Instituto Politcnico Nacional Escuela nacional de ciencias biolgicas Departamento de bioqumica Laboratorio de mtodos de anlisis.

Estudio de algunos factores que afectan el establecimiento de un mtodo espectrofotomtrico.

Castillo Avila Fernando 5QM2 Profesora: Gabriela Edith Olgun Ruz

Objetivos: Seleccionar tubos comunes de laboratorio para usarlos como cubetas para el espectrofotmetro. Manejar algunos de los parmetros que intervienen en el establecimiento de un mtodo espectrofotomtrico. Establecer las condiciones ptimas de los parmetros probados para la aplicacin del mtodo.

Fundamento de la prctica: El fundamento del equipo se basa en la cantidad de luz que es absorbida y en la cantidad de luz que es transmitida cuando se le incide un haz de luz monocromada a una muestra colorida, la resultante de la suma de la luz transmitida ms la absorbida nos da igual a la intensidad de la luz que le hacemos incidir. La eleccin de tubos adecuados se fundamenta en escoger los que sean de paredes pticamente equivalentes y dimetros regulares equivalentes. La reaccin se fundamenta en la formacin de un complejo colorido entre el ion frrico presente en algn tipo de muestra con el tiocianato, este complejo es de color rojo y puede cuantificarse a 480 nanmetros. Resultados: 1:- Seleccin de tubos para ser usados como celdas. Se calibro el espectrofotmetro al aire a 0% de transmitancia a 400 nm, despus se introdujo un tubo y se calibro el espectrofotmetro al 95% de transmitancia y posteriormente se introdujeron varios tubos buscando que tuvieran valores cercanos de ms menos 2 unidades de transmitancia al 95%, esto para ver que tuvieran superficies pticamente equivalentes, posteriormente para ver si eran de dimetro interno equivalente se les adiciono una solucin de sulfato de nquel, la cual nos mostrara las pequeas variaciones en el paso de luz, se us un tubo con agua para calibrar a 100% de transmitancia y se buscaron tubos que no dieran ms de dos unidades de diferencia, as llegamos a la conclusin de que 13 del total de tubos proporcionados cumplan con estas dos caractersticas y podan ser usados como celdas. El dimetro interno equivalente hace referencia a que los tubos deben de tener la misma medida de dimetro a lo largo del tubo para evitar variaciones en los resultados, y superficies pticamente equivalentes se refiere a que en la superficie del tubo debe de ser de tal manera que la luz pase de manera homognea a travs de el, y del resto de los tubos.

2.- Curva de calibracin. Ecuacin de la recta: y = 0.015x Ejemplo de la correccin de absorbancia: Para el valor de 0.698, este valor corresponde a la concentracin de ion frrico, por lo tanto corresponde al eje de las X, as que para calcular el nuevo valor de y o de absorbancia para esa concentracin, simplemente se multiplica el valor por la pendiente quedando as: Y = 0.015 x 0.698 .: Y = 0.0104 que es el valor de absorbancia corregida.

Figura 1.- Tabla que muestra los valores de absorbancias obtenidos a lo largo de la prctica de curva de titulacin, tambin se incluyen los valores ajustados de Absorbancia.

Absorbancia Concentracin del ion frrico Figura 2.- Grfico que muestra la curva de titulacin junto con su lnea de tendencia, tambin se muestra el valor de la r2 que nos muestra que los datos se comportan como una recta dndonos su correspondiente ecuacin.

Discusin: Que el valor de r2 nos diera muy parecido a uno, nos indica que nuestros datos se comportan como una recta y el grafico nos dice que la ordenada se encuentra al origen, as que podemos decir que se trabaj bien, podemos usar la ecuacin del grafico para interpolar datos de absorbancia que es la variable dependiente de la concentracin, y as obtener la concentracin de una muestra problema. Que nos diera como resultado una lnea recta nos indica que se cumple con la ley de Bouger y Beer ya que se observa que la cantidad de luz absorbida es directamente proporcional a la concentracin de la muestra por medio de la ecuacin. En la ecuacin y corresponde a la absorbancia, x a la concentracin y el valor de 0.015 es el coeficiente de absorcin. Determinacin del %Ep

El %Ep es igual al valor de absortancia. El valor de transmitancia se puede calcular despejando %T de la siguiente formula: A= 2 log %T donde A: Absorbancia .: %T= 10(2-A) despus calculamos la absortancia Abs = 100 - %T Ejemplo: para la absorbancia de 0.01047; se calcula %T; %T = 10(2-(0.01047)) Abs = 100 - %T .: error. .: %T = 97.618% despus calculamos la absortancia Abs = 100 97.618 .: Abs = 2.38 y este es nuestro porciento de

Absortancia

Log [Fe 3+ ] Figuras 3.- y 4.- Muestran los valores calculados para el logaritmo de la concentracin de iones frricos, el % de transmitancia y la absortancia, la grfica muestra como la lnea de tendencia tiene forma sigmoidea, en la parte recta de dicha curva es donde se observa que el error fotomtrico es mnimo.

Como podemos observar en la grfica, las determinaciones que se hicieron en los tubos 5, 6, 7, 8, 9 y 10, fueron en las cuales el error fotomtrico fue mnimo, indicndonos que estos valores corresponden a la zona donde el error es muy bajo y por lo tanto es la zona que debemos utilizar. 3.- Efecto del tiempo en la estabilidad del color

Figuras 4.- y 5.- Tabla de resultados de la estabilidad del color con respecto al tiempo y su respectivo grfico.

Discusin: Se puede observar que a lo largo del tiempo la absorbancia va disminuyendo, esto nos indica que el color no es estable, la inestabilidad se puede deber a muchos factores, como la luz, radiaciones de ms energa, la presencia de agentes contaminantes en el aire o el mismo oxgeno. El tiempo estable va de los 60 a los 120 minutos, porque es donde observamos que los datos forman una meseta, lo que nos indica que es estable el color al no variar. a) es estable el color? No, no lo es, ya que se observan variaciones de lectura a lo largo del tiempo. b) Cul es el tiempo ptimo para hacer las lecturas? Entre los 60 y 120 minutos, ya que en este intervalo es donde se observa menor variacin entre los datos. 4.- Efecto de la concentracin de cromgeno

Figuras 6.- y 7.- Tabla que indica los valores obtenidos en la prctica para este experimento y su respectivo grafico donde observamos el efecto de la concertacin de tiocianato en la determinacin de iones frricos.

Discusin: Se observa que a concentraciones muy altas, superiores a 29000 micro moles por mililitro hay una constancia en la absorbancia, es decir, el mximo de absorbancia se da a estas concentraciones muy altas, por eso en las dems experiencias se usa a concentraciones de saturacin. Qu concertacin de tiocianato recomienda? Se recomienda una concentracin saturada de tiocianato, porque se observ en la grfica que a concentraciones muy altas se da la mayor absorbancia por parte del complejo colorido.

5.- Efecto del pH

Figuras 8.- y 9.- Tabla con valores de pH y su correspondiente absorbancia, la grfica muestra el efecto del pH sobre la estabilidad del color.

Discusin: Se observa que a pHs cidos la absorbancia es mayor, en cambio a pHs alcalinos el color casi desaparece, esto se debe a que el hierro es ms soluble a pHs cidos adems a pHs alcalinos puede que no se lleve a cabo la reaccin de manera satisfactoria, o los iones hidroxilo compitan contra el tiocianato por estar con el hierro. a) De qu manera influye el pH en el sistema colorido? Influye evitando que se lleve a cabo la reaccin o separando los iones una vez formado el compuesto colorido.

b) Cul es el pH recomendado para que se efectu la reaccin? El pH recomendado es de 1 a 3, ya que observamos los puntos ms altos de absorbancia en estos valores de pH.

6. - Efecto de algunos iones sobre la absorbancia absoluta.

Figura 10.- Tabla de valores de absorbancia para cada ion, antes y despus de agregar el anin.

Discusin: Se observa que el hierro es ms afn a los aniones fluoruro y oxalato que al tartrato y al fosfato, esto se aprecia por que en los dos primeros aniones, la absorbancia es mucho ms baja que en los dos ltimos, y esto se debe a la competencia que tiene el fluoruro y el oxalato contra el tiocianato para unirse al hierro. a) Cul es el efecto de los diferentes aniones sobre la reaccin? El efecto es una competencia entre algunos aniones, como el fluoruro o el oxalato por el hierro. b) A qu se debe este efecto? Ya que el fluoruro al ser muy electronegativo se ve atrado por las cargas positivas del hierro, y el oxalato tiende a formar un nuevo complejo de tres molculas de oxalato por un catin frrico. Determinacin del lmite de deteccin del analito. El lmite de deteccin del analito se puede definir como la concentracin de analito que proporciona una seal igual a la seal del blanco ms tres veces la desviacin estndar del blanco. Esto nos sirve para calcular la concentracin mnima de analito que puede detectar nuestro mtodo espectrofotomtrico. LDD= 3Sb/m Donde Sb es la desviacin estndar del blanco y m es la pendiente. Si: y = 0.015X; y Sb= 0.5857073 LDD= 0.5857073/0.015 detectable de analito. .: LDD = 39.0471 g/mL, esta es la concentracin minima

7.- Parmetros ptimos para el mtodo del tiocianato de amonio para determinar iones frricos.

Figura 11.- Tabla que nos indica los valores ptimos para cada determinacin.

Conclusiones: Es posible usar tubos normales de ensaye como cubetas siempre y cuando cumplan con ciertas caractersticas. Los parmetros que pueden interferir en un mtodo espectrofotomtrico son: pH, tiempo, temperatura, concentracin del cromgeno, etc. Las condiciones ptimas para llevar a cabo la reaccin se dan a pH muy cidos, de preferencia despus de que pasara una hora, a concentraciones de cromgeno saturadas, y evitando la presencia de aniones que pudieran interferir con la medicin, como los fluoruros o los oxalatos. Es posible usar la curva de calibracin para interpolar absorbancias y as obtener datos de concentracin.

Bibliografa:

D.A. Skoog, J.J. Leary, Analisis Instrumental, pendice 1, McGraw-Hill, 4ta. Edicin, 1994. Anlisis instrumental, Calibracin y lmite de deteccin en tcnicas instrumentales, pdf, pg. 9, sin autor, fecha de consulta: 19/08/2013.