INSTITUTO TECNOLGICO SUPERIOR DE COATZACOALCOS

CARACTERIZACIN MICROBIOLGICA DEL AGUA DEL RIO CALZADAS PARA DETERMINAR EL NIVEL DE CONTAMINACIN POR LA PRESENCIA DE ESCHERICHIA COLI

PRESENTA: Smano Chvez Alan Gabriel

Contraportada

Asesor: Ing. Solano Silva Gustavo

HOJA DE AUTORIZACIN

DEDICATORIA

Dedico este trabajo a mis padres: Gabriel Smano Armenta y Alicia Chvez Andrs, por que sin su valioso apoyo nunca hubiese sido posible su realizacin, ya que la mayor herencia que pudieron legarme es haberme dado la oportunidad de estudiar y ser alguien de provecho. De igual muy especial el apoyo de mi hermana Paola Smano Chvez que siempre fue incondicional. Tambin a mis abuelos Macario Zamano Prez y Paula Armenta Rodrguez. As mismo quiero agradecer a las personas cuyo apoyo durante el curso de mi carrera profesional fueron de gran valor para m. Como son el Seor Jaime Alberto Ramn Molina y su seora esposa Mireya Rodrguez Olan y sus hijos Fabin Ramn Rodrguez, Omar Alberto Ramn Rodrguez y su seora esposa Anah Aguilar Gmez; y Cindy Mireya Ramn Rodrguez. Quienes me brindaron un lugar en su hogar y han sido como una familia. De igual manera quiero agradecer a mis amigos cuyo apoyo fue muy grande durante muchas noches de desvelo por la escuela o simplemente por estar ah cuando lo necesite como son: Daniel Daz Santos, Minerva Cabrera Salinas, Andrea Cabrera Salinas, Cristina Navarro Cruz, Ral Gallegos Cruz, Morgan Michelle Cansino Hon, Rubn Salgado Delgado y a todos mis compaeros de clase cuyo apoyo fue invaluable. Pero por sobre todo quiero dedicar este logro en mi vida a mi hijo Axel Fernando Smano Hernndez cuya llegada a mi vida ha sido el mayor regalo que la vida pudo ofrecerme.

Resumen
El agua es un recurso muy valioso, cuya preservacin es de vital importancia para el hombre pues de este liquido depende su supervivencia, ah radica la importancia de su cuidado y proteccin. El Ro Calzadas no es ms que l Ro Huazuntln cuyo trayecto pasa por Coatzacoalcos y es ah donde se le conoce como Ro Calzadas que posteriormente desemboca en el Ro Coatzacoalcos. Por su trayectoria el Ro Calzadas es usado para diversas cosas entre ellas como canal de desag para las colonias aledaas, adems de ser fuente de pescados para los pobladores que viven en sus alrededores, cuyo efluente es muchas casos es su principal fuente de ingresos. Debido a que las agua del Ro Calzadas han sido utilizadas como drenaje de algunas colonias de Coatzacoalcos, su niveles de contaminacin se ido incrementando durante el transcurso del tiempo, pues el desecho fecal de los seres humanos contiene una carga bacteriana que pueden transmitir enfermedades gastrointestinales en la poblacin que entre en contacto con sus aguas. Es por ello que es de gran importancia llevar un control del dao provocado a sus aguas, pues puede tener repercusiones graves en la salud de la poblacin si no se sabe con qu tipo de microorganismo se est lidiando. Es en este punto donde los estudios microbiolgicos entran para determinar los niveles de polucin, as como caracterizar los tipos de bacterias presentes en el agua. Existen normas que nos sirven de referencia para llevar a cabo dichos estudios, tambin nos dan parmetros establecidos para cuantificar el dao provocado y saber si se est dentro de los lmites que la ley nos marca o tenemos que pensar en acciones correctivas para repararla. Una norma cuyos pasos son importantes en la determinacin de Escherichia coli es la norma NMX-042-1987 Calidad del Agua - Determinacin del Nmero ms Probable (NMP) de Coliformes Totales, Coliformes Fecales (Termotolerantes) y Escherichia coli, pues nos indica si existe presencia de dicha bacteria de manera presuntiva, al igual de otros mtodos usados para confirmar aun mas su presencia, no es la nica pero si una de las ms especficas en nuestro pas para identificar la Escherichia coli y fue la que ms se uso como referencia en la elaboracin de este trabajo.

NDICE DE CONTENIDO
ndice de contenido.... i i ndice de mapas, figuras y tablas.... ii ii Introduccin. 1 1 Captulo I Planteamiento del problema. 3 3 1.1.- Definicin del problema 4 4 1.2.- Delimitacin del problema... 5 5 1.3.- Objetivos. 6 6 1.3.1.- Objetivo general..... 6 6 1.3.2.- Objetivos especficos. 6 6 1.4.- Hiptesis. 7 7 1.5.- Justificacin... 8 8 Captulo II Fundamento terico........ 10 10 2.1.- Ro Calzadas...... 10 10 2.1.1.- Contaminacin en el Ro Calzadas... 12 12 2.2.- Contaminacin de aguas en Mxico....... 13 13 2.3.- Uso de bioindicadores para evaluar la calidad del agua.. 21 21 2.4.- Escherichia coli... 22 22 2.4.1.- Patogenicidad de la Escherichia coli.... 25 25 2.4.2.- Enterotoxina de la Escherichia coli....... 29 29 2.5.- Normas mexicanas relacionadas con anlisis de aguas.... 30 30 2.5.1.- Determinacin por el mtodo del nmero ms probable.. 31 31 Captulo III Metodologa...... 33 33 3.1.- Tipo de investigacin.... 33 33 3.1.1.- Investigacin documental... 33 33 3.1.2.- Investigacin de campo...... 34 34 3.2.- Procedimiento..... 35 35 3.2.1.- Muestreo... 37 37 3.2.4.- Prueba presuntiva... 41 41 3.2.5.- Prueba confirmativa.... 44 44 3.2.6.- Prueba presuntiva para Escherichia coli...47 45 Captulo IV Presentacin y Anlisis de los resultados 48 48 Conclusin y anlisis de la encuesta... 53 53 4.1.- Investigacin cuantitativa...... 54 54 4.2.- Evaluacin o impacto econmico. 56 56 Conclusiones y recomendaciones....... 57 57 Bibliografa....... 58 58 Anexos........ 61 61

INDICE DE MAPAS, FIGURAS Y TABLAS

Mapas 1.- Modelo de elevacin digital con sub cuencas del Coatzacoalcos.... 11 11 2.- Mapa satelital de los puntos en los que se tomaron las muestras... 38 38 Figuras 2.1 Distribucin nacional del agua.... 14 14 2.2 Balance hidrulico Nacional (base anual). 15 15 2.3 Distribucin del agua en Mxico por cuenca hidrolgica.. 16 16 2.4 Empleo del agua a nivel mundial 16 16 2.5 Potencial de uso del agua en algunas cuencas del pas... 18 18 2.6 Eutroficacin.. 20 20 2.7 Estructura de la Escherichia coli 24 24 2.8 Escherichia coli vista por microscopio electrnico.. 24 24 3.2 Toma de la muestra a 1 m y 30 cm con ayuda del muestreador.. 38 38 3.3 Muestra despus de ser tomada dentro del agua y guardada.. 39 39 3.4 Hielera receptora de las muestras recabadas.. 40 40 3.5 Hielera junto al muestreador para conservacin inmediata... 40 40 3.6 Material en la autoclave para su esterilizacin. 41 41 3.7 Preparacin del Caldo lactosa usado en las diluciones. 42 42 3.8 Guardando las muestras para su incubacin a 24 y 48 horas.. 42 42 3.9 Tubos a las 24 hrs de la incubacin.. 43 43 3.10 Tubos positivos en produccin de gas en tubos de Durham .. 43 43 3.11 Resiembra del caldo lactosa a caldo E.C....... 44 44 3.12 Tubos de E.C. de la primera y segunda resiembra a las 24 y 48 hrs.44 44 3.13 Vaciando el agar EMB a las cajas petri.. 45 45 3.14 Cajas petri en espera para su gelificacin.. 46 46 3.15 Siembra de del medio E.C. al agar EMB por estriado en cajas petri. 46 46 4.1 Agar EMB con Escherichia coli positiva de la primera muestra 54 54 4.2 Agar EMB con E. coli positiva de la segunda muestra... 55 55 Tablas Tabla 1.- Reparto del agua sobre la tierra... 13 13 Tabla 2.- Principales fuente de adherencia que favorecen la fijacin de patgenos 24 microbianos a los tejidos del hospedador 2 5 25

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INTRODUCCIN
El presente trabajo se desarrollo con el objetivo de determinar los niveles de polucin en el ro Calzadas a causa del microorganismo conocido como Escherichia coli, la cual es una enterobacteria causante de enfermedades sobre todo las gastrointestinales en el ser humano que son problemas graves de salud en la poblacin pues puede llegar a cobrar vidas. El agua es un recurso tan valioso, pues a travs de ella obtenemos muchos beneficios, como el agua que los cultivos necesitan para ser regados, donde crecen y se reproducen peces para posteriormente ser pescados y ser nuestro alimento, as mismo todo esto es una fuente de empleos para muchos personas que viven a su alrededor. Pero por sobre todo debe tener un cuidado para no contaminarla, ya que el uso industrial, municipal y urbano son la principal causa de polucin en los ros. Como no existen antecedentes como tales del Ro Calzadas, ya que en realidad se trata del Ro Huazuntln, solo que al llegar a Coatzacoalcos toma el nombre de Ro Calzadas para su diferenciacin dentro del poblado, y que posteriormente desemboca en el Ro Coatzacoalcos, por esto fue necesario tomar en cuenta otro tipo de bibliografas e informes tomados localmente. Es as que esta ramificacin del Ro Huazuntln es fuente de trabajo para muchos pescadores que viven en sus aguas, al igual que sus aguas son usadas para diferentes propsitos, y es as que est en contacto con la poblacin de forma directa o indirecta El estudio efectuado para determinar si exista presencia de Escherichia coli, es un mtodo importante de monitoreo a las aguas que deberan implementarse durante cada determinado tiempo, este trabajo trato de dar a conocer que en las aguas del ro Calzadas existe este microorganismo y por tanto debe tomarse medidas adecuadas para su descontaminacin y su cuidado. Segn la norma NOM-127-SSA1-1994 no debe existir bacterias entricas en el agua de los efluentes. La norma NMX-042-1987 Calidad del Agua - Determinacin del Nmero ms Probable (NMP) de Coliformes Totales, Coliformes Fecales (Termotolerantes) y Escherichia coli, explica el procedimiento a seguir para poder determinar la presencia de coliformes fecales y Escherichia coli en base a esa norma podemos decir si existe Escherichia coli presuntiva en los cuerpos de aguas que se escogieron para su anlisis. Hay muchos aspectos que se deben tomar en cuenta a la hora del muestreo de aguas, para evitar la contaminacin de la muestra y dar falsos resultados por eso tambin se hace referencia a la norma NMX-AA-003-1980 para seguir los lineamientos y cuidados que se deben tener a la hora de tomar las muestras de agua, todo material usado como referencia es importante para retroalimentar la investigacin y hacerla ms rica desde su base.

CAPITULO I PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

1. Planteamiento del problema

El agua, adems de ser una sustancia imprescindible para la vida, por sus mltiples propiedades, es ampliamente utilizada en actividades diarias tales como la agricultura (70% al 80%), la industria (20%), el uso domstico (6%), entre otras, convirtindose en uno de los recursos ms apreciados en el planeta. De ah la importancia de conservar y mantener la calidad de las fuentes naturales, de manera que se garantice su sostenibilidad y aprovechamiento para las futuras generaciones. El Estado de Veracruz es uno de los ms grandes de la repblica y cuenta con un gran nmero de bosques, ros, arroyos, lagos, lagunas, cuencas hidrolgicas y una extensa rea del litoral costero. A pesar de contar con una gran cantidad de ecosistemas, derivado de la variedad de bosques, ros y litorales costeros, en Veracruz no se tiene una cultura de la ecologa por lo que la entidad es unos de los estados con mayores indicies de contaminacin y deforestacin. Cabe hacer mencin que los ros se encuentran en su gran mayora contaminados, principalmente los que atraviesan grandes ciudades, ya que los drenajes son vertidos indiscriminadamente a ellos y al mar. En materia de deforestacin el estado de Veracruz es el segundo lugar en el nivel nacional con este problema, slo por debajo del Distrito Federal. Los municipios que presentan mayores ndices de contaminacin en sus ros y dems mantos acuferos son, Xalapa, Poza Rica, Crdoba, Orizaba, Coatzacoalcos, Catemaco y San Rafael. La Escherichia Coli es quizs el organismo procariota ms estudiado por el ser humano, se trata de una bacteria que se encuentra generalmente en los intestinos animales, y por ende en las aguas negras. Es un bacilo que reacciona negativamente a la tincin de Gram (gram-negativo), es anaerobio facultativo, mvil por flagelos peritricos, no forma esporas, es capaz de fermentar la glucosa y la lactosa y su prueba de IMVIC es ++--. La Escherichia coli puede causar infecciones intestinales y extraintestinales generalmente graves, tales como infecciones del aparato excretor, cistitis, meningitis, peritonitis, mastitis, septicemia y neumona Gram-negativa. Las aguas del Ro Coatzacoalcos, sus afluentes (ro Calzadas, arroyo Gopalapa y arroyo Teapa) y la laguna Pajaritos han sufrido alteracin en su calidad con motivo de las descargas de aguas residuales provenientes de procesos industriales y asentamientos humanos, que vierten 30.7 toneladas al da de materia orgnica medida como demanda qumica de oxgeno, 6.2 toneladas al da de slidos suspendidos totales, 1.5 toneladas al da de nutrientes, 1.5 toneladas al da de metales pesados, 0.13 toneladas al da de compuestos orgnicos txicos y 25.3 toneladas al da de sulfatos, entre otros, ms contaminacin microbiolgica. La caracterizacin microbiolgica en el Ro calzadas, dar una idea de la magnitud del nivel de contaminacin por Escherichia Coli en sus aguas, y con

esto saber ante problema de contaminacin nos estamos enfrentando en su cauce y el peligro latente que representa a la poblacin cerca de l. 1.1 Definicin del problema El Estado de Veracruz es uno de los ms grandes de la repblica y cuenta con un buen nmero de bosques, ros, arroyos, lagos, lagunas, cuencas hidrolgicas y una extensa rea del litoral costero. A pesar de contar con una gran cantidad de ecosistemas, derivado de la variedad de bosques, ros y litorales costeros, en Veracruz no se tiene una cultura de la ecologa por lo que la entidad es unos de los estados con mayores indicies de contaminacin y deforestacin. Cabe hacer mencin que los ros se encuentran en su gran mayora contaminados, principalmente los que atraviesan grandes ciudades, ya que los drenajes son vertidos indiscriminadamente a ellos y al mar. En materia de deforestacin el estado de Veracruz es el segundo lugar en el nivel nacional con este problema, slo por debajo del Distrito Federal. Los municipios que presentan mayores ndices de contaminacin en sus ros y dems mantos acuferos son, Xalapa, Poza Rica, Crdoba, Orizaba, Coatzacoalcos, Catemaco y San Rafael. Los ltimos ndices de calidad del agua demostraron que Veracruz no tiene ros sanos, situacin que empieza a repercutir en la muerte de las especies que habitan en los primeros 15 metros al margen del afluente, seal Carlos Welsh Rodrguez, investigador del Centro de Ciencias de la Tierra de la Universidad Veracruzana. En ese sentido indic que las especies empiezan a emigrar a zonas ms altas o bajas, donde encuentren agua de calidad para sobrevivir. Las consecuencias de la contaminacin de los cuerpos de agua se aprecian porque "estamos perdiendo biodiversidad en las cuencas hidrolgicas, perdiendo especies que viven en los primeros 15 o 20 metros al margen de los ros. El problema a tratar en cuestin es llevar a cabo una caracterizacin microbiolgica del agua del ro calzadas para determinar el nivel de contaminacin por la presencia de la Escherichia Coli y as podremos determinar que tan peligroso es para la poblacin cercana a l y as tambin ver los posibles riesgos a la salud que se puedan derivar de est.

1.2 Delimitacin del problema Es por lo anterior expuesto que creemos que esta investigacin es necesaria para la llevar a cabo un estudio microbiolgico del nivel de contaminacin con el que el ro calzadas se encuentra en estos momentos, y saber cul es su posible impacto sobre la poblacin circundante. Este estudio ayudar a realizar posteriores investigaciones sobre el nivel de contaminacin del ro calzadas, y con esto determinar su peligrosidad para la poblacin que est cercana a l y as tomar medidas necesarias para disminuir sus niveles de polucin o llevar a cabo un programa de tratamiento de aguas residuales que ayude a disminuir su impacto sobre la poblacin. Se realizaran una serie estudios microbiolgicos al agua del Ro calzadas, esto con el fin de poder determinar su nivel de contaminacin por la presencia de la bacteria Escherichia Coli en est. Esto con el fin de cuantificar el dao que se le ah hecho al ro por la actividad industrial y municipal. Para esto utilizaremos de un grupo de anlisis y realizacin de pruebas microbiolgicas para el estudio del agua del Ro calzada mediante normas oficiales mexicanas que servirn de base para estos estudios. Para esto se contara con el personal capacitado a nivel tcnico y laboratorio para efectuar estos estudios y anlisis dentro de laboratorio de Ingeniera Bioqumica y Qumica del ITESCO.

1.3 Objetivos Los objetivos aqu establecidos determinaran el camino a seguir durante el tiempo que se lleve a cabo la investigacin y el anlisis de los datos obtenidos durante el proceso de experimentacin para el estudio microbiolgico del agua del Ro calzadas para determinar su nivel de contaminacin por la presencia de Escherichia coli.

1.3.1 Objetivo general Realizar la caracterizacin microbiolgica del agua del Ro Calzadas para determinar el nivel de la contaminacin por la presencia de Escherichia coli.

1.3.2 Objetivos especficos 1. Investigar informacin relacionada con la contaminacin del Ro Calzadas. 2. Conocer las causas por las cuales el Ro Calzadas pueda tener presencia de Escherichia coli en sus aguas. 3. Realizar anlisis microbiolgicos en base a las normas de referencia. 4. Aislar cepas con caractersticas morfolgicas a Escherichia coli 5. Interpretar los resultados obtenidos. 6. Determinar si el agua del Ro Calzadas est apta para el consumo humano en base a los resultados obtenidos.

1.4 Hiptesis Caracterizando microbiolgicamente el agua del Ro Calzadas, se dar a conocer la presencia de Escherichia Coli.

o Variable dependiente: A partir de las muestras de agua del rio calzadas se efectuaran anlisis microbiolgicos, para comprobar la presencia de la Escherichia coli. o Variable independiente: Se tomara muestras del Ro Calzadas para la realizacin de pruebas microbiolgicas.

1.5 Justificacin La Realizacin de este proyecto se debe a la preocupacin generalizada por el medio ambiente debido a los excesos de nuestra sociedad debidos al consumismo global, al desarrollo industrial desordenado, la ignorancia de la poblacin, la falta de responsabilidad de los gobiernos: municipales, estatales y federales. Con la presente investigacin se pretende determinar el nivel de contaminacin del Ro Calzadas en Coatzacoalcos, ya que por la actividad industrial y la descarga de aguas residuales domesticas en este han venido incrementando su nivel de polucin en los ltimos aos. Es as que se quiere saber de manera cualitativa y cuantitativa la contaminacin mediante su caracterizacin microbiolgica por la presencia de la Escherichia Coli en sus aguas. El control de la calidad microbiolgica del agua de consumo y de vertido, requiere una serie de anlisis dirigidos a determinar la presencia de microorganismos patgenos, como por ejemplo la Escherichia Coli. La Escherichia Coli es una bacteria que puede perjudicar severamente la salud de las personas enfermas, como la trasmisin es por medio de los alimentos y agua, es posible prevenir el contagio si se tienen en cuenta algunas simples recomendaciones. La deteccin y cuantificacin de coliformes totales y Escherichia Coli como microorganismos indicadores de contaminacin fecal tiene gran importancia en el control microbiolgico de la calidad sanitaria de las aguas. Tradicionalmente se le ha considerado como indicador de contaminacin fecal en el control de calidad del agua destinada al consumo humano en razn de que, en los medios acuticos, los coliformes son ms resistentes que las bacterias patgenas intestinales y porque su origen es principalmente fecal. Por tanto, su ausencia indica que el agua es bacteriolgicamente segura. Asimismo, su nmero en el agua es proporcional al grado de contaminacin fecal; mientras ms coliformes se aslan del agua, mayor es la gravedad de la descarga de heces. El riesgo de contaminacin tanto a nivel humano como ambiental hace necesario el control de la presencia de microorganismos en el agua. Determinar el tipo de microorganismos presentes y su concentracin proporciona herramientas indispensables para conocer la calidad del agua y para la toma de decisiones en relacin al control de vertidos, tratamiento de aguas y conservacin de ecosistemas.

CAPITULO II MARCO TEORICO

2.- Fundamento Terico

En este captulo se dar a conocer los aspectos tericos sobre los que est fundamentado este trabajo y as poder comprender de una manera ms amplia, su importancia, su impacto y su contribucin. De tal forma que cada uno de los temas aqu descritos permite tener el conocimiento necesario para comprender ms sobre tema de estudio en cuestin y as comprender de lo que se hable ms adelante sobre este tema. 2.1 Ro Calzadas El Ro Huazuntln nace en la Sierra de Santa marta, en su recorrido, el canal principal recoge los aportes de otros ros importantes como el Ozuluapa, Texizapa, Tilaza y Chacalapa y comprende una superficie de drenaje de 800km 2. En su porcin terminal el ro se bifurca; el canal principal cambia de nombre a Ro Calzadas, el cual desemboca en el Ro Coatzacoalcos con un volumen estimado de 11 m3/s22. De acuerdo con el anlisis de la dinmica hidrolgica, el Ro Calzadas es la va de entrada de agua ms importante hacia el pantano y a su vez la va de salida ms eficiente, tanto de agua como de la carga de materia orgnica que ah se acumula y produce. Esto significa que en el pantano se realiza un movimiento lento de flujo y reflujo de agua que tiene como origen fundamental el Ro Calzadas y la precipitacin pluvial, drena superficial y subsuperficialmente hacia el pantano , para regresar nuevamente al Ro Calzadas y salir hacia la desembocadura del Ro Coatzacoalcos. Esta dinmica no es tan simple, vara estacionalmente y est influenciada por la confluencia del ro Calzadas con el Coatzacoalcos, donde tanto los volmenes de agua provenientes del ro Coatzacoalcos, como la entrada de agua marina intervienen y afectan este proceso de flujo y reflujo del pantano en forma diferencial20. Durante la estacin de lluvias el nivel del agua va aumentando progresivamente por el aporte de agua dulce de los ros y por la precipitacin local. El pantano alcanza la condicin de inundacin producto de los niveles de saturacin superficial y manto fretico. El Ro Calzadas desborda sus aguas sobre el pantano y stas se desplazan en abanico hasta la rivera del ro Coatzacoalcos con una direccin predominante hacia el sureste20. El Ro Calzadas tambin recibe la influencia de agua marina a travs de su confluencia con el Coatzacoalcos y esta condicin determina la distribucin de varios organismos estuarinos de importancia como el mangle y el camarn, que entra en su etapa de cra hacia los cuerpos de aguas interiores (estuarios y lagunas). Desafortunadamente tambin por este medio penetran los contaminantes provenientes de la zona industrial de la regin, con impactos sobre estas poblaciones20. Tanto en el escenario de inundacin, como en el de drenaje, la va fundamental de circulacin del agua es el Ro Calzadas, lo que se hace evidente al observar la
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ausencia de un cauce profundo y bien consolidado, as como riberas diferenciadas en este afluente, en cambio el Ro Coatzacoalcos presenta un bordo claramente definido y un cauce ms profundo que impide su desbordamiento hacia el pantano, excepto tal vez en condiciones de avenidas extremas. Es posible que el Ro Coatzacoalcos apoye el proceso de inundacin del pantano a travs de la saturacin del manto fretico; sin embargo, superficialmente est aislado de la zona de inundacin por los bordos de sus riberas y por el antiguo cauce18. Ro Calzadas mostrado en el mapa de la figura 120.

Figura 1.- Modelo de elevacin digital con sub cuencas del Coatzacoalcos Fuente: Pronatura (2009). Plan para la Conservacin de Sitios en la Cuenca media y baja del ro Coatzacoalcos. Coatzacoalcos: indito

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2.1.1 Contaminacin en el Ro Calzadas. Los principales problemas de contaminacin en la regin, se ubican en los cuerpos de agua superficial. Las aguas costeras y esteros son los receptores finales de estas cargas contaminantes2. Conforme lo reflejan los registros del ndice de calidad de agua (ICA) de las estaciones de monitoreo sobre el ro Coatzacoalcos, se hace evidente que conforme el ro avanza hacia su desembocadura, existe una mayor contaminacin debido al incremento de las descargas de los centros urbanos e industriales a lo largo del cauce ocasionando que el ro no logre asimilar la carga contaminante y por consiguiente no puede diluirlas lo suficiente para lograr una recuperacin de su calidad en la ltima parte de su trayecto2. Sobre el Ro Teapa, se ubica la estacin La Cangrejera con solo tres aos de registros con los que se obtiene un ICA que lo define con calidad muy cerca de los lmites de contaminacin. En el Ro Calzadas, perteneciente a la cuenca del Huazuntln, con registros de 1975 a 1997, la estacin reporta un ICA promedio que lo caracteriza como contaminado2. A su vez actualmente el ro Calzadas tambin se ve afectado por que algunas colonias de Coatzacoalcos que descargan sus aguas residuales en l, como lo son: la Lpez Mateos, Ampliacin Lpez Mateos y Coatzacoalcos, as como la Divina Providencia, Teresa Morales y San Silverio, adems del colector de la colonia Primero de Mayo3.

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2.2 Contaminacin de aguas en Mxico. Se calcula que en la Tierra existen aproximadamente 13385, 000,000 Km 3 de agua, de los cuales el 97.3% es salada, el 2.08% se encuentra en los polos y slo una pequea parte est efectivamente disponible para nuestras necesidades.

Tabla 1.- Reparto del agua sobre la Tierra Fuente: Blanca Elena Jimnez Cisneros (2001). La contaminacin ambiental en Mxico. Mxico a DF: Limusa Noriega Editores (1 Ed). .

La renovacin natural del recurso se realiza a travs del ciclo hidrolgico. Por precipitacin cae 28% del agua en la tierra y el 72 % en el mar. Del agua que cae en la tierra: 7% se percola a los acuferos 8% va al mar por escurrimientos y, El 13% restante, regresa a la atmosfera por evaporacin (de los cuerpos de agua superficiales) y evapotranspiracin (de la cubierta vegetal). De tal manera que slo el 7% del agua de lluvia recupera en los diversos cuerpos de agua para su posible empleo como agua dulce, mientras que el 93% se pierde por medios fsicos o biolgicos (evapotranspiracin)5. Aparte de la condicin climtica, la distribucin y abundancia del agua en el mundo depende de la geologa, orografa, tipo de suelo y cubierta vegetal. Estos factores, por s mismos, imponen variaciones espaciales y temporales en la abundancia del recurso. En especial, para la disponibilidad del agua subterrnea (principal fuente de agua para consumo humano debido a que generalmente tiene una mejor calidad) influye el tipo de suelo (permeabilidad, grado de drenaje y la relacin entre erosin e infiltracin). Como resultado, la distribucin mundial del agua til es muy desigual, a tal grado que ocho pases (Canad, Noruega, Brasil, Venezuela, Suecia, Australia, la comunidad de Estados Independientes y Estados Unidos) concentran prcticamente el 90% del recurso, mientras que otros (Egipto, Sudfrica y Suazilandia en especial) deben complementar su abastecimiento con importaciones de los excedentes de otras naciones. Por si fuera poco, la carencia
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de infraestructura adecuada para el aprovechamiento del agua acrecienta las diferencias. En efecto mientras millones de personas cuentan con una dotacin de apenas 50 L/d, en pases desarrollados este valor fcilmente sobre pasa los 400 L/hab xd (Garduo 1992). El ndice de escasez de calculado con la metodologa de Falkenmark (1989) para Mxico sita al pas como una regin con disponibilidad de agua comprometida por su variacin temporal posiblemente contaminacin, de la suerte que si no desarrollamos una administracin adecuada para su manejo, almacenamiento y proteccin, los mexicanos sufriremos escasez de agua5. El agua en Mxico El 67% del territorio mexicano es rido y solamente el 33% es hmedo o subhmedo. La precipitacin media anual es de 777mm, de los cuales cerca del 27% se transforma en un escurrimiento de 13,000 m 3/s con una parte no recuperable de aproximadamente 3,488 m3/s (Garduo, 1992). Al igual que en el resto del mundo, la distribucin es muy irregular y se concentra principalmente en el Sur en las cuencas de los ros Grijalva-Usumacinta, Papaloapan, Pnuco y Balsas durante una estacin de pocos meses. En el norte y altiplano central regiones que representan ms de la mitad del territorio nacional- se registra casi 20% del escurrimiento medio anual y es all donde se encuentra las dos terceras partes de la poblacin, la mayor parte de la industria y las zonas agrcolas (figura 2.1). As, aun cuando el balance global del pas es positivo, los balances regionales en casi la mitad del territorio muestran un dficit considerable. Tal es el caso de las regiones de Baja California, Bravo, Lerma y el valle de Mxico. La figura 2.2 muestra el balance hidrulico nacional y la figura 2.3 muestra la distribucin de agua en Mxico por cuenca hidrolgica5.

Figura 2.1. Distribucin nacional del agua Fuente: Blanca Elena Jimnez Cisneros (2001). La contaminacin ambiental en Mxico. Mxico a DF: Limusa Noriega Editores (1 Ed).

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Figura 2.2. Balance hidrulico Nacional (base anual) Fuente: Blanca Elena Jimnez Cisneros (2001). La contaminacin ambiental en Mxico. Mxico a DF: Limusa Noriega Editores (1 Ed).

Usos Los usos que se pueden dar al agua son variados y se clasifican en: 1. Consumo humano (bebidas, cocina y procesamiento de alimentos). 2. Limpieza personal. 3. Cultivo de peces, mariscos o cualquier otro tipo de vida acutica. 4. Agricultura. 5. Industria. 6. Municipales (riega de jardines, lavado de coches, fuentes de ornato, lavado de calles e instalaciones pblicas)5.

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Figura 2.3. Distribucin del agua en Mxico por cuenca hidrolgica. Fuente: Blanca Elena Jimnez Cisneros (2001). La contaminacin ambiental en Mxico. Mxico a DF: Limusa Noriega Editores (1 Ed).

El ltimo uso (transporte de desechos), aun que pareciera inaceptable, actualmente se da con frecuencia, a muchos cuerpos de agua, a pesar de que esta prctica limita la posibilidad de emplearlos para otros fines. La figura 2.4 muestra el empleo en el mbito mundial5.

Figura 2.4. Empleo del agua a nivel mundial Fuente: Blanca Elena Jimnez Cisneros (2001). La contaminacin ambiental en Mxico. Mxico a DF: Limusa Noriega Editores (1 Ed).

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Calidad del Agua El agua a diferencia del aire tiene una composicin precisa (H 2O) y, por lo tanto, es fcil identificar los componentes ajenos a ella. Sin embargo, la definicin de cules son contaminantes es difcil. Es un hecho que el agua rara vez se encuentra en forma pura y, afortunadamente, para fines prcticos no se le requiere as o no importa el que contenga otros compuestos; todo depende del uso que se le d. En general, se considera como contaminante al exceso de materia o energa (calor) que provoque dao a los humanos, animales, plantas y bienes, o bien, que perturbe negativamente las actividades que normalmente se desarrollan cerca o dentro del agua. De esta forma, no existe una divisin precisa entre las aguas contaminadas y las no contaminadas; esta calificacin se atribuye en funcin del uso, las exigencias higinicas y del grado de avance de la ciencia y tecnologa para determinar los efectos y medir los contaminantes. A pesar de la dificultad para definir la contaminacin, es claro que sta provoca el abatimiento o muerte de la flora y fauna, impide el uso del agua en industrias o ciudades y deteriora el medio ambiente, e incluso, el paisaje. El origen de la contaminacin es muy variado pero se puede citar como causantes a los desechos urbanos e industriales, los drenajes de la agricultura y de minas, la erosin de plantas depuradoras de sustancias txicas (accidentes o intencionales), los efluentes de plantas depuradoras, los subproductos de los procesos de depuracin, la ruptura de drenajes y el lavado de la atmsfera, entre otros. No hay duda de que el solvente universal no slo disuelve, sino adems arrastra y emulsiona a gran nmero de compuestos con los que entra en contacto a lo largo de su ciclo y que modifica su calidad. El problema del agua es complejo; para poder hacer uso de ella se requiere que tenga la calidad adecuada y exista en cantidad suficiente durante un periodo y poca del ao determinados. Para evaluar la cantidad disponible de agua, tomando en cuenta su calidad, se utilizan ndices de calidad de agua. Jimnez, y otros autores, en 1992, desarrollaron el clculo de un ndice conocido como potencial de uso (PU). Con l se toma en cuenta la calidad de agua a partir de la informacin disponible, es decir, por medio de la caracterizacin (actual y futura) de los cuerpos de agua, el empleo que se les va a dar y la cantidad disponible (lo ideal ecolgicamente disponible). Determinando el promedio de nmero de veces que los parmetros de los que se tiene informacin para una regin dada, exceden el criterio de un uso determinado. La figura 2.6 muestra las principales cuencas contaminadas del pas en funcin del potencial de uso de agua para abastecimiento en los cuerpos de agua superficiales desarrollado por Jimnez (Jimnez et al., 1992)5.

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Figura 2.5. Potencial de uso del agua en algunas cuencas del pas. Fuente: Blanca Elena Jimnez Cisneros (2001). La contaminacin ambiental en Mxico. Mxico a DF: Limusa Noriega Editores (1 Ed).

Clasificacin de de los componentes presentes en el agua. La barrera entre qu es un compuesto benfico, muchas veces es cuestin de la cantidad en la cual se encuentra una sustancia, valor que no es universal para los seres vivos o usos del agua. De acuerdo con su naturalesa Se distinguen los contaminantes en qumicos, biolgicos y fsicos. Qumicos. Los contaminantes qumicos provienen de los drenajes de minas, desechos solubilizados de la agricultura, derrames de petrleo, pesticidas, aguas residuales municipales, desechos lquidos industriales y componentes radiactivos. Producen efectos diversos y pueden ser de origen natural o sinttico. Algunos son desechados directamente, otros, se forman por la reaccin entre diferentes compuestos en el agua y, por ltimo, una pequea fraccin se forma durante el procesamiento del agua. Entre estos ltimos se encuentran los organoclorados (tetracloruro de carbono y cloroformo, principalmente) que se forman durante la desinfeccin del agua con cloro. Biolgico. Son seres vivos que provocan enfermedades en el hombre u otras especies. Las ms comunes en el hombre son la tifoidea, la salmonelosis, disentera, clera y helmintiasis. Los agentes que las causan entran al agua a travs de las heces fecales de humanos o animales. Para tener una idea de la magnitud de este problema, se estima que el 80% de todas las enfermedades, y ms de 1/3 de los fallecimientos en pases en vas de desarrollo, se debe al consumo de agua contaminada. Fsicos. Son alteraciones de las propiedades fsicas del agua, tales como la temperatura, color, etc. Su origen y efecto son diversos5.
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 De acuerdo con el tamao Segn la medida del contaminante, existe: Materia suspendida. Corresponde a molculas en fase dispersa con dimetro equivalente ente 1 y 100 m. Materia coloidal. Es materia suspendida con caractersticas similares a la materia disuelta. Tiene dimetro equivalente entre 10 -3 y 1 m y se caracteriza por ser de sedimentacin muy lenta. Materia disuelta. Son molculas o iones disueltos con dimetro equivalente entre 10-5 y 10-3 m. En general, la dificultad para eliminar los contaminantes es de mayor a menor en este orden: disueltos, coloidales y suspendidos. De acuerdo al grupo al que pertenece Esta clasificacin tiende a agrupar compuestos similares, independientemente de sus efectos o fuentes. Los grupos ms comunes que se distinguen son los que se mencionan en la siguiente lista. Biolgicos Bifenilos policlorados Compuestos orgnicos biodegradables Orgnicos refractarios Detergentes teres Fenoles Hidrocarburos Metales No metales Nutrientes (N y P) Orgnicos refractarios Plaguicidas Radiactivos Radicales (CN-) Eutroficacin acelerada La eutroficacin es el proceso natural de envejecimiento de cuerpos de agua estancada, por ejemplo: lagos, presas, etc. La contaminacin acelera la velocidad de este proceso acortando el periodo de vida. La secuencia que sigue un lago se muestra en la Figuera 2.8. Los lagos oligotrficos representan el estado ms joven de la sucesin que caracteriza por una baja concentracin de nutrientes y poca productividad biolgica. Al irse acumulando los materiales aportados por los escurrimientos que alimentan al lago, aumenta el contenido de flora y fauna. Si existe una gran cantidad de nutrientes, en especial nitrgeno y fosforo, las algas comienzan a proliferar en forma anormal, cubren la superficie e impiden el paso de la luz y la oxigenacin del cuerpo. Al morir las plantas, stas se van al fondo en
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donde se descomponen en condiciones anaerobias. Con el transcurso del tiempo, la acumulacin de sedimentos en el fondo y la alta tasa de evaporacin provocada por las plantas de la superficie, genera el desecamiento del lago y su transformacin en pantano. La aceleracin de este proceso por el aporte de N y P en las aguas residuales se denomina eutroficacin acelerada5.

Figura 2.6. Eutroficacin. Fuente: Blanca Elena Jimnez Cisneros (2001). La contaminacin ambiental en Mxico. Mxico a DF: Limusa Noriega Editores (1 Ed).

El crecimiento excesivo de las plantas acuticas es el resultado de los cambios provocados en las condiciones fsicas, qumicas y biolgicas del agua por el aporte incontrolado de nutrientes de las aguas residuales de los ncleos urbanos, agrcolas e industriales y por el deterioro de los suelos que componen las cuencas hidrogrficas. Algunas de los problemas causados por las malezas acuticas son5: Prdida de agua a causa de la evaporacin de las plantas. Deterioro de la calidad del agua. Prdida de la biodiversidad de los cuerpos de agua por el desplazamiento de las especies nativas. Riesgos para la salud pblica por la proliferacin de fauna nociva, causa potencial de enfermedades. Obstruccin de canales y drenajes en zonas de riesgo y tomas de plantas hidroelctricas. Restriccin al uso turstico, a las actividades recreativas y pesqueras. Reduccin de la vida til de los cuerpos de agua a causa del aumento de los sedimentos5.

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2.3 Uso de bioindicadores para evaluar la calidad del agua Otro parmetro interesante para evaluar la calidad del agua es el uso de bioindicadores. Las especies indicadoras son aquellos organismos (o restos de los mismos) que ayudan a descifrar cualquier fenmeno o acontecimiento actual (o pasado) relacionado con el estudio de un ambiente6. Los microorganismos indicadores son aquellos que tienen un comportamiento similar a los patgenos (concentracin y reaccin frente a factores ambientales y barreras artificiales), pero son ms rpidos, econmicos y fciles de identificar. Una vez se ha evidenciado la presencia de grupos indicadores, se puede inferir que los patgenos se encuentran presentes en la misma concentracin y que su comportamiento frente a diferentes factores como pH, temperatura, presencia de nutrientes, tiempo de retencin hidrulica o sistemas de desinfeccin es similar a la del indicador8. A principios de siglo se propuso la utilizacin de listas de organismos como indicadores de caractersticas del agua en relacin con la mayor o menor cantidad de materia orgnica. La idea de usar como indicadores a las especies se generaliz, aplicndose a la vegetacin terrestre y al plancton marino6. La Organizacin Mundial de la Salud (WHO, 1977) recomienda utilizar como indicadores de contaminacin fecal para aguas costeras a Escherichia coli y Estreptococos fecales, debido a que Escherichia coli. Los coliformes fecales y Escherichia coli en particular, se han seleccionado como indicadores de contaminacin fecal debido a su relacin con el grupo tifoide paratifoide y a su alta concentracin en diferentes tipos de muestras23. Los coliformes fecales son un subgrupo de los coliformes totales, capaz de fermentar la lactosa a 44.5C. Aproximadamente el 95% del grupo de los coliformes presentes en heces fecales, estn formados por Escherichia coli y ciertas especies de Klebsiella. Ya que los coliformes fecales se encuentran casi exclusivamente en las heces de animales de sangre caliente, se considera que reflejan mejor la presencia de contaminacin fecal. Otro de los aspectos negativos del uso de los coliformes totales como indicador es el hecho de que algunos coliformes son capaces de multiplicarse en el agua (Madigan y col., 1997)8. Los coliformes fecales se denominan termotolerantes por su capacidad de soportar temperaturas ms elevadas. Esta denominacin est ganando ms adeptos actualmente, pues sera una forma ms apropiada de definir este subgrupo que se diferencia de los coliformes totales por la caracterstica de crecer a una temperatura superior8. Herrera y Surez (2005) observaron que los Coliformes fecales y los Enterococos son los indicadores ms apropiados para determinar la presencia de
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contaminacin de origen fecal en el cuerpo de agua. Fujioka et al. (1999) sostienen que E. coli y Enterococos son ubicuos y pueden persistir por largos periodos de tiempo en agua y suelos tropicales y subtropicales23. El control de los parmetros fsico-qumicos y microbiolgicos es muy importante tanto en los sistemas de potabilizacin como de depuracin del agua. Sin embargo, en los lugares donde el agua es consumida por el hombre o es reutilizada, el factor de riesgo ms importante est asociado con la exposicin a agentes biolgicos que incluyen bacterias patgenas, helmintos, protozoos y virus entricos (Asano y Levine, 1998)23. El riesgo de contaminacin tanto a nivel humano como ambiental hace necesario el control de la presencia de microorganismos en el agua. Determinar el tipo de microorganismos presentes y su concentracin proporciona herramientas indispensables para conocer la calidad del agua y para la toma de decisiones en relacin al control de vertidos, tratamiento de aguas y conservacin de ecosistemas23. 2.4 Escherichia coli. Escherichia coli es un bacilo corto Gram negativo que se encuentra clasificado dentro de la familia Enterobacteriaceae (bacterias entricas), existe como comensal en el intestino delgado de humanos y animales. Sin embargo, hay algunas cepas de E. coli patgenas que provocan enfermedades diarreicas. Estas Escherichia coli se clasifican con base en las caractersticas que presentan sus factores de virulencia nicos, cada grupo provoca la enfermedad por un mecanismo diferente. Las propiedades de adherencia a las clulas epiteliales de los intestinos grueso y delgado son codificadas por genes situados en plsmidos. De manera similar las toxinas son mediadas por plsmidos o fagos (figura 2.7 y 2.8)12. La Escherichia coli es un miembro de la flora intestinal normal, y se identific como un patgeno de origen alimentario en 1971, cuando se descubri que unos quesos importados en 14 estados americanos estaban contaminados con una cepa enteroinvasiva que afect a casi 400 individuos12. Basndose en los sndromes y en las caractersticas de las enfermedades, y de las enfermedades, y tambin en su efecto en determinados cultivos celulares y en los grupos serolgicos, se han identificado cinco grupos virulentos de Escherichia coli: enterogregante (EAggEC), enterohemorrgico (EHEC), enteroinvasivo (EIEC), entopatgeno (EPEC) y enterotoxignico (ETEC) 12. La Escherichia coli y la mayor parte de las entero bacterias entricas forman colonias lisas, circulares, convexas, con bordes bien diferenciados. Las colonias de enterobacter son similares pero un poco ms mucoides. Las colonias de

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klebsiela son grandes, muy mucoides y tienden a confluir cuando la incubacin se prolonga. Algunas cepas de Escherichia coli producen hemlisis en agar sangre9. Por lo general, la Escherichia coli ocasiona reacciones positivas para indol, lisina descarboxilasa y fermentacin del manitol y produce gas a partir de glucosa. Los aislados a partir de la orina pueden identificarse con rapidez como Escherichia coli por la hemlisis sobre agar sangre, la morfologa tpica de las colonias con brillo iridiscente sobre un medio diferencial como agar EMB y la prueba positiva en la mancha indol. Ms de 90% de las E. coli aisladas son positivas para glucuronidasa con el empleo del sustrato 4-metilumbeliferil- -glucurnido (MUG). Los aislados de otros sitios anatmicos diferentes del aparato urinario, con propiedades caractersticas (adems de las pruebas negativas de oxidasa) casi siempre se confirman como E. coli mediante prueba MUG positiva9. Para la diferenciacin bioqumica pueden emplearse los patrones de fermentacin de los carbohidratos y actividad de los aminocidos descarboxilasas y otras enzimas. Algunas pruebas, por ejemplo produccin de indol a partir de triptfano, se emplean con regularidad en sistemas de identificacin rpida, en tanto que otras, como la reaccin de Voges-Proskauer (produccin de acetilmetilcarbinol) se utilizan con menor frecuencia. Los cultivos sobre medios diferenciales con colorantes especiales y carbohidratos (por ej., eosina-azul de metileno [EMB; del ingls, eosin-methylene blue], de MacConkey o medio de desoxicolato) distinguen las colonias fermentadoras de lactosa (pigmentada) de las no fermentadoras de lactosa (no pigmentadas) y permiten una identificacin presuntiva rpida de las bacterias entricas9. Los animales y el hombre tambin constituyen una fuente importante de bacterias patgenas. Las bacterias contenidas en la saliva se liberan a la atmsfera al hablar, toser y estornudar; la descamacin de la piel y el cabello es una fuente constante de generacin de virus, bacterias y hongos; las heces de animales y humanos pueden contaminar el suelo con microorganismos potencialmente patgenos, y existe la posibilidad de que sean suspendidos posteriormente en la atmsfera. En diversas muestras de polvo urbano y casero de la Ciudad de Mxico (datos no publicados) se ha aislado la bacteria Escherichia coli, indicadora de contaminacin fecal, y que constituye el 40% del total de bacterias Coliformes aisladas en el polvo, lo que indica un riesgo potencial de contaminacin por sta y otras bacterias patgenas, as como por virus o parsitos11.

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Figura 2.7. Estructura de la Escherichia coli. Fuente: Crdenas Teno Manuel. Colibacilosis - Escherichia Coli. Puede encontrarse en: http://www.canariculturacolor.com/colibacilosis-aves.

Figura 2.8. Escherichia coli vista por microscopio electrnico. Fuente: Madigan Michael T., Martinko John M. (2003), Parker jack. Biologia de los a microorganismos, 10 edicin. Madrid: Pearson Educacion.

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2.4.1 Patogenicidad de la Escherichia coli. Algunos microorganismos son patgenos por las toxinas que producen. Estos organismos no necesitan llegar a los tejidos del hospedador. Sin embargo, la mayor parte de los patgenos penetran en el epitelio e inician el proceso patognico denominado invasin. En el sitio de entrada, generalmente pequeas heridas o lesiones de la piel o de las superficies mucosas, lo ms frecuente es que se establezcan y se desarrollen. Tambin pueden multiplicarse en las superficies mucosas intactas, sobre todo si la biota normal (microbiota) est alterada o ha desaparecido, por ejemplo, por tratamiento antimicrobiano. Los patgenos pueden entonces colonizar con ms rapidez el tejido y comenzar al proceso invasivo. Igualmente, el patgeno puede desarrollarse en lugares alejados del sitio original de entrada. El acceso a estos lugares distantes, generalmente interiores, se realiza por la sangre a travs del sistema linftico9.
Tabla 2

Tabla 2.- Principales fuente de adherencia que favorecen la fijacin de patgenos microbianos a los tejidos del hospedador. Fuente: Madigan Michael T., Martinko John M. (2003), Parker jack. Biologa de los a microorganismos, 10 edicin. Madrid: Pearson Educacin.

Las cepas patgenas de Escherichia se clasifican serolgicamente de la misma forma que otras enterobacterias. Se han identificado ms de 200 serotipos O para Escherichia coli. Dado que las protenas flagelares son menos heterogneas que
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las cadenas laterales de carbohidratos que constituyen los grupos O, existen considerablemente menos tipos antignicos H (alrededor de 30)9. Los animales y el hombre constituyen una fuente importante de bacterias patgenas. Las bacterias contenidas en la saliva se liberan a la atmsfera al hablar, toser y estornudar; la descamacin de la piel y el cabello es una fuente constante de generacin de virus, bacterias y hongos; las heces de animales y humanos pueden contaminar el suelo con microorganismos potencialmente patgenos, y existe la posibilidad de que sean suspendidos posteriormente en la atmsfera. En diversas muestras de polvo urbano y casero de la Ciudad de Mxico (datos no publicados) se ha aislado la bacteria Escherichia coli, indicadora de contaminacin fecal, y que constituye el 40% del total de bacterias Coliformes aisladas en el polvo, lo que indica un riesgo potencial de contaminacin por sta y otras bacterias patgenas, as como por virus o parsitos11. Las manifestaciones clnicas de las infecciones con Escherichia coli y otras bacterias entricas dependen del sitio infectado, y por los sntomas y signos no pueden diferenciarse de los procesos causados por otras bacterias9. 1. infecciones del aparato urinario: la Escherichia coli es la causa ms comn de infecciones del aparato urinario y es responsable de casi 90% de las infecciones urinarias primarias en mujeres jvenes. Los sntomas y signos incluyen poliuria, disuria, hematuria y piuria9. El dolor en el flanco se asocia con infeccin de la parte superior del aparato. Ninguno de estos sntomas o signos es especifico de la infeccin por Escherichia coli. Las infecciones de las vas urinarias pueden provocar bacteriemia con signos clnicos de sepsis9. Por lo general, la Escherichia coli nefropatgena produce una hemolisis. mayor parte de las infecciones se deben a un pequeo nmero de tipos antgeno O de Escherichia coli. El antgeno K parece ser importante en patognesis de la infeccin. La pielonefritis se asocia con un tipo especfico pili, los pilis P, que se unen con las sustancias P del grupo sanguneo 9. La de la de

2. Enfermedades diarreicas asociadas con Escherichia coli: La Escherichia coli causante de diarrea es muy comn en todo el mundo. Estas Escherichia coli se clasifican por las caractersticas de sus propiedades de virulencia y cada grupo causa la enfermedad por un mecanismo diferente. Las propiedades de adherencia a las clulas epiteliales de los intestinos grueso y delgado so codificadas por genes situados en los plsmidos. De manera similar, las toxinas son medidas por plsmidos o por fagos9. La Escherichia coli enteropatoena (ECEP). Es una causa importante de diarrea en los lactantes, particularmente en los pases en desarrollo. La ECEP se asocio antes con brotes de diarrea en guarderas en los pases desarrollados. La ECEP se adhiere a las clulas mucosas del intestino delgado. Los factores mediados cromosomaticamente promueven adherencia firme. Hay prdida de la
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microvellosidades (borramiento), formacin de pedestales de actina filamentosa o estructuras calisiformes, y en ocasiones, las ECEP penetran a las clulas mucosas. En las micrografas electrnicas de biopsia de las lesiones del intestino delgado pueden observarse lesiones caractersticas. La infeccin por ECEP provoca diarrea acuosa, generalmente autolimitada pero puede ser crnica. La diarrea por ECEP se ha asociado por mltiples serotipos especficos de Escherichia coli; las cepas se identifican mediante la tipificacin del antgeno O y en ocasiones del antgeno H. Tambin se puede desarrollar un modelo de infeccin en dos etapas con clulas HEp-2. Las pruebas para identificar la ECEP se llevan a cabo en laboratorios de referencia. El tratamiento con antibiticos puede cortar la duracin de la diarrea por ECEP y curarla cuando es crnica 9. La Escherichia coli enterotoxigena (ECET). Es cauda comn de la diarrea del viajero y agente etiolgico importante de diarrea en lactantes de los pases en desarrollo. Factores de colonizacin de la ECET promueven en humanos a las clulas epiteliales del intestino delgado. Algunas cepas de ECET producen una exotoxina termolbil (TL) (PM 80 000) bajo control gentico de un plsmido. Su subunidad B se une con el ganglisido GM, del borde en cepillo de las clulas epiteliales del intestino delgado y facilita la entrada de la subunidad A (PM 26 000) a la clula, donde activa la adenililciclasa. Esto incrementa notablemente la adenililciclasa. Esto incrementa notablemente la concentracin local del monofosfato de adenosina cclico (cAMP), que a su vez produce hipersecrecin intensa y prolongada de agua y cloruros e inhibe la reabsorcin de sodio. La luz intestinal se distiende con el lquido y sobrevienen aumento de la peristalsis con el lquido y diarrea que duran varios das. La TL es antignica y presenta reaccin cruzada con enterotoxina del Vibrio cholerae; estimula la produccin de anticuerpos neutralizantes en el suero (y tal vez sobre la superficie del intestino) de personas previamente infectadas con Escherichia coli enterotoxgena. Las personas residentes en regiones donde estos microorganismos son muy prevalentes (p. ej., algunos pases en desarrollo) tal vez poseen anticuerpos y son menos susceptibles a sufrir diarrea con las nuevas exposiciones a la Escherichia coli productora de TL9. Algunas cepas de la ECET producen la enterotoxina termoestable ET (PM 1 500 a 4 000) bajo control gentico de un grupo heterogneo de plsmidos. La TE activa la guanililciclasa en las clulas epiteliales entricas y estimula la secrecin de lquido. Muchas cepas positivas a TE tambin producen TL. Las cepas con ambas toxinas producen diarrea ms grave9. Los plsmidos portadores de los genes para enterotoxinas (TL, TE) tambin pueden portar genes para factores de colonizacin que facilitan la adhesin de las cepas de Escherichia coli al epitelio intestinal. Factores de colonizacin reconocidos se presentan con particular frecuencia en algunos serotipos. Ciertos serotipos de la ECET se encuentra en todo el mundo; otros presentan distribucin limitada. Potencialmente cualquier Escherichia coli puede adquirir un plsmido
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que codifique para enterotoxina. No hay una asociacin definida de la ECET con las cepas de la ECEP causantes de diarrea en nios. De igual manera, no hay relacin entre cepas enterotoxgenas y cepas capaces de invadir las clulas del epitelio intestinal9. La profilaxis antimicrobiana puede ser eficaz, pero a veces incrementa la resistencia bacteriana a los antibiticos y tal vez no debe recomendarse en todos los casos. Una vez presente la diarrea, el tratamiento con antibiticos reduce de manera eficaz la duracin de la enfermedad9. La Escherichia coli enterohemorrgica (ECEH) produce verotoxina, as denominada por su efecto citotxico sobre la clulas Vero, una lnea de clulas renales del mono verde africano. Existen al menos dos variantes antignicas de la toxina. La ECEH se ha asociado con colitis hemorrgica, una variedad grave de diarrea; y con el sndrome urmico hemoltico, enfermedad capaz de producir insuficiencia renal aguda, anemia hemoltica microangioptica y trombocitopenia. La verotoxina tiene muchas propiedades similares a la toxina Shiga producida por algunas cepas de la Shigella dysenteriae tipo 1; sin embargo, las dos toxinas son antignica y genticamente distintas. De los serotipos de la Escherichia coli que producen verotoxina, el ms comn es O157:H7 y l nico que puede identificarse en muestras clnicas. LA ECEH O157:H7 no emplea sorbitol, a diferencia de las otras Escherichia coli y es negativa sobre agar sorbitol MacConkey (tiene sorbitol en lugar de lactosa); la cepa O157:H7 tambin es negativa la prueba MUG. Para identificar las cepas O157:H7 se utilizan anticuerpos especficos. Las pruebas para la verotoxina se practican en laboratorios de referencia. Muchos casos de colitis de hemorrgica y sus complicaciones asociadas pueden prevenirse mediante coccin completa de la carne molida de ternera9. La Escherichia coli enterovasiva (ECEI) produce un enfermedad muy similar a la shigelosis. La enfermedad se presenta ms comnmente en los nios de los pases en desarrollo y en las personas quienes viajan a dichos pases. Igual que la shigela, las cepas de ECEI no fermentan la lactosa, o la fermentan tardamente, y carecen de motilidad. La ECEI produce la enfermedad al invadir las clulas epiteliales de la mucosa intestinal9. La Escherichia coli enteroagresiva (ECEA) causa diarrea aguda y crnica (> 14 das de duracin) en personas de los pases en desarrollo. Estos organismos tambin son causantes de enfermedades producidas por alimentos contaminados, en pases industrializados. Se caracteriza por su patrn de adherencia a clulas humanas. EACE produce toxina parecida a TE y una hemolisina9. 3. Sepsis: cuando las defensas normales del husped son inadecuadas, la Escherichia coli puede alcanzar el torrente sanguneo y causar sepsis. Los recin nacidos a veces son muy susceptibles a la sepsis por Escherichia coli debido a que puede presentarse como consecuencia de infecciones del aparato urinario9.
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4. Meningitis: la Escherichia coli y los estreptococos del grupo B son las principales causantes de meningitis en los lactantes. Casi 75% de la Escherichia coli procedente de casos de meningitis posee el antgeno KL, el cual muestra reaccin cruzada con el polisacrido capsular del grupo B de la N. meningitidis. El mecanismo de virulencia asociado con el antgeno KL an no se comprende 9. 2.4.2 Enterotoxina de la Escherichia coli. Las enterotoxinas son exotoxinas que actan sobre el intestino delgado causando habitualmente una secrecin masiva de lquidos en la luz intestinal provocando vmitos y diarrea. Las enterotoxinas son producidas por distintas bacterias entre las que se incluyen los organismos de la intoxicacin alimentaria staphylococcus aureus, Clostridium perfrigens y Bacillus cereus, y los patgenos intestinales Vibrio cholerae, Escherichia coli y Salmonella enteritidis1. Enterotoxinas de Escherichia coli. Los Escherichia coli enterotoxgenos pueden producir dos tipos fundamentales de enterotoxinas citotnicas, TL y TS y recientemente se han demostrado en algunos serotipos (O26, O157) enterotoxinas citotxicas. Enterotoxina termolbil TL (PM 86 000). Es una toxina semejante a la colrica en cuanto a composicin, estructura, propiedades inmunolgicas y mecanismo de accin, que se diferencia por estar codificada por plsmidos (plsmidos En1). Est producida por los Escherichia coli enterotoxigenos y da lugar, despus de un periodo de incubacin de 30 minutos, a una diarrea liquida de 8-12 horas de duracin. Estas cepas para producir la enfermedad deben presentar los factores de colonizacin (CFAL, CFAIL; E8775 o fimbrias MR) que facilitan la adherencia a las clulas epiteliales del intestino delgado y la accin de la toxina. Se considera que otras bacterias gram negativas (Salmonella, Klebsiella, Pseudomonas) producen enterotoxinas semejantes1.

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2.5 Normas Mexicanas relacionadas con anlisis de aguas. Las NOM son las regulaciones tcnicas que contienen la informacin, requisitos, especificaciones, procedimientos y metodologa que permiten a las distintas dependencias gubernamentales establecer parmetros evaluables para evitar riesgos a la poblacin, a los animales y al medio ambiente. Estn presentes en prcticamente todo lo que te rodea, agua embotellada, licuadoras, llantas, ropa, etc19. Las Normas Mexicanas (NMX) son las elaboradas por un organismo nacional de normalizacin, o la SECOFI en trminos de lo dispuesto por la LFMN. Las NMX prevn para uso comn y repetido, reglas, especificaciones, atributos, mtodos de prueba, directrices, caractersticas o prescripciones aplicables a un producto u operacin, as como aquellas relativas a la terminologa, simbologa, embalaje, marcado o etiquetado10. Algunas referencias sobre normas utilizadas para anlisis de aguas.

NOM-001-ECOL-1996, Establece los lmites mximos permisibles de contaminantes en las descargas de aguas residuales en aguas y bienes nacionales. NOM-112-SSA1-1994, Bienes y Servicios. Determinacin de Bacterias Coliformes. Tcnica del nmero ms probable. NOM-127-SSA1-1994, Salud Ambiental. Agua para uso y consumo humano-lmites permisibles de calidad y tratamiento al que debe someterse el agua para su potabilizacin. NOM-230-SSA1-2002, Salud Ambiental. Agua para uso y consumo humano, requisitos sanitarios que se deben de cumplir en los sistemas de abastecimiento pblicos y privados durante el manejo del agua. Procedimientos sanitarios para el muestreo21. Normas Mexicanas NMX-AA-003-1980 Aguas Residuales. Muestreo13. NMX-AA-008-SCFI-2000 Determinacin del pH. Mtodo de Prueba14. NMX-AA-042-1987, calidad del agua. Determinacin del numero ms probable (NMP) de coliformes totales, coliformes fecales (termotolerantes) y Escherichia Coli Presuntiva16. NMX-AA-014-1980 Cuerpos Receptores.-Muestreo Reciever Bodies.Sampling15.

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2.5.1 Determinacin por el mtodo del nmero ms probable La determinacin de microorganismos coliformes totales por el mtodo del Nmero Ms Probable (NMP), se fundamenta en la capacidad de este grupo microbiano de fermentar la lactosa con produccin de cido y gas al incubarlos a 35C 1C durante 48 h., utilizando un medio de cultivo que contenga sales biliares. Esta determinacin consta de dos fases, la fase presuntiva y la fase confirmativa. En la fase presuntiva el medio de cultivo que se utiliza es el caldo lauril sulfato de sodio el cual permite la recuperacin de los microorganismos daados que se encuentren presentes en la muestra y que sean capaces de utilizar a la lactosa como fuente de carbono. Durante la fase confirmativa se emplea como medio de cultivo caldo lactosado bilis verde brillante el cual es selectivo y solo permite el desarrollo de aquellos microorganismos capaces de tolerar tanto las sales biliares como el verde brillante. La determinacin del nmero ms probable de microorganismos coliformes fecales se realiza a partir de los tubos positivos de la prueba presuntiva y se fundamenta en la capacidad de las bacterias para fermentar la lactosa y producir gas cuando son incubados a una temperatura de 44.5 0.1C por un periodo de 24 a 48 h. La bsqueda de Escherichia coli se realiza a partir de los tubos positivos de caldo EC, los cuales se siembran por agotamiento en medios selectivos y diferenciales (Agar MacConkey, Agar eosina azul de metileno) y posteriormente realizando las pruebas bioqumicas bsicas (IMViC) a las colonias tpicas7.

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CAPTULO III METODOLOGA

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3. Metodologa
Este captulo comprende principalmente de los pasos que se usaran para la realizacin del presente trabajo, de la misma forma se presenta la metodologa usada para los estudios a los que fueron sometidos las muestras de agua tomadas. Los diversos tipos de investigacin aportan las pautas necesarias para ir desarrollando de una manera clara y concreta lo que un estudio metodolgico nos puede ofrecer para poder llegar a un resultado y cumplir con los objetivos planteados durante el inicio del estudio. 3.1 Tipo de investigacin A continuacin se describirn los tipos de metodologas usadas para el desarrollo del siguiente trabajo de una menara breve pero concisa, pues los tipos de investigaciones usadas fueron las guas de las que este proyecto se apoyo para lograr su objetivo, y estas fueron: la investigacin documental; que es lo investigado para tener una base terica fundamentada sobre la cual basarse y tener claro el tema, La investigacin de campo donde se desarrollo mayormente el trabajo pues aqu se llevo a cabo la toma de muestra y los anlisis que se usaron para determinar la presencia de Escherichia coli, y por ltimo la investigacin cuantitativa donde se da conocer lo obtenido con todo lo que se realizado durante el proceso de trabajo del presente trabajo. 3.1.1 Investigacin documental El presente proyecto de tesis tiene como referencia principal la Norma Mexicana NXM-AA-42-1987 Calidad del Agua - Determinacin del Nmero ms Probable (NMP) de Coliformes Totales, Coliformes Fecales (Termotolerantes) y Escherichia coli Presuntiva, y adems de tener otras normas como: NMX-AA-003-1980 AGUAS RESIDUALES MUESTREO, NMX-AA-008-SCFI-2000 ANLISIS DE AGUA - DETERMINACIN DEL pH, NMX-AA-014-1980 CUERPOS RECEPTORES.- MUESTREO, del mismo modo se usaron libros para complementar la investigacin tales como: Reserva Especial de la Biosfera, Sierra de Santa Marta, Veracruz; Hidrologa de superficie y precipitaciones intensas 2005 en el estado de Veracruz, Plan para la Conservacin de Sitios en la Cuenca media y baja del ro Coatzacoalcos, La contaminacin ambiental en Mxico. Mxico, Microbiologa moderna de los alimentos, Microbiologa mdica de Jawetz, Melnick y Adelberg, Microbiologa ambiental. Microbiologa y Parasitologa Mdica, Tcnicas para el Anlisis Microbiolgico de Alimentos, adems fueron de utilidad algunas revistas que son: Agua potable para comunidades rurales, rehus y tratamientos avanzados de aguas residuales domsticas. Revista Virtual Pro; y Enterococcus y Escherichia coli como indicadores de contaminacin fecal en playas costeras de Lima. Revista del Instituto de Investigaciones FIGMMG, que apoyan el estudio realizado, etc.
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Ya que el Ro Calzada no es un ro que se mencione en la hidrologa o geografa de Coatzacoalcos, las fuentes electrnicas fueron una herramienta clave para la obtencin de datos tiles sobre l para lo que al marco terico se refiere, ya que existen documentos y estudios subidos a la red que aportan informacin sobre este, como son la ubicacin, fuentes contaminantes que se vierten en l, etc. 3.1.2 Investigacin de campo Puesto que el objetivo principal de esta tesis es la realizacin de una caracterizacin microbiolgica del agua del Ro Calzadas para determinar el nivel de la contaminacin por la presencia de Escherichia coli, es necesario llevar a cabo una serie de pruebas y anlisis para poder llegar a un resultado que nos demuestre este hecho, para eso contamos con las instalaciones del Instituto Tecnolgico Superior de Coatzacoalcos que nos brindo los materiales necesarios para la elaborar los estudios pertinentes en materia de anlisis de aguas. Con la finalidad de poder estudiar las aguas del Ro Calzadas es necesario el tomar muestras de agua de l, que circunda por Coatzacoalcos. Se recabaron muestras el da 22 de mayo del 2011, a las 1:30 p.m. Y posteriormente otro el da 23 de mayo a la 1:30 p.m. para con esto proceder a su anlisis.

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3.2 Procedimiento Para efectos prcticos y metodolgicos se desarrollo un simple pero til diagrama de flujo que nos ayud a organizarnos, y poder tener claro lo que se iba a llevar a cabo durante el proceso de obtencin de muestras y proceso llevado a cabo.

Procedimiento

En base a la Norma Mexicana NMX-A-042-1987

Proceso de muestreo en el Ro Calzadas

Prueba presuntiva en caldo lactosa.

Prueba confirmativa

Prueba Presuntiva para Escherichia Coli.

Preparacin de Caldo E.C. Procesamiento de la muestra para inocularla. Elaboracin del caldo lactosado y su esterilizacin. Resembrar de los tubos de lactosa que dieron positivas en el caldo E.C. Preparacin del medio EMB. Resembrar de los tubos que dieron positivo en el caldo E.C a este medio.

Realizar tres diluciones de 10 mL, 1 mL y 0.1 mL incubar a 24 hrs y monitorear de nuevo a las 48 hrs

Incubacin durante 24 hrs.

Incubar durante 24hrs y monitorear a las 48 hrs.

Revisar los tubos a las 24 hrs y 48 hrs.

Resultados obtenidos de los tubos a las 24 hrs y 48 hrs.

Revisar si el medio se torno de un tono verde metlico, ya que esto indica que es positivo para Escherichia coli.

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 Equipos Balanza analtica Parrilla elctrica Una cuba Incubadora con una temperatura de 37C Autoclave Refrigerador Tubos de ensayo de cristal refractarios de 16 mm x 160 mm con tapn de baquetilla y tapn de caucho. Tubos de fermentacin (Durham). Asas de inoculacin Papel aluminio y papel estraza Matraz erlenmeyer de 500 mL. Pipetas serolgicas Vidrio de reloj Esptula Agitador de vidrio Mechero de alcohol Reactivos. Caldo Lactosa. Caldo E.C Caldo E.M.B Agua destilada

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3.2.1 Muestreo Una de las partes fundamentales de este proyecto fue la realizacin de la toma de muestra de agua en el Ro Calzadas pues de aqu vendra el agua que es el objeto de estudio en este trabajo, y se tiene que prestar especial cuidado a esta parte puesto que para anlisis microbiolgicos, es de gran importante mantener la inocuidad de la muestra tomada ya que si est entra en contacto con alguna superficie contaminada, los anlisis hechos a esta muestra no reflejaran realmente un resultado verdadero, y estaramos equivocados al expresar lo obtenido durante el estudio al agua proveniente del Ro Calzadas. Para esto se usa como referencia la norma mexicana NMX-042-1987 Calidad del Agua - Determinacin del Nmero ms Probable (NMP) de Coliformes Totales, Coliformes Fecales (Termotolerantes) y Escherichia coli, en el apartado 7 de la misma se habla sobre el muestreo. Adems de usar tambin como referencia la norma mexicana NMX-AA-003-1980 Aguas Residuales. Muestreo. La norma NMX-042-1987 se refiere a cmo hay que tomar la muestra con frascos muestreadores que se que se hayan lavado con extremo cuidado y esterilizado, nos dispusimos a utilizar un tipo de muestreador especial que permitiera usar frascos de vidrio removibles para poderlos esterilizar y posteriormente usar para tomar las muestras de aguas con l. De tal forma que se diseo un muestreador con esas caractersticas (anexo 5). Para recolectar las muestras se uso una lancha que permiti viajar a travs del rio, y as obtener el agua necesaria para los anlisis que se llevaron a cabo en el laboratorio del Instituto Tecnolgico Superior de Coatzacoalcos, se centro la toma de muestras en 3 puntos del ro para obtenerlas, esto en base a un punto inicial, uno intermedio y otro al final del rea delimitada para el muestro (figura 3.1). Con ayuda de la lancha pudimos recolectar nuestras muestras a 1 m y a 30 cm del ro en los puntos marcados. La norma mexicana NMX-AA-003-1980 explica que el intervalo entre la toma de cada muestra simple para integrar la muestra compuesta, debe ser el suficiente para determinar la variacin de los contaminantes del agua residual, por tanto consideramos que el rea delimitada (figura 3.1) es lo suficientemente alejada una de otra para determinar la variacin de contaminantes en dicho lapso, de una manera representativa del caudal del ro. Y ya que esta misma norma explica textualmente que las muestras compuestas se deben tomar de tal manera que cubran las variaciones de las descargas durante 24 horas como mnimo, nos dispusimos a tomar la siguiente muestra a las 24 hrs de la anterior y cubrir este parmetro de manera mnima, puesto que el tiempo con el que contamos para realizar las pruebas fue insuficiente as como el equipo de laboratorio y su disponibilidad.

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Mapa 2.- Mapa satelital de los puntos en los que se tomaron las muestras. Fuente: Google Maps.

.
Figura 3.2.- Toma de la muestra a 1 m y 30 cm con ayuda del muestreador. Fuente: Tomada por Samano Chvez Alan Gabriel (2011), para la realizacin de la tesis: Caracterizacin microbiolgica del agua del rio calzadas para determinar el nivel de contaminacin por la presencia de Escherichia coli. Coatzacoalcos, ver.

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Figura 3.3.- Muestra despus de ser tomada dentro del agua y guardada. Fuente: Tomada por Samano Chvez Alan Gabriel (2011), para la realizacin de la tesis: Caracterizacin microbiolgica del agua del rio calzadas para determinar el nivel de contaminacin por la presencia de Escherichia coli. Coatzacoalcos, ver.

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 Reservacin y transporte de la muestra La norma mexicana NMX-042-1987 indica que las muestras tomadas de cuerpos receptores requieren una refrigeracin a 4 C, con el fin de prevenir e inhibir el crecimiento bacteriano dentro de los frascos de muestra, y que se recomienda el uso de una hielera (figura 3.4 y 3.5) para el transporte de las muestras hasta el laboratorio donde se le practicaran los anlisis correspondientes. As que una vez hecho el muestreo se procedi a introducir la muestra tomada en una hielera con su respectivo hielo para la preservacin de 4 C, para con esto poder transportarlas al laboratorio del Instituto Tecnolgico Superior de Coatzacoalcos.

Figura 3.4.- Hielera receptora de las muestras recabadas.

Figura 3.5.- Hielera junto al muestreador para conservacin inmediata. Fuente: Tomada por Samano Chvez Alan Gabriel (2011), para la realizacin de la tesis: Caracterizacin microbiolgica del agua del rio calzadas para determinar el nivel de contaminacin por la presencia de Escherichia coli. Coatzacoalcos, ver.

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3.2.4 Prueba Presuntiva. Antes de empezar los anlisis correspondientes se procedi a esterilizar todo material a usar en la autoclave a 394.1K (121.1C) durante 15 min (figura 3.6).

Figura 3.6.- Material en la autoclave para su esterilizacin. Fuente: Tomada por Smano Chvez Alan Gabriel (2011), para la realizacin de la tesis: Caracterizacin microbiolgica del agua del rio calzadas para determinar el nivel de contaminacin por la presencia de Escherichia coli. Coatzacoalcos, ver.

Una vez listo todo, se procedi a realizar el mtodo que la norma indica para el anlisis de las muestras, que fue el del nmero ms probable.

Se prepara e inoculo el medio antes del examen, se agito vigorosamente para obtener un mezclado ms homogneo de los microorganismos. Se preparo caldo lactosa usando un volumen de 500 mL en un matraz Erlenmeyer y una proporcin de caldo lactosa en polvo, una vez mezclado los ingredientes y eliminado los grumos se esteriliza en el autoclave a 394 1K (121 1C) durante 15 min (figura 3.7).

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Figura 3.7.- Preparacin del Caldo lactosa usado en las diluciones. Fuente: Tomada por Samano Chvez Alan Gabriel (2011), para la realizacin de la tesis: Caracterizacin microbiolgica del agua del rio calzadas para determinar el nivel de contaminacin por la presencia de Escherichia coli. Coatzacoalcos, ver.

Se utilizaron diluciones de 10.0 mL, 1.0 mL y 0.1 mL por practicidad decidi la utilizacin estas diluciones. Se usaron 3 tubos por cada dilucin hecha, con un contenido de caldo lactosa de 10.0 mL, posteriormente a esto, se le agrego 20.0 mL de la muestra de agua tomada. Una vez hecho lo anterior se dispuso a incubar a 37 C durante 24 hrs y 48 hrs, para ver el crecimiento en estos tiempos (figura 3.8).

Figura 3.8.- Guardando las muestras para su incubacin a 24 y 48 horas. Fuente: Tomada por Samano Chvez Alan Gabriel (2011), para la realizacin de la tesis: Caracterizacin microbiolgica del agua del rio calzadas para determinar el nivel de contaminacin por la presencia de Escherichia coli. Coatzacoalcos, ver.

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Examen a los tubos. Paso las 24 horas se examinaron los tubos para observarlos y as comprobar si hubo crecimiento en ellos (figura 3.9), de tal forma que se considero positivos aquellos que mostraron turbidez as como la produccin de gas dentro de los tubos de fermentacin Durham que se encuentras dentro de los tubos de ensayo (figura 3.10).

Figura 3.9.- Tubos a las 24 hrs de la incubacin. Fuente: Tomada por Smano Chvez Alan Gabriel (2011), para la realizacin de la tesis: Caracterizacin microbiolgica del agua del rio calzadas para determinar el nivel de contaminacin por la presencia de Escherichia coli. Coatzacoalcos, ver.

Figura 3.10.- Tubos positivos en produccin de gas en tubos de Durham. Fuente: Tomada por Smano Chvez Alan Gabriel (2011), para la realizacin de la tesis: Caracterizacin microbiolgica del agua del rio calzadas para determinar el nivel de contaminacin por la presencia de Escherichia coli. Coatzacoalcos, ver.

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3.2.5 Prueba confirmativa. Una vez que se confirmo la presencia de gas y turbidez en los tubos de caldo lactosa, se procedi a resembrar los tubos que dieron positivo, a caldo E.C. (figura 3.11) puesto que no se pudo usar el caldo bilis lactosa verde brillante porque no haba en existencia en el laboratorio.

Figura 3.11.- Resiembra del caldo lactosa a caldo E.C. Fuente: Tomada por Samano Chvez Alan Gabriel (2011), para la realizacin de la tesis: Caracterizacin microbiolgica del agua del rio calzadas para determinar el nivel de contaminacin por la presencia de Escherichia coli. Coatzacoalcos, ver.

Ya efectuado la resiembra se dejo incubando durante un periodo de 48 horas, para posteriormente examinar si exista produccin de gas dentro los tubos de Durham. Y as poder determinar la presencia de organismos coliformes, y para confirmar la presencia de organismos coliformes termotolerantes se uso una resiembra en medio EC, por otras 24 horas ms (figura 3.12).

Figura 3.12.- Tubos de E.C. de la primera y segunda resiembra a las 24 y 48 hrs. Fuente: Tomada por Samano Chvez Alan Gabriel (2011), para la realizacin de la tesis: Caracterizacin microbiolgica del agua del rio calzadas para determinar el nivel de contaminacin por la presencia de Escherichia coli. Coatzacoalcos, ver.

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3.2.6 Prueba presuntiva para Escherichia coli. Para la prueba presuntiva hecha para la bsqueda de Escherichia coli, se uso la resiembra de los tubos positivos de caldo E.C. mediante siembra en placas de agar EMB, ya que en el laboratorio no contaban con triptona para preparar el agua triptonada; dicha tcnica fue obtenida del manual de tcnicas para anlisis de microbiolgicos de alimentos 2da edicin de la facultad de qumica de la UNAM. Puesto que no se pudo hacer la prueba que la norma exige, que es la incubacin en agua de triptona para detectar la produccin de indol a 317 K (44C) durante un periodo de 24 horas, y posteriormente aadir 0.2 a 0.3 cm3 de reactivo de kovacs a los tubos de agua de triptona. Primeramente se preparo 500 mL de agar EMB usando 27gr para posteriormente esterilizarla en la autoclave. Una vez efectuada la esterilizacin del agar, se procedi a vaciarlos en cajas petri estriles y se espero a que se gelificara (figura 3.13).

Figura 3.13.- Vaciando el agar EMB a las cajas petri. Fuente: Tomada por Samano Chvez Alan Gabriel (2011), para la realizacin de la tesis: Caracterizacin microbiolgica del agua del rio calzadas para determinar el nivel de contaminacin por la presencia de Escherichia coli. Coatzacoalcos, ver.

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Figura 3.14.- Cajas petri en espera para su gelificacin. Fuente: Tomada por Samano Chvez Alan Gabriel (2011), para la realizacin de la tesis: Caracterizacin microbiolgica del agua del rio calzadas para determinar el nivel de contaminacin por la presencia de Escherichia coli. Coatzacoalcos, ver.

Se espero unos 5 min aproximadamente para que gelificara del todo bien, y posteriormente efectuarse el estriado en cada uno las cajas petri, as resembrando los tubos positivos del caldo E.C. a este agar y comprobar la existencia presuntiva de Escherichia coli en las muestras del agua del Ro Calzadas (figura 3.15).

Figura 3.15.-Siembra de del medio E.C. al agar EMB por estriado en cajas petri Fuente: Tomada por Samano Chvez Alan Gabriel (2011), para la realizacin de la tesis: Caracterizacin microbiolgica del agua del rio calzadas para determinar el nivel de contaminacin por la presencia de Escherichia coli. Coatzacoalcos, ver.

Se efectu la verificacin si haba crecimiento bacteriano a las 24 horas y otro para cerciorarse que hubo o no crecimiento en este agar.

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CAPTULO IV PRESENTACIN Y ANLISIS DE LOS RESULTADOS

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4. Presentacin y Anlisis de los resultados.

Este capitulo da a conocer los datos obtenidos por medio de una encuesta placada, as como los resultados de los anlisis microbiolgicos hechos en el laboratorio.

Cuestionario para la tesis: Caracterizacin microbiolgica del agua del rio calzadas para determinar el nivel de contaminacin por la presencia de Escherichia coli. Objetivo.- Obtener informacin adicional sobre la poblacin circundante del Ro Calzadas as como saber los diferentes usos que le dan a sus aguas y el posible impacto que tiene sobre estos. 1. Ha sufrido alguna enfermedad gastrointestinal, de la piel o enfermedad relacionada con estas? a) Si b) No

2. Qu actividad es la que se realiza ms en el Ro Caladas? a) Pesca b) Recreativa

3. Cuenta con servicio de drenaje y alcantarillado en su vivienda? a) Si 4. El Ro Caladas es su principal fuente de ingresos? a) Si b) No b) No

5. El Ro Caladas es su principal fuente de agua para uso cotidiano? a) Si b) No c) Regularmente

6. En que usa usualmente el agua del Ro Caladas? a) Para beber Ninguno b) Uso domestico c) Todos c) Higiene personal d)

7. Conoce la bacteria Escherichia coli? a) Si b) No

8. Sabe usted si los animales domsticos, de cra, as como aves, beben y defecan el agua del Ro Caladas? a) Si b) No

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Evaluacin de los datos obtenidos de las en cuentas hechas a 15 personas.1. Ha sufrido alguna enfermedad gastrointestinal, de la piel o enfermedad relacionada con estas? a) Si Opciones Si No
120% 100% 80% 60% 40% 20% 0% Si NO

b) No Frecuencia 16 0 Porcentaje 100 % 0%

Series1

En esta pregunta se obtuvo un 100% de afirmacin para enfermedades gastrointestinales, y un 0 % negativas, por tanto existe un riesgo potencialmente alto para las personas que entren en contacto con el agua de dicho ro. 2. Qu actividad es la que se realiza ms en el Ro Caladas? a) Pesca Opciones Pesca Recreativa
120% 100% 80% 60% 40% 20% 0% Pesca Recreativa Series1

b) Recreativa Frecuencia 16 0 Porcentaje 100 % 0%

La pesca es la actividad que ms se realiza en el Ro Calzadas, pues al preguntarles a los pobladores el 100% de estos, contesto que era la pasca la actividad predominante.

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3. Cuenta con servicio de drenaje y alcantarillado en su vivienda? a) Si Opciones Si No

20 15 10 5 0 Si No Series1

b) No Frecuencia 0 16 Porcentaje 0% 100 %

El 100% de los encuestados respondieron negativamente en esta pregunta, por tanto no se cuenta con una red de drenaje en este poblado, haciendo ms peligroso su estancia en ese lugar, pues sus desechos van directamente al ro, por tanto se contamina mas y se est ms expuesto a enfermedades gastrointestinales. 4. El Ro Caladas es su principal fuente de ingresos? a) Si Opciones Si No
80% 60% 40% Series1 20% 0% Si No

b) No Frecuencia 12 4 Porcentaje 75 % 25 %

El 75% de los encuestados aseguraron que su principal fuente de ingresos es lo que obtienen del ro y el 25% no depende del ro como fuente inmediato de dinero, pues tienen otro oficio o trabajo.

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5. El Ro Caladas es su principal fuente de agua para uso cotidiano? a) Si Opciones Si No Regularmente

80% 60% 40% 20% 0% Si No Regularmente Series1

b) No Frecuencia 12 4

c) Regularmente Porcentaje 0% 75 % 25 %

EL 75% de la poblacin que vive cerca del Ro Calzadas depende directamente del sus aguas como recurso nico para sus actividades diarias. El otro 25% cuenta con tomas de aguas municipales haciendo que el Ro Calzadas no es su nica fuente de agua. 6. En que usa usualmente el agua del Ro Caladas? a) Para beber b) Uso domestico c) Higiene personal Ninguno c) Todos Opciones Para beber Uso domestico Higiene personal Ninguno Todos
70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0%

d)

Frecuencia 0 6 0 10 0

Porcentaje 0% 37.5 % 0% 62.5 % 0%

Series1

El 37.5 de la poblacin usa el agua del Ro Calzadas para uso domstico, as mismo el 62.5 no la usa de ninguna forma y un ninguno la usa para beber o para su higiene personal.
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7. Conoce la bacteria Escherichia coli? a) Si Opciones Si No

20 15 10 5 0 Si No Series1

b) No Frecuencia 0 16 Porcentaje 0% 100 %

El 100% de la poblacin encuestada desconoce la existencia de la bacteria Escherichia coli, de tal manera que estn desinformados de que es esta bacteria y que puede provocarles. 8. Sabe usted si los animales domsticos, de cra, as como aves, beben y defecan el agua del Ro Caladas? a) Si Opciones Si No
120% 100% 80% 60% 40% 20% 0% Si NO Series1

b) No Frecuencia 16 0 Porcentaje 100 % 0%

El 100% dijo que haba visto defecar animales domsticos, de cra, aves en las aguas del Ro Calzadas, as mismo beben de este.

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Conclusin y anlisis de la encuesta.

Con la siguiente encuesta se obtuvo informacin de la poblacin que habita el Ro Calzadas, y los usos que le dan a sus aguas. Ya que la actividad primordial es la pesca y de la cual depende en gran medida la poblacin circundante como fuente principal de ingresos es de preocupacin que sigan practicando pesca en sus aguas contaminadas, ya que pues ingieren pescado contaminado con Escherichia coli, as mismo tambin defecan animales en ella, pues todo esto hace que esta bacteria prolifere con mayor facilidad en estas aguas, de igual forma desconocen por completo la existencia de esta bacteria y por tanto ignoran los riesgo a la salud que puede provocar su exposicin a est. Al no contar con un sistema de drenaje en estas zonas, es de suponer que las aguas de las gente circundante terminan por desechar el agua que usan al ro incurriendo a un mas a que la polucin sea mayor, es evidente que nuestras autoridades municipales sean olvidado de esta gente y de su ro, puesto que han permitido que se desechen aguas residuales de origen municipal en l.

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4.1 Investigacin Cuantitativa Para el estudio microbiolgico se procedi a tomar unas 6 muestras, de las cuales 3 fueron tomadas a 1m y las otras 3 a 30 cm bajo el ro y que fueron tomados das diferentes respectivamente, que fueron procesados en el laboratorio, usando 9 tubos de fermentacin por cada muestra tomada, 3 de 10mL, 3 de 1mL, 0.1 mL. Usando un total de 54 tubos de ensayo y 54 tubos de durham para cada prueba. Para la prueba presuntiva se uso caldo lactosado y caldo E.C para la prueba confirmativa, y agar EMB para el aislamiento de Escherichia coli. Al realizar los anlisis correspondientes segn lo normado, se fue observando que los tubos iban dando positivos conforme se avanzaba en cada fase de los exmenes hechos al agua muestreada, para la ltima etapa que fue el aislamiento de Escherichia coli por agar EMB, al examinarlas a las 24 horas hubo crecimiento bacteriano y al observar detenidamente se observo colonias grandes, color negro azulado, y brillo verde metlico; segn especificaciones del proveedor de agar EMB (anexo 3), significa que es una sepa de Escherichia coli (figura 4.1).

Figura 4.1.- Agar EMB con Escherichia coli positiva de la primera muestra. Fuente: Tomada por Samano Chvez Alan Gabriel (2011), para la realizacin de la tesis: Caracterizacin microbiolgica del agua del rio calzadas para determinar el nivel de contaminacin por la presencia de Escherichia coli. Coatzacoalcos, ver.

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Figura 4.2.- Agar EMB con E. coli positiva de la segunda muestra. Fuente: Tomada por Samano Chvez Alan Gabriel (2011), para la realizacin de la tesis: Caracterizacin microbiolgica del agua del rio calzadas para determinar el nivel de contaminacin por la presencia de Escherichia coli. Coatzacoalcos, ver.

As mismo con el clculo del nmero ms probable mediante tabla 4 del anexo 1, se puede estimar un nmero de 2400 mL de microorganismos probables presentes. En ambos casos se dieron los mismo resultados, por ello sin duda algn existe una contaminacin de origen fecal, que se desemboca en las aguas del Ro Calzadas y que est afecta la calidad e inocuidad del agua, por tanto la hace inadecuada para el uso para los seres humanos, pues segn la norma NOM-127-SSA1-1994 no debe tener presencia de bacterias entricas en agua de los ros, como lo es la Escherichia coli. (Tabla 1 anexo 3).

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4.2 Evaluacin o impacto econmico. Este proyecto tiene como finalidad el estudio del agua del Ro Calzadas para determinar la polucin en sus aguas por Escherichia coli, puesto que este ro es la principal fuente de ingresos de muchas familias que se encuentran en sus alrededores. Puesto que en este ro se efectan prcticas cotidianas como la pesca, la recreacin y de uso domestico en algunos casos, es necesario informar a la gente en general en el riesgo que se corre al nadar, pescar o usar sus aguas. As como alertar a las autoridades municipales que se est incurriendo en una grave prctica que es inadecuada para la disposicin de las aguas residuales municipales. De una manera directa puede tener un impacto econmico favorable como son: Disminucin de gastos a mdicos. Menor gasto en medicamentos. Demandas por pescado contaminado por Escherichia coli. Aumento del consumo de pescado. Entretenimiento para las familias empleando en sus aguas.

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Conclusiones y recomendaciones

Conclusin Despus de observar las muestras y finalizar los resultados, se puede llegar a concluir que el Ro Calzadas es un ro de suma importancia para nuestra ciudad y sus alrededores, y mucha gente depende de lo que provee sus aguas, ya sea en la pesca o entretenimiento familiar algunas ocasiones. Ya que con los resultados obtenidos el agua del Ro Calzadas segn lo revelado por las pruebas microbiolgicas, que no es apta para consumo humano, ya que los niveles de contaminacin exceden los permisibles establecidos en la norma NOM-127-1994, en la tabla 1 de est (anexo 3).

Recomendaciones Por lo anterior expuesto debe pensarse en una manera alternativa de descargar las aguas residuales municipales en otro lado o montar una planta tratadora de aguas residuales antes de descargarla en el Ro Calzadas y as disminuir el nivel de contaminacin es l. Segn la NOM-127-1994 se debe usar algn tipo de bactericida como el cloro o sus derivados para sanearla al igual de otros mtodos como luz ultravioleta en fin, debe pensarse en montar una planta tratadora de aguas para sanearla, pues es el agua de todo un ro el que se est contamina que nos puede ser til en unos aos, pero si seguimos as perderemos un valioso ro que a la larga no podremos rescatar si no actuamos de una manera responsable y a tiempo para revertir el dao provocado.

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12. M. jay James, J. Loessner Martin, A. Golden David (2009). Microbiologa moderna de los alimentos (5a Ed). Espaa: Acribia. 13. NORMA MEXICANA: NMX-AA-003-1980 AGUAS RESIDUALES MUESTREO. Disponible en: http://www.semarnat.gob.mx/leyesynormas/normas/Normas%20Mexicanas%20Vi gentes/NMX-AA-003-1980.pdf 14. NORMA MEXICANA: NMX-AA-008-SCFI-2000 ANLISIS DE AGUA DETERMINACIN DEL pH - MTODO DE PRUEBA. Disponible en: http://www.sma.df.gob.mx/sma/links/download/archivos/secofi_nmx_aa_008l_SCF I_2000.pdf 15. NORMA MEXICANA: NMX-AA-014-1980 CUERPOS RECEPTORES.MUESTREO. Disponible en: http://www.semarnat.gob.mx/leyesynormas/normas/Normas%20Mexicanas%20Vi gentes/NMX-AA-014-1980.pdf 16. NORMA MEXICANA: NMX-AA-042-1987 CALIDAD DEL AGUA DETERMINACION DEL NUMERO MAS PROBABLE (NMP) DE COLIFORMES TOTALES, COLIFORMES FECALES (TERMOTOLERANTES) Y Escherichia coli PRESUNTIVA. Disponible en: http://www.semarnat.gob.mx/leyesynormas/normas/Normas%20Mexicanas%20Vi gentes/NMX-AA-042-1987.pdf 17. Par O Luisa., Velzquez H. Emilia, Ramrez R. Fernando, Hernndez D. lvaro, Lozada R. Marta Patricia, Perales R. Hugo y Blanco R. Jos Luis. (1997) Reserva Especial de la Biosfera, Sierra de Santa Marta, Veracruz (1a Ed.). Mxico DF: aldina, S.A. 18. Pereyra Daz Domitilo y J. A. Agustn Prez Sesma (2006). Hidrologa de superficie y precipitaciones intensas 2005 en el estado de Veracruz (1a Ed). Veracruz: (indito). 19. Por Revista del Consumidor en lnea, en enero 21, 2010 a las 5:30 PM. Qu son las Normas Oficiales Mexicanas (NOM)?. Blog. Disponible en: http://revistadelconsumidor.gob.mx/?p=7077 20. Pronatura (2009). Plan para la Conservacin de Sitios en la Cuenca media y baja del ro Coatzacoalcos. Coatzacoalcos: indito 21. Publicacin listado de normas oficiales mexicanas de la secretaria de salud. Disponible en: http://www.salud.gob.mx/unidades/cdi/nomssa.html

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22. V. Botello A., Rendn von Osten J, Golden-Bouchot G y Agraz Hernndes C (2005). Golfo de Mxico: contaminacin e impacto ambiental: diagnstico y tendencias (2a Ed). Veracruz. 23. Vergaray Germn, R. Mndez Carmen, Y. Morante Hilda, I. Heredia Vidalina, R. Bja.r Vilma (2007). Enterococcus y Escherichia coli como indicadores de contaminacin fecal en playas costeras de Lima. Revista del Instituto de Investigaciones FIGMMG, volumen 10 ,numero 20, 83.

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ANEXOS

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Anexo 1
Cultura Ecolgica, A.C.______________________________________________________________________

Norma Mexicana NMX-AA-042-1987 Calidad del Agua - Determinacin del Nmero ms Probable (NMP) de Coliformes Totales, Coliformes Fecales (Termotolerantes) y Escherichia coli Presuntiva Water Quality - Determination of the Most Probable Number (NMP) of Total Coliforms, Fecal Coliforms (Thermal Tolerants), and Escherichia coli Presumptive____________________
22-06-87

PREFACIO En la elaboracin de la presente norma participaron las siguientes instituciones: - SECRETARIA DE DESARROLLO URBANO Y ECOLOGIA. Instituto SEDUE. - SECRETARIA DE SALUD. - SECRETARIA DE AGRICULTURA Y RECURSOS HIDRAULICOS. - SECRETARIA DE MARINA. Direccin General de Oceanografa Naval. - DEPARTAMENTO DEL DISTRITO FEDERAL Direccin General de Reordenacin Urbana y Proteccin Ecolgica. Laboratorio Central de Control. - UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MEXICO. Facultad de Qumica. - PETROLEOS MEXICANOS. - CAMARA NACIONAL DE LA INDUSTRIA DEL HIERRO Y EL ACERO. - ASOCIACION MEXICANA CONTRA LA CONTAMINACION DEL AGUA Y EL AMBIENTE. - CELANESE MEXICANA, S.A. - MERCK MEXICO, S.A. INTRODUCCION La presencia y extensin de contaminacin fecal es un factor importante en la determinacin de la calidad de un cuerpo de agua. Las heces contienen una variedad de microorganismos y formas de resistencia de los mismos, involucrando organismos patgenos, los cuales son un riesgo para la salud pblica al estar en contacto con el ser humano. El examen de muestras de agua para determinar la presencia de microorganismos del grupo coliformes que habitan normalmente en el intestino humano y de otros animales de sangre caliente, da una indicacin sensible de dicho tipo de contaminacin. Dada la limitada capacidad de algunos miembros del grupo de organismos coliformes para sobrevivir en agua; sus nmeros tambin pueden emplearse para estimar el grado de contaminacin fecal. 1 OBJETIVO Y CAMPO DE APLICACION Esta Norma Mexicana establece un mtodo para la deteccin y enumeracin en agua de organismos coliformes totales, organismos coliformes fecales (termotolerantes) y Escherichia coli presuntiva (E. coli) mediante el cultivo en un medio lquido en tubos mltiples y el clculo de sus nmeros ms probables

(NMP) en la muestra. Este mtodo es aplicable para todo tipo de agua, incluyendo aquellos que contienen una cantidad apreciable de materia en suspensin. La seleccin de las pruebas usadas en la deteccin y confirmacin del grupo de organismos coliformes, incluyendo E. coli, puede verse como parte de una secuencia continua. El grado de confirmacin con una muestra en particular depende parcialmente de la naturaleza del agua y parcialmente de las razones para realizar el examen. En la prctica, la deteccin de E. coli presuntiva, como se define en el punto 3.3 de esta norma, da usualmente una indicacin satisfactoria de contaminacin fecal. 2 REFERENCIAS Esta norma se complementa con las siguientes Normas Mexicanas vigentes: NMX-Z-001 Sistema Internacional de Unidades (SI) NMX-BB-014 Clasificacin y tamaos nominales para utensilios de vidrio usados en laboratorios. 3 DEFINICIONES Para propsitos de esta Norma Mexicana, se aplican las siguientes definiciones: 3.1 Organismos coliformes.- Organismos capaces de crecimiento aerbico ya sea a 308 1K (35 1C) 310 1K (37 1C) en un medio de cultivo lquido lactosado con produccin de cido y gas dentro de un perodo de 48 h. 3.2 Organismos coliformes fecales (termotolerantes).- Organismos coliformes como se describe en 3.1 que tienen las mismas propiedades fermentativas a 317 0.5K (44 0.5C). 3.3 Escherichia coli presuntiva (E. coli).- Organismos coliformes termotolerantes como se describe en 3.2 que tambin producen indol a partir de triptofano a 317K (44C). 4 PRINCIPIO El mtodo se basa en la inoculacin de alcuotas de la muestra, diluida o sin diluir, en una serie de tubos de un medio de cultivo lquido conteniendo lactosa. Los tubos se examinan a las 24 y 48 horas de incubacin ya sea a 308 310K (35 37C). Cada uno de los que muestran turbidez con produccin de gas se resiembra en un medio confirmativo ms selectivo y, cuando se busca E. coli presuntiva, en un medio en el que se pueda demostrar la produccin del indol. Se lleva a cabo la incubacin de estos medios confirmativos hasta por 48 horas ya sea a 308 310K (35 37C) para la deteccin de organismos coliformes y a 317K (44C) para organismos coliformes termotolerantes y E .coli. Mediante tablas estadsticas, se lleva a cabo el clculo del nmero ms probable (NMP) de organismos coliformes, organismos coliformes termotolerantes y E. coli que pueda estar presente en 100 cm3 de muestra, a partir de los nmeros de los tubos que dan resultados confirmativos positivos. 5 APARATOS Y EQUIPO Aparte de los equipos que se suministran estriles, el material de vidrio y el resto del equipo deben esterilizarse.

5.1 Incubadora capaz de mantener una temperatura de 308 1K (35 1C) 310 1K (37 1C) y 317 0.5K (44 0.5C). 5.2 Estufa capaz de mantener una temperatura de 453 a 473K (180 a 200C). 5.3 Autoclave u olla de presin con manmetro. 5.4 Potencimetro. 5.5 Balanza analtica con sensibilidad de 0.0001 g. 5.6 Pipetas serolgicas. 5.7 Pipeteros de aluminio o acero inoxidable; se pueden sustituir por papel aluminio o papel Kraft. 5.8 Tubos de ensaye de cristal refractario de 15 mm x 150 mm, con tapn de baquelita, aluminio o algodn. 5.9 Frascos muestreadores, de vidrio resistente o cristal refractario de 125 cm3, con tapn de cristal esmerilado. 5.10 Tubos de fermentacin (Durham). 5.11 Asas de inoculacin. 5.12 Material comn de laboratorio. 6 REACTIVOS Los reactivos que a continuacin se mencionan, deben ser grado analtico a menos que se indique otra cosa. Cuando se especifique el uso de agua se debe entender agua destilada in vitro o agua desionizada libre de sustancias que pueden inhibir el crecimiento bacteriano en las condiciones de la prueba. Para la preparacin de los reactivos, las condiciones de esterilizacin deben ser 394K (121C) y 0.098066 MPa (1kg/cm2) de presin manomtrica durante 15 minutos. Los tubos de fermentacin (Durham) no deben contener burbujas de aire despus de la esterilizacin. En caso de utilizar medios deshidratados, seguir las recomendaciones del fabricante para su preparacin. 6.1 Utilizar uno de los siguientes medios de cultivo 6.1.1 Caldo lauril triptosa (CLT) Medio de doble concentracin: Triptosa 40.0 g Lactosa 10.0 g Cloruro de sodio (NaCl) 10.0 g Fosfato monobsico de potasio (KH2PO4) 5.5 g Fosfato dibsico de potasio (K2HPO4) 5.5 g Lauril sulfato de sodio 0.2 g Agua para llevar a 1000 cm 3 Aadir la triptosa y el cloruro de sodio al agua, calentar para disolver y aadir el lauril sulfato de sodio. Disolver el resto de los componentes por separado y agregarlos a los anteriores mezclando suavemente para evitar la formacin de espuma. Ajustar a pH 6.8. Preparar medio de simple concentracin diluyendo el medio de doble concentracin con un volumen igual de agua. Distribuir el medio de simple concentracin en volmenes de 5 cm3 y el medio de doble concentracin en volmenes de 10 y 50 cm3. Cada tubo o matraz deben

contener un tubo de fermentacin invertido (Durham). Colocar en autoclave a 388K (115C) durante 10 min. 6.1.2 Caldo McConkey Medio de doble concentracin: Sales biliares Peptona Lactosa Cloruro de sodio (NaCl) Prpura de bromocresol (1% v/v en solucin etanlica) Agua para llevar a 10.0 g 40.0 g 20.0 g 10.0 g 2 cm3 1000 cm3

Disolver, calentando, la peptona, el cloruro de sodio y las sales biliares en agua y almacenarlo a 277K (4C) durante toda la noche. Filtrar mientras est an fro, aadir la lactosa y disolver. Ajustar a pH 7.4 y aadir el prpura de bromocresol. Preparar el medio de simple concentracin disolviendo el de doble concentracin con un volumen igual de agua o prepararlo usando la mitad de la concentracin de los ingredientes. Distribuir el medio de simple concentracin en volmenes de 5 cm3 y el de doble concentracin en volmenes de 10 y 50 cm3 en tubos o matraces conteniendo un tubo de fermentacin invertido (Durham). Colocar en autoclave a 388K (115C) durante 10 min. 6.1.3 Caldo Lactosa Medio de doble concentracin: Peptona Lactosa Extracto de carne Agua para llevar a 10.0 g 10.0 g 6.0 g 1000 cm3

Disolver los componentes en agua hirviendo. Si es necesario, ajustar el pH de modo que al terminar la esterilizacin sea de 6.7. Preparar el medio de simple concentracin diluyendo el medio de doble concentracin con un volumen igual de agua. Distribuir el medio de simple concentracin en volmenes de 5 cm3 y el de doble concentracin en volmenes de 10 y 50 cm3. Cada tubo o matraz debe contener un tubo de fermentacin invertido (Durham). Esterilizar en autoclave a 394 1K (121 1C) durante 15 min. Estos tres medios son de uso comn en numerosos pases. La selectividad del McConkey y del CLT depende respectivamente de la presencia de sales biliares y del agente de superficie activo, el laurilsulfato. El caldo lactosa no es un medio selectivo. 6.2 Utilizar uno o ms de los siguientes medios confirmativos 6.2.1 Medios para la produccin de gas: 6.2.1.1 Caldo bilis lactosa verde brillante: Peptona 10.0 g Lactosa 10.0 g

Bilis de buey (deshidratada) 20.0 g Verde brillante (0.1% m/m en solucin acuosa) 13 cm3 Agua para llevar a 1000 cm3 Disolver la peptona en 500 cm3 de agua. Aadir los 20 g de bilis de buey deshidratada disueltos en 200 cm3 de agua; la solucin debe tener un pH entre 7.0 y 7.5. Disolver con agua hasta un volumen aproximado de 975 cm3. Aadir la lactosa y ajustar el pH a 7.4. Aadir la solucin de verde brillante y aforar a 1000 cm3 con agua. Distribuir volmenes de 5 cm en tubos de ensaye conteniendo tubos de fermentacin invertidos (Durham) y colocar en autoclave a 388K (115C) durante 10 min. NOTA 1.- Este medio no da resultados reproducibles en todos los casos y se recomienda comprobar sus propiedades inhibitorias antes de usarlo.

6.2.1.2 Medio EC: Triptosa tripticasa Lactosa Mezcla de sales biliares Fosfato dibsico de potasio (K2HPO4) Fosfato monobsico de potasio (KH2PO4) Cloruro de sodio (NaCl) Agua para llevar a 20.0 g 5.0 g 1.5 g 4.0 g 1.5 g 5.0 g 1000 cm3

Disolver los componentes por separado y agregarlos agitando suavemente. El pH debe ser de 6.9 despus de la esterilizacin. Antes de esterilizar, distribuir en tubos de fermentacin con suficiente medio para que el tubo invertido quede cubierto cuando menos parcialmente despus de la esterilizacin. Como medio confirmativo para coliformes totales, el ms generalizado es el caldo bilis lactosa verde brillante (BLVB). Para confirmar la presencia de coliformes fecales se utiliza tanto el BLVB como el caldo EC. 6.2.2 Medio para la produccin de indol: 6.2.2.1 Agua de Triptona: Triptona Cloruro de sodio (NaCl) Agua para llevar a 20.0 g 5.0 g 1000 cm3

Disolver los componentes en agua y ajustar a pH. 7.5 distribuir en volmenes de 5 cm3 y colocar en autoclave a 388K (115C) durante 10 min. NOTA 2.- La adicin de 0.1% (m/m) de L DL-triptofano puede mejorar el funcionamiento del medio. 6.3 Reactivo de Kovacs para indol 1,4 dimetilaminobenzaldehdo (C6H4 [N(CH3)2] CH0) 5.0 g

Alcohol amlico (CH3 (CH2) 4OH) libre de bases orgnicas cm3 Acido clorhdrico concentrado (HCl) cm3

75 25

Disolver el aldehdo en el alcohol. Aadir el cido concentrado con cuidado. Proteger de la luz y almacenar a 277K (4C). NOTA 3.- El reactivo debe tener una coloracin entre amarillo claro y caf claro; algunas muestras de alcohol amlico son insatisfactorias y dan una coloracin oscura con el aldehdo. 6.4 Reactivo de oxidasa para la prueba de oxidasa Clorhidrato de tetrametil-p-fenilendiamina Agua 0.1 g 10 cm3

Este reactivo no es estable y debe prepararse para usarse en pequeas cantidades cada vez que sea necesario. 6.5 Diluyentes 6.5.1 Diluyente de Peptona (0.1%) Peptona Agua para llevar a 1.0 g 1000 cm3

Disolver la peptona en aproximadamente 950 cm3 de agua. Ajustar el pH con solucin de hidrxido de sodio 1 mol/L o cido clorhdrico 1 mol/L de modo que despus de la esterilizacin sea de 7.0 0.1. Aforar a 1000 cm3 con agua, distribuir en volmenes convenientes y esterilizar en autoclave a 394 1K (121 1C) durante 15 min. 6.5.2 Solucin Salina de Peptona Peptona Cloruro de sodio (NaCl) Agua para llevar a 1.0 g 8.5 g 1000 cm3

Disolver los componentes hirvindolos en aproximadamente 950 cm3 de agua. Ajustar el pH con solucin de hidrxido de sodio 1 mol/L o cido clorhdrico 1 mol/L de modo que despus de la esterilizacin sea de 7.0 + 0.1. Llevar a 1000 cm3 con agua, distribuir en volmenes convenientes y esterilizar en autoclave a 394 + 1K (121 + 1C) durante 15 min. 6.5.3 Solucin de ringer Cloruro de sodio (NaCl) Cloruro de potasio (KCl) Cloruro de calcio anhidro (CaCl2) Bicarbonato de sodio (NaHCO3) Agua para llevar a 2.25 g 0.105 g 0.12 g 0.05 g 1000 cm3

Disolver los componentes y dividirlos en volmenes convenientes. Esterilizar en autoclave a 394K (121C) durante 15 min. 6.5.4 Solucin amortiguadora de fosfato

Fosfato monobsico de potasio (KH2PO4) Cloruro de magnesio (MgCl2) Agua para llevar a

42.5 mg 190.0 mg 1000 cm3

6.5.4.1 Solucin de Fosfato Disolver 34 g de fosfato en 500 cm3 de agua. Ajustar a pH 7.2 0.5 con solucin de hidrxido de sodio 1 mol/L y aforar a 1000 cm3 con agua. 6.5.4.2 Solucin de Cloruro de Magnesio Disolver 38 g de cloruro de magnesio en 1000 cm3 de agua. Para usarla, aadir 1.25 cm3 de solucin de fosfato (6.5.4.1) y 5.0 cm3 de solucin de cloruro de magnesio (6.5.4.2) a 1000 cm3 de agua. Distribuir en volmenes convenientes y esterilizar en autoclave a 394 1K (121 1C) durante 15 min.

7 MUESTREO El procedimiento para la recoleccin de las muestras de agua para el anlisis bacteriolgico, depende del tipo de agua que se desee muestrear. Las muestras para el anlisis bacteriolgico, se deben tomar en frascos muestreadores que se hayan lavado con extremo cuidado y esterilizado. En su interior colocar, previo a la esterilizacin, 0.1 cm3 de solucin de tiosulfato de sodio al 1% con el propsito de inhibir la accin del cloro que pueda contener la muestra, cubriendo adems el tapn del frasco hasta el cuello con papel aluminio. 7.1 Muestreo en cuerpos receptores 7.1.1 Siempre que sea posible, llenar el frasco a 2/3 partes de su capacidad; una cantidad menor sera insuficiente, si fuera mayor, disminuira el espacio de aire disponible, necesario para homogeneizar la muestra. Las muestras deben de ser representativas del agua en estudio y asimismo no deben contaminarse en forma alguna. 7.1.2 El frasco donde se colecta la muestra no se debe destapar sino hasta el momento en el que se efecte el muestreo. Al muestrear, se debe evitar que el cuello del frasco se ponga en contacto con los dedos o cualquier otro material contaminante. 7.1.3 El examen de la muestra colectada debe realizarse lo ms pronto posible, para evitar proliferacin o muerte de las bacterias. Cuando el examen se practica dos horas despus de tomar la muestra, los resultados empiezan a ser inciertos. 7.1.4 El volumen de muestra suficiente para efectuar el anlisis bacteriolgico, de preferencia debe ser de aproximadamente 100 cm3. Es importante que todas las muestras estn acompaadas de datos completos y exactos de identificacin y descripcin. 7.1.5 El mecanismo de muestreo superficial es el siguiente: 7.1.5.1 Quitar el papel aluminio del cuello del frasco; introducir el frasco aproximadamente 30 cm3 bajo la superficie del agua. 7.1.5.2 Destapar el frasco dentro del agua. La boca del envase debe quedar en sentido contrario al flujo de la corriente. Si no existe corriente, como en los embalses, crearla empujando el frasco horizontalmente, en direccin opuesta al movimiento de la mano. 7.1.5.3 Una vez que la muestra ocupe el volumen correspondiente del frasco (2/3 partes); tapar sin sacarlo del agua teniendo cuidado de que el papel aluminio vuelva a cubrir el cuello de la botella. 7.1.5.4 Si no es posible la recoleccin de muestras en las condiciones antes enunciadas, fijar un lastre al frasco, al que se hace descender en el agua. 7.1.6 Para tomar muestras profundas en lagos o embalses; usar aparatos especiales que permitan destapar y tapar mecnicamente el frasco debajo de la superficie. 7.2 Muestreo en pozos y grifos 7.2.1 Si el pozo est provisto de bomba de mano, bombear durante 5 min. para que el agua fluya libremente, antes de tomar la muestra. 7.2.2 Si el pozo est dotado de bomba mecnica, tomar la muestra en una llave previamente flameada de la descarga, dejando que fluya el agua libremente 5 min antes de tomar la muestra. 7.2.3 Al efectuar este muestreo, se debe evitar que el agua escurra fuera del frasco; adems, se deben flamear los bordes del frasco y tapn durante el tiempo

que dura el muestreo. Esto se hace con objeto de mantener al mximo las condiciones de asepsia. 7.2.4 Si no se cuenta con equipo de bombeo, tomar la muestra directamente del pozo por medio de un frasco estril con lastre. En este caso se debe evitar la contaminacin de la muestra por las natas superficiales. 7.2.5 Si se trata de tomar una muestra de un grifo del sistema de servicio, flamear el grifo y abrirlo completamente, dejando que el agua fluya por 2 3 min. o el tiempo suficiente para permitir la purga de la lnea. 7.2.6 En el momento del muestreo, restringir el flujo de la llave para que se pueda llenar el frasco sin salpicaduras. 7.2.7 Las condiciones de asepsia deben ser las mismas que las enunciadas en el punto 7.2.3. 8 PRESERVACION Y ALMACENAMIENTO El anlisis bacteriolgico de la muestra debe practicarse inmediatamente despus de su recoleccin. Es por ello que se recomienda que de no efectuarse as el anlisis, se inicie dentro de las dos horas prximas a la recoleccin de la muestra y en ningn caso, este lapso debe exceder de 24 horas para agua potable y de 6 horas para otros tipos de agua para que sea vlido el resultado del anlisis. Durante el perodo que transcurre del muestreo al anlisis, se debe conservar la muestra a 277K (4C), con objeto de inhibir la actividad bacteriana para no obtener resultados falsos o dudosos. 9 PROCEDIMIENTO 9.1 Pruebas presuntivas9.1.1 Preparacin de la muestra e inoculacin del medio Antes del examen, mezclar perfectamente la muestra agitndola vigorosamente para lograr una distribucin uniforme de los microorganismos y, dependiendo de la naturaleza del agua y el contenido bacteriano esperado, hacer todas las diluciones necesarias en esta etapa. Utilizar series que constan de por lo menos tres diluciones: 10.0 cm3, 1.0 cm3 y 0.1 cm3, o bien 1.0 cm3, 0.1 cm3 y 0.01 cm3. Por cada dilucin debe haber 3 5 tubos. Para dilucines a 10 veces, poner 90 9 cm3 del diluyente en matraces o tubos de dilucin esterilizados. Alternativamente, usar volmenes de diluyente preesterilizado en botellas con tapn de rosca. Hacer una o ms diluciones a 10 veces transfiriendo un volumen de la muestra de agua a 9 volmenes de diluyente. Repetir estos pasos cuantas veces sea necesario. Preparar suficiente cantidad de cada dilucin para todas las pruebas que se vayan a llevar a cabo con la muestra. Para diluciones diferentes a 10 veces ajustar el volumen de diluyente a la porcin de prueba. Inocular los tubos conteniendo medios de aislamiento de doble concentracin con porciones de prueba de un volumen mnimo de 5 cm3. 9.1.2 Incubacin de los tubos Incubar los tubos inoculados ya sea a 308 1K (35+1C) o 310 1K (37 1C) durante 48 horas. 9.1.3 Examen de los tubos

Examinar los cultivos de los tubos despus de un perodo de incubacin de 18 a 24 horas y considerar como resultados positivos aquellos que muestren turbidez debida al crecimiento bacteriano y formacin de gas en los tubos internos invertidos (Durham) junto con produccin de cido si el medio de aislamiento contiene un indicador de pH. Reincubar aquellos tubos que no muestran alguno o todos estos cambios y examinarlos nuevamente para detectar reacciones positivas a las 48 horas. 9.2 Pruebas confirmativas 9.2.1 Inoculacin del medio Resembrar a partir de cada tubo de medio de aislamiento que muestre un resultado positivo en uno o ms tubos de medio confirmativo (6.2) para detectar la produccin de gas e indol. NOTA 4.- Si se usa el medio ms inhibitorio de caldo lactosa para aislar, resembrar en alguno de los dos medios confirmativos ms selectivos, Caldo Bilis Lactosa Verde Brillante o Caldo EC para efectuar la confirmacin 9.2.2 Incubacin y examen Para confirmar la presencia de organismos coliformes, incubar un tubo de 9.2.1 de Caldo Bilis Lactosa Verde Brillante o Caldo EC a 310K (37C) y examinarlo para ver si hay produccin de gas dentro de un perodo de 48 horas. Para confirmar la presencia de organismos coliformes termotolerantes, incubar otro tubo de 9.2.1 de Caldo Bilis Lactosa Verde Brillante o Caldo EC a 317K (44C) durante 24 horas para ver si hay produccin de gas. Para confirmar la presencia de E. coli presuntiva, incubar un tubo de 9.2.1 de agua de triptona para detectar la formacin de indol a 317 K (44C) durante 24 horas. Despus aadir de 0.2 a 0.3 cm3 de reactivo de kovacs (6.3) al tubo de agua de triptona; el desarrollo de un anillo de color rojo despus de agitar suavemente denota la presencia de indol. NOTA 5.- La deteccin de E. coli presuntiva se considera una evidencia satisfactoria de contaminacin fecal. Sin embargo, pueden efectuarse mayores pruebas para la confirmacin de E. coli si se considera necesario. 9.3 Prueba de oxidasa Algunas bacterias existentes en el agua pueden conformarse a la definicin de organismos coliformes en muchos aspectos, pero son capaces de producir gas a partir de lactosa solamente a temperaturas inferiores a 310K (37C). Por consiguiente, dan resultados negativos en las pruebas confirmativas estndar para organismos coliformes y su presencia en agua usualmente no se considera significativa. Las especies de Aeromonas, que se encuentran naturalmente en el agua, tienen una temperatura ptima de crecimiento en el rango 303 a 308K (30 a 35C), pero a pesar de ello son capaces de producir cido y gas a partir de lactosa a 310K (37C). Tienen poco significado para efectos sanitarios y se distinguen del grupo de los coliformes por una reaccin de oxidasa positiva. 9.3.1 Llevar a cabo la prueba con subcultivos puros de los organismos fermentadores de lactosa, crecidos en medio nutriente de agar, como sigue: - Colocar de 2 a 3 gotas de reactivo de oxidasa recientemente preparado (6.4) en un papel filtro en una caja de Petri. - Con una barra de vidrio o un asa de alambre de platino (no de nicromel), colocar parte del cultivo en el papel filtro preparado. - Considerar la aparicin de un color azul marino purpreo en un lapso de 10 seg como una reaccin positiva.

NOTA 6.- En cada ocasin que se use el reactivo de oxidasa, llevar acabo pruebas de control con cultivos de organismos que se sepa dan una reaccin positiva (Pseudomonas aeruginosa) y uno que d una reaccin negativa (E. coli) en 100 cm3 de la muestra. 10 CALCULOS A partir del nmero de tubos que dan reacciones positivas en los medios de aislamiento y confirmativo, calcular por referencia a las tablas estadsticas (ver tabla) el nmero ms probable de organismos coliformes, organismos coliformes termotolerantes y E. coli presuntiva en 100 cm3 de la muestra. Cuando se emplean diluciones, el resultado final deber multiplicarse por el factor de dilucin para hacerlo equivalente. En caso de no encontrar en las tablas la combinacin de tubos adecuada, emplear para los clculos la siguiente ecuacin:

TABLA 1 Indice del NMP y lmite confiable de 95% para varias combinaciones de resultados positivos y negativos cuando se usan: 5 tubos con porciones de 10 cm3 en cada uno, 5 con porciones de 1 cm3 y 5 con porciones de 0.1 cm3.

TABLA 2 ndice del NMP y lmite confiable de 95% para varias combinaciones de resultados positivos y negativos cuando se usan: 1 tubo con porciones de 50 cm3 5 tubos con porciones de 10 cm3 y 5 tubos con porciones de 10 cm3.

TABLA 3 ndice del NMP y lmite confiable de 95% para varias combinaciones de resultados positivos y negativos cuando se usan: 5 tubos con porciones de 50 cm3, 5 tubos con porciones de 10 cm3 y 5 tubos con porciones de 1 cm 3

TABLA 4 ndice del NMP y lmite confiable de 95% para varias combinaciones de resultados positivos y negativos cuando se usan: 3 tubos con porciones de 1 cm3 y 3 con porciones de 0.1 cm3.

11 REPORTE DE LA PRUEBA El reporte de la prueba debe hacer referencia a esta norma y dar toda la informacin relevante, incluyendo a. Todos los detalles necesarios para la identificacin completa de la muestra. b. La tcnica y medio de cultivo empleados. c. El tiempo, temperatura y condiciones de la incubacin. d. Los resultados expresados conforme a lo que se describe en el punto 10. e. Cualquier suceso particular observado en el curso del anlisis y cualquier operacin no especificada en el mtodo o considerada opcional que pueda haber infludo en los resultados. 12 CONFIABILIDAD El procedimiento de fermentacin en tubos mltiples es el mtodo ms usado, por su facilidad y economa. El resultado de esta prueba se expresa por el "nmero ms probable" (NMP), pero debe entenderse que este mtodo no es exacto ya que slo nos da la probable densidad de bacterias coliformes totales o fecales de una muestra determinada. La confiabilidad est dada por los niveles superiores o inferiores del lmite de confianza al 95% establecido en las tablas para cada NMP/100 cm3, no obstante, es una indicacin importante para evaluar la calidad sanitaria del agua. 13 BIBLIOGRAFIA STANDARD METHODS FOR THE EXAMINATION OF WASTEWATER. 15th edition. Paginas 794-805. 1980. . 14 CONCORDANCIA CON NORMAS INTERNACIONALES WATER AND

Esta norma concuerda parcialmente con el anteproyecto de norma ISO/DP 9308/2. Water quality-Detectin and enumeration of coliform organisms, thermotolerant coliform organisms and presumptive Escherichia coli by themultiple tube (most probable number) method. Mxico, D.F., Junio 3, 1987 LA DIRECTORA GENERAL DE NORMAS LIC. CONSUELO SAEZ PUEYO Fecha de aprobacin y publicacin: Junio 22, 1987 Esta Norma cancela a la: NMX-AA-042-1981

Anexo 2

SECRETARIA DE COMERCIO Y FOMENTO INDUSTRIAL NORMA MEXICANA NMX-AA-003-1980 AGUAS RESIDUALES.- MUESTREO RESIDUAL WATERS.- SAMPLING DIRECCION GENERAL DE NORMAS NMX-AA-003-1980 PREFACIO En la elaboracin de esta Norma participaron los siguientes Organismos e Instituciones: SECRETARIA DE AGRICULTURA Y RECURSOS HIDRAULICOS.- DIRECCION GENERAL DE PROTECCION Y ORDENACION ECOLOGICA. SECRETARIA DE SALUBRIDAD Y ASISTENCIA.- DEPARTAMENTO DE VIGILANCIA DE AGUAS RECEPTORAS. CONFEDERACION DE CAMARAS INDUSTRIALES.- DEPARTAMENTO TECNICO. FERTILIZANTES MEXICANOS, S.A.- SUBGERENCIA DE INVESTIGACION. COMISION FEDERAL DE ELECTRICIDAD.- LABORATORIO. LABORATORIOS NACIONALES DE FOMENTO INDUSTRIAL.DEPARTAMENTO DE CONTAMINACION. INSTITUTO MEXICANO DEL SEGURO SOCIAL.- DEPARTAMENTO TECNICO.OFICINA FISICO-QUIMICA.

AGUAS RESIDUALES.- MUESTREO RESIDUAL WATERS.- SAMPLING 1 OBJETIVO Y CAMPO DE APLICACION Esta norma establece los lineamientos generales y recomendaciones para muestrear las descargas de aguas residuales, con el fin de determinar sus caractersticas fsicas y qumicas, debindose observar las modalidades indicadas en las normas de mtodos de prueba correspondientes. 2 DEFINICIONES 2.1 Agua residual Es el lquido de composicin variada proveniente de usos municipal, industrial, comercial, agrcola, pecuario o de cualquier otra ndole, ya sea pblica o privada y que por tal motivo haya sufrido degradacin o alteracin en su calidad original. 2.2 Canal abierto Cualquier conducto en el cual el agua fluye presentando una superficie libre. 2.3 Colector Es un conducto abierto o cerrado que recibe las aportaciones de agua de otros conductos. 2.4 Descarga Es el conjunto de aguas residuales que se vierten o disponen en algn cuerpo receptor. 2.5 Muestra simple Es aquella muestra individual tomada en un corto perodo de forma tal que el tiempo empleado en su extraccin sea el transcurrido para obtener el volumen necesario. 2.6 Muestra compuesta Es la que resulta del mezclado de varias muestras simples. 3 APARATOS Y EQUIPO 3.1 Recipientes para el transporte y conservacin de las muestras Los recipientes para las muestras deben ser de materiales inertes al contenido de las aguas residuales. Se recomiendan los recipientes de polietileno o vidrio. Las tapas deben proporcionar un cierre hermtico en los recipientes y se recomienda que sean de material afn al del recipiente. Se recomienda que los recipientes tengan una capacidad mnima de 2 dm3 (litros). 3.2 Muestreadores automticos Se permite su empleo siempre y cuando se operen de acuerdo con las instrucciones del fabricante del equipo muestreador dndoles el correcto y adecuado mantenimiento, asegurndose de obtener muestras representativas de las aguas residuales. 3.3 Vlvulas y accesorios Cada toma de muestreo debe tener una vlvula de cierre que permita el paso libre de las aguas residuales y de los materiales que puedan contener y proporcionar el cierre hermtico de la toma. Esta vlvula y los accesorios necesarios para su instalacin, deben ser de materiales similares a los de las tomas y/o los conductos en que stas se instalen. 3.4 Hielera o refrigerador 3.5 Material comn de laboratorio

4 IDENTIFICACION DE LAS MUESTRAS 4.1 Se deben tomar las precauciones necesarias para que en cualquier momento sea posible identificar las muestras. Se deben emplear etiquetas pegadas o colgadas, o numerar los frascos anotndose la informacin en una hoja de registro. Estas etiquetas deben contener como mnimo la siguiente informacin. Identificacin de la descarga. Nmero de muestra. Fecha y hora de muestreo. Punto de muestreo. Temperatura de la muestra. Profundidad de muestreo. Nombre y firma de la persona que efecta el muestreo. 4.2 Hoja de registro 4.2.1 Se debe llevar una hoja de registro con la informacin que permita identificar el origen de la muestra y todos los datos que en un momento dado permitan repetir el muestreo. 4.2.2 Se recomienda que la hoja de registro contenga la siguiente informacin: Los datos citados en el inciso 4.1. Resultados de pruebas de campo practicadas en la descarga muestreada. Cuando proceda, el gasto o flujo de la descarga de aguas residuales que se muestreo. Descripcin detallada del punto de muestreo de manera que cualquier persona pueda tomar otras muestras en el mismo lugar. Descripcin cualitativa del olor y el color de las aguas residuales muestreadas. 5 PROCEDIMIENTO 5.1 Cualquiera que sea el mtodo de muestreo especfico que se aplique a cada caso, debe cumplir los siguientes requisitos. 5.1.1 Las muestras deben ser representativas de las condiciones que existan en el punto y hora de muestreo y tener el volumen suficiente para efectuar en l las determinaciones correspondientes. 5.1.2 Las muestras deben representar lo mejor posible las caractersticas del efluente total que se descarga por el conducto que se muestrea. 5.1.3 Al efectuarse el muestreo, deben anotarse los datos segn los incisos 4.1 y 4.2.2. 5.2 Muestreo en tomas 5.2.1 Se recomienda, se instalen tomas en conductos a presin o en conductos que permitan el fcil acceso para muestrear a cielo abierto con el objeto de caracterizar debidamente las aguas residuales. Las tomas deben tener un dimetro adecuado para muestrear correctamente las aguas residuales en funcin de los materiales que puedan contener, deben ser de la menor longitud posible, y procurar situarlas de tal manera que las muestras sean representativas de la descarga. Se recomienda el uso de materiales similares a los del conducto, de acero al carbn o de acero inoxidable. 5.2.2 Se deja fluir un volumen aproximadamente igual a 10 veces el volumen de la muestra y a continuacin se llena el recipiente de muestreo.

5.3 Muestreo en descargas libres 5.3.1 Cuando las aguas residuales fluyan libremente en forma de chorro, debe emplearse el siguiente procedimiento. 5.3.1.1 El recipiente muestreador se debe enjuagar repetidas veces antes de efectuar el muestreo. 5.3.1.2 Se introduce el recipiente muestreador en la descarga o de ser posible, se toma directamente la muestra en su recipiente. 5.3.1.3 La muestra se transfiere del recipiente muestreador al recipiente para la muestra cuidando de que sta siga siendo representativa. 5.4 Muestreo en canales y colectores 5.4.1 Se recomienda tomar las muestras en el centro del canal o colector de preferencia en lugares donde el flujo sea turbulento a fin de asegurar un buen mezclado. 5.4.1.1 Si se va a evaluar contenido de grasas y aceites se deben tomar porciones, a diferentes profundidades, cuando no haya mucha turbulencia para asegurar una mayor representatividad. 5.4.2 El recipiente muestreador se debe enjuagar repetidas veces con el agua por muestrear antes de efectuar el muestreo. 5.4.3 El recipiente muestreador, atado con una cuerda y sostenido con la mano de preferencia enguantada, se introduce en el agua residual completamente y se extrae la muestra. 5.4.4 Si la muestra se transfiere de recipiente, se debe cuidar que sta siga siendo representativa. 5.5 Cierre de los recipientes de muestreo Las tapas o cierres de los recipientes deben fijarse de tal forma que se evite el derrame de la muestra. 5.6 Obtencin de muestras compuestas 5.6.1 Se recomienda que las muestras sean compuestas (ver inciso 2.6), para que representen el promedio de las variaciones de los contaminantes. El procedimiento para la obtencin de dichas muestras es el siguiente: 5.6.1.1 Las muestras compuestas se obtienen mezclando muestras simples en volmenes proporcionales al gasto o flujo de descarga medido en el sitio y momento del muestreo. 5.6.1.2 El intervalo entre la toma de cada muestra simple para integrar la muestra compuesta, debe ser el suficiente para determinar la variacin de los contaminantes del agua residual. 5.6.1.3 Las muestras compuestas se deben tomar de tal manera que cubran las variaciones de las descargas durante 24 horas como mnimo. 5.7 Preservacin de las muestras Solo se permite agregar a las muestras los preservativos indicados en las Normas de Mtodos de Prueba. 5.8 Preservar la muestra durante el transporte por medio de un bao de hielo y conservar las muestras en refrigeracin a una temperatura de 277K (4C). 5.9 Se recomienda que el intervalo de tiempo entre la extraccin de la muestra y su anlisis sea el menor posible y que no exceda de tres das. 6 APENDICE 6.1 Observaciones

6.1.1 Es muy importante tomar las debidas precauciones de seguridad y de higiene en el muestreo en funcin del tipo de aguas residuales que estn muestreando.

7 BIBLIOGRAFIA 7.1 1978. - Annual Book of ASTM Standards. - D 3370-76 "Standard Practices for Sampling Water.- Tomo 31. 7.2 Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater.- American Public Health Association, American Water Works Association y Water Pollution Control Federation. - 14 th, edition. 7.3 Gaging and Sampling Industrial Wastewaters.- J.G. Rabosky y Donald D. Horaido, Chemical Engineering/January s. 1973, Vol. 30 Nm. 1. 7.4 Reglamento para la Prevencin y control de la Contaminacin de Aguas. 7.5 NMX-R-050-1977 Norma Mexicana "Gua para la Redaccin, Estructuracin y Presentacin de las Normas Mexicanas". 7.6 British Standard 1328-1969 "Methods of Sampling Water Used in Industry". 8 CONCORDANCIA CON NORMAS INTERNACIONALES No concuerda con ninguna por no existir norma internacional sobre el tema. Mxico, D.F., Febrero 11, 1980

EL DIRECTOR GENERAL. DR. ROMAN SERRA CASTAOS. Fecha de aprobacin y publicacin: Marzo 25, 1980 Esta Norma cancela a la: NMX-AA-003-1975

Anexo 3 NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-127-SSA1-1994, "SALUD AMBIENTAL, AGUA PARA USO Y CONSUMO HUMANO-LIMITES PERMISIBLES DE CALIDAD Y TRATAMIENTOS A QUE DEBE SOMETERSE EL AGUA PARA SU POTABILIZACION". Al margen un sello con el Escudo Nacional, que dice: Estados Unidos Mexicanos.Secretara de Salud. GUSTAVO OLAIZ FERNANDEZ, Director General de Salud Ambiental, por acuerdo del Comit Consultivo Nacional de Normalizacin de Regulacin y Fomento Sanitario, con fundamento en los artculos 39 de la Ley Orgnica de la Administracin Pblica Federal; 3o. fraccin XIV, 13 apartado A fraccin I, 118 fraccin II y 119 fraccin II de la Ley General de Salud; 38 fraccin II, 40 fraccin I y 47 de la Ley Federal sobre Metrologa y Normalizacin; 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 218, 224, 227 y dems aplicables del Reglamento de la Ley General de Salud en Materia de Control Sanitario de Actividades, Establecimientos, Productos y Servicios; 8o. fraccin IV y 25 fraccin V del Reglamento Interior de la Secretara de Salud. 0. Introduccin El abastecimiento de agua para uso y consumo humano con calidad adecuada es fundamental para prevenir y evitar la transmisin de enfermedades gastrointestinales y otras, para lo cual se requiere establecer lmites permisibles en cuanto a sus caractersticas bacteriolgicas, fsicas, organolpticas, qumicas y radiactivas. Con el fin de asegurar y preservar la calidad del agua en los sistemas, hasta la entrega al consumidor, se debe someter a tratamientos de potabilizacin. 1. Objetivo y campo de aplicacin Esta Norma Oficial Mexicana establece los lmites permisibles de calidad y los tratamientos de potabilizacin del agua para uso y consumo humano, que deben cumplir los sistemas de abastecimiento pblicos y privados o cualquier persona fsica o moral que la distribuya, en todo el territorio nacional. 2. Referencias NOM-008-SCF1-1993 "Sistema General de Unidades de Medida".

3. Definiciones 3.1 Ablandamiento: Proceso de remocin de los iones calcio y magnesio, principales causantes de la dureza del agua. 3.2 Adsorcin: Remocin de iones y molculas de una solucin que presentan afinidad a un medio slido adecuado, de forma tal que son separadas de la solucin.

3.3 Agua para uso y consumo humano: Aquella que no contiene contaminantes objetables, ya sean qumicos o agentes infecciosos y que no causa efectos nocivos al ser humano. 3.4 Caractersticas bacteriolgicas: Son aquellas debidas a microorganismos nocivos a la salud humana. Para efectos de control sanitario se determina el contenido de indicadores generales de contaminacin microbiolgica, especficamente organismos coliformes totales y organismos coliformes fecales. 3.5 Caractersticas fsicas y organolpticas: Son aquellas que se detectan sensorialmente. Para efectos de evaluacin, el sabor y olor se ponderan por medio de los sentidos y el color y la turbiedad se determinan por medio de mtodos analticos de laboratorio. 3.6 Caractersticas qumicas: Son aquellas debidas a elementos o compuestos qumicos, que como resultado de investigacin cientfica se ha comprobado que pueden causar efectos nocivos a la salud humana. 3.7 Caractersticas radiactivas: Son aquellas resultantes de la presencia de elementos radiactivos. 3.8 Coagulacin qumica: Adicin de compuestos qumicos al agua, para alterar el estado fsico de los slidos disueltos, coloidales o suspendidos, a fin de facilitar su remocin por precipitacin o filtracin. 3.9 Contingencia: Situacin de cambio imprevisto en las caractersticas del agua por contaminacin externa, que ponga en riesgo la salud humana. 3.10 Desinfeccin: Destruccin de organismos patgenos por medio de la aplicacin de productos qumicos o procesos fsicos. 3.11 Filtracin: Remocin de partculas suspendidas en el agua, hacindola fluir a travs de un medio filtrante de porosidad adecuada. 3.12 Floculacin: Aglomeracin de partculas desestabilizadas en el proceso de coagulacin qumica, a travs de medios mecnicos o hidrulicos. 3.13 Intercambio inico: Proceso de remocin de aniones o cationes especficos disueltos en el agua, a travs de su reemplazo por aniones o cationes provenientes de un medio de intercambio, natural o sinttico, con el que se pone en contacto. 3.14 Lmite permisible: Concentracin o contenido mximo o intervalo de valores de un componente, que garantiza que el agua ser agradable a los sentidos y no causar efectos nocivos a la salud del consumidor. 3.15 Neutralizacin: Ajuste del pH, mediante la adicin de agentes qumicos bsicos o cidos al agua en su caso, con la finalidad de evitar incrustacin o corrosin de materiales que puedan afectar su calidad.

3.16 Osmosis inversa: Proceso esencialmente fsico para remocin de iones y molculas disueltos en el agua, en el cual por medio de altas presiones se fuerza el paso de ella a travs de una membrana semipermeable de porosidad especfica, retenindose en dicha membrana los iones y molculas de mayor tamao. 3.17 Oxidacin: Introduccin de oxgeno en la molcula de ciertos compuestos para formar xidos. 3.18 Potabilizacin: Conjunto de operaciones y procesos, fsicos y/o qumicos que se aplican al agua a fin de mejorar su calidad y hacerla apta para uso y consumo humano. 3.19 Precipitacin: Proceso fsico que consiste en la separacin de las partculas suspendidas sedimentables del agua, por efecto gravitacional. 3.20 Sistema de abastecimiento: Conjunto intercomunicado o interconectado de fuentes, obras de captacin, plantas cloradoras, plantas potabilizadoras, tanques de almacenamiento y regulacin, crcamos de bombeo, lneas de conduccin y red de distribucin. 4. Lmites permisibles de calidad del agua 4.1 Lmites permisibles de caractersticas bacteriolgicas El contenido de organismos resultante del examen de una muestra simple de agua, debe ajustarse a lo establecido en la Tabla 1. Bajo situaciones de emergencia, las autoridades competentes deben establecer los agentes biolgicos nocivos a la salud a investigar.

TABLA 1

4.2 Lmites permisibles de caractersticas fsicas y organolpticas Las caractersticas fsicas y organolpticas debern ajustarse a lo establecido en la Tabla 2. TABLA 2

4.3 Lmites permisibles de caractersticas qumicas El contenido de constituyentes qumicos deber ajustarse a lo establecido en la Tabla 3. Los lmites se expresan en mg/l, excepto cuando se indique otra unidad. Tabla 3

Los lmites permisibles de metales se refieren a su concentracin total en el agua, la cual incluye los suspendidos y los disueltos. 4.4 Lmites permisibles de caractersticas radiactivas El contenido de constituyentes radiactivos deber ajustarse a lo establecido en la Tabla 4. Los lmites se expresan en Bq/l (Becquerel por litro). TABLA 4

5. Tratamientos para la potabilizacin del agua La potabilizacin del agua proveniente de una fuente en particular, debe fundamentarse en estudios de calidad y pruebas de tratabilidad a nivel de laboratorio para asegurar su efectividad. Se deben aplicar los tratamientos especficos siguientes o los que resulten de las pruebas de tratabilidad, cuando los contaminantes biolgicos, las caractersticas fsicas y los constituyentes qumicos del agua enlistados a continuacin, excedan los lmites permisibles establecidos en el apartado 4. 5.1 Contaminacin biolgica 5.1.1 Bacterias, helmintos, protozoarios y virus.- Desinfeccin con cloro, compuestos de cloro, ozono o luz ultravioleta. 5.2 Caractersticas fsicas y organolpticas 5.2.1 Color, olor, sabor y turbiedad.- Coagulacin-floculacin-precipitacinfiltracin; cualquiera o la combinacin de ellos, adsorcin en carbn activado u oxidacin. 5.3 Constituyentes qumicos 5.3.1 Arsnico.- Coagulacin-floculacin-precipitacin-filtracin; cualquiera o la combinacin de ellos, intercambio inico u smosis inversa. 5.3.2 Aluminio, bario, cadmio, cianuros, cobre, cromo total y plomo.- Intercambio inico u smosis inversa. 5.3.3 Cloruros.- Intercambio inico, smosis inversa o destilacin. 5.3.4 Dureza.- Ablandamiento qumico o intercambio inico.

5.3.5 Fenoles o compuestos fenlicos.- Adsorcin en carbn activado u oxidacin con ozono. 5.3.6 Fierro y/o manganeso.- Oxidacin-filtracin, intercambio inico u smosis inversa. 5.3.7 Fluoruros.- Osmosis inversa o coagulacin qumica. 5.3.8 Materia orgnica.- Oxidacin-filtracin o adsorcin en carbn activado. 5.3.9 Mercurio.- Proceso convencional: coagulacin-floculacin-precipitacinfiltracin, cuando la fuente de abastecimiento contenga hasta 10 microgramos/l. Procesos especiales: en carbn activado granular y smosis inversa cuando la fuente de abastecimiento contenga hasta 10 microgramos/l; con carbn activado en polvo cuando la fuente de abastecimiento contenga ms de 10 microgramos/l. 5.3.10 Nitratos y nitritos.- Intercambio inico o coagulacin-floculacinsedimentacin-filtracin; cualquiera o la combinacin de ellos. 5.3.11 Nitrgeno amoniacal.- Coagulacin-floculacin-sedimentacin-filtracin, desgasificacin o desorcin en columna. 5.3.12 pH (potencial de hidrgeno).- Neutralizacin. 5.3.13 Plaguicidas.- Adsorcin en carbn activado granular. 5.3.14 Sodio.- Intercambio inico. 5.3.15 Slidos disueltos totales.- Coagulacin-floculacin-sedimentacin-filtracin y/o intercambio inico. 5.3.16 Sulfatos.-Intercambio inico u smosis inversa. 5.3.17 Sustancias activas al azul de metileno.- Adsorcin en carbn activado. 5.3.18 Trihalometanos.- Aireacin u oxidacin con ozono y adsorcin en carbn activado granular. 5.3.19 Zinc.- Destilacin o intercambio inico. 5.3.20 En el caso de contingencia, resultado de la presencia de sustancias especificadas o no especificadas en el apartado 4, se deben coordinar con la autoridad sanitaria competente, las autoridades locales, la Comisin Nacional del Agua, los responsables del abastecimiento y los particulares, instituciones pblicas o empresas privadas involucrados en la contingencia, para determinar las acciones que se deben realizar con relacin al abastecimiento de agua a la poblacin. 6. Bibibliografa 6.1 "Desinfeccin del Agua". Oscar Cceres Lpez. Lima, Per. Ministerio de Salud. Organizacin Panamericana de la Salud. Organizacin Mundial de la Salud. 1990. 6.2 "Guas para la Calidad del Agua Potable". Volumen 1. Recomendaciones. Organizacin Panamericana de la Salud. Organizacin Mundial de la Salud. 1985. 6.3 "Guas para la Calidad del Agua Potable". Volumen 2. Criterios relativos a la salud y otra informacin de base. Organizacin Panamericana de la Salud. 1987. 6.4 "Gua para la Redaccin, Estructuracin y Presentacin de las Normas Oficiales Mexicanas". Proyecto de Revisin. SECOFI. 1992. 6.5 "Guide to Selection of Water Treatment Processes". Carl L. Hamann Jr., P.E. J. Brock Mc. Ewen, P.E. Anthony G. Meyers, P.E. 6.6 "Ingeniera Ambiental". Revista No. 23. Ao 7. 1994. 6.7 "Ingeniera Sanitaria Aplicada a la Salud Pblica". Francisco Unda Opazo. UTEHA 1969.

6.8 "Ingeniera Sanitaria y de Aguas Residuales". Purificacin de Aguas y Tratamiento y Remocin de Aguas Residuales. Gordon M. Fair, John C. Geyer, Daniel A. Okun. Limusa Wiley. 1971. 6.9 "Instructivo para la Vigilancia y Certificacin de la Calidad Sanitaria del Agua para Consumo Humano". Comisin Interna de Salud Ambiental y Ocupacional. Secretara de Salud. 1987. 6.10 "Integrated Design of Water Treatment Facilities". Susumu Kawamura. John Willey and Sons, Inc. 1991. 6.11 "Manual de Normas de Calidad para Agua Potable". Secretara de Asentamientos Humanos y Obras Pblicas. 1982. 6.12 "Manual de Normas Tcnicas para el Proyecto de Plantas Potabilizadoras". Secretara de Asentamientos Humanos y Obras Pblicas. 1979. 6.13 "Reglamento de la Ley General de Salud en Materia de Control Sanitario de Actividades, Establecimientos, Productos y Servicios". Diario Oficial de la Federacin. 18 de enero de 1988. 6.14 "Revision of the WHO Guidelines for Drinking-Water Quality". IPS. International Programme on Chemical Safety. United Nations Environment Programme. International Labour Organization. World Health Organization. 1991. 6.15 "WHO Guidelines for Drinking-Water Quality". Volume 1. Recommendations. World Health Organization. 1992. 6.16 "WHO Guidelines for Drinking-Water Quality". Volume 2. Health Criteria and Other Supporting Information. Chapter 1: Microbiological Aspects. United Nations Environment Programme.International Labour Organization. World Health Organization. 1992. 7. Concordancia con normas internacionales Al momento de la emisin de esta Norma no se encontr concordancia con normas internacionales. 8. Observancia de la Norma Esta Norma Oficial Mexicana es de observancia obligatoria en todo el territorio nacional para los organismos operadores de los sistemas de abastecimiento pblicos y privados o cualquier persona fsica o moral que distribuya agua para uso y consumo humano. La vigilancia del cumplimiento de esta Norma Oficial Mexicana corresponde a la Secretara de Salud y a los gobiernos de las entidades federativas en coordinacin con la Comisin Nacional del Agua, en sus respectivos mbitos de competencia. 9. Vigencia La presente Norma Oficial Mexicana entrar en vigor con carcter de obligatorio, al da siguiente de su publicacin en el Diario Oficial de la Federacin. Sufragio Efectivo. No Reeleccin. Mxico, D.F., a 30 de noviembre de 1995.- El Director General de Salud Ambiental, Gustavo Olaiz Fernndez.- Rbrica.

Anexo 4 BD EMB Agar (Eosin Methylene Blue Agar), Modified USO PREVISTO El BD EMB Agar, Modified (agar eosina azul de metileno, modificado, frmula de Holt-Harris y Teague) es un medio ligeramente selectivo y diferencial para el aislamiento y la diferenciacin de bacilos gram-negativos entricos (Enterobacteriaceae y diversos bacilos gram-negativos) en muestras clnicas y no clnicas. PRINCIPIOS Y EXPLICACION DEL PROCEDIMIENTO Mtodo microbiolgico EMB Agar se basa en una frmula originalmente descrita por Holt-Harris y 1 Teague en 1916 . La frmula original de Holt-Harris y Teague posteriormente fue modificada por 2 Levine .La principal diferencia entre las dos es la inclusin de sacarosa en el medio de Holt-Harris y Teague. Ciertos microorganismos entricos fermentan 3 con mayor facilidad la sacarosa que la lactosa . BD EMB Agar, Modified contiene colorantes de azul de metileno y eosina Y, que inhiben las bacterias gram-positivas en cierto grado. Los colorantes tambin actan como indicadores diferenciales en respuesta a la fermentacin de la lactosa o la sacarosa por parte de los microorganismos. Los coliformes producen colonias de color negro azulado, mientras que las colonias de Salmonella y Shigella son incoloras o de color mbar transparente. Las colonias de Escherichia coli pueden exhibir un brillo verde metlico caracterstico debido a la rpida fermentacin de la lactosa. El conjunto de medios de aislamiento de baja selectividad para Salmonella en 4 muestras fecales y de otros tipos incluye el EMB Agar (con y sin sacarosa) . Este medio puede inhibir el crecimiento de las bacterias gram-positivas como los estreptococos fecales, estafilococos y levaduras, o bien favorecer su crecimiento con formacin de colonias puntiformes. REACTIVOS BD EMB Agar, Modified Frmula* por litro de agua destilada Digerido 10,0 g pancretico de gelatina Lactosa 5,0 Sacarosa 5,0 Fosfato dipotsico 2,0 Agar 13,5 Eosina Y 0,4 Azul de metileno 0,065 pH 7,2 +/- 0,2 *Ajustada o suplementada para satisfacer los criterios de rendimiento. PRECAUCIONES . Para uso exclusivo por parte de profesionales.

No usar placas que presenten seales de contaminacin microbiana, decoloracin, desecacin, roturas u otras seales de deterioro. Consultar en las INSTRUCCIONES GENERALES DE USO los procedimientos de manipulacin asptica, peligros biolgicos y eliminacin del producto despus de su uso.

ALMACENAMIENTO Y VIDA UTIL Al recibir las placas, almacenarlas en un lugar oscuro a una temperatura entre 2 y 8 C, envueltas en su envase original, hasta justo antes de usarlas. Evitar la congelacin y el calentamiento excesivo. Las placas pueden inocularse hasta su fecha de caducidad (ver la etiqueta en el paquete) e incubarse durante los perodos de incubacin recomendados. Las placas de grupos de 10 placas ya abiertos pueden usarse durante una semana siempre que se almacenen en un lugar limpio a una temperatura entre 2 y 8 C. CONTROL DE CALIDAD DEL USUARIO Inocular muestras representativas con las siguientes cepas (consultar las INSTRUCCIONES GENERALES DE USO para obtener instrucciones detalladas). Incubar las placas en condiciones aerobias a una temperatura de 35 2 C durante un perodo de 18 a 24 horas. Cepas Escherichia coli ATCC 25922 Resultados del crecimiento Crecimiento de bueno a excelente; colonias de color negro azulado con brillo verde metlico Crecimiento de bueno a excelente; colonias de gris claro a mbar Crecimiento de adecuado a excelente; colonias desde incoloras hasta mbar claro Inhibicin parcial; colonias incoloras Prpura con un tinte verdoso anaranjado, ligeramente opalescente

Salmonella Typhimurium ATCC 14028 Shigella flexneri ATCC 12022

Enterococcus faecalis ATCC 29212 Sin inocular

PROCEDIMIENTO Materiales suministrados BD EMB Agar, Modified microbiolgicamente. (placas Stacker de 90 mm). Controladas

Materiales no suministrados Medios de cultivo auxiliares, reactivos y equipo de laboratorio que se requiera. Tipos de muestras Este producto es un medio selectivo para bacilos gram-negativos y se puede utilizar con todas las muestras (ver tambin Limitaciones del procedimiento) y

muestras no clnicas propicias (ver tambin CARACTERSTICAS RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO).

DE

Procedimiento de anlisis Una vez recibida la muestra en el laboratorio, extenderla tan pronto como sea posible. La placa de extendido se emplea sobre todo para aislar cultivos puros en muestras que contengan flora microbiana mixta. Si por el contrario el material se cultiva directamente empleando una torunda, hacerla girar en una seccin pequea cercana al borde, extendiendo luego a partir de esta rea inoculada. Asimismo es preciso extender un medio no selectivo, p. ej. agar Columbia, con sangre de carnero al 5% para suministrar una indicacin de otros microorganismos presentes en la muestra. Incubar las placas, protegidas de la luz, a una temperatura de 35 2 C durante un perodo de 18 a 24 h. Resultados En la tabla siguiente se indica la morfologa BD EMB Agar, Modified caracterstica de las colonias: Microorganismos E. coli Colonias grandes, color negro azulado, brillo verde metlico Enterobacter/Klebsiella Colonias grandes, mucoides, color negro azulado Proteus Colonias grandes, incoloras Salmonella Colonias grandes, desde incoloras hasta color mbar Shigella Colonias grandes, desde incoloras hasta color mbar Pseudomonas Colonias irregulares, incoloras Bacterias gram-positivas Crecimiento escaso o nulo

Caractersticas de rendimiento y limitaciones del procedimiento En BD EMB Agar, Modified, crecern microorganismos de la familia Enterobacteriaceae y una diversidad de bacilos gram-negativos, p. ej. 3-5 Pseudomonas y Aeromonas . Frecuentemente este medio no inhibe completamente los microorganismos grampositivos. Ciertas pruebas de diagnstico pueden efectuarse directamente en este medio; no obstante, para lograr la identificacin total se necesitan pruebas bioqumicas, y (si as se indica) pruebas inmunolgicas usando cultivos puros. Consultar las 3-5 referencias correspondientes . REFERENCIAS 1. Holt-Harris, J.E., and O. Teague. 1916. A new culture medium for the isolation of Bacillus typhosus from stools. J. Infect. Dis. 18:596-600. 2. Levine, M. 1918. Differentiation of B. coli and B. aerogenes on a simplified eosin-methylene blue agar. J. Infect. Dis. 23:43-47.

3. MacFaddin, J.F. 1985. Media for the isolation cultivation maintenance of medical bacteria. Volume 1. Williams and Wilkins, Baltimore, London. 4. Farmer III, J.J. 2003. Enterobacteriaceae: introduction and identification. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 5. Bopp, C.A., Brenner, F.W., Fields, P.I., Wells, J.G., and N.A. Strockbine. 2003. Escherichia, Shigella, and Salmonella. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. ENVASE Y DISPONIBILIDAD BD EMB Agar, Modified N de cat. 254014 N de cat. 254073 Medio en placas listo para su uso, 20 placas Medio en placas listo para su uso, 120 placas

INFORMACION ADICIONAL Para obtener ms informacin, dirjase a su representante local de BD. BD Diagnostic Systems Tullastrasse 8 12 D-69126 Heidelberg/Germany Phone: +49-62 21-30 50 Fax: +49-62 21-30 52 16 Reception_Germany@europe.bd.com BD Diagnostic Systems Europe Becton Dickinson France SA 11 rue Aristide Bergs 38800 Le Pont de Claix/France Tel: +33-476 68 3636 Fax: +33-476 68 3292 http://www.bd.com ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection BD, BD Logo and all other trademarks are the property of Becton, Dickinson and Company. 2009 BD

Anexo 5 Muestreador El Muestreador usado fue uno diseado especialmente para este tipo de muestreo hecho, fue un Muestreador mecnico con tapa que se cierra y se abre de manera manual debajo del agua para obtener la muestra requerida, hecha de un material totalmente de vidrio en la parte inferior, que se puede extraer fcilmente para esterilizarlo y as cumplir con lo normado para el muestreo y de fcil almacenamiento del mis modo para su conservacin inmediata una vez concluido el muestreo.