Enzimas. Introduccin. En todo ser vivo se producen constantemente innumerables reacciones qumicas.

Muchas de ellas tienden a transformar las sustancias introducidas con los alimentos a fin de obtener energa y materia prima para la sntesis de nuevas estructuras moleculares. Dicha sntesis, as como la degradacin a que son sometidos los propios componentes celulares una vez cumplida su vida til, son tambin el resultado de mltiples reacciones. Las reacciones qumicas se realizan en los seres vivientes a gran velocidad, en condiciones muy moderadas de temperatura, pH, presin, etc., gracias a la existencia de catalizadores. Un catalizador es un agente capaz de acelerar una reaccin qumica, sin formar parte de los productos finales ni desgastarse en el proceso. En los medios biolgicos se desempean como catalizadores un grupo numeroso y variado de sustancias denominadas enzimas. Como todo catalizador, las enzimas actan disminuyendo la energa de activacin (Ea) de una reaccin. Que la mayora de catalizadores inorgnicos. Por otra parte, las enzimas muestran mucha mayor especificidad. Un catalizador inorgnico suele actuar acelerando reacciones qumicas muy diversas, mientras que una enzima slo cataliza una reaccin qumica determinada. Las sustancias sobre las cuales actan las enzimas reciben el nombre genrico de sustratos Desarrollo. Nomenclatura Antiguamente las enzimas fueron nombradas atendiendo al substrato sobre el que actuaban, aadindole el sufijo asa o haciendo referencia a la reaccin catalizada. As tenemos que la ureasa, cataliza la hidrlisis de la urea; la amilasa, la hidrlisis del almidn; la lipasa, la hidrlisis de lpidos; la ADNasa, la hidrlisis del ADN; la ATPasa, la hidrlisis del ATP, etc. Clasificacin de las enzimas Grupo Accin Catalizan reacciones de oxidorreduccin. Tras la accin catlica quedan modificados en su grado de oxidacin por lo que debe ser transformado antes de volver a actuar de nuevo. ejemplos Dehidrogenasas Aminooxidasa Deaminasas Catalasas

1. Oxidoreductasas

2. Transferasas

Transfieren grupos activos (obtenidos Transaldolasas de la ruptura de ciertas molculas)a otras sustancias receptoras. Suelen Transcetolasas actuar en procesos de interconversiones de azucares, de Transaminasas 1

aminocidos, etc Glucosidasas Verifican reacciones de hidrlisis con Lipasas la consiguiente obtencin de monmeros a partir de polmeros. Peptidasas Suele ser de tipo digestivo, por lo que normalmente actan en primer lugar Esterasas Fosfatasas Isomerasas de azcar

3. Hidrolasas

4. Isomerasas

5. Liasas

6. Ligasas

Actan sobre determinadas molculas obteniendo de ellas sus ismeros de Epimerasas funcin o de posicin. Suelen actuar en procesos de interconversion Mutasas Realizan la degradacin o sntesis (entonces se llaman sintetasas) de los Aldolasas enlaces denominados fuertes sin ir acoplados a sustancias de alto valor Decarboxilasas energtico. Realizan la degradacin o sntesis de Carboxilasas los enlaces fuertes mediante el acoplamiento a sustancias ricas en Peptidosintetasas energa como los nucleosidos del ATP

Propiedades de las Enzimas Por ser catalizadores: Eficientes en pequeas cantidades. No se modifican durante la reaccin. No afectan el equilibrio de la reaccin. Por ser catalizadores biolgicos: Composicin qumica especfica: son protenas con estructura terciaria y cuaternaria. Componentes del citoplasma vivo y sintetizado en el mismo. Especficas: para cada reaccin hay una enzima determinada. Sujetas a regulacin: estn reguladas en cantidad y funcin. Naturaleza qumica de las enzimas Hasta hace pocos aos estaba firmemente arraigado el concepto de que todas las enzimas eran protenas. Sin embargo, se han aislado molculas de cido ribonucleico (ARN) con actividad cataltica. Las tcnicas han permitido conocer con toda exactitud la estructura molecular de numerosas enzimas. Este tipo de conocimiento ha empezado a conocer su funcin. Algunas enzimas son protenas simples, constituidas slo por aminocidos. Muchas enzimas estn formadas por asociaciones de varias subunidades o cadenas polipeptdicas, es decir, son oligmeros. 2

Hay enzimas que slo pueden realizar su funcin cataltica en asociacin con otra molcula no proteica, de tamao relativamente pequeo, a la cual se la denomina coenzima. La coenzima puede estar firmemente unida de enlace fuerte, formando un complejo que no se separa fcilmente. Es este caso, algunos prefieren hablar de grupo prosttico y reservar el nombre de coenzima para aquellas que se asocian ms laxamente a la protena y pueden ser separadas se sta por simple dilisis. Las dos porciones, protenicas y no protenicas, son indispensables para la actividad de la enzima. El sistema completo se llama holoenzima y est constituido por la protena, a la cual se designa apoenzima (macromolcula termolbil, no dializable) y la coenzima (molcula no protenica, termoestable, tamao relativamente pequeo). HOLOENZIMA = APOENZIMA + COENZIMA Enzima total Protena Termolbil No protena No dializa Termoestable Las coenzimas intervienen activamente en la reaccin experimentando cambios que compensan las transformaciones sufridas por el sustrato. Por ejemplo, las coenzimas de xidoreductasa. Por otra parte, las coenzimas estn relacionadas con las vitaminas, compuesto que el organismo no puede sintetizar y que deben ser aportados por la alimentacin. Las vitaminas pertenecientes al grupo B forman parte de la estructura de coenzimas. Esta participacin en un proceso enzimtico otorga a las vitaminas su importancia fisiolgica. La siguiente tabla presenta una lista de coenzimas importantes e indica la vitamina que participa en la constitucin de cada una. Nombre Pirofosfato de tiamina Fosfato de piridoxal Biotina Flavn adenn mononucletido (FMN) Flavn adenn dinucletido (FAD) Nicotinamida adenn dinucletido (NAD) Nicotinamida adenn dinucletidofosfato (NADP) Coenzima A cido tetrahidroflico Coenzima B12 Vitamina correspondiente Tiamina Piridoxina Biotina Riboflavina Riboflavina Nicotinamida Nicotinamida cido pantotnico cido flico Vitamina B12

Si bien siempre participa en un determinado tipo de reaccin, una coenzima puede unirse a distintas apoenzimas y actuar frente a diferentes sustratos. No es la coenzima, sino la porcin protenica o apoenzima la que capacidad de reconocer con precisin al sustrato y dar especificidad a la holoenzima. Metaloenzima En algunas enzimas la presencia de iones metlicos en la molcula es indispensable para la accin cataltica. En todas las metaloenzimas lleva a la prdida de la actividad enzimtica. Ejemplos: 3

Fe. La catalasa, las peroxidasa y los citocromos son hemoprotenas en las cuales el hierro es esencial para su actividad. Ca. Muchas enzimas requieren ion Ca2+ o son activadas por su presencia. Cu. La tirosinasa, el cido oxidasa, la citocromooxidasa (que posee adems Fe) requieren cobre. Por otra parte, sealamos aqu el hecho de que existen enzimas que requieren la presencia de ciertos iones en el medio para ctuar. Cationes como el Na+ y el K+ son necesarios para la actividad de algunas enzimas. Entre los iones no metlicos, el Cl es requerido por la amilasa. Caractersticas de la accin enzimtica La caracterstica ms sobresaliente de los enzimas es su elevada especificidad. Esta es doble y explica que no se formen subproductos: Especificidad de sustrato. El sustrato (S) es la molcula sobre la que el enzima ejerce su accin cataltica. Especificidad de accin. Cada reaccin est catalizada por un enzima especfico. La accin enzimtica se caracteriza por la formacin de un complejo que representa el estado de transicin. E + S ES E + P Enzima Sustrato Complejo Enzima Producto EnzimaSustrato El sustrato se une al enzima a travs de numerosas interacciones dbiles como son: puentes de hidrgeno, electrostticos, hidrfobos, etc., en un lugar especfico, el centro activo. Este centro es una pequea porcin del enzima, constituido por una serie de aminocidos que interaccionan con el sustrato. Sitio activo Para formar el complejo ES el sustrato se fija a un lugar definido por la molcula de enzima. Esta regin de la molcula ha recibido las denominaciones de sitio activo, es el responsable de la accin cataltica. En general, se acepta que el lugar de sustrato posee sitios de unin, se dispone en el sitio cataltico. Para que esta unin y la accin catalizadora tengan lugar, es indispensable una conformacin tridimensional altamente especfica a nivel del sitio activo, con la presencia de grupos funcionales definidos, aportados por las cadenas laterales de restos aminocidos. Con frecuencia, los restos que aparecen como esenciales para la accin cataltica poseen cadenas laterales reactivas como la cisterna, lisina, arginina. El sitio activo es una agrupacin de un nmero no muy grande de aminocidos, ordenados espacialmente; para que su conformacin se mantenga con la disposicin adecuada es necesaria la contribucin de la estructura (primaria, secundaria, terciaria y cuaternaria) de la protena. Hay siempre una gran diferencia de tamao entre la molcula de la enzima y la del sustrato. Aun cuando el sustrato sea una macromolcula, la zona de sta que experimenta la accin de la enzima es un segmento pequeo. El sitio activo es una porcin reducida de la molcula, est colabora en mantenerlo en la disposicin adecuada. 4

La coenzima tambin participa en asegurar la conformacin ptica. Se une a la enzima en un lugar a ella destinado, generalmente prximo al sitio activo y a veces forma parte del lugar del sustrato. A fines del siglo pasado, E Fischer emiti la hiptesis en la cual homologaba la unin del sustrato a la enzima con el encaje recproco de la llave y la cerradura. Actualmente tiene ms aceptacin la hiptesis de Koshland de la adaptacin o ajuste inducido, que consiste a la enzima como una estructura dotada de plasticidad y flexibilidad. Slo el sustrato adecuado provoca en la enzima la disposicin precisa de cadenas laterales necesarias para la catlisis. Cuando el sustrato se une a la enzima, induce cambios conformacionales en la molcula de sta, que recin entonces acomoda los grupos funcionales crticos para asegurar la ubicacin ms efectiva.

Enzimas intracelulares Otras enzimas actan en el interior de las clulas, transformando los nutrientes que les llegan a travs de la sangre en otras sustancias, como el cido oxalactico o el pirvico, que forman parte del metabolismo celular. Las enzimas intracelulares tambin son los responsables de los procesos de degradacin celular. En estos procesos se obtienen nutrientes elementales a partir de los materiales estructurales propios de las clulas cuando el aporte mediante la dieta se interrumpe (por ejemplo, durante el ayuno), o cuando la clula no puede 5

utilizar los nutrientes de la sangre (por ejemplo, en la diabetes). Enzimas y PH Las enzimas poseen un PH caracterstico donde su actividad es mxima: por encima o debajo de ese PH la actividad disminuye. La relacin PH actividad enzimtica, constituye un factor de regulacin intracelular de la actividad enzimtica.

Temperatura y Enzimas La velocidad de las reacciones enzimticas aumenta por lo general con la temperatura, dentro del intervalo en que la enzima es estable y activa. La velocidad por lo general se duplica por cada 10 C de aumento de temperatura. Sin embargo las enzimas se desnaturalizan cuando la elevacin de la temperatura sobrepasa cierta temperatura lmite. La cual a su vez es la temperatura ptima de trabajo. A bajas temperatura, las reacciones disminuyen mucho o se detienen, pero la accin cataltica reaparece cuando la temperatura se eleva a valores normales. Inhibidores enzimticos. Existen agentes qumicos inhibidores. Algunos de ellos ejercen su accin unindose a sitios o grupos funcionales de la molcula de la enzima. Los inhibidores pueden ser reversibles o irreversibles. Inhibidores irreversibles: toda sustancia que produzca un cambio permanente en la molcula de enzima, que resulte en un deterioro definitivo de su capacidad cataltica, se considera un inhibidor irreversible. Como ejemplo de este tipo de inhibidores citaremos los venenos rganofosforado, muy utilizados como insecticidas. Inhibidores reversibles: la inhibicin reversible puede ser de tres tipos: competitiva, no competitiva y anticompetitiva. Inhibidores competitivos: actan aumentando el valor de la constante de Michaelis (Km) pero no modifican la velocidad mxima de la enzima. Una caracterstica de este inhibidor est dad por el hecho de que puede ser revertida aumentando la concentracin de sustrato. Si ste predomina en la mezcla, tiende a desplazar al inhibidor de su unin con la enzima. Adems estos han encontrado aplicacin farmacolgica. Inhibidores no competitivos: son compuestos que se unen a la enzima en un lugar de la molcula diferente del sitio activo y provocan una disminucin de la velocidad mxima sin modificar la constante de Km. 6

Este tipo de inhibicin no puede ser revertida por aumento de la concentracin de sustrato. Pertenecen a esta categora ciertos reactivos e iones metlicos como el Cu2+ , Hg2+ y Ag+ . Inhibidores anticompetitivos: su accin se pone en manifiesto en la grafica de actividad en funcin de concentracin de sustrato determinada en presencia y ausencia de inhibidor. Este tipo de inhibicin se da en casos en los cuales participan varios sustratos en la reaccin. No puede ser revertida por aumento de la concentracin de sustrato. Regulacin de la actividad enzimtica. Existen varios mecanismos que permiten la regulacin. La actividad de la enzima guarda proporcionalidad con los niveles de sustrato. Estos determinan la mayor o menor velocidad en la actividad enzimtica. Al aumentar la concentracin de sustrato, en la clula se acelera su utilizacin y viceversa. Las transformaciones que sufre un determinado compuesto en el organismo se producen generalmente a travs de una serie de etapas, cada una de ellas catalizada por una enzima distinta. En cada paso se forma un nuevo producto que ser utilizado como sustrato por la enzima de La etapa siguiente. Estas secuencias de reacciones son denominadas vas metablicas y en casi todas ellas existe una o ms enzimas. Es comn que en una va metablica la enzima que cataliza la primera etapa sea reguladora. Las restantes enzimas de la serie ajustarn su actividad a la disponibilidad de sustrato fijada a partir de la primera reaccin. De acuerdo con el tipo de seal a la cual responden, las enzimas reguladoras pueden distinguirse en enzimas alostricas y enzimas reguladas por unin covalente. Enzimas alostricas: en algunas vas metablicas, la enzima que cataliza la primera etapa de la serie suele ser inhibida por el producto de la ltima. Cuando la concentracin de ese producto final aumenta, ello indica que su elaboracin excede las necesidades y se frena el funcionamiento de la va reduciendo la actividad de la enzima reguladora. Se habla de inhibicin retoalimentacin o retroregulacin. Tambin puede suceder que una enzima sea estimulada por algn agente que se acumula en el medio. Cuando existe un exceso de sustrato, l mismo promueve su utilizacin activando a al enzima. El agente modificador acta unindose a la enzima en un lugar distinto al del sitio cataltico; de all el nombre de alostrica que se da este tipo de regulacin. En las enzimas alostricas, adems del sitio cataltico, existen otros sitios reguladores a los cuales se unen especficamente las molculas que pueden ejercer accin sobre su actividad cataltica. Ya sean inhibidores o activadores, los agentes que se fijan al sitio alostrico recin el nombre de moduladores, modificadores o efectores alostricos. Sern positivos si estimulan y negativos si deprimen la actividad de la enzima. Las enzimas alostricas, al igual que la hemoglobina., estn constituidos por varias subunidades poliptdicas entre las cuales existe algn tipo de comunicacin, que hace que cuando un modulador se une a una de ellas produzca un cambio conformacional; ste se transmite a las otras subunidades modificando la aptitud de su sitio activo para recibir el sustrato. 7

Modificacin covalente: hay enzimas reguladoras por agregado por agregado o sustraccin de grupos unidos covalentemente. La regulacin covalente se realiza en varias enzimas por un proceso de unin o eliminacin de fosfato. Existen tambin enzimas cuya actividad es modulada por la insercin covalente de otros grupos. Isozimas. Son enzimas que difieren en su forma estructural pero que poseen la misma actividad cataltica, catalizan la misma reaccin