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QUANTIFICAO DE DNA
20/12/2012 10:19:00

A quantificao do DNA aps a sua extrao importante para o aperfeioamento da qualidade do produto de DNA resultante da PCR (Internacional Society for Forensic Haemogenetics, 1992). O excesso de DNA em uma amostra de PCR poder saturar a reao, fazendo com que aparea artefatos de tcnica e amplificaes inespecficas que podem dificultar a sua anlise. J o sua falta, poder acarretar na perda de um dos alelos, quando o indivduo heterozigoto, ou mesmo na no amplificao dos mesmos (Butler, 2005). A qualidade e quantidade de DNA devem ser examinadas aps a extrao, alm de verificar a possibilidade de degradao (JUNG et al, 1991; HOFF-OLSEN et al, 1999). O DNA pode ser quantificado por espectrofotometria em espectrofotmetro a 260 nm, sua pureza pela relao 260/280 nm e a sua integridade pode ser avaliada em gis de agarose. No entanto, esses mtodos avaliam a quantidade geral de DNA, seja ele humano ou de outro tipo. Quando se refere s amostras utilizadas em investigao criminal ou passveis de degradao e contaminao, recomenda-se a utilizao da quantificao de DNA de humano (INTERNACIONAL SOCIETY FOR FORENSIC HAEMOGENETICS - ISFH, 1992). Essa quantificao pode ser realizada por hibridizao de uma sonda utilizando-se um determinado lcus (D17Z1) em uma amostra de DNA imobilizada em uma membrana de nilon dot blot (WALSH et al., 1992; ANDERSEN, 1998), e por kits comerciais como, por exemplo, o AluQuant human DNA quantitation system (WAYE et al, 1989; HOFF-OLSEN et al, 1999; MANDREKAR et al., 2001; SCHNEIDER et al, 2004; BUTLER, 2005). Apesar de essas tcnicas serem mais complexas e caras que a espectrofotometria, elas quantificam somente o DNA humano, pois possuem sondas especficas para o mesmo. Tal caracterstica pode ser imprescindvel em casos forenses que haja a possibilidade de contaminao de DNA externo. No entanto, muitas vezes no utilizada, pois h a necessidade de 5 a 10L de produto de DNA, o que muitas vezes no obtido. Uma metodologia que est substituindo as outras tcnicas de quantificao por utilizar pouca quantidade de DNA, ser especfico para DNA e inclusive possibilitando verificar a presena de inibidores da enzima polimerase a quantificao de DNA por PCR em tempo real. Principalmente em casos forenses que existe nfima quantidade de DNA, est sendo altamente recomendada. Consiste no emprego de marcadores especficos marcados com fluorescncia que so utilizados para a amplificao de regies do genoma humano. No entanto, para fins didticos, ser explicado aps a explicao da reao em cadeia pela polimerase (PCR), pois envolve a amplificao do DNA. A amostra biolgica sendo preservada adequadamente e realizada em condies timas de extrao e quantificao, obtm-se quantidades maiores ou menores de DNA. Autor: Colunista Portal - Educao

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