sau din probe #etero!ene, n care sunt
posibile probleme de interferen. Bea mai la ndem,n metod pentru prelucrarea
probelor din formulri cosmetice de tip Gulei n ap% este diluia i omo!eni"area
probei, sonicare sau centrifu!are i filtrare.
Cetodele utili"ate pentru e'tracia conser(anilor i antio'idanilor din
produsele cosmetice depind n primul r,nd de natura produselor cosmetice+
emulsii, creme, ampoane etc. i de asemenea de caracteristicile te#nicilor analitice
care se utili"ea" pentru determinarea substanelor acti(e.
.tili"area antio'idanilor n produsele cosmetice si de n!rijire se poate face,
fie indi(idual, fie n amestec, puterea de antio'idare cresc,nd atunci c,nd acetia
se folosesc n amestec. .nul dintre cei mai utili"ai antio'idani sintetici n
formularile cosmetice este 23- 13+tert+butil+8+#idro'i anisol5, iar din clasa
antio'idanilor naturali H+4- 1alfa tocoferol acetat5 este adesea nt,lnit n
formularile de tip anti+a!in!.
;tudiul de fa conturea" rolul i importana antio'idanilor n formulrile
cosmetice i i propune totodat s mbunteasc unele metode de anali"a a
acestor compui din cate!oria de produse cosmetice de tip anti+a!in!. ;+au (i"at
dou aspecte ale anali"ei? pre!tirea probei, care s+a efectuat prin e'tracia cu
di(erse sisteme de sol(eni, e'tracia pe fa"a solid i saponificare i anali"a
propriu+"is, care s+a reali"at fie prin EB+FI=, fie prin 3<&B+.6, urmrindu+se
determinarea condiiilor optime de anali"a.
7
-nali"ele s+au efectuat pe probe sintetice 1formulri de creme de tip anti+
a!in! fortificate cu di(erse cantitai de 23- la ni(el de concentraie de 0,09: i H+
4- la ni(el de concentraie de 0,9:5, pe crJme disponibile comercial.
-nali"ele cromato!rafice au fost efectuate pe un !a" cromato!raf ;#imad"u
2010 Codel ec#ipat cu detector FI=. n sistem s+a folosit o coloan capilar din
silice fu"ibila =2+9, 30m ' 0,29 mm I=, cu o fa"a staionar de 9: difenil+ 09:
dimetilpolisilo'an, cu !rosimea de 0,29 Km. 4emperatura cuptorului a fost
menLinuta la 120MB timp de 9 minute, iar apoi mrit cu o (ite"a de 10MBNmin p,n
la 310MB unde a fost meninut timp de 10 min..
<arametrii detectorului au fost meninui la 320MB, cu debite de O2+30
m&Nmin. i 32+80 m&Nmin. i aer 200m&Nmin.. 4emperatura de injecie a fost de
390MB. ;+au anali"at cantiti de c,te un 1 Kl din soluiile standard i soluiile de
prob, folosind condiiile descrise mai sus.
6. Determinarea simultan a antioxidanilor sintetici i naturali din formulri
cosmetice anti-aging prin extracie cu etanol urmat de analiza GC-FID
<entru determinarea simultan a antio'idanilor naturali i sintetici+ 4-
respecti( 23- n trei formulri cosmetice de tip Goil in Pater% 1oNP5, a fost
de"(oltat o metoda cromato!rafic de !a"e, utili",nd te#nica EB+FI=. O
procedura simpl de e'tracie cu etanol a fost necesar, iar separarea celor doi
compui a fost obinut n condiiile cromato!rafice utili"ate [17D].
;+a obinut o separare bun a standardelor de antio'idani, cu caracteristici de
retenie
de t@,23-QD,073 i t@,L+4-Q23,301, prin condiile cromato!rafice utili"ate.
Fi!ura 1 pre"int cromato!rama unei soluii standard a celor doi antio'idani
studiai.
D
Figura 1: Cromatograma GC a unui standard de BHA si o-TA utiliznd metodele de
prelucrare a probei i condiiile cromatografice descrise
4rei probe de creme anti+a!in!? Crem Gras Antirid Contur Ochi, Crem
Semigras Lift Intensiv Hidratant i Crem Gras Lift Restructurant+ au fost
preparate n laborator. 2lanR+ului de crem i s+au adau!at controlat cantiti de
0,09 : 23- i 0,9 : H+4-. -nali"a probelor a fost efectuat n triplicat pentru
toate cele trei creme luate n studiu, pentru a permite calculul de(iaiei standard
1=;5 i a de(iaiei standard relati(e 1=;@5 ca i msur a repetabilitii
cromato!rafice.
4rei mostre din probe comerciale ale cremelor luate n studiu, ce au coninut
combinaii ale antio'idanilor descrii, au fost anali"ate i H-TA respecti( 23- au
fost identificai, compar,nd timpii de retenie a peaR+urilor obser(ate, cu cele
obinute pentru soluiile standard.
Bromato!rama unei Creme Grase Antirid Contur Ochi este pre"entat n
Fi!ura 2. Bromato!rama unei Creme Semigrase Lift Intensiv Hidratant i a unei
Creme Grase Lift Restructuranta este pre"entat n Fi!ura 3, respecti( Fi!ura 8?
0
Figura 2: Cromatograma GC a Cremei 'ra() A*+,r,- C#*+r Och,
10
Figura 3: Cromatograma GC a unei Cr)m) S)m,.ra() /,0+ I*+)*(,1 H,-ra+a*+)
Figura 4: Cromatograma GC a unei Cr)m) 'ra() /,0+ R)(+rc+ra*+)
11
Boncentraiile determinate ale antio'idanilor anali"ai n trei probe de creme
de tip anti+a!in!: Crema Gras Antirid Contur Ochi! Crema Semigras Lift
Intensiv Hidratant i Crema Gras Lift Restructurant determinate prin metoda
de anali" EB+FI=, !radul de recuperare a acestora, precum i concentraia
antio'idanilor determinai n probe comerciale sunt pre"entate n 4abelul 1?
Proba analizat Concentra(ie DS
Proba
(g/100g)
Grad de
recuperare
()
Concentra(ie DS
Proba
comercial
(g/100g)
Concentra(i
e
declarat
(g/100g)
23- H+4- 23- H+4- 23- H+4- 23- H+4-
Brem !ras
antirid contur
oc#i
0,0887
0,003
0,8281
0,002
D0.8 D8.D 0,0813
0,002
0,8301

0,002
0.09 0.9
Brem semi!ras
lift intensi(
#idratant
0,08*D
0,002
0,8818
0,003
03.* DD.3 0,083D
0,002
0,8**3

0,003
0.09 0.9
Brem !ras lift
restructurant
0,0870
0,001
0,8190
0,008
08.0 D3.2 0,080*
0,002
0,82D8

0,003
0.09 0.9
Cetoda a permis o determinare simultan, simpl, rapid i e'act, precum
i confirmarea pre"enei a 23- i H+4- n produsele anti+a!in!, formulri
cosmetice ce conin un numr ridicat si (ariat de in!rediente cosmetice. @e"ultatele
obinute demonstrea" c metoda propus pentru anali"a antio'idanilor cu un !rad
mare de interferen din produsele cosmetice este adec(at.
=atorit asemnrilor !ruprilor funcionale ale tocoferolilor i
antio'idanilor sintetici s+a decis in(esti!area prin aceleai metode a acestor !rupe
de antio'idani. Obiecti(ul acestui studiu a fost determinarea cantitati(
simultan a alfa tocoferol acetatului i a 3+tertbutil+8+#idro'i+anisolului din
formulri cosmetice prin anali"a EB cuplat cu detector FI=.
7. Determinarea simultan a antioxidanilor sintetici i naturali din formulri
cosmetice anti-aging prin extracie cu amestec de solvent organic acetonitril:
metanol urmat de analiza GC-FID
<entru determinarea simultan a antio'idanilor naturali i sintetici? H+
tocoferol acetat, respecti( 23- n trei formulari cosmetice de tip oNP, a fost
12
de"(oltata o metod cromato!rafic de !a"e, utili",nd te#nica EB+FI=. O
procedur simpl de e'tracie cu amestec or!anic metanol?acetonitril a fost
necesar, iar separarea celor doi compui a fost obinut n condiiile
cromato!rafice utili"ate [1D2].
O separare bun a standardelor de antio'idani, cu caracteristici de retenie
de t@,23-Q 10.11D i t@,H+4-Q 2*.078 s+a obinut prin condiiile cromato!rafice
utili"ate.
Fi!ura 9 pre"int cromato!rama unei soluii standard a celor doi antio'idani
studiai?
Figura 5: Cromatograma GC a unui standard de BHA yi o-TA utiliznd metodele de
prelucrare a probei yi condi(iile cromatografice descrise
4rei probe de creme anti+a!in!? Crem Gras Antirid Contur Ochi, Crem
Semigras Lift Intensiv Hidratant i Crem Gras Lift Restructurant+ au fost
preparate n laborator. ;+a adu!at controlat n creme cantiti de 0,09 : 23- i
0,9 : H+4-.
4rei mostre din probe comerciale ale cremelor luate n studiu, ce au coninut
combinaii ale antio'idanilor descrii, au fost anali"ate i at,t H-TA c"t i 23- au
fost identificai, compar,nd timpii de retenie a peaR+urilor obser(ate, cu cele
obinute pentru soluiile standard.
Bromato!rama unei Creme Grase Antirid Contur Ochi este pre"entat n
Fi!ura *.
13
Figura 6: Cromatograma GC a unei Cr)m) 'ra(e A*+,r,- C#*+r Och,
Bromato!rama unei Creme Semigrase Lift Intensiv Hidratante i a unei Creme Grase
Lift Restructurante este pre"entat n Fi!ura 7, respecti( Fi!ura D?
18
Figura 7: Cromatograma GC a unei Cr)m) S)m,.ra() /,0+ I*+)*(,1 H,-ra+a*+)
Figura 8: Cromatograma GC a unei Cr)m) 'ra() /,0+ R)(+rc+ra*+)
19
Boncentraiile determinate ale antio'idanilor anali"ai n trei probe de creme
de tip anti+a!in!? Crem Gras Antirid Contur Ochi, Crem Semigras Lift
Intensiv Hidratant i Crem Gras Lift Restructurant determinate prin metoda de
anali" EB+FI=, !radul de recuperare a acestora, precum i concentraia
antio'idanilor determinai n probe comerciale sunt pre"entate n 4abelul 32?
Tabelul 2: #alorile concentraiilor antio$idanilor %n pro&ele de crem anali'ate
Cetoda a permis o determinare simultan, simpl, rapid i e'act, precum
i confirmarea pre"enei a 23- i H+4- n produsele anti+a!in!, formulri
cosmetice ce conin un numr ridicat i (ariat de in!rediente cosmetice.
@e"ultatele obinute demonstrea" c metoda propus pentru anali"a
antio'idanilor cu un !rad mare de interferen, din produsele cosmetice este
adec(ata. Boncentraiile de antio'idani determinate din produsele anti+a!in! au
fost n conformitate cu cele declarate de productor.
1*
CONCLUZII
-(,nd n (edere c n produsele cosmetice se utili"ea" at,t antio'idani
naturali i sintetici, ideal ar fi identificarea, respecti( cuantificarea simultan a
acestora.
n !eneral, cei mai utili"ai antio'idani n majoritatea formulrilor
cosmetice sunt antio'idantul sintetic 23- i cel natural H+4, n forma acetat a
acestuia H+4-, cu concentraii de 0,09:, respecti( 0,9:.
;+au de"(oltat diferite metode de pre!tire a probelor de crem, at,t pentru
probe sintetice, obinute prin impre!nare p,n la un ni(el de concentraie de 0,09:
23- i 0,9: H+4-, c,t i probe de produse cosmetice disponibile comercial,
acestea fiind anali"ate prin cromato!rafie EB cuplat cu FI=.
Bea mai adec(at metoda s+a do(edit a fi diluia probelor de crem anali"at
cu amestec de sol(ent or!anic acetonitril?metanol prin sonicare, filtrare i
determinarea simultan a antio'idanilor prin EB.
17
BIB/IO'RAFIE SE/ECTIV
[1] FS#rer 3., (ragoco Report, 1070, -pril, 70.
[*] &upo C. <., Clinics in (ermatolog)! 10, 2001, 8*7+873.
[0] -ndreassi C., -ndreassi &., *+ Cosmetic (ermatol+, 2, 2008, 193+1*0.
[10] Badenas )., <acRer &., Hand&oo, of Antio$idants, Carcel =eRRer Inc., 2nd
)dition, 2002, 1+9.
[29] 2oe#m C., >illiams T., *+ -harm+, 232, 1083, 202.
[3D] &uUue+ Earcia T. &., &uUue de Bastro C. =., *+ Chromatogr+ A, 039, 2001, 3+
11.
[03] Vin! >. <., Vissin!er T., *+ Assoc+ Off+ Anal+ Chem+, *3, 10D0, 137.
[08] I(ano(ic =., Cedenica C., Chromatographia, 80, 1009, *92.
[09] 2ianc#in &., Boli(icc#i C. -., =ellacorte &., *+ Chromatogr+, *08, 1007, 390.
[130] CaP+@on! &.! B#ue#+Wu &., Xu+Euan! &., 4"u+Fen! 4., *+ Chromatogr+ A,
1120, 200*, 288+291.
[178] Ito O., 3irose C., FuRus#ima ;., ;#irai 4., 4atematsu C., .ood Chem+
To$icol+, 10D*, 28, 10+11, 1071.
[179] 3irose C., 4aResada W., 4anaRa 3., 4amano ;., Vato 4., ;#irai 4.,
Carcinogenesis, 1007, 10, 1, 207.
[17D] Tuncan -. C., 3or!a B. )., 3odiLan 4., Studia /niversitatis! Chemia, 2011
1accepted for publication5.
1D

S-ar putea să vă placă și