12/3/2010 Biosenzori 1

Electrozi de referin
Ca electrod de referin (RE) se poate utiliza electrodul normal
de hidrogen, care poate fi foarte uor realizat n laborator. Cu
toate acestea, datorit faptului c msurrile implic curgerea
hidrogenului, care prezint pericol de explozie, nu se utilizez
acest electrod ca electrod de referin.
n practic se utilizeaz ali electrozi de referin. Acetia au
urmtoarele caracteristici: sunt uor de realizat practic, sunt
nepolarizai, furnizeaz poteniale reproductibile care au
coeficieni de temperatur de valoare redus.
Cei mai utilizai elctrozi de referin sunt: electrodul clorur de
argint argint i electrodul calomel saturat.
12/3/2010 Biosenzori 2
Electrodul argint/ clorur de argint
Clorura de argint are avantajul de a fi moderat solubil n ap.
Reacia chimic corespunztoare semicelulei este:
AgCl + e
-
= Ag + Cl
-
E
0
= +0,22 V
Electrodul const ntr-un fir de argint acoperit cu clorur de
argint i introdus ntr-o soluie de clorur de potasiu (uzual 1 M).
O soluie pentru acoperirea cu clorur de argint a firului de
argint este urmtoarea. Se utilizeaz o celul electrochimic n
care anodul este firului de argint, catodul este din Pt, iar soluia
electrolitic este clorura de potasiu. Electroliz se realizeaz 30
min, timp n care se aplic argintului o tensiune de 0,5 V.
Suprafaa argintului se oxideaz n ioni de Ag, care atrag ionii
de clorur, formndu-se, astfel, stratul de clorur de argint.
12/3/2010 Biosenzori 3
Electrod de referin argint/ clorur de argint
12/3/2010 Biosenzori 4
Electrodul calomel saturat
Calomel este vechea denumire a clorurei de mercur Hg
2
Cl
2
.
Aceasta este moderat solubil n ap.
Reacia chimic corespunztoare semicelulei este:
Hg
2
Cl
2
+ 2e
-
= 2Hg + 2Cl
-
E
0
= +0,25 V
Electrodul const ntr-un bazin de mercur aflat n contact cu o
past obinut prin amestecarea de mercur, pudr de clorur de
mercur i soluie de clorur de potasiu saturat. Pasta este n
contact cu soluie de clorur de potasiu saturat. Soluia
saturat poate fi obinut prin amestarea prin agitare a clorurii de
potasiu cu apa pn nu se mai dizolv.
Acest electrod este foarte potrivit n cazul soluiilor apoase.
12/3/2010 Biosenzori 5
Electrod de referin calomel saturat
12/3/2010 Biosenzori 6
Relaii cantitative. Ecuaia lui Nernst
Ne punem problema determinrii efectului concentraiilor
diferite ale electroliilor asupra potenialului electrodului.
Pentru o semicelul reacia chimic este:
ox + ne
-
= red
unde: ox i red sunt speciile care sufer reducerea i oxidarea;
n este numrul de electroni schimbai n reacie.
Substanele reduse i oxidate dintr-o semireacie formeaz un
cuplu redox i se noteaz ox/red (de exemplu la celula Daniell
cuplurile redox sunt Cu
2+
/Cu i Zn
2+
/Zn).
12/3/2010 Biosenzori 7
Ecuaia lui Nernst este:
( ), ln ln
0 0
Q
nF
RT
E
a
a
nF
RT
E E
red
ox
+ =
|
|
.
|

\
|
+ =
unde: E este t.e.m. a celulei;
E
0
este potenialul standard al semicelulei;
T este temperatura absolut;
a
ox
, a
red
sunt activitile chimice ale speciilor ox i red;
Q = a
ox
/ a
red
este ctul reaciei;
F este constanta lui Faraday sarcina electric aflat
ntr-un mol de electroni (F = 9,648510
4
C/mol);
R este constanta gazelor (R = 8,324472(15) JK
-1
mol
-1
).
12/3/2010 Biosenzori 8
Activitatea chimic a unei specii x, a
X
este dat de relaia:
a
x
=
x
c
x
unde
x
este coeficientul de activitate, iar c
x
este concentraia speciei x
Observaie: La concentraii mici coeficientul de activitate
x
tinde
ctre 1, situaie n care avem: a
x
~ c
x
.
Presupunem c valorile concentraiilor sunt mici. n acest caz
ecuaia lui Nernst devine:
|
|
.
|

\
|
+ =
] [
] [
log 303 , 2
0
red
ox
nF
RT
E E
12/3/2010 Biosenzori 9
Pentru T = 293 K (20
0
C) obinem 2,303RT/F = 0,0580, iar
pentru T = 298 K (25
0
C) obinem 2,303RT/F = 0,0591.
innd cont de valorile de mai sus ecuaia lui Nernst scris
anterior o putem aproxima prin:
.
] [
] [
log 06 , 0
0
|
|
.
|

\
|
+ =
red
ox
E E
Specia red este, de obicei, un metal. n acest caz [red] =1, iar
relaia de mai sus devine:
( ). ] [ log 06 , 0
0
ox E E + =
12/3/2010 Biosenzori 10
Ecuaia lui Nernst poate fi scris sub o forma mai simpl de
utilizat n practic:
( ), ] [ log ox S K E + =
unde K este decalajul, iar S este panta.
Rezultatele experimentale obinute pentru K i S sunt
comparate cu cele teoretice E
0
(pentru decalaj) i 2,303RT/F
(pentru pant) .
12/3/2010 Biosenzori 11
n continuare introducem potenialul electrodului de referin
(E
REF
) i potenialul jonciunii lichidului (E
1,j
) ca n figura de mai
jos.
Electrod de referin combinat cu alt semicelul
12/3/2010 Biosenzori 12
Avem relaiile:
| | ( )
+
+ =
=
+
+
n
M M
j RE
M M
celul
M S E E
E E E E
n
n
log
'
0 ' '
,
, 1
,
Rezult:
( ) ]) log([
, 1
0 ' +
+ =
n
j RE celul
M S E E E E
Relaia de mai sus poate fi scris:
]), log([
+
+ =
n
celul
M S K E
unde .
, 1
0 '
j RE
E E E K =
12/3/2010 Biosenzori 13
Concentraia celulelor
n continuare n locul electrodului de referin introducem o
semicelul similar cu acelai cuplu redox, dar cu diferite
concentraii ale speciei ox, ca n figura de mai jos.
Celul cu concentraii diferite ale speciei ox.
RE
1
, RE
2
electrozi de
referin.
12/3/2010 Biosenzori 14
Ecuaiile Nernst aferente reaciile celor dou semicelule sunt:
| | ( )
1
0
1
log ox S E E + =
| | ( ). log
2
0
2
ox S E E + =
Prin scderea celor dou relaii se obine:
| |
| |
. log
2
1
2 1
|
|
.
|

\
|
= = A
ox
ox
S E E E
Concentraia [ox]
2
este meninut constant (concentraie de
referin). n aceast situaie relaia de mai sus devine:
| | ( ), log
1
ox S const E + = A
unde const este o constant egal cu Slog([ox]
2
).
12/3/2010 Biosenzori 15
Rezultatul obinut anterior este utilizat n majoritatea electrozilor
sensibili la ioni (ISE). n practic, n general, aranjamentul este
ca n figura prezentat anterior.
n partea stng este soluia de test, care urmeaz a fi
determinat, n care se introduce un electrod de referin. n
partea dreapt este soluia standard (de referin), care are o
concentraie fixat (cunoscut). n aceasta este introdus al
doilea electrod de referin. La mijloc, ntre cele dou soluii, se
afl o membran selectiv la ioni. ntre cei doi electrozi se
conecteaz un voltmetru care are o impedan intern de
valoare ridicat. Apoi, sistemul de electrozi este calibrat.
Tensiunea msurat este dat de diferena de potenial a
electrozilor celor dou semicelule, care sunt identice, cu
excepia faptului c valorile celor dou concentraii ale ionilor
sunt diferite.
12/3/2010 Biosenzori 16
T.e.m. a celulei este dat de relaia:
( ) ( ), log log
1 2 , 1 2 1
a S a S E E E E
j REF REF
+ + + =
unde a
1
este activitatea soluiei de test, iar a
2
este activitatea
soluiei de referin (standard).
Relaia de mai sus poate fi scris:
( ), log
1
a S K E + =
unde ( ). log
2 , 1 2 1
a S E E E K
j REF REF
+ + =
12/3/2010 Biosenzori 17
Aspecte practice legate de electrozii selectivi la ioni
n scopul obinerii unor rezultate consistente, reproductibile cu
limitele de detecie cele mai mici trebuie avute n vedere o serie
de precauii. Urmtorii factori trebuie avui n vedere:
- Concentraia ionic trebuie meninut constant de la un
eantion la urmtorul. Aceasta poate fi realizat prin adugarea
unui electrolit cu concentraie constant, destul de mare. Un
astfel de electrolit nu interfer n nici o direcie cu fiecare
eantion i fiecare standard.
- Indicele pH trebuie controlat cu o anumit eroare. Acest lucru
este mai important n cazul anumitor substane ionice, e.g.
fluorurile.
- Poate fi posibil i de dorit s se adauge componente care
minimizeaz sau elimin ionii de interferen.
12/3/2010 Biosenzori 18
Amestecurile cele mai potrivite pentru ndeplinirea acestor
proprieti sunt soluiile folosite pentru reglarea concentraiei
ionice ISA (Ionic Strength Adjusters) i substanele tampon
folosite pentru reglarea concentraiei ionice totale TISAB (Total
Ionic Strenght Adjustement Buffers).
Exemple:
Pentru ISE de nitrai substana ISA este sulfatul de sodiu.
Aceasta menine indicele pH ntre limitele cerute 2 -12. Cu toate
aceastea, aceast substan ISA nu elimin interferenele
importante din partea fluorurilor i nitriilor. Din acest motiv, s-a
folosit substana ISA sulfat de argint, iar n prezent o substan
mult mai complex, dar mai ieftin, care este un amestec de
acetat.
12/3/2010 Biosenzori 19
Electrozii pentru floruri necesit un amestec mult mai complex
care conine: 1 M clorur de sodiu (pentru controlul concentraiei
ionice) + 1 M acid acetic, ajustat pn la indicele pH de 5,5 cu
hidroxid de sodiu (pentru controlul indicelui pH, deoarece un
indice pH ridicat conduce la interferene din partea hidroxidului) +
10
-3
M citrat de sodiu.
Temperatura trebuie controlat foarte precis deoarece n ecuaia
lui Nernst intervine temperatura. O variaie a temperaturii cu 1 K
conduce la o eroare de 2% de msurare a concentraiei. Similar,
ali factori cum ar fi de exemplu timpul de agitare i de echilibrare
(de regul 30 s 2 min) nainte de citire trebuie standardizat.