Metode optice de analiza

Generalitati
Metodele optice de analiza se bazeaza pe interactiunea radiatiile electro-magnetice, cu diverse lungimi de unda cu substanta de analizat. Ele utilizeaz ca mijloc de excitare a substanelor (respectiv atomilor componeni ai moleculelor) radiaia electromagnetic, n vederea obinerii de informaii privind fie natura constituenilor fie cantitatea acestora. Se tie c radiaia electromagnetic este o forma a materiei specific, cu proprieti att de und ct i de particul (comportament dual). Componentele - electric i magnetic - oscileaz perpendicular una pe alta dar i pe direcia de propagare. Lumina (sau radiaia electromagnetic) mai nseamn i energie ce se transmite doar n buci, numite cuante de energie, i care pot fi calculate din lungimea de und: E = h = hc/ Domeniul de lungimi de und fiind foarte larg, radiaia electromagnetic este foarte diferit. n funcie de natura interaciunii radiaiilor de natur luminoas cu substanele, metodele spectrale se pot clasifica n: metode de absorbie (pe domenii diverse: raze X, vizibil, UV, IR, RMN etc), metode de emisie a radiaiei electromagnetice (tot pe diverse domenii), metode de fluorescen (UV, VIS, X etc), fosforescen sau luminescen, metode de difracie (cu raze X, cu electroni, cu neutroni), refractometria i interferometria, polarimetria, metode bazate pe difuzia luminii, metode combinate.

Polarimetria

Page 1

Metode optice de analiza

Metodele spectrale de analiz se bazeaz pe utilizarea fenomenelor de emisie sau de interaciune a radiaiei electromagnetice cu atomii sau moleculele substanei de analizat (absorbie). Emisia sau absorbia radiaiilor electromagnetice de ctre sistemul cercetat duce la apariia unui semnal analitic ce d informaii despre compoziia calitativ i cantitativ a substanei analizate. Intensitatea semnalului analitic este proporional cu numrul de particule care au cauzat acest semnal, deci cu concentraia componentului ce se determin. n cazul metodelor spectrale de absorbie, semnalul analitic este absorbana. Metodele optice dau i alte informaii valoroase privind substanele, de exemplu: compoziia (concentraii, componeni, faze), viteze de reacie, constante de echilibru, structuri ale combinaiilor (distane ntre atomi, ntre plane de atomi, energii de legtur). Contribuiile cruciale n progresul metodelor optice le-au adus: Newton - 1696 - ce realizeaz primul descompunerea luminii albe cu ajutorul prismei; Wollaston - 1802 - i Fraunhofer - 1859 - care descoper spectrele de emisie respectiv de absorbie; Kirchhoff - 1859 - enun legea privind legtura ntre capacitatea de emisie i de absorbie a luminii de ctre corpuri, lege ce-i poart numele; Bunsen i Kirchhoff - 1860 - primul chimist, al doilea fizician, pun bazele spectroscopiei, devenit astzi spectrometrie datorit msurtorilor electrice asociate; Louis de Broglie - 1924 - intuiete existena dualismului corpuscul - und. n ultimul timp, principalul progres a fost computerizarea instrumentaiei spectrometrice pentru toate tipurile de analize, lucru care a deschis noi perspective prelucrrii numerice rapide a semnalelor, ceea ce a condus chiar la noi metode (de exemplu extinderea aplicrii transformatei Fourier n analizele chimice) dar i utilizarea fibrelor optice, pentru dirijarea drumului optic, ceea ce a dus la micorarea dimensiunilor instrumentelor.

Polarimetria

Page 2

Metode optice de analiza

Fluorescen, luminescen, fosforescen

Anumite combinaii chimice, aflate mai ales n soluie sau n stare solid, n urma excitrii moleculelor cu radiaii din domeniile vizibil i UV apropiat, reemit o parte din energia primit sub form de radiaie luminoas - adesea vizibil. Aceast reemisie se numete fluorescen. Maximul radiaiei de fluorescen este situat de obicei la o valoare a lungimii de und mai mare dect maximul picului radiaiei care a provocat excitarea, diferena de energie corespunztoare transformndu-se n cldur, fiind disipat n mediu. Simplificat, acest fenomen poate fi reprezentat conform schemei din fig. 1.

Dup excitare, intensitatea luminii emise de ctre atomi, F, scade exponenial n timp respectnd o ecuaie de forma:

Unde: F - radiaia de fluorescen produs de ctre o substan, - intensitatea radiaiei incidente, - o constant caracteristic substanei (analog constantei de vitez) t - timpul. Polarimetria Page 3

Metode optice de analiza

Trebuie fcut o distincie ntre fluorescen, care corespunde unei scderi rapide a intensitii luminoase emise i fosforescen - la care scderea n timp este cu mult mai lent.De aceea o specie molecular poate fi, deodat, att fluorescent ct i fosforescent. Pe de alt parte, luminescena este tot o reemisie de lumin dar aceasta are la origine energia unei reacii. Aceast energie nu se degaj sub form de cldur (ca n majoritatea cazurilor) ci sub form de energie radiant. De fapt o putem considera ca pe o excitare a electronilor cu ajutorul cldurii de reacie. Timpul de via a unei specii moleculare excitate, 0, se definete chiar cu ajutorul constantei de vitez din relaia precedent: Dup acest timp intensitatea rezidual nu reprezint dect 36.7% din cea iniial adic peste 60% dintre moleculele excitate au revenit la starea neemisiv. De aceea fluorimetria lucreaz n regim staionar - excitarea avnd loc pe tot parcursul msurtorii - pe cnd fosforescena, la care diminuarea intensitii n timp este mult mai lent, se studiaz doar dup ce a ncetat faza de excitare. Fluorescena, riguros vorbind, implic emisia de radiaie prin tranziia ntre dou niveluri care au aceeai multiplicitate (de exemplu singlet la singlet sau triplet la triplet). Dac tranziia are loc ntre dou niveluri de multiplicitate diferit, aceasta poart numele de luminescen. Metodele de analiz bazat pe fluorescen nu sunt general aplicabile oricror substane. Dar, toate metodele analitice bazate pe att pe fluorescen ct i pe i luminescen pe lng c sunt foarte specifice sunt i foarte sensibile. De exemplu, putem aminti c limita de determinare a unei metode fluorimetrice, pentru o anumit combinaie chimic, este de circa 1000 de ori mai cobort dect cea a unei metode prin absorbie n vizibil sau n ultraviolet. De aceea, din aceast categorie de metode exist cteva extrem de utile n analiza i monitorizarea unor poluani ai mediului. Dei am amintit la nceput c fluorescena apare n strile lichid i solid, anumite gaze, de exemplu aflate n atmosfera terestr, pot fi determinate cantitativ prin fluorescena indus de excitarea cu un puls de durat foarte mic (1sec) cu ajutorul unui laser de mare putere (dispozitiv cunoscut sub denumirea de lidar). ntruct nivelul radiaiei de luminescen nu este ntotdeauna foarte ridicat, exist doutipuri de instrumente diferite: fluorimetre i spectrometre de chemiluminescen. Ultimele i-au gsit aplicaii n domeniul analizelor N sau S din materiale precum i n monitorizareaNOx, H2S din aer precum i n studiile, respectiv analizele fenomenelor de mbtrnire a materialelor plastice.

Bazele fizice ale fluorescenei

Din punct de vedere fundamental, fluorescena compuilor moleculari (de interes pentru analiza chimic) se poate nelege ca o absorbie de radiaie UV-VIS urmat de o serie de tranziii energetice ntre ultimii orbitali ocupai, n starea fundamental a moleculei, i primii orbitali externi Polarimetria Page 4

Metode optice de analiza

vacani. Iniial moleculele se afl n repaos, n starea fundamental, notat S0 (fig. 2). Dup absorbia unui foton incident electronii trec n starea S1 - prima stare de tranziie electronic, excitat. Apoi, foarte rapid (10-12s), are loc un proces denumit conversie intern, prin care moleculele sufer rearanjri, fr a emite fotoni, timp n care electronii ajung n starea caracterizat prin numrul de vibraie V0 a strii electronice urmtoare, S1. Abia apoi intervin tranziiile de fluorescen (timp de 10-9-10-7s) n urma crora moleculele revin pe unul din nivelele notate V0, V1, ... (stri energetice de vibraie caracterizate fiecare prin numrul de vibraie respectiv, Vi) - aparinnd nivelului iniial S0 [91].

Se poate observa (fig. 2) c moleculele pot pstra o parte din energia lor sub form de energie de vibraie. Acest exces de energie urmeaz a fi disipat n mediul nconjurtor prin coliziuni mecanice sau alte procese neradiative cunoscute sub denumirea de relaxare vibraional. Se mai poate uneori totui produce i o emisie de fotoni, evident mai sraci n energie, care stau la baza unei fluorescene situate n IR apropiat. Spectrul de absorbie i cel de fluorescen pentru diferii compui prezint (cu o bun aproximaie) o simetrie, unul reprezentnd aproape imaginea n oglind a celuilalt. Cum e i firesc absorbia este situat la lungimi de und mai mici, respectiv n conformitate cu ecuaiile: E = h = hc/, la valori ale energiei, E, mai ridicate (fig. 3).

Polarimetria

Page 5

Metode optice de analiza

Fosforescena, pe lng faptul c nsoete o reacie chimic, analog luminescenei, corespunde i unui mod diferit de revenire la starea fundamental. Dup faza de absorbie o dat cu transferul unui electron pe nivelul S1 (prima stare electronic excitat dup cea fundamental - o stare de singlet) are loc, dac relaxarea vibraional se produce suficient de lent, modificarea spinului electronului la o stare de triplet, notat T1 (fig. 2), ceva mai stabil (metastabil). Din acest motiv, revenirea la starea fundamental este ncetinit, deoarece implic o nou modificare de spin a acestui electron. Ca urmare, durata strii excitate n fosforescen poate fi de 108 ori mai mare dect n fluorescen. Se cunosc cteva reguli privind legtura dintre structura compuilor organici i fluorescena acestora: Moleculele organice care nu absorb puternic lumina peste 200 nm n general nu sunt fluorescente. Moleculele care au banda de absorbie corespunztoare tranziiei: S0S1 (v. fig. 1), localizat la = 250nm i pentru care absorbia luminii se datorete unei tranziii (') sunt fluorescente. Substituenii - donori de electroni - grefai pe un sistem -delocalizat mresc ntotdeauna absorbia luminii, intensificnd fluorescena. n acest sens, se pot aminti, de exemplu, funciunile: OH > OR > NH2. Grupele funcionale puternic atragtoare de electroni (grefate la sistemul ') tind s reduc fluorescena moleculei respective. n plus prezena, alturi de acestea, a unor grupri donoare de electroni, tinde s diminueze fluorescena (i nu s o intensifice). n consecin, moleculele organice care au cel puin dou legturi conjugate i care conin i o band de absorbie la > 200nm, cu un coeficient de absorbie 103Lmol-1cm-1, prezint fluorescen i pot fi analizate fluorimetric. De exemplu, compuii moleculari ciclici cu sisteme conjugate (fig. 4), care mai posed grupri funcionale donoare de electroni, se preteaz foarte bine la acest tip de determinri.

Polarimetria

Page 6

Metode optice de analiza

Intensitatea fluorescenei
Semnalul analitic n fluorimetrie l constituie intensitatea fluorescenei, F. Valoarea acesteia depinde att de poziia punctului de unde este emis radiaia ct i de poziiile fantelor de intrare i ieire din celula de msur. Astfel, o parte a radiaiei incidente (excitante) este absorbit de ctre lichidul din celul nainte de a atinge punctul de emisie iar o parte a radiaiei de fluorescen, o dat emise, este absorbit de aceeai soluie, nainte ca aceasta s prseasc celula. Asadar, intensitatea radiaiei de fluorescen care atinge detectorul corespunde unui volum de soluie relativ mic prezent n spaiul delimitat de proieciile ferestrelor de intrare i ieire din celul. Fenomenul de diminuare a intensitii luminoase - numit impropriu filtrare intern - se datorete mai ales suprapunerii pariale a spectrelor de fluorescen i de absorbie (fig. 3). n afar de absorbia propriu zis, denumit i diminuare prin culoare, mai pot interveni transferuri de energie de la molecule excitate la alte molecule sau la ioni strini din celul, n urma unor coliziuni sau formri de compleci. Acest fenomen se numete diminuare chimic. De exemplu, prezea oxigenului atmosferic provoac o diminuare suplimentar de fluorescen. De aceea, pentru soluii, se definete o mrime denumit randamentul fluorescenei, f, cuprins ntre 0 i 1 - un parametru independent de intensitatea sursei: = (Numrul de fotoni emii)/(Numrul de fotoni absorbii) (1) Se poate observa c aceast mrime reprezint fracia radiaiei incidente absorbite, care este reemis sub form de fluorescen. Cu ajutorul acesteia, n soluii diluate, se poate scrie o ecuaie a intensitii fluorescenei, F. n primul rnd trebuie s se in cont de factorii care determin absorbana, A, ct i de lungimea, notat cu b, a parcursului radiaiei de fluorescen prin celul. n consecin expresia intensitii fluorescenei se poate scrie: Polarimetria Page 7

Metode optice de analiza

F= unde cu Ab (2)

s-a notat intensitatea radiaiei incidente,

A - absorbana soluiei (A = lC) b lungimea parcursului radiaiei de fluorescen prin celula de msur. nlocuind A avem: F= lbC (3)

unde C este concentraia molar a soluiei. nglobnd toate constantele care depind de celul, respectiv de soluie, ntr-o singur constant, K, obinem o ecuaie mai simpl: F = K C (4) Pe baza acestei ecuaii se poate gsi experimental o curb de etalonare n coordonatele F, C care este o dreapt (fig. 5 - stnga). Desigur c aceasta este valabil doar n soluii diluate, ntruct s-a constatat c poate suferi modificri accentuate la concentraii superioare (fig. 5 - dreapta) tocmai din cauzele amintite.

Aparatura
Deoarece proba spus analizei emite radiaia de fluorescen n toate direciile, pe fotodioda sau fotomultiplicatorul instrumentului folosit cad doar radiaiile care vin n direcia acestuia, n timp ce restul se pierd. De aceea suprafaa senzorului care preia radiaia trebuie s fie ct mai mare. n general se msoar radiaia care prsete celula sub un unghi de 90 fa de radiaia incident. Pentru soluii cu absorban ridicat studiul se poate realiza i n prelungirea fascicolului incident. Pentru soluii semiopace se preconizeaz o observare sub un unghi variabil ntre 90-180. Geometria fluorimetrelor poate fi sintetizat prin schema din fig. 6.

Polarimetria

Page 8

Metode optice de analiza

Sursele optice ale fluorimetrelor actuale emit un spectru luminos continuu. Au devenit uzuale urmtoarele lmpi folosite n calitate de surse: Lmpile cu arc de deuteriu (190-400nm), Lmpile cu arc de xenon (200-850nm), Lmpile cu arc de wolfram (380-700nm). Se mai utilizeaz i lmpile cu vapori de mercur care produc linii spectrale intense (la 254, 313 i 365nm). Acestea, pot fi izolate individual folosindu-se nite simple filtre optice. De asemenea au mai aprut surse cu laser heliu-cadmiu (325nm, 5-10mW) care de asemenea necesit un filtru optic i impun folosirea unor fotomultiplicatori. Constructiv se pot distinge dou tipuri de fluorimetre: (1) bazate pe determinarea raportului fluorescenelor i (2) spectrofluorimetre. Fluorimetrele bazate pe determinarea raportului fluorescenelor (fig. 7) dup ce selecteaz radiaia excitant optim, gsit prin ncercri preliminare, radiaia incident este desprit, de o oglin semitransparent, n dou raze: una care cade pe prob (aflat n celula de msur) iar cealt pe o fotodiod. Din celula de msur iese radiaia de fluorescen, care se observ la un unghi de 90 fa de cea incident. Un al doilea monocromator, denumit de emisie, selecteaz radiaia dorit, de regul cea mai intens. Proba poate fi nlocuit cu un etalon metrologic pentru reglaje. Folosirea celor dou fotodiode n opoziie elimin fluctuaiile de intensitate inerente oricrei surse bazate pe arc electric. Calculul concentraiei necunoscute se face pe baza ecuaiei F = KI0C n care KI0 este o constant pentru orice pereche de valori C, F. Rezult:

unde

- concentraia probei necunoscute, - intensitatea fluorescenei probei necunoscute, - concentraia probei etalon, cunoscute

Polarimetria

Page 9

Metode optice de analiza

- intensitatea fluorescenei pentru proba etalon cunoscut.

Spectrofluorimetrele permit, pe lng cele amintite anterior la fluorimetre, obinerea unor spectre de fluorescen. Fiecare din cele dou monocromatoare baleiaz ntreg domeniul spectral. Pentru fiecare valoare a radiaiei excitante exist un spectru de fluorescen separat. Pentru tot domeniul se obine o familie de spectre care caracterizeaz n mod unic o combinaie chimic sau un material fluorescent. Cu ajutorul acestora se pot seleciona condiiile optime de lucru pentru o determinare de rutin.

Aplicaii
Exist un numr mic de molecule care posed o fluorescen natural. Acestea pot fi analizate cantitativ prin fluorimetrie dac se dispune de substana pur (etalon). Numrul acestora este foarte mic (5-8% din total). Pe de alt parte, aa cum exist reactivii de culoare, exist i o serie de reactivi de fluorescen care duc, n urma unei reacii chimice, la produi fluoresceni. Din primul grup de metode amintim analiza hidrocarburilor policiclice aromatice din ape, n urma separrii acestora prin cromatografie. Tot n categoria acestui prim grup intr i determinarea aflatoxinelor - nite ageni cancerigeni prezeni n alimente dar i o serie de alte substane importante cum ar fi steroizi i vitamine. Din a doua grup de metode amintim determinrile unor cationi metalici cum ar fi Be2+ cu reactivul morin sau unii compleci ai metalelor trivalente cu oxina (8-oxichinoleina).

Determinarea dioxidului de sulf (SO2) prin fluorimetrie n UV

Se bazeaz pe excitarea moleculelor de SO2 din prob cu o lamp UV pulsatorie (avnd o frecven de 20kHz) cu < 214nm. Moleculele de SO2 emit prin excitare o fluorescen cu lungimea de unda de 214nm, foarte specific. Aceast metod st la baza celor mai performanre analizoare de SO2 Polarimetria Page 10

Metode optice de analiza

permind determinarea 1ppb n aer. Mai mult, folosindu-se cuptoare de conversie oxidative prin care H2S este convertit la SO2 se pot construi analizoare att pentru SO2 ct i pentru H2S. O scem de principiu a analizorului pentru SO2 prin fluorescen n UV este prezentat n fig. 8.

Chemiluminescena
Exist reacii chimice care sunt nsoite de emisie luminoas. O astfel de substan este luminol-ul care poate reaciona cu ferul (II) i permite punerea n eviden a unor concentraii mici din acest element. O astfel de reacie este i cea utilizat pentru determinarea monoxidului de azot, NO n amestec cu dioxidul de azot, NO2. Aceti oxizi rezult prin arderea combustibililor la temperaturi ridicate n prezena azotului din aer i constituie poluani ai aerului. Metoda are la baz reacia de oxidare a NO cu ozon rezultnd, ntr-o prim faz, NO2* (adic o form excitat a dioxidului de azot) o specie chimic luminescent. Pentru determinarea compoziiei amestecului NO plus NO2 se procedeaz astfel. Pe o fraciune cunoscut din proba de aer (1 pe fig. 8) tot dioxidul de azot este redus la monoxid i n urma reaciei cu ozonul se determin NO + NO2. Pe o alt fraciune, (2), se determin prin aceeai metod doar NO (NO2 prezent, nefiind n stare excitat, nu prezint luminescen). Apoi, prin diferen se determin NO.

Polarimetria

Page 11

Metode optice de analiza

Un astfel de monitor NOx este prezentat schematic n fig. 8. Proba de aer este n prealabil filtrat pe un filtru i se desparte prin dou conducte. Pe drumul (1) exist o etuv-convertizor care conine o coloan umplut cu pulbere de molibden. La nclzire, Mo din coloan provoac reducerea doar pentru dioxidul de azot: NO2 + Mo NO + MoO3 Deci, pe drumul (2) gazul rmne nemodificat iar pe drumul (1) amestecul este convertit integral la NO. Apoi, fraciunile (1) i (2) intr n cele dou celule de luminescen, ambele alimentate cu ozon (O3) - produs de un ozonizator (inclus n instalaie). n celule au loc exact aceleai reacii: NO + O3 NO2* + O2 NO2* NO2 + h Luminescena este emis doar de dioxidul de azot proaspt obinut (fiind n stare excitat notat *), aprut prin reacia amintit anterior, avnd lungimea de und = 1.2m (1200nm), situat n infraroul apropiat. Semnalele de la cele dou celule ajung alternativ la blocul fotomultiplicator B durata fiind determinat de poziia chopper-ului (notat C). O perioad de timp se nregistreaz semnalul din celula NOx i o alt perioad, cel din celula NO (fig. 8). De aici semnalul este preluat de un microprocesor i transformat n concentraie rezolvndu-se ecuaia: F = K (5)

Polarimetria

Page 12

Metode optice de analiza

Pentru a se putea determina concentraia NO, pe baza semnalului F msurat, este necesar cunoaterea prealabil a valorii K. Aceast constant se determin, nainte de analiz, prin introducerea n cele dou celule a unui gaz-etalon, format din aer i un amestec cunoscut de NO + NO2 - coninut ntr-un cilindru sub presiune, legat la aparat. Dup evaluarea K se determin pe o prob necunoscut concentraia CNO i separat, CNO + CNO2 (notat in mod uzual NOx - fig. 8). n final, prin diferen se determin CNO2. Metoda servete att pentru monitorizarea NO i NO2 din aer ct i la determinri ale coninutului de azot cu ajutorul unor analizoare specializate de azot i sulf. n acestea din urm sulful se determin tot printr-o reacie de luminescen i tot n prezena ozonului: O3 + H2S H2O + SO2*; SO2* SO2 + h (luminescen n UV apropiat)

Bibliografie: Metode analitice performante in analiza farmaceutica- cursuri pentru doctorate Analiza fizico-chimica a marfurilor Gheorghe Brebeanu- Editura Universitatii din Ploiesti2003 Analiza instrumentala Andrei Florin Danet- Editura Universitatii din Bucuresti 2010

Polarimetria

Page 13