Biologia e Geologia 1o Ano.

Ficha Informativa n__

Muitos dos progressos nos vrios domnios da cincia, nomeadamente na citologia, devem-se a um instrumento de pesquisa o microscpio. Este aparelho produz uma imagem ampliada e de grande preciso do objecto em estudo. 1. CONSTITUIO E FUNCIONAMENTO DO MICROSCPIO PTICO COMPOSTO O microscpio ptico composto (MOC) constitudo por uma parte ptica e uma parte mecnica. Conforme consta na tabela, a parte ptica constituda por dois sistemas: o sistema de iluminao e o sistema de ampliao. Na tabela encontram-se tambm os constituintes da parte mecnica do microscpio e respectiva funo.
Figura 1 Diversos constituintes do MOC.

CONSTITUINTES Lmpada ou Espelho Sistema de Iluminao

FUNO Ilumina o campo do microscpio

PARTICULARIDADES Lmpada incorporada de microscpios mais modernos tungstnio

Espelho de duas faces: plana luz natural; cncava luz artificial Condensador Concentra os raios omitidos pela fonte luminosa, fazendo-os incidir na preparao (Fig. 1A). Regula a intensidade do campo visual do microscpio (Fig. 1B). Sistema de lentes que ampliam a imagem do objecto a ser observado.Cada objectiva constituda por vrias lentes lente frontal, que fica mais prxima da platina, e lentes correctpras, que corrigem aspectos como curvatura de campo, etc. (Fig. 1C). Sistema de lentes que ampliam a imagem fornecida pela objectiva, situado na parte superior do tubo (Fig. 1D). Sistema de duas ou trs lentes.

Diafragma

Existe associado ao condensador constitudo por vrias palhetas. Tipos de objectivas:

Objectivas PARTE PTICA

A seco designao que advm do facto de existir uma camada de ar entre a lente frontal da objectiva e a preparao; De imerso a lente frontal fica imersa num leo, geralmente de cedro, com um ndice de refraco semelhante ao do vidro. As oculares so especificadas por: - Letra que indica o tipo; - Ampliao; - Dimetro do campo de viso; Por exemplo: P10x 13,4 uma Plan-acromtica (P) compoder ampliador de 10x e nmero de campo 13,4.

Sistema de ampliao

Oculares

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CONSTITUINTES P ou base Brao ou coluna

FUNO Suporte do microscpio. Pea fixa base, suporte outras partes do microscpio. Pea, paralela base, onde se coloca a preparao. No centro apresenta uma abertura a janela da platina por onde passam os raios de luz (Fig. 1E) Pea que possui na extremidade inferior o revlver e na superior a ocular. Pea giratria que suporte as objectivas. Possibilita movimentos verticais de grande amplitude. Possibilita movimentos verticais de pequena amplitude.

PARTICULARIDADES Apresenta formas diversas.

Platina

Pode ser fixa e apresentar duas pinas que fixam a preparao. Por vezes so mveis, deslocando-se pela aco de um conjunto de parafusos.

PARTE MECNICA

Tubo ou canho

Revlver Parafuso macromtrico Parafuso micromtrico

Permite a seleco rpida das objectivas.

Permite uma focagem rpida. Permite optimizar a focagem. Permite observar o material em diferentes planos e determinar a profundidade de campo.

1.1. IDENTIFICAO DAS OBJECTIVAS No corpo da objectiva costumam vir marcados: Ampliao; Abertura numrica; Comprimento do tubo (distncia entre rosca da objectiva e a entrada para ocular); Espessura de lamela recomendada; Cdigo especificando o tipo (I de imerso). Por exemplo: a marcao 40/0,25 k; 160/0,17 diz respeito a: Uma objectiva com um poder ampliador de 40x; Abertura numrica de 0,25; Comprimento do tubo de 160 mm e espessura da lamela de 0,17 mm. 1.2. ILUMINAO E FOCAGEM Para procederes a uma correcta iluminao do microscpio deves ter em conta que a luz deve atravessar a preparao. O ajuste correcto da iluminao aquele em que: O campo visual est uniforme e completamente iluminado; O ngulo de entrada na objectiva est iluminado (Fig.4). Para se obter esse ajuste deve seguir-se um conjunto de procedimentos como: 1 verificar se toda a componente ptica est devidamente limpa;
Figura 4 transmisso. Iluminao por Figura 3 ampliaes. Objectivas com diferentes

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Figura 2 Representao em corte de uma objectiva.

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2 confirmar se a objectiva de menor ampliao est no prolongamento do tubo; 3 abrir o diafragma e ligar a fonte de luz; 4 visualizar o campo do microscpio, que deve estar uniformemente iluminado. Aps este conjunto de operaes poder-se- procurar obter uma primeira visualizao do objecto, sendo necessrio proceder focagem. Para tal deve-se: 1 colocar a preparao na platina e, aps estar centrada na janela, prend-la com as pinas; 2 rodar o condensador para que fique ajustado janela da platina; 3 mover lentamente o parafuso macromtrico, para que a platina se aproxime da objectiva. Deves colocar-te numa posio lateral, relativamente ao microscpio para controlares estes movimentos; 4 verificar se o cone de luz da iluminao preenche somente o cone de entrada da objectiva. 5 observando atravs da ocular, afastar lentamente a platina at obter a primeira imagem; 6 com o auxlio do parafuso micromtrico, corrigir a focagem at se obter uma imagem ntida; 7 regular a abertura do diafragma, iluminando o campo do microscpio de acordo com o material que se est a observar. Se necessrio pode descer-se um pouco o condensador. 1.3. AMPLIAO E PODER DE RESOLUO DO MICROSCPIO PTICO O microscpio tem como principal funo o fornecimento de uma imagem ampliada do objecto em estudo, permitindo a visualizao de pormenores que no eram passveis de observao a olho nu. Em microscopia ptica o valor total da ampliao de uma imagem dado pela frmula seguinte:

Ampliao total = Ampliao ocular x Ampliao objectiva

No entanto, pode-se considerar como caractersticas mais importantes que o poder ampliador de um microscpio, o poder de definio (que permite a formao de imagens com contornos bem definidos) e o poder de resoluo, que traduzido pela capacidade de se distinguir dois pontos que se encontrem muito prximos. Como se pode observar na figura 5, se ampliarmos uma imagem de 10x para 45x para 100x, a imagem de facto surge maior, mas no necessariamente mais ntida. Mas, se medida que se aumenta o poder ampliador de um sistema ptico, se aumentar o poder de resoluo, a imagem surge com uma informao cada vez mais pormenorizada. A razo para esta dicotomia entre ampliao e resoluo relaciona-se com o limite de resoluo do olho humano, que aproximadamente de 0,1 mm. Ou seja, para que dois objectos sejam visualizados separadamente tm que se encontrar separados por uma distncia de 0,1 mm. Se a distncia que os separa for menor, ns vamos observ-los como se fossem um nico objecto. Como a maioria das clulas apresenta um dimetro inferior a 0,1 mm, surge a necessidade de recorrer ao microscpio para as observar. O limite de resoluo do microscpio ptico composto de 0,2 m. 1.4. CARACTERSTICAS DA IMAGEM EM MICROSCOPIA PTICA

Figura 5 Poder de ampliao versus poder de resoluo em microscopia ptica.

Sistema objectivo a objectiva fornece uma imagem real, ampliada (o nmero de vezes indicado), simtrica e invertida.

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Como j foi referido, o microscpio ptico composto fornece imagens ampliadas dos objectos. Esta ampliao obtida atravs da conjugao do poder ampliador do sistema objectivo e do sistema ocular (Fig.6).

Sistema ocular a ocular fornece uma imagem ampliada (o nmero de vezes indicado) relativamente imagem fornecida pela objectiva, direita e virtual (porque se forma atrs da lente ocular). Pode-se concluir que a imagem que o observador recebe, relativamente ao objecto, : - uma imagem ampliada (primeiro pela objectiva e depois pela ocular); - simtrica e invertida; - virtual. Dado que a imagem invertida, deve-se movimentar sempre a preparao microscpica no sentido contrrio quele em que desejamos movimentar a imagem.

Figura 6 A imagem fornecida pela objectiva ampliada, simtrica e invertida.

1.5. DIMETRO DE CAMPO DO MICROSCPIO PTICO Na utilizao do microscpio ptico fundamental relacionar o dimetro da superfcie observada com a ampliao utilizada. Pode-se relacionar essas duas variveis atravs da frmula seguinte:

a2/a1 = d1/d2
a1 poder ampliador da objectiva de menor aumento; a2 poder ampliador da objectiva de maior aumento; d1 dimetro do crculo observado com menor ampliao; d2 dimetro do crculo observado com maior ampliao.

Verifica-se assim que a rea da superfcie observada varia na razo inversa da ampliao utilizada. A execuo do trabalho experimental relativo determinao do dimetro de campo do microscpio ptico (Fig.7) permite concluir que se deve: 1. iniciar a observao microscpica utilizando a objectiva de menor ampliao, que permite captar uma ideia de conjunto e seleccionar a zona que interessa observar; 2. passar depois s objectivas de maior poder ampliador que apesar de reduzirem a rea observada, revelam pormenores que no so visveis em ampliaes menores.

1.6. PROFUNDIDADE DE CAMPO DO MICROSCPIO PTICO

Figura 7 Observao com ampliaes diferentes e os trs campos do microscpio em grandeza real.

importante que durante a observao microscpica se proceda a uma manobra constante do parafuso micromtrico, de modo a poderem visualizar-se nitidamente pormenores nos diferentes planos.

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A profundidade de campo do microscpio ptico muito reduzida, pelo que ao observar um objecto necessrio ter em conta que s se consegue observar nitidamente um plano de cada vez. Assim, os planos que se encontram acima e abaixo desse ficam desfocados. Quanto menor for o poder de ampliao da objectiva, maior a profundidade de campo.