Universidad Nacional del Nordeste - Facultad de Medicina - Microbiologa e Inmunologa

Diagnstico bacteriolgico
En general, el diagnstico bacteriolgico sigue el siguiente esquema, con pequeas variaciones dependiendo del tipo de muestra o bacteria a estudiar. Toma de muestra

Observacin en fresco (400X)

Observacin de Coloraciones (1000X)

Siembra para aislamiento primario en medios generales, selectivos y/o diferenciales

Incubacin en atmsfera, temperatura y tiempo adecuados

Observacin de las Colonias

Identificacin bioqumica y/o serolgica

Pruebas de sensibilidad antimicrobiana

MEDIOS PARA AISLAMIENTO PRIMARIO Permiten recuperar colonias aisladas de bacterias a partir de muestras clnicas (Primer postulado de Koch) y su composicin es muy variada segn el uso que se les quiera dar. En las colonias que desarrollan debe observarse las caractersticas de las mismas (color, textura, tamao, brillo) y los cambios producidos en el medio de cultivo (cambios de color, difusin de pigmentos, hemlisis, etc). A continuacin se describen algunos de los medios de cultivos para aislamiento primario ms utilizados en bacteriologa mdica. Agar sangre Consiste en un agar usado como base al cual se le agrega un 5% de sangre humana, de caballo o de carnero para transformarlo en un medio enriquecido que permite el crecimiento de la mayora de las bacterias causantes de enfermedades en el hombre. Sin embargo, su principal uso se basa en que en ellos se puede detestar el tipo de hemlisis que producen las bacterias alrededor de las colonias. La hemlisis puede ser total o transparente (betahemlisis), parcial o verdosa (alfahemlisis) o estar ausente (gammahemlisis).

Beta hemlisis 1

Alfa hemlisis

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Medio EMB (Eosina-azul de metileno) Es un medio selectivo que permite el crecimiento de bacilos gramnegativos, principalmente de la Familia Enterobacteriaceae, inhibiendo el crecimiento de las bacterias grampositivas. Tambin es un medio diferencial ya que nos permite saber por la coloracin de las colonias si los microorganismos que crecen fermentan lactosa o sacarosa. Si las bacterias fermentan lactosa o sacarosa, acidifican el medio y la eosina vira dando lugar a la aparicin de colonias oscuras, de color rosado a verde brillante (Ej: Escherichia, Klebsiella, Enterobacter). Las bacterias que no fermentan ni lactosa ni sacarosa originan colonias claras o transparentes (Ej: Salmonella, Proteus, Pseudomonas).

Lactosa positiva

Lactosa negativa

Medio CLDE (Cistena Lactosa Deficiente en Electrolitos) Es un medio diferencial de aislamiento primario que permite el crecimiento de la mayora de las bacterias productoras de infecciones urinarias. Es diferencial porque aquellas bacterias que utilizan la lactosa producen colonias amarillas (imagen de la izquierda) mientras que aquellas que no utilizan la lactosa producen colonias incoloras (imagen de la derecha).

Lactosa positiva

Lactosa negativa

Medio TCBS (Tiosulfato Citrato Sales Biliares) Es un medio utilizado para el cultivo y aislamiento selectivo de bacilos gram negativos de la familia Vibrionaceae, en concreto de Vibrio cholerae y otros vibrios. Las colonias de Vibrio son grandes, de color amarillo. Este medio inhibe selectivamente el crecimiento de la Familia Enterobacteriaceae.

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Medio de Chapman o agar manitol salado Es un medio selectivo para estafilococos. Posee manitol y ClNa en altas concentraciones. Permite detectar el uso del manitol como fuente de carbono ya que este metabolismo se manifiesta como un cambio de color del medio de naranja a amarillo, mientras que las bacterias que crecen en ClNa pero no fermentan el manitol no producen cambios en el medio de cultivo.
Neg Pos

PRUEBAS PARA IDENTIFICACIN Son muy numerosas y su aplicacin depende del tipo de bacteria a identificar. La seleccin de cada una de ellas se realiza en base a la morfologa colonial y la coloracin de Gram de la bacteria. A continuacin se mencionan algunas de las ms utilizadas. Prueba de la catalasa Permite detectar la produccin de la enzima catalasa que desdobla al agua oxigenada en agua y oxgeno. Esta actividad se pone de manifiesto cuando al enfrentar una colonia bacteriana con una gota de agua oxigenada se evidencia la formacin de burbujas. Permite diferenciar estafilococos (prueba positiva) de estreptococos (prueba negativa).

Prueba de la Oxidasa Se trata de determinar si un microorganismo posee citocromo c-oxidasa. Para ello se utiliza un compuesto orgnico que puede ser reducido por el sistema citocromo-oxidasa/citocromo c en presencia de oxgeno molecular, originando un producto coloreado fcilmente apreciable. Si el disco se pone de color rosado oscuro, el microorganismo es oxidasa positivo, Ej: Vibrio, Pseudomonas. Las bacterias oxidasa negativas no producen cambios de color, Ej: Escherichia, Proteus, Klebsiella, Salmonella, Citrobacter. Test del triple azcar-hierro

En este test se utiliza el medio de cultivo TSI y proporciona varios datos fisiolgicos importantes para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar la glucosa, la lactosa o la sacarosa y si produce gas o cido sulfhdrico. Pueden obtenerse los siguientes resultados: a) Fermentacin de glucosa. Los microorganismos capaces de fermentar la glucosa darn lugar a la formacin de cidos que bajan el pH del medio, haciendo que el fondo del tubo aparezca de color amarillo y el pico de color rojo. Ej: Shigella. b) Fermentacin de glucosa y lactosa (o sacarosa). Los microorganismos capaces de fermentar ambos azcares darn lugar a la formacin de cidos que bajan el pH de todo el medio, haciendo que tanto el fondo como el pico del tubo aparezca de color amarillo. Ej: Escherichia, Klebsiella, Enterobacter, Vibrio.

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c) Incapacidad de fermentacin de glucosa. Los microorganismos incapaces de fermentar la glucosa no darn lugar a la formacin de cidos que bajen el pH pero utilizarn las protenas presentes bajando el pH por formacin de aminas haciendo que el pico del tubo aparezca de color rojo. Ej: Pseudomonas. d) Produccin de cido sulfhdrico: Los microorganismos capaces de formar SH2 se manifiestan por la aparicin de un color negro en fondo del tubo debido a la formacin de sulfuro ferroso. Ej: Salmonella, Proteus, Citrobacter. e) Produccin de gas: Los microorganismos capaces de formar gas producen la aparicin de burbujas y/o la ruptura del medio de cultivo. Ej: Escherichia.

Glu+, Lac+ Gas+

Glu+, Lac-

Glu+, Lac-, SH2

Glu-, Lac-

+ Prueba de Bilis-Esculina Esta prueba permite estudiar la capacidad de crecimiento de la bacteria en presencia de sales biliares y la hidrlisis de la esculina, sustancia que al hidrolizarse se une al hierro presente en el medio produciendo un color negro. (Ej: Enterococcus) mientras que las bacterias incapaces e crecer en bilis o de hidrolizar la esculina no producen cambios (Ej: Streptococcus agalactaiae)

Produccin de pigmentos Numerosas bacterias son capaces de producir sustancias que le confieren color a las colonias. Por ejemplo: Staphylococcus aureus amarillo; Pseudomonas verdoso; Serratia - rojo

S. aureus

Pseudomonas

Serratia