Mtodo cromognico para la identificacin de Salmonella spp.

con el empleo del medio CromoCen SC

BioCen, cdigo 4226 El mtodo incluye una fase de identificacin presuntiva con el empleo del medio cromognico CromoCen SC para la deteccin, aislamiento, diferenciacin y/o recuento de Salmonella (excepto S. Typhi) y coliformes totales de otras bacterias Gram-negativas en muestras de heces fecales y otras muestras clnicas. Garantiza los resultados en 24-32 h y requiere la confirmacin adicional con las pruebas serolgicas. Tipos de muestras que pueden ser procesadas por este mtodo: coprocultivos, hemocultivos, o cualquier otro tipo de muestra donde se sospeche la presencia de los microorganismos diana. Resumen de la aplicacin El medio basa su funcionamiento en la combinacin de una reaccin cromognica para detectar la actividad -galactosidasa de los coliformes y una reaccin bioqumica de degradacin de fuentes de carbono por las Salmonella no pertenecientes al grupo Typhi y Paratyphi que produce una disminucin del pH, con el consiguiente cambio de color del indicador incluido en la formulacin. La combinacin de bases nutritivas utilizadas permite el crecimiento adecuado de los microorganismos de inters, en presencia de inhibidores para los microorganismos Gram-positivos. La utilizacin de un agente que proporciona opacidad, posibilita un mejor contraste de colores y mejor observacin de las respuestas. Procedimiento (Ver el esquema general del mtodo). La recogida y preparacin de las muestras de heces fecales se ejecuta segn los procedimientos establecidos para la toma, transportacin y recepcin. Utilizando los cultivos procedentes del Caldo Selenito recomendado para muestras de heces fecales o cultivos procedentes de otros medios de enriquecimiento, como el Caldo Rappaport- Vassiliadis (CRV), inocule con la ayuda del asa la superficie de la placa de medio CromoCen SC y del Agar S.S. (Modificado) (o en otro medio recomendado para la identificacin presuntiva de Salmonella Typhi y Paratyphi), sembrando por estriado (agotamiento del inculo) en las placas. Realice tantas rplicas como sean necesarias a partir de cada uno de los medios de enriquecimiento selectivo. Para obtener una respuesta presuntiva ms rpida, puede sembrar directamente con un asa la muestra sobre la superficie del medio CromoCen SC y en el medio Agar S.S. (Modificado). Incube las placas en posicin invertida a 35 2 C (CromoCen SC y Agar S.S. (Modificado)), agrpelas en no ms de 4 placas por columnas. Con posterioridad a la incubacin, examine las placas para determinar la presencia de colonias tpicas de Salmonella y las atpicas (sospechosas) que pudieran considerarse Salmonella. Para la confirmacin, tome una colonia considerada como tpica o sospechosa de cada placa de cada medio selectivo. De resultar el aislamiento negativo, seleccione otras 4 colonias sospechosas. Si una placa muestra menos de 5 colonias sospechosas, seleccione todas las tpicas para la confirmacin. Estre las colonias seleccionadas en la superficie del medio agar nutriente con la superficie previamente secada. Incube las placas por espacio de 24 3 h a 37 1 C. (Para el Caldo RappapotVassiliadis incube a 41,5 1 C durante 18-24 h). Utilice cultivos puros tanto para las pruebas bioqumicas, como para la serologa. En el caso de las colonias sospechosas en el medio CromoCen SC puede aplicar directamente las pruebas serolgicas, siempre y cuando la colonia est bien aislada. Interpretacin El crecimiento tpico de Salmonella (Typhimurium, Choleraesuis, Enteritidis, y otras, excepto S. Typhi y Paratyphi), se expresa como colonias de rosa fucsia con diferentes intensidades a rojas con el centro ms oscuro y bordes, generalmente, regulares. En el caso de los coliformes, excepto Klebsiella y Citrobacter, se presentan como colonias de coloracin azul-verdosa. Las colonias de Klebsiella y Citrobacter se observan de color violeta. Cuando se sospeche de la presencia de Pseudomonas en las muestras, por la presencia de colonias de color rosado a naranja, opacas, con bordes, generalmente irregulares, se proceder a diferenciarlas por su actividad citrocromo oxidasa (positiva). Las colonias incoloras o con pigmentacin propia corresponden a otras bacterias Gram-negativas. Los microorganismos Gram-positivos resultan inhibidos en el medio. En el caso de muestras en las cuales no sea detectado crecimiento de colonias sospechosas en el medio CromoCen SC, se proceder a ensayar las colonias sospechosas provenientes de otros medios de aislamiento segn los procedimientos tradicionales establecidos. De manera similar, se proceder a identificar las colonias que pudieran ser consideradas como atpicas en el medio CromoCen SC.

Aplicacin en muestras clnicas

Ventajas Ms rpido. La identificacin de Salmonella spp. y coliformes se realiza en un perodo mximo de 32 h. La deteccin directa y simultnea de varias actividades enzimticas en un mismo medio eleva la exactitud del anlisis. Esto permite la identificacin presuntiva directa y la confirmacin con las pruebas serolgicas sin la confirmacin bioqumica, cuyos resultados no presentan diferencia con la identificacin por los mtodos tradicionales. Posibilidad de realizar los ensayos de susceptibilidad antimicrobiana para los coliformes por el mtodo de difusin a partir de subcultivos de las colonias coloreadas en el medio, ya que stas estn constituidas por bacterias que retienen en su interior el cromforo insoluble procedente de sustrato derivado del indoxilo.

Ms fcil de utilizar. No necesita esterilizacin durante su preparacin. Disminucin de la carga de trabajo

asociada al procesamiento de los coprocultivos.

Ms preciso. Sus Sensibilidad y Especificidad diagnsticas son superiores a las de los medios convencionales
destinados al mismo propsito para todos los microorganismos de inters.

Ms confiable. El contraste de colores no permite confusin.

Composicin y preparacin de los medios de cultivo y reactivos 1. Medio CromoCen SC Composicin: Bases nutritivas-11,0 g; Mezcla cromognica- 5,4; Agar- 15,0 g. 1.1 Preparacin Adicione el suplemento lquido PLG (cd. 4261) a 1 L de agua destilada o desionizada. Mezcle bien. Suspenda 31,4 g del medio base y agite suavemente. Caliente hasta ebullicin repetidas veces, si fuera necesario, hasta la total fusin del agar. No caliente a temperaturas mayores de 100 C. Enfre hasta 45 C. No esterilizar en autoclave. 1.2 Preparacin de las placas del Medio CromoCen SC. Transfiera inmediatamente a un bao con temperatura de 44 a 47 C. Dispense el medio en placas, agitando suavemente para homogeneizar, y deje solidificar. Inmediatamente ante de su uso, seque las placas en posicin invertida en el horno a temperatura entre 35-55 C, por un tiempo suficiente hasta que la superficie del medio est seca. Almacenamiento del Medio CromoCen SC Mantener el frasco con el medio deshidratado hermticamente cerrado en lugar seco, fresco, protegido de la luz, a temperatura de 15 a 30 C Se podr almacenar las placas listas para el uso por un perodo de 30 das a temperatura de 2 a 8 C protegidas de la luz. Para mayor informacin dirigirse a: Departamento de ventas: Ing. Carlos Prendes, tel. 8-81-70-24, e-mail: prendes@biocen.cu Asistencia tcnica: DrC Raisa Zhurbenko, tel. 047-68-2441, e-mail: raisa@biocen.cu

Diagrama de flujo para la determinacin de Salmonella spp. en muestras clnicas Anlisis de heces fecales

Muestra

SC
24 h

S.S. mod.
24 h

Caldo Selenito, CRV

8h

Serologa

Kligler, LIA
Imagen Salm. 24-48 h

SC S.S. S.S.mod.
24 h

Urea, glicerol Serologa

3h

Sist. , ident.*
18-24 h

Serologa