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EFECTO ANTIBACTERIANO DE 5 ANTISPTICOS DE USO EN CAVIDAD BUCAL Recibido para arbitraje: 06/10/2008 Aceptado para publicacin: 16/04/2010 M. en C. Jos Jess Muoz Escobedo, Investigador Docente, Instituto de Investigaciones Odontolgicas, Unidad Acadmica de Odontologa. Universidad Autnoma de Zacatecas Mxico. MCD. Patricia Gmez Marroqun, Ex alumna Unidad Acadmica de Odontologa UAZ. Dra. en C. Alejandra Moreno Garca, Investigador Docente, Unidad Acadmica de Biologa Experimental UAZ. CORRESPONDENCIA: E-mail: ymunoz@terra.com.mx Resumen La resistencia bacteriana a sustancias qumicas es un problema de salud pblica. Un Ejemplo es el Staphylococcus aureus. La presin selectiva de los antispticos ha generado una respuesta de los microorganismos a evadir la accin de algunos agentes qumicos. El propsito del estudio fue determinar el efecto antibacteriano ejercido por 5 antispticos usados en cavidad bucal, en contra de las bacterias S. aureus y E. coli. La metodologa fue la siguiente: En frascos se depositaron recortes de papel filtro Wathman Nmero 2, se taparon y esterilizaron, se les agreg el antisptico a probar, y se dej embeber. Por otro lado se subcultivaron en caldo BHI cepas de E. coli y S. aureus durante 18 horas, a 37 C, de aqu se volvieron a resembrar a manera de antibiograma en cajas de agar soya tripticasa, luego se depositaron equitativamente 4 recortes embebidos con el antisptico, se incubaron por 24 hrs. a 37 C., se sacaron los cultivos, se midieron los halos de inhibicin bacteriana, se sac el halo promedio para cada antisptico siendo ste el reporte final. Resultados. De los 5 antispticos estudiados, presentaron de mayor a menor halo de inhibicin: 1.Perxido de Hidrgeno al 3.18%. 2.-Hipoclorito de sodio al 1.25%., 3.-Hidrxido de calcio al 5% 4.Clorhexidina al 0.12%., 5.- Isodine bucofarngeo al 0.8%. Conclusiones. Dos antispticos presentaron un efecto antibacteriano inferior a lo descrito bibliogrficamente. Por lo anterior se sugiere informarse, de manera actualizada sobre: concentracin, mecanismo de accin, tiempo de exposicin, ventajas y desventajas de los antispticos. Palabras clave: Efecto antibacteriano, antispticos, cavidad bucal. Summary Introduction: The bacterium resistance to chemical substances, is a public health problem of public health. An example, is the Staphylococcus aureus. The selective pressure of antiseptics has generate an answer in the microorganisms, to evade the action for some chemical agents. The purpose of the study was to determine the antibacterium effect done by the antiseptics used in bucal cavity, against S. aureus and E. coli bacterium. The methodology was: In deposit bottles cuts of filter paper, covered and sterilized, then add the antiseptic that was testing and left them to wet. In the other side has subcultivate in soup BHI E. coli and S. aureus incubated about 18 hrs. at 37C., after this has sowed again in a antibiogram way in dishes soy tripticase agar. After that deposit ecually 4 cuts of wet filter paper with antiseptic, incubated 24 hrs. at 37C., take out the cultives, measure the halos of bacterium inhibition. Was

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incubated 24 hrs. at 37C., take out the cultives, measure the halos of bacterium inhibition. Was efectuated in 3 dishes take the average halos inhibition for each antiseptic being this the final report. Results. From the 5 studied antiseptics, presented from biggest to smallest inhibition halo:1. Hydrogen peroxide to 3.18%. 2. - Sodium hipoclorite at 1.25%. 3. - Calcium hydroxide to 5%. 4. Clorhexidina gluconate at 0.12%, 5. - Isodine bucofaringeo at 0.8%. Conclutions. 2 antiseptics presented antibacterium effect lower to the described bibliographically, to the mentioned before is suggested to get informed and promote information, actualized about: concentration, action mechanism, exposition time, advantages, disadvantages of the antiseptics. Key words: Antibacterian effect, antiseptics, bucal cavity.

Introduccin Reciben el nombre de antispticos los biocidas que destruyen o inhiben el crecimiento de microorganismos sobre tejidos vivos., son menos txicos que los desinfectantes que son similares, pero que se diferencian de los antispticos por su utilizacin sobre objetos y superficies inanimadas (1,2): La resistencia a mltiples sustancias hoy da es un problema de salud pblica que se viene observando a nivel mundial despus de la aparicin de los antibiticos, Un Ejemplo que ofrece muestras evolutivas de resistencia, es la bacteria Staphylococcus aureus. El uso indiscriminado de los antibiticos y la presin selectiva ambiental realizada por antispticos y desinfectantes ha generado una respuesta de supervivencia en los microorganismos, que los capacita para evadir con eficacia la accin bactericida de algunos de estos agentes qumicos (2). Durante los ltimos 20 aos el uso indiscriminado de estos productos ha hecho que las bacterias dotadas de mltiples mecanismos (bioqumicos, genticos-moleculares y celulares) desarrollen estrategias inherentes y adquiridas, que les permiten evadir con efectividad la accin de stos compuestos qumicos (2). Pero el personal mdico no siempre ha tenido una clara comprensin de ste fenmeno ni del papel modulador que sobre l tiene la aplicacin de una correcta poltica de uso de estas sustancias (3). Un factor importante a tener en cuenta para establecer una poltica de uso de desinfectantes y antispticos es la estandarizacin de mtodos de control de calidad de estos productos de acuerdo con la naturaleza, el estado fsico de las sustancias y el uso al que estn destinadas (4). Durante la Prctica Odontolgica tanto en las clnicas Universitarias de Odontologa como del sector salud y en consulta privada, se estn utilizando diversos antispticos., sin embargo a pesar de que existe informacin sobre estos, sta no ha sido clara ni explcita sobre la concentracin a la cual surten el mejor efecto antibacteriano. Por lo que la efectividad de stos debe ser ms estudiada y de manera peridica ya que hoy por hoy las bacterias se estn volviendo tolerantes y/o resistentes a diversas sustancias qumicas a las que antes eran susceptibles. El presente trabajo consisti en determinar el efecto de diferentes antispticos de uso a nivel de cavidad bucal, frente a dos bacterias patgenas (S. aureus y E. coli) representativas relacionadas con procesos infecciosos de cavidad bucal y otras partes del organismo. Antecedentes A travs del tiempo, en la evolucin de la ciruga, es notable el hecho de que muchas de las operaciones y curaciones llevadas a cabo, fracasaban por la falta de asepsia y antisepsia reinantes, que provocaban graves infecciones (5,6). Durante aquellos tiempos (antes de la evolucin), se crea que eran los demonios y espritus del mal los que causaban la peste y las infecciones. Los ritos extraos para ahuyentarlos fueron reemplazados por
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que causaban la peste y las infecciones. Los ritos extraos para ahuyentarlos fueron reemplazados por la purificacin mediante el fuego. En la actualidad todava se utiliza el calor como medio para destruir a los microorganismos (6,7). No obstante y aun antes de que Lister hiciera su contribucin a la asepsia en Viena el doctor Ignaz Philipp Semmelweis y el doctor norteamericano Oliver Wendell Holmes observaron y comprobaron que el simple acto de lavarse las manos con hipoclorito de sodio, entre paciente y paciente, se reduca la cantidad de bacterias virulentas y por lo tanto se disminua notablemente la asepsia puerperal, estos doctores introdujeron el cloro como un antisptico an sin antes conocer su mecanismo de accin e incluso antes de que se supiera el autentico papel de los microorganismos en las enfermedades infecciosas (7,8,9,10,11). Fueron varias las contribuciones de Lister a la ciruga, pero su trabajo ms importante fue el triunfo sobre la infeccin de las heridas, l estaba seguro de que las heridas se podan librar de bacterias si se protegan con la aplicacin de una sustancia que matara los microbios. Estas fueron las bases de su mtodo antisptico (12,13). Este investigador (Joseph Lister) en 1865 inicialmente us una solucin fenol (cido fnico) muy conocido como profilctico, en los apsitos y redujo el ndice de mortalidad en sus pacientes de cierto grado. El xito fue inmediato y sorprendente. Lister entonces pens que las infecciones eran originadas en el aire y su principio de antisepsia consisti en destruirlos tanto en las heridas como en el rea circundante (5,6,7). Finalmente propuso un mtodo sistemtico para el uso de cido fnico en las operaciones, conocido como mtodo antisptico de Lister. Actualmente no usamos mtodos antispticos, sino aspticos, en los cuales los instrumentos y otros materiales operatorios se esterilizan antes de utilizarlos (12). Mxico fue el tercer pas del mundo donde se emple la antisepsia (usando soluciones de fenol), en la Ciudad de San Luis Potos, por los doctores Manuel F. Soriano, Juan Feneln y Juan Cabral y Aranda. Primero fue Inglaterra en 1867 con Sir Lister, segundo Dinamarca con Saxthrop en 1870 y tercero Mxico con Soriano Fenelon y Cabral en 1872 (6,14). Las tcnicas aspticas actuales para la zona bucal y maxilofacial se basan principalmente en la prevencin de la contaminacin de la herida por bacterias extraas y especialmente virulentas La prevencin de la infeccin es sin duda alguna el requisito obligatorio de la prctica quirrgica u operatoria en todo tipo de procedimientos odontolgicos (15). A continuacin de manera sinttica se describen las caractersticas generales de los antispticos estudiados y usados en cavidad bucal: [(Cuadros 1- A, 1-B y 1-C). 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24,25 ].
Cuadro No. 1-A CA RA CTERSTICA S GENERA LES DE LOS A NTISPTICOS UTILIZA DOS EN LA CA VIDA D BUCA L

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Cuadro No. 1-B CA RA CTERSTICA S GENERA LES DE LOS A NTISPTICOS UTILIZA DOS EN LA CA VIDA D BUCA L

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Cuadro No. 1-C CA RA CTERSTICA S GENERA LES DE LOS A NTISPTICOS UTILIZA DOS EN LA CA VIDA D BUCA L

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MATERIAL Y MTODO La metodologa empleada en este estudio se efectu en 2 etapas de la siguiente manera: Primera Etapa: Preparacin de materiales y reactivos 1. A frascos de 120 ml boca ancha bien limpios, se les depositaron en cada uno de ellos 25 recortes circulares de papel filtro wathman No. 2 de 6 mm de dimetro, en cada uno de ellos, mismos que previamente se recortaron con una perforadora (marca pegaso 800), se taparon los frascos y se esterilizaron en autoclave a una presin de 15 libras (121 C) durante 15 minutos. 2. Posterior a esto y tomando al azar uno de los frascos, a dichos recortes se les realiz la prueba de esterilidad., para ello se depositaron 4 recortes distribuidos equitativamente en una caja con agar soya tripticasa luego se someti a incubar en una estufa bacteriolgica durante 24 hrs. a 37 C luego se observ si hubo o no crecimiento bacteriano. 3. Cada uno de los frascos con los recortes de papel estriles se rotul con el nombre y concentracin del antisptico a investigar, y bajo un ambiente de esterilidad, se vaci 30 ml del antisptico, se tap el frasco y dej embeber durante 18 horas. 4. Paralelamente se realizaron los procedimientos correspondientes para la preparacin, esterilizacin y vaciado de los medios de cultivo a utilizar en el estudio (Caldo infusin cerebro corazn y agar soya tripticasa). Segunda Etapa: Trabajo experimental como tal La metodologa de investigacin se efectu bajo condiciones de esterilidad de acuerdo a como se indica en el diagrama general de procedimiento (ver diagrama) y fue como sigue: 1. Despus de realizado el paso No. 3 de la primera etapa, se resembraron en tubos con 5 ml de caldo infusin cerebro corazn las cepas previamente caracterizadas de S. aureus y E. coli e incubaron por 18 horas, a 37 C. 2. Al trmino de incubacin las bacterias se volvieron a resembrar a manera de antibiograma en cajas de agar soya tripticasa. 3. Bajo condiciones de esterilidad en dichas cajas se depositaron equitativamente 4 recortes de
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3. Bajo condiciones de esterilidad en dichas cajas se depositaron equitativamente 4 recortes de papel filtro previamente embebido en el antisptico a estudiar (experimento realizado por triplicado). 4. Se dej reposar entreabiertas las cajas con los antispticos por 15 minutos, luego voltendolas hacia abajo se incubaron durante 24 hs. a 37 C. 5. Se sacaron los cultivos de la estufa y se procedi a observar, comparar y medir en milmetros los halos (dimetro) de inhibicin bacteriana en cada caja de petri (4 halos por caja) y luego se efectu el clculo del halo de inhibicin bacteriana promedio formado alrededor de los antispticos encontrados en cada una de las 3 cajas de petri probado contra ambas especies bacterianas.
DIA GRA MA GENERA L DE PROCEDIMIENTO

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Anlisis estadstico Para que los resultados obtenidos del tamao del halo de inhibicin bacteriana de c/u de los diferentes antispticos estudiados fueran representativos y confiables, cada experimento se realiz por cuadruplicado en cajas de petri, pero a la vez se efectu en 3 cajas y luego se sac el promedio de los halos de inhibicin para cada antisptico siendo ste el reporte final. Resultados De los 5 antispticos investigados, los que presentan un mayor halo de inhibicin bacteriana en orden descendente frente a S. aureus y E. coli son (ver cuadros No. 2-A, 2-B y fotografas No. 1-a, I-b, 2, 3, 4-a, 4-b, 5-a, 5-b):
Cuadro No. 2-A Efecto de los antispticos usados en cavidad bucal frente a Staphylococcus aureus.

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Cuadro No. 2-B Efecto de los antispticos usados en cavidad bucal frente a Escherichia coli .

Fotografas No. 1-a y 1-b Halos de inhibicin bacteriana causados por el Perxido de hidrogeno al 3.18%, frente a S. aureus y E. coli .

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Fotografa No. 1-a

Fotografa No. 1-b.

Fotografa No. 2 Halos de inhibicin bacteriana causados por el Hipoclorito de sodio al 1.25%, frente a S. aureus y E. coli .

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Fotografas No. 3-a y 3-b Halos de inhibicin bacteriana causados por el Gluconato de clorhexidina al 0.12 %, frente a S. aureus y E. coli .

Fotografa No. 3-a

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Fotografa No. 3-b

Fotografa No. 4 Halos de inhibicin bacteriana causados por el hidrxido de calcio al 5 %, frente a S. aureus y E. coli .

Fotografa No. 5 Halos de inhibicin bacteriana causados por la Iodopovidona (Isodine bucofaringeo al 0.8 %), frente a S. aureus y E. coli .

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Discusin En el presente estudio, la susceptibilidad de S. aureus y E. coli a cinco antispticos de uso en cavidad bucal fueron determinados por el mtodo del papel filtro inmerso en antispticos. La reproducibilidad del experimento fue buena., en la bsqueda bibliogrfica se encontr variada informacin sobre las medidas requeridas para una adecuada antisepsia (1,2). Dentro de los antispticos que mostraron un alto poder antibacteriano "In vitro" tanto para bacterias Gram negativas como positivas, son el Hipoclorito de sodio (Cloralex) y perxido de hidrgeno (Agua oxigenada), incluyendo su bajo costo y amplio mercado en los pases (26,5). Es importante mencionar que el Hipoclorito de sodio se experiment al 0.5 % y al 1.25% siendo esta ltima concentracin ms eficaz contra las bacterias probadas. Bibliogrficamente la concentracin al 1.25% no se menciona, sin embargo cabe mencionar que en la Unidad Acadmica de Odontologa de la Universidad Autnoma de Zacatecas Mxico, a esta concentracin es utilizada de manera rutinaria para el tratamiento de conductos radiculares y de acuerdo al autor principal, se obtienen buenos resultados (27,28). Sigue siendo controversial el grado de dilucin o si el hipoclorito de sodio debe utilizarse en combinacin con otras soluciones como es el perxido de hidrgeno (29). En el caso del perxido de hidrgeno equivalente a 3.18%, result estar dentro de los mejores antispticos probados. Se describe que el perxido de hidrgeno debe alternarse con otro antisptico para tener efectos satisfactorios, pero tambin se menciona que la accin solvente del agua oxigenada en tejidos orgnicos es mucho menor que el Hipoclorito de Sodio (30). Los resultados experimentales nos hacen reflexionar sobre la eficacia de los antispticos ms comnmente usados en cavidad bucal, un ejemplo es el Gluconato de Clorhexidina al 0.12% (Gingivitis de oral B) el efecto antibacteriano "In vitro" result inferior comparado con 2 de los antispticos como es el perxido de hidrgeno al 3.18 % e hipoclorito de sodio al 1.25%, cabe mencionar que en la bibliografa consultada se menciona que el gluconato de clorhexidina, tiene un efecto antisptico superior a estos dos (31,32). Se menciona que aunque la Clorhexidina posee resultados antibacterianos semejantes a los del Hipoclorito de Sodio al 5.25% e incluso tiene mejor efecto residual que el Hipoclorito a las 24 horas pero que no tiene la capacidad de disolver tejido pulpar. No obstante a ello la Clorhexidina se usa para pacientes alrgicos al Hipoclorito (33,34). Para el caso de 2 de ellos (Isodine bucofarngeo e hidrxido de calcio) presentaron un efecto antibacteriano "In vitro" significativamente inferior a lo referido por Cabrera y cols., Rodrguez PAU y cols., y Rodrguez PAU (2,3,4). En cambio los resultados de ste estudio demuestran que el peroxido de hidrogeno y el hipoclorito de sodio para ambas cepas bacterianas (S. aureus y E. coli) tienen amplio efecto bactericida concordando lo obtenido, con lo descrito por los investigadores Lerones C. y cols., Waltimo TMT. y cols. (35,36) . Es importante mencionar que el efecto antibacteriano de todos los antispticos fue mejor contra el S. aureus que es una bacteria Gram positiva en cambio contra E. coli (bacteria Gram negativa) dicho efecto fue menor. Conclusiones y Sugerencias De todo lo anterior se concluye que los antispticos generalmente utilizados en la prctica odontolgica no siempre son los que tienen un mejor efecto antibacteriano por lo que de acuerdo a los resultados de ste estudio se requiere tener ms conocimiento sobre el efecto antibacteriano, concentracin, modo de empleo, tiempo de exposicin e incluso costo-beneficio de stos.
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Por lo anteriormente encontrado se sugiere que se debe concientizar y estimular a los responsables de las reas clnicas as como a las personas responsables del uso y manejo de dichos antispticos a consultar, pedir y proporcionar informacin estandarizada, adecuada y actualizada sobre la formulacin, concentracin, mecanismo de accin, tiempo de exposicin, manejo, uso adecuado, modo de aplicacin ventajas y desventajas de cada uno de los antispticos, ya sea por medio de exposicin en ponencias de manera oral o mediante posters, cursos terico-prcticos, difusin por medio de trpticos, folletos etc. a Enfermeras, estudiantes, Odontlogos, miembros del rea de Ciencias de la Salud y Biomdica ya que son todos ellos los que deben de tener el suficiente conocimiento al respecto.

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EFECTO ANTIBACTERIANO DE 5 ANTISPTICOS DE USO EN CAVIDAD BUCAL

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