UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA

LABORATORIO DE HEMATOLOGA

PRCTICA No. 8. RECUENTO DE PLAQUETAS

Alumnos:

Baez Ramrez Oliveria Araceli Castellanos Garca Silvia Berenice Fln Ayala Aline Esther Gonzlez Cabrera Julio Csar

Grupo: 2804 Equipo: 5 PROFESOR: Guillermo Gutirrez Espndola

FEBRERO DEL 2014

INTRODUCCIN Las plaquetas o trombocitos son fragmentos citoplasmticos pequeos, irregulares y carentes de ncleo, de 23 m de dimetro, derivadas de la fragmentacin de los megacariocitos. La vida media de una plaqueta es de 8-12 das, y es el elemento forme ms pequeo de la sangre. Actan en la hemostasis, en el mantenimiento de la
integridad vascular, participan en el proceso de la coagulacin sangunea y son una fuente de factores de crecimiento. Las plaquetas se producen en la trombopoyesis en la mdula sea, y la produccin de megacariocitos y plaquetas est regulada por la trombopoyetina. Las plaquetas son destruidas por fagocitosis en el bazo, y por las clulas de Kupffer en el hgado. Entre los medicamentos que disminuyen el conteo de plaquetas estn: medicamentos quimioteraputicos, cloranfenicol, colchicina, agentes bloqueadores H2, heparina, hidralazina, indometacina, isoniazida, quinidina, estreptomicina, sulfamidas, diurticos tiazidicos, tolbutamida, etc. Un nmero de plaquetas por debajo de lo normal (trombocitopenia 100,000 plaquetas/mm ) puede deberse a: quimioterapia, ciertos medicamentos, coagulacin intravascular diseminada, anemia hemoltica, hiperesplenismo, prpura trombocitopnica idioptica, leucemia, transfusin de gran cantidad de sangre, vlvula cardaca protsica, prpura trombocitopnica trombtica, celiaqua, deficiencia de vitamina k. Si el nmero de plaquetas es demasiado bajo, puede ocasionar una hemorragia excesiva. Un nmero de plaquetas ms alto de lo normal (trombocitosis 1,000,000 plaquetas/mm ) puede deberse a: anemia, leucemia mieloctica crnica, policitemia vera, trombocitemia primaria o extirpacin reciente del bazo. Si el nmero de plaquetas es demasiado alto pueden formarse cogulos sanguneos y ocasionar trombosis, los cuales pueden obstruir los vasos sanguneos y ocasionar un accidente cerebro vascular, infarto agudo de miocardio, embolismo pulmonar y el bloqueo de vasos sanguneos en cualquier otra parte del cuerpo, como en las extremidades superiores e inferiores. Las plaquetas liberan el factor de crecimiento derivado de plaquetas, un potente agente quimiotctico, y el factor de crecimiento transformante beta, el cual estimula el depsito de matriz extracelular. Estos 2 factores son importantes en la regeneracin y reparacin del tejido conectivo. Otros factores de crecimiento producidos por las plaquetas y asociados a los procesos curativos incluyen: factor de crecimiento bsico del fibroblasto, factor de crecimiento-1 asociado a la insulina, factor de crecimiento del epitelio, factor de crecimiento del hepatocito, y el factor de crecimiento del endotelio vascular. ACTIVACIN DE LAS PLAQUETAS. Las clulas endoteliales de los vasos sanguneos actan inhibiendo la activacin plaquetaria por la produccin de monxido de nitrgeno, ADPasa endotelial, y PGI2. Las clulas endoteliales producen el factor de Von Willebrand (FVW), el cual ayuda a las clulas endoteliales a adherir el colgeno a la membrana basal. El FVW es almacenado en grnulos dentro de las clulas endoteliales y las plaquetas. Cuando las plaquetas hacen contacto con el colgeno o el FVW, son activadas; estas son activadas tambin por la trombina o por una superficie cargada negativamente (como el vidrio). La activacin plaquetaria posterior resulta en el transporte de fosfolpidos cargados a la superficie plaquetaria. Las plaquetas activadas cambian su forma hacindose ms esfricas y formando pseudpodos. SECRECIN DE GRNULOS. Las plaquetas activadas excretan el contenido de sus grnulos dentro de sus sistemas canalculares y en la sangre circundante. Hay 2 tipos de grnulos: Grnulos densos: contienen ADP o ATP, calcio y serotonina. Grnulos alfa: contienen factor 4 plaquetario, factor de crecimiento transformante beta 1, factor de crecimiento derivado de plaquetas, fibronectina, B-tromboglobulina, FVW, fibringeno y factores V y XIII.
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SNTESIS DE TROMBOXANO A2. La activacin plaquetaria inicia la va del cido araquidnico para producir tromboxano A2 que est involucrado en la activacin de otras plaquetas. ADHESIN Y AGREGACIN. Las plaquetas activadas se adherirn, va glicoprotena Ia, al colgeno expuesto por el dao epitelial. La agregacin y adhesin actan juntos para formar el tapn plaquetario. Los filamentos de miosina y actina, en las plaquetas, se contraen durante la agregacin reforzando ms el tapn. La agregacin plaquetaria es estimulada por el ADP, tromboxano y la activacin del receptor 2, pero inhibida por las prostaglandinas PGI2 y PGD2.

REPARACIN DE HERIDAS. La agregacin plaquetaria ayuda a la reparacin del vaso mediante la secrecin de qumicos que promueven la invasin de fibroblastos del tejido conectivo adyacente hacia el interior de la herida para formar una costra. El cogulo obturador es disuelto por la plasmina, y las plaquetas son eliminadas por fagocitosis. Por otra parte, hay 2 mtodos para cuantificar las plaquetas. Las tcnicas del mtodo indirecto son la de Kees-Echer, el del hemocitmetro, el mtodo Unopette, el mtodo de microscopio de contraste de fases y el mtodo de recuento electrnico (contador Coulter). El mtodo indirecto es la cuenta diferencial leucocitaria por extensin sangunea, y se efecta el recuento de plaquetas hasta que se han contado por lo menos 1000 eritrocitos.

MATERIAL

Pipeta de Thoma Boquilla Tubo con Citrato de Sodio Aguja Torundas de algodn Ligadura Agitador para pipetas de Thoma Caja petri Algodn o papel filtro

EQUIPO Microscopio Hemocitmetro

REACTIVOS Oxalato de amonio al 1%.

METODOLOGA 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. Se recolectaron 5 ml de sangre venosa con anticoagulante en un tubo al vaco. Se homogeniz perfectamente bien la sangre haciendo girar el tubo circularmente. Se aspirar con cuidado la sangre hasta la marca de 1 de la pipeta de Thoma. Se sec la parte exterior de la punta de la pipeta con una gasa para retirar la sangre adherida, y luego se aspira el oxalato de amonio para llenar la pipeta hasta la marca de 101. Obteniendo una dilucin de 1:100. Se mezcl por 15 min el contenido en un agitador mecnico para pipetas Se desecharon las primeras gotas de la pipeta, puesto que contiene solamente lquido diluyente y luego se carg la cmara de recuento procediendo como para el recuento de eritrocitos. La cmara llena se dej sedimentar de 15 a 20 min en una caja Petri cuyo fondo tenga papel filtro o algodn hmedo para prevenir la evaporacin. Pasado dicho tiempo se coloc la cmara fuera de la caja por 10 min, para ponerla despus en la platina del microscopio y localizar el cuadro E con el objetivo de 10x. Las plaquetas se contaron en 10 cuadros terciarios. Si el nmero total de plaquetas contadas es menor a 100, se cuentan ms cuadros terciarios hasta registrar por lo menos 100 plaquetas; 10 cuadros o todos los 25 cuadros terciarios del cuadro E, si es necesario. Si el nmero total en los 25 cuadros terciarios es menor de 50, el recuento debe repetirse con diluciones de sangre de 1:20. El conteo se realiz con el objetivo de 40x. Las plaquetas tienen un aspecto redondeado u oval y presentan prolongaciones dendrticas. Su estructura interna granular y una cubierta de color purpreo permiten distinguir las plaquetas de los restos celulares que son a menudo refractarios. En ocasiones se observan restos de eritrocitos lisados por el oxalato de amonio. Tambin pueden contarse los leucocitos, pues el lquido de dilucin no les afecta.

10.

RESULTADOS

TABLA 1. Resultados del recuento de plaquetas por equipo y sexo. 3 EQUIPO SEXO No. de plaquetas/mm 1 H 370,000 2 M 1,425,000 3 H 1,515,000 4 M 292,500 5 M 1,197,500 6 H 442,500 M = mujer, H = hombre CLCULOS No. de plaquetas/mm = ND/V =2500 N
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Donde: N = No. de plaquetas contadas. D =dilucin de la muestra = 100 2 V = volumen = 10 (0.2 mm) 0.1 mm donde: 10 = No. de cuadros contados. 2 (0.2) = rea de cada cuadro terciario. 0.1 = altura de la cmara. *El factor 2500 variar si cambia el rea contada, la profundidad de la cmara y la dilucin. REFERENCIA PARA EL MTODO DIRECTO: 140,000-440,000 plaquetas/mm
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DISCUSIN El recuento de plaquetas de los hombres y mujeres de los equipos 2, 3, y 5 excedi el lmite superior de referencia (440,000 plaquetas/mm3), tal vez porque se sobreestim el conteo de las mismas o porque presentaban una trombocitosis (en el caso de los pacientes de los equipos 2, 3 y 5). En el caso del paciente del equipo 6 se excedi ligeramente (442,500 plaquetas/mm 3) el lmite superior de referencia, por lo que se descarta una trombocitosis (1, 000,000 plaquetas/mm3). El hombre y la mujer de los equipos 1 y 4 presentaron un recuento normal (370,000 y 292,500 plaquetas/mm 3).
Cabe mencionar que las plaquetas son difciles de contar debido a que son pequeas y deben distinguirse de los restos y desperdicios celulares. Otra fuente de dificultad reside en su tendencia de adherirse al cristal, a cualquier cuerpo extrao y en particular unas a otras. Adems las plaquetas no estn uniformemente repartidas en la sangre. En este mtodo se debe mezclar rpidamente la sangre en la pipeta eritroctica, para evitar la aglutinacin de las plaquetas.

CONCLUSIONES El recuento de plaquetas de los pacientes de los equipos 2, 3, 5 y 6 excedi el lmite superior de referencia, y los pacientes de los equipos 1 y 4 presentaron un recuento normal.

Se cumpli con el objetivo de la prctica al poder realizar de manera correcta los dos mtodos manuales por los que se realiza un conteo de plaquetas en sangre. El mtodo es rpido y practico, aunque se debe contar con la experiencia para poder identificar estos pequeos elementos de la sangre, que son de gran importancia en la preservacin de la hemostasia.

BIBLIOGRAFIA I. II. Rodak B. F. Hematologa: fundamentos y aplicaciones clnicas. Editorial mdica panamericana. 2005. Universidad Nacional Autnoma de Mxico. Facultad de Estudios Superiores Zaragoza. Manual de prcticas para el laboratorio de anlisis bioqumico clnico I de la carrera de qumico farmacutico bilogo. 8 semestre. Hematologa. 2011. Vlez A. H., Rojas M. W., Borrero R. J. y Restrepo M. J. Fundamentos de medicina. Hematologa. 6 edicin. Corporacin para investigaciones biolgicas. 2004.

III.