Manual Conocer La Agilent

Agilent ChemStation
Conocer la ChemStation
Agilent Technologies
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Avisos de seguridad
Nmero de referencia del manual:

G2070-95121
PRECAUCIN
Un aviso de PRECAUCIN indica un peligro. Llama la atencin sobre un procedimiento de operacin, una prctica o similar que, si no se realizan correctamente o no se ponen en prctica, pueden provocar daos en el producto o prdida de datos importantes. No avance ms all de un aviso de PRECAUCIN hasta que se entiendan y se cumplan completamente las condiciones indicadas.
Edicin
05/05 Impreso en Alemania Agilent Technologies Hewlett-Packard-Strasse 8 76337 Waldbronn, Alemania
Licencias sobre la tecnologa

El hardware y/o software descritos en este documento se suministran bajo una licencia y pueden utilizarse o copiarse nicamente de acuerdo con las condiciones de tal licencia.
Revisin de software
Esta gua es vlida para las revisiones B.01.xx del software Agilent ChemStation, donde xx hace referencia a revisiones menores del software que no afectan a la exactitud tcnica de esta gua.
Leyenda de derechos restringidos

Cuando el software sea para uso en el desempeo de un contrato directo o un subcontrato del gobierno de los EE.UU., el software se suministra y licencia como "software informtico comercial" segn se define en DFAR 252.227-7014 (junio de 1995) o como "artculo comercial" segn se define en FAR 2.101(a) o como software informtico restringido segn se define en FAR 52.227-19 (junio de 1987) o en cualquier clusula contractual o normativa de agencias equivalentes. El uso, reproduccin o divulgacin del software estn sujetos a los trminos estndar de licencia comercial
ADVERTENCIA
Un aviso de ADVERTENCIA indica un peligro. Llama la atencin sobre un procedimiento de operacin, una prctica o similar que, si no se realizan correctamente o no se ponen en prctica, pueden provocar daos personales o la muerte. No avance ms all de un aviso de ADVERTENCIA hasta que se entiendan y se cumplan completamente las condiciones indicadas.
Conocer la Agilent ChemStation
En esta gua
Esta gua describe varios conceptos de la Agilent ChemStation. Su objetivo es la familiarizacin con el funcionamiento de la Agilent ChemStation.
Caractersticas de la Agilent ChemStation

Este captulo describe los componentes y caractersticas principales de la Agilent ChemStation.
Mtodos
Este captulo describe los conceptos de mtodos y cmo trabajar con ellos.
Adquisicin de datos
Este captulo describe los conceptos de la adquisicin de datos, ficheros de datos, libro de registro y otros.
Integracin
Este captulo describe los conceptos de integracin de los algoritmos de integracin ChemStation. Describe el algoritmo de integracin, la integracin y la integracin manual.
Cuantificacin
Este captulo describe cmo la ChemStation realiza la cuantificacin. Ofrece detalles sobre clculos de % de rea y % de altura, clculo del patrn externo (ESTD), clculo % norm, clculo del patrn interno (ISTD) y cuantificacin de picos sin identificar.
Identificacin de picos
Este captulo describe los conceptos de la identificacin de picos.
Calibracin
Este captulo describe la calibracin en la ChemStation.
Automatizacin
Este captulo describe los conceptos de la automatizacin. Explica cmo trabajar con secuencias en la ChemStation, qu ocurre cuando se ejecuta una secuencia y cmo personalizar secuencias.
Revisin por lotes

Este captulo describe los conceptos de la revisin por lotes. Configuracin por lotes, funciones de revisin e informes por lotes.
10
Utilizacin de los informes de la ChemStation

Este captulo describe en qu consiste un informe. Aporta detalles sobre los resultados de los informes, resultados cuantitativos, estilos de informes, destino de informe e informes resumen de secuencia.
11 12
Evaluacin de la idoneidad del sistema Verificacin del sistema
Contenido
1 Caractersticas de la Agilent ChemStation 17 Descripcin general 18 Mdulos adicionales del instrumento 19 Mdulos adicionales de evaluacin de datos 19 Productos slo para la evaluacin de datos 20 Hardware de la Agilent ChemStation 21
Acerca del software de la Agilent ChemStation 22 Sistema operativo 22 Mtodos y secuencias 22 Configuracin del sistema 22 Modelo de datos 23 Convenciones de los nombres de ficheros 24 Interfase de usuario del software 26 Adquisicin de datos 27 Anlisis de datos Visualizacin 28 Anlisis de datos Integracin 29 Capacidades del integrador 29 Anlisis de datos Cuantificacin 30 Anlisis de datos Informes estndar 31 Anlisis de Datos Informes especializados 31 Utilidades y compatibilidades 35 Personalizacin 35 Automatizacin 36 Buenas prcticas de laboratorio 37
Contenido
Control del instrumento 41 Conexin en red 41 Documentacin 42 44
La estructura de directorios de la ChemStation 2 Mtodos 47 48
En qu consiste un mtodo?
Partes de un mtodo 49 Method Information (Informacin del mtodo) 49 Instrument Control (Control del instrumento) 49 Data Analysis (Anlisis de datos) 50 Run-Time Checklist (Lista de control del anlisis) 51 Estado de los mtodos 52 Mtodo grabado (Stored) 52 Mtodo activo (Current) 52 Creacin de mtodos 53 55 56 57
Edicin de mtodos 54 Partes del mtodo a editar
Estructura del directorio de mtodos
Qu ocurre cuando se ejecuta un mtodo? Operacin del mtodo 58 Comando o macro pre-anlisis 58 Adquisicin de datos 58 Anlisis de datos 59 Anlisis de datos personalizado 60 Salvar datos GLP 60 Comando o macro postanlisis 61 Salvar copia del mtodo con datos 61 Resumen del funcionamiento del mtodo
62
Contenido
Adquisicin de datos
63 64
En qu consiste la adquisicin de datos? Ficheros de datos 65
Monitores en lnea 66 Monitorizacin en lnea de la seal 66 Monitorizacin en lnea de los espectros Logbook 67
66
Informacin del estado 68 Estado de la ChemStation 68 Barra de estado 68 Diagrama del sistema 69 4 Integracin 71 73
En qu consiste la integracin? Qu hace la integracin? 73
Los algoritmos de integracin de la ChemStation Capacidades de integracin 74
74
Introduccin 76 Definicin de la lnea base inicial 77 Seguimiento de la lnea base 77 Asignacin de la lnea base 78 Identificacin de los puntos cardinales de un pico Definicin de trminos 81 Puntos cardinales 81 Pico de disolvente 81 Hombro (frontal, trasero) Pendiente 82 Principio de operacin 83
80
82
Contenido
Reconocimiento de picos 84 Anchura de pico 84 Filtros de reconocimiento de picos 85 Agrupamiento 87 El algoritmo de reconocimiento de picos Clculos no gaussianos 92
88
Asignacin de la lnea base 94 Construccin de la lnea base por defecto 94 El inicio de la lnea base 95 Marcas de sealizacin 95 El final de la lnea base 95 Penetracin de la lnea base 96 Seguimiento avanzado de la lnea base (Advanced Baseline Tracking) Divisin tangencial (Tangent Skimming) 99 Picos no asignados (Unassigned Peaks) 105 Cdigos de separacin de picos Caracteres 1 y 2 106 Carcter 3 106 Carcter 4 107 106
97
Medida del rea de pico 108 Determinacin del rea 109 Unidades y factores de conversin Parmetros de integracin 111 Parmetros iniciales 111 Anchura de pico (Peak Width) 112 Rechazo por altura y anchura de pico Refinamiento de la integracin 113 Parmetros programados 115
110
113
Contenido
Integracin automtica (Autointegrate) 116 Introduccin 116 Principios de funcionamiento 116 Parmetros de la integracin automtica 117 Integracin manual 118 Introduccin 118 Cdigos de separacin de picos para picos integrados manualmente Documentacin de parmetros de integracin manual 119 5 Cuantificacin 121 122
119
En qu consiste la cuantificacin? Clculos de cuantificacin 123
Factores de correccin 124 Factor de respuesta absoluto Multiplicador 124 Factor de dilucin 124 Cantidad de muestra 125
124
Procedimientos de clculo no calibrados % de rea y % de Altura 126 Procedimientos de clculo calibrados Clculo ESTD Clculo % Norm 128 130
126 127
Clculo ISTD 131 Anlisis 1: Calibracin 132 Anlisis 2: Muestra desconocida 133 Clculo ISTD de picos calibrados 133 Clculo ISTD de picos no calibrados 134
Contenido
135 136
En qu consiste la identificacin de picos? Reglas de asignacin de picos 137
Tipos de identificacin de picos 138 Tiempo de retencin/migracin absoluto Tiempo de retencin/migracin corregido Cualificadores de picos 138 Lmites de cantidad 139 Tiempo de retencin/migracin absoluto Tiempos de retencin/migracin corregidos Picos de referencia simples 142 Picos de referencia mltiples 143 Cualificadores de picos 144 Correlacin de la seal 145 Verificacin del cualificador 145 Clculo de la relacin del cualificador
138 138
140 142
145
El proceso de identificacin 147 Localizacin de los picos de referencia 147 Localizacin de picos ISTD (Patrn interno) 147 Localizacin del resto de los picos calibrados 148 Clasificacin de picos no identificados 148 7 Calibracin 149 150 151 152 154
Definicin de trminos Tabla de calibracin Curva de calibracin Muestras desconocidas
10
Contenido
Tipos de calibracin 155 Calibracin de un slo nivel 155 Calibracin multinivel 156 Rangos de calibracin 158 Ajustes de la curva de calibracin Tratamiento del origen 158 Calibracin de grupo Suma de picos 162 161
158
Recalibracin 163 Qu es la recalibracin? 163 Por qu recalibrar? 163 Recalibracin manual 163 Recalibracin con suma de picos 164 Opciones de recalibracin 164 Maneras de recalibrar 165 Recalibracin de picos no identificados 8 Automatizacin 167 169
166
En qu consiste la automatizacin? Qu es una secuencia? Parmetros de secuencia Tabla de secuencia 172 170 171
Creacin de secuencias 173 Utilizacin del editor de tablas de secuencias 173 Utilizacin del botn Insert Vial Range (Insertar Rango de Viales) Utilizacin del botn Append Line (Aadir Lnea) 173 Trabajar con secuencias 174 Muestras prioritarias 174 Secuenciacin con muestras de control Detener una secuencia (Stop) 174
173
174
11
Contenido
Abortar una secuencia (Abort) 175 Interrumpir una secuencia (Pause) 175 Ejecucin de una secuencia parcial 175 Fichero del registro de secuencias 177 178
Qu ocurre cuando se ejecuta una secuencia?
Asignacin de nombre a los ficheros de datos en una secuencia 179 Nombrar automticamente los ficheros en una secuencia 179 Introducir manualmente los nombres de los ficheros 180 Operacin postsecuencia 181 Not Ready Timeout (slo LC y CE) Wait Time (slo LC Y CE) 181 Recalibracin automtica 182 183 181
Especificacin de las recalibraciones 183 Parmetros de recalibracin en la Tabla de Secuencia Tipos de secuencias 186 187 188
Secuencias de calibracin explcita
Secuencias de calibracin cclica de un slo nivel Secuencias de calibracin cclica multinivel Orden de anlisis del mtodo A 191 Orden de anlisis del mtodo B 192 Calibraciones explcita y cclica juntas Ejemplo 193 Orden del anlisis SimpReg 194 193 189
Secuencias de calibracin cclica con agrupamiento Ejemplo 195 Operacin con secuencia agrupada 196 Ejemplo 197
195
12
Contenido
Secuencias de recalibracin cclicas con mltiples viales que contienen la misma dilucin del patrn 199 Secuencia de recalibracin cclica con manejo de viales de calibracin Round-Robin 199 Recalibraciones cclicas donde cada calibracin utiliza un vial diferente 201 Secuencia de agrupamiento que utiliza viales diferentes para el inicio y final del agrupamiento 201 9 Revisin por lotes 203 204
En qu consiste la revisin por lotes? Configuracin de lotes 205 Tabla de lotes 205 Tabla del compuesto 206 Informe por lotes 206 Interfase del usuario 207 Funciones de revisin 208 Calibracin en la revisin por lotes Informe de lotes 209 Historial de lotes 209 10
208
Utilizacin de los informes de la ChemStation Qu es un informe? 212
211
Informe de resultados 213 Informes no calibrados 213 Informes calibrados 213 Informe del patrn externo 214 Informe del patrn interno 214 Informe de los Cuadros de Control Resultados cuantitativos 215
214
13
Contenido
Estilos de informes 216 Adicin de un informe personalizado a los estilos de informes Otros parmetros de estilos de informes 219 Tabla de picos sumados 219 Informe a medida de los picos no calibrados Destino del informe 220 Formatos del fichero de informe 220
218
219
Informes resumen de secuencia 222 Introduccin 222 Configuracin de un Informe Resumen de Secuencia 11 Evaluacin de la idoneidad del sistema 227
222
Determinacin del nivel de ruido 231 Clculo del ruido utilizando seis veces la desviacin estndar Clculo del ruido mediante la frmula pico-a-pico 232 Clculo del ruido mediante el mtodo ASTM 233 Clculo de seal-a-ruido 235 Deriva y rango de variacin 235 Clculo de la simetra de pico 236 238
231
Frmulas y clculos de la idoneidad del sistema
Definiciones generales 239 Volumen muerto 239 Tiempo de retencin del compuesto no retenido t (m) [min]
239
Definiciones de las pruebas de rendimiento 240 Momentos estadsticos 240 Momentos estadsticos, desviacin y exceso 241 Verdadera anchura de pico Wx [min] 242 Factor de capacidad (USP), Relacin de capacidad (ASTM) k 242 Factor de cola USP (USP) t 242 Nmero de platos tericos por columna (USP, ASTM) n 243
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Contenido
Nmero de platos tericos por metro N [1/m] 244 Retencin relativa (USP, ASTM), Selectividad alfa 244 Resolucin (USP, ASTM) R 245 Definiciones de reproducibilidad 246 Media de la muestra M 246 Desviacin Estndar de la muestra S 247 Desviacin estndar relativa RSD[%] (USP) Desviacin estndar de la media SM 247 Intervalo de confianza CI 248 Anlisis de regresin 249 Coeficiente de regresin 250 Desviacin estndar (S) 250
247
Acceso a los nmeros de doble precisin almacenados internamente 12 Verificacin del sistema 255 259
251
Verificacin del sistema 256 Pantallas de verificacin y de diagnsticos El registro GLPsave 260
Funcin de prueba del detector DAD 262 Funcin de prueba para la verificacin del detector DAD ndice 265
262
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Contenido
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Agilent ChemStation Conocer la ChemStation
1 Caractersticas de la Agilent ChemStation

Descripcin general 18 Mdulos adicionales del instrumento 19 Mdulos adicionales de evaluacin de datos 19 Productos slo para la evaluacin de datos 20 Hardware de la Agilent ChemStation 21 Acerca del software de la Agilent ChemStation 22 Sistema operativo 22 Mtodos y secuencias 22 Configuracin del sistema 22 Modelo de datos 23 Convenciones de los nombres de ficheros 24 Interfase de usuario del software 26 Adquisicin de datos 27 Anlisis de datos Visualizacin 28 Anlisis de datos Integracin 29 Capacidades del integrador 29 Anlisis de datos Cuantificacin 30 Anlisis de datos Informes estndar 31 Anlisis de Datos Informes especializados 31 Utilidades y compatibilidades 35 Personalizacin 35 Automatizacin 36 Buenas prcticas de laboratorio 37 Control del instrumento 41 Conexin en red 41 Documentacin 42 La estructura de directorios de la ChemStation 44
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Caractersticas de la Agilent ChemStation Descripcin general
Descripcin general
Las ChemStations para GC, LC, LC/MSD y A/D son sistemas para el control del instrumento, adquisicin y evaluacin de datos para cromatgrafos de gases Agilent 6890N, 6890Plus y 6890A; cromatgrafo de gases Agilent 6850 Serie II; cromatgrafo de gases 5890 Serie II; mdulos y sistemas HPLC Agilent 1100; LC/MSD Agilent 1100, cromatgrafos de lquidos 1090, detectores FLD 1046 y ECD 1049, sistema de electroforesis capilar (CE) Agilent, sistema CE/MS Agilent e interfase analgico/digital de doble canal Agilent 35900E. El software est diseado para ordenadores personales compatibles con IBM, bajo el entorno operativo Microsoft 2000 y Microsoft Windows XP Professional. El software se vende como una Agilent ChemStation bsica, para un instrumento en cinco versiones. Todas las versiones incluyen las funciones de adquisicin de datos, control instrumental, anlisis de datos (integracin, cuantificacin y elaboracin de informes), automatizacin y personalizacin, para un instrumento analtico. Un instrumento est diseado para operar segn un esquema de tiempo individual, pero puede recoger datos de varios detectores, simultneamente. Las cuatro versiones son: ChemStation para un slo instrumento para sistemas de cromatografa de gases (GC), referencia G2070BA, ChemStation para un slo instrumento para sistemas de cromatografa de lquidos (LC), referencia G2170BA, ChemStation para un slo instrumento para sistemas de electroforesis capilar (CE), referencia G1601BA, ChemStation de un slo instrumento para sistemas de cromatografa de lquidos/detector selectivo de masas (LC/MSD), referencia G2710BA, y
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Caractersticas de la Agilent ChemStation Descripcin general Agilent ChemStation de un instrumento analgico/digital (A/D) para la adquisicin de datos analgicos con control de parmetros externos, referencia G2072BA. Las posibilidades de control instrumental del software de la Agilent ChemStation pueden ampliarse mediante la adquisicin de instrumentos adicionales de adquisicin de datos y mdulos de control que permiten configuraciones de tcnicas mixtas de mltiples instrumentos.
Mdulos adicionales del instrumento

Los mdulos adicionales del instrumento son: mdulo de control instrumental GC y adquisicin de datos, referencia G2071BA, mdulo de control instrumental LC y adquisicin de datos, referencia G2171BA, mdulo de control instrumental CE y adquisicin de datos, referencia G2172BA, mdulo de control instrumental LC/MSD, adquisicin y evaluacin de datos, referencia G2715BA, y mdulo de adquisicin de datos analgicos, referencia G2073BA.
Mdulos adicionales de evaluacin de datos

La posibilidad de proceso de datos de las ChemStations tambin puede ampliarse mediante la adquisicin de los mdulos correspondientes para aplicaciones de especialistas: mdulo de evaluacin espectral del detector de diodos (DAD), referencia G2180BA, mdulo adicional ChemStore de organizacin de muestras y bases de datos de resultados, referencia G2181BA, y mdulo de evaluacin de datos de deconvolucin y bioanlisis LC/MSD, referencia G2720BA, para uso solamente con la ChemStation LC/MSD.
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Caractersticas de la Agilent ChemStation Descripcin general En cada ChemStation se pueden configurar hasta cuatro instrumentos de cromatografa. Si se configuran instrumentos con detectores espectroscpicos (detectores de diodos para cromatografa de lquidos o electroforesis capilar), no se soportan ms de dos detectores de diodos en una Agilent ChemStation y el nmero de instrumentos soportados est restringido a tres. Cuando se utiliza la Agilent ChemStation para LC/MSD para controlar el mdulo LC/MSD Agilent 1100 (opcionalmente con un HPLC Agilent 1100 o HPLC 1090 Serie II), el PC no soporta otros instrumentos.
Productos slo para la evaluacin de datos

Existen tres productos para la evaluacin de datos, que podran no tener instrumentos configurados. Estn diseados para la evaluacin de datos en un entorno de oficina: la Agilent ChemStation de evaluacin de datos, referencia G2090BA, tiene las mismas capacidades de evaluacin de datos que las HP ChemStations bsicas, la Agilent ChemStation de evaluacin de datos LC 3D, referencia G2190BA, incluye la evaluacin de datos espectrales de diodos y las posibilidades de la Agilent ChemStation para evaluacin de datos, y la Agilent ChemStation de evaluacin de datos LC/MSD, referencia G2730BA, incluye la evaluacin de datos espectrales de diodos y de masas as como las posibilidades de la Agilent ChemStation bsica para evaluacin de datos.
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Caractersticas de la Agilent ChemStation Hardware de la Agilent ChemStation
Hardware de la Agilent ChemStation

Para ms detalles sobre el hardware de la Agilent ChemStation, consultar el manual de Instalacin de la Agilent ChemStation.
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Caractersticas de la Agilent ChemStation Acerca del software de la Agilent ChemStation
Acerca del software de la Agilent ChemStation

Sistema operativo
La ChemStation requiere los sistemas operativos Microsoft Windows 2000 Professional, actualizado con Microsoft Service Pack 4, o Windows XP Professional SP2. Los cuadros de control de Agilent ChemStation requieren Microsoft Excel.
Mtodos y secuencias
El mtodo analtico describe cmo debe realizarse una determinada separacin. Contiene todos los parmetros para el control del instrumento, adquisicin y evaluacin de datos, incluyendo integracin, cuantificacin y elaboracin de informes. El sistema puede configurarse para adquirir datos de cierto nmero de muestras por diferentes mtodos. El fichero de control para esta clase de operacin se denomina secuencia y contiene informacin de cada muestra, referencias a los mtodos correspondientes y especificaciones de la recalibracin automtica. Para ms informacin sobre los mtodos y secuencias, consultar el Captulo 8, Automatizacin y la ayuda en lnea.
Configuracin del sistema

La configuracin del sistema se realiza a travs del programa editor de configuracin. Permite definir los instrumentos, direcciones GPIB LAN, los directorios de los datos, secuencias y mtodos y la definicin de color para el software de la Agilent ChemStation. Para ms informacin, consultar los manuales suministrados con los mdulos adicionales de la Agilent ChemStation.
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Modelo de datos
El software est diseado segn un modelo de datos basado en una estructura de memoria llamada registro. Los registros son estructuras de mltiple uso que pueden soportar datos analticos e informacin tanto de dos dimensiones (por ejemplo, tiempo/intensidad) como de tres (por ejemplo, tiempo/intensidad/longitud de onda). La Agilent ChemStation proporciona comandos y funciones para construir, ampliar, extraer y, donde no se alteren los datos iniciales, editar registros. Para ms informacin, consultar la Gua de Programacin de Macros disponible en la ayuda en lnea.
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Convenciones de los nombres de ficheros

Convenciones de los nombres
Las reglas siguientes permiten que la ChemStation genere y procese nombres vlidos para ficheros y directorios: No est permitido que los caracteres siguientes formen parte de los nombres de ficheros y directorios: < > : " / \ | @ % * ? etc Si se utilizan estos caracteres en la carpeta de instalacin, la copia para reprocesamiento no arranca; si se utiliza el carcter % en la carpeta de instalacin, algunos mtodos abreviados de "Agilent ChemStation B.01.0x" no funcionan correctamente. Son asimismo aplicables las siguientes reglas: Tabla 1 Caracteres restringidos
Carcter % y . (punto decimal) no permitidos espacios en blanco no permitidos [] + = ; , . (punto decimal) no permitidos
Parmetro de ChemStation Nombres de ficheros de mtodo: Nombres de ficheros de datos (prefijo/contador): Subdirectorios de datos y subdirectorios de secuencias:
No se pueden utilizar como nombre de un fichero los siguientes nombres de dispositivo reservados: CON, PRN, AUX, NUL COMx (donde x es un nmero del 1 al 9) LPT1x (donde x es un nmero del 1 al 9) Debe evitarse asimismo el uso de estos nombres seguidos de una extensin (p.ej. Nul.txt).
N O TA
En las pruebas realizadas para validar las convenciones de los nombres de ficheros se utilizan equipos con sistema operativo en ingls. Agilent no puede garantizar el soporte de sistemas operativos que no sean en ingls y sus caracteres especiales.
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Longitud mxima de los nombres de ficheros y subdirectorios de ChemStation

Se enumeran a continuacin las especificaciones de la Agilent ChemStation relativas a nombres de ficheros y subdirectorios: Tabla 2 Longitud mxima de los nombres de ficheros y subdirectorios de ChemStation
Longitud mx. de la entrada 38 15 40 Adicin Ejemplo automtica . .D . .D .M .S . HYP . UVL . FRP Demodad.d longname000001.d def_lc.m def_lc.s def_lc.hyp demodad.uvl areapct.frp demo (en informacin de la muestra) demo (en parmetros de secuencia) 100 c:\chem32\1\data c:\chem32\1\methods c:\chem32\1\sequence c:\chem32\1\hyper c:\chem32\speclib c:\chem32\repstyle
Fichero de datos/Subdirectorio/Ruta
Nombre de fichero de datos Nombre de fichero de datos utilizando prefijo/contador Mtodo Secuencia Hipersecuencia Libreras Plantillas de informe personalizadas Subdirectorio de ficheros de datos
40
Subdirectorio de secuencias de datos
40
Ruta de datos Ruta de mtodo Ruta de secuencia Ruta de hipersecuencia Ruta de librera Ruta de plantilla de informe personalizada
100
N O TA
Las barras de herramientas que muestran nombres de ficheros de datos/secuencias/mtodos se han redimensionado para mostrar hasta 18 caracteres.
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Caractersticas de la Agilent ChemStation Acerca del software de la Agilent ChemStation Todos los mensajes del sistema de informes de los libros de registro de la ChemStation en formato ampliado y las cadenas de informacin se imprimen en varias lneas. En determinados informes, por ejemplo el informe de secuencia, los nombres de ficheros pueden aparecer truncados para que encaje toda la informacin en la plantilla de informe.
Interfase de usuario del software

La interfase de usuario est organizada en ventanas que agrupan las funcionalidades del software de acuerdo con las tpicas tareas analticas. Las tres ventanas estndar siguientes estn presentes en todas las configuraciones: la pantalla Method and Run Control (Control del mtodo y del anlisis) para controlar y adquirir datos del instrumento, la pantalla Data Analysis (Anlisis de Datos) para revisar y reevaluar datos que han sido adquiridos, la pantalla Report Designer (Diseador de Informes) para disear informes especficos, y Habr pantallas adicionales si se han adquirido mdulos de evaluacin de datos o para ciertas configuraciones instrumentales que soportan procedimientos de verificacin y diagnsticos del instrumento. Puede instalarse una pantalla de ChemStation Companion si se desea que los operadores analicen muestras a partir de una tabla preconfigurada fcil de utilizar. Cada ventana consta de una serie de elementos estndar que incluyen mens y barras de herramientas. La barra de herramientas estndar proporciona un acceso rpido a la informacin comn del sistema como mtodos y secuencias. La ventana Method and Run Control incorpora adems una barra de estado del sistema, un rea de informacin de la muestra, que puede configurarse para un slo anlisis o para anlisis automatizados y un diagrama esquemtico de la interfase del instrumento para configuraciones GC, CE y LC. Esta estructura utiliza puntos que permiten el acceso rpido a los parmetros del instrumento y una revisin grfica animada del estado de cada anlisis en curso. El diagrama esquemtico del instrumento puede desactivarse si no se necesita, para ahorrar memoria y otros recursos de Windows.
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Caractersticas de la Agilent ChemStation Acerca del software de la Agilent ChemStation La ventana Data Analysis ampla la barra de herramientas estndar a modos especficos de anlisis de datos que incluyen integracin, calibracin, elaboracin de informes, anotaciones, comparacin de seales y modos especializados adicionales si estn instalados los mdulos adecuados. Cada uno de los modos de anlisis de datos est soportado por un grupo de herramientas especfico. La ventana Report Designer (Diseador de Informes) permite al usuario definir grficamente el formato de un determinado estilo de informe de una manera orientada hacia objetos grficos. Tambin utiliza un grupo de herramientas especficas para esta tarea.
Adquisicin de datos
El estado del instrumento se monitoriza continuamente y se actualiza en pantalla junto con el tiempo de anlisis transcurrido, tanto si el software est visible como si est iconizado. Todo lo que ocurre durante el anlisis, incluido cualquier error y las condiciones instrumentales al principio y al final del anlisis, se registran en el sistema, y un extracto del registro se almacena con cada fichero de datos. Las condiciones instrumentales, como flujo, temperatura, presin y composicin del disolvente para cromatgrafos de lquidos, pueden ser registradas y almacenadas con cada fichero de datos. Estos parmetros pueden visualizarse e imprimirse para atestiguar la calidad de cada anlisis. La naturaleza exacta de los parmetros registrados depende tanto de la tcnica como de las capacidades del instrumento configurado. Pueden utilizarse una o ms ventanas para monitorizar los datos que estn siendo adquiridos por el instrumento, en tiempo real. Los datos se presentan en unidades reales de medida como mUA, voltios, grados o bares. Cada ventana puede mostrar mltiples seales cromatogrficas/electroferogrficas o parmetros instrumentales, como presin, superpuestos. Los parmetros de visualizacin por defecto pueden ser ajustados y recordados por el sistema de manera que los usuarios pueden fijar sus propios valores como los de defecto. La ventana tiene capacidad de ampliarse y el cursor puede utilizarse para visualizar la respuesta de una seal especfica en cualquier punto de tiempo. Pueden utilizarse todas las funciones de la Agilent ChemStation durante el anlisis, a travs de la copia off-line.
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Caractersticas de la Agilent ChemStation Acerca del software de la Agilent ChemStation Existe un comando snapshot (instantneo) disponible para los usuarios que deseen iniciar el procesado de datos antes de que termine el anlisis. El formato de las ventanas de informacin de las seales y de estado, incluidos los componentes del diagrama esquemtico de la interfase del instrumento, se salvan automticamente. Para ms informacin sobre la adquisicin de datos, consultar el Captulo 3, Adquisicin de datos y la ayuda en lnea.
Anlisis de datos Visualizacin

La ventana Data Analysis ampla la barra de herramientas estndar con funciones de anlisis de datos agrupadas por tareas como integracin, calibracin, informes, anotaciones y comparacin de seales. Son posibles las siguientes operaciones grficas: visualizacin de una o mltiples seales seleccionable cuando se carga el cromatograma/electroferograma, superposicin de cromatograma/electroferograma de diferentes muestras, resta de un cromatograma/electroferograma de otro, alineamiento grfico vertical y horizontal de las seales, como ayuda para la comparacin visual, inversin o reflexin de seal, como ayuda para la comparacin visual, funciones de ampliacin (zoom) y desplazamiento grfico, ajuste de los atributos de visualizacin que incluyen marcas de integracin, lneas de base, ejes, tiempos de retencin/migracin y nombres de los compuestos (el usuario tambin puede seleccionar el tipo de letra para el RT y las etiquetas, ajustar el tamao y la orientacin de la visualizacin, seleccionar visualizacin superpuesta o separada y seleccionar factores de escala), la visualizacin del cromatograma/electroferograma puede incluir la superposicin grfica de los parmetros del instrumento, dependiendo de la capacidad del instrumento configurado, pueden aadirse interactivamente anotaciones definidas por el usuario, seleccionado el tipo de letra, tamao, rotacin y color del texto (una vez definidas, las anotaciones pueden moverse, editarse o borrarse, grficamente),
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Caractersticas de la Agilent ChemStation Acerca del software de la Agilent ChemStation copiar las ventanas al portapapeles de Windows tanto en formato metafile como bitmap, una funcin pick mode para visualizar los valores de datos individuales en unidades del detector, y exportar puntos digitalizados de tiempo/intensidad al portapapeles de Microsoft Windows.
Anlisis de datos Integracin

El algoritmo de integracin de la ChemStation es la segunda revisin de una nueva generacin que pretende mejorar la resistencia, fiabilidad y facilidad de uso.
Capacidades del integrador

N O TA
Casi todas las pantallas reflejan la posibilidad de usar nombres de fichero largos. Las barras de herramientas que muestran nombres de ficheros de datos/secuencias/mtodos se han redimensionado para mostrar hasta 18 caracteres.
Los algoritmos del integrador incluyen las siguientes capacidades clave: posibilidad de integracin automtica para configurar los parmetros iniciales del integrador, la capacidad de definir tablas individuales de parmetros para cada seal cromatogrfica/electroferogrfica, si se utilizan mltiples seales o ms de un detector, definicin interactiva de los parmetros de integracin que permite a los usuarios seleccionar grficamente los tiempos de los parmetros, integracin grfica manual o elstica de cromatogramas/electroferogramas que requieren la interpretacin humana (estos parmetros pueden registrarse en el mtodo y ser utilizados en la operacin automatizada), visualizacin e impresin de resultados de integracin, y capacidad de integrar al menos 1000 picos por cromatograma/electroferograma.
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Caractersticas de la Agilent ChemStation Acerca del software de la Agilent ChemStation definiciones de parmetros del integrador para fijar o modificar los valores bsicos de rechazo por rea, rechazo por altura, anchura de pico y sensibilidad de pendiente, parmetros de control de la lnea de base, como lnea de base forzada, sostener lnea de base, lnea base en todos los valles, lnea base en el siguiente valle, fijar lnea base hacia detrs desde el final del pico actual, control de suma de rea, reconocimiento de picos negativos, proceso de divisin tangencial que incluye comandos de definicin del pico de disolvente, y capacidad de definicin de tablas de parmetros individuales para clculos de divisin tangencial frontal/de cola para toda la seal cromatogrfica/electroferogrfica, parmetros de correccin de la lnea base (independientes de la seal), comandos de control que definen rangos de tiempo de retencin/migracin para la operacin del integrador, la asignacin de hombros de picos mediante el uso de una segunda derivada o grado de clculo de curvatura, muestreo mejorado de puntos de datos no equidistantes para un mejor comportamiento con ficheros de datos LC-DAD reconstruidos a partir de espectros DAD. El algoritmo del integrador se describe con ms detalle en el Captulo 4, Integracin.
Anlisis de datos Cuantificacin

La ventana de anlisis de datos del modo de calibracin de la Agilent ChemStation permite visualizar simultneamente: la seal o seales que se estn calibrando con una indicacin de la ventana actual de tiempo de retencin/migracin del compuesto, la tabla de calibracin cuya visualizacin puede configurarse desde una seleccin completa de parmetros de calibracin, y la curva de calibracin del compuesto que se est calibrando.
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Todas las ventanas del modo de calibracin estn vinculadas, de manera que los cambios en una de ellas se reflejan automticamente en el resto. Este modo permite la seleccin grfica y la modificacin de los datos. La cuantificacin se basa en clculos de %, % normalizado, patrn externo, % de patrn externo, patrn interno y % de patrn interno, calculados sobre rea o altura de pico. Las calibraciones pueden ser multinivel, e incluir mltiples patrones internos. Los historiales de calibracin se salvan automticamente y pueden utilizarse para ponderar los clculos de recalibracin. Para ms informacin sobre la calibracin y cuantificacin, consultar el Captulo 7, Calibracin.
Anlisis de datos Informes estndar

Un grupo estndar de estilos de informes definibles por el usuario para informes de muestra pueden seleccionarse desde la pantalla de especificacin de informe. Cada tipo de informe estndar contiene grupos de informacin estndar y opcionales. Para ms informacin sobre los estilos de informes disponibles, consultar el Captulo 10, Utilizacin de los informes de la ChemStation.
Anlisis de Datos Informes especializados

Tambin se incluyen en la Agilent ChemStation funciones avanzadas para las aplicaciones que requieran informes ms especializados. Estos incluyen estadsticas sobre la calidad de la separacin, informes que incluyen anlisis de tendencias entre muestras y formatos definidos por el usuario.
Informes de idoneidad del sistema

Los informes de idoneidad del sistema permiten a los usuarios incluir los parmetros de rendimiento del sistema para cada anlisis. Hay tres variaciones o estilos de estos informes.
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Caractersticas de la Agilent ChemStation Acerca del software de la Agilent ChemStation El Informe Estndar del rendimiento imprime los parmetros para mtodos no calibrados, que incluyen: tiempo de retencin/migracin, k, rea del pico, altura del pico, simetra, anchura verdadera del pico a media altura, eficacia en nmero de platos, resolucin y selectividad. Para mtodos calibrados, el nombre y la cantidad de compuesto sustituyen al rea de pico, altura y columnas de selectividad. La cabecera del informe incluye la cabeza y pie de pgina estndar, informacin de la muestra, parmetros de la columna analtica y, opcionalmente, un grfico del cromatograma/electroferograma. El estilo de rendimiento y ruido (Performance and Noise) aade una evaluacin del ruido de la seal, con un mximo de siete rangos de evaluacin definidos por el usuario, a los datos del estilo de informe de rendimiento (Performance). Los parmetros de ruido aparecen como relaciones entre la seal y el ruido para cada pico o compuesto calibrado y como una tabla de ruido para cada seal. Cada una de estas tablas incluye el ruido calculado mediante la desviacin estndar de seis medidas, pico a pico y mtodos ASTM, as como la desviacin y la deriva. El estilo de rendimiento mejorado (Extended Performance) aade la representacin grfica de cada pico, mostrando el tiempo inicial y final, media anchura y lnea de base. Este estilo incluye los siguientes parmetros adems de los que aparecen en los informes de rendimiento estndar: rea, altura y cantidad, desviacin, exceso, factor de cola usp, intervalo de tiempo entre puntos y nmero de puntos sobre el pico, momentos estadsticos (M0 a M4),
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anchura de pico a media altura calculada por los mtodos verdadero, cinco sigma, de tangente y de cola, platos/columna y platos/metro calculadas por los mtodos de anchura de pico a media altura, cinco sigma, de tangente y de estadstica. Los usuarios pueden definir sus propios rangos de evaluacin de ruido y los lmites aceptables para estos criterios. Los valores que caigan fuera de los lmites aceptables definidos por el usuario, se indican en el informe. Para ms informacin sobre los clculos de idoneidad del sistema, consultar el Captulo 11, Evaluacin de la idoneidad del sistema.
Informes resumen de secuencia

Los informes resumen de secuencia se generan al final de una serie de anlisis automatizados. Su rango de aplicacin va desde un breve resumen de las muestras analizadas, a una representacin grfica detallada de repetitividad o tendencia del anlisis de los parmetros seleccionados por el usuario, entre diferentes muestras analizadas con el mismo mtodo. Los informes constan de hasta nueve categoras de informacin: una pgina de encabezamiento que puede ser definida por el usuario, la configuracin del instrumento, incluyendo nmeros de revisin y especificaciones de la columna analtica o capilar para sistemas LC o CE, la lista de muestras programadas para analizar; la secuencia, una copia impresa del registro que indica lo analizado y documenta las etapas de adquisicin y procesado de datos, as como cualquier parmetro inesperado, una copia impresa de los mtodos analticos, informes individuales de muestra, estadsticas sobre las muestras de calibracin, estadsticas sobre las muestras desconocidas, una pgina sumario que puede ser un resumen de la muestra, una lnea de informacin por anlisis, o un resumen de un compuesto con una pequea tabla resumen del compuesto adems del de la muestra. Para ms informacin sobre los informes resumen de secuencia, consultar la ayuda en lnea e Informes resumen de secuencia en la pgina 222.
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Informes personalizados
En la Agilent ChemStation se incluye una ventana para el diseo de informes personalizados para los usuarios que deseen definir el contenido exacto de sus informes. El usuario define grficamente un formato que puede incluir informacin general de la muestra, seal, de la integracin y resultados analticos cuantitativos. El usuario puede definir elementos individuales como texto, tablas y grficos, organizarlos en secciones de informacin y ajustar grficamente su posicin relativa, tamao y orientacin de cada uno de ellos. Las secciones individuales pueden aadirse, borrarse, reordenarse y relacionarse. El usuario puede definir cabeceras y pies de pgina, sellos de hora para el informe y numeracin de pginas en el formato pgina x de y. La informacin incluida en el informe puede ser cualquier parmetro de la Agilent ChemStation o definido por el usuario. Una vez diseado el informe, puede ser asociado con un determinado mtodo para ser el informe por defecto para ese tipo de anlisis en particular. Los informes personalizados pueden enviarse a pantalla, a impresora o a un fichero. Los informes en pantalla incluyen grficos. Para ms informacin sobre el formato de informes, consultar el sistema de ayuda en lnea.
Informes de los Cuadros de Control

Un cuadro de control viene incluido con el software de la Agilent ChemStation. Una vez instalado y seleccionado, el usuario podra seguir automticamente un parmetro seleccionado de un compuesto cada vez que se ejecuta un mtodo. Estos parmetros incluyen: Cantidad, Factor de Respuesta, Tiempo de retencin/migracin, y rea. Para ms informacin sobre estos informes Personalizados y de Cuadros de Control, consultar la ayuda en lnea.
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Utilidades y compatibilidades
General
La Agilent ChemStation puede importar y exportar ficheros de datos en el formato cromatogrfico ANDI (Analytical Data Interchange) de la Analytical Instrument Association (AIA), revisin 1.0, copyright 1992. Importar datos est soportado a nivel de cumplimiento uno (informacin de la muestra y datos de seal) y exportar datos, al nivel dos de cumplimiento (informacin de la muestra, datos de seal y resultados de integracin). La Agilent ChemStation incluye comandos y funciones para soportar el intercambio dinmico de datos (DDE) estndar de la plataforma Microsoft Windows como cliente DDE y como servidor DDE. El grupo de comandos incluye aquellos para establecer y terminar conexiones, transferir informacin en ambas direcciones y ejecutar funciones remotas.
Personalizacin
La Agilent ChemStation puede personalizarse utilizando el potente grupo de comandos. Estos comandos pueden agruparse para ejecutar automticamente una funcin especfica; tal grupo se denomina macro. Los usuarios, al escribir macros, pueden definir sus propias variables, incluidas en programaciones condicionales o ciclos, realizar I/O fsicas que incluyen manejo de ficheros e interaccin de usuario, ligar sus macros y organizar e intercambiar datos con otras aplicaciones MS-DOS o Microsoft Windows. Para ms informacin sobre la personalizacin, consultar la Gua de programacin de macros disponible en la ayuda en lnea.
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Automatizacin
La Agilent ChemStation puede ejecutar secuencias multimtodo. El grupo de parmetros de secuencia puede definirse para utilizar ficheros generados automticamente o numerados secuencialmente, con un prefijo de hasta quince caracteres. El usuario puede elegir realizar anlisis completos o slo secuencias de reproceso de datos y puede tambin seleccionar uno de una serie de comandos de desconexin especfica de la tcnica, o una macro de desconexin definida por el usuario que se ejecute cuando la secuencia termina por error o despus de que todos los anlisis estn completos. La tabla de secuencia, o lista de anlisis a realizar, se crea en una interfase de usuario del tipo hoja de clculo y permite especificar los nmeros de vial y los nombres de muestra, mtodos de anlisis, parmetros de cuantificacin de muestras que incluyen la cantidad de muestra, un multiplicador y un factor de dilucin, especificaciones de calibracin, el parmetro de intercambio de datos LIMSID y el nmero de inyecciones repetidas. Dependiendo de los instrumentos y mdulos configurados, habr ms campos accesibles; por ejemplo, si un sistema LC Agilent 1100 incluye un colector de fracciones, en la tabla de secuencia aparecer la columna "Fract. Start". El usuario puede configurar el aspecto de la tabla de secuencia. El usuario puede moverse por las celdas en la tabla y copiar, cortar o pegar cada una de ellas, o las filas completas o serie de filas, para crear las secuencias de forma eficaz y rpida. Las muestras pueden identificarse en la tabla de secuencia como muestras de tipo desconocido, de calibracin o de control. El tipo de muestra determina cualquier tratamiento especial de evaluacin de datos de la muestra: las muestras desconocidas son evaluadas y reportadas de acuerdo con las especificaciones del mtodo, las muestras de calibracin se utilizan para recalibrar el componente de cuantificacin del mtodo, como se describe a continuacin, y las muestras de control son evaluadas frente a los lmites para cada componente definido en el mtodo. Si los resultados caen fuera del rango especificado del parmetro, se interrumpir la ejecucin de la secuencia. Las muestras de calibracin pueden definirse como simples, cclicas o agrupadas. Simple significa que se realiza una recalibracin cada vez que una muestra de calibracin se define en la secuencia. Las cclicas tienen lugar a intervalos definidos durante los anlisis de una serie de muestras desconocidas. En las agrupadas, se analizan una serie de muestras
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Caractersticas de la Agilent ChemStation Acerca del software de la Agilent ChemStation desconocidas entre dos grupos de calibracin. Los informes cuantitativos de las muestras desconocidas se calculan utilizando una tabla de calibracin promediada entre los dos grupos de calibracin. La funcionalidad de la secuencia parcial permite a los usuarios visualizar el orden de ejecucin de la secuencia y seleccionar entradas individuales de muestras para reanalizar o reevaluar. Cuando se reevalan datos ya adquiridos, los usuarios pueden especificar si el reproceso utiliza los datos originales de cuantificacin de la muestra o los nuevos datos introducidos en la tabla de muestra de secuencia. Las secuencias pueden interrumpirse para analizar la inyeccin de muestras prioritarias por otro mtodo, y reiniciarse a continuacin sin afectar a la automatizacin. Las muestras pueden ser aadidas a la tabla de secuencia mientras se est ejecutando la secuencia. Pueden imprimirse tanto las tablas de secuencia como las de secuencia parcial. Para ms informacin sobre las secuencias, consultar el Captulo 8, Automatizacin y el sistema de ayuda en lnea.
Buenas prcticas de laboratorio

La Agilent ChemStation est desarrollada segn patrones internacionalmente reconocidos y contiene un nmero de funciones que ayudan a los usuarios a trabajar en un entorno regulado. Estas funciones se refieren al rea de especificacin del mtodo completo y verificacin de que los mtodos se ajustan al uso que se pretende de ellos, para controlar la operacin del sistema y asegurar la trazabilidad, originalidad y calidad de los datos.
Proceso de desarrollo
El Certificado de Validacin incluido con cada paquete de software documenta las etapas de desarrollo y las pruebas ejecutadas como parte del ciclo de desarrollo. El proceso de desarrollo est registrado con la norma de calidad ISO 9001. Est documentado junto con los protocolos de revalidacin in situ, en la Carpeta de validacin de la Agilent ChemStation para HPLC.
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Especificacin y uso del mtodo

Mtodos globales todas las especificaciones del instrumento y del anlisis de datos se almacenan juntas. Los mtodos incluyen informacin del rango de cada compuesto para controlar que los resultados de cuantificacin no se aplican fuera del rango calibrado. El registro de la historia del cambio del mtodo permite a los usuarios de un mtodo validado, grabar automticamente cmo y cundo cambi un mtodo. Los usuarios pueden, opcionalmente, aadir un comentario. El registro se almacena automticamente como parte de mtodo, en formato binario. Para evitar el acceso desautorizado a los registros, estn protegidos por el esquema de acceso del usuario, descrito posteriormente. El registro de la historia del cambio, puede visualizarse e imprimirse. Pueden asignarse lmites sobre una base compuesto-compuesto en cada mtodo, para ciertos parmetros cromatogrficos/electroferogrficos y de rendimiento del sistema, como se describe en la seccin de cuantificacin del anlisis de datos. Los resultados que exceden estos rangos se utilizan para controlar la ejecucin de secuencias automatizadas como se describe en la seccin de automatizacin. Se indican en el informe del anlisis correspondiente. Los informes de rendimiento o idoneidad del sistema (ver la seccin anterior de Informes), proporcionan un anlisis detallado de la calidad de separacin. La Agilent ChemStation puede configurarse para el acceso restringido a dos niveles, de operador y de administrador. Este nivel de administrador puede estar protegido por una clave y permite el acceso a todas las funciones de la Agilent ChemStation. El nivel de operador restringe el uso a las funciones clave y a la ejecucin de mtodos analticos definidos. El nivel de operario est orientado al uso en laboratorios de rutina y evita la modificacin y creacin de nuevos mtodos por parte de los usuarios.
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Robustez del mtodo

Los Informes resumen de secuencia (ver Anlisis de Datos Informes especializados en la pgina 31) proporcionan un medio para probar la robustez de los mtodos. Los informes con formato extendido para criterios seleccionados por el usuario, muestran grficos de tendencia y pueden utilizarse para determinar los lmites de operacin reales. Estos lmites pueden incorporarse al mtodo para asegurar, a travs del anlisis de muestras de control, que el mtodo funciona dentro de las especificaciones.
Operacin del sistema

El kit de verificacin de la Agilent ChemStation, que es parte del software estndar, comprueba automticamente la instalacin y operacin correcta de la seccin de evaluacin de datos, comparando los resultados generados cuando el test se ejecuta frente a valores conocidos ya registrados. El kit de verificacin permite a los usuarios definir sus propios ficheros de datos y mtodos, para ser la base del test.
Seguimiento, originalidad y calidad de los datos

El registro del anlisis proporciona un registro de la transaccin del sistema completo. Registra tambin cualquier evento inusual (como errores o cambios de parmetros durante el anlisis), as como las condiciones instrumentales antes y despus de cada anlisis. Con cada fichero de datos se salva una copia del extracto relevante del registro. Las condiciones instrumentales, como presin, flujo y temperatura, que se alcanzaron durante cada anlisis, tambin se registran, si el instrumento configurado soporta esta posibilidad. Estos datos pueden visualizarse grficamente con el cromatograma/electroferograma y mostrar las condiciones durante el anlisis, as como ser incluidas en el informe. Los mtodos salvados con el fichero de datos registran el mtodo en el momento del anlisis y permiten la reconstruccin completa de los datos reportados en una fecha posterior. El mtodo se salva al completarse todas las etapas analticas. Todos los informes tienen el sello de la hora y numeracin de las pginas (con estilo pgina x de y). El usuario puede seleccionar el nivel de detalle en cada informe, desde informes resumen simples a detalles completos del sistema (ver la seccin anterior sobre informes).
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Caractersticas de la Agilent ChemStation Acerca del software de la Agilent ChemStation Si se especifican como parte del mtodo GLP los Save register files, se salvarn todos los datos originales, incluyendo informacin de la muestra, mtodo de anlisis de datos, seales cromatogrficas/electroferogrficas, condiciones instrumentales, resultados de integracin y cuantificacin, datos de informe y el logbook del anlisis, en un fichero binario protegido. Se trata de un formato binario que no se puede editar y que asegura la originalidad de los resultados. El fichero incluye un esquema de revisin que indica si se han reprocesado los datos. Los tipos de las muestras de control pueden ser definidos en la tabla de secuencia y utilizados para comprobar automticamente el rendimiento del sistema frente a los resultados de muestras de control de calidad cuando el instrumento funciona de forma desatendida. Los resultados fuera del rango aceptable especificado por el usuario, detendrn la ejecucin automtica del instrumento.
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Caractersticas de la Agilent ChemStation Control del instrumento
Control del instrumento

La capacidad de control de las Agilent ChemStations puede ampliarse mediante la adquisicin de mdulos adicionales que permiten configurar mltiples instrumentos y tcnicas mixtas. Para ms informacin, consultar el (los) manual(es) suministrados con los mdulos adicionales de la ChemStation.
Conexin en red
Se ha probado con xito la compatibilidad del software con los productos de red de Agilent LanManager, Microsoft Windows 2000 y Microsoft Windows XP Professional, basados en la especificacin IEEE 802.3 CSMA/CD. Ser compatible con cualquier software de la red compatible con las reglas de programacin de Microsoft Windows. Estos productos permiten a la Agilent ChemStation compartir dispositivos como plotters e impresoras con otros ordenadores del laboratorio, as como compartir informacin como ficheros de datos y mtodos.
Cliente/Servidor
El software de la Agilent ChemStation puede instalarse en un servidor de red adecuado y cargarse en los PCs del cliente cuando se requiera. Cada configuracin especfica de cliente asegura un entorno adecuado para diferentes tcnicas y usuarios individuales mientras que la instalacin de software centralizada mitiga la carga de manejar muchas copias de la misma instalacin de la Agilent ChemStation en un entorno de trabajo.
Control del instrumento basado en la red de rea local (LAN)

El software de la Agilent ChemStation proporciona el control del instrumento basado en la red de rea local (LAN) y la adquisicin de datos para el GC Agilent 6890, el modulo de control A/D Agilent 35900E y el LC Agilent 1100. Los instrumentos se pueden controlar y monitorizar fcilmente conectndolos a una red de rea local (LAN) donde reside el PC de la Agilent ChemStation. Esta disposicin permite al PC estar localizado lejos de los instrumentos que controla.
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Caractersticas de la Agilent ChemStation Documentacin
Documentacin
El grupo de documentacin contiene secciones especficas sobre: instalar y aprender el software Agilent ChemStation, utilizar el software Agilent ChemStation, conocer los principios de cmo funciona el software, y personalizar la Agilent ChemStation.
Instalacin y aprendizaje
Cada producto Agilent ChemStation se acompaa de un manual de instalacin que incluye detalles de las etapas clave respecto a los requisitos de hardware y software, instalacin de la interfase del instrumento, instalacin y cualificacin de la instalacin de la Agilent ChemStation. El manual de instalacin es especfico de la configuracin adquirida y puede incluir diagnsticos, registros del sistema y consejos sobre el mantenimiento.
Utilizacin del software

Dos categoras adicionales de informacin en lnea estn diseadas para el usuario de rutina. La ChemStation incluye un sistema de ayuda en lnea ordenado, con estilo Windows y dependiente del contexto. Este sistema ofrece explicaciones detalladas de cada pantalla y el significado de los parmetros en esa pantalla. Las explicaciones estn acompaadas por grficos, donde corresponde, y pueden copiarse en el portapapeles de Windows para incorporarlas en la documentacin del usuario, o para imprimirlas. La seccin How To de la ayuda en lnea tambin incluye una lista de control de las tareas de cromatografa ms complejas, especficas y comunes, para ayudar a los usuarios menos experimentados a configurar el sistema correctamente. Estas listas de control estn vinculadas directamente con la informacin de ayuda en lnea.
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Caractersticas de la Agilent ChemStation Documentacin
Familiarizacin con los principios

El manual Familiarizacin con la Agilent ChemStation documenta los principios de la operacin del software y los algoritmos utilizados en la manipulacin de datos.
Personalizacin
Los usuarios que deseen personalizar la operacin de la Agilent ChemStation, o que quieran incorporar funciones adicionales, pueden hacerlo escribiendo macros. El manual de referencia, Gua de programacin de macros, disponible en la ayuda en lnea, incluye un conjunto de ejemplos acompaados por una descripcin completa de los tipos y estructuras de datos internos. El fichero de ayuda de comandos, al que se accede directamente desde el men de ayuda de la Agilent ChemStation o el cuadro de dilogo Show Command, es la referencia de funcin del programador. Incluye la sintaxis y explicaciones del parmetro con ejemplos de macros que ilustran el uso de muchos de los comandos. Por estar en lnea, los usuarios pueden copiar los ejemplos y la sintaxis del comando directamente en sus propios ficheros de macro.
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Caractersticas de la Agilent ChemStation La estructura de directorios de la ChemStation
La estructura de directorios de la ChemStation

El siguiente ejemplo muestra la estructura de directorios de la ChemStation. Consta de directorios genricos que son compartidos por todos los instrumentos configurados y directorios especficos de los instrumentos. El programa de instalacin del software crea un subdirectorio (por defecto CHEM32) para cada instrumento configurado, con el nmero correspondiente. Dentro de este subdirectorio, se almacenan, por defecto, los datos, mtodos y secuencias para este instrumento.
CHEM32 REPSTYLE CORE
PICTURES LANGUAGE HELPENU 1024 800
LANGUAGE SYS HELPENU LANGUAGE
BACKUP LC GC CE DRIVERS HELPENU LANGUAGE 800 TEMP 1 DATA METHODS SEQUENCE VERIFY SPECLIBS DEMO
Figura 1 44
Estructura de directorios de la ChemStation Conocer la Agilent ChemStation
Caractersticas de la Agilent ChemStation La estructura de directorios de la ChemStation Los subdirectorios de la Agilent ChemStation son los siguientes: Tabla 3
Directorio CHEM32
Subdirectorios de la ChemStation
Contenidos Comprende programas para configurar e iniciar el software de la ChemStation. Debe formar parte de la PATH. Este directorio es creado automticamente por el programa de instalacin, a menos que se d otra alternativa. Contiene las plantillas definidas para los informes. Consta de los componentes principales del software compartidos por todas las configuraciones de instrumentos cromatogrficos/electroferogrficos. Es el directorio de trabajo de la Agilent ChemStation. Contiene los grficos necesarios para la Agilent ChemStation. Utilizado por el cdigo especfico de lenguaje de esta parte del software. Comprende los ficheros de inicializacin para la interfase grfica de usuario. No cambiar. Contiene los componentes genricos compartidos por todas las configuraciones de los instrumentos cromatogrficos/electroferogrficos. \chem32\sys debe formar parte del PATH. Los programas de instalacin los crean, por defecto. Utilizado por la versin inglesa-US de los ficheros de ayuda de la parte principal del software. Utilizado por otras partes, especficas del lenguaje. Para las copias de seguridad de los ficheros antiguos durante la instalacin. Contiene los controladores de los instrumentos configurados. Para el instrumento configurado (1 a 4). Consta de cinco subdirectorios: DATA, METHODS, SEQUENCE, VERIFY y TEMP. Contiene todos los directorios con los resultados de los anlisis. Tambin puede contener ms subdirectorios si se estructura el disco con subdirectorios, definindolos utilizando los cuadros de dilogo Sample Information o Sequence Parameters. Los directorios de resultados se identifican por un nombre con la extensin.D. Para ms informacin sobre la estructura de los ficheros de datos, consultar Ficheros de datos en la pgina 65. Contiene todos los directorios de mtodos con la extensin .M. Para ms detalles sobre contenidos, consultar Estructura del directorio de mtodos en la pgina 56. Comprende las tablas de secuencia. Los ficheros de estos directorios tienen la extensin .S.
REPSTYLE CORE
PICTURES LANGUAGE 1024 and 800 SYS
HELPENU LANGUAGE BACKUP DRIVERS 1 DATA
METHODS
SEQUENCE
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Caractersticas de la Agilent ChemStation La estructura de directorios de la ChemStation Tabla 3

Directorio VERIFY
Subdirectorios de la ChemStation (continuacin)

Contenidos Contiene ficheros de datos, mtodos y los resultados del proceso de datos almacenados en ficheros registro (.REG). Estos ficheros ejecutan el procedimiento de verificacin de la Agilent ChemStation descrito en la ayuda en lnea (Online Help). Para cada test de verificacin se utiliza un grupo de ficheros de datos, mtodos y registro El subdirectorio TEMP contiene los ficheros de trabajo temporales y los ficheros del logbook. Por ejemplo, para el Instrumento 1 el logbook en lnea se denomina INSTR1.LOG y el logbook no en lnea se denomina INSTR1-2.LOG. Cdigo especfico de instrumento como los ficheros INI. Estos directorios slo aparecen si est instalado un instrumento de este tipo. Comprende las libreras espectrales. (Agilent ChemStations slo para sistemas 3D LC, LC/MS).
TEMP
LC, GC, CE SPECLIBS
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2 Mtodos
En qu consiste un mtodo? 48 Partes de un mtodo 49 Method Information (Informacin del mtodo) 49 Instrument Control (Control del instrumento) 49 Data Analysis (Anlisis de datos) 50 Run-Time Checklist (Lista de control del anlisis) 51 Estado de los mtodos 52 Mtodo grabado (Stored) 52 Mtodo activo (Current) 52 Creacin de mtodos 53 Edicin de mtodos 54 Partes del mtodo a editar 55 Estructura del directorio de mtodos 56 Qu ocurre cuando se ejecuta un mtodo? 57 Comando o macro pre-anlisis 58 Adquisicin de datos 58 Operacin del mtodo 58 Anlisis de datos 59 Anlisis de datos personalizado 60 Salvar datos GLP 60 Comando o macro postanlisis 61 Salvar copia del mtodo con datos 61 Resumen del funcionamiento del mtodo 62
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Mtodos En qu consiste un mtodo?
En qu consiste un mtodo?
Un mtodo comprende todos los parmetros de adquisicin y anlisis de datos de una muestra determinada, junto con las tareas pre y post anlisis, si fueran necesarias.
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Mtodos Partes de un mtodo
Partes de un mtodo
Los mtodos se identifican mediante un nombre de hasta ocho caracteres alfanumricos. El nombre del fichero siempre tiene la extensin .M, que lo identifica como mtodo. Los mtodos se almacenan como directorios MS-DOS que contienen ficheros individuales relativos a los componentes del mtodo. Cada mtodo consta de cuatro componentes: informacin del mtodo, control del instrumento, anlisis de datos, y lista de control del anlisis
Method Information (Informacin del mtodo)

Esta seccin se utiliza para incluir la informacin sobre el mtodo.
Instrument Control (Control del instrumento)

Define los parmetros que controlan el instrumento o sus componentes. Con un LC, parmetros como la composicin de la fase mvil, velocidad de flujo, volumen de inyeccin, longitud de onda de deteccin, etc., controlan la bomba, inyector y detector. En un GC, la temperatura, presin del inyector y el flujo en la columna empaquetada, etc. controlan el instrumento.
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Data Analysis (Anlisis de datos)

Define los parmetros que controlan el procesado de datos.
Signal Details (Detalles de la seal)

Define las seales y las propiedades utilizadas para la evaluacin de datos.
Parmetros de integracin
Define los parmetros programados que tendrn lugar en momentos de retencin/migracin especficos en un cromatograma/electroferograma. Estos parmetros pueden utilizarse para cambiar el modo de integracin.
Define los parmetros del procesamiento de datos asociados a la identificacin de picos en el cromatograma/electroferograma.
Peak Quantification (Cuantificacin de picos)

Define los parmetros del procesado de datos que afectan a los clculos de cuantificacin, que determinan la cantidad o concentracin del componente de la muestra correspondiente a cada pico.
Calibration and Recalibration (Calibracin y Recalibracin)

Define los parmetros del procesado de datos que afectan a la calibracin y a la frecuencia con que se realiza.
Report (Informe)
Define el formato del informe que se imprime despus de un anlisis.
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Run-Time Checklist (Lista de control del anlisis)

Define qu partes del mtodo se ejecutan al realizar un anlisis. Puede utilizarse la lista de control del anlisis para: adquirir, almacenar y procesar datos para generar un informe, ejecutar slo una parte del mtodo, adquirir y almacenar datos sin analizarlos, analizar de nuevo ficheros de datos existentes, usar macros propias para el anlisis de datos, procesado pre y postanlisis, salvar los resultados de los anlisis en un registro para propsitos GLP.
51
Mtodos Estado de los mtodos
Estado de los mtodos

Un mtodo puede tener dos estados.
Mtodo grabado (Stored)

Es un mtodo grabado en el disco del ordenador. Estos mtodos constan de un nombre de hasta ocho caracteres alfanumricos seguidos de la extensin .M.
Mtodo activo (Current)

Cuando un mtodo almacenado se recupera del disco, se convierte en activo. Siempre hay un mtodo activo en memoria. Cuando la ChemStation se inicia, se carga el mtodo por defecto que suministra Agilent Technologies como parte del proceso de inicializacin. Por ejemplo, este mtodo puede ser: DEF_LC.M para un instrumento LC, o DEF_GC.M para un instrumento GC. Se sita en memoria una copia del mtodo por defecto convirtindose en el mtodo activo. En este momento puede cargarse un mtodo diferente, que ser, entonces, el activo.
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Mtodos Creacin de mtodos
Creacin de mtodos
La creacin de un nuevo mtodo siempre consiste en modificar el mtodo activo y salvar los cambios bajo un nuevo nombre. Es importante tener en cuenta que cuando el mtodo activo se cambia, la versin grabada en el disco permanece sin modificar hasta que se salva. Hay varias posibilidades para crear un mtodo. Se puede crear un mtodo para realizar una o todas las partes de un anlisis. Por ejemplo, se puede crear un mtodo para realizar nicamente la adquisicin de datos. Cuando est preparado para analizar los datos y generar un informe de bsqueda de libreras, puede modificarse de nuevo el mtodo para realizar las tareas del procesado de datos.
PRECAUCIN
No borrar el mtodo por defecto (DEF_LC.M, o DEF_GC.M). Estos ficheros se utilizan como plantillas para crear nuevos mtodos.
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Mtodos Edicin de mtodos
Edicin de mtodos
Pueden editarse los mtodos existentes utilizando la opcin Edit Entire Method del men Method. Pasar por todos los cuadros de dilogo del mtodo y al final podr salvarlo. Este proceso se muestra a continuacin (Figura 2):
Mtodo en el disco
Cargar el mtodo
El mtodo se carga en memoria y se convierte en el mtodo activo
Seleccionar Edit Entire Method en el men Method
Editar el mtodo
Salvar el mtodo como
Salvar con un nuevo nombre
Salvar con el mismo nombre
Se crea el nuevo mtodo en el disco
Sustituye al mtodo activo
Figura 2
Edicin de mtodos
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Mtodos Edicin de mtodos
Partes del mtodo a editar

Cada mtodo consta de cuatro secciones que pueden editarse por separado. Algunos de los apartados siguientes se refieren a cuadros de dilogo especficos, otros son descripciones generales. Method Information (Informacin del mtodo) consiste: en una descripcin del mtodo. Instrument Control (Control del instrumento) depende de la configuracin y puede consistir en, por ejemplo: parmetros del horno, parmetros del inyector y parmetros del detector. Data Analysis (Anlisis de datos), consiste en: detalles de la seal, parmetros de integracin, parmetros de cuantificacin, parmetros de calibracin y parmetros del informe. Run Time Checklist (Lista de control del anlisis) consta de: las partes del mtodo que se van a ejecutar.
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Mtodos Estructura del directorio de mtodos
Estructura del directorio de mtodos

Un mtodo consta de un grupo de ficheros almacenados en un directorio. El subdirectorio methods comprende todos aquellos que tienen una extensin .M. Los ficheros de mtodo con la extensin .MTH contienen grupos de parmetros en formato ASCII. El fichero INFO.MTH comprende los parmetros de control del mtodo. Los ficheros de mtodos que contienen los parmetros del instrumento tienen el nombre del mdulo analtico correspondiente. Por ejemplo: Tabla 4 Ejemplos de ficheros de mtodos
Contiene el mtodo de adquisicin del 1090. Contiene el mtodo de adquisicin del 5890. Contiene el mtodo de adquisicin para electroforesis capilar. Contiene el mtodo de adquisicin del HP 1090. Contiene el mtodo de adquisicin del detector de fluorescencia HP1046. Contiene el mtodo de adquisicin del detector electroqumico HP1049. Contiene el mtodo de adquisicin del Agilent 35900. Si estn configurados dos instrumentos idnticos, los ficheros del mtodo son ADC1.MTH, ADC2.MTH. Para evaluacin de datos. Contiene los parmetros para el inyector automtico Agilent 1100. Los ficheros de mtodos para los dems mdulos Agilent 1100 siguen el mismo convenio lxxx1.reg donde xxx son las siglas del mdulo.
LC1090.MTH GC5890.MTH HPCE1.MTH DAD1.MTH FLD1.MTH ECD1.MTH ADC1.MTH DAMETHOD.REG LALS1.REG
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Mtodos Qu ocurre cuando se ejecuta un mtodo?
Qu ocurre cuando se ejecuta un mtodo?

El cuadro de dilogo Run Time Checklist especifica las partes del mtodo a ejecutar cuando se inicia un anlisis. Hay ocho partes en la lista de control del anlisis (Run Time Checklist): comando o macro preanlisis, adquisicin de datos, anlisis de datos estndar, anlisis de datos para la segunda seal (slo GC), anlisis de datos personalizado, salvar datos GLP, comando o macro postanlisis, y salvar copia del mtodo con datos. Cuando se ejecuta un mtodo, se ejecutan las partes del mtodo definidas en el cuadro de dilogo Run Time Checklist.
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Operacin del mtodo

La Figura 3 muestra el estado de la ChemStation durante la operacin del mtodo, con todas las partes de la Run Time Checklist seleccionadas.
Estado de ChemStation Macro postanlisis Evaluacin datos Inyeccin y anlisis Macro preanlisis Preanlisis Fichero de datos iniciales cerrado Ejecucin del mtodo a travs de la ChemStation Tiempo Niveles estado Inyeccin
Figura 3
Operacin del Mtodo
Comando o macro pre-anlisis

Si se especifica un comando o macro pre-anlisis, se ejecuta antes de iniciarse el anlisis. Esta parte se utiliza normalmente para personalizar el sistema, junto con otros paquetes de software.
Adquisicin de datos
Todos los parmetros se fijan con las condiciones iniciales del mtodo activo. Si se especific, se ejecuta un programa de inyeccin y se inyecta muestra del vial definido actualmente.
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Mtodos Qu ocurre cuando se ejecuta un mtodo? La pantalla muestra el progreso del anlisis, incluyendo informacin cromatogrfica/electroferogrfica y datos espectrales, si los hubiera. Se adquieren los datos y se almacenan en un fichero.
Anlisis de datos
Cuando se alcanza el tiempo final, el anlisis acaba y todos los datos primarios se almacenan en el disco duro. La parte Data Analysis del software se inicia, una vez almacenados todos los datos iniciales.
Integracin
Los objetos del cromatograma/electroferograma de la seal se integran segn se indica en el cuadro de dilogo Integration Events. Se determinan el inicio y el mximo del pico, el tiempo de retencin/migracin y el final del pico. Se define la lnea de base bajo cada pico, para determinar la altura y el rea. Se generan los resultados de integracin en la lista Integration Results.
Identificacin y cuantificacin del pico

Utilizando los tiempos de retencin/migracin y los cualificadores opcionales de picos, el software identifica los picos mediante referencias cruzadas con compuestos conocidos, definidos en la tabla de calibracin. Con la altura o el rea del pico, el software calcula la cantidad de cada componente detectado, usando los parmetros especificados en la Calibration Table.
Bsqueda de la librera de espectros (ChemStations slo para sistemas LC 3D, CE, CE/MS y LC/MS)
Para todos los picos que dispongan de espectros UV-visible, puede hacerse una bsqueda automtica en una librera espectral predefinida, para identificar los componentes de la muestra. Consultar Familiarizacin con el mdulo de espectros para ms detalles.
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Control de pureza de pico (ChemStations slo para sistemas LC 3D, CE, CE/MS y LC/MS)
Para un pico del que se disponga del espectro UV-visible, puede calcularse un factor de pureza y almacenarlo en un registro. La pureza del pico puede determinarse automticamente al final de cada anlisis como parte del mtodo, si se ha marcado la opcin Check Purity al especificar una bsqueda en librera o se ha seleccionado un estilo de informe apropiado. Consultar Familiarizacin con el mdulo de espectros para ms detalles.
Imprimir informe
Se genera un informe con las identidades y cantidades de los compuestos detectados en el anlisis.
Anlisis de datos personalizado

Permite ejecutar macros personalizadas para evaluar los datos analticos.
Salvar datos GLP

Salva el registro binario GLPSave.Reg junto con el mtodo de anlisis de datos en el subdirectorio de ficheros de datos. Esta funcin est diseada para ayudar a probar el origen de los datos y la calidad de cada anlisis. El fichero binario GLPSave.Reg contiene la siguiente informacin en un fichero registro, no editable, protegido: parmetros claves del instrumento (presin, temperatura, etc.), seales cromatogrficas o electroferogrficas, resultados de integracin, resultados de cuantificacin, mtodo de anlisis de datos, y logbook (libro de registro). Estos datos se salvan slo cuando est activada la funcin Save GLP Data, por haberla seleccionado en la lista de control del anlisis. Pueden revisarse, pero no editarse, los datos GLP en el men Data Analysis de la ChemStation.
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Comando o macro postanlisis

Si se especifica un comando o macro postanlisis, se ejecuta despus de la evaluacin de datos. Por ejemplo, copiar datos en un disco como copia de seguridad.
Salvar copia del mtodo con datos

Se realiza despus de la adquisicin de datos y slo si est activada Data Acquisition en la Run Time Checklist. De esta forma se copia el mtodo actual en el directorio de datos.
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Mtodos Resumen del funcionamiento del mtodo
Resumen del funcionamiento del mtodo

La lista siguiente muestra el proceso de la operacin del mtodo, cuando estn seleccionadas todas las partes de la Run Time Checklist. 1 Prerun Command Macro (Macro de comandos pre-anlisis) Ejecuta una tarea antes de iniciarse el anlisis. 2 Adquisicin de datos Ejecuta el programa del inyector. Inyecta la muestra. Adquiere datos iniciales. Almacena los datos. 3 Save Copy of Method with Data (Salva una copia del mtodo con datos) 4 Data Analysis (Process Data) (Anlisis de datos (proceso de datos)) Carga el fichero de datos. Integra el fichero de datos. Identifica y cuantifica el pico. Busca en la librera espectral, si hubiera. Controla la pureza de pico, si hubiera. Imprime el informe. 5 Customized Data Analysis (Anlisis de datos personalizado) Ejecuta las macros. 6 Save GLP Data (Salva los datos GLP) Salva el registro binario GLPSave.Reg 7 Postrun Command Macro (Macro de comandos post-anlisis) Ejecuta una tarea una vez finaliza el anlisis. Por ejemplo, genera un informe personalizado.
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3 Adquisicin de datos
En qu consiste la adquisicin de datos? 64 Ficheros de datos 65 Monitores en lnea 66 Monitorizacin en lnea de la seal 66 Monitorizacin en lnea de los espectros 66 Logbook 67 Informacin del estado 68 Estado de la ChemStation 68 Barra de estado 68 Diagrama del sistema 69
63
Adquisicin de datos En qu consiste la adquisicin de datos?
En qu consiste la adquisicin de datos?

Durante la adquisicin de datos, todas las seales adquiridas por el instrumento analtico pasan de seales analgicas a digitales, en el detector. La seal digital se transmite a la ChemStation electrnicamente y se graba en el fichero de datos de seales.
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Adquisicin de datos Ficheros de datos
Ficheros de datos
Un fichero de datos comprende un grupo de ficheros guardados en el directorio DATA como un subdirectorio, con un nombre de fichero de datos y una extensin .D. Los nombres de ficheros de datos se pueden definir manualmente utilizando 40 caracteres incluida la extensin. Cada uno de los ficheros del directorio sigue unas convenciones con respecto a sus nombres. Tabla 5
Nombre *.CH
Ficheros de datos
Descripcin Ficheros de datos de seales cromatogrficas/electroferogrficas. El nombre comprende el tipo de mdulo o detector, el nmero del mdulo y la identificacin de la seal o del canal. Por ejemplo, ADC1A.CH, donde ADC es el tipo de mdulo, 1 es el nmero del mdulo, A es el identificador de la seal y .CH es la extensin cromatogrfica. Ficheros de datos espectrales UV. El nombre comprende el tipo de detector y el nmero de dispositivo (slo con detector de diodos y de fluorescencia). Informes para los ficheros de datos de seal equivalente. El nombre comprende el tipo de detector, el nmero de dispositivo y la identificacin de seal o canal, por ejemplo, ADC1A.TXT. Macro de informacin de la muestra. Entradas del logbook generadas durante un anlisis. El logbook guarda un registro del anlisis. Todos los mensajes de error y los cambios de estado importantes de la ChemStation se introducen en el logbook. Slo para LC. Contiene curvas del instrumento (gradientes, temperaturas, presiones, etc.), el volumen de inyeccin y descripciones de los disolventes. Contiene informacin de la columna. Para GC tambin contiene el volumen de inyeccin. Parte del fichero de datos si se indica Save GLP Data.
*.UV REPORT.TXT
SAMPLE.MAC RUN.LOG
LCDIAG.REG ACQRES.REG GLPSAVE.REG
El mtodo puede grabarse junto con los resultados. En estos casos, el directorio del mtodo se graba como un subdirectorio del directorio de los ficheros de datos.
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Adquisicin de datos Monitores en lnea
Monitores en lnea
Hay dos tipos de monitores en lnea, el de la seal y el de espectros.
Monitorizacin en lnea de la seal

El monitor de la seal en lnea permite visualizar varias seales y, si est soportado por el instrumento asociado, el rendimiento del instrumento se representa grficamente en la misma ventana. Pueden seleccionarse las seales que se deseen visualizar y ajustar los ejes de tiempo y de absorbancia. Para los detectores que soporten esta funcin, se dispone de un botn de balance. Puede visualizarse la respuesta de la seal absoluta en la lnea del mensaje, moviendo el cursor en la pantalla.
Monitorizacin en lnea de los espectros

La monitorizacin de los espectros en lnea slo puede utilizarse en ChemStations que soporten la evaluacin de espectros. Muestra la absorbancia como una funcin de la longitud de onda. Puede ajustarse tanto el rango de longitud de onda como el de la escala de absorbancia.
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Adquisicin de datos Logbook
Logbook
El logbook muestra los mensajes generados por el sistema analtico. Estos mensajes pueden ser de error, del sistema o de eventos de un mdulo. El logbook registra estos eventos independientemente de que se visualicen o no. Para obtener ms informacin sobre algn parmetro en el registro, pinchar dos veces sobre la lnea correspondiente para visualizar un texto descriptivo de ayuda.
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Adquisicin de datos Informacin del estado
Informacin del estado

Estado de la ChemStation
La ventana ChemStation Status muestra un estado de resumen del software de la ChemStation. Cuando se est realizando un anlisis sencillo: La primera lnea de la ventana Status (Estado) de la ChemStation muestra el anlisis en curso La segunda lnea de la ventana de estado muestra el estado del mtodo activo y El nombre del fichero de datos primarios se muestra en la tercera lnea junto con el tiempo actual del anlisis (para un instrumento GC, tambin se muestran ficheros para el inyector frontal y trasero). La ventana Instrument Status ofrece informacin del estado de los mdulos y los detectores del instrumento. Muestran el estado de cada componente y las condiciones actuales, si corresponde, por ejemplo, datos de presin, de gradiente y de flujo.
Barra de estado
La interfase grfica de usuario del sistema de la ChemStation, consta de barras de herramientas y de estado en la ventana Method and Run Control. La barra de estado contiene un campo de estado del sistema e informacin sobre el mtodo y la secuencia actualmente cargados. Si se modificaron despus de ser cargados, estarn marcados con un tringulo rojo. Para un mdulo Agilent 1100 para HPLC, un smbolo EMF amarillo recuerda al usuario que se han excedido los lmites de uso fijados para los fungibles (por ejemplo, la lmpara).
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Diagrama del sistema

Si est soportado por los instrumentos analticos configurados (por ejemplo, para los mdulos Agilent 1100 para HPLC o el GC Agilent 6890) puede visualizarse un diagrama grfico del sistema para la ChemStation. Este permite comprobar rpidamente el estado del sistema. Seleccionar la opcin System Diagram en el men View de la ventana Method and Run Control para activar el diagrama. Es una representacin grfica del sistema de la ChemStation. Cada componente se representa por un icono. Utilizando el cdigo de colores, descrito a continuacin, se visualiza el estado actual. Tabla 6
Color gris amarillo verde azul rojo
Cdigo de colores para el diagrama del sistema

Estado inactivo o apagado no preparado preparado operando error
Adems, pueden visualizarse listas de los valores actuales de los parmetros. Aparte de una revisin del estado, el diagrama permite el acceso rpido a los cuadros de dilogo para fijar los parmetros de cada componente del sistema. Consultar el sistema de ayuda en lnea para obtener ms informacin sobre el diagrama del sistema.
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70
4 Integracin
En qu consiste la integracin? 73 Qu hace la integracin? 73 Los algoritmos de integracin de la ChemStation 74 Capacidades de integracin 74 Introduccin 76 Definicin de la lnea base inicial 77 Seguimiento de la lnea base 77 Asignacin de la lnea base 78 Identificacin de los puntos cardinales de un pico 80 Definicin de trminos 81 Puntos cardinales 81 Pico de disolvente 81 Hombro (frontal, trasero) 82 Pendiente 82 Principio de operacin 83 Reconocimiento de picos 84 Anchura de pico 84 Filtros de reconocimiento de picos 85 Agrupamiento 87 El algoritmo de reconocimiento de picos 88 Clculos no gaussianos 92 Asignacin de la lnea base 78 Construccin de la lnea base por defecto 94 El inicio de la lnea base 95 Penetracin de la lnea base 96 Seguimiento avanzado de la lnea base (Advanced Baseline Tracking) 97 Divisin tangencial (Tangent Skimming) 99 Picos no asignados (Unassigned Peaks) 105
71
Integracin
Cdigos de separacin de picos 106 Caracteres 1 y 2 106 Carcter 3 106 Carcter 4 107 Medida del rea de pico 108 Determinacin del rea 109 Unidades y factores de conversin 110 Parmetros de integracin 111 Parmetros iniciales 111 Anchura de pico (Peak Width) 112 Rechazo por altura y anchura de pico 113 Refinamiento de la integracin 113 Parmetros programados 115 Integracin automtica (Autointegrate) 116 Introduccin 116 Principios de funcionamiento 116 Parmetros de la integracin automtica 117 Integracin manual 118 Introduccin 118 Cdigos de separacin de picos para picos integrados manualmente 119 Documentacin de parmetros de integracin manual 119
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Integracin En qu consiste la integracin?
En qu consiste la integracin?
La integracin localiza los picos en una seal y calcula su tamao. La integracin es un paso necesario para: la cuantificacin, los clculos de pureza de pico (slo en ChemStations de sistemas LC 3D, CE, CE/MS y LC/MS) y la bsqueda en libreras de espectros (slo en ChemStations de sistemas LC 3D, CE, CE/MS y LC/MS).
Qu hace la integracin?
Cuando una seal se integra, el software: identifica un tiempo inicial y final para cada pico y seala estos puntos con marcas de integracin verticales, encuentra el mximo de cada pico; es decir, el tiempo de retencin/migracin, construye una lnea de base, y calcula el rea, la altura y la anchura de cada pico. Este proceso est controlado por los parmetros llamados parmetros de integracin.
73
Integracin Los algoritmos de integracin de la ChemStation
Los algoritmos de integracin de la ChemStation

El algoritmo de integracin de ChemStation es la segunda revisin de una nueva generacin que pretende mejorar la resistencia, fiabilidad y facilidad de uso.
Capacidades de integracin
Los algoritmos del integrador incluyen las siguientes capacidades clave: una funcin de integracin automtica utilizada para configurar los parmetros iniciales de integracin, la capacidad de definir tablas individuales de parmetros para cada seal cromatogrfica/electroferogrfica, si se utilizan mltiples seales o ms de un detector, definicin interactiva de los parmetros de integracin que permite a los usuarios seleccionar grficamente los tiempos de los parmetros, integracin grfica manual o elstica de cromatogramas/electroferogramas que requieren la interpretacin humana (estos parmetros pueden registrarse en el mtodo y ser utilizados en la operacin automatizada), visualizacin e impresin de resultados de integracin, y capacidad de integrar al menos 1000 picos por cromatograma/electroferograma. definiciones de parmetros del integrador para fijar o modificar los valores bsicos de rechazo de rea, rechazo de altura, anchura de pico y sensibilidad de pendiente, parmetros de control de la lnea de base, como lnea de base forzada, sostener lnea de base, lnea base en todos los valles, lnea base en el siguiente valle, fijar lnea base hacia detrs desde el final del pico actual, control de suma de rea, reconocimiento de picos negativos,
74
Integracin Los algoritmos de integracin de la ChemStation
proceso de divisin tangencial que incluye comandos de definicin del pico de disolvente, capacidad de definicin de tablas de parmetros individuales para clculos de divisin tangencial frontal/de cola para toda la seal cromatogrfica/electroferogrfica, parmetros de correccin de la lnea base (independientes de la seal), comandos de control que definen rangos de tiempo de retencin/migracin para la operacin del integrador, la asignacin de hombros de pico mediante el uso de la segunda derivada o clculo del grado de curvatura, muestreo mejorado de puntos de datos no equidistantes para un mejor comportamiento con ficheros de datos LC-DAD reconstruidos a partir de espectros DAD.
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Integracin Introduccin
Introduccin
Para integrar un cromatograma/electroferograma, el integrador: 1 define la lnea base inicial, 2 realiza un seguimiento de la lnea base y la actualiza continuamente, 3 identifica el momento de inicio de un pico y seala ese punto con una marca vertical, 4 localiza el punto mximo de cada pico e imprime el tiempo de retencin/migracin correspondiente, 5 identifica el momento de finalizacin del pico y seala ese punto con una marca vertical, 6 construye una lnea base, y 7 calcula el rea, la altura y la anchura de pico correspondientes a cada pico. Este proceso se controla por medio de parmetros de integracin. Los parmetros ms importantes son sensibilidad de pendiente inicial (initial slope sensitivity), anchura de pico (peak width), rechazo de rea (area reject) y rechazo de altura (height reject). El software permite al usuario fijar los valores iniciales de stos y otros parmetros. Los valores iniciales tienen vigencia al comienzo del cromatograma. De forma adicional, la funcin de integracin automtica proporciona un conjunto de parmetros iniciales que el usuario puede optimizar posteriormente. En la mayora de los casos, los parmetros iniciales darn buenos resultados de integracin en todo el cromatograma, si bien habr ocasiones en las que el usuario prefiera tener un mayor control sobre el progreso de la integracin. El software permite controlar el modo en que se lleva a cabo una integracin mediante la programacin de nuevos parmetros de integracin en determinados momentos del cromatograma. Para ms informacin, consulte la seccin Parmetros de integracin en la pgina 111.
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Definicin de la lnea base inicial

Puesto que las condiciones de la lnea base pueden variar en funcin de la aplicacin y el detector, el integrador utiliza parmetros obtenidos de ficheros tanto de mtodo como de datos para optimizar la lnea base. Para poder integrar los picos, el integrador debe establecer antes un punto de lnea base. Al comienzo del anlisis, el integrador establece un nivel de lnea base inicial tomando el primer punto de datos como punto de lnea base provisional. A continuacin trata de redefinir ese punto de lnea base inicial utilizando el promedio de la seal de entrada. Si no obtiene un punto de lnea base inicial redefinido, mantiene el primer punto de datos como posible punto de lnea base inicial.
Seguimiento de la lnea base

El integrador muestrea los datos digitales a una velocidad determinada por la anchura de pico inicial o por la anchura de pico calculada a medida que progresa el anlisis. Considera cada uno de los puntos de datos como posible punto de lnea base. El integrador determina una zona de lnea base a partir de la pendiente de la lnea base, utilizando un algoritmo de seguimiento de la lnea base en el que la pendiente viene dada por la primera derivada y la curvatura por la segunda derivada. La zona de lnea base se puede visualizar como un cono con la punta situada en el punto de datos actual. Los niveles superior e inferior de aceptacin del cono se determinan como sigue: + pendiente ascendente + curvatura + desviacin de la lnea base debe dar un resultado inferior al nivel umbral, - pendiente ascendente - curvatura + desviacin de la lnea base debe dar un resultado ms positivo (o menos negativo) que el nivel umbral. A medida que se van aceptando nuevos puntos de datos, el cono se desplaza hacia adelante hasta que dejen de cumplirse las condiciones.
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Integracin Introduccin Para ser aceptado como punto de lnea base, un punto de datos debe cumplir las condiciones siguientes: debe encontrarse dentro de la zona definida como de lnea base, la curvatura de la lnea base en el punto de datos (determinada por los filtros basados en derivadas) debe estar por debajo de un valor crtico determinado por el valor actual del parmetro de sensibilidad de la pendiente. El punto de lnea base inicial establecido al comienzo del anlisis se restablece as de forma continua, a una velocidad determinada por la anchura de pico, como el promedio mvil de los puntos de datos que se encuentran dentro de la zona de lnea base durante un perodo de tiempo determinado por la anchura de pico. El integrador realiza un seguimiento continuo de la lnea base y la restablece peridicamente para compensar la deriva hasta que detecta la pendiente ascendiente de un pico.
Asignacin de la lnea base

El integrador asigna durante el anlisis la lnea base cromatogrfica/ electroferogrfica con una frecuencia determinada por el valor de anchura de pico. Cuando ha muestreado un nmero determinado de puntos de datos, restablece la lnea base desde el punto de lnea base inicial al punto de lnea base actual. El integrador reanuda entonces el seguimiento de la lnea base en el siguiente conjunto de puntos de datos para restablecer nuevamente la lnea base. El proceso contina hasta que el integrador identifica el inicio de un pico.
tiempo inicial T 2T 2T T T T T T T
Punto de datos punto actual T restablecimiento de la lnea base Anchura de pico esperada
Figura 4
Lnea base
78
Al comienzo del anlisis, el valor del parmetro de lnea base se utiliza como lnea base inicial. Si no hay un valor fijado, se utiliza el primer punto de datos. El punto de lnea base se restablece entonces peridicamente de acuerdo con la siguiente frmula: Se suman las reas durante un tiempo T (anchura de pico esperada). Ese tiempo no puede ser inferior a un punto de datos. El proceso contina mientras exista una condicin de lnea base. Se adquieren asimismo medidas de pendiente y curvatura. Si tanto la pendiente como la curvatura son inferiores al umbral, se combinan entre s dos sumas de reas y se comparan con la lnea base previa. Si el nuevo valor es inferior a la lnea base previa, pasa a reemplazar inmediatamente al valor antiguo. Si es superior al valor previo, se graba como nuevo valor provisional de la lnea base que se confirmar si un valor ms cumple los criterios de llanura de la pendiente y la curvatura. Esta ltima limitacin no tiene efecto cuando se permiten picos negativos. Durante la fase de lnea base, es preciso realizar asimismo comprobaciones para examinar disolventes con rpida elevacin de la seal; la elevacin puede ser demasiado rpida para permitir la deteccin de una pendiente ascendente (para cuando se confirma la pendiente ascendente, el criterio de disolvente puede no ser ya vlido). En el momento inicial, el primer punto de datos constituye la lnea base. Ese valor se reemplaza por el promedio calculado sobre 2T si la seal est en base. La lnea base se restablece entonces a cada intervalo T (vase la Figura 4 en la pgina 78).
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Identificacin de los puntos cardinales de un pico

El integrador determina que puede estar comenzando a producirse un pico cuando los posibles puntos de lnea base se encuentran fuera de la zona de lnea base y la curvatura de la lnea base excede un cierto valor determinado por el parmetro de sensibilidad de la pendiente del integrador. Si esta condicin contina, el integrador reconoce estar en la pendiente ascendiente de un pico y ste se procesa.
Inicio
1 Pendiente y curvatura dentro del lmite: prosigue el seguimiento de la lnea base. 2 Pendiente y curvatura por encima del lmite: posibilidad de un pico. 3 La pendiente permanece por encima del lmite: se reconoce un pico, se define el punto cardinal correspondiente. 4 La curvatura se hace negativa: punto de inflexin frontal.
Mximo
5 La pendiente pasa por cero y se hace negativa: mximo del pico, se define el punto cardinal correspondiente. 6 La curvatura se hace positiva: punto de inflexin trasero.
Final
7 Pendiente y curvatura dentro del lmite: se aproxima el final del pico. 8 La pendiente y la curvatura se mantienen dentro del lmite: final del pico, se define el punto cardinal correspondiente. 9 El integrador vuelve al modo de seguimiento de la lnea base.
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Integracin Definicin de trminos
Definicin de trminos
Puntos cardinales
mximo del pico punto de inflexin punto de lnea base punto de inflexin punto de lnea base
coordenada vertical de altura
coordenada horizontal de tiempo transcurrido
Figura 5
Puntos cardinales
Los puntos cardinales son los puntos elegidos por el integrador para definir y cuantificar un pico. Se designan como puntos cardinales y se graban los puntos de lnea base, puntos de valle, mximos de pico y puntos de inflexin. A cada punto cardinal le corresponde una coordenada horizontal de tiempo transcurrido y una coordenada vertical de altura desde la lnea base, adems de otros parmetros tales como tipo de pico, cdigos de separacin, valores de inicio/final de picos potenciales y las correspondientes lecturas de altura, rea y pendiente que el integrador utiliza para calcular las reas de pico.
Pico de disolvente
El pico de disolvente, generalmente un pico de gran tamao sin relevancia analtica, no suele integrarse. No obstante, cuando hay pequeos picos de inters analtico con elucin cercana al pico de disolvente, por ejemplo en la cola del mismo, es posible establecer condiciones de integracin especiales para calcular sus reas corregidas teniendo en cuenta la contribucin de la cola del pico de disolvente.
81
Integracin Definicin de trminos
Hombro (frontal, trasero)

Se producen hombros cuando dos picos eluyen tan cerca el uno del otro que no llega a haber un valle entre ellos que permita resolverlos. Los hombros pueden aparecer en el avance del pico (hombro frontal) o en el rastro del mismo (hombro trasero). Cuando se detectan hombros, stos pueden integrarse bien mediante divisin tangencial o mediante lneas de cada verticales.
Pendiente
La pendiente de un pico, que denota el cambio de concentracin del componente en funcin del tiempo, se utiliza para determinar el inicio, el mximo y el final del pico.
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Integracin Principio de operacin
Principio de operacin
Parmetros iniciales
Definicin de la lnea base inicial Inicializacin
Seguimiento y restablecimiento de la lnea base
Inicio del grupo de picos Seguimiento de la lnea base Parmetros programados Identificacin de las coordenadas de pico
Deteccin de la lnea base
Fin del grupo de picos Deteccin del grupo
Construccin de lneas base de pico
Deteccin de divisiones
Almacenamiento de picos en la tabla de picos
Clculo de estadsticas de pico Evaluacin del grupo
Figura 6
Diagrama de flujo del integrador
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Integracin Reconocimiento de picos
Reconocimiento de picos
El integrador utiliza varias herramientas para reconocer y caracterizar un pico: anchura de pico, filtros de reconocimiento de picos, agrupamiento, algoritmo de reconocimiento de picos, algoritmo de determinacin del mximo de pico, y clculos de efectos no gaussianos (por ejemplo colas, picos solapados).
Anchura de pico
Durante la integracin, se calcula la anchura de pico a partir del rea y la altura del pico:
Anchura = rea/Altura
o, si los puntos de inflexin estn disponibles, a partir de la anchura entre los puntos de inflexin.
H Fs Hf a1 t1 a2 t2 Hr a3 a4 t3 t4 Rs
Figura 7
Clculo de la anchura de pico
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Integracin Reconocimiento de picos En la Figura 7, el rea total, A, es la suma de las reas a1, a2, a3 y a4. Fs es la pendiente frontal en el punto de inflexin, Rs es la pendiente trasera en el punto de inflexin. En caso de no localizarse alguno de los puntos de inflexin, la anchura de pico se define como sigue:
Anchura = rea ajustada / Altura ajustada
El parmetro de anchura de pico controla la capacidad del integrador para distinguir los picos del ruido de la lnea base. Para obtener buenos resultados, la anchura de pico debe ser cercana a la anchura de los picos cromatogrficos/electroferogrficos reales. Hay tres modos de cambiar la anchura de pico: antes del anlisis, el usuario puede especificar la anchura de pico inicial, durante el anlisis, el integrador actualiza automticamente la anchura de pico como corresponda para mantener una buena correspondencia con los filtros de reconocimiento de picos, durante el anlisis, el usuario puede restablecer o modificar la anchura de pico utilizando un parmetro programado en el tiempo. Para obtener informacin acerca de las definiciones de anchura de pico utilizadas en los clculos de idoneidad del sistema, consulte el Captulo 4, Integracin seccin Anchura de pico en la pgina 84.
Filtros de reconocimiento de picos

El integrador cuenta con tres filtros de reconocimiento de picos que puede utilizar para reconocer picos mediante la deteccin de cambios en los valores de pendiente y curvatura dentro de un conjunto de puntos de datos contiguos. Los filtros contienen la primera derivada (para medir la pendiente) y la segunda derivada (para medir la curvatura) de los puntos de datos examinados por el integrador. Los filtros de reconocimiento son los siguientes: Filtro 1 Filtro 2 Filtro 3 Pendiente (curvatura) de dos (tres) puntos de datos contiguos Pendiente de cuatro puntos de datos contiguos y curvatura de tres puntos de datos no contiguos Pendiente de ocho puntos de datos contiguos y curvatura de tres puntos de datos no contiguos
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Integracin Reconocimiento de picos El filtro que se utiliza viene determinado por el valor del parmetro de anchura de pico. Por ejemplo: al comienzo del anlisis puede utilizarse el Filtro 1. Si la anchura de pico aumenta durante el anlisis, se pasar primero al Filtro 2 y en ltimo trmino al Filtro 3. Para obtener buenos resultados del uso de los filtros de reconocimiento, los valores fijados para la anchura de pico deben ser cercanos a la anchura de los picos cromatogrficos/electroferogrficos reales. Durante el anlisis, el integrador actualiza la anchura de pico como sea necesario para optimizar la integracin. El integrador calcula la anchura de pico actualizada de distintos modos segn la configuracin instrumental: Para configuraciones LC/CE, el clculo de anchura de pico por defecto utiliza un clculo compuesto
(0,3 x punto de inflexin derecho - punto de inflexin izquierdo) + 0,7 x rea / Altura
Para configuraciones GC, el clculo de anchura de pico por defecto utiliza el rea/la altura. Este clculo no sobreestima la anchura cuando los picos estn solapados por encima del punto de media altura. En determinados tipos de anlisis, por ejemplo anlisis GC isotrmicos y LC isocrticos, los picos se ensanchan de forma significativa a medida que progresa el anlisis. Para compensar ese efecto, el integrador actualiza automticamente la anchura de pico a medida que los picos se ensanchan durante el anlisis. Lo hace de forma automtica salvo que se haya deshabilitado la funcin de actualizacin o se haya fijado la anchura de pico en un valor especfico por medio de un parmetro programado. La actualizacin de la anchura de pico se pondera del modo siguiente:
0,75 x (anchura de pico existente) + 0,25 x (anchura del pico actual)
Si un parmetro de integracin programado deshabilita la anchura de pico o la fija en un valor especfico, se deshabilita el ajuste automtico de la anchura de pico.
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Agrupamiento
El agrupamiento (bunching) es el medio que el integrador utiliza para ensanchar continuamente los picos dentro del rango de efecto de los filtros de reconocimiento de picos con el fin de mantener una buena selectividad. Cuando los picos se ensanchan, el integrador no puede continuar aumentando la anchura de pico de forma indefinida. Llegara un momento en que los picos fueran tan anchos que no pudieran ser identificados por los filtros de reconocimiento. Para superar esa limitacin, el integrador agrupa los puntos de datos entre s, estrechando en trminos prcticos el pico sin que el rea se vea alterada. Cuando se agrupan datos, los puntos de datos se agrupan en dos elevado a la potencia de agrupamiento, o sea, sin agrupar = x1, agrupamiento realizado una vez = x2, realizado dos veces = x4, etc. El agrupamiento se realiza en base a la velocidad de datos y la anchura de pico. El integrador utiliza esos parmetros para fijar el factor de agrupamiento de modo que se obtenga el nmero de puntos de datos apropiado (vase la Tabla 7). El agrupamiento se realiza en potencias de dos en base a la anchura de pico esperada u obtenida. El algoritmo de agrupamiento se resume a continuacin en la Tabla 7: Tabla 7 Criterios de agrupamiento
Filtro(s) utilizado(s) Primero Segundo Tercero Segundo Tercero Tercero, segundo Tercero, segundo Agrupamiento realizado Ninguno Ninguno Ninguno Una vez Una vez Dos veces Tres veces
Anchura de pico esperada 0 - 10 puntos de datos 8 - 16 puntos de datos 12 - 24 puntos de datos 16 - 32 puntos de datos 24 - 48 puntos de datos 32 - 96 puntos de datos 64 - 192 puntos de datos
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El algoritmo de reconocimiento de picos

El integrador identifica el inicio del pico con un punto de lnea base determinado por el algoritmo de reconocimiento de picos. El algoritmo de reconocimiento de picos compara en primer lugar los valores de salida de los filtros de reconocimiento de picos con el valor de la sensibilidad de pendiente inicial para aumentar o disminuir el acumulador de pendiente ascendente. El integrador declara el punto en el que el valor del acumulador de pendiente ascendente es >= 15 como el punto que indica el inicio de un pico. El algoritmo de reconocimiento de picos se muestra en la Figura 8.
Arranque t2 Lnea base t3 Pendiente ascendente t4 t11 Pendiente descendente t8 t7 Extraccin del pico t9 Almacenamiento del pico t6 t10 t1
t5
Figura 8
Reconocimiento de picos
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Los criterios utilizados son los siguientes:

t1 t2 t3 t4 El contador de pendiente ascendente es mayor o igual a 1 El contador de pendiente ascendente es igual a 0 El contador de pendiente ascendente es mayor o igual a 2 Se ha encontrado la cumbre del pico y se ha encontrado la anchura a medio pico o Se ha encontrado la cumbre del pico y el contador de pendiente descendente es mayor o igual a 2 t5 Se ha abortado el pico o Se ha restablecido la lnea base t6 Se ha encontrado el valle del pico y el contador de pendiente ascendente es mayor o igual a 2, o El valor sigma de la pendiente descendente es ms de dos veces el valor sigma del final del pico, o Se ha restablecido la lnea base, o Se ha restablecido la lnea base en el siguiente valle y se ha encontrado el valle del pico t7 t8 t9 Ya no se cumple el criterio de pendiente descendente Se cumple nuevamente el criterio de pendiente descendente Se ha encontrado el valle del pico y el contador de pendiente ascendente es mayor o igual a 2, o El contador de pendiente descendente es igual a 0, o El valor sigma de la pendiente descendente es mayor que el valor sigma del final del pico, o Se ha restablecido la lnea base, o Se ha restablecido la lnea base en el siguiente valle t10 t11 El contador de pendiente ascendente es mayor o igual a 2 El contador de pendiente ascendente es menor o igual a 1
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Inicio del pico

En la Tabla 8, la anchura de pico esperada determina qu valores de pendiente y curvatura de filtro se comparan con la sensibilidad de pendiente. Por ejemplo, cuando la anchura de pico esperada es reducida, se aaden los nmeros del Filtro 1 al acumulador de pendiente ascendente. Si la anchura de pico esperada aumenta, se utilizan entonces los nmeros correspondientes al Filtro 2 y, en ltimo trmino, al Filtro 3. Cuando el valor del acumulador de pendiente ascendente es >= 15, el algoritmo reconoce que se puede estar produciendo el inicio de un pico. Tabla 8 Valores de incremento del acumulador de pendiente ascendente
Filtro 1 +8 +0 -8 -4 -0 Filtro 2 +5 +2 -5 -2 -2 Filtro 3 +3 +1 -3 -1 -1
Filtros basados en derivadas 1 - 3 Valores de salida frente a la sensibilidad de pendiente Pendiente > Sensibilidad de pendiente Curvatura > Sensibilidad de pendiente Pendiente < (-) Sensibilidad de pendiente Pendiente > |Sensibilidad de pendiente| Curvatura < (-) Sensibilidad de pendiente
Fin del pico

En la Tabla 9, la anchura de pico esperada determina qu valores de pendiente y curvatura de filtro se comparan con la sensibilidad de pendiente. Por ejemplo, cuando la anchura de pico esperada es reducida, se aaden los nmeros del Filtro 1 al acumulador de pendiente descendente. Si la anchura de pico esperada aumenta, se utilizan entonces los nmeros correspondientes al Filtro 2 y, en ltimo trmino, al Filtro 3. Cuando el valor del acumulador de pendiente descendente es >= 15, el algoritmo reconoce que se puede estar produciendo el final de un pico.
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Tabla 9
Valores de incremento del acumulador de pendiente descendente

Filtro 1 +8 +0 -11 -28 -0 Filtro 2 +5 +2 -7 -18 -2 Filtro 3 +3 +1 -4 -11 -1
Filtros basados en derivadas 1 - 3 Valores de salida frente a la sensibilidad de pendiente Pendiente > Sensibilidad de pendiente Curvatura > Sensibilidad de pendiente Pendiente < (-) Sensibilidad de pendiente Pendiente > |Sensibilidad de pendiente| Curvatura < (-) Sensibilidad de pendiente
El algoritmo de determinacin del mximo de pico El mximo del pico se reconoce como el punto ms alto del cromatograma mediante la construccin de una curva de ajuste parablica que pase por los puntos de datos ms altos.
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Clculos no gaussianos
Picos solapados
Se produce un solapamiento de picos cuando un nuevo pico comienza antes de haberse alcanzado el final del pico anterior. La Figura 9 muestra qu hace el integrador con los picos solapados.
Punto de valle
Figura 9
Picos solapados
El integrador procesa los picos solapados como sigue: 1 suma el rea del primer pico hasta el punto de valle; 2 en el punto de valle, termina la suma del rea correspondiente al primer pico e inicia la correspondiente al segundo pico; 3 cuando el integrador localiza el final del segundo pico, se detiene la suma del rea. Este proceso se puede visualizar como la separacin de los picos solapados trazando una perpendicular desde el punto de valle entre ambos picos.
Hombros
Los hombros son picos no resueltos ubicados en el avance o el rastro de un pico ms grande. Cuando hay un hombro presente, no existe un verdadero valle en el sentido de una pendiente negativa seguida por otra positiva. Un pico puede tener cualquier nmero de hombros frontales y/o traseros.
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15.550 a 15.410 15.690 b
Figura 10
Hombros de pico
Los hombros se detectan a partir de la curvatura del pico, que viene dada por la segunda derivada. Cuando la curvatura cae a cero, el integrador identifica un punto de inflexin, como los puntos a y b de la Figura 10. Existe un posible hombro frontal cuando se detecta un segundo punto de inflexin antes del mximo del pico. Si se confirma la presencia de un hombro, el punto de inicio del mismo se fija en el punto de mxima curvatura positiva previo al punto de inflexin. Existe un posible hombro trasero cuando se detecta un segundo punto de inflexin antes del final o el valle del pico. Si se confirma la presencia de un hombro, el punto de inicio del mismo se fija en el punto tangente desde el punto inicial a la curva. El tiempo de retencin/migracin se determina a partir del punto de mxima curvatura negativa del hombro. Con un parmetro de integracin programado, el integrador puede calcular tambin reas de hombro como picos normales con lneas de cada verticales en los puntos de inflexin del pico que presenta el hombro. El rea del hombro se resta del pico principal. Los hombros de pico pueden tratarse como picos normales utilizando un parmetro de integracin programado.
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Integracin Asignacin de la lnea base
Asignacin de la lnea base
Una vez completado un grupo de picos y encontrada la lnea base, el integrador solicita al algoritmo de asignacin de la lnea base la asignacin de sta mediante una tcnica de "jalonamiento". El algoritmo utiliza correcciones de rea trapezoidal y altura proporcional para normalizar la lnea base y mantenerla lo ms baja posible. Entre los valores de entrada al algoritmo de asignacin de la lnea base se incluyen tambin parmetros obtenidos de los ficheros de mtodo y datos que identifican el detector y la aplicacin y que el integrador utiliza para optimizar los clculos.
Construccin de la lnea base por defecto

En el caso ms sencillo, el integrador construye la lnea base como una serie de segmentos rectos entre: el inicio de la lnea base, las marcas de sealizacin, el final del pico.
Marcas de sealizacin
Lnea base
Figura 11
Construccin de la lnea base por defecto
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El inicio de la lnea base

Si no se localiza una lnea base al comienzo del anlisis, el inicio de la lnea base se establece de uno de los modos siguientes: desde el inicio del anlisis al primer punto de lnea base, si el punto de inicio del anlisis es inferior al primer punto de lnea base, desde el inicio del anlisis al primer punto de valle, si el punto de inicio del anlisis es inferior al primer valle, desde el inicio del anlisis al primer punto de valle, si el primer valle penetra una lnea imaginaria trazada desde el inicio del anlisis a la primera lnea base, desde el inicio del anlisis a una lnea base horizontal extrapolada al primer punto de lnea base.
Marcas de sealizacin
Las marcas de sealizacin identifican el inicio y el final de un pico. Sus posiciones vienen determinadas por los tiempos de inicio y final de pico almacenados en la tabla de picos.
El final de la lnea base

El ltimo punto de lnea base vlido se utiliza para designar el final de la lnea base. En los casos en que un anlisis no termine en la lnea base, el final de esta se calcula desde el ltimo punto de lnea base vlido a la deriva de lnea base establecida. Si un pico termina en lo que parece ser un valle pero el siguiente pico est por debajo del valor establecido para el rechazo por rea, la lnea base se proyecta desde el comienzo del pico al siguiente punto de lnea base verdadero. Cuando un pico comience de modo similar, se aplicar la misma regla.
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Penetracin de la lnea base

Se produce una penetracin cuando la seal cae por debajo de la lnea base construida (punto a de la Figura 12). En caso de penetracin, por lo general se reconstruye esa parte de la lnea base, tal como muestran los puntos b de la Figura 12.
Figura 12
Penetracin de la lnea base
El usuario puede utilizar las siguientes opciones de seguimiento para eliminar todas las penetraciones de la lnea base:
Seguimiento clsico de la lnea base (Classical Baseline Tracking, sin penetraciones)

Cuando se selecciona esta opcin, cada grupo de picos se examina en busca de posibles penetraciones de la lnea base. Si se encuentran, se desplazan los puntos de inicio y/o final del pico hasta eliminarlas por completo (comprense las lneas base de la Figura 13 y la Figura 12).
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Seguimiento estndar de la lnea base
Seguimiento de la lnea base (sin penetraciones)
Figura 13
Seguimiento estndar de la lnea base y seguimiento de la lnea base (sin penetraciones)
N O TA
El seguimiento de la lnea base (sin penetraciones) no est disponible para los picos de disolvente con sus hombros y picos secundarios.
Seguimiento avanzado de la lnea base (Advanced Baseline Tracking)

En el modo de seguimiento avanzado de la lnea base, el integrador trata de optimizar la ubicacin del inicio y el final de los picos, restablece la lnea base para un grupo de picos y elimina las penetraciones de la lnea base (vase la seccin Penetracin de la lnea base en la pgina 96). En muchos casos, con el modo de seguimiento avanzado se consigue una lnea base ms estable, menos dependiente de la sensibilidad de pendiente.
Relacin pico/valle (Peak Valley Ratio)

Este parmetro especificado por el usuario forma parte del modo de seguimiento avanzado de la lnea base. Se utiliza para decidir si dos picos que no muestran separacin a nivel de la lnea base deben separarse utilizando una lnea de cada vertical o una lnea base de valle. El integrador calcula la relacin entre la altura corregida por la lnea base del menor de los picos y la altura corregida por la lnea base del valle. Cuando la relacin pico a valle es inferior al valor especificado por el usuario, se utiliza una lnea de cada
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Integracin Asignacin de la lnea base vertical; de lo contrario, se traza una lnea base desde la lnea base del inicio del primer pico al valle y desde el valle a la lnea base del final del segundo pico (comprese la Figura 13 con la Figura 14).
H1 Hv
H2
Figura 14
Relacin pico/valle
La relacin pico a valle se calcula por medio de las ecuaciones siguientes: H 1 H 2 , Relacin pico/valle = H2/Hv y H 1 < H 2 , Relacin pico/valle = H1/Hv La Figura 15 muestra cmo afecta a las lneas base el valor especificado por el usuario para la relacin pico a valle.
18,529 19,060
18,529 19,060
Relacin pico/valle Relacin pico/valle inferior al valor superior al valor especificado por el usuario especificado por el usuario
Figura 15
Efecto de la relacin pico a valle sobre las lneas base
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Divisin tangencial (Tangent Skimming)

La divisin tangencial es una forma de lnea base construida para picos que se encuentran en las pendientes ascendente o descendiente de otro pico. Cuando est habilitada, hay cuatro modelos disponibles para el clculo de las reas de pico adecuadas: ajuste a una curva exponencial, nueva divisin exponencial, divisin mediante lnea recta, clculos de recta y exponencial combinados para obtener el mejor ajuste (divisin estndar).
Pico principal 14,296 14,144 Lneas de cada verticales Curva de divisin exponencial Lnea base del pico principal 14,357 Picos secundarios
Figura 16
Nuevo modo de divisin exponencial
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Ajuste a una curva exponencial

Este modelo de divisin traza una curva, utilizando una ecuacin exponencial, que pasa por los puntos inicial y final del pico secundario (la altura del inicio del pico secundario se corrige por la pendiente del pico principal). La curva pasa bajo cada uno de los picos secundarios que siguen al principal; el rea que queda por debajo de la curva de divisin se resta de los picos secundarios y se aade al pico principal (vase la Figura 17).
14,296 14,144
14,357
Figura 17
Divisin exponencial
Divisin mediante lnea recta

Este modelo de divisin traza una lnea recta a travs de los puntos inicial y final del pico secundario. La altura del inicio del pico secundario se corrige por la pendiente del pico principal. El rea que queda bajo la lnea recta se resta del pico secundario y se aade al pico principal (vase la Figura 18).
14,296 14,144
14,357
Figura 18 100
Divisin mediante lnea recta Conocer la Agilent ChemStation
Divisiones estndar
El mtodo de clculo apropiado se elige para cada aplicacin particular; por defecto, el mtodo elegido es una combinacin de clculos de curva exponencial y lnea recta para obtener el mejor ajuste. El paso de un clculo exponencial a uno lineal se realiza de modo que no haya discontinuidades abruptas en las alturas o las reas. Cuando la seal se encuentra apreciablemente por encima de la lnea base, el clculo para ajustar la cola es exponencial. Cuando la seal se encuentra en la zona de lnea base, el clculo para ajustar la cola es una lnea recta. Los clculos combinados se muestran como divisin exponencial o tangencial.
Criterios de divisin
Dos son los criterios que determinan si se va a utilizar una lnea de divisin para calcular el rea de un pico secundario que eluye en el rastro de otro principal: relacin de alturas para divisin de cola (tail skim height ratio) relacin de altura con respecto al valle (valley height ratio) Estos criterios no se utilizan si se est aplicando un parmetro programado para un clculo exponencial o si el pico principal es en s mismo un pico secundario de otro. El cdigo de separacin entre el pico principal y el secundario debe ser de tipo valle.
101
Relacin de alturas para divisin de cola Es la relacin de la altura corregida por la lnea base del pico principal (Hp en la Figura 19) con la altura corregida por la lnea base del pico secundario (Hc en la Figura 19). Para que se divida el pico secundario, esta relacin debe ser superior al valor especificado.
Hp Hv Hc
Figura 19
Criterios de divisin
El usuario puede deshabilitar la divisin exponencial durante el anlisis fijando el valor de la relacin de alturas para divisin de cola en un valor alto o en cero.
Relacin de altura con respecto al valle Es la relacin de la altura del pico secundario por encima de la lnea base (Hc en la Figura 19) con la altura del valle por encima de la lnea base (Hv en la Figura 19). Para que se divida el pico secundario, esta relacin debe ser inferior al valor especificado.
Clculo de ajuste a curva exponencial empleado en las divisiones

Para calcular una divisin exponencial se utiliza la ecuacin siguiente (consulte la Figura 20): Hb = Ho exp ( B ( Tr To ) ) + A Tr + C donde Hb = altura de la divisin exponencial en el momento Tr Ho = altura (por encima de la lnea base) del inicio de la divisin exponencial B = factor de decaimiento de la funcin exponencial To = tiempo correspondiente al inicio de la divisin exponencial
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Integracin Asignacin de la lnea base A = pendiente de la lnea base del pico principal C = desplazamiento de la lnea base del pico principal
13,934 14,296 14,144 Ho A C To Hb 14,357
Figura 20
Valores utilizados en el clculo de una divisin exponencial
El modelo exponencial se ajusta en la parte de la cola del pico principal inmediatamente anterior al primer pico secundario. La Figura 21 muestra la curva corregida de un pico secundario tras la divisin tangencial.
Curva corregida del pico secundario
Figura 21
Pico secundario corregido por la cola
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Divisin de pico frontal

Al igual que para los picos secundarios ubicados en la cola de otro principal, la presencia de picos en el frente/la pendiente ascendente de otro pico requiere una integracin especial, vase la Figura 22.
Figura 22
Divisin de pico frontal
La divisin de picos frontales se trata del mismo modo que la de picos de cola, utilizando los mismos modelos de divisin. Los criterios de divisin son los siguientes: relacin de alturas para divisin frontal (front skim height ratio) relacin de altura con respecto al valle (valley height ratio) La relacin de altura con respecto al valle tiene el mismo valor para divisiones tanto de picos frontales como de picos de cola (vase la seccin Relacin de altura con respecto al valle en la pgina 102); la relacin de alturas para divisin frontal se calcula del mismo modo que la relacin de alturas para divisin de cola (vase la seccin Relacin de alturas para divisin de cola en la pgina 102) pero puede tener un valor diferente.
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Picos no asignados (Unassigned Peaks)

Con algunas construcciones de lnea base, hay pequeas reas que quedan por encima de la lnea base y por debajo de la seal y que no forman parte de ningn pico reconocido. Por lo general, estas reas ni se miden ni se muestran. Si se habilita la funcin de picos no asignados, dichas reas se miden y se muestran como picos no asignados. El tiempo de retencin/migracin correspondiente a tales reas es el punto medio entre el inicio y el final del rea, tal como se muestra en la Figura 23 en la pgina 105.
0,482 0,581
0,832
Figura 23
Picos no asignados
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Integracin Cdigos de separacin de picos
Cdigos de separacin de picos
En los informes, cada pico lleva asignado un cdigo de dos, tres o cuatro caracteres que describe el modo en que se traz la lnea base de la seal.
Caracteres 1 y 2
El primer carcter describe la lnea base al inicio del pico, mientras que el segundo carcter describe la lnea base al final del pico. B V P H F M U El pico se inici o se detuvo en la lnea base. El pico se inici o se detuvo con una cada vertical en un valle. El pico se inici o se detuvo estando la lnea base penetrada. El pico se inici o se detuvo en una lnea base horizontal forzada. El pico se inici o se detuvo en un punto forzado. El pico se integr manualmente. El pico no ha sido asignado. Pueden aadirse asimismo sealizadores adicionales (en orden de prioridad):
Carcter 3
D A U O El pico estaba distorsionado. La integracin fue abortada. Se produjo una condicin de "por debajo del rango". Se produjo una condicin de "por encima del rango".
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Integracin Cdigos de separacin de picos
Carcter 4
El cuarto carcter describe el tipo de pico: S N + T X E m n t R f b F B U El pico es un pico de disolvente. El pico es un pico negativo. El pico es un pico de rea sumada. Pico con divisin tangencial (divisin estndar). Pico con divisin tangencial (divisin con el modo exponencial antiguo). Pico con divisin tangencial (divisin con el nuevo modo exponencial). Pico definido por una lnea base manual. Pico negativo definido por una lnea base manual. Pico con divisin tangencial definido por una lnea base manual. El pico es un pico de disolvente recalculado. Pico definido por una tangente de hombro frontal. Pico definido por una tangente de hombro trasero. Pico definido por una cada vertical de hombro frontal. Pico definido por una cada vertical de hombro trasero. Pico no asignado.
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Integracin Medida del rea de pico
Medida del rea de pico
El paso final de la integracin de picos es determinar el rea final del pico. Las reas de pico se calculan a partir del contenido del fichero de puntos cardinales. Los puntos cardinales son los puntos elegidos por el integrador para definir y cuantificar un pico (vase la seccin Identificacin de los puntos cardinales de un pico en la pgina 80). Entre ellos se incluyen los puntos de lnea base, puntos de valle, mximo de pico y puntos a media altura del pico. Los puntos cardinales tienen una coordenada horizontal de tiempo transcurrido, una coordenada vertical de altura desde la lnea base, un rea y otros parmetros que el integrador utiliza para calcular las reas de pico.
BB
Figura 24
Medida del rea para picos de lnea base a lnea base
En el caso de un simple pico aislado, el rea de pico viene determinada por el rea acumulada por encima de la lnea base entre el inicio y el final del pico (identificados por marcas de sealizacin).
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Integracin Medida del rea de pico
Determinacin del rea

El rea que el integrador calcula durante la integracin se determina como sigue: para picos de lnea base a lnea base (BB), el rea por encima de la lnea base entre las marcas de sealizacin, como se muestra en la Figura 24 en la pgina 108, para picos de valle a valle (VV), el rea por encima de la lnea base segmentada con lneas de cada verticales trazadas a partir de las marcas de sealizacin, como se muestra en la Figura 25,
VV
Figura 25
Medida del rea para picos de valle a valle
para picos tangenciales (T), el rea por encima de la lnea base restablecida, para picos de disolvente (S), el rea por encima de la extrapolacin horizontal desde el ltimo punto de lnea base encontrado y por debajo de la lnea base restablecida asignada a picos tangenciales (T). Es posible que un pico de disolvente produzca una elevacin de la seal demasiado lenta para el reconocimiento del pico o que en medio del anlisis aparezca un grupo de picos que el usuario considere que deben ser tratados como un disolvente con una serie de picos montados. se suele ser el caso de un grupo de picos solapados en el que el primer pico es mucho mayor que el resto. El tratamiento ms simple, el de la lnea de cada vertical, exagerara los picos posteriores al estar stos en realidad sobre la cola del primero. Forzando el reconocimiento del primer pico como pico de disolvente, es posible dividir de la cola el resto del grupo,
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Integracin Medida del rea de pico los picos negativos que aparecen por debajo de la lnea base tienen un rea positiva, tal como se muestra en la Figura 26 en la pgina 110.
rea total de la zona - rea por debajo de la lnea base corregida por la lnea base
rea
Figura 26
Medida del rea para picos negativos
Unidades y factores de conversin

Externamente, los datos contienen un conjunto de puntos de datos, que pueden ser bien muestreados o integrados. En el caso de datos integrados, cada punto de datos corresponde a un rea, que se expresa como Altura x Tiempo. En el caso de datos muestreados, cada punto de datos corresponde a una altura. Por lo tanto, en el caso de los datos integrados, la altura es una entidad calculada, obtenida dividiendo el rea por el tiempo transcurrido desde el punto de datos previo. En el caso de los datos muestreados, el rea se calcula multiplicando el dato por el tiempo transcurrido desde el punto de datos previo. El clculo de integracin hace uso de ambas entidades. Las unidades que el integrador utiliza internamente son las siguientes: cuentas x milisegundos para el rea y cuentas para la altura. Se hace as con el fin de proporcionar una base comn para los truncamientos a enteros cuando sea necesario. Las medidas de tiempo, rea y altura se muestran en unidades fsicas reales, con independencia de cmo se miden, calculan y almacenan en el software.
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Integracin Parmetros de integracin
Parmetros de integracin
El integrador proporciona al usuario una serie de parmetros de integracin tanto iniciales como programados. Muchos parmetros son parejas de tipo on/off o start/stop.
Parmetros iniciales
La anchura de pico inicial La anchura de pico inicial establece el valor de anchura de pico que el integrador utiliza internamente al comienzo del anlisis. Esta anchura de pico inicial se utiliza para escalar el acumulador que detecta pendientes ascendentes, pendientes descendentes y colas. El integrador actualiza la anchura de pico como sea necesario durante el anlisis para optimizar la integracin. El usuario especifica la anchura de pico en unidades de tiempo correspondientes a la anchura a media altura del primer pico esperado (excluido el pico de disolvente). La sensibilidad de pendiente establece el nivel de sensibilidad para la deteccin de picos. Es un parmetro que cambia en una escala lineal. El rechazo por altura establece el umbral de rechazo del pico por la altura final. Los picos con altura inferior al valor fijado como mnimo aceptable no se muestran. El rechazo por rea establece el umbral de rechazo del pico por el rea final. Los picos con rea inferior al valor fijado como mnimo aceptable no se muestran. Cuando la deteccin de hombros est habilitada, el integrador detecta los posibles hombros utilizando la curvatura de pico dada por la segunda derivada. Cuando la curvatura se hace cero, el integrador identifica ese punto de inflexin como un posible hombro. Si el integrador identifica otro punto de inflexin antes del mximo del pico, se ha detectado un hombro.
La sensibilidad de pendiente El rechazo por altura El rechazo por rea Deteccin de hombros
111
Anchura de pico (Peak Width)

El parmetro anchura de pico controla la selectividad del integrador para distinguir los picos del ruido de la lnea base. Para obtener buenos resultados, debe fijarse un valor cercano a la anchura a media altura de los picos cromatogrficos/electroferogrficos reales. El integrador actualiza la anchura de pico como sea necesario durante el anlisis para optimizar la integracin.
Seleccin de la anchura de pico

Debe elegirse el valor que proporcione el nivel de filtro justo y suficiente para evitar interpretar el ruido como picos pero sin llegar a distorsionar la informacin que porta la seal. Para seleccionar una anchura de pico inicial adecuada para un determinado pico de inters, utilice como base de referencia la anchura en tiempo del pico. Para seleccionar una anchura de pico inicial adecuada cuando hay varios picos de inters, fije la anchura de pico inicial en un valor igual o inferior a la anchura del pico ms estrecho con el fin de obtener una selectividad de pico ptima. Si la anchura de pico inicial seleccionada es demasiado reducida, puede darse el caso de que el ruido se interprete como picos. Si hay una mezcla de picos anchos y estrechos, puede ser conveniente utilizar parmetros programados en funcin del tiempo de anlisis para ajustar la anchura para determinados picos. En ocasiones, los picos se ensanchan de forma significativa a medida que el anlisis progresa, como ocurre por ejemplo con los anlisis GC isotrmicos y LC isocrticos. Para compensar ese efecto, el integrador actualiza automticamente el valor de anchura de pico a medida que los picos se ensanchan durante el anlisis salvo que se haya deshabilitado la funcin o se haya fijado el valor de anchura por medio de un parmetro programado. La actualizacin de la anchura de pico se pondera del modo siguiente: 0,75 (anchura de pico existente) + 0,25 (anchura del pico actual) Si un parmetro de integracin programado deshabilita la anchura de pico o la fija en un valor especfico, se deshabilita el ajuste automtico de la anchura de pico.
112
Rechazo por altura y anchura de pico

Ambos parmetros, anchura de pico y rechazo por altura, son sumamente importantes en el proceso de integracin. Modificando estos valores se pueden obtener distintos resultados. Eleve los valores de ambos parmetros, rechazo por altura y anchura de pico, cuando deban detectarse y cuantificarse componentes relativamente dominantes en un entorno de alto ruido. Una mayor anchura de pico mejora el filtrado del ruido y un mayor rechazo por altura asegura que se ignore el ruido aleatorio. Reduzca los valores de los parmetros rechazo por altura y anchura de pico para detectar y cuantificar componentes traza, cuyas alturas se aproximan a la del propio ruido. La disminucin de la anchura de pico tiene como efecto un menor filtrado de la seal, mientras que la disminucin del rechazo por altura asegura que no se rechacen picos pequeos por no tener la altura suficiente. Cuando un anlisis incluya picos de distintas anchuras, fije el valor de la anchura de pico para los ms estrechos y reduzca el valor del rechazo por altura para asegurar que no se ignoren los picos anchos debido a su reducida altura.
Refinamiento de la integracin
Con frecuencia resulta til modificar los valores de sensibilidad de pendiente, anchura de pico, rechazo por altura y rechazo por rea para personalizar as la integracin. La Figura 27 muestra cmo afectan esos parmetros a la integracin de cinco picos de una seal.
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Rechazo por altura Lnea base 3 1 7 5 Anchura de pico 2 4 6
Figura 27
Uso de parmetros iniciales
Un pico se integra nicamente si se satisfacen los requisitos de los cuatro parmetros de integracin. Utilizando la anchura de pico correspondiente al pico 3, el rechazo por rea y la sensibilidad de pendiente que se muestran en la Figura 27, slo los picos 1, 3, 5 y 7 resultan integrados. Pico 1 Pico 2 Pico 3 Pico 4 Pico 5 Pico 6 Pico 7 se integra puesto que se satisfacen los requisitos de los cuatro parmetros de integracin. se rechaza por estar el rea por debajo del valor fijado para el rechazo por rea. se integra puesto que se satisfacen los requisitos de los cuatro parmetros de integracin. no se integra al estar la altura de pico por debajo del valor fijado para el rechazo por altura. se rechaza por estar el rea por debajo del valor fijado para el rechazo por rea. no se integra; el filtrado y el agrupamiento hacen el pico indetectable. se integra.
114
Tabla 10
Valores de rechazo por altura y rea

Pico 1 Por encima Por encima S Pico 2 Por encima Pico 3 Por encima Pico 4 Pico 5 Pico 7 Por encima
Parmetro de integracin Rechazo por altura Rechazo por rea Pico integrado
Por debajo Por encima
Por debajo Por encima No S
Por debajo Por debajo Por encima No No S
Parmetros programados
El usuario puede utilizar parmetros programados para personalizar la construccin de la lnea base de la seal cuando la construccin por defecto no resulte apropiada. Dichos parmetros pueden resultar tiles para sumar reas de pico finales y para corregir aberraciones a corto y largo plazo de la lnea base. Para obtener informacin adicional acerca de los parmetros de integracin, consulte la seccin Parmetros de integracin en la pgina 111.
115
Integracin Integracin automtica (Autointegrate)
Integracin automtica (Autointegrate)
Introduccin
La funcin Autointegrate proporciona un punto de partida para el establecimiento de valores de los parmetros iniciales. Eso resulta particularmente til durante la implantacin de un nuevo mtodo. El usuario parte de una tabla de parmetros de integracin por defecto que no contiene parmetros programados y optimiza entonces los parmetros propuestos para uso general por la funcin Autointegrate.
Principios de funcionamiento
La funcin Autointegrate lee los datos cromatogrficos y calcula los valores ptimos de los parmetros de integracin iniciales para cada seal del cromatograma. El algoritmo examina un 1% al inicio y el final del cromatograma y determina el ruido y la pendiente de esas zonas. El ruido se determina como 3 veces la desviacin estndar de la regresin lineal dividido por la raz cuadrada del porcentaje de puntos utilizados en la regresin. Los resultados se utilizan para asignar valores apropiados de los parmetros de rechazo por altura y sensibilidad de pendiente para la integracin. El algoritmo asigna entonces un valor temporal de anchura de pico dependiendo de la longitud del cromatograma, utilizando un 0,5% para LC y del 0,3% al 0,2% para GC. Se fija en cero el parmetro de rechazo por rea inicial y se lleva a cabo una integracin de prueba. La prueba se repite varias veces si es necesario, ajustndose en cada intento los valores de los parmetros hasta conseguir detectar al menos 5 picos o hasta que la integracin se lleve a cabo con un valor de rechazo por altura inicial de 0. De no cumplirse las condiciones citadas despus de 10 intentos, se da por terminada la integracin de prueba.
116
Integracin Integracin automtica (Autointegrate)
Se examinan los resultados de la integracin y se ajusta la anchura de pico en base a las anchuras de los picos detectados, sesgndose el clculo a favor de los picos iniciales. Se utiliza la simetra de los picos detectados para incluir en el clculo de la anchura de pico nicamente aquellos picos con simetra entre 0,8 y 1,3. Si no se encuentran suficientes picos simtricos, esos lmites se relajan para permitir una simetra mnima/1,5 y una simetra mxima*1,5. Se examina entonces la lnea base entre los picos para refinar los valores previos de rechazo por altura y sensibilidad de pendiente. El rechazo por rea se fija en el 90% del rea mnima del pico ms simtrico de los detectados durante la integracin de prueba. El cromatograma se integra nuevamente utilizando esos valores finales de los parmetros de integracin y los resultados de la integracin se almacenan.
Parmetros de la integracin automtica

La funcin Autointegrate establece valores para los siguientes parmetros: Sensibilidad de pendiente inicial Altura inicial Anchura de pico inicial Rechazo por rea inicial
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Integracin Integracin manual
Integracin manual
Introduccin
Este tipo de integracin permite al usuario integrar determinados picos o grupos de picos. A excepcin del valor de rechazo por rea inicial, los parmetros de integracin del software se ignoran dentro del rango especificado para la integracin manual. Si uno o ms de los picos resultantes de la integracin manual estn por debajo del umbral de rechazo por rea, esos picos se desechan. Los parmetros de integracin manual utilizan valores de tiempo absoluto. No se ajustan por la deriva de la seal. La integracin manual permite al usuario definir los puntos de inicio y final del pico para despus incluir las reas recalculadas en las rutinas de cuantificacin e informes. Los picos integrados manualmente se etiquetan en los informes con el cdigo de separacin de picos M. La integracin manual ofrece las siguientes funciones: Draw Baseline Draw Baseline especifica dnde se van a trazar las lneas base para un pico o un conjunto de picos. El usuario puede especificar tambin si se debe producir o no la separacin automtica en los puntos de valle de los picos incluidos en el rango dado. Negative Peaks especifica cundo considerar las reas por debajo de la lnea base como picos negativos. El usuario puede especificar tambin si se debe producir o no la separacin automtica en los puntos de valle de los picos incluidos en el rango dado. Tangent Skim calcula las reas de picos divididos tangencialmente de un pico principal. El rea del pico dividido tangencialmente se resta del rea del pico principal. Split Peak especifica el punto donde dividir un pico con una lnea de cada vertical. Elimina uno o ms picos de los resultados de integracin.
Negative Peaks
Tangent Skim
Split Peak Delete Peak(s)
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Cdigos de separacin de picos para picos integrados manualmente

Los picos integrados manualmente se etiquetan en los informes de integracin con el cdigo de picos MM. Si hay algn otro pico antes del integrado manualmente y el final de ese pico cambia como consecuencia de la integracin manual, el pico modificado recibe el cdigo F (forzado). Un pico de disolvente afectado por la integracin manual, por ejemplo por una divisin tangencial, se etiqueta como R (disolvente recalculado).
Documentacin de parmetros de integracin manual

Los resultados generados tras aplicar los parmetros de integracin manual se guardan, generndose un registro de auditora de las operaciones de integracin manual. Los parmetros de integracin manual se especifican con valores absolutos del tiempo de retencin/migracin y la altura, siendo por tanto especficos del cromatograma. Como consecuencia, el sistema no aplica automticamente los parmetros de integracin manual a otros cromatogramas.
119
120
5 Cuantificacin
En qu consiste la cuantificacin? 122 Clculos de cuantificacin 123 Factores de correccin 124 Factor de respuesta absoluto 124 Multiplicador 124 Factor de dilucin 124 Cantidad de muestra 125 Procedimientos de clculo no calibrados 126 % de rea y % de Altura 126 Procedimientos de clculo calibrados 127 Clculo ESTD 128 Clculo % Norm 130 Clculo ISTD 131 Anlisis 1: Calibracin 132 Anlisis 2: Muestra desconocida 133 Clculo ISTD de picos calibrados 133 Clculo ISTD de picos no calibrados 134
121
Cuantificacin En qu consiste la cuantificacin?
En qu consiste la cuantificacin?
Despus de haber integrado e identificado los picos, el siguiente paso del anlisis es la cuantificacin. En esta etapa se utiliza el rea o la altura del pico para determinar la concentracin de un compuesto en una muestra. Un anlisis cuantitativo involucra muchas etapas, que se resumen brevemente a continuacin: Conocer el compuesto que se est analizando. Establecer un mtodo para analizar muestras que contengan este compuesto. Analizar una o varias muestras que contengan una concentracin conocida del compuesto, para obtener la respuesta debida a esa concentracin. Como alternativa pueden analizarse varias de estas muestras con diferentes concentraciones de los compuestos de inters, si el detector tiene una respuesta no lineal. Este proceso se conoce como calibracin multinivel. Analizar la muestra que contiene una concentracin desconocida del compuesto para obtener la respuesta debida a esa cantidad. Comparar la respuesta de la concentracin desconocida con la conocida, para determinar qu cantidad del compuesto est presente. Para obtener una comparacin vlida de la respuesta de la muestra desconocida con la de la muestra conocida, los datos deben adquirirse y procesarse en condiciones idnticas.
122
Cuantificacin Clculos de cuantificacin
Clculos de cuantificacin
La ChemStation ofrece los siguientes procedimientos de clculo para determinar la concentracin de cada componente presente en una mezcla: Porcentaje Normalizacin Patrn externo (ESTD) % ESTD Patrn interno (ISTD) % ISTD Los clculos utilizados para determinar la concentracin de un compuesto en una muestra desconocida dependen del tipo de cuantificacin. Cada procedimiento de clculo utiliza el rea o la altura del pico y genera un tipo diferente de informe.
123
Cuantificacin Factores de correccin
Factores de correccin
Los clculos de cuantificacin utilizan cuatro factores de correccin, el factor de respuesta absoluto, el multiplicador, el factor de dilucin y la cantidad de muestra. Estos factores se utilizan en los procedimientos de calibracin para compensar las variaciones de la respuesta del detector a los diferentes componentes, concentraciones, diluciones, cantidades de muestra y unidades de conversin.
Factor de respuesta absoluto

El factor de respuesta absoluto de una muestra representa la cantidad del componente dividida por el rea o la altura medida del pico correspondiente, en el anlisis de una mezcla de calibracin. El factor de respuesta absoluto, que se utiliza para cada procedimiento de clculo calibrado, corrige la respuesta del detector a cada componente de la muestra.
Multiplicador
El multiplicador se utiliza en cada frmula de clculo para multiplicar el resultado de cada componente. El multiplicador puede utilizarse para convertir las unidades de las cantidades.
Factor de dilucin
El factor de dilucin es un nmero por el cual se multiplican todos los resultados calculados, antes de imprimir el informe. Puede utilizarse para cambiar la escala de los resultados o corregir los cambios en la composicin de la muestra durante el preanlisis. Tambin puede utilizarse con cualquier otro propsito que requiera el uso de un factor constante.
124
Cuantificacin Factores de correccin
Cantidad de muestra
Si se seleccionan los clculos de % ESTD o % ISTD, los informes correspondientes presentan valores relativos en lugar de absolutos, es decir, la cantidad de cada componente se expresa como un porcentaje de la cantidad de muestra. La cantidad de muestra se utiliza en los informes ESTD% e ISTD% para convertir la cantidad absoluta de los componentes analizados en valores relativos, dividiendo por el valor especificado.
125
Cuantificacin Procedimientos de clculo no calibrados
Procedimientos de clculo no calibrados

Los procedimientos de clculo no calibrados no requieren una tabla de calibracin.
% de rea y % de Altura
El procedimiento de clculo del % del rea informa del rea de cada pico del anlisis, como porcentaje del rea total de todos los picos en el anlisis. El % del rea no requiere una calibracin previa y no depende de que la cantidad de muestra inyectada est dentro de los lmites del detector. No se utilizan factores de respuesta. Si todos los componentes responden igual en el detector y son eluidos, entonces el %Area proporciona una aproximacin adecuada a las cantidades relativas de los componentes. El % del rea se utiliza de forma rutinaria cuando los resultados cualitativos son de inters y para obtener informacin para crear la tabla de calibracin requerida para otros procedimientos de calibracin. El procedimiento de clculo del % de altura (Height%) informa de la altura de cada pico en el anlisis, como un porcentaje de la altura total de todos los picos del anlisis.
126
Cuantificacin Procedimientos de clculo calibrados
Procedimientos de clculo calibrados

Los procedimientos de clculo de Patrn Externo (ESTD), Normalizacin y Patrn Interno (ISTD) requieren factores de respuesta y, por lo tanto, utilizan una tabla de calibracin. Esta tabla especifica la conversin de las respuestas en las unidades elegidas por el procedimiento seleccionado.
127
Cuantificacin Clculo ESTD
Clculo ESTD
El procedimiento ESTD es un procedimiento de cuantificacin bsica en el que tanto las muestras de calibracin como las desconocidas son analizadas bajo las mismas condiciones. Los resultados de la muestra desconocida se comparan con los de calibracin para calcular las cantidades en aquella. El procedimiento ESTD utiliza factores de respuesta absolutos al contrario que el ISTD. Los factores de respuesta se obtienen en una calibracin y se graban. En los siguientes anlisis de muestra, las cantidades de los componentes se calculan aplicando estos factores de respuesta a las cantidades medidas. En este tipo de clculo el tamao de la inyeccin debe ser reproducible entre anlisis, ya que no hay patrn en la muestra para corregir las variaciones en los tamaos de la inyeccin o la preparacin de la muestra. En la preparacin de un informe ESTD, el clculo de la cantidad de un determinado compuesto en una muestra desconocida, ocurre en dos pasos: 1 Se calcula una ecuacin para la curva que pase por los puntos de calibracin de este compuesto, utilizando el tipo de ajuste indicado en el cuadro de dilogo Calibration Settings o Calibration Curve. 2 La cantidad del compuesto en la muestra se calcula utilizando la ecuacin descrita posteriormente. Esta cantidad puede aparecer en el informe o puede utilizarse en clculos adicionales en los que se utiliza el Multiplicador, Factor de Dilucin o la Cantidad de Muestra, antes de generar el informe. Si se elige el informe ESTD, la ecuacin utilizada para calcular la cantidad absoluta del componente x es:
Absolute Amt of x = Response x RF x M D
donde: Responsex (Respuestax) es la respuesta del pico x; RFx es el factor respuesta por componente x: Amount x RF x = -----------------------Response x
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Cuantificacin Clculo ESTD M es el multiplicador. D es el factor de dilucin.
Respuesta
(RF)x
Respuesta x
Cantidad x
Cantidad
El multiplicador y el factor de dilucin pueden leerse en el cuadro de dilogo Calibration Settings o en Sample Information. Si se selecciona el informe % ESTD y la cantidad de muestra no es cero, la cantidad relativa (%) de un componente x se calcula como se muestra a continuacin: ( Absolute Amt of x ) 100 Relative Amt of x = -------------------------------------------------------------Sample Amount donde: Absolute Amt of x (Cantidad absoluta de x) se calcula como se muestra anteriormente en el clculo ESTD; Sample Amount (Cantidad de muestra) se obtiene del cuadro de dilogo Sample Information o del cuadro de dilogo Calibration Settings de los anlisis individuales. Si la cantidad de muestra es cero, se calcula el patrn externo (ESTD).
129
Cuantificacin Clculo % Norm
Clculo % Norm
En el mtodo de normalizacin, se aplican factores de respuesta a las reas (o alturas) de los picos para compensar los cambios en la sensibilidad del detector para los diferentes componentes de la muestra. El informe % Norm se calcula de la misma manera que el ESTD excepto porque hay una etapa adicional para calcular las cantidades relativas, en lugar de absolutas, de los compuestos. El informe % Norm tiene la misma desventaja que los informes % rea y % Altura. Cualquier cambio que afecte al rea total de los picos afectar al clculo de concentracin de cada pico individual. El informe de normalizacin slo debe utilizarse si todos los componentes de inters son eluidos e integrados. Excluyendo ciertos picos de un informe de normalizacin cambiarn los resultados reportados de la muestra. La ecuacin utilizada para calcular el % Norm de un componente x es: Response x RF x 100 M D Norm% of x = ---------------------------------------------------------------------( Response RF ) donde: Respuestax es el rea (o altura) del pico x; RFx es el factor de respuesta;
( Response RF ) es el total de todos los productos (RESPUESTA)(RF)

para todos los picos, incluyendo el pico x; M es el multiplicador D es el factor de dilucin. El multiplicador y el factor de dilucin pueden leerse en el cuadro de dilogo Calibration Settings o Sample Information.
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Cuantificacin Clculo ISTD
Clculo ISTD
El procedimiento ISTD elimina las desventajas del mtodo ESTD utilizando un componente aadido en cantidad conocida, que acta como factor de normalizacin. Este componente, el patrn interno, se aade tanto a la muestra de calibracin como a las desconocidas. El software toma los factores de respuesta apropiados obtenidos de calibraciones previas grabadas en el mtodo. Utilizando la concentracin del patrn interno y las reas o alturas de pico del anlisis, el software calcula las concentraciones de los componentes. El compuesto utilizado como patrn interno debe ser similar al compuesto calibrado, tanto qumicamente como en su tiempo de retencin/migracin, pero debe ser cromatogrficamente distinguible. Tabla 11
Ventajas La variacin del tamao de la muestra no es crtica. La deriva del instrumento se compensa mediante el patrn interno. Los efectos de la preparacin de la muestra se minimizan si el comportamiento qumico del ISTD y el desconocido son similares.
Procedimiento ISTD
Desventajas El patrn interno debe aadirse a todas las muestras.
Si el procedimiento ISTD se utiliza para calibraciones con caractersticas no lineales, debe cuidarse que los errores que resulten de los clculos no causen errores sistemticos. En calibraciones multinivel, la cantidad del compuesto ISTD debe mantenerse constante, es decir, la misma para todos los niveles si la curva de calibracin del compuesto es no lineal. En el anlisis de patrn interno, la cantidad del componente de inters est relacionada con la cantidad del patrn interno por el cociente de las respuestas de los dos picos.
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Cuantificacin Clculo ISTD En una calibracin ISTD de dos anlisis, el clculo de la relacin corregida de cantidades de un determinado compuesto en una muestra desconocida tiene lugar en las siguientes etapas:
Anlisis 1: Calibracin
1 Los puntos de calibracin se construyen calculando la relacin de cantidades y de respuestas para cada nivel de un determinado pico en la Calibration Table. La relacin de cantidades es la cantidad del compuesto dividida por la del patrn interno, en este nivel. La relacin de respuestas es el rea o altura del compuesto dividida por la del patrn interno, en este nivel. 2 Se calcula una ecuacin para la curva que pase por los puntos de calibracin, utilizando el tipo de ajuste de curva indicado en el cuadro de dilogo Calibration Settings o Calibration Curve. Amount Ratio RF x = -----------------------------------Response Ratio
Relacin respuesta
RFx
Relacin de cantidad
Figura 28
Relacin de cantidad
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Anlisis 2: Muestra desconocida

1 La respuesta del compuesto en la muestra se divide por la respuesta del patrn interno en la muestra para obtener la relacin de respuestas para el desconocido. 2 Se calcula una relacin de cantidades para el desconocido utilizando la ecuacin de ajuste de la curva determinada en el paso 2 y la cantidad de ISTD en la muestra.
Clculo ISTD de picos calibrados

Las ecuaciones utilizadas para calcular la cantidad actual de un componente x calibrado para una calibracin de nivel nico, son: Response x Response Ratio = --------------------------------Response ISTD Actual Amt of x = ( Response Ratio RF x ) ( Actual Amount of ISTD ) M D donde: RFx es el factor de respuesta para el compuesto x; La cantidad actual (Actual Amt) de ISTD es el valor introducido en el cuadro de dilogo Calibration Settings o Sample Info para el patrn interno aadido a la muestra desconocida; M es el multiplicador. D es el factor de dilucin. Si se selecciona el tipo de informe % ISTD, se utiliza la siguiente ecuacin para calcular la cantidad relativa (%) del componente x: ( Actual Amount of x ) 100 Relative Amt of x = ----------------------------------------------------------------Sample Amount
133
Clculo ISTD de picos no calibrados

Hay dos maneras de definir el factor de respuesta que se utiliza para calcular la cantidad de picos no identificados. 1 Utilizar el factor de respuesta fijado en el cuadro With Rsp Factor del cuadro de dilogo Calibration Settings. Puede corregirse el factor de respuesta especificando una correccin ISTD. Actual Amount of x = RF x ( Response Ratio ) x Actual Amount of ISTD M D Response x Response Ratio = --------------------------------Response ISTD RFx es el factor de respuesta en el cuadro de dilogo Calibration Settings. En estas frmulas se observa que las variaciones en la respuesta ISTD se utilizan para corregir la cuantificacin del componente desconocido. 2 Utilizar un pico calibrado. Ello garantiza la utilizacin del mismo factor de respuesta para la cuantificacin de todos los picos. El factor de respuesta del compuesto seleccionado y de los picos no calibrados se corrige durante todas las recalibraciones. Si el factor de respuesta del pico calibrado cambia, tambin lo har el de los picos no identificados, en la misma proporcin. Si ya hubiera una Tabla de Calibracin configurada, puede seleccionarse un compuesto desde el cuadro Using Compound del cuadro de dilogo Calibration Settings. Las ecuaciones utilizadas para calcular la cantidad real de un pico no calibrado x se muestran anteriormente.
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6 Identificacin de picos
En qu consiste la identificacin de picos? 136 Reglas de asignacin de picos 137 Lmites de cantidad 139 Tipos de identificacin de picos 138 Tiempo de retencin/migracin absoluto 140 Tiempos de retencin/migracin corregidos 142 Picos de referencia simples 142 Picos de referencia mltiples 143 Cualificadores de picos 144 Correlacin de la seal 145 Verificacin del cualificador 145 Clculo de la relacin del cualificador 145 El proceso de identificacin 147 Localizacin de los picos de referencia 147 Localizacin de picos ISTD (Patrn interno) 147 Localizacin del resto de los picos calibrados 148 Clasificacin de picos no identificados 148
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Identificacin de picos En qu consiste la identificacin de picos?
En qu consiste la identificacin de picos?

Esta funcin identifica a los componentes en una muestra desconocida basndose en sus caractersticas cromatogrficas/electroferogrficas, determinadas por el anlisis de una muestra de calibracin bien definida. La identificacin de estos componentes es un paso necesario en la cuantificacin, si es que el mtodo analtico requiere de esta. Las caractersticas de la seal de cada componente de inters se graban en la Tabla de Calibracin del mtodo. La funcin del proceso de identificacin es comparar cada pico de la seal con los picos grabados en la Tabla de Calibracin. La Tabla de Calibracin contiene los tiempos de retencin/migracin esperados de los componentes de inters. A un pico cuyo tiempo coincide con el de uno de los picos de la Tabla de Calibracin, se le asignan los atributos de ese componente, por ejemplo, el nombre y el factor de respuesta. Los picos que no coinciden con ninguno de la Tabla de Calibracin, se clasifican como desconocidos. El proceso viene controlado por: el tiempo de retencin/migracin en la Tabla de Calibracin para los picos designados como referencia de tiempo, las ventanas del tiempo de retencin/migracin especificadas para los picos de referencia, los tiempos de retencin/migracin en la Tabla de Calibracin para los picos calibrados que no son referencia de tiempo, la ventana del tiempo de retencin/migracin especificada para estos picos no-referencia, y la presencia de cualquier pico cualificador adicional en la proporcin adecuada.
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Identificacin de picos Reglas de asignacin de picos
Reglas de asignacin de picos

En el proceso de asignacin de picos se aplican las siguientes reglas: si un pico de la muestra cae dentro de la ventana de asignacin de un componente en la Tabla de Calibracin, al pico se le asignan los atributos de ese compuesto, si dentro de la ventana de asignacin de un pico aparece ms de un pico de la muestra, entonces, el pico con tiempo de retencin/migracin ms cercano al valor esperado, es el identificado como ese compuesto, si un pico es una referencia de tiempo o un patrn interno, el pico ms grande en la ventana es el identificado como ese componente, si se utilizan cualificadores de picos, se utiliza la relacin del pico junto con la ventana de asignacin para identificar el pico del compuesto, si el pico es un cualificador, el pico medido ms cercano al pico principal del compuesto, es el identificado, y si un pico de la muestra no cae dentro de ninguna ventana de asignacin, se lista como componente desconocido.
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Identificacin de picos Tipos de identificacin de picos
Tipos de identificacin de picos

Pueden utilizarse diferentes tcnicas para identificar los picos de la muestra segn aquellos introducidos en la Tabla de Calibracin del software ChemStation.
Tiempo de retencin/migracin absoluto

Se compara el tiempo de retencin/migracin del pico de muestra con el tiempo esperado especificado para cada componente, en la Tabla de Calibracin.
Tiempo de retencin/migracin corregido

Los tiempos de retencin/migracin de los picos de los componentes se corrigen utilizando los valores de tiempo actuales de uno o ms picos de referencia y, el proceso de asignacin se realiza utilizando estos tiempos corregidos (relativos). El pico o picos de referencia debe especificarse en la Tabla de Calibracin.
Cualificadores de picos
Adems de identificar picos por su tiempo de retencin/migracin, pueden utilizarse cualificadores de picos para obtener resultados ms precisos. Si ms de un pico aparece en una ventana de tiempo, deben utilizarse los cualificadores para identificar el compuesto correcto.
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Identificacin de picos Tipos de identificacin de picos
Lmites de cantidad
Los lmites de cantidad definidos en el cuadro de dilogo Compound Details (Detalles de los compuestos) se utilizan para cualificar la identificacin de picos. Si la cantidad del compuesto identificado est dentro de los lmites de identificacin, se indica en el informe.
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Identificacin de picos Tiempo de retencin/migracin absoluto
Tiempo de retencin/migracin absoluto

En el proceso de asignacin de picos se utiliza una ventana de tiempo de retencin/migracin. sta es una ventana centrada en el tiempo de un pico esperado. Cualquier pico de la muestra que caiga dentro de esta ventana puede ser considerado como candidato para la identificacin de un componente. La Figura 29 muestra una ventana de tiempo de retencin/migracin para el pico 2 que est entre 1,809 y 2,631 minutos, siendo el tiempo esperado 2,22 minutos. Hay dos posibilidades para el pico 2, una a 1,85 minutos y otra a 2,33 minutos. Si el pico esperado no es de referencia, se selecciona el pico ms cercano al tiempo esperado de 2,22 minutos. Si el pico esperado es una referencia de tiempo o un patrn interno, se selecciona el pico ms grande de la ventana. En ambos casos la ChemStation selecciona el pico a 2,33 minutos. Si los dos picos tuvieran el mismo tamao, se escoge el pico ms cercano al centro de la ventana.
Pico 1
Pico 2
Pico 3
Pico 4
Ventana para pico 2
Figura 29
Ventanas de tiempo de retencin/migracin
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Identificacin de picos Tiempo de retencin/migracin absoluto Se utilizan tres tipos de ventanas para intentar localizar los picos. ventanas de picos de referencia que se aplican slo a este tipo de picos, ventanas de picos no de referencia que se aplican al resto de los picos calibrados, y
ventana de valores especficos para los componentes individuales que estn fijados en el cuadro de dilogo Compound Details. Los valores por defecto para estas ventanas se introducen en el cuadro de dilogo Calibration Settings. La anchura a ambos lados del tiempo de retencin/migracin que define la ventana de asignacin de picos es la suma de las ventanas absoluta y porcentaje. Una ventana del 5 % significa que el pico debe tener un tiempo de retencin/migracin entre 2,5 % por debajo y 2,5 % por encima del tiempo calibrado para ese pico. Por ejemplo, un pico con un tiempo de retencin/migracin de 2,00 en el anlisis de calibracin debe aparecer entre 1,95 y 2,05 minutos en los anlisis siguientes. Por ejemplo, una ventana absoluta de 0,20 minutos y una relativa del 10 % resultan en una ventana de tiempo de retencin/migracin de entre 1,80 y 2,20 minutos. 1,80 min = 2,00 min 0,10 min (0,20 min / 2) 0,10 min (10 % de 2,00 min). 2,20 min = 200 min + 0,10 min (0,20 min / 2) + 0,10 min (10 % de 2,00 min).
141
Identificacin de picos Tiempos de retencin/migracin corregidos
Tiempos de retencin/migracin corregidos

Asignar los picos por sus tiempos de retencin/migracin absolutos puede ser simple pero no siempre es fiable. Cada tiempo puede variar ligeramente debido a pequeos cambios en las condiciones o la tcnica. Como resultado pueden aparecer los picos fuera de las ventanas de asignacin y, por lo tanto, no ser identificados. Una tcnica para intentar resolver las inevitables fluctuaciones que ocurren cuando se utilizan los valores absolutos de tiempo, es expresar los tiempos de los componentes, relativamente a uno o ms picos de referencia. Los picos de referencia se identifican en la Tabla de Calibracin como una entrada en la columna referencia de ese pico. La tcnica de asignacin relativa de picos utiliza el pico o los picos de referencia para modificar la posicin de las ventanas de asignacin y poder compensar las derivas en los tiempos de retencin/migracin de los picos de la muestra. Si no se definen picos de referencia en el mtodo o la ChemStation no puede identificar al menos un pico de referencia durante el anlisis, el software utilizar los tiempos absolutos para la identificacin.
Picos de referencia simples

Se crea una ventana de tiempo de retencin/migracin para el pico de referencia alrededor de su tiempo. El pico mayor que aparece en la ventana es identificado como el pico de referencia. Se corrigen los tiempos esperados del resto de los picos en la Tabla de Calibracin, en proporcin a la relacin del tiempo esperado al actual, del pico de referencia.
142
Identificacin de picos Tiempos de retencin/migracin corregidos
Picos de referencia mltiples

El corregir los tiempos de retencin/migracin con un slo pico de referencia se basa en suponer que la desviacin del tiempo respecto al esperado es uniforme y lineal, segn progresa el anlisis. A menudo, durante un anlisis largo, el tiempo de retencin/migracin no cambia de manera uniforme. En tal caso se obtienen mejores resultados utilizando picos de referencia mltiples, espaciados a lo largo del anlisis. De este modo se divide la seal en zonas separadas. Dentro de cada zona se supone que la desviacin entre los tiempos de retencin/migracin cambia linealmente, pero la relacin de cambio se determina independientemente para cada zona.
N O TA
El algoritmo de correccin del tiempo puede fallar si los tiempos de retencin de los picos de referencia estn muy cercanos y no estn distribuidos a lo largo del tiempo total del anlisis.
143
Identificacin de picos Cualificadores de picos
Cualificadores de picos
Un componente puede detectarse con ms de una seal. Aunque es aplicable a todas las formas de cromatografa que utilicen mltiples detectores o detectores capaces de producir seales mltiples, la deteccin de seales mltiples se utiliza de manera ms comn en cromatografa lquida mediante los detectores de longitud de onda mltiple o de diodos. Tales detectores se configuran normalmente de manera que la longitud de onda ms cercana a la mayor absorbancia (rea) es la utilizada para definir el pico principal en la Tabla de Calibracin. En la Figura 30 es 1. Las otras dos longitudes de onda a las que se han adquirido seales, pueden utilizarse como cualificadores de picos. En la Figura 30 son 2 y 3.
Longitud de onda del pico principal Respuesta Longitud de onda pico cualificador
Longitud de onda
Figura 30
Cualificadores de pico
Los picos de un compuesto tienen una relacin constante de respuesta a las diferentes longitudes de onda. La respuesta del pico cualificador es un cierto porcentaje de la respuesta del pico principal. Los lmites que determinan el rango aceptable para la respuesta esperada pueden fijarse en la tabla de calibracin cuando la opcin Identification Details est seleccionada. Si la relacin entre el cualificador del pico principal 1 y el cualificador de picos, por ejemplo, 3 est dentro de los lmites permitidos, podr confirmarse la identidad del compuesto.
144
Identificacin de picos Cualificadores de picos
Correlacin de la seal
La correlacin de seales significa que dos picos, medidos en diferentes detectores dentro de una ventana de tiempo definida, se asignan al mismo compuesto. La ventana de correlacin de seales se puede controlar a travs del parmetro SignalCorrWin, en la tabla QuantParm del registro _DaMethod. La correlacin de seales se desactiva cuando se ajusta la ventana de correlacin a 0,0 minutos (consultar la Gua de Programacin de Macros para ms informacin). Cuando la correlacin de seales no est activada, los picos que eluyen al mismo tiempo de retencin/migracin en detectores diferentes son tratados como compuestos diferentes. La ventana de correlacin de seales por defecto para datos LC, CE, CE/MS y LC/MS es de 0,03 minutos y de 0,0 minutos para GC.
Verificacin del cualificador

Cuando la correlacin de seales est permitida, la verificacin de la cualificacin se activa para todos los tipos de ficheros de datos por defecto. Se puede desactivar ajustando la bandera UseQualifiers en la tabla Quantification Parameters del mtodo (consultar la gua de programacin de macros para ms detalles). La verificacin del cualificador se desactiva tambin cuando la correlacin de seales est apagada.
Clculo de la relacin del cualificador

Cuando la verificacin de los cualificadores para un compuesto, la relacin entre el tamao del cualificador y el tamao del pico principal se verifica frente a los lmites calibrados. El tamao puede ser altura o rea, de acuerdo al parmetro de clculo base en el Informe especfico (Specify Report). Los picos del cualificador se pueden calibrar en la misma manera que los compuestos objetivo. El usuario no tiene que especificar la relacin del cualificador. La relacin esperada del cualificador se calcula de forma automtica: QualRespRatio = Respuesta del cualificador / Respuesta del pico principal ambos medidos en el tiempo de retencin del compuesto.
145
Identificacin de picos Cualificadores de picos El parmetro QualTolerance define el rango admisible de la relacin del cualificador, por ejemplo, 20%. La tolerancia puede ajustarse en la tabla de calibracin de la interfase del usuario (Identification Details) y es un porcentaje absoluto. Por ejemplo, porcentaje absoluto: Rango admisible = 50% 20% = 30% 70% Para calibraciones multinivel, la ChemStation calcula una tolerancia mnima del cualificador basada en las relaciones medidas para el cualificador en cada nivel de calibracin. La tolerancia mnima del cualificador se calcula mediante la siguiente ecuacin:
i
( qi q )
n=1 - 100 minimum qualifier tolerance = ---------------------------qi
donde qi es la relacin del cualificador medida al nivel i.
146
Identificacin de picos El proceso de identificacin
El proceso de identificacin
Al intentar identificar picos, el software revisa tres veces los datos de integracin.
Localizacin de los picos de referencia

La primera revisin identifica los picos de referencia de tiempo. El software busca los tiempos de retencin/migracin en el anlisis para asignar las ventanas de los picos de referencia en la Tabla de Calibracin. Un pico de un anlisis se identifica como referencia en la Tabla de Calibracin si el tiempo de retencin/migracin del pico del anlisis est dentro de la ventana construida para el pico de la Tabla de Calibracin. Si dentro de una ventana se encuentra ms de un pico, aquel con el rea o altura mayor seguido por una coincidencia con el cualificador de seal positiva, si hubiera configurada, es el elegido como pico de referencia. Despus de encontrar un pico de referencia, la diferencia entre su tiempo de retencin/migracin y el de la Tabla de Calibracin, se utiliza para ajustar los tiempos esperados del resto de los picos de la Tabla de Calibracin.
Localizacin de picos ISTD (Patrn interno)

La segunda revisin identifica cualquier pico de patrn interno definido. Si un pico no ha sido ya identificado como ISTD, puede serlo como referencia. Los picos ISTD son identificados por ventanas de tiempo de retencin/migracin y cualificadores de picos. Si se encuentra ms de un pico en la misma ventana ISTD, se elige el mayor.
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Identificacin de picos El proceso de identificacin
Localizacin del resto de los picos calibrados

La tercera revisin identifica el resto de los picos listados en la Tabla de Calibracin. Los picos no-referencia en la tabla, son asignados al resto de los picos del anlisis utilizando sus ventanas de tiempo. Cada pico calibrado, no-referencia, tiene su propio tiempo de retencin/migracin en la Tabla de Calibracin. Este se ajusta por un anlisis particular basndose en la preidentificacin de los picos referencia de tiempo. La ventana de tiempo de retencin/migracin de pico calibrado se ajusta segn el tiempo corregido del pico calibrado. Si en la misma ventana se encuentra ms de un pico, se escoge aquel con el tiempo ms cercano al esperado y que adems cumple las expectativas del cualificador, opcional.
Clasificacin de picos no identificados

Si hubiera picos que todava no estuvieran identificados, se clasifican como desconocidos. La ChemStation intenta agrupar los picos desconocidos que pertenecen al mismo compuesto. Si se ha detectado un pico en ms de una seal, los picos con el mismo tiempo en todas las seales, son agrupados a un compuesto. Los picos desconocidos se reportan si se ha seleccionado la opcin correspondiente en el cuadro de dilogo Calibration Settings.
148
7 Calibracin
Definicin de trminos 150 Tabla de calibracin 151 Curva de calibracin 152 Muestras desconocidas 154 Tipos de calibracin 155 Calibracin de un slo nivel 155 Calibracin multinivel 156 Rangos de calibracin 158 Ajustes de la curva de calibracin 158 Tratamiento del origen 158 Calibracin de grupo 161 Suma de picos 162 Recalibracin 163 Qu es la recalibracin? 163 Por qu recalibrar? 163 Recalibracin manual 163 Recalibracin con suma de picos 164 Opciones de recalibracin 164 Maneras de recalibrar 165 Recalibracin de picos no identificados 166
149
Calibracin Definicin de trminos
Definicin de trminos
Calibracin La calibracin es el proceso de determinacin de los factores de respuesta utilizados para calcular las concentraciones absolutas de los componentes, inyectando muestras especialmente preparadas para ello. La tabla de calibracin tambin se utiliza para la identificacin. Consultar el Captulo 6, Tipos de identificacin de picos. Un compuesto qumico puede dar lugar a varios picos, en una calibracin de seal mltiple, normalmente uno por seal. En una calibracin de seal simple, un compuesto se relaciona con un pico. Un nivel de calibracin comprende los puntos para una concentracin de la muestra de calibracin. En una calibracin multiseal, los puntos pueden estar distribuidos sobre varias seales. Un punto de calibracin se refiere a una relacin cantidad/respuesta para un pico de la curva de calibracin. Una muestra de calibracin, tambin denominada como patrn de calibracin o mezcla patrn, es una muestra que contiene una cantidad conocida del compuesto a cuantificar. En el software, la muestra de calibracin se refiere a una inyeccin del vial. Las muestras de calibracin pueden adquirirse a proveedores de compuestos qumicos o pueden prepararse utilizando una cantidad, medida con exactitud, del compuesto puro. La cantidad del compuesto en la muestra de calibracin se expresa, normalmente, como concentracin, generalmente en ng/l.
Compuesto
Nivel de calibracin Punto de calibracin Muestra de calibracin
150
Calibracin Tabla de calibracin
Tabla de calibracin
La Tabla de Calibracin, Calibration Table, especifica las conversiones de las reas o alturas de picos en las unidades elegidas, de acuerdo con el procedimiento de clculo seleccionado. La tabla de calibracin contiene una lista de tiempos de retencin/migracin de un anlisis de calibracin. Estos tiempos se comparan con los de los picos en un anlisis de muestra. Donde se produce una coincidencia, se asume que el pico de la muestra representa el mismo componente que aquel de la tabla de calibracin, consultar el Captulo 6, Tipos de identificacin de picos. Durante un anlisis o mientras se est generando un informe, las cantidades introducidas para cada pico se utilizan para calcular las cantidades segn el procedimiento de clculo seleccionado para el informe. El tipo y la cantidad de informacin requerida para crear una tabla de calibracin vara con el tipo de procedimiento de clculo deseado. Es necesaria la siguiente informacin para crear una tabla de calibracin: el tiempo de retencin/migracin para el pico de cada componente de una mezcla de calibracin, y la cantidad de cada componente utilizada en la mezcla de calibracin, expresada en unidades consistentes.
151
Calibracin Curva de calibracin
Curva de calibracin
Una curva de calibracin es la representacin grfica de los datos de cantidad y respuesta para un compuesto, obtenidos de una o ms muestras de calibracin. Normalmente se inyecta una alcuota de la muestra de calibracin, se obtiene una seal y se determina la respuesta calculando el rea o altura del pico, como se muestra en la Figura 31.
Respuesta Respuesta
Tiempo (min)
Cantidad ng/l
Figura 31
Seal y Curva de Calibracin de la muestra (10 ng/l) de Calibracin
Un coeficiente de correlacin aparece con el grfico de la curva de calibracin. El coeficiente de correlacin es la raz cuadrada del coeficiente de regresin y constituye una medida del ajuste de la curva de calibracin entre los puntos de datos. El valor del coeficiente se muestra con tres decimales, en el rango: 0.000 a 1.000 donde: 0.000 = no hay ajuste 1.000 = ajuste perfecto
152
Calibracin Curva de calibracin Para cada nivel de calibracin, se muestra el residual relativo. Se calcula mediante la frmula: Response calibrated Response calculated - 100 relRES = -----------------------------------------------------------------------------------------------------Response calculated donde: relRES= residual relativo en porcentaje La respuesta calculada representa el punto en la curva de calibracin. La desviacin estndar residual, que se imprime en algunos informes y cuando se selecciona Print calibration table and curves (Imprimir tabla y curvas de calibracin) se calcula utilizando la siguiente frmula:
n i=1
( Resp
calibratedi
Resp calculatedi )2
ResSTD =
donde:
---------------------------------------------------------------------------n2
ResSTD = desviacin estndar residual Respcalibrada = respuesta calibrada para el punto i Respcalculada i = respuesta calculada para el punto i n= nmero de puntos de calibracin
153
Calibracin Muestras desconocidas
Muestras desconocidas
Una muestra desconocida es aquella que contiene una cantidad desconocida del compuesto a cuantificar. Para saber qu cantidad del compuesto hay en la muestra desconocida, debe: crear una curva de calibracin para el compuesto, inyectar una alcuota de la muestra desconocida y realizar el anlisis exactamente igual que para la muestra de calibracin, utilizando la seal, determinar la respuesta, que es el rea o altura del pico debido a la cantidad desconocida del compuesto y usar la curva de calibracin para calcular la cantidad del compuesto en la muestra desconocida. Por ejemplo, si el rea de pico en la muestra desconocida es 500, puede determinarse que la cantidad en la muestra es de 5 ng/l, utilizando la curva de calibracin que se muestra en la Figura 32.
Respuesta
Respuesta Respuesta desconocida = 500 Cantidad desconocida = 5 ng/l
rea = 500
Tiempo (min)
Cantidad (ng/l)
Figura 32
Seal de la muestra desconocida y curva de calibracin
154
Calibracin Tipos de calibracin
Tipos de calibracin
La ChemStation ofrece dos tipos de calibraciones, de nivel simple y mltiple.
Calibracin de un slo nivel

La curva de calibracin mostrada en la Figura 33 contiene un punto, es decir, un nivel. Para la curva de calibracin de nivel simple, se supone que la respuesta del detector es lineal en el rango de concentraciones de trabajo para las muestras de inters. El factor de respuesta para un pico determinado se obtiene por la inversa de la pendiente de la lnea de la curva de calibracin que atraviesa ese punto y el origen. Una desventaja de la calibracin de nivel simple es que debe suponerse que la respuesta del detector a la concentracin de la muestra es lineal y que la representacin de la concentracin frente a la respuesta, pasa por el origen. Esto no es siempre verdad y puede llevar a resultados imprecisos.
Respuesta Curva calibracin
Concentracin (ng/l)
Figura 33
Curva de calibracin de un slo nivel
155
Calibracin Tipos de calibracin Para obtener resultados cuantitativos exactos, una curva de calibracin debe tener al menos dos niveles. Estos niveles deben encerrar las cantidades esperadas en las muestras desconocidas.
Respuesta Curva de calibracin
Concentracin ng/l
Figura 34
Curva de calibracin de dos niveles
Por ejemplo, si quiere cuantificarse un compuesto y se espera que las muestras desconocidas estn entre 1 y 10 ng/l, la curva de calibracin debera tener al menos los dos niveles que se muestran en la Figura 34.
Lmites de cantidad
La ChemStation permite definir los rangos vlidos de cuantificacin en trminos de cantidades absolutas para cada componente.
Calibracin multinivel
La calibracin multinivel puede utilizarse cuando no sea suficientemente exacto suponer que un compuesto presenta una respuesta lineal, o para confirmar la linealidad del rango de calibracin. Cada nivel corresponde a una muestra de calibracin con una concentracin de los componentes. Las muestras de calibracin deben prepararse de manera que la concentracin de cada componente vare a lo largo del rango esperado en las muestras desconocidas. De este modo es posible permitir un cambio en la respuesta del detector con la concentracin y calcular los factores de respuesta.
156
Esta curva de calibracin multinivel tiene tres niveles y muestra un ajuste lineal a travs del origen. Este mtodo de ajuste es similar al de calibracin de nivel simple. Se supone que la respuesta del detector a la concentracin es lineal. La diferencia entre los dos tipos de calibracin es que, con ajuste lineal, la pendiente de la respuesta del detector puede determinarse mediante el mejor ajuste a travs de un nmero de puntos, uno para cada nivel.
Cantidad (ng/l)
Figura 35
Curva de calibracin con tres niveles
La tabla de calibracin correspondiente, que es la tabulacin de la informacin utilizada para generar esta curva, podra ser similar a la que se muestra en la Tabla 12. Tabla 12
Nivel 1 2 3
Tabla de calibracin
Cantidad (ng/l) 1 5 10 Respuesta (cuentas de rea) 100 500 1000
En este ejemplo, las muestras de calibracin que se utilizaron para generar los tres niveles han sido identificados como 1, 2 y 3.
157
Rangos de calibracin
Cada calibracin multinivel es vlida en el rango de concentraciones de los patrones. La extrapolacin de una curva de calibracin, especialmente si no es lineal, es en el mejor de los casos, una aproximacin. El rango vlido de calibracin para cada compuesto puede definirse en el cuadro de dilogo Compound Details. Los datos para ese compuesto se introducen como lmites inferior y superior. Si se exceden stos, aparecer un mensaje de aviso.
Ajustes de la curva de calibracin

Se dispone de varios tipos de ajuste de curva con la calibracin multinivel. Lineal por trozos Lineal Logartmico Potencial Exponencial Cuadrtico Cbico Promedio (Respuesta/Cantidad)
Ajuste no lineal
En algunos casos, la respuesta del detector a los cambios en la concentracin es no lineal. Para este tipo de anlisis, un mtodo de calibracin de regresin lineal no es adecuado y debe utilizarse un clculo de calibracin multinivel.
Tratamiento del origen

Hay cuatro maneras de tratar al origen cuando se representa la respuesta: ignorarlo, incluirlo,
158
Calibracin Tipos de calibracin forzarlo, o conectarlo. Para forzar el origen a que aparezca en la curva de calibracin, los puntos de calibracin se reflejan desde el primer cuadrante al tercer cuadrante. La utilizacin de todos los puntos para el clculo de regresin garantiza que la curva de calibracin resultante pasa por el origen. Esto tambin se explica en la Figura 36.
()
Cantidad (ng/l)
()
() Figura 36 Forzado del origen
Para ms informacin sobre los ajustes de la curva de calibracin y el tratamiento del origen, consultar el fichero de la ayuda en lnea.
Importancia del punto de calibracin

A la hora de configurar la curva de calibracin por defecto, puede especificarse el peso relativo (o importancia) de los puntos de calibracin utilizados para generar la curva.
159
Calibracin Tipos de calibracin Pueden seleccionarse las siguientes opciones:

Weight (Importancia) Igual Lineal (Amnt) Descripcin Todos los puntos tienen igual importancia en la curva. Un punto de calibracin con la cantidad x tiene la importancia 1/x normalizada a la cantidad ms pequea de manera que el factor de mayor importancia es 1. La normalizacin se realiza multiplicando el peso por la cantidad ms pequea. Por ejemplo, para un punto de cantidad x, es ( 1 x ) a donde a es la cantidad ms pequea del compuesto calibrado preparado con los patrones de calibracin. Si se incluye el origen, se le asigna la media de las importancias del resto de los puntos de calibracin. Un punto de calibracin con la respuesta y tiene la importancia 1/y normalizada a la respuesta ms pequea de manera que el factor de mayor importancia sea 1. La normalizacin se realiza multiplicando la importancia por la respuesta ms pequea. Por ejemplo, la importancia de un punto de calibracin por la cantidad y es ( 1 y ) b donde b, es la respuesta correspondiente a la cantidad ms pequea del compuesto calibrado preparado con los patrones de calibracin. Si se incluye el origen, se le asigna la media de las importancias del resto de los puntos de calibracin.
Lineal (Resp)
Quadratic (Amnt) Un punto de calibracin con la cantidad x tiene la importancia 1/x2 normalizada a la cantidad ms pequea de manera que el factor de mayor importancia es 1. La normalizacin se realiza multiplicando el peso por la cantidad ms pequea. Por 2 2 ejemplo, para un punto de cantidad x, es ( 1 x ) a donde a es la cantidad ms pequea del compuesto calibrado preparado con los patrones de calibracin. Quadratic (Resp) Un punto de calibracin con la respuesta y tiene la importancia 1/y2 normalizada a la respuesta ms pequea, de manera que el factor de importancia mayor sea 1. La normalizacin se realiza multiplicando la importancia por la respuesta ms pequea. Por ejemplo, la importancia de un punto de calibracin de respuesta y es 2 2 ( 1 y ) b donde b, es la respuesta correspondiente a la cantidad ms pequea del compuesto calibrado preparado con los patrones de calibracin. # Calibrations Un punto de calibracin se considera ms o menos, segn el nmero de recalibraciones del punto. No se realiza normalizacin.
Las opciones de calibracin cuadrtica, por ejemplo, pueden utilizarse para ajustar las variaciones en los puntos de calibracin. Con esto se garantiza que los puntos de calibracin ms prximos al origen, que pueden normalmente medirse ms exactamente, tengan una mayor importancia que los puntos de calibracin ms alejados del origen, que pueden estar dispersos. La decisin sobre qu tipo de importancia asignar a los puntos de calibracin, debe basarse en los requisitos del mtodo.
160
Calibracin Calibracin de grupo
Calibracin de grupo
La calibracin de grupo puede aplicarse a compuestos en los que las concentraciones individuales no son conocidas, pero si lo es la suma de concentraciones de un grupo de compuestos. Un ejemplo son los ismeros. Se calibran grupos completos de compuestos. Se utilizan las siguientes frmulas: Calibracin Conc AB = RF A R esponse + RF B Response B A donde: ConcAB es la concentracin del grupo de compuestos que consiste en los compuestos A y B La RespuestaA es el rea ( altura) del compuesto A RFA es el factor de respuesta Se supone que los compuestos de un grupo tienen el mismo factor de respuesta: RF A = RF B Por lo tanto, la concentracin de un compuesto dentro de un grupo, se calcula como se indica a continuacin: Conc AB Resp A Conc A = --------------------------------------Resp A + Resp B
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Calibracin Suma de picos
Suma de picos
La tabla suma de picos se proporciona para ciertas aplicaciones en las industrias petroqumica y farmacutica, que se pueden realizar de un modo ms efectivo con las siguientes caractersticas: Suma las reas de picos que entran en el rango especificado por el usuario Suma las reas de un rango de picos y realiza los clculos utilizando un slo multiplicador Suma las reas de todos los picos que tienen el mismo nombre La tabla suma de picos es similar, pero distinta de la tabla de calibracin estndar. Como la tabla de calibracin, est asociada con el mtodo que se ejecuta.
N O TA
Debe crearse una tabla de calibracin para el anlisis antes de crear la tabla suma de picos.
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Calibracin Recalibracin
Recalibracin
Qu es la recalibracin?
La recalibracin es el proceso utilizado cuando se desea actualizar un nivel de una curva de calibracin. Al recalibrar se analiza otra muestra que contiene los mismos componentes que la original y, ms importante, la misma cantidad de esos compuestos. Cuando se analiza la muestra de calibracin, se obtienen los factores de respuesta y los tiempos de retencin/migracin actualizados. Tambin puede elegirse promediar los factores de respuesta de un nmero de anlisis de calibracin de manera que todos los factores se consideran de importancia equivalente.
Por qu recalibrar?
La mayora de las calibraciones tienen una vida limitada debido a los cambios en la cromatografa. La recalibracin es necesaria para mantener la exactitud del anlisis. Por ejemplo, suponga que se ha creado una Tabla de Calibracin para la cafena que se utiliza siempre que se necesita cualificar muestras que contengan tal compuesto. En algn momento necesitar reemplazar la columna/capilar. Aunque se reemplace con una columna/capilar exactamente del mismo tipo, no se comportar de la misma manera que la columna/capilar previos cuando cre primero la tabla de calibracin para la cafena. Por lo tanto, para asegurar la consistencia debern recalibrarse los niveles de la Tabla de Calibracin anterior, utilizando la nueva columna/capilar para analizar las muestras que contengan cantidades desconocidas de cafena. As se cuantificarn muestras analizadas bajo las mismas condiciones.
Recalibracin manual
Puede introducir informacin sobre la calibracin de picos manualmente y normalizar la tabla de calibracin utilizando la opcin Manual Setup en la caja de dilogo New Calibration Table. Normalmente, se produce un nuevo mtodo de calibracin analizando una mezcla del patrn de calibracin, creando una tabla de calibracin e introduciendo las cantidades de todos los picos calibrados para obtener factores de respuesta. Esta aproximacin es ineficaz para alguna aplicacin, como la encontrada en la industria petroqumica, donde se han analizado los mismos compuestos durante aos y se encuentran disponibles factores de respuesta para varios compuestos y detectores. Conocer la Agilent ChemStation 163
Calibracin Recalibracin Se crea la tabla de calibracin manualmente, introduciendo los picos y sus factores de respuesta dentro de la tabla de calibracin, recalibrando el mtodo utilizando un patrn que contenga al menos un pico con respuesta de referencia, y seleccionando % Delta actualizado.
Recalibracin con suma de picos

Cuando se realiza una calibracin, los rangos de tiempo de retencin/migracin en la tabla Peaksum del mtodo se actualizarn antes de que la recalibracin est terminada. Las recalibraciones con suma de picos se realizan de esta manera para asegurar que la variacin (delta) se incorpora en los clculos de tiempo.
Opciones de recalibracin
Hay varias formas de actualizar las respuestas en la tabla de calibracin con los nuevos datos.
Media
Se calcula la media de todos los anlisis de calibracin, utilizando la siguiente frmula n Response + MeasResponse Response = ----------------------------------------------------------------------------n+1 donde n = nmero de calibraciones previas MeasResponse = respuesta medida
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Floating Average
Se calcula una media ponderada de todos los anlisis de calibracin. La importancia actualizada se fija en el cuadro de dilogo Recalibration Settings. Weight Weight - MeasResponse - Response + ----------------Response = 1 ---------------- 100 100 donde weight= importancia actualizada de la respuesta fijada en Recalibration Settings MeasResponse = respuesta medida
Sustituye
Los nuevos valores de respuesta sustituyen a los antiguos.
Maneras de recalibrar
La recalibracin se puede llevar a cabo de dos formas utilizando el software ChemStation. Se puede recalibrar de forma interactiva o de forma automtica durante una secuencia de anlisis automatizados. La recalibracin interactiva es en la que se entra directamente en el proceso de recalibracin del software ChemStation, despus de inyectar una o ms muestras de calibracin. La recalibracin utilizando una secuencia es en la que se especifica cuando debe ocurrir el proceso, pero el software de automatizacin realiza la recalibracin. Para ms informacin, consultar la seccin Recalibracin automtica en la pgina 182. Para ms informacin sobre cmo realizar la recalibracin utilizando el software, consultar la seccin How To? del sistema de ayuda.
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Recalibracin de picos no identificados

Hay tres formas de recalibrar los picos no identificados.
No recalibrar
Si un pico de la Tabla de Calibracin no puede identificarse en los resultados de integracin, se aborta la calibracin. Si esto ocurre en una secuencia, sta tambin se aborta.
Recalibracin parcial
Esta funcin permite recalibrar slo los picos identificados. Si hay picos no identificados, la calibracin no se aborta pero en el informe se seala qu picos no se han encontrado.
Recalibracin de todos los tiempos de retencin/migracin

Esta funcin permite la recalibracin del tiempo de retencin/migracin de todos los picos identificados y no identificados. Para ello se utilizan los tiempos de los picos identificados. No se actualizan los factores de respuesta de los picos no identificados.
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8 Automatizacin
En qu consiste la automatizacin? 169 Qu es una secuencia? 170 Parmetros de secuencia 171 Tabla de secuencia 172 Creacin de secuencias 173 Utilizacin del editor de tablas de secuencias 173 Utilizacin del botn Insert Vial Range (Insertar Rango de Viales) 173 Utilizacin del botn Append Line (Aadir Lnea) 173 Trabajar con secuencias 174 Muestras prioritarias 174 Secuenciacin con muestras de control 174 Detener una secuencia (Stop) 174 Abortar una secuencia (Abort) 175 Interrumpir una secuencia (Pause) 175 Ejecucin de una secuencia parcial 175 Fichero del registro de secuencias 177 Qu ocurre cuando se ejecuta una secuencia? 178 Asignacin de nombre a los ficheros de datos en una secuencia 179 Nombrar automticamente los ficheros en una secuencia 179 Operacin postsecuencia 181 Introducir manualmente los nombres de los ficheros 180 Recalibracin automtica 182 Not Ready Timeout (slo LC y CE) 181 Wait Time (slo LC Y CE) 181 Especificacin de las recalibraciones 183 Parmetros de recalibracin en la Tabla de Secuencia 183 Tipos de secuencias 186 Secuencias de calibracin explcita 187
167
Automatizacin
Secuencias de calibracin cclica de un slo nivel 188 Secuencias de calibracin cclica multinivel 189 Orden de anlisis del mtodo A 191 Orden de anlisis del mtodo B 192 Calibraciones explcita y cclica juntas 193 Ejemplo 193 Secuencias de calibracin cclica con agrupamiento 195 Orden del anlisis SimpReg 194 Ejemplo 195 Operacin con secuencia agrupada 196 Ejemplo 197 Secuencias de recalibracin cclicas con mltiples viales que contienen la misma dilucin del patrn 199 Secuencia de recalibracin cclica con manejo de viales de calibracin Round-Robin 199 Recalibraciones cclicas donde cada calibracin utiliza un vial diferente 201 Secuencia de agrupamiento que utiliza viales diferentes para el inicio y final del agrupamiento 201
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Automatizacin En qu consiste la automatizacin?
En qu consiste la automatizacin?
La automatizacin es el anlisis desatendido de ms de una inyeccin. La parte de secuencias del software ChemStation permite automatizar la adquisicin, la evaluacin de datos y la generacin del informe.
169
Automatizacin Qu es una secuencia?
Qu es una secuencia?
Una secuencia es una serie de instrucciones que automatizan el anlisis de muestras. Una secuencia puede utilizarse para inyectar automticamente cada muestra, adquirir y analizar los datos de acuerdo con el mtodo especificado para esa muestra. Cada vial de muestra en una secuencia puede analizarse con un mtodo analtico diferente y, por lo tanto, utilizar diferentes conjuntos de condiciones cromatogrficas/electroferogrficas y parmetros de evaluacin.
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Automatizacin Parmetros de secuencia
Parmetros de secuencia
La caja de dilogo Sequence Parameters contiene informacin comn a todos los viales de muestra en una secuencia. Utilice esta caja de dilogo para: introducir informacin sobre el directorio de datos y el nombre del operador (el nombre aparece en la caja de dilogo del nivel de acceso), especificar cmo debe hacerse el proceso de la secuencia eligiendo los parmetros Part of Methods to Run (Partes del mtodo a ejecutar). Por ejemplo, puede escogerse: ejecutar Run Time Checklist, realizar slo la adquisicin, o realizar slo el reprocesado. Si se selecciona esta opcin, podr elegirse utilizar los datos de la muestra definidos cuando sta se analiz originalmente o activando la Use Sequence Table Information (Informacin sobre la tabla de secuencia a utilizar), pueden utilizarse los datos actualizados de la muestra introducindolos en la Tabla de Secuencia: especificar lo que debe ocurrir cuando la secuencia finalice, mediante los parmetros Shutdown (Apagado), y especificar si deben utilizarse los cdigos de barras en la secuencia y como tratar una discordancia en el cdigo, suponiendo que hay instalado un lector de cdigos de barras en el sistema.
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Automatizacin Tabla de secuencia
Tabla de secuencia
La Tabla de secuencia (Sequence Table) determina qu mtodos se utilizan para analizar los viales de muestra y el orden en el que se analizan. Esta tabla tambin contiene informacin sobre cada muestra, incluyendo el nombre, los parmetros de cuantificacin y los de recalibracin. La ventana del inyector se muestra para aquellos instrumentos que soportan doble muestreo (GC). Al seleccionar Front o Back aparecen las lneas de la Sequence Table y el estado actual de ese inyector. En la ayuda en lnea se incluye una descripcin de las columnas de esta tabla y cmo estn relacionadas con la informacin grabada en el mtodo.
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Automatizacin Creacin de secuencias
Creacin de secuencias
Utilice la Tabla de Secuencia para especificar las muestras, mtodos y viales a analizar en la secuencia. Esta tabla lista cada muestra para analizar en la secuencia y contiene la informacin necesaria del vial, mtodo y calibracin, para cada muestra.
Utilizacin del editor de tablas de secuencias

Si desea modificar la visualizacin y el contenido de su tabla de secuencia, puede abrir el editor de tablas de secuencias pulsando sobre el smbolo de lista que aparece en la esquina inferior derecha de la tabla de secuencia. Una vez abierto, el editor le permitir especificar si una determinada columna debe aparecer o no en la tabla de secuencia. Tambin permite definir las anchuras correspondientes a cada una de las columnas de la tabla. Dependiendo de las opciones de software instaladas se aadirn campos de columna adicionales, como el campo "Target Mass" cuando haya un mdulo LC/MS instalado o el campo "Study" para la instalacin adicional de ChemStore.
Utilizacin del botn Insert Vial Range (Insertar Rango de Viales)

Si muchas de las muestras utilizan el mismo mtodo, pueden introducirse rpidamente en la tabla de secuencias (Sequence Table) utilizando la funcin Insert Vial Range. Esta funcin copia el nombre del mtodo, el rango de viales, el nmero de inyecciones por vial y, si se especifica, la Cantidad de Muestra, Cantidad de patrn interno, Multiplicador y Dilucin. El sistema, entonces, introduce la informacin para cada vial en el rango en la Tabla de Secuencia.
Utilizacin del botn Append Line (Aadir Lnea)

Para aadir una nueva lnea en blanco al final de la tabla de secuencia, seleccionar el botn Append Line.
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Automatizacin Trabajar con secuencias
Trabajar con secuencias

A las secuencias se accede y se crean desde el men Sequence. Las secuencias pueden crearse y salvarse del mismo modo que los mtodos. Cuando se graba una secuencia, se crea un fichero con la extensin .S. Cuando se desee editar o utilizar de nuevo la secuencia, acceder a ella utilizando la opcin Load Sequence del men Sequence.
Muestras prioritarias
Una secuencia que est ejecutndose puede interrumpiese (Pause) despus de que se complete el mtodo en curso. La secuencia puede interrumpirse para poder realizar el anlisis de una muestra prioritaria, con el mismo u otro mtodo. La secuencia puede, entonces, reiniciarse, continuando con la muestra en la que fue interrumpida.
Secuenciacin con muestras de control

En el campo Sample Type de la tabla de secuencia, pueden especificarse muestras de control. El mtodo utilizado para analizar la muestra de control, debe contener una tabla de calibracin donde se especifiquen los lmites de la muestra de control para uno de los compuestos. Si se exceden estos lmites, la secuencia se detiene y se registra un mensaje en el registro. Al utilizar uno de los estilos de informe de la ChemStation, los lmites de la muestra de control tambin se imprimen en los informes generados para estos anlisis. Para ms informacin sobre cmo definir una secuencia con muestras de control, consultar la seccin How To? del sistema de ayuda en lnea.
Detener una secuencia (Stop)

El anlisis actualmente en curso ser completado antes de que la secuencia se detenga. Una secuencia detenida no puede reiniciarse.
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Automatizacin Trabajar con secuencias
Abortar una secuencia (Abort)

La funcin Abort termina la secuencia en curso, inmediatamente.
Interrumpir una secuencia (Pause)

Durante la interrupcin de una secuencia no pueden cambiarse el nombre del fichero de la Tabla de Secuencia ni el fichero de datos. En la Sequence Table slo pueden modificarse lneas que no hayan sido ya ejecutadas o el nmero del vial en la lnea de secuencia en curso. Pueden aadirse, borrar y cambiar lneas de secuencia para futuros anlisis. Por ejemplo, puede ser necesario editar una secuencia activa para aadir un nuevo lote de muestras. Puede editarse la secuencia para que esos viales sean la siguiente muestra que la ChemStation procese despus de las muestras que estn en la lnea de secuencia que se est ejecutando en ese momento.
Ejecucin de una secuencia parcial

Una Tabla de Secuencia que ya est configurada puede ser ejecutada parcialmente seleccionando la opcin Partial Sequence en el men Sequence. El sistema muestra la caja de dilogo Partial Sequence y permite seleccionar muestras individuales de la tabla para el anlisis. En cada lnea de la caja de dilogo Partial Sequence se muestra un anlisis. Para cada anlisis se presenta el vial, el mtodo, el fichero de datos y el nombre de la muestra. Adems, en las columnas Seq Tbl y Calib:RF:RT se incluye informacin codificada sobre la Tabla de Secuencia y cualquier muestra de calibracin. Consultar en el sistema de ayuda en lnea una explicacin de estos cdigos. Puede obtenerse una copia en papel de la secuencia parcial, seleccionando el botn Print.
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Automatizacin Trabajar con secuencias El siguiente cuadro de dilogo Partial Sequence es el que resulta cuando SimpReg Method y Sequence Table mostrados posteriormente en la Tabla 18 en la pgina 193 y la Tabla 19 en la pgina 194, estn activos. Las muestras 1, 2, 4, 5, y 8 son marcadas para su procesado.
Figura 37
Cuadro de dilogo Partial Sequence (Secuencia Parcial)
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Automatizacin Fichero del registro de secuencias
Fichero del registro de secuencias

Se genera un fichero de registro de secuencias en el que se indica lo que ha ocurrido durante su ejecucin. Es til para identificar cundo han ocurrido los errores si la secuencia se ha ejecutado durante la noche o de forma desatendida. El nombre del fichero de registro (logbook) siempre tiene la extensin .log. Este fichero est localizado en el directorio donde estn grabados los datos de la secuencia.
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Automatizacin Qu ocurre cuando se ejecuta una secuencia?
Qu ocurre cuando se ejecuta una secuencia?

Si hubiera inyector automtico, el software ChemStation, primero localiza la muestra en el inyector, segn el nmero introducido en la columna Vial. Se cargan en el instrumento los parmetros del mtodo. Se ejecuta la macro preanlisis. Se inyecta la muestra en el instrumento (manual o automticamente). Se realiza la evaluacin de datos del mtodo. Integracin, cuantificacin e informe, incluyendo cualquier macro especificada por el usuario. Se ejecuta la macro postanlisis. Durante todo el proceso, la ChemStation realiza seguimiento del progreso de la secuencia en tiempo real y genera un fichero de registro de secuencia.
Estado de ChemStation Macro post Evaluacin datos Niveles estado Fichero datos primarios cerrado Inicio secuencia Inyeccin y anlisis Macro pre Cargar mtodo
Inyeccin
Figure 38
Estado de la secuencia
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Automatizacin Asignacin de nombre a los ficheros de datos en una secuencia
Asignacin de nombre a los ficheros de datos en una secuencia

El nombramiento de los ficheros de datos en una secuencia, puede realizarse de forma: automtica, manual, o por prefijo/contador. En cada caso, debe especificarse un subdirectorio donde los ficheros de datos van a grabarse, consultar Parmetros de secuencia en la pgina 171.
Nombrar automticamente los ficheros en una secuencia

Viales de muestra
Por ejemplo 017-0103.D donde: Los primeros tres dgitos son el nmero del vial. Por ejemplo, 017. El cuarto dgito en cromatografa lquida y electroforesis capilar es un guin de separacin (-). En un cromatgrafo de gases, ser (F) de front (frontal) o (B) de back (trasero). El quinto y el sexto dgito son la lnea de secuencia que define el mtodo utilizado. Por ejemplo 01 para la primera lnea. El sptimo y octavo dgito son el nmero de inyeccin para ese vial segn el mtodo. Por ejemplo 03 para la tercera inyeccin.
Anlisis de blancos
Por ejemplo NV--0499.D donde: NV significa ningn vial. - es un guin de separacin. 0499 es el nonagsimo noveno anlisis blanco de la lnea de secuencia 4.
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Automatizacin Asignacin de nombre a los ficheros de datos en una secuencia
Introducir manualmente los nombres de los ficheros

Una de las columnas de la tabla de secuencia se denomina Datafile. Cuando no contiene ninguna entrada, el esquema especificado para nombrar los ficheros de datos (automtico o prefijo-contador) se utiliza para crear el nombre de los ficheros. Si se introduce cualquier texto en la columna Datafile, la ChemStation utiliza ese texto como nombre de los ficheros durante el anlisis. Si se especifica ms de una inyeccin por vial en una lnea con un nombre de fichero de datos manual, la ChemStation automticamente, corta caracteres del final del nombre introducido por el usuario y aade el nmero de inyeccin. Esto evita que se utilice el mismo nombre para mltiples inyecciones.
Utilizacin de un prefijo/contador para nombrar ficheros

Si se utiliza la opcin Prefix/Counter para nombrar ficheros de datos, la ChemStation genera un nombre para cada anlisis. Para un instrumento que soporte anlisis de doble seal, como el GC, la ChemStation generar un nombre para cada seal. La configuracin de las secuencias permite el uso de nombres de fichero largos para el prefijo/contador. El nombre de fichero de datos definido mediante prefijo/contador puede tener hasta quince caracteres ms la extensin .d, lo que hace un total de diecisiete caracteres. El campo de prefijo/contador est sujeto a las reglas siguientes: el contador en s puede tener un mximo de 6 caracteres si un prefijo contiene menos de nueve caracteres, el contador se ampla automticamente a 6 dgitos el nmero que se da en el contador es el nmero de partida incrementado. Tabla 13
Prefijo long longname testwithalongna Contador 000001 000001 1 Nombre de fichero resultante long000001 longname000001 testwithalongna1
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Automatizacin Operacin postsecuencia
Operacin postsecuencia
Puede especificarse qu debe ocurrir despus de que una secuencia haya terminado durante una operacin normal o cuando la ChemStation encuentre un error durante una operacin de secuencia. Para LC, activando la opcin Post-Sequence Cmd/Macro de Sequence Parameters podr elegirse: que el sistema permanezca en estado STANDBY (reposo) en el que la bomba y la lmpara estn apagadas, que el sistema permanezca en estado LAMPOFF si todas las lmparas estn apagadas (slo LC y CE), que el sistema permanezca en estado PUMPOFF si todas las bombas estn apagadas (slo LC y CE), utilizar una macro por defecto SHUTDOWN o modificar SHUTDOWN.MAC para determinar una operacin especfica. Por ejemplo, puede desearse apagar el sistema despus de completar la secuencia. Otros usos de la macro de apagado pueden ser fijar un flujo cero o reducirlo lentamente. En Sequence Parameters, puede especificarse la ejecucin de cualquier macro incluyendo su nombre en el campo Post-Sequence Cmd/Macro y seleccionando la opcin.
Not Ready Timeout (slo LC y CE)

Not Ready Timeout en Sequence Parameters es el tiempo que el sistema esperar a que el instrumento est preparado, ready; despus de este tiempo el sistema se apagar.
Wait Time (slo LC Y CE)

Sequence Parameters permite especificar un tiempo de espera que se ejecuta despus de cargar un mtodo y antes de la primera inyeccin con ese mtodo. Puede ser til para que la columna/capilar se reequilibre si se utilizan nuevas condiciones de anlisis.
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Automatizacin Recalibracin automtica
Recalibracin automtica
A menudo se realiza una calibracin despus de un cambio en las condiciones de operacin, por ejemplo despus de cambiar una columna o un capilar. La recalibracin automtica se suele realizar al principio de una secuencia de anlisis o a intervalos regulares durante ella, como parte de un programa para compensar los factores que afectan al rendimiento analtico. Hay dos formas de especificar la recalibracin automtica de secuencias: secuencias de calibracin explcita, o secuencias de calibracin cclica.
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Automatizacin Especificacin de las recalibraciones
Especificacin de las recalibraciones

Los parmetros de recalibracin de una secuencia se introducen directamente en la tabla de secuencia. Estos parmetros definen cmo se recalibra el mtodo durante una secuencia.
Parmetros de recalibracin en la Tabla de Secuencia

El factor de respuesta y los tiempos de retencin/migracin pueden actualizarse de varias formas. Las instrucciones utilizadas en el anlisis de datos al recalibrar la tabla de calibracin son el nivel de calibracin, actualizar el factor de respuesta y los tiempos de retencin/migracin. Cuando se introduce Calibration en la columna SampleType de la tabla de muestra, se activan, y pueden editarse, las siguientes columnas: Cal Level Update RT Update RF Interval Los valores que pueden introducirse en cada una de estas columnas se muestran en la Tabla 14. Tabla 14
Cal Level Calibration table Level (1-999)
Parmetros de recalibracin en la tabla de secuencia

Update RT No update Average Replace Update RF No update Average Replace Bracket Delta% Interval Cyclic recalibration interval # (1-999) Blank
La Tabla 14 muestra las columnas en la tabla de secuencia que contienen los parmetros de recalibracin y los valores que pueden ser introducidos.
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No Update (No actualizar)

No cambia el factor de respuesta ni el tiempo de retencin/migracin.
Replace (Reemplazar)
Reemplaza los tiempos de retencin/migracin y la respuesta previas (reas o alturas) con aquellas slo del anlisis actual. La respuesta no se cambia para ningn pico que no se encuentre en ese anlisis de recalibracin.
Average (Promedio)
Promedia los tiempos de retencin/migracin y las respuestas (reas o alturas) para cada pico, basndose en la calibracin original y todas las recalibraciones promediadas desde entonces. Si un pico no aparece en una de ellas, la respuesta promedio del pico no se afecta.
Bracket (Agrupada)
Las muestras son agrupadas por calibraciones pre y postmuestra. Se realiza la evaluacin cuando la ltima muestra de calibracin del grupo de cierre se ha analizado. Los datos de calibracin existentes se reemplazan por los datos de los resultados del anlisis de calibracin del grupo de apertura. Las calibraciones de cierre se promedian en la Tabla de Calibracin.
Interval (Intervalo)
Interval determina la frecuencia de realizacin de la calibracin durante una secuencia. Esta frecuencia corresponde al nmero de inyecciones de muestra que se realizan antes de que el siguiente grupo de inyecciones de calibracin tenga lugar. Al principio del anlisis, se realiza una calibracin y los resultados (factores de respuesta) se introducen en la Tabla de Calibracin. Estos resultados se utilizan en los clculos cuantitativos siguientes. Despus de haber realizado el nmero de inyecciones especificado, se realiza otra calibracin y los resultados se introducen en la Tabla de Calibracin sustituyendo los resultados del anlisis de calibracin previo.
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Delta% (Variacin%)
El clculo de la variacin% le permite comparar factores de respuesta a partir de un anlisis con factores de respuesta introducidos manualmente en una tabla de calibracin. La variacin% se aplica entonces a todos los picos calibrados de la tabla. Se pueden identificar varios estndares internos, y sus factores respuesta medidos se utilizan para calcular nuevos factores de respuesta para los otros picos. Se identifica qu estndar interno se utiliza para el clculo de la variacin% para cada pico en la tabla de calibracin.
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Automatizacin Tipos de secuencias
Tipos de secuencias
Los siguientes son tipos de secuencias: secuencias de calibracin explcita, secuencias de calibracin explcita de nivel nico, secuencias de calibracin cclica multinivel, calibraciones explcita y cclica juntas en una secuencia, y secuencias de calibracin cclica con agrupamiento.
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Automatizacin Secuencias de calibracin explcita
Secuencias de calibracin explcita

Este tipo de secuencia recalibra a intervalos especficos definidos por el usuario en la Tabla de Secuencia. Para secuencias de calibracin explcita, las muestras de calibracin son introducidas en la secuencia sin una entrada de intervalo en la Tabla de Secuencia. Se realiza una recalibracin para cada muestra de calibracin de la Tabla de Secuencia.
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Automatizacin Secuencias de calibracin cclica de un slo nivel
Secuencias de calibracin cclica de un slo nivel

Este tipo de secuencias utilizan el mismo vial, es decir, la muestra de calibracin a intervalos regulares en la secuencia. La entrada del intervalo en la tabla de secuencia determina cmo realizar la recalibracin. Por ejemplo, un valor de intervalo de 2 dar lugar a que se recalibre cada dos viales de muestra en la secuencia.
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Automatizacin Secuencias de calibracin cclica multinivel
Secuencias de calibracin cclica multinivel

Este tipo de secuencia utiliza diferentes muestras de calibracin para recalibrar un mtodo calibrado multinivel. El siguiente ejemplo describe una secuencia de dos mtodos, A y B, para analizar dos grupos de muestras. Ambos mtodos son de calibracin multinivel y recalibrarn automticamente a intervalos definidos. Para cada mtodo, la tabla de secuencia tiene tres entradas: Dos niveles de calibracin: Lneas de secuencia 1 y 2 en el mtodo A. Lneas de secuencia 8 y 9 en el mtodo B. Cinco entradas para las muestras: Lneas de secuencia 3 a 7 en el mtodo A. Lneas de secuencia 10 a 14 para el mtodo B. Se especifica la calibracin a intervalos regulares mediante la entrada Recalibration Interval en la Tabla de Recalibracin de Secuencia. El mtodo A recalibrar despus de cada dos muestras. El mtodo B recalibrar despus de cada tres muestras. La Tabla de Secuencia siguiente se divide para simplificar el ejemplo. Tabla 15
Lnea Vial
Tabla de secuencia para el mtodo A y el mtodo B

Muestra Nombre Mtodo Nombre Mtodo A Mtodo A Mtodo A Mtodo A Mtodo A Mtodo A Mtodo A Iny/ Muestra Vial Tipo 1 1 1 1 1 1 1 Calibracin Calibracin Nivel de calibracin 1 2 Actualizado Actualizado RF RT Media Media Intervalo
1 2 3 4 5 6 7
1 2 10 11 12 13 14
No actualizado 2 No actualizado 2
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Automatizacin Secuencias de calibracin cclica multinivel Tabla de secuencia para el mtodo A y el mtodo B (continuacin)
Muestra Nombre Mtodo Nombre Mtodo B Mtodo B Mtodo B Mtodo B Mtodo B Mtodo B Mtodo B Iny/ Muestra Vial Tipo 1 2 1 1 1 1 1 Calibracin Calibracin Nivel de calibracin 1 2 Actualizado Actualizado RF RT Media Media Intervalo
Tabla 15
Lnea Vial
8 9 10 11 12 13 14
3 5 20 21 22 23 24
No actualizado 3 No actualizado 3
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Orden de anlisis del mtodo A

Esta seccin describe el orden de anlisis del mtodo A que es la primera parte de la secuencia de dos mtodos. Tabla 16
N iny. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
Orden de anlisis del mtodo A

Mtodo Mtodo A Mtodo A Mtodo A Mtodo A Mtodo A Mtodo A Mtodo A Mtodo A Mtodo A Mtodo A Mtodo A Vial 1 2 10 11 1 2 12 13 1 2 14 Operacin Nivel de calibracin 1 e informe Nivel de calibracin 2 e informe Anlisis de muestra e informe Anlisis de muestra e informe Nivel de calibracin 1 e informe Nivel de calibracin 2 e informe Anlisis de muestra e informe Anlisis de muestra e informe Nivel de calibracin 1 e informe Nivel de calibracin 2 e informe Anlisis de muestra e informe
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Orden de anlisis del mtodo B

Esta seccin describe el orden del anlisis para el mtodo B que es la segunda parte de la secuencia de dos mtodos. El mtodo B tiene las siguientes diferencias respecto al mtodo A: Hay dos inyecciones por vial para el nivel de calibracin 2. El Intervalo de Recalibracin es 3. Tabla 17
N iny. 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22
Orden de anlisis del mtodo B

Mtodo Mtodo B Mtodo B Mtodo B Mtodo B Mtodo B Mtodo B Mtodo B Mtodo B Mtodo B Mtodo B Mtodo B Vial 3 5 5 20 21 22 3 5 5 23 24 Operacin Nivel de calibracin 1 e informe Nivel de calibracin 2 e informe Nivel de calibracin 2 e informe Anlisis de muestra e informe Anlisis de muestra e informe Anlisis de muestra e informe Nivel de calibracin 1 e informe Nivel de calibracin 2 e informe Nivel de calibracin 2 e informe Anlisis de muestra e informe Anlisis de muestra e informe
Obsrvese que los resultados mostrados en la Tabla 16 en la pgina 191 y la Tabla 17 pueden obtenerse utilizando Partial Sequence para previsualizar el orden del anlisis despus de configurar la tabla de secuencia.
192
Automatizacin Calibraciones explcita y cclica juntas
Calibraciones explcita y cclica juntas

Este tipo de secuencia comprende calibraciones explcita e implcita en la misma secuencia. Esta funcin permite recalibrar completamente el mtodo al principio de una secuencia (recalibracin explcita) y actualizar entonces la calibracin (recalibracin cclica) durante la secuencia. Dos lneas de calibracin para cada nivel de calibracin de la Tabla de Secuencia deben ser especificadas. Una lnea de calibracin es para la entrada de recalibracin explcita y la otra para la entrada de recalibracin cclica. La Tabla de Secuencia debe tener entradas para cada lnea de calibracin y todos los viales de recalibracin cclica deben aparecer antes de tanto la recalibracin explcita como de las entradas de muestra.
Ejemplo
La tabla de secuencia siguiente ilustra un mtodo de calibracin de un nivel, denominado SimpReg. Est cortada, para simplificar el ejemplo. Tabla 18
1 2 3 4 5 6 7 1 1 2 3 4 5 6
Tabla de secuencia para SIMPREG

SimpReg SimpReg SimpReg SimpReg SimpReg SimpReg SimpReg 1 1 1 1 1 1 1 Calibracin Calibracin 1 1 Media Sustituye Media Sustituye 3
193
Automatizacin Calibraciones explcita y cclica juntas La tabla tiene dos entradas para el nivel de calibracin simple. La primera lnea de calibracin es para el mismo nivel pero promedia los parmetros de calibracin. La entrada del intervalo especifica que la recalibracin se realice despus de cada tres muestras. La segunda entrada reemplaza todos los parmetros de recalibracin, es decir, se realiza una recalibracin completa. No tiene intervalo de recalibracin.
Tabla de secuencia
La Tabla de Secuencia consta de siete lneas. La primera indica la muestra de recalibracin cclica. La segunda especifica la recalibracin explcita que se realiza slo una vez al principio de la secuencia. La tercera de las siete lneas indica las muestras a analizar. El orden de las entradas en la Tabla de Secuencia es muy importante. Todas las entradas de viales de recalibracin cclica que especifican calibracin cclica deben aparecer antes de las entradas de la muestra o de cualquier entrada de recalibracin explcita para el mtodo.
Orden del anlisis SimpReg

Esta seccin describe el orden del anlisis del mtodo SimpReg. Tabla 19
Lnea sec. 2 1 3 3 4 5 6 7
Orden del anlisis SimpReg

N iny. 1 2 3 4 5 6 7 8 Mtodo SimpReg SimpReg SimpReg SimpReg SimpReg SimpReg SimpReg SimpReg Vial 1 1 2 3 4 1 5 6 Operacin Calibracin simple Calibracin regular Anlisis de muestra Anlisis de muestra Anlisis de muestra Calibracin regular Anlisis de muestra Anlisis de muestra
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Automatizacin Secuencias de calibracin cclica con agrupamiento
Secuencias de calibracin cclica con agrupamiento

Este tipo de secuencia interpola las calibraciones de una o ms muestras desconocidas para representar ms exactamente la respuesta del instrumento en el momento en el que las muestras fueron analizadas. Utilizando secuencias agrupadas pueden minimizarse los efectos de la deriva de la respuesta del instrumento en el proceso de calibracin.
Ejemplo
Considere la siguiente situacin: Respuesta del instrumento con deriva. Se especifican tres inyecciones de una mezcla de dos componentes. Se especifican dos inyecciones como muestras de calibracin y una como muestra. La primera y la tercera son muestras de calibracin. La segunda inyeccin es una muestra, ver la Figura 39 en la pgina 196.
195
Automatizacin Secuencias de calibracin cclica con agrupamiento Para obtener un resultado cuantitativo preciso para la inyeccin dos (la muestra), debe hacerse una interpolacin entre las dos muestras de calibracin, ver la Figura 39. Este proceso se conoce como agrupamiento (Bracketing).
Deriva
Tiempo
Calibracin 1
Muestra
Calibracin 2
Figura 39
Agrupamiento (Bracketing)
En una secuencia calibrada cclica con agrupamiento de la Tabla de Calibracin, utilizada para calcular los resultados cuantitativos desconocidos, se genera promediando los resultados de la calibracin actual con aquellos de la calibracin previa. Esta nueva tabla de calibracin es una representacin ms exacta de la respuesta del instrumento en el momento en el que la muestra fue analizada.
Operacin con secuencia agrupada

Se analizan los primeros viales de calibracin. Se analizan los viales de muestra. Se analizan los siguientes viales de calibracin. Se genera la Tabla de Calibracin reemplazando los factores de respuesta existentes por los nuevos y promediando los siguientes anlisis de calibracin en una nueva tabla. 196 Conocer la Agilent ChemStation
Automatizacin Secuencias de calibracin cclica con agrupamiento Se evalan los ficheros de datos de los viales de muestra y se generan los informes.
La secuencia vuelve al paso 2 si no hay ms viales de muestra que analizar.
Ejemplo
Esta seccin describe un ejemplo de agrupacin de secuencia que consta de un mtodo llamado Brack.M. El mtodo es de patrn interno de dos niveles, con calibracin cclica.
Tabla de secuencia
La tabla de secuencia de Brack.M (pgina siguiente) est cortada, para simplificar el ejemplo. Consta de siete lneas. Las dos primeras definen las condiciones de recalibracin para cada nivel. Las lneas restantes definen las muestras a analizar. Ms especficamente, la tabla de secuencia del mtodo Brack.M tiene: Una entrada Bracket en el rea Update Response Factor que especifica la agrupacin de muestras con muestras de calibracin. Una entrada Replace en el rea Update Retention/Migration Times que especifica reemplazar los tiempos de retencin/migracin. Una entrada de 3 en el rea Recalib Interval que especifica recalibrar cada tres muestras. Tabla 20
1 2 3 4 5 6 7 1 2
Tabla de secuencia para BRACK-M

BRACK-M BRACK-M 2 2 1 1 1 1 1 Calibracin Calibracin 1 2 Agrupamiento Agrupamiento Sustituye Sustituye 3 3
10 BRACK-M 11 BRACK-M 12 BRACK-M 13 BRACK-M 14 BRACK-M
197
Automatizacin Secuencias de calibracin cclica con agrupamiento
Orden de anlisis de la secuencia agrupada

-----------------------------------------------------------------------------------Run Method Vial Inj DataFile Level Upd Upd Operation No. Name No. No. Name No. RF Ret -----------------------------------------------------------------------------------1 Brack.M 1 1 c1-03001.d 1 R R Report for Calibration Run No.1 2 Brack.M 1 2 c1-03002.d 1 A R Report for Calibration Run No.2 3 Brack.M 2 1 c2-03001.d 2 R R Report for Calibration Run No.3 4 Brack.M 2 2 c2-03002.d 2 A R Report for Calibration Run No.4 Print Calibration Table 5 Brack.M 10 1 010-0301.d Sample Analysis, no report 6 Brack.M 11 1 011-0301.d Sample Analysis, no report 7 Brack.M 12 1 012-0301.d Sample Analysis, no report 8 Brack.M 1 1 c1-03003.d 1 A R Calibration Analysis, no report 9 Brack.M 1 2 c1-03004.d 1 A R Calibration Analysis, no report 10 Brack.M 2 1 c2-03003.d 2 A R Calibration Analysis, no report 11 Brack.M 2 2 c2-03004.d 2 A R Calibration Analysis, no report Print Calibration Table 010-0301.d Report for Sample Run No.5 011-0301.d Report for Sample Run No.6 012-0301.d Report for Sample Run No.7 c1-03003.d 1 R Report for Calibration Run No.8 c1-03004.d 1 A Report for Calibration Run No.9 c2-03003.d 2 R Report for Calibration Run No.10 c2-03004.d 2 A Report for Calibration Run No.11 12 Brack.M 13 1 013-0301.d Sample Analysis, no report 13 Brack.M 14 1 014-0301.d Sample Analysis, no report 14 Brack.M 1 1 c1-03005.d 1 A R Calibration Analysis, no report 15 Brack.M 1 2 c1-03006.d 1 A R Calibration Analysis, no report 16 Brack.M 2 1 c2-03005.d 2 A R Calibration Analysis, no report 17 Brack.M 2 2 c2-03006.d 2 A R Calibration Analysis, no report Print Calibration Table 013-0301.d Report for Sample Run No.12 014-0301.d Report for Sample Run No.13 c1-03005.d 1 R Report for Calibration Run No.14 c1-03006.d 1 A Report for Calibration Run No.15 c2-03005.d 2 R Report for Calibration Run No.16 c2-03006.d 2 A Report for Calibration Run No.17 ------------------------------------------------------------------------------------donde A = promedio R = reemplazar
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Automatizacin 8 Secuencias de recalibracin cclicas con mltiples viales que contienen la misma dilucin del patrn
Secuencias de recalibracin cclicas con mltiples viales que contienen la misma dilucin del patrn
Secuencia de recalibracin cclica con manejo de viales de calibracin Round-Robin
Cuando se ejecuta una secuencia larga que realiza recalibraciones cclicas, es decir, una recalibracin automtica despus de un nmero fijo de inyecciones de muestra, existe un riesgo potencial de que se vace el volumen del vial de calibracin durante el curso de la secuencia. La tabla de secuencia ChemStation, proporciona los medios para utilizar series de viales que contengan la misma dilucin del patrn que se va a usar en un mtodo round-robin. Con esta posibilidad, se pueden definir secuencias largas con recalibraciones automticas a intervalos fijos utilizando viales de calibracin mltiple para cada nivel y as, cada vial de calibracin se consumir en la misma extensin. Definiendo un nmero apropiado de viales de calibracin, es posible incluso garantizar que cada vial de calibracin se use solamente una vez. Esto es un requerimiento importante en los casos donde se necesita para cada recalibracin un vial de calibracin fresco, por ejemplo, porque el analito se evapora una vez que el septum se ha perforado o se empieza a degradar al entrar en contacto con el acero de la aguja. La siguiente seccin describe cmo la tabla de secuencias de la ChemStation necesita ser configurada para cumplir con estos requerimientos. Determina el nmero total de viales de calibracin para cada nivel basndose en el tratamiento de calibracin estimado a travs de la secuencia. Configura una lnea separada de calibracin cclica para cada vial de calibracin. Las lneas definidas para el mismo nivel de calibracin deben situarse en lneas de secuencia adyacentes y las posiciones definidas de los viales deben ser tambin adyacentes. Elija un intervalo de calibracin idntico para todas las lneas de calibracin. Por ejemplo, si su secuencia debera recalibrarse despus de cada 6 inyecciones, fije el intervalo de recalibracin en 6.
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Automatizacin Secuencias de recalibracin cclicas con mltiples viales que contienen la misma dilucin del patrn
Tabla 21
Vial N. 1 2 3 5 6 7 10 11 12 13 14
Secuencia de Recalibracin Cclica con 3 viales definidos para cada nivel

Nombre de la muestra Cal1a Cal1b Cal1c Cal2a Cal2b Cal2c Muestra10 Muestra11 Muestra12 Muestra13 Muestra14 Tipo de muestra Calib Calib Calib Calib Calib Calib Muestra Muestra Muestra Muestra Muestra Nombre del mtodo Mtodo A Mtodo A Mtodo A Mtodo A Mtodo A Mtodo A Mtodo A Mtodo A Mtodo A Mtodo A Mtodo A N de iny. Nivel 1 1 1 1 1 1 6 6 6 6 6 1 1 1 2 2 2 Actualizado RT Media Media Media Media Media Media Actualizado RF Media Media Media Media Media Media Intervalo 6 6 6 6 6 6
El orden de ejecucin es: Vial 1 (Cal1a) Vial 5 (Cal1a) 6 inyecciones fuera del vial 10 (Muestra 10) Vial 2 (Cal1a) Vial 6 (Cal2b) 6 inyecciones fuera del vial 11 (Muestra 11) Vial 3 (Cal1a) Vial 7 (Cal1a) 6 inyecciones fuera del vial 12 (Muestra 12) Vial 1 (Cal1a) Vial 5 (Cal1a)
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Automatizacin 8 Secuencias de recalibracin cclicas con mltiples viales que contienen la misma dilucin del patrn 6 inyecciones fuera del vial 13 (Muestra 13) Vial 2 (Cal1a) Vial 6 (Cal1a) etc.
Recalibraciones cclicas donde cada calibracin utiliza un vial diferente

Para asegurar que cada vial de calibracin se inyecta slo una vez, la secuencia debe definir un nmero suficiente de viales de calibracin diferentes, de manera que la orden round-robin descrita en el ejemplo anterior no se aplique. Por ejemplo, si la secuencia procesa 80 viales de muestra con recalibraciones requeridas despus de 10 muestras, la tabla de secuencia debe contener 80/10 + 1= 9 lneas de calibracin para cada nivel. Como en el ejemplo anterior, las lneas de calibracin deben ser lneas de secuencia adyacentes que referencien posiciones de viales adyacentes.
Secuencia de agrupamiento que utiliza viales diferentes para el inicio y final del agrupamiento
Se dispone de la misma capacidad para las secuencias de agrupamiento. Al definir el rango apropiado de viales de calibracin, una secuencia de agrupamiento puede definirse de manera que se usen viales de calibracin diferentes para el inicio y final del agrupamiento. En este caso, tambin, las lneas de calibracin en la secuencia deben estar adyacentes as como las posiciones de los viales de calibracin. El que sus viales de calibracin agrupados se usen o no en el modo round-robin o para una nica inyeccin slo depende del nmero total de viales de calibracin para cada nivel y el nmero de recalibraciones requeridas para la secuencia. El siguiente ejemplo define 3 muestras de inyeccin que se han agrupado para calibraciones. En el inicio se usa un vial de calibracin diferente del final. Es precisa una recalibracin despus de cada inyeccin de muestra, por lo que el intervalo de recalibracin tiene que ser 1. El nmero de lneas de calibracin por nivel es el nmero de muestras ms uno.
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Automatizacin Secuencias de recalibracin cclicas con mltiples viales que contienen la misma dilucin del patrn
Tabla 22
Vial N. 1 2 3 4 10 11 12
Viales diferentes usados para el principio y final del agrupamiento

Nombre de la muestra Cal1a Cal1b Cal1c Cal1d Muestra10 Muestra11 Muestra12 Tipo de muestra Calib Calib Calib Calib Muestra Muestra Muestra Nombre del mtodo Mtodo A Mtodo A Mtodo A Mtodo A Mtodo A Mtodo A Mtodo A N. de Iny. 1 1 1 1 1 1 1 Nivel 1 1 1 1 Actualizado Actualizado RT RF Brkt Brkt Brkt Brkt Brkt Brkt Brkt Brkt Intervalo 1 1 1 1
La ejecucin de la orden para esta secuencia es: Vial 1 (Cal1a), Principio del agrupamiento 1 Vial 10 (Muestra10) Vial 2 (Cal1b), Final del agrupamiento 1 y Principio 2 Vial 11 (Muestra11) Vial 3 (Cal1c), Final 2 y Principio 3 Vial 12 (Muestra 12) Vial 4 (Cal1d), Final 3
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9 Revisin por lotes

En qu consiste la revisin por lotes? 204 Configuracin de lotes 205 Tabla de lotes 205 Tabla del compuesto 206 Informe por lotes 206 Interfase del usuario 207 Funciones de revisin 208 Calibracin en la revisin por lotes 208 Informe de lotes 209 Historial de lotes 209
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Revisin por lotes En qu consiste la revisin por lotes?
En qu consiste la revisin por lotes?

La revisin por lotes (Batch Review) es una capacidad, dentro del anlisis de datos, diseada para ayudar a un analista a realizar una revisin first-pass de los resultados de una secuencia o una seleccin de un anlisis fcil y rpidamente. Ahorrar tiempo, especialmente cuando se reprocesan gran nmero de muestras. Siempre que se ejecuta una secuencia, se genera automticamente un fichero batch (con una extensin .b) y se sita en el directorio de datos junto a los ficheros de datos. Este fichero batch contiene ndices de los ficheros de datos en la misma revisin por lotes. Al cargar un batch, el analista slo necesita seleccionar el mtodo a usar para el mismo, y entonces, los ficheros de datos que se desean analizar para analizar. Se puede comprobar la precisin de la calibracin, el rendimiento del instrumento y las integraciones individuales antes de aprobar los resultados. Cualquiera de los parmetros especficos modificados de integracin se pueden almacenar con los ficheros para la bsqueda de datos. Este entorno interactivo proporciona un completo acceso a todas las otras capacidades de anlisis de datos, tales como pureza de picos, bsqueda en libreras, etc. La revisin por lotes utiliza los mismos registros de anlisis de datos (ChromReg y ChromRes) que los anlisis de datos estndar y, por ello, no se debera utilizar en una sesin en lnea que est llevando a cabo algn anlisis en ese momento.
204
Revisin por lotes Configuracin de lotes
Configuracin de lotes
Un batch es una serie de ficheros de datos seleccionados por el usuario que se procesa utilizando un mtodo definido por el mismo. Todos los ficheros de datos en el batch se procesan utilizando el mismo mtodo. Los pasos de procesamiento llevados a cabo cada vez que una nueva muestra se carga para revisin se pueden seleccionar (integracin, informes de identificacin/cuantificacin). Todas las calibraciones que se ejecutan en el batch se usan para crear una sola tabla de calibracin, utilizando factores de respuesta promedios, que se utiliza para cuantificacin.
Tabla de lotes
Los anlisis se muestran en una tabla por lotes (batch table) configurable por el usuario: se puede especificar el nmero y contenido de las columnas de la tabla; los anlisis pueden ordenarse por ndice de anlisis (el orden en el cual se adquieren) independientemente de cualquier otro criterio, tipo de muestra (primero muestras de control, despus muestras de calibracin y luego muestras normales) despus por el ndice de anlisis dentro de cada tipo de muestra, mtodo (si se usa ms de un mtodo para adquirir los anlisis) despus por el ndice de anlisis dentro de cada mtodo; las muestras, muestras de calibracin y de control se pueden mostrar o no en la tabla. Cada anlisis seleccionado ocupa una lnea en la tabla batch. Puede eliminarse un anlisis de la tabla batch cambiando su tipo de muestra a Removed.
205
Tabla del compuesto

Los resultados del compuesto se muestran en una tabla de compuestos configurable por el usuario, pero los contenidos de esta tabla dependen del tipo de muestras en la tabla por lotes: la lista de compuestos contiene todos los compuestos encontrados en el mtodo que se carg para la revisin por lotes. si solamente las muestras de calibracin se muestran en la tabla por lotes (las normales y de control estn ocultas) en la tabla de compuestos aparecen columnas adicionales de informacin relativa a la calibracin (cantidad esperada, error relativo y error absoluto). si slo aparecen los anlisis de control en la tabla por lotes (las muestras normales y las de calibracin estn ocultas), en la tabla del compuesto aparecen columnas adicionales para lmites de control definidos cualesquiera. Para columnas que contienen informacin especfica del compuesto, puede incluirse el nombre del compuesto en el ttulo de la tabla al aadir %s a la especificacin de la columna.
Informe por lotes

Contiene dos tablas que generalmente son anlogas a la tabla de lotes y a la tabla del compuesto; el usuario puede configurar estas tablas. Para columnas que contienen informacin especfica del compuesto, puede incluirse el nombre del compuesto en el ttulo de la tabla al aadir %s a la especificacin de la columna. Se permiten cabeceras multilneas; inserte el carcter | en el punto donde quiera romper la lnea.
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Interfase del usuario

La revisin por lotes permite elegir entre dos interfases de usuario: la interfase estndar incluye una barra de botones (button bar), con botones que reflejan la mayora de las opciones del men Batch, junto con la tabla por lotes y la tabla del compuesto, una interfase mnima proporciona una barra de botones similar a la de la fase estndar, pero reemplaza la tabla por lotes y la del compuesto con una caja combinada que contiene slo la informacin especificada en la tabla. Esta barra no contiene botones relacionados con la tabla por lotes o con la tabla del compuesto.
207
Revisin por lotes Funciones de revisin
Funciones de revisin
Los ficheros de datos pueden aparecer en una de estas dos maneras: manualmente, seleccionando un anlisis de la tabla, automticamente, con un intervalo predefinido entre cada fichero de datos. En la forma automtica, slo aparecen aquellos tipos de muestras situadas en la tabla; los anlisis se muestran en el orden en el cual aparecen en la tabla. La revisin automtica se puede parar y continuar despus, o finalizar. Las funciones estndar proporcionadas por la ChemStation se encuentran disponibles en la revisin por lotes. Esto incluye calibracin, manipulacin manual de cromatogramas, por ejemplo, por integracin manual o suavizada. Cualquier cambio en un fichero de datos puede marcarse y salvarse en el fichero batch. Los cromatogramas que han sido revisados son marcados con un asterisco en la tabla por lotes. Tambin se pueden descartar los cambios realizados en el cromatograma actual, o todos los cambios de todos los cromatogramas en el batch. Cuando se carga un anlisis, se realizan las opciones de procesamiento seleccionadas; si el anlisis ya ha sido procesado y los cambios salvados, se carga el anlisis procesado. Esto es un proceso ms rpido que cargar un anlisis no procesado, porque no se necesita hacer procesamientos.
Calibracin en la revisin por lotes

La calibracin en la revisin por lotes funciona independientemente de las configuraciones de recalibracin de la tabla de secuencia. El primer paso en la calibracin por lotes siempre sustituye a las entradas de respuesta y de retencin en la tabla de calibracin. Los siguientes patrones de calibracin, tanto los valores de tiempo de respuesta como los de retencin, son promedios.
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Revisin por lotes Informe de lotes
Informe de lotes
La tabla Tabla de lotes en la pgina 205 configurable por el usuario, se puede imprimir directamente en la impresora, mostrar en la pantalla o imprimir en un fichero con un prefijo especificado por el usuario, en uno de los siguientes formatos: ASCII fichero de texto con la extensin .TXT Formato de intercambio de datos con la extensin .DIF Formato de valores separados por coma con la extensin .CSV Formato Microsoft Excel con la extensin .XLS Las opciones de informe dan tambin la posibilidad de ordenar las muestras (mediante Run Index, Sample Type o Method) independientemente del tipo de mtodo de la tabla de lotes. Los tipos de prioridades son como para la Tabla de lotes en la pgina 205.
Historial de lotes
La revisin por lotes mantiene un registro de todas las acciones relacionadas con el lote actual. Cualquier accin que cambie el lote (por ejemplo, cambiando el cromatograma mostrado, el tipo de muestra, cargando y salvando el lote) aade una lnea al historial de lotes con un sello de la fecha y hora, el nombre del operario actual y una descripcin del evento. Tambin puede aadir sus propios comentarios al historial por lotes. Las entradas existentes no se pueden editar, y no se puede acceder a la lista del historial excepto a travs de la opcin del men Batch History.
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Revisin por lotes Informe de lotes
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10 Utilizacin de los informes de la ChemStation

Qu es un informe? 212 Informe de resultados 213 Informes no calibrados 213 Informes calibrados 213 Informe del patrn externo 214 Informe del patrn interno 214 Informe de los Cuadros de Control 214 Resultados cuantitativos 215 Estilos de informes 216 Adicin de un informe personalizado a los estilos de informes 218 Otros parmetros de estilos de informes 219 Tabla de picos sumados 219 Informe a medida de los picos no calibrados 219 Destino del informe 220 Formatos del fichero de informe 220 Informes resumen de secuencia 222 Introduccin 222 Configuracin de un Informe Resumen de Secuencia 222
211
10
Utilizacin de los informes de la ChemStation Qu es un informe?
Qu es un informe?
Un informe puede incluir tanto informacin cuantitativa como cualitativa acerca de la muestra que se analiza. El informe puede ser una copia impresa, una presentacin en pantalla o un fichero electrnico. El informe puede incluir detalles de los picos detectados durante el anlisis y el dibujo de las seales adquiridas.
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Utilizacin de los informes de la ChemStation Informe de resultados
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Informe de resultados
Puede disponerse de dos tipos de informes: un informe no calibrado que no corrige la respuesta del detector, y un informe calibrado que muestra los resultados con la diferencia corregida de la respuesta del detector a los distintos componentes de la muestra.
Informes no calibrados
Los informes no calibrados incluyen % Area y % Altura. Estos informes se usan fundamentalmente en la preparacin de informes calibrados. Tendrn valor como informe final si las cantidades del compuesto requeridas para producir una unidad de respuesta de rea o de altura, son similares para todos los compuestos de inters.
Informes calibrados
Los informes calibrados corrigen la diferencia de la respuesta del detector a los compuestos del informe. Una o ms muestras de calibracin conteniendo cantidades conocidas de los compuestos del informe, deben analizarse bajo las mismas condiciones empleadas para la muestra desconocida. Los datos de integracin procedentes de estas muestras de calibracin se utilizan para preparar una tabla de calibracin. Esta no es ms que una lista de los tiempos de retencin/migracin, cantidades y respuestas que se utilizan en la generacin del informe. Los informes calibrados se basan en dos procedimientos de calibracin denominados patrn externo y patrn interno.
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Utilizacin de los informes de la ChemStation Informe de resultados
Informe del patrn externo

El informe ESTD lista los resultados con las unidades elegidas o con cada compuesto como porcentaje de todos los compuestos presentes. El procedimiento de patrn externo requiere que el volumen inyectado relativo tanto de las muestras de calibracin como desconocida debe conocerse con exactitud. La fiabilidad del informe de patrn externo est limitada por la reproducibilidad de la inyeccin y cualquier otro factor que pueda cambiar de una muestra a otra.
Informe del patrn interno

Las limitaciones del procedimiento de patrn externo pueden vencerse utilizando el mtodo del patrn interno. Una cantidad conocida con exactitud (no necesariamente la misma cantidad) del patrn interno se aade tanto a las muestras de calibracin como a la desconocida. La respuesta de cada compuesto de inters se divide por la respuesta del patrn interno para obtener una relacin de respuesta. Las curvas de calibracin son la representacin de esta relacin de respuesta frente a la relacin de la cantidad y esta informacin se utiliza en el clculo de los resultados en el informe. As, se eliminan los errores inadvertidos en el volumen de inyeccin o los ligeros cambios en el sistema cromatogrfico/electroferogrfico que afectan a todos los compuestos de manera similar. El informe ISTD lista los resultados con las unidades elegidas.
Informe de los Cuadros de Control

El informe de los Cuadros de Control persigue un nico resultado de mltiples anlisis para un compuesto calibrado especfico. El Cuadro de Control se instala una vez que la ChemStation es operativa. Los mtodos que utilizan esta caracterstica pasan el resultado a una hoja de clculo de Microsoft Excel tras cada anlisis. Excel se utiliza entonces para imprimir el informe.
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Utilizacin de los informes de la ChemStation Resultados cuantitativos
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Resultados cuantitativos
El tipo de informe se identifica por el nombre del mtodo de clculo utilizado para prepararlo, por ejemplo, ISTD. A continuacin se describe cada tipo de informe. Los clculos para cada informe se dan en el Captulo 5, Cuantificacin. Area% proporciona el informe ms simple y no requiere datos de calibracin ya que no se realiza ningn tipo de correccin de la diferencia en la respuesta del detector a los componentes de la muestra. El informe % Area es particularmente til en el desarrollo de una tabla de calibracin para utilizar con otras opciones del informe. Este informe es apropiado para anlisis en los cuales la diferencia en la respuesta del detector a los componentes no es significativa. Height% proporciona un informe similar al informe % Area, excepto porque para los clculos se utiliza la altura del pico en vez del rea. Norm% proporciona un informe en el que cada componente se define como un porcentaje de todos los componentes presentes. Los picos se corrigen segn la respuesta del detector antes del clculo del porcentaje de cada uno. ESTD genera un informe de la cantidad actual de cada sustancia en cualquier tipo de unidades elegidas. Las cantidades se calculan utilizando una tabla de calibracin previamente establecida. El uso de un patrn externo requiere que el volumen inyectado de la mezcla de calibracin sea conocido. %ESTD genera un informe de la cantidad relativa de cada sustancia como un porcentaje de la muestra inyectada. Las cantidades se calculan utilizando una tabla de calibracin previamente establecida. El uso de un patrn externo requiere que el volumen inyectado de la mezcla de calibracin sea conocido. ISTD genera un informe de la cantidad de cada sustancia. Las cantidades se calculan usando una curva de calibracin previamente establecida. El uso de un patrn interno tanto en la muestra como en la mezcla de calibracin elimina la necesidad de conocer y controlar el volumen de muestra inyectada. Corrige, adems, cualquier variacin en el rendimiento del instrumento entre anlisis. %ISTD genera un informe de la cantidad relativa de cada sustancia como un porcentaje de la muestra inyectada. El uso de un patrn interno tanto en la muestra como en la mezcla de calibracin elimina la necesidad de conocer y controlar el volumen de la muestra inyectado. Corrige, adems, cualquier variacin en el rendimiento del instrumento entre anlisis.
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Utilizacin de los informes de la ChemStation Estilos de informes
Estilos de informes
Se encuentran disponibles los siguientes estilos de informes: Elija aadir una seal a cualquier estilo de informe marcando la opcin apropiada en el cuadro de dilogo Specify Report. None no se reporta texto. El cromatograma se reportar slo si se selecciona la opcin Add Chromatogram Output. Short consta de resultados de texto cuantitativos de todas las seales integradas configuradas en el cuadro de dilogo Signal Details (slo LC) o el cuadro de dilogo Signal (slo GC). La anchura de pico que aparece en el informe Short se calcula con la frmula ms compleja utilizada por el integrador. PW = 0,3 (IPRight - IPLeft) + 0,7 (rea/Altura) donde IPRight e IPLeft son los puntos de inflexin. Detail consta de la cabecera, resultados cuantitativos y curvas de calibracin. La cabecera se graba en un fichero denominado RPTHEAD.TXT en el directorio de mtodos. Puede cambiarse utilizando un editor de textos para incluir un texto especfico del mtodo. Header + Short consta de la cabecera del fichero y resultados de texto cuantitativos. La cabecera se graba en un fichero denominado RPTHEAD.TXT en el directorio de mtodos. Puede cambiarse utilizando un editor de textos para incluir un texto especfico del mtodo. GLP + Short consta de la cabecera, informacin de la muestra, condiciones del instrumento, logbook, seal y resultados cuantitativos. La cabecera se graba en un fichero denominado RPTHEAD.TXT en el directorio de mtodos. Puede cambiarse utilizando un editor de textos para incluir un texto especfico del mtodo. GLP + Detail consta de la cabecera, informacin de la muestra, condiciones del instrumento, logbook, seal, resultados cuantitativos y curvas de calibracin. La cabecera se graba en un fichero denominado RPTHEAD.TXT en el directorio de mtodos. Puede cambiarse utilizando un editor de textos para incluir un texto especfico del mtodo.
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Utilizacin de los informes de la ChemStation Estilos de informes
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Full consta de la cabecera, informacin de la muestra, condiciones del instrumento, logbook, seales y resultados cuantitativos. La cabecera se graba en un fichero denominado RPTHEAD.TXT en el directorio de mtodos. Puede cambiarse utilizando un editor de textos para incluir un texto especfico del mtodo. Performance genera un informe de acuerdo con los lmites especificados en el cuadro de dilogo Edit Performance Limits del men System Suitability. Para mtodos no calibrados, los parmetros del informe incluyen el nmero del pico, el tiempo de retencin/migracin, el rea del pico, altura del pico, descripcin de la seal, anchura de pico a media altura (consultar tambin Verdadera anchura de pico Wx [min] en la pgina 242), simetra, k, eficacia (platos) y resolucin de cada pico. Para mtodos calibrados, los parmetros incluyen el nmero del pico, tiempos de retencin/migracin, nombre del compuesto, cantidad, descripcin de la seal, anchura verdadera del pico a media altura, simetra, k, eficacia (platos) y resolucin para cada pico. El clculo de anchura de pico a media altura no se calcula con la frmula de anchura de pico ms compleja utilizada por el integrador. La eficacia y resolucin se basan en esta anchura de pico calculada. La cabecera del informe comprende toda la informacin relevante del mtodo, incluyendo instrumento, columna/capilar, muestra y parmetros de adquisicin. Tambin se representa la seal grficamente. Performance + Noise combina el estilo de informe Performance con los clculos de ruido para los rangos definidos en el cuadro de dilogo Edit Noise Range del men System Suitability. Adems, el ruido, dado como seis veces la desviacin estndar, como pico a pico y como ruido ASTM; la deriva y la variacin se determinan tambin. Performance + Extended genera un informe ampliado con todos los parmetros desde los clculos del rendimiento del pico y grficos individuales. Los grficos incluyen la lnea de base, las tangentes y las anchuras de pico en alturas definidas. Este tipo de informe slo incluye picos calibrados.
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Utilizacin de los informes de la ChemStation Estilos de informes Adems de los parmetros impresos para el estilo de informe Performance, se determinan otros Parmetros del Rendimiento de Pico: se imprimen los tiempos de inicio de pico y fin de pico, desviacin, exceso, anchura de pico, factor de cola USP, intervalo de tiempo entre puntos de datos, nmero de puntos de datos, momentos estadsticos, platos, platos por metro, selectividad y resolucin de cada pico. La anchura de pico, platos, platos por metro, selectividad y resolucin se calculan mediante la media altura, 5 sigma, los mtodos de integracin por tangente (consultar la seccin Definiciones de las pruebas de rendimiento en la pgina 240 para ms detalles). La cabecera comprende toda la informacin relevante del mtodo como instrumento, columna/capilar, muestra y parmetros de adquisicin y un grfico para la seal. Para una lista completa de los algoritmos del rendimiento ver Definiciones de las pruebas de rendimiento en la pgina 240. Los estilos de informes espectrales (Short + Spectrum, Detail + Spectrum, Performance + Library Search) se describen en el manual de Familiarizacin con el mdulo de espectros.
Adicin de un informe personalizado a los estilos de informes

A la lista de estilos de informe disponibles se puede aadir un modelo de informe personalizado que se haya creado en el Report Layout de la ChemStation.
N O TA
Todos los informes aparte de los del funcionamiento listan las anchuras de pico calculadas por el integrador mediante una frmula ms compleja (para ms detalles sobre el clculo de la anchura de pico, consultar la seccin Anchura de pico en la pgina 84).
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Utilizacin de los informes de la ChemStation Otros parmetros de estilos de informes
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Otros parmetros de estilos de informes

Tabla de picos sumados
La tabla suma de picos se proporciona para ciertas aplicaciones en las industrias petroqumica y farmacutica, que se pueden realizar de un modo ms efectivo con las siguientes caractersticas: Suma las reas de picos que entran en el rango especificado por el usuario Suma las reas de un rango de picos y realiza los clculos utilizando un slo multiplicador Suma las reas de todos los picos que tienen el mismo nombre Cuando se genera un informe, la ChemStation utiliza la tabla de suma de picos para producir un informe de suma de picos que se imprime despus de los clculos del informe estndar con la excepcin del %Norm que es reemplazado por el informe suma de picos.
Informe a medida de los picos no calibrados

Para cambiar el informe a medida de los picos no calibrados, elija uno de los siguientes en el cuadro de dilogo Specify Report. Separately, para reportar los picos no calibrados en una tabla separada si se selecciona ordenacin por tiempo de retencin/migracin, o tablas separadas si se elige ordenacin por seal. With Calibrated Peaks, para reportar los picos no calibrados junto con los calibrados. Do Not Report, para suprimir el informe de los picos no calibrados.
219
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Utilizacin de los informes de la ChemStation Destino del informe
Destino del informe

El informe puede enviarse a: Pantalla El informe (que incluye texto y grficos) se muestra en la pantalla utilizando la ventana Report Preview desde la cual se pueden imprimir. Impresora El informe contiene texto y grficos y se imprime en la impresora seleccionada. Fichero El informe se salva en un fichero. Cuando los datos se salvan en un fichero es posible reprocesar los datos con otro programa, por ejemplo, Microsoft Windows EXCEL.
Formatos del fichero de informe

Un informe puede salvarse en cuatro formatos diferentes. Cada formato tiene una extensin especfica. Es posible seleccionar ms de un formato para un informe. .TXT .WMF El texto del informe se imprime como un fichero ASCII. Cada grfico del informe (seal o curva de calibracin) se salva con formato Microsoft Windows metafile (WMF). Puede haber varios ficheros .WMF para un informe. El formato de fichero generado se adhiere al metafile estndar de Microsoft como se define en el software de desarrollo para Windows. Estos ficheros son compatibles con el formato Aldus Placeable Metafile (APM) usado por diversos propietarios de software. Los datos del informe tabular se salvan con el formato Data Interchange Format (DIF). Este formato es aceptado por los programas de hoja de clculo, por ejemplo, Microsoft EXCEL para Windows. Con independencia del estilo de informe seleccionado, slo se salvar la informacin contenida en el estilo de informe Short.
.DIF
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Utilizacin de los informes de la ChemStation Destino del informe .CSV El informe tiene el formato Comma Separated Values (CSV). Es un formato muy simple para datos tabulados que es aceptado por muchos programas de hoja de clculo y base de datos. Con independencia del estilo de informe seleccionado, slo se salvar la informacin contenida en el estilo Short.
10
Puede haber varios ficheros .DIF y .CSV para un nico informe. Para cada bloque de informes, el primer fichero, por ejemplo: REPORT00.CSV, contiene la informacin de cabecera del informe. Los siguientes ficheros contienen los resultados tabulares. Si los resultados se clasifican por los tiempos de retencin/migracin, slo se requiere un fichero para la tabla completa, por ejemplo, REPORT01.CSV. Si los resultados se clasifican por seal, para cada seal se requiere una tabla. En este caso, los ficheros se nombran desde Report01.CSV hasta ReportNN.CSV, donde NN es el nmero de la seal. .XLS El informe se exporta a una hoja de clculo Microsoft Excel en formato (XLS). Los datos requieren generalmente un procesado adicional.
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Utilizacin de los informes de la ChemStation Informes resumen de secuencia
Informes resumen de secuencia

Introduccin
La ChemStation puede imprimir una gran variedad de informes estndar para anlisis de muestras individuales. El Informe Resumen de Secuencia (Sequence Summary Reporting), es una manera adicional de proporcionar informacin, le permite calcular e introducir los parmetros a partir de un nmero de anlisis diferentes. Es til, por ejemplo, para probar la estabilidad de un instrumento o la robustez de un nuevo mtodo. Un Informe Resumen de Secuencia puede incluir: el ttulo de una pgina, la configuracin del instrumento, incluyendo los nmeros de revisin del instrumento y detalles acerca de la columna/capilar empleado, un listado de la Tabla de Secuencia que describe lo que la secuencia automtica de los anlisis debera haber realizado, las descripciones del registro acerca de lo que la secuencia ha hecho y de cualquier evento inesperado que haya ocurrido durante la secuencia, el listado de mtodos, los informes individuales en cada muestra, las estadsticas de los anlisis basados en criterios seleccionadoslas estadsticas se calculan solamente para compuestos calibrados, y una tabla de contenidos con referencias a los nmeros de pgina para las secciones detalladas del informe.
Configuracin de un Informe Resumen de Secuencia

En la puesta a punto de un Informe Resumen de Secuencia, puede seleccionarse cualquier combinacin de las nueve siguientes categoras que se quieran incluir en el informe marcando las opciones correspondientes, y donde sea apropiados, seleccione un estilo de informe de las selecciones Template. Cada plantilla (template) especifica el contenido y el formato de esa seccin en particular del conjunto del Informe Resumen de Secuencia.
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Utilizacin de los informes de la ChemStation Informes resumen de secuencia Puede elegirse uno de los siguientes estilos del Informe Resumen de Secuencia:
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Una cabecera de pgina

La plantilla GLP imprime GLP en grandes caracteres como ttulo de pgina para el siguiente informe. Tambin incluye la fecha y el lugar de una firma.
Configuracin
Seleccione Configuration si desea incluir la configuracin del instrumento y las especificaciones de la columna/capilar analtica en el informe.
Tabla de secuencia
Seleccione Sequence Table para incluir en el informe una lista de las muestras, parmetros de cuantificacin de la muestra y nombres de mtodos. Esta lista es lo que el sistema deber ejecutar.
Logbook
Seleccione Logbook para obtener una lista de los anlisis ejecutados por el sistema, incluyendo condiciones del instrumento y cualquier evento inusual que ocurriera mientras las muestras se analizaron.
Mtodos
Seleccione Methods para obtener una lista de todos los mtodos analticos utilizados en una serie de anlisis automatizados.
Informes de los anlisis

Seleccione Analysis reports para obtener informes de anlisis individuales de acuerdo con el estilo configurado para el mtodo. Los informes analticos individuales pueden imprimirse despus de cada anlisis de acuerdo con el estilo de informe especificado para el mtodo en cuestin, adems de las secciones indicadas en el Informe Resumen de Secuencia. Consultar Salida de secuencia en la pgina 225.
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Estadsticas para anlisis calibrados y de muestras

Seleccionando Statistics cal. runs se producirn anlisis de la tendencia estadstica para las muestras de calibracin. Seleccionando Statistics sample runs se realizarn anlisis de la tendencia estadstica para anlisis de muestras (desconocidas). Ambas opciones tienen estilos Standard Statistic y Extended Statistic. Este ltimo imprime las estadsticas de los anlisis como grficos, mientras que la Standard Statistics imprime slo texto. Las selecciones hechas en el cuadro de dilogo Items and Limits for Extended Statistics slo se utilizan cuando se selecciona la opcin(es) Extended Statistic en el cuadro de dilogo Sequence Summary Parameters. Si se escoge Standard Statistic en el cuadro de dilogo Sequence Summary Parameters, las estadsticas resultantes sern: tiempo de retencin/migracin, rea, altura, cantidad, anchura de pico (segn el estilo de informe, consultar Estilos de informes en la pgina 216), simetra. El clculo estadstico no distingue entre los distintos niveles de calibracin en una secuencia que utiliza mtodos de calibracin multinivel. Esto significa que los clculos dependientes de la concentracin (Area, Altura, Cantidad, consultar el cuadro de dilogo Items and Limits for Extended Statistics) todas se toman conjuntamente, independientemente del nivel de calibracin. Los valores de Statistics for Calibration Runs no son por tanto tiles para mtodos de calibracin multinivel en secuencias.
Sumario
La seleccin Summary imprimir un resumen de la serie de muestras analizadas y los mtodos utilizados. Si esta opcin se elige junto con otras selecciones Sequence Summary, se incluyen los nmeros de pgina que se refieren a otras partes del Informe Resumen de Secuencia. Hay dos estilos Summary disponibles: Sample Summary tabula los detalles de los anlisis de las muestras ejecutados en la secuencia, con cierta informacin, como el nombre de la muestra, nombre del fichero de datos, mtodo y nmero de vial.
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10
Compound Summary tabula los anlisis de la muestra con resultados bsicos de cuantificacin para cada compuesto calibrado, o cada pico, dependiendo del tipo de informe especificado en el mtodo.
Salida de secuencia
En el cuadro de dilogo Sequence output tambin puede definirse donde imprimir los informes resumen de secuencia. Seleccionando Report to file e introduciendo el nombre de un fichero, se imprime el informe en el fichero especificado. Con la opcin por defecto se salvarn los datos en el fichero GLPrprt.txt. En sistemas GC con doble inyeccin, los datos se salvan en GLPrptF.txt y GLPrptB.txt para el inyector frontal y trasero, respectivamente. Seleccionando Report to printer se enva el informe a la impresora del sistema.Al imprimir informes individuales para cada anlisis tambin activa la impresin de informes de muestra despus de cada anlisis. Estos informes se imprimen adems de los especificados por el informe resumen de secuencia, que se producen al final de la secuencia completa. Puede especificarse un nuevo destino para estos informes en el dilogo Sequence Output o utilizar el destino especificado en los mtodos individuales.
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10
226
11 Evaluacin de la idoneidad del sistema

Determinacin del nivel de ruido 231 Clculo del ruido utilizando seis veces la desviacin estndar 231 Clculo del ruido mediante la frmula pico-a-pico 232 Clculo del ruido mediante el mtodo ASTM 233 Clculo de seal-a-ruido 235 Clculo de la simetra de pico 236 Deriva y rango de variacin 235 Frmulas y clculos de la idoneidad del sistema 238 Definiciones generales 239 Definiciones de las pruebas de rendimiento 240 Volumen muerto 239 Tiempo de retencin del compuesto no retenido t (m) [min] 239 Momentos estadsticos 240 Momentos estadsticos, desviacin y exceso 241 Verdadera anchura de pico Wx [min] 242 Factor de capacidad (USP), Relacin de capacidad (ASTM) k 242 Factor de cola USP (USP) t 242 Nmero de platos tericos por columna (USP, ASTM) n 243 Nmero de platos tericos por metro N [1/m] 244 Retencin relativa (USP, ASTM), Selectividad alfa 244 Definiciones de reproducibilidad 246 Resolucin (USP, ASTM) R 245 Media de la muestra M 246 Desviacin Estndar de la muestra S 247 Desviacin estndar relativa RSD[%] (USP) 247 Desviacin estndar de la media SM 247 Intervalo de confianza CI 248 Coeficiente de regresin 250
227
11
Evaluacin de la idoneidad del sistema
Anlisis de regresin 249 Acceso a los nmeros de doble precisin almacenados internamente 251 Desviacin estndar (S) 250
Es una buena prctica analtica evaluar el rendimiento del instrumento analtico antes de usarlo para anlisis de muestras y del mtodo analtico antes de usarlo con carcter rutinario. Es tambin una buena idea comprobar el rendimiento de los sistemas de anlisis antes y durante los anlisis de rutina. El software ChemStation proporciona las herramientas para realizar estos tres tipos de pruebas de manera automtica. Una prueba del instrumento puede incluir la sensibilidad del detector, la precisin de los tiempos de retencin/migracin de los picos y la precisin de las reas de los picos. Una prueba del mtodo puede incluir la precisin de los tiempos de retencin/migracin y las cantidades, la selectividad y la robustez del mtodo en la variacin de la operacin diaria. Una prueba del sistema puede incluir la precisin de las cantidades, la resolucin entre dos picos especficos y la cola de los picos. A los laboratorios que tienen que cumplir con: las buenas Prcticas de Laboratorio (GLP), las buenas Prcticas de Fabricacin (GMP) y Buenas Prcticas de Fabricacin Actuales (cGMP), las buenas Prcticas del Laboratorio Automatizado (GALP). Se aconseja que los laboratorios realicen estas pruebas y documenten los resultados exhaustivamente. Los laboratorios que forman parte de un sistema de control de calidad, para cumplir con las certificaciones ISO9000 por ejemplo, tendrn que demostrar el rendimiento adecuado de sus instrumentos. La ChemStation compara los resultados de varios anlisis y los evala estadsticamente en el informe resumen de secuencia. Las pruebas se documentan en un formato de aceptacin generalizada por las autoridades reguladoras y por los auditores independientes. Las estadsticas incluyen: tiempos de retencin/migracin de los picos, rea del pico, cantidad,
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11
altura del pico, anchura del pico a media altura, simetra del pico, colas del pico, factor de capacidad (k), nmero de platos, resolucin entre picos, selectividad relativa con relacin al pico precedente, desviacin, y exceso.
Con ello se calcula el valor medio, la desviacin estndar, la desviacin estndar relativa y el intervalo de confianza. Pueden establecerse lmites para la desviacin estndar, la desviacin estndar relativa o para el intervalo de confianza para cada uno de estos parmetros. Si los valores exceden los lmites, el informe se seala para llamar la atencin del usuario. La calidad de los datos analticos puede soportarse manteniendo los registros de las condiciones en el momento en el que se realizaron las medidas. El logbook de la ChemStation registra las condiciones instrumentales antes y despus de un anlisis. Esta informacin se graba con los datos y se incluye en el informe con los datos de la muestra. Las curvas de rendimiento del instrumento se graban durante el anlisis como seales y se almacenan en el fichero de datos. Si el instrumento soporta estos registros, la superposicin en el cromatograma puede recuperarse cuando se desee, durante una auditoria por ejemplo. El ruido y la deriva de la lnea de base pueden medirse automticamente. Puede calcularse un nivel mnimo a partir de los datos de altura del pico para cada compuesto calibrado en el mtodo. Finalmente, pueden incluirse en cada informe la configuracin y los nmeros de serie del instrumento, la identificacin de la columna/capilar as como otros comentarios que desee aadir. Los resultados de rendimiento extendidos se calculan nicamente para los compuestos calibrados en el mtodo, asegurando su caracterizacin por los tiempos de retencin/migracin y los nombres de los compuestos.
229
11
Un informe tpico de una prueba de rendimiento del sistema contiene los siguientes resultados: detalles del instrumento, detalles de la columna/capilar, mtodo analtico, informacin de la muestra, informacin de la adquisicin, descripcin de la seal y determinacin del ruido de la lnea de base, y seal etiquetada con tiempos de retencin/migracin, o nombres de compuestos. Adems, la siguiente informacin se genera para cada compuesto calibrado en el cromatograma: tiempo de retencin/migracin, k, simetra, anchura de pico, nmero de platos, resolucin, relacin seal-ruido, y nombre del compuesto.
230
Evaluacin de la idoneidad del sistema Determinacin del nivel de ruido
11
Determinacin del nivel de ruido

El ruido puede determinarse a partir de los valores de los datos de un rango de tiempo seleccionado de una seal. El ruido se trata de tres maneras distintas: como seis veces la desviacin estndar (sd) de la regresin lineal de la deriva, como pico a pico (deriva corregida), y como viene determinado por el mtodo ASTM (ASTM E 685-93). Se puede calcular el ruido con hasta siete rangos de seal; los rangos se encuentran especificados como parte de configuraciones adecuadas del sistema en los parmetros del informe.
Clculo del ruido utilizando seis veces la desviacin estndar

- linear regression
noise= 6xSd
slope = drift
time
Figura 40
Ruido como seis veces la desviacin estndar
La regresin lineal se calcula utilizando todos los puntos de datos dentro del rango de tiempo establecido (consultar Anlisis de regresin en la pgina 249). El ruido viene dado por la frmula: N = 6 Std donde N es el ruido basado en el mtodo de seis veces la desviacin de estndar y Std es la desviacin estandar de la regresin lineal de todos los puntos de los datos en el rango de tiempo.
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Clculo del ruido mediante la frmula pico-a-pico

noise= max. peak minus min. peak
time
Figura 41
Ruido como pico mximo a pico mnimo (distancia)
La deriva se calcula en primer lugar determinando la regresin lineal mediante todos los puntos de los datos en el rango de tiempo (consultar Anlisis de regresin en la pgina 249). La lnea de regresin lineal se resta de todos los puntos de datos dentro del rango de tiempo para obtener la seal corregida por la deriva. A continuacin se calcula el ruido pico-a-pico mediante la frmula: I max N = ---------I min donde N es el ruido pico-a-pico, Imax es el pico de intensidad ms alta (mximo) y Imin es el pico de intensidad ms baja (mnimo) en el rango de tiempo.
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Clculo del ruido mediante el mtodo ASTM
noisei= m ax. peak m inus m in. peak
wander
tim e dt
Figura 42 Ruido determinado por el mtodo ASTM
La determinacin del ruido ASTM (ASTM E 685-93) se basa en la prctica estndar para probar los detectores fotomtricos de longitud de onda variable empleados en cromatografa lquida, definidos por la American National Standard Society. Se pueden distinguir tres tipos distintos de ruido, basados en el tamao del rango del tiempo. La determinacin del ruido se basa en una medicin pico a pico dentro de los rangos de tiempo definidos.
Tiempo de ciclo, t
Ruido a largo plazo la amplitud mxima para todas las variaciones aleatorias de la seal del detector de frecuencias entre 6 y 60 ciclos por hora. Se determina cuando el rango de tiempo seleccionado exceda una hora. El rango de tiempo para cada ciclo (dt) se establece en 10 minutos lo que dar al menos seis ciclos dentro del rango de tiempo seleccionado. Ruido a corto plazo la amplitud mxima para todas las variaciones aleatorias de la seal del detector de frecuencia mayor de un ciclo / minuto. El ruido a corto plazo se determina para un rango de tiempo seleccionado entre 10 y 60 minutos. El rango de tiempo para cada ciclo (dt) se establece en un minuto, lo que dar al menos 10 ciclos dentro del rango de tiempo seleccionado. Ruido a muy corto plazo (no forma parte de ASTM E 685-93) este trmino se introduce para describir la amplitud mxima para todas las variaciones aleatorias de la seal del detector de frecuencia mayor de un ciclo por 0,1 minuto. Se determina para un rango de tiempo seleccionado entre 1 y 10 minutos. El rango de tiempo para cada ciclo (dt) se establece en 0,1 minutos lo que dar al menos 10 ciclos dentro del rango de tiempo seleccionado.
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Determinacin del nmero de ciclos, n

t tot n = -----t donde t es el tiempo del ciclo y ttot es el tiempo total sobre el cual se calcula el ruido.
Clculo del ruido pico-a-pico en cada ciclo

La deriva se calcula en primer lugar determinando la regresin lineal mediante todos los puntos de los datos en el rango de tiempo (consultar Anlisis de regresin en la pgina 249). La lnea de la regresin lineal se resta de todos los puntos de datos dentro del rango de tiempo para obtener la seal corregida por la deriva. A continuacin se calcula el ruido pico-a-pico mediante la frmula: I max N = ---------I min donde N es el ruido pico-a-pico, Imax es el pico de intensidad ms alta (mximo) y Imin es el pico de intensidad ms baja (mnimo) en el rango de tiempo.
Clculo del ruido ASTM

n
N
=1 ------------N ASTM = i n
donde NASTM es el ruido basado en el mtodo ASTM. La determinacin del ruido ASTM no se lleva a cabo si el rango de tiempo seleccionado es inferior a un minuto. Dependiendo del rango, si el tiempo seleccionado es mayor o igual a un minuto, el ruido se determina empleando uno de los mtodos ASTM descritos con anterioridad. Al menos siete puntos por ciclo se emplean en los clculos. Los ciclos en la determinacin automtica de ruido se solapan en un 10%.
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11
Clculo de seal-a-ruido
Para el clculo de la seal-a-ruido, la ChemStation utiliza seis veces la desviacin estandar (sd) de la regresin lineal de la deriva para calcular el ruido. El rango ms cercano al pico se selecciona de los rangos tal y como se especifican en las configuraciones de idoneidad del sistema. La seal-a-ruido se calcula mediante la frmula: Height of the peak Signal-to-Noise = ---------------------------------------------------Noise of closest range La seal-a-ruido se calcula para cada pico en la seal. Si la ChemStation no puede encontrar un valor de ruido, la seal-a-ruido aparece como -.
Deriva y rango de variacin

La deriva se define como la pendiente de la regresin lineal, consultar la Figura 40, y el rango de variacin se determina como el ruido pico a pico de los valores de los datos medios en los ciclos de ruido ASTM, consultar la Figura 42 en la pgina 233.
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Evaluacin de la idoneidad del sistema Clculo de la simetra de pico
Clculo de la simetra de pico

La ChemStation no determina la relacin de asimetra de un pico, realizado generalmente comparando las anchuras medias del pico al 10% de la altura, al 5% como lo recomienda la FDA. La simetra del pico se calcula como un pseudo momento por parte del integrador empleando las siguientes ecuaciones de los momentos: a1 - m 1 = a 1 t 2 + ----------- 1.5 H f a2 m 2 = ------------------------------0.5 H f + 1.5 H a3 m 3 = -------------------------------0.5 H r + 1.5 H a4 - m 4 = a 4 t 3 + ------------ 1.5 H
r 2 2
Peak symmetry =
m1 + m2 ------------------m3 + m4
Si no se encuentran puntos de inflexin o slo se registra uno de ellos, entonces la simetra del pico se calcula como sigue: a1 + a2 Peak symmetry = ---------------a3 + a4
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Evaluacin de la idoneidad del sistema Clculo de la simetra de pico
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HF
Hr
start of peak a1 t1 a2 t2 a3 t3 a4 t4
end of peak baseline time
Figura 43 donde:
Clculo del factor de simetra del pico
ai = rea de la franja ti = tiempo de la franja Hf = altura del punto de inflexin delantero Hr = altura del punto de inflexin trasero H = altura del mximo del pico
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Evaluacin de la idoneidad del sistema Frmulas y clculos de la idoneidad del sistema
Frmulas y clculos de la idoneidad del sistema

La ChemStation emplea las siguientes frmulas para obtener resultados para las diversas pruebas de idoneidad del sistema. Los informes de resultados utilizan los estilos Performance, Performance + Noise y Performance + Extended. Cuando se especifica el mtodo ASTM o el USP para una definicin dada, entonces la definicin se ajusta a los que figuran en la referencia correspondiente. Sin embargo, los smbolos aqu empleados pueden no ser los mismos que los utilizados en la referencia. Las dos referencias empleadas en este contexto son: ASTM: Section E 682 93, Annual Book of ASTM Standards, Vol.14.01 USP: The United States Pharmacopeia, XX. Revisin, pp. 943 - 946
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Evaluacin de la idoneidad del sistema Definiciones generales
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Definiciones generales
Volumen muerto
V = d2l( f 4 ) donde: d = dimetro de la columna [cm] = constante, relacin de la circunferencia al dimetro del crculo l = longitud de la columna [cm] f = fraccin del volumen de la columna no ocupada por la fase estacionaria pero disponible para la fase mvil; valor por defecto de la f = 0.68 (para Hypersil)
Tiempo de retencin del compuesto no retenido t (m) [min]

(Conocido tambin como tiempo muerto) Tm = V F donde: F = Velocidad de flujo de LC [ml/min]
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Evaluacin de la idoneidad del sistema Definiciones de las pruebas de rendimiento
Definiciones de las pruebas de rendimiento

Momentos estadsticos
M 0 = dt X X M 1 = t 0 + d t -Y dt - M 2 = ---X dt - M 3 = ---X dt - M 4 = ---X donde: N = nmero de franjas de rea Ai = valor de la franja de rea ordenado por i dt = intervalo de tiempo entre franjas de rea adyacentes t0 = tiempo de la primera franja de rea
N 4 3 2 N
i=1 N
i 1 -- X
Y 2
A i
i=1 N
i 1 -- X
Y 3
A i
i 1 -- X
i=1
Y 4
A i
i=1
= suma desde 1 hasta N para las observaciones discretas
X=
( Ai )
i=1
240

N
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Y=
( ( i 1 ) Ai )
i=1
Momentos estadsticos, desviacin y exceso

Los momentos estadsticos se calculan como una alternativa para describir las formas de picos asimtricos. Hay un nmero infinito de momentos del pico, pero slo se utilizan los cinco primeros con los picos cromatogrficos. A stos se les denomina Momento 0, Primer Momento, Cuarto Momento. El Momento 0 representa el rea del pico. El Primer Momento es el tiempo de retencin medio, o el tiempo de retencin medido en el centro de gravedad del pico. Es diferente del tiempo de retencin cromatogrfico medido en el mximo del pico a no ser que el pico sea simtrico. El Segundo Momento es la varianza del pico, que es una medida de la expansin lateral. Es la suma de la varianza contribuida por diferentes partes del sistema del instrumento. El Tercer Momento describe la simetra vertical o la desviacin. Mide la diferencia de la forma del pico respecto al modelo Gaussiano. La desviacin se presenta adimensional en el informe Performance & Extended. Un pico simtrico tiene una desviacin cero. Un pico simtrico tiene una desviacin cero. Los picos con cola tienen desviacin positiva y su Momento 1 es mayor que el tiempo de retencin. Los picos con frente tienen desviacin negativa y su Momento 1 es menor al tiempo de retencin. El Cuarto Momento o el exceso es una medida de la compresin o el estrechamiento del pico a lo largo de un eje vertical, y cmo se compara ste con un modelo Gaussiano para el cual el Momento 4. es cero. Puede visualizarse moviendo o apartando los laterales del pico Gaussiano mientras se mantiene un rea constante. Si se comprime el pico, su exceso es negativo. Si es ms alto, su exceso es positivo. El exceso tambin se incluye en el informe Performance & Extended en su forma adimensional.
241
11
Verdadera anchura de pico Wx [min]

W x = width of peak at height x % of total height Casos especiales:
WB anchura de la base, 4 sigma, obtenida por interseccin de las tangentes a los puntos de inflexin con la lnea base (anchura pico por tangente) consultar la Figura 44 en la pgina 243) anchura al 4,4% de altura (anchura de 5 sigma) anchura al 5% de altura (anchura de los picos con cola), utilizada para el factor de cola USP anchura al 50% de altura (anchura de pico a media altura o 2,35 sigma). Consultar la Figura 44 para ms detalles.
W4,4 W5,0 W50,0
Factor de capacidad (USP), Relacin de capacidad (ASTM) k

TR T0 k = ----------------T0 donde: TR = tiempo de retencin del pico [min] T0 = tiempo muerto [min]
Factor de cola USP (USP) t

W 5.0 t = ----------tw 2 donde: tw = distancia en min entre el frente del pico y el TR, medido al 5% de la altura del pico (ver la Figura 44 en la pgina 243) W5.0 = anchura de pico al 5% de la altura del pico [min]
242
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W50 H
Lnea base
5% H TR Tw W5.0 WB Tiempo
Figura 44
Parmetros de rendimiento
Nmero de platos tericos por columna (USP, ASTM) n

Mtodo de la tangente (USP, ASTM):
TR 2 - n = 16 ------W B donde: WB = anchura de la base [min] (consultar la Figura 44)
Mtodo de media anchura (ASTM):

TR 2 - n = 5.54 --------W 50 donde: W50 = anchura de pico a media altura [min] (consultar la Figura 44)
243
11
Mtodo 5 Sigma:
TR 2 - n = 25 ---------W
4.4
donde: W4.4 = anchura del pico al 4,4% de la altura del pico [min]
Mtodo de la varianza:
M1 n = ---------M2 donde: Mx = x momento estadstico (consultar tambin la seccin Momentos estadsticos en la pgina 240)
2
Nmero de platos tericos por metro N [1/m]

n N = 100 -l donde: n = nmero de platos tericos l = longitud de la columna [cm]
Retencin relativa (USP, ASTM), Selectividad alfa

(Relativo a los picos a y b, TR de pico a < TR de pico b) k ( b ) -, alpha 1 alpha = ---------k ( a ) donde: k(x) = factor de capacidad para el pico x 244 Conocer la Agilent ChemStation
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Resolucin (USP, ASTM) R

(Con relacin a los picos a y b, TR del pico a < TR del pico b; TR en min)
Mtodo de la tangente (USP, ASTM):

2 ( TR ( b ) TR ( a ) ) R = --------------------------------------WB ( b ) + WB ( a )
Mtodo 5 Sigma:
2.5 ( T R ( b ) T R ( a ) ) R = -------------------------------------------W 4.4 ( b ) + W 4.4 ( a )
Mtodo de media anchura:

( 2.35 2 ) ( T R ( b ) T R ( a ) ) R = ----------------------------------------------------------W 50 ( b ) + W 50 ( a )
Mtodo estadstico:
M 1( b ) M 1( a ) R = ---------------------------------WS ( b ) + WS ( a ) donde: M1(x)= tiempo medio retencin para el pico x (1er. Momento Estadstico) [min] WB(x)= anchura de la base para el pico x [min] W4.4(x)= anchura al 4.4% de altura para el pico x [min] W50(x)= anchura al 50% de altura para el pico x [min] WS(x)= anchura derivada de momentos estadsticos = ( M 2 ) para el pico x (consultar tambin Momentos estadsticos en la pgina 240) [min]
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Evaluacin de la idoneidad del sistema Definiciones de reproducibilidad
Definiciones de reproducibilidad
Para la revisin estadstica de los datos analticos en trminos de reproducibilidad, se considera la secuencia como una pequea muestra tomada al azar, de un infinito nmero de posibles resultados experimentales. Para lograr un conjunto completo de resultados, sera necesaria una cantidad ilimitada de material de muestra as como de tiempo. Estrictamente, los datos estadsticos no se aplican solamente a un conjunto completo independiente o poblacin de datos. Por tanto, un requisito previo para tal tratamiento es que la muestra seleccionada pueda considerarse representativa de todos los datos.
Media de la muestra M
El valor medio M de una muestra aleatoria consistente de N medidas se calcula a partir de este conjunto limitado de N valores independientes observados Xi cuyo indice i va en orden consecutivo segn la frmula:
M = -------------N donde: N = nmero de observaciones discretas Xi = valor de las observaciones discretas de ndice i
i=1
Xi
246
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Desviacin Estndar de la muestra S

Considrese una muestra aleatoria de tamao N. La desviacin estndar de la muestra S, para la muestra seleccionada de la gran poblacin de datos se determina mediante
S =
i=1
( Xi M )
--------------------------------N1
La desviacin estndar de la muestra S difiere en dos puntos de la desviacin estndar s, para toda la poblacin: en lugar del valor medio real, se utiliza el valor medio de la muestra M y la divisin por N-1 en lugar de por N.
Desviacin estndar relativa RSD[%] (USP)

La desviacin estndar relativa se define como S RSD = 100 ---M
Desviacin estndar de la media SM

Supuesto M el valor de la media de la muestra y S, la desviacin estndar de la muestra [o (N-1)]. La desviacin estndar SM de la media de la muestra M se determina mediante
S S M = ------N
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Evaluacin de la idoneidad del sistema Definiciones de reproducibilidad Se puede ilustrar mejor esto con un ejemplo: Puesto que el tiempo de retencin de un determinado compuesto puede desviarse ligeramente del valor medio calculado durante una secuencia, es posible que los datos de otra secuencia difieran mucho ms debido a, por ejemplo, cambios en la temperatura ambiente, degradacin del material de la columna con el tiempo, etc. Para determinar esta desviacin, se puede calcular la desviacin estandar de la media de la muestra SM segn la siguiente frmula.
Intervalo de confianza CI
El intervalo de confianza se calcula para proporcionar informacin sobre lo buena que resulta la estimacin de un valor medio, cuando se aplica a toda la poblacin y no slo a una muestra. El 100 ( 1 ) % del intervalo de confianza para la media absoluta se da con
CI = t ( 2 ) ;N 1 S M
donde: t ( 2 ) ;N 1 punto de porcentaje de la tabla de distribucin del t a un riesgo de probabilidad de Para las estadsticas detalladas del informe resumen de la secuencia, puede utilizarse un 95% de intervalo de confianza ( = 0, 05 ). La distribucin del tiempo (o distribucin de student') debe utilizarse para pequeos volmenes de muestra. En el caso de grandes volmenes de muestra, los resultados para la distribucin del tiempo y la distribucin normal (gausiana) ya no difieren entre s. Por tanto, en el caso de 30 o ms muestras, puede utilizarse la distribucin normal en su lugar (sera muy difcil calcular la distribucin del tiempo para nmeros grandes; la distribucin normal es la mejor aproximacin de ello). Intervalo de confianza del 95% para 6 muestras:) 1 = 0,95 N=6
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Evaluacin de la idoneidad del sistema Definiciones de reproducibilidad El valor correcto para t ha de tomarse a partir de la tabla de distribucin de t para 5 (N-1) grados de libertad y para el valor 2 , siendo 0.025. Esto proporciona la siguiente frmula de clculo para CI:
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1CI = 2, 571 ----- SM 6
Anlisis de regresin
Donde N = nmero de observaciones discretas Xi = variable independiente, observacin i Yi = variable dependiente, observacin i Funcin lineal: y ( X ) = a + bX Coeficientes:
N N N N 2 1 a = ------ X i Y i X i X i Y i X i = 1 i = 1 i=1 i=1 N N N 1 -----b = N X i Y i X i Y i X i=1 i = 1 i = 1
donde:
N 2 Xi
X = N
i=1
N X i i = 1
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Coeficiente de regresin
N N N N X Y X Y i i i i i=1 i=1 i=1 r = --------------------------------------------------------------------------x y
donde:
N 2 Yi
Y = N
i=1
N Y i i = 1
Desviacin estndar (S)

N i=1
( Yi a bXi )
S =
--------------------------------------------N2
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Evaluacin de la idoneidad del sistema Acceso a los nmeros de doble precisin almacenados internamente
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Acceso a los nmeros de doble precisin almacenados internamente

Para realizar una validacin puede ser necesario recalcular manualmente los resultados de la ChemStation como las curvas de calibracin, los coeficientes de correlacin, los platos tericos, etc. Para llevar esto a cabo es necesario tener en cuenta el formato de nmero usado en la ChemStation. Para todos los nmeros almacenados internamente dentro de la ChemStation, se utiliza el tipo de datos C DOUBLE. Esto significa que se almacenan 14 dgitos significativos para cada nmero. La implantacin de este tipo de datos se adhiere a la implantacin de Microsoft del estndar IEEE para el tipo de datos C y las reglas de redondeo asociadas (consultar los documentos de Microsoft Q42980, Q145889 y Q125056). Debido al ilimitado nmero de parmetros que pueden utilizarse para el clculo de la tabla de calibracin, no es posible calcular el error exacto posiblemente introducido mediante la propagacin y acumulacin de errores de redondeo. Las intensivas pruebas con diferentes curvas de calibracin han demostrado, sin embargo, que puede garantizarse una exactitud de hasta 10 dgitos. Mientras la repetibilidad del rea, altura y tiempo de retencin de un anlisis cromatogrfico tiene normalmente 3 dgitos significativos, es suficiente con 10 dgitos significativos dentro de los clculos. Por este motivo, las tablas de calibracin y otras, muestran un mximo de 10 dgitos significativos. Si se requiere un clculo externo (manual) para las tareas de validacin, se recomienda utilizar todos los dgitos utilizados para los clculos internos. La utilizacin de los datos visualizados y/o redondeados para los clculos externos podra dar resultados diferentes de los de la ChemStation debido a errores de redondeo. El siguiente prrafo describe cmo acceder a todos los dgitos almacenados internamente para los nmeros normalmente necesarios para clculos manuales. En todos los casos, debe cargarse un fichero de datos con un estilo de informe adecuado previamente a la ejecucin del comando listado. Todos los comandos se introducen en la lnea de comandos de la ChemStation, que puede activarse desde el elemento del men View. La informacin del fichero C:\CHEM32\TEMP.TXT puede visualizarse utilizando NOTEPAD o un editor de TEXTO adecuado.
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Informacin del pico inicial:

Tiempo de retencin rea Altura Anchura (integrador) Simetra Tiempo de inicio del pico Tiempo final del pico Utilizar la lnea de introduccin de comandos: DUMPTABLE CHROMREG, INTRESULTS,C:\CHEM32\1\TEMP\ INTRES.TXT
Informacin del pico procesado:

Tiempo de retencin medido Tiempo de retencin esperado rea Altura Anchura (integrador) Simetra Anchura media - Altura de medio pico (Performance & Extended Performance) Factor de cola (Performance & Extended Performance) Selectividad (Performance & Extended Performance) K` (Extended Performance) Anchura del pico por tangente (Extended Performance) Desviacin (Extended Performance) Platos tericos - Anchura media (Performance & Extended Performance) Platos tericos - Tangente (Extended Performance) Platos tericos - 5-Sigma (Extended Performance) Platos tericos - Estadstica (Extended Performance) Resolucin - Anchura media (Performance & Extended Performance) Resolucin - Tangente (Extended Performance)
252
Evaluacin de la idoneidad del sistema Acceso a los nmeros de doble precisin almacenados internamente Resolucin - 5-Sigma (Extended Performance) Resolucin - Estadstica (Extended Performance) Utilizar la lnea de introduccin de comandos: DUMPTABLE CHROMRES, PEAK,C:\CHEM32\1\TEMP\PEAK.TXT
11
Informacin del compuesto procesado:

Cantidad calculada Utilizar la lnea de introduccin de comandos: DUMPTABLE CHROMRES, COMPOUND,C:\CHEM32\1\TEMP\ COMPOUND.TXT
Informacin de la tabla de calibracin:

Nmero de nivel Cantidad rea Altura Utilizar la lnea de introduccin de comandos: DUMPTABLE _DAMETHOD, CALPOINT,C:\CHEM32\1\TEMP\CALIB.TXT
Informacin sobre la regresin lineal:

Y-Intercept (CurveParm1) Pendiente (CurveParm2) Coeficiente de correlacin Utilizar la lnea de introduccin de comandos: DUMPTABLE _DAMETHOD, PEAK,C:\CHEM32\1\TEMP\REGRESS.TXT
253
11
254
12 Verificacin del sistema

Verificacin del sistema 256 Pantallas de verificacin y de diagnsticos 259 El registro GLPsave 260 Funcin de prueba del detector DAD 262 Funcin de prueba para la verificacin del detector DAD 262
255
12
Verificacin del sistema Verificacin del sistema
Verificacin del sistema

La verificacin del sistema es un proceso clave en el uso rutinario de un instrumento analtico en un laboratorio regulado. Las funciones de verificacin GLP de la ChemStation han sido diseadas para ayudarle a probar que el instrumento o un componente del mismo, funciona de manera ptima, o lo haca durante la realizacin de un determinado anlisis. La funcin de verificacin de la ChemStation permite verificar el correcto funcionamiento del software de su ChemStation. Esto se puede realizar reprocesando los ficheros de datos de acuerdo con mtodos especficos, y comparando los resultados con un patrn predefinido. La funcin de verificacin es particularmente importante para probar la integridad de los resultados de integracin y cuantificacin. Puede utilizarse la prueba de verificacin estndar, o definir sus propias pruebas empleando mtodos y ficheros de datos distintos. La prueba de verificacin es un fichero protegido y no puede ni modificarse ni borrarse. La opcin Verification en el anlisis de datos View permite escoger cualquiera de las opciones siguientes: ejecutar una prueba de verificacin en la base de datos, definir una nueva prueba de verificacin y aadirla a la base de datos, y borrar una prueba de verificacin de la base de datos. La seccin Cmo? del sistema de ayuda en lnea, describe cmo realizar estas tareas. Cuando se realiza un test de verificacin de la ChemStation, puede elegirse si realizar el test completo o algunas partes. Los resultados se graban en formato binario en el subdirectorio por defecto: c:\CHEM32\1\Verify, junto con el mtodo y los ficheros de datos. El subdirectorio Verify est en el mismo nivel que los subdirectorios de secuencias, mtodos y datos. Pueden enviarse los resultados a una impresora o a un fichero. Los resultados del test, incluyendo un resultado del test de verificacin combinado, se indican como superado (pass) o fallado (fail).
256
Verificacin del sistema Verificacin del sistema Los siguientes tests de verificacin estn disponibles:
12
Electrnica digital (slo DAD Agilent 1100)

Un cromatograma de test est grabado en el detector de diodos. Este cromatograma se enva a la ChemStation despus de haber realizado los mismos pasos de preproceso que los datos primarios de los fotodiodos. Los datos resultantes se comparan con los originales, almacenados en la ChemStation, para este cromatograma de test. Si no coinciden, el test falla. Este test asegura que la electrnica del DAD que realiza el preproceso de datos, est funcionando correctamente. Mientras se est utilizando un cromatograma de test almacenado, la lmpara o la matriz de diodos no forman parte de la prueba. stos pueden comprobarse con la Funcin de prueba del detector DAD en la pgina 262.
Integracin de picos
El fichero de datos se integra de nuevo, utilizando el mtodo original. Los resultados se comparan con los resultados originales de integracin, almacenados en el registro de verificacin. Si no coinciden, el test falla.
Cuantificacin del compuesto

Los compuestos en el fichero de datos se cuantifican de nuevo. Los resultados se comparan con los resultados originales de cuantificacin, almacenados en el registro de verificacin. Si no coinciden, el test falla.
Impresin del informe

El informe original se imprime de nuevo. La pgina siguiente muestra un ejemplo de un test de verificacin llevado a cabo con xito.
257
12
=============================================================== ChemStation Verification Test Report =============================================================== Tested Configuration: Component Revision ----------------------------------------------------------------------ChemStation for LC 3D ChemStation B.01.01 Microsoft Windows Microsoft Windows XP Processor Processor_Architecture_Intel CoProcessor yes ChemStation Verification Test Details: Test Name : C:\CHEM32\1\VERIFY\DEFAULT.VAL Data File : C:\CHEM32\1\VERIFY\DEFAULT.VAL\VERIFY.D Method : C:\CHEM32\1\VERIFY\DEFAULT.VAL\VERIFY.M Original Datafile : VERIFY.D Original Acquisition Method : VERIFY.M Original Operator : Hewlett-Packard Original Injection Date : 4/16/93 11:56:07 AM Original Sample Name : Isocratic Std. Signals Tested: Signal 1: DAD1 A, Sig=254,4 Ref=450,80 of VERIFY.D ChemStation Verification Test Results: Test Module Selected For Test Test Result ---------------------------------------------------------------------Digital electronics test No N/A Integration test yes Pass Quantification test yes Pass Print Analytical Report No N/A ChemStation Verification Test Overall Results: Pass
258
12
Pantallas de verificacin y de diagnsticos

Si lo soporta el instrumento configurado, por ejemplo los mdulos Agilent 1100 para HPLC, la ChemStation incluye dos pantallas adicionales para realizar las tareas de verificacin y diagnstico del instrumento. Para ms informacin, consultar el sistema de ayuda en lnea y el manual Verificacin del Rendimiento.
259
12
Verificacin del sistema El registro GLPsave
El registro GLPsave
El registro GLPsave se salva al final de cada anlisis, cuando se ha seleccionado en la lista de control del anlisis. Contiene la siguiente informacin: seales, logbook, tabla de resultados de integracin, tabla de resultados de cuantificacin, datos de rendimiento del instrumento, y mtodo de anlisis de datos. Este es un registro protegido completo, generado en el momento del anlisis. Puede recuperarse en cualquier momento como prueba de los mtodos analticos. La opcin GLPsave Register de la pantalla Data Analysis permite revisar el fichero de registro GLPsave en cualquier momento. El fichero est protegido y codificado en binario, para asegurar que no se modifica. En el cuadro de dilogo utilizado para seleccionar el registro GLPsave, puede elegirse revisar entre las siguientes opciones: cargar mtodo original, cargar seales originales, cargar datos de rendimiento del instrumento, imprimir mtodo original, imprimir resultados de integracin originales, imprimir resultados de cuantificacin originales, y generar el informe original del mtodo y seales originales. Puede utilizarse la funcin GLP review para mostrar qu datos cromatogrficos son originales, probar la calidad de los anlisis de los datos de rendimiento del instrumento, y demostrar la autenticidad de la interpretacin de los datos.
260
Verificacin del sistema El registro GLPsave Por ejemplo, es posible:
12
recargar y reimprimir la parte del anlisis de datos del mtodo utilizada en el momento del anlisis de muestra, para probar que la evaluacin de datos, presentada como resultado del anlisis, no ha sido modificada de ninguna forma, y revisar sin recalcular, los resultados de integracin y cuantificacin para probar la autenticidad del informe.
261
12
Verificacin del sistema Funcin de prueba del detector DAD
Funcin de prueba del detector DAD

Los tests del detector pueden utilizarse como una etapa en la rutina de validacin del sistema de un instrumento analtico, en un laboratorio regulado. El test del DAD valora el rendimiento del detector de diodos. Cuando se selecciona el test DAD desde el men Instrument (slo para LC3D y CE ), se comprueba la intensidad y la calibracin de la longitud de onda del instrumento. Cuando se pulsa Save, los resultados del test se salvan automticamente en la base de datos DADTest, en un fichero de registro llamado DADTest.Reg localizado en el directorio por defecto del instrumento.
Funcin de prueba para la verificacin del detector DAD

La funcin Review DAD Test del men View del anlisis de datos, permite revisar el fichero DADTest.Reg en cualquier momento. El fichero est protegido y codificado en binario, para asegurar que no se modifica. Se puede seleccionar cualquiera de las siguientes partes del test DAD:
Show Holmium Spectra (Mostrar espectros del holmio)

Representa todos los espectros del holmio listados en la tabla DAD Test review. Se marca el espectro activo.
Show Intensity Spectra (Mostrar espectros de intensidad)

Representa todos los espectros listados en la tabla DAD Test review. Se marca el espectro activo.
Save as New Database (Salvar como nueva base de datos)

Si se cambia la lmpara del DAD puede reiniciarse el DADTest borrando los resultados no deseados de la tabla y utilizando la funcin Save As New Database.
262
12
Show Selected Spectra (Mostrar espectros seleccionados)

Muestra slo los espectros seleccionados en la tabla.
Show Intensity Graph (Mostrar grfico de intensidad)

Puede representarse un grfico de intensidad para obtener una indicacin de la vida de lmpara del detector de diodos. El grfico es una funcin de la intensidad mxima de la lmpara frente al tiempo.
263
12
264
ndice
A
abortar partes, 175 absoluto factor de respuesta, 124 tiempo de retencin, 138, 140 activo en qu consiste?, 48 bsqueda de librera, 59 control pureza de pico, 60 crear, 53 directorio, 56 editar, 54 espera, 181 estado, 69 GLPSave.Reg, 60 informacin, 49 integracin, 59 modificar, 53 operacin, 58 partes, 49 sumario de operacin, 62 actualizar factor de respuesta, 183 tiempo de retencin, 183 adquisicin de datos, 27 en qu consiste?, 64 agrupada calibracin, 184 secuencia, 195 agrupamiento, 87 ajuste curva, 159 no lineal, 158 altura% clculo, 126 informe, 215 anlisis exactitud, 165 anlisis de datos cuantificacin, 30 informes, 31 informes especializados, 31 integracin, 29 personalizado, 60 anlisis de regresin, 245 anchura de pico, 79, 84, 112, 113 a la altura x%, 242 tangente, 242 anchura de pico inicial, 111 apagado automtica, 181 macro, 181 sistema, 181 rea de pico, 108 area% clculo, 126 informe, 215 asignacin de la lnea base, 78, 94 automtica apagado, 181 bsqueda de librera, 59 recalibracin, 182 revisin por lotes, 208 automatizacin, 36, 167 en qu consiste?, 169 ayuda en lnea, 42 blanco anlisis, 179 buenas prcticas de laboratorio, 37 bsqueda de librera, 59
C
clculo calibrado, 127 cuantificacin, 123 ESTD, 128 ISTD, 131 no calibrado, 126 Norm%, 130 simetra de pico, 236 clculo de porcentaje, 126 clculo seal-a-ruido, 235 clculos sin calibrar, 126 calibracin "Round-Robin", 199 calibraciones multinivel, 131 ChemStation descripcin general, 18 personalizacin, 35 CI, 245 cclica, 155 secuencias de calibracin, 188 cdigos de separacin de picos, 106 compuesto, 150 configuracin, 22 construccin de la lnea base, 94 control del instrumento, 41 conexin en red, 41 control pureza de pico, 60 criterios de divisin, 101 cualificadores, 144
B
batch configuracin, 205 informe, 206 tabla del compuesto, 206
265
ndice
cuantificacin en qu consiste?, 122 clculos, 123 procedimiento ESTD, 128 procedimiento ISTD, 131 curva ajuste, 159 secuencia, 152 curva de calibracin en qu consiste?, 152 ajuste, 159 descripcin de, 152 forzada a travs del cero (origen), 159 importancia del punto de calibracin, 159 multinivel, 156 mltiples niveles, 156 tipos, 155 un nivel, 155
divisin tangencial, 99 documentacin, 42 documentacin para el usuario, 42
E
en lnea monitores, 66 errores partes, 177 estado instrumento, 69 ventana, 69 estado standby, 181 ESTD clculo, 128 informe, 214, 215 procedimiento, 128 estilo informe, 216 exactitud anlisis, 165 extrapolacin, 158, 196 respuesta, 195
D
definiciones de reproducibilidad, 246 definiciones del test de linealidad, 246 definiciones del test de rendimiento momentos estadsticos, 240 derivada, 77, 85 destino informe, 220 desviacin, 241 desviacin estndar de la media, 247 desviacin estndar S, 250 muestra, 247 relativo, 247 deteccin de hombros, 111 detener (stop) partes, 174 determinacin del ruido, 231, 233 determinacin del ruido ASTM, 233 directorio activo, 56 estructura, 44 distribucin del t, 245 divisin de pico frontal, 104
F
factor de capacidad, 242 factor de cola, 242 factor de cola USP, 242 factor de dilucin, 124, 129 factor de normalizacin, 131 factor de respuesta absoluto, 124 actualizar, 183 factores de correccin, 124 fichero mtodo, 56 fichero de mtodo parmetros del instrumento, 56 fichero de registro partes, 177 ficheros de datos, 205
filtro reconocimiento de picos, 85 final del pico, 80 formatos de fichero informe por lotes, 209 informes de resultados, 220 frmulas definiciones de las pruebas de rendimiento, 240 definiciones generales, 239 frmulas para la idoneidad del sistema anlisis de regresin, 249 anchura de pico, 242 coeficiente de regresin, 250 desviacin estndar, 247, 250 factor de capacidad, 242 factor de cola USP, 242 media, 244 nmero de platos, 243 resolucin, 245 retencin relativa, 244 RSD, 247 tiempo de retencin, 239 tiempo muerto, 239 volumen muerto, 239 fuera de tiempo no preparado, 181
G
GLPSave.Reg, 60 salvar con el mtodo, 60
H
hombro, 82, 92
I
identificacin de picos en qu consiste?, 136 tipos, 138 idoneidad del sistema estadsticas incluidas, 228 lmites, 229
266
ndice
importancia cuadrtica, 159 igual, 159 lineal, 159 puntos de calibracin, 159 ndice de anlisis, 205 configuracin, 205 informes, 207 tipo de muestra eliminada, 205 informe en qu consiste?, 212 altura%, 215 area%, 215 calibrado, 213 cuadros de control, 34 destino, 220 ESTD, 214, 215 estilo, 216 formatos de fichero, 220 no calibrado, 213 Norm%, 215 personalizado, 34 resumen de secuencia, 33 informe de idoneidad del sistema informe de rendimiento, 32 rendimiento, 32 rendimiento y ruido, 32 informe resumen de secuencia, 33, 222 cabecera, 223 configuracin, 223 especificacin de salida, 225 estadsticas, 224 informes de anlisis, 223 logbook, 223 mtodos, 223 pgina sumario, 224 tabla de muestra, 223 tabla de secuencia, 223 informes de idoneidad del sistema, 31 informes de lotes formatos de salida, 209 informes de resultados, 213 inicio del pico, 80
instrumento estado, 69 extrapolacin de la respuesta, 195 integracin, 59 marcas de integracin, 73 tabla de resultados, 59 integracin automtica, 116 integracin manual, 118 interrumpir (pause) partes, 175 intervalo recalibracin, 184 intervalo de confianza, 245, 248 ISTD clculo, 131 informe, 214 localizacin de picos, 147 procedimiento, 131
muestra cantidad, 125 desconocida, 154 prioritaria, 174 secuencia, 150, 157 mltiples picos de referencia, 143 mltiples niveles secuencia, 156 secuencias de calibracin, 189 mltiples patrones, 196 multiplicador, 124, 129
N
no actualizar, 184 no lineal ajuste de curva, 158 nombre fichero de secuencia, 179 Norm% clculo, 130 informe, 130, 215 nmero de platos, 243
L
limites de cantidad, 139 lmites de cantidad, 156 lmites de control, 205 lnea base inicial, 76, 77 logbook, 67
O
operacin postsecuencia, 181 origen conectar, 159 forzar, 159 ignorar, 159 incluir, 159 tratamiento, 159
M
macro apagado, 181 manuales, 42 marcas de integracin, 73 mximo del pico, 80, 91 mensajes de error, 67 mensajes de parmetros, 67 momento de finalizacin, 76 momento de inicio, 76 momentos estadsticos, 241 monitor estado del instrumento, 69 seal, 66
P
parmetros de integracin, 76, 111 parmetros programados, 115
267
ndice
partes qu es?, 170 abortar, 175 agrupamiento, 195 anlisis en blanco, 179 calibracin cclica, 188, 189 calibracin explcita, 187 crear, 173, 174 detener (stop), 174 editar, 174 errores, 177 fichero de registro, 177 interrumpir (pause), 175 nombre de fichero, 179 parmetros de recalibracin, 183 recalibracin, 183 salvar, 174 subdirectorio, 46 tabla, 172 viales de muestra, 179 patrn externo, 128 interno, 131 recalibracin con mltiples viales, 199 patrn externo, 128 patrn interno, 131 pendiente, 82 penetracin de la lnea base, 96 personalizacin, 35 anlisis de datos, 60 personalizado informes, 34 pico altura, 126 cualificadores, 137, 138, 144 cuantificacin, 59, 122 identificacin, 59, 136 proceso de identificain, 147 pureza, 60 reglas de asignacin, 137 respuesta, 144 simetra, 236 tiempo de retencin, 142 ventana de tiempo de retencin, 141
pico de disolvente, 81, 109 pico negativo, 79 picos de referencia localizacin, 147 mltiples, 143 simples, 142 uso, 142 picos de referencia simples, 142 picos no asignados, 105 picos no identificados clasificacin, 148 recalibracin, 166 picos solapados, 92 postanlisis comando, 61 macro, 61 pre-anlisis comando, 58 macro, 58 precisin formato del nmero, 251 punto mximo, 76 puntos cardinales, 80, 81
R
rangos secuencia, 158 recalibracin, 165 en qu consiste?, 165 por qu?, 165 automtica, 182 completa, 166 intervalo, 184 parcial, 166 picos no identificados, 166 promediar, 184 tiempo de retencin de un compuesto no retenido, 166 recalibracin cclica, 199 rechazo por altura, 111, 113 rechazo por rea, 111 reconocimiento de picos, 88 filtro, 85
reemplazar, 184 regresin coeficiente de regresin, 250 relacin de altura con respecto al valle, 102 relacin de alturas para divisin de cola, 102 relacin de capacidad, 242 relacin pico/valle, 97 residual relativo, 153 resolucin, 245 respuesta, 122, 154 detector, 155 extrapolacin, 195 relacin, 144 respuesta del detector, 155, 157, 213 resultados cuantitativos, 215 resultados, informes, 213 retencin relativa, 244 revisin del software configuracin del sistema, 22 mtodos y secuencias, 22 modelo de datos, 23 sistema operativo, 22 revisin por lotes, 204 automtica, 208 historia, 208 interfase del usuario, 207 manual, 208 Run Time Checklist, 51, 55, 56 adquisicin de datos, 58 anlisis de datos, 59 comando postanlisis, 61 comando preanlisis, 58 macro postanlisis, 61 macro pre-anlisis, 58 salvar copia del mtodo, 61 salvar datos GLP, 60
268
ndice
S
salvar datos GLP, 60 secuencia, 150 agrupada, 184 ajuste de curva, 159 cclica, 188 cclica multinivel, 189 compuesto, 150 configuraciones, 134 curva, 152 explcita, 187 frecuencia, 184 muestra, 150, 157 mltiples niveles, 156 nivel, 150 operacin agrupada, 196 punto, 150 rangos, 158 secuencias de calibracin explcita, 187 seguimiento de la lnea base, 77, 97 seguimiento de la lnea base (sin penetraciones), 96 seal analgica, 64 detalles, 50 digital, 64 monitor, 66 sensibilidad de pendiente, 111 sistema apagado, 181 estado, 68 mensajes, 67
tiempo de retencin, 239 absoluto, 138, 140 actualizar, 183 corregido, 138, 142 recalibracin, 166 tiempo de retencin corregido, 138, 142 tiempo muerto, 239
V
variacin%, 185 ventana de referencia, 141 ventana de tiempo de retencin, 140, 141 verificacin, 256 verificacin del sistema, 256 verificar subdirectorio, 46 volumen muerto, 239
T
tabla de calibracin, 136 en qu consiste?, 151 tabla de picos sumados, 219 tabla de secuencia recalibracin, 183 tabla del compuesto, 206
269
ndice
270
www.agilent.com
En este manual
Este manual describe varios conceptos de la ChemStation. Su objetivo es la familiarizacin con el funcionamiento de la Agilent ChemStation. Para ms informacin sobre cmo utilizar la ChemStation, consulte el sistema de ayuda o la tarjeta "Primeros pasos" que acompaa a los manuales.
Agilent Technologies 2004, 2005

Impreso en Alemania 05/05
*G2070-95121* *G2070-95121* G2070-95121


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Utilizacin de los informes de la ChemStation

Evaluacin de la idoneidad del sistema Verificacin del sistema

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Control del instrumento 41 Conexin en red 41 Documentacin 42 44

La estructura de directorios de la ChemStation 2 Mtodos 47 48

Edicin de mtodos 54 Partes del mtodo a editar

Estructura del directorio de mtodos

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En qu consiste la adquisicin de datos? Ficheros de datos 65

En qu consiste la integracin? Qu hace la integracin? 73

Los algoritmos de integracin de la ChemStation Capacidades de integracin 74

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En qu consiste la cuantificacin? Clculos de cuantificacin 123

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En qu consiste la identificacin de picos? Reglas de asignacin de picos 137

Definicin de trminos Tabla de calibracin Curva de calibracin Muestras desconocidas

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Qu ocurre cuando se ejecuta una secuencia?

Secuencias de calibracin explcita

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Utilizacin de los informes de la ChemStation Qu es un informe? 212

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Frmulas y clculos de la idoneidad del sistema

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Caractersticas de la Agilent ChemStation Descripcin general

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Mdulos adicionales del instrumento

Mdulos adicionales de evaluacin de datos

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Productos slo para la evaluacin de datos

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Caractersticas de la Agilent ChemStation Hardware de la Agilent ChemStation

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Caractersticas de la Agilent ChemStation Acerca del software de la Agilent ChemStation

Acerca del software de la Agilent ChemStation

Configuracin del sistema

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Caractersticas de la Agilent ChemStation Acerca del software de la Agilent ChemStation

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Convenciones de los nombres de ficheros

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Longitud mxima de los nombres de ficheros y subdirectorios de ChemStation

Subdirectorio de secuencias de datos

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Interfase de usuario del software

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