Respiracin Celular

Metabolismo energtico

1789: Lavoisier escribi que la respiracin no es nada ms que una combusitn lenta del carbono y el hidrgeno. El hab a demostrado que los seres vivos cosumen o! geno y generan "#$.

% &inales del siglo '(' se sab a que )lucosa * #$ "#$ * +$#

% principios del siglo '' se vi que esto era por trans&erencia de electrones y protones de la glucosa al o! geno para &ormar agua seg,n las ecuaciones )lucosa * -+$# -#$ * $. +* * $. e/ -"#$ * $.+* * $.e/ 0e o!ida 1$+$#. 0e reduce

0iglo '(' t1rmino o!idasa

Breve Historia

1912/1$ o!idacin de compuestos por #$ en presencia de te3idos y la sensibilidad a algunos inhibidores: concepto de proceso en4imtico. 5$2s t1rmino deshidrogenasa y citocromos. 562s compuesto con 7e o las deshidrogenasas. 0olucin: cone!in por hemoprote nas 8citocromos9

Si gl o X X

1969 deshidrogenasa: citocromo b: c a y a$: #$ y +$# 19.- respiracin en mitocondrias 19.8 &os&orilacin o!idativa desde el ;%<+ hasta el # $ 19=2 ubiquinona o coen4ima >. 19=$ membranas por microscop a electrnica. 19=6: teor a qu mica. 19-2 7e: 0: "u y ?g como co&actores metlicos y prote nas 7e/0 19-1 teor a quimioosmtica: transporte de electrones con el pasa3e de +* contragradiente como &uer4a para s ntesis de %@A por la %@Aasa 19-- "omple3os (: ((: ((( 8citocromo bc9: (B 8citocromos a9 y B 8%@Aase9: tamaCos en precipitaciones con sul&ato de amonio y columnas de e!clusin molecular que conten an actividad: 572s controversias En 197= el ciclo >.1978 ;obel Ari4e para ?itchell.1981

Mitocondrias

La respiracin celular tiene lugar en la membrana interna de las mitocondrias

Cuatro compartimientos

"ontienen su propio %<; con di&erente cantidad de genes 8desde 67 en humanos a =7/72 en plantas u hongos9 @eor a del endosimbionte: o proteobacteria 8Rickettsia sp.9

Localizacin submitocondrial
@#? y 0%? En4imas del ciclo @"%: %<;mt: ribosomas

7actores de apoptosis o A"<

"adena respiratoria y @(?

Teora del endosimbionte

La o!idacin del ;%<+ es una reaccin e!ergnica El ;%<+ es el intermediario ms importante de la c1lula por su capacidad de !ido/reduccin. El ;%<+ es o!idado por el #$ ;%< * +* * $e/ F #$ * $+* * $e/ ;%<+ +$# E2DE /2:61= E2DE 2:81=

La a&inidad por electrones aumenta con el potencial de reduccin

F #$ * ;%<+ * +*

+$# * ;%<*

EoDE 2:81=/ 8/2:61=9 E 1:162 B o como )oDE /nFEoD 1:162 BE /$18 GH. mol/1

Cadena de Transporte de Electrones:

consideraciones termodinmicas
La a&inidad por electrones aumenta con el potencial de reduccin

):/$18:$GH.mol/1 dividido en tres reacciones

Los electrones provenientes de la o!idacin del ;%<+ y 7%<+ $ pasan por cuatro comple3os: desde los potenciales de reduccin ms ba3os a los ms altos

n!ibidores

"oncentracin de o! geno

0in adiciones
tiempo

122

J consumo de o! genoKmin

"oncentracin de o! geno

Motenona

tiempo "oncentracin de o! geno

L";

"1lulas alimentadas con glucosa

rot

L";

tiempo

"mo dar a alimentado con hidro!ibutirato que produce ;%<+I

Cadena de Transporte de Electrones

Cadena Respiratoria

Comple" : #$%H de!&drogenase:'bi(uinone o"ido reductase

$22-

En $212 se logr cristali4ar de una bacteria

Comple" : C&toc!rome bc) comple" ubi(uinol:c&toc!rome c o"idoreductase

C&toc!rome c

Comple" *: C&toc!rome c +"idase

La subunidad de la $T,ase es capaz de girar

Comple" *: $T, s&nt!ase

Electron Transport C!ain

Enfoque protemico para identificar nuevas funciones en mitocondrias

mitocondrias

Funciones generales de la mitocondria

decarboxylacin de piruvato ciclo de cidos tricarboxlicos (TCA) fosforilacin oxidativa degradacin y biosntesis de aminocidos ciclo de la urea * -oxidacin de cidos grasos * biosntesis de fosfolpidos (e ! cardiolipin) biosntesis de biotina y cido lipoico biosntesis de "emo biosntesis de cido flico y ascrbico (vitamina C) #nsambla e de comple os $e-% sntesis de protenas& transcripcin y replicacin de A'( importe de protenas& cliva e y degradacin apoptosis ) muerte celular programada rol en cancer& *ar+inson& ataxia * Ausente en mitocondrias de plantas "omeostasis de Ca ,, y $e ,,

#nfo-ue *rotemico de organelas. /Aislamiento de las organelas a la mayor pure0a posible /Aislamiento de todas las protenas /%eparacin de las protenas por diferentes m1todos /Aislamiento e identificacin sistemtica de las protenas

?uchas de las prote nas son conocidas: &or&orilacin o!idativa el ciclo de @"%: 62/-2J 8dependiendo del organismos9 no han sido todav a identi&icadas.
N N

$=J se desconoce su &uncin e!perimentalmente

0e supone que las mitocondrias cumplen muchas &unciones pero slo algunas han sido estudiadas en gran detalle . En la mayor a de los casos las prote nas implicadas en estos procesos no han sido identi&icadas a,n. Aara poder comprender a &ondo estos procesos es necesario establecer un catlogo completo de estas prote nas. Esto es la protemica.

Purificacin de mitocondrias por ultracentrifugacin en gradientes de Percoll

etiolated seedlings green seedlings flower buds

%istemas de electroforesis en gel en dos dimensiones

2' 3#$ ) %'%-*A4# 2' 5( ) %'%-*A4# 2' 5( ) 5(-*A4#

T7o-dimensional isoelectroenfo-ue 3#$) %'% *A4#

$irst gel dimension. / proteins / non-ionic detergent / p6 gradient %econd gel dimension. / gel strip of t"e first gel dimension / %'%

T7o-dimensional 5lue-native ) %'% *A4#

$irst gel dimension. / proteins / non-ionic detergent / Coomassie-blue %econd gel dimension. / gel strip of t"e first gel dimension / %'%
89nsc" et al! (:;;<)& *lant 8! ;& =>?-=<@

T7o-dimensional 5lue-native ) 5lue-native *A4#

$irst gel dimension. / proteins / non-ionic detergent 3 / Coomassie-blue %econd gel dimension. / gel strip of t"e first gel dimension / non-ionic detergent 33
#ubel et al! (2AAB)& *lant *"ysiol! :=B& :B>A->;

2' $luorescence 'ifference 4el #lectrop"oresis (2-' '34#)

Cix labelled samples

2' gel electrop"oresis protein sample 3 Cy= label () 3mage analysis protein sample 33 Cy> label (7t)

excitation 7avelengt" 3 overlay image

excitation 7avelengt" 33

*urificacin de los comple os por ultracentrifugacin en gradientes de sacarosa

actividad
: 2 = B > < ? @ ; :A :: :2 := 3,3332 3 6 D 3332 $'6

:' 5lue native *A4#

M$L% -T+. M/0M/

Cadena Respiratoria de ,lantas

C3
B2 subunits ; plantspecific >: genes 6,

('ex
: subunit B genes
(A'6 NDe

Cyt c
: subunit 2 genes 6,
C

CD
:B subunits : plantspecific 2A genes 135 genes 25% plant specific

6,

C3
NDin (A'6 (A'6

C333

C3D

CD

C33
succ

AOX F2 F2

('in
: subunit 2 genes

C33
@ subunits B plantspecific :2 genes

AFG
: subunit > genes

C333
:A subunits 2 plantspecific :? genes

AT*

C3D
:B subunits < plantspecific 2= genes

6,

Cadena rami1icada en plantas

CHller& Iasmusson& 5ro7n (2AA2) 3n. *lant *"ysiology& Tai0& Jeiger (#d)& %inauer Associates

El Comple2o est3 implicado en la sntesis de 3cido ascrbico 4vitamina C5

La en4ima L/galactono/1:./lactone dehydrogenase 8)L<+9 catali4a la reaccin &inal en la s ntesis de cido ascrbico

El Comple2o de plantas tiene un dominio e"tra

Arabidopsis (eurospora

4u1nebaut et al! (:;;?) 8 Col 5iol 2<>. BA;-B:@

<udGina et al.: $22=

Las C$s est3n en el brazo de membrana

complex 3
*rotenas de membrana

<AA +'a subcomple

BAA +'a subcomple

0underhaus et al.: $22-

Las C$s est3n en la membrana !acia la matriz

O

B< =A 2:

A(T

%F'

CA
0underhaus et al.: $22-

!a falta de CA" causa reduccin del Comple#o $

5lue-native *A4# >> =A %'% *A4#
At=gB@<@A

3#$
At>g=?>:A

?A >>

=A 2A

:B

At>g>2@BA

At=g<=>:A

At=gA?B@A

A
3,3332 3 D 3332

5
B!< >!= <!A <!? @!?

*erales et al!& 2AA>

NAD( o ida)ing domain

Carbonic an%&drases

'embrane arm

Supercomplejos Respiratorios I2+III4 I+III2+IVa I+III2+IVb I+III2 III2+IVa III2+IVb V III2 I

tallo

tubrculo I+III2+IVa4 I+III2+IVa2 I+III2+IVa I+III2 III2+IVa2 I III2+IVa V III2 ? IVa ?

? IVa ? IVb
Eubel et al. 2004, Plant Ph siol. !"4, !4#0$!4#%.

Iespirasoma
6,M3C%N (A'6 , 6, 3 (A'
,

62F 333 333 6,MCN 3D LF2 , 2 6, 3D 3D 62F

#ubel et al! 2AAB& *lant *"ysiol! :=B& :B>A-:B>;!

3,3332

Iol funcional de supercomple osK C"annelingK

mportacin de protenas

Enzimas de la gliclisis asociadas mitocondrias

(n vitro Arote nas poco abundantes L"K?0 subproteomas En varios organismos encontraron las en4imas de la gliclisis en proteomas de la membrana e!terna mitocondrial. (n vivo
Enolase/)7A %ldolase/)7A )7A

?ito/ tracGer

%el 6 al )78 est3 asociado a la mitocondria

Estn asociadas a la membrana e!terna

)ieg1 et al: $226

Oa AT*asa est involucrada en generar Oas crestas mitocondrialesK

subunidad AT*ase de levaduras altera la estructura mitocondrial #l cross-lin+ing de los dominios $: de la AT*ase altera tambi1n la morfologa

*aumard et al! 2AA2& #C5F 8! 2:& 22:-2=A

4avin et al! 2AAB& 8! Cell %cience ::?& 2===-2=B=

Estructura de la A*Pase dim+rica , Oa asociacin angular de los monmeros induce una fuerte curvatura de la membrana interna

'ud+ina (!& et al!! (2AA>)

Oas mitocondrias pueden diferir en forma y nPmero de acuerdo al organismo o incluso al te ido

%in embargo los mecanismos moleculares -ue gobiernan estos parmetros no son claramente entendidos aPn!

Comparacin de ,roteomas de Mitocondrias

)enes codi&icados en mitocondrias Arote nas estimadas Jidenti&icadas J Energ a J mantenimiento J signalling J de&ensa yKo apoptosis J desconocidas

L $8

1222

72

1.

=6

$=

M 16

$222

6=

$$

=2

1$

12

=7

$222

$=

$6

.9

$$

?itocondrias de di&erentes te3idos suelen contener distintas prote nas acordes con sus &unciones