UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA PLATA

ill Bacillus spp.

CTEDRA DE MICROBIOLOGA II CTEDRA DE MICROBIOLOGA II
FACULTAD CIENCIAS VETERINARIAS
Genero Bacillus Genero Bacillus
Gnero Bacillus: amplio y
heterogneo grupo de bacterias heterogneo grupo de bacterias
(ms de 80 especies).
La biodiversidad encontrada entre
ll h ll d h ellas ha llevado a que muchas se
agrupen en la actualidad
constituyendo otros gneros como
Brevibacillus, Geobacillus o ,
Paenibacillus.
CARACTERSTICAS DEL GNERO CARACTERSTICAS DEL GNERO
Bacilos productores de endosporas
Algunos mviles por flagelos pertricos
Con capacidad de elaborar cpsula
Gram positivos
Aerobios o anaerobios facultativos.
Capacidad de esporular:
*resistencia a factores ambientales adversos, resistencia a factores ambientales adversos,
*amplia distribucin en la naturaleza (suelo,
vegetales y agua).
Algunas especies intervienen en:
*procesos de degradacin de materia orgnica *procesos de degradacin de materia orgnica,
*elaboran compuestos con actividad
antimicrobiana y antimicrobiana y
*algunas pocas especies son agentes de
enfermedades en el hombre y en los animales
En el laboratorio se suelen aislar con frecuencia como
contaminantes de las muestras clnicas contaminantes de las muestras clnicas.
B. subtilis pueden ocasionar infecciones como
oportunista
B. cereus elabora enterotoxinas causantes de
enfermedad transmitida por los alimentos (ETA). enfermedad transmitida por los alimentos (ETA).
B. alvei (Paenibacillus alvei) y B. thuringiensis son
patgenos para insectos (pesticidas en cultivos
vegetales)
B. stearothermophilus (Geobacillus
stearothermophilus) es una especie termfila control stearothermophilus) es una especie termfila control
de esterilizacin.
Bacillus anthracis Bacillus anthracis
Es el patgeno ms importante del Es el patgeno ms importante del
gnero
descripto por Robert Koch y Luis
Pasteur a mediados del siglo XIX Pasteur a mediados del siglo XIX.
Base de los postulados de Koch Base de los postulados de Koch
Robert Koch
Luis Pasteur
B. anthracis
afeccin mortal de los animales,
particularmente bovinos y ovinos
carbunclo o antrax
distribucin mundial y transmisible
id t l t l h b accidentalmente al hombre.
CARACTERSTICAS MORFOLGICAS CARACTERSTICAS MORFOLGICAS
Bacilo recto Bacilo recto
Grande: 1 a 3 m por 5 a 8 m, con extremos
truncados.
inmvil y Gram positivo. y p
En extendidos de sangre se pueden observar
bacilos aislados o en pares rodeados por una
cpsula.
CAPSULA
capa polimerizada de cido poliglutmico
slo se desarrolla en el hospedador
i it di l d d in vitro: en medios con el agregado de suero,
bicarbonato y anhdrido carbnico, condiciones
similares a las presentes en el tejido vivo similares a las presentes en el tejido vivo.
Tcnica de M Fadyean (coloracin con azul de
metileno).
ESPORAS
B. anthracis esporas elipsoidales centrales
no se detectan en el individuo no se detectan en el individuo
infectado y desarrollan con facilidad en
contacto con el oxgeno y en los medios de contacto con el oxgeno y en los medios de
cultivo.
protoplasma residual del bacilo
se desintegra g
Bacillus antrhacis Bacillus antrhacis
Coloracin de Gram
Bacillus antrhacis Bacillus antrhacis
Formas vegetativas y esporuladas. g y p
Coloracin de Gram
Bacillus antrhacis Bacillus antrhacis
Tincin negativa de la cpsula
Bacillus antrhacis Bacillus antrhacis
MEB
Bacillus antrhacis Bacillus antrhacis
Formas vegetativas y esporas.
MET
Bacillus antrhacis Bacillus antrhacis
Formacin de esporas
MET
CARACTERSTICAS DE CULTIVO
*aerobia y anaerobia facultativa aerobia y anaerobia facultativa.
*No es exigente No es exigente
*desarrolla en medios de cultivo simples en desarrolla en medios de cultivo simples en
24 h a 37 C (12-44 C)
*En medios slidos forma colonias grandes,
elevadas granulosas con bordes irregulares elevadas, granulosas, con bordes irregulares,
blanco grisceas de 2 a 3 mm de dimetro.
*Con lupa muestran el aspecto caracterstico:
b ll d d cabellera de medusa.
*Apariencia rugosa (R) corresponden a cepas Apariencia rugosa (R) corresponden a cepas
virulentas.
*En los extendidos realizados a partir de ellas
se pueden observar largas cadenas de
b il t l bacilos, con esporas centrales no
deformantes semejando una caa de
bamb bamb .
*En agar sangre no produce hemlisis En agar sangre no produce hemlisis
(diferencial con otras especies de
Bacillus) Bacillus).
*Produce catalasa y fermenta varios
hidratos de carbono con produccin de p
cido.
*La identificacin bioqumica rara vez
resulta necesaria para el diagnstico resulta necesaria para el diagnstico.
*En medios de cultivo con penicilina *En medios de cultivo con penicilina
inducen la transformacin de los bacilos
en estructuras esfricas redondeadas en estructuras esfricas, redondeadas,
semejando un collar de perlas.
*Presenta sensibilidad a un bacterifago
especfico denominado fago gamma especfico denominado fago gamma.
RESISTENCIA RESISTENCIA
*Las formas vegetativas poseen
la resistencia comn a los la resistencia comn a los
bacilos no esporulados.
*Su punto trmico letal es de p
60 C en 30 minutos.
*En los cadveres *En los cadveres
*no tiene oportunidad de esporular
*se establece una competencia con
microorganismos de la putrefaccin: g p
clostridios, enterobacterias o Pseudomonas,
b i i b B h i cuyas bacteriocinas actan sobre B. anthracis.
*En contacto con el oxgeno esporula
fcilmente dentro de los 60 min
*altamente resistente a los agentes
ambientales como calor, radiaciones y
compuestos qumicos.
*Puede sobrevivir durante largos
periodos contaminando el suelo
(100 aos).
PATOGENIA PATOGENIA
*Esporas ingresan a travs de heridas,
picaduras de insectos, por ingestin o por picaduras de insectos, por ingestin o por
inhalacin.
*De los macrfagos a los ganglios linfticos
*En los tejidos germinan y se multiplican,
expresando sus factores de virulencia sobre expresando sus factores de virulencia sobre
el hospedador.
*Si se eliminan al exterior, esporulan y se
disemina nuevamente en el ambiente. disemina nuevamente en el ambiente.
Factores de virulencia
*Dos factores de virulencia
cpsula y toxina. cpsula y toxina.
B. anthracis presenta otros dos tipos de B. anthracis presenta otros dos tipos de
estructuras como son la cpsula y las
protenas de superficie (SAP: surface array protenas de superficie (SAP: surface array
proteins) (SAP y EA1).
CAPSULA
La cpsula se considera uno de sus mayores
factores de virulencia.
Contribuye a que la bacteria evada las defensas del
hospedador evitando la fagocitosis y produciendo hospedador evitando la fagocitosis y produciendo
una septicemia.
Es una estructura delgada, no antignica
compuesta por un polmero de cido d-glutmico.
La cpsula de naturaleza peptdica no es comn en
las bacterias las bacterias
cpsula codificada por los genes
capA capA
capB
capC capC
presentes en el locus cap del
plsmido pXO2. plsmido pXO2.
Un cuarto gen presente en el locus cap, Un cuarto gen presente en el locus cap,
denominado dep, est asociado a la
despolimerizacin, en correspondencia despolimerizacin, en correspondencia
con control del tamao de la cpsula.
Sobre la superficie de B. anthracis se
encuentran dos protenas encuentran dos protenas
denominadas
S EA1 Sap y EA1
codificadas respectivamente por los
genes sap y eag.
Sap y EA1 constituyen los mayores
antgenos de superficie antgenos de superficie.
Toxinas
*papel clave en la patognesis del carbunclo.
*t es f acciones p oteicas sec etadas sepa adamente al *tres fracciones proteicas secretadas separadamente al
medio.
antgeno protector (PA)
factor letal (LF)
factor edema (FE)
Estas tres fracciones no presentan accin txica si se Estas tres fracciones no presentan accin txica si se
inoculan por separado y su asociacin de a dos, conduce
a la formacin de un complejo denominado toxina binaria
(tipo A B) (tipo A-B)
*La inoculacin de Antgeno Protector junto con g j
Factor Letal (LeTx, toxina letal) por va endovenosa
produce la muerte
*la inoculacin de Antgeno Protector junto con
Factor Edema (EdTx toxina edemtica) por va Factor Edema (EdTx, toxina edemtica) por va
intradrmica, produce edema en la piel.
El Factor Edema es una enzima que presenta
actividad de adenilciclasa.
La actividad de adenilciclasa conduce al aumento
del AMPc intracelular y a una actividad del AMPc intracelular y a una actividad
descontrolada de las quinasas dependientes de
ste, desencadenando el cuadro de edema tisular. ,
Control gentico de la sntesis de los Control gentico de la sntesis de los
factores de virulencia
La cpsula y las toxinas se producen durante La cpsula y las toxinas se producen durante
la multiplicacin de las formas vegetativas en
el hospedador el hospedador.
Los genes se encuentran determinados en dos Los genes se encuentran determinados en dos
grandes plsmidos:
pXO1 (Toxina) y pXO1 (Toxina) y
pXO2 (cpsula)
DIAGNSTICO
Bacteriolgico
*demostracin de bacilos Gram positivos capsulados en p p
extendidos de sangre o tejidos
*desarrollo en medios de cultivo simples desarrollo en medios de cultivo simples
*ausencia de hemlisis sobre agar sangre
*caractersticas de las colonias
*ausencia de movilidad *ausencia de movilidad.
*prueba del collar de perlas
*sensibilidad al fago gamma completan la
identificacin.
Mediante una tcnica de
PCR d PCR se puede
confirmar la presencia confirmar la presencia
de los genes
codificantes para la
toxina y para la toxina y para la
cpsula. p
Serolgico Serolgico
inmunofluorescencia, inmunodifusin, ELISA y aglutinacin
metodologa de aplicacin y validez internacional metodologa de aplicacin y validez internacional
Ascoli-Valente
prueba de termoprecipitacin en medio lquido
La muestra procedente del individuo sospechoso se coloca en solucin La muestra procedente del individuo sospechoso se coloca en solucin
salina y se calienta en bao de agua, a 100 C durante 5 min.
Se filtra por una gasa.
en un tubo de hemlisis con suero inmune
anillo blanco en la zona de interfase 15 min
El cido glutmico de la cpsula y el polipptido del citoplasma seran
los antgenos presentes en los tejidos, responsables de la reaccin.
Experimental p
Si bien en la actualidad existen
metodologas de diagnstico normatizadas
l l internacionalmente no se aconseja el
empleo de animales de laboratorio en
forma indiscriminada forma indiscriminada
Prevencin
Vacuna con cepa Sterne de B Vacuna con cepa Sterne de B.
anthracis contiene slo el plsmido
XO1 pXO1.
Bacillus spp. Bacillus spp.
Colonias de Bacillus antrhacis (der.) y de Bacillus cereus (izq.)
en una placa de agar sangre
Bacillus spp. Bacillus spp.
Colonias de Bacillus antrhacis (izq.) y de Bacillus subtilis (der.)
en una placa de agar sangre
Bacillus antrhacis Bacillus antrhacis
Colonias de Bacillus antrhacis en agar sangre. g g
Note la ausencia de hemlisis.
Bacillus antrhacis Bacillus antrhacis
Colonias de Bacillus antrhacis en agar sangre. g g
Miden 3-5 mm y son ligeramente convexas.
Bacillus antrhacis Bacillus antrhacis
Colonias mucoides de Bacillus antrhacis Colonias mucoides de Bacillus antrhacis.
Atmsfera: 5% CO
2
Bacillus antrhacis Bacillus antrhacis
Colonias de Bacillus antrhacis en agar selectivo g
despus de 42 hs a 37C.
Bacillus antrhacis Bacillus antrhacis
Bacillus antrhacis es inmvil (der). Se observa Bacillus antrhacis es inmvil (der). Se observa
el crecimiento como una lnea simple que crece
sin desviarse de la lnea de puntura.
En el tubo de la izq se observan algunas especies En el tubo de la izq. se observan algunas especies
de Bacillus mviles con crecimiento difuso
Anthax Anthax cutneo en cutneo en Anthax Anthax cutneo en cutneo en
humanos humanos humanos humanos
Bioterrorismo Bioterrorismo Bioterrorismo Bioterrorismo
2001 murieron 5 personas 2001 murieron 5 personas 2001 murieron 5 personas 2001 murieron 5 personas
An envelope that was sent to NBC News anchor Tom Brokaw, which contained anthrax. An envelope that was sent to NBC News anchor Tom Brokaw, which contained anthrax.
Bacillus cereus Bacillus cereus
Bacillus cereus Bacillus cereus
Coloracin de Gram
Bacillus cereus
Es un bacilo con esporas subterminales
mvil por flagelos de ubicacin pertrica
Gram positivo
aerobio y anaerobio facultativo
no exigente
productor de catalasa.
Ampliamente distribuido en la
naturaleza y se puede aislar como
patgeno oportunista de infecciones pa ge o opo u s a de ecc o es
genitales y articulares y como
agente primario en toxinfecciones agente primario en toxinfecciones
alimentarias (ETA).
B d fosfolipasas l B. cereus produce fosfolipasas que provocan la
liberacin de enzimas de los lisosomas de los neutrfilos e
impiden la fagocitosis, hemolisinas detectables in vitro y p g , y
proteasas que degradan el tejido colgeno.
En toxinfecciones enterotoxinas y la toxina emtica.
Enterotoxinas t l bilid d il Enterotoxinas aumentan la permeabilidad capilar y
poseen efecto citotxico sobre el epitelio intestinal
provocando un cuadro de enteritis con diarrea.
toxina emtica termoestable, resiste la accin de la
tripsina y otras enzimas digestivas y es probable que se tripsina y otras enzimas digestivas y es probable que se
produzca durante el proceso de esporulacin.
DIAGNOSTICO
* i l i t d l i i *aislamiento del microorganismo
y/o
*d t i d t i *deteccin de sus toxinas
Bacillus cereus Bacillus cereus
Esporas y clulas de
Bacillus cereus
Bacillus cereus Bacillus cereus
Endosporas
Bacillus cereus Bacillus cereus
MEB
Bacillus cereus Bacillus cereus
Espora E p
Formacin de la pared
(60000X) MET
Bacillus cereus Bacillus cereus
Agar sangre Agar sangre
Bacillus cereus Bacillus cereus
Beta hemlisis Beta hemlisis
Agar sangre
Bacillus cereus Bacillus cereus
Beta hemlisis Beta heml s s
Agar sangre
Bacillus cereus Bacillus cereus
Colonias grandes y opacas Colonias grandes y opacas
Bacillus subtilis
*bacilo esporulado
*mvil
*puede presentar una cpsula de polmeros de cido glutmico p p p p g
*Gram positivo
*aerobio y anaerobio facultativo
*no exigente.
bacteria ambiental que puede actuar como patgeno oportunista
S h i l d d i i i i b i Se ha aislado de septicemias, mastitis y abortos en ovinos y
bovinos.
D t i i bt i i i t l tibiti De este microorganismo se obtuvo originariamente el antibitico
bacitracina