HOMOGENEIZACIN DE TEJIDOS

Martell Castro Perla Yolanda

Departamento de Ciencias de la Salud. Universidad del Valle de Mxico Campus
Tlalpan-Coyoacn: Calz. de Tlalpan 3058, Santa rsula Coapa, Coyoacn, 14370
Mxico, D.F.
Viernes 07 de marzo del 2014
RESUMEN
Mediante la realizacin de esta prctica se determin la utilidad de dos mtodos de
fraccionamiento celular, la centrifugacin y la homogeneizacin, los cuales son un medio
para extraer organelos celulares sin daar sus estructuras. Partiendo de esto, se utiliz
una muestra de tejido muscular que se someti a homogeneizacin con Buffer RIPA y una
centrifugacin posterior con lo que se obtuvo un sobrenadante de coloracin rosa plida y
consistencia cremosa que fue guardada para su uso para futuras prcticas. El uso del
homogeneizador con Buffer RIPA, el centrifugado a 4 C y el mantener en hielo todo el
proceso fueron condiciones especficas para la obtencin de las protenas que se
deseaban obtener. Dependiendo la estructura celular que se desea extraer se deber
trabajar en condiciones especficas a sta. Es de alta importancia conocer los medios de
fraccionamiento celular pues son de gran ayuda en el estudio de la biologa molecular.
PALABRAS CLAVE
Fraccionamiento celular, protenas, centrifugacin, homogeneizacin.
INTRODUCCIN
Existen diferentes tcnicas de fraccionamiento celular que nos permiten aislar un orgnulo
concreto. El fraccionamiento celular requiera la ruptura de la clula en condiciones en las
que no se destruyan los orgnulos celulares, lo que supone una homogeneizacin del
tejido y una posterior separacin del orgnulo utilizando una tcnica separativa adecuada.
En el proceso de homogeneizacin pueden utilizarse diferentes medios mecnicos, y
adems diferentes compuestos que faciliten una mejor disgregacin del tejido.
La centrifugacin es el procedimiento ms utilizado para separar un homogeneizado en
diferentes partes o fracciones.
Tambin es posible fragmentar las membranas plasmticas mediante equipos especiales
de homogeneizacin de tejidos presurizados en los cuales las clulas son forzadas a
travs de un espacio muy estrecho entre el mbolo y la pared del recipiente. El agua fluye
dentro de las clulas cuando se les coloca en una solucin hipotnica.
DESARROLLO
Para la obtencin de protenas:
Se tom una muestra de tejido muscular el cual se encontraba en un tubo eppendorf a
temperatura regulada por hielo. Se agregaron 300 micro litros de Buffer Ripa hasta tener
una consistencia lquida y un sedimento al fondo.
Se tom la mayor parte posible del homogenizado y se llev a centrifugacin a 14000
rpm a 4C y se obtuvo el sobrenadante y se puso en un tubo eppendorf. Todo el proceso
se llev a cabo en hielo, se guard en el revco a -80 C para su uso posterior.
RESULTADOS
La muestra se homogeniz por aproximadamente dos minutos y con 300 micro litros de
Buffer RIPA en una sola porcin sin lavar el homogeneizador al finalizar para retirar los
restos de tejido que pudieran quedar en el.
Se obtuvo un lquido de consistencia espesa y coloracin rosada plida, se tomo el
homogenizado y se centrifug como lo indica el procedimiento hasta obtener un
sobrenadante, el cual se llev a refrigeracin.
DISCUSIN
El objetivo de llevar a cabo la homogeneizacin de tejidos es romper las membranas
celulares para poder as obtener estructuras subcelulares purificadas mediante la presin
ejercida por un mbolo y la pared del recipiente que contiene al tejido.
Inicialmente se hizo una modificacin en el uso del homogeneizador, pues se deban
agregar 200 micro litros para hacer el homogeneizado y 100 ms para lavar los restos que
pudieran quedar en el equipo, este ltimo paso se omiti y se agregaron directamente los
300 micro litros, pues el msculo es un tejido ms rgido y difcil de romper a comparacin
de otros tejidos blandos que se trabajaron por otra parte, de esta forma necesit ms
Buffer RIPA para ser tratado y ms tiempo para llegar al producto deseado.
La centrifugacin tiene a funcin de separar los componentes celulares del homogenado
por densidades, sedimentando las de mayor peso y quedando en el sobrenadante las de
menor peso. La importancia de llevar a cabo todo el proceso a temperaturas bajas es que
la friccin producida por la homogeneizacin y por la centrifugacin puede producir calor y
de esta forma provocar que las protenas llegaran a perder su estructura.
CONCLUSIN
Es importante conocer la variedad de mtodos de fragmentacin celular, pues mediante
estos procesos podemos extraer cualquier estructura de inters bioqumico para su
estudio. Se debe hacer nfasis en las condiciones que requiere cada tipo celular pues no
todo depende del proceso mecnico, sino tambin del ambiente en el que se est
trabajando. En el caso de la extraccin de protenas una condicin importante fue el
manejo a temperaturas bajas para evitar el dao en las estructuras protenicas.
REFERENCIAS
Alberts, B., & Cwi, S. (2008). Introduccin a la biologa celular (2da. ed.). Buenos Aires:
Editorial Mdica Panamericana. Pg. 160-167
Lodish, H. F., Speziale, N. B., Vidal, N. A., & Giovanniello, O. (2005). Biologa Celular y
Molecular (5ta. ed.). Buenos Aires, Argentina: Editorial Mdica Panamericana. Pg. 160
Roca, P., Oliver, J., & Rodrguez, A. M. (2003). Bioqumica: tcnicas y mtodos. Espaa:
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