UNIVERSIDAD COLEGIO MAYOR DE CUNDINAMARCA FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD PROGRAMA DE BACTERIOLOGA DETERMINACIN DE LA PREVALENCIA DE HIPERAGREGABILIDAD PLAQUETARIA PRIMARIA POR

AGREGOMETRIA Y CITOMETRIA DE FLUJO, EN POBLACIN SANA DE BOGOT - COLOMBIA, 2010 PALABRAS CLAVES: Prevalencia, Hiperagregabilidad plaquetaria, expresin de receptores CD41, CD61, CD41/CD61, Agregacin con agonistas Epine rina ! ADP ESTUDIANTES: "ind! #atiana $arbosa Castro, Ana %arit&a Clavi'o Cru&, (enni )orena Cort*s +odr,gue& DOCENTES: Asesores Externos: Doc- .loria +a/os +a/os 0 Doc- $en'a/,n 1spino Cali& Asesor Interno: %!ria/ $eatri& A/a!a FECHA: Agosto, 2313 RESUMEN

El ",ndro/e de Plaqueta Pega'osa 4"PP5 es un desorden autos/ico do/inante asociado con eventos tro/boe/blicos arteriales ! venosos 1- "u isiopatolog,a a6n no se encuentra total/ente esclarecida, sin e/bargo, se cree que se debe a un de ecto en los receptores de la super icie plaquetaria, visuali&7ndose alteraciones en curvas de agregabilidad en presencia de agonistas co/o ADP 4Adenosindi os ato5 ! EP8 4Epine rina5 pacientes que 9an tenido
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- En di erentes estudios reali&ados sobre tro/bticos previos 4en er/edad

"PP se 9a encontrado que su incidencia es alta, pero *sta solo se 9a calculado en episodios tro/boe/blica, :A% ! accidente cerebrovascular, entre otros5, antecedentes a/iliares o que tienen actores de riesgo para desarrollar este tipo de eventos;
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/ientras que su prevalencia en su'etos sanos sin ning6n tipo de antecedente era desconocida por lo que ue necesario el calculo de esta 413<5, indicando que parte de la poblacin anali&ada es vulnerable a presentar este evento- Estos 9alla&gos ueron obtenidos a trav*s del an7lisis de curvas de agregacin por t*cnica de agrego/etria ! del punto de corte esti/ado por cito/etr,a de lu'oDe los 2=3 individuos anali&ados 1>> ueron /u'eres, ?> 9o/bres, ! su

distribucin en cuanto a tipos de 9iperagregabilidad ue la siguiente@ #ipo : 1= su'etos 4>-6<5, #ipo :: >A su'etos 42>-1<5, #ipo ::: un su'eto 43-4<5 ! 1>A 46A-?<5 ueron negativos; el /a!or porcenta'e de 9iperagregabilidad se observ con Epine rina, en consideracin al alto n6/ero de positivos, se pretendi con ir/arlos a todos pero solo se conto con la colaboracin de 2A participantes; de estos solo ? resultaron positivos a los cuales se les reali&o PB4De la poblacin a estudio se seleccionaron aleatoria/ente A6 /uestras para cito/etr,a de lu'o 4CD61, CD41 ! CD61/CD415, de estas 42 no presentaron 9iperagregabilidad ! 44 si- De las 42 negativas se to/o el pro/edio co/o punto de corte de negatividad en este grupo de estudio, al co/parar los porcenta'es con los 44 positivos se observo que *stos eran /a!ores con relacin a los negativos; lo que evidencia una buena correlacin de las dos t*cnicas-

INTRODUCCION )as plaquetas son el resultado de la ruptura de los /egacariocitos 4C*lulas del siste/a sangu,neo i/plicados en la coagulacin5- Cu/plen un papel esencial en el organis/o, por esto su uncionalidad 9a sido ! sigue siendo /otivo de estudio, lo /is/o que su alteracin ! consecuente i/plicacin en di erentes patolog,as de orden 9e/orr7gico o tro/btico, co/o in arto agudo al /iocardio :A%, accidentes cerebrovasculares, tro/bosis venosa ! arterial, e 9iperagregabilidad plaquetaria, que es un desorden de la actividad ! espec, ica/ente de la agregacin de las plaquetasExisten actores a/bientales ! isiolgicos co/o cansancio, estr*s, tabaquis/o, alco9olis/o, res riados co/unes, preocupaciones, irritabilidad, entre otros, que pueden provocar 9iperagregabilidad plaquetaria de /anera isiolgica; para diagnosticar ! 9acer segui/iento de esta, se utili&a la t*cnica de agrego/etr,a que pretende 9allar el porcenta'e de agregacin por turbidi/etr,a en presencia de agonistas co/o ADP ! EP:; entre otras t*cnicas se encuentra la cito/etr,a de lu'o, en la cual se 9ace uso de los /arcadores CD61, CD41 ! CD61/CD41 que buscan deter/inar si existe o no la sobreexpresin de estos receptores en la /e/brana plaquetaria ! evidenciar si se correlaciona con los 9alla&gos obtenidos en las curvas de agregacin estableciendo un punto de corte que per/ita conocer la expresin nor/al ! sobreexpresin cuando se presentePara apo!ar la t*cnica de diagnstico !a establecida 4agrego/etr,a plaquetaria5 existe una prote,na, el PB4, indicador de activacin plaquetaria, presente en los gr7nulos al a ! liberado en el proceso de activacin 24, que con ir/a el resultado obtenido a trav*s de agrego/etr,a ! cito/etr,a de lu'o-

ANTECEDENTES Para 9ablar de 9iperagregabilidad plaquetaria es necesario obtener en el laboratorio una curva de agregacin positiva en presencia de ADP !/o Epine rina en plas/a rico en plaquetas, aco/paCado con otras condiciones co/o la actividad desbalanceada entre /ol*culas procoagulantes ! anticoagulantes, tro/bocitosis e 9iperviscosidad sangu,nea, que los conduce cuales al pro/ueven desarrollo de un estado de 9ipercoagulabilidad tro/boe/blicas1,=En 1D?D, %e t! A-)- ! colaboradores describieron un grupo de pacientes adultos con cuadros de accidentes isqu*/icos transitorios, en quienes no se 9ab,an encontrado actores asociados, excepto agregacin ! ad9esividad plaquetaria au/entadas1,=- En 1DA=, Hollida! ! %a//en, en la :E Con erencia :nternacional sobre #ro/bosis ! Circulacin .eneral en P9oenix0Ari&ona, describieron un s,ndro/e relacionado con in arto cerebral en adultos 'venes deno/in7ndolo co/o F",ndro/e de la Plaqueta Pega'osaG; encontrando en ellos 9iperagregabilidad plaquetaria en pruebas reali&adas con ADP ! Epine rina 4,=,1- En 1DA6, %elv!n, %a//en ! colaboradores presentaron un estudio reali&ado en 41 pacientes adultos con dolor precordial ! arterias coronarias angiogr7 ica/ente nor/ales, en quienes encontraron 9iperagregabilidad plaquetaria en pruebas reali&adas con ADP ! epine rina, las cuales resultaron estad,stica/ente signi icativas 4pH3,3315 en co/paracin con la reali&ada en ?= controles >,=- En 1DD>, %a//en public un estudio de die& aCos de experiencia con el "PP, identi icado en /7s de 233 pacientes 'venes entre > ! 4> aCos ! sus a/ilias, quienes presentaban tro/bosis principal/ente arteriales ! venosas en varios casos, sin actores asociados; todos /ostraban 9iperagregabilidad con ADP !/o epine rina4- En 1DDA, $icI +odger )- publica un estudio reali&ado en 1>= pacientes adultos con cuadros tro/bticos re eridos al Centro Cl,nico de #ro/bosis ! He/ostasis de Dallas durante un per,odo de 2 aCos, encontrando que del total de tro/bosis venosas, 14< correspondieron a ",ndro/e de Plaqueta Pega'osa ! de
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co/plicaciones

los Eventos Arteriales, el 2= < correspond,an a esta patolog,a as,@ el 26< de las #ro/bosis Cerebrovasculares, el ==< de los Accidentes de :sque/ia Cerebral #ransitoria, el 1D< de las #ro/bosis Coronarias Agudas, el >3< de las #ro/bosis Jasculares +etinianas, el 12< de las #ro/bosis Arteriales Peri *ricas ! el 16< del ",ndro/e de P*rdidas Betales, correspond,an al ",ndro/e de Plaqueta Pega'osa=,?- Algunos estudios reali&ados en %*xico en colaboracin con el :nstituto 8acional de 8eurolog,a ! 8eurocirug,a %anuel Jelasco "u7re&, /uestran una recuencia de Hiperagregabilidad plaquetaria en el =3-6< de aquellos que presentaban eventos arteriales ! un 63< para eventos venosos de un total de >3 pacientes-1> )os pri/eros traba'os basados en la t*cnica de cito/etr,a aplicados al estudio de las plaquetas aparecieron a inales de la d*cada de los A3 del siglo pasado ! la introduccin por "9attil ! colaboradores de la cito/etr,a de lu'o para su estudio en sangre total, ue un paso unda/ental para su aplicacin cl,nica ?- En 233A, )enIa $artosova ! co/paC,a de la +epublica Eslovaca estuvieron deter/inando por cito/etr,a de lu'o, los niveles de /arcadores plaquetarios durante su activacin ! encontraron que los niveles de CD61, CD62P, CD>1 ! la coexpresin CD6=/61 eran /7s elevados en pacientes con "PPDEn Colo/bia, ta/bi*n se 9an desarrollado estudios que involucran la prevalencia de Hiperagregabilidad plaquetaria en gestantes ! su relacin con antecedentes co/o /igraCa, eventos tro/bticos ! abortos principal/ente 1; sin e/bargo, no se 9a deter/inado un ,ndice de prevalencia en la agregabilidad plaquetaria en su'etos sanos- 1tros estudios 9an revelado la i/portancia de deter/inar PB4 co/o apo!o a las t*cnica de agrego/etr,a; en uno de ellos se inclu!eron 43 pacientes, distribuidos en = grupos@ 23 con evento tro/btico, 13 con episodio /igraCoso ! 13 /adres gestantes con antecedentes de abortos recurrentes a los cuales se les deter/in PB4 por Elisa1? pacientes presentaron 9iperagregabilidad #ipo :: 4A><5 ! = #ipo : 41><5 en ase aguda- Despu*s de > se/anas, 1> pacientes continuaron el /is/o patrn ! dos ueron negativos; los =
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pacientes #ipo : no presentaron ca/bios- Con respecto a PB4 1= ueron positivas ! = negativas en los dos /o/entos; de los 4 restantes; 2 presentaron PB4 negativo en ase aguda ! positivo a las > se/anas, los otros 2 positivos en ase aguda para PB4 ! negativo a las > se/anas24-

OBJETIVO GENERAL

Deter/inar la prevalencia de Hiperagregabilidad Plaquetaria Pri/aria por curvas de agregacin plaquetaria ! Cito/etr,a de lu'o 4/arcadores CD41 ! CD615 en poblacin sana de $ogot7 K Colo/bia-

OBJETIVOS ESPECFICOS Deter/inar seg6n la in or/acin de/ogr7 ica de la poblacin a estudio g*nero ! recuencia por edad

Deter/inar el porcenta'e de agregacin plaquetaria por /edio de curvas, estableciendo as, el co/porta/iento de la uncin plaquetaria seg6n el ,ndice de agregacin en los su'etos sanos estudiados-

Establecer el punto de corte para poblacin sana ! de esta or/a poder establecer en pacientes sobreexpresin de receptores que indicar,an 9iperagregabilidad plaquetaria, /ediante la t*cnica de cito/etr,a de lu'o, por /edio del uso de /arcadores plaquetarios CD41 ! CD61-

Clasi icar seg6n tipo de agregacin 4:, :: ! :::5 a los participantes del estudio que 9a!an presentado curva de agregacin positiva por t*cnica de agrego/etr,a

Correlacionar los 9alla&gos de 9iperagregabilidad encontrados con las t*cnicas de agrego/etr,a, cito/etr,a de lu'o ! PB4

MARCO REFERENCIAL

CARACTERSTICAS ESTRUCTURALES DE LAS PLA UETAS )as plaquetas son producto de la ruptura de los /egacariocitos, c*lulas de la /*dula sea, las cuales son c*lulas extraordinaria/ente grandes 423 // de di7/etro5, con un n6cleo alta/ente poliploide ! un citoplas/a subdividido por capas de /e/branas onduladas- "e or/an a partir de ves,culas que se desprenden en grandes cantidades de las /e/branas externas de los /egacariocitos- Circulan en la sangre peri *rica en or/a de disco biconvexo 4discocitos5 de aproxi/ada/ente = //2 de di7/etro, 4 0 ? //= de volu/en ! 13 pg de peso- Poseen carga el*ctrica negativa en su super icie- "u concentracin nor/al en la sangre es de 1>3 0 =>3 x 13 6//), con un tie/po de vida /edia en sangre de aproxi/ada/ente ? a 13 d,as- Lunto a los eritrocitos ! leucocitos constitu!en los ele/entos or/es de la sangre; poseen algunos ele/entos co/unes a otras c*lulas ! otros que las distinguen ! caracteri&an ?- Est7n con or/adas por una /e/brana, citoplas/a el cual alberga el siste/a de /icrot6bulos, siste/a canalicular abierto, siste/a tubular denso, /itocondrias, gr7nulos densos, gr7nulos al a ! gr7nulos de glucgeno)a /e/brana deter/ina el l,/ite con el exterior por su super icie biconvexa, integrada por el glucocalix que contiene receptores glucoprote,cos co/o el co/ple'o .P :b0J0:E, que interviene en el proceso de ad9esin al interactuar con el actor Jon Millebrand ! la integrina N::bO= 4.P::b/:::a5, de signi icativa i/portancia que ocupa una gran proporcin de la super icie 41> < de la prote,na total de la /e/brana ! = < de la c*lula5; *sta integrina es un 9eterod,/ero de 22A IDa?,14, dependiente de calcio, cu!as subunidades N ! O son codi icadas por genes di erentes; la /a!or proporcin de esta integrina es extracelular ! dispone de 2 seg/entos trans/e/brana ! 2 seg/entos citoplas/7ticos or/ados por los extre/os C0 ter/inales- En la plaqueta en reposo se 9alla en or/a de /on/ero,
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!a que la asociacin de las subunidades requieren calcio extracelular que se enla&a a la subunidad ::b; la integrina ::b / :::a 4integrina N::/O:::5 es el receptor /7s abundante sobre la super icie plaquetaria, con aproxi/ada/ente >3-333 copias por c*lula14- "u subunidad N de 1=60PD consiste en una cadena pesada ! una cadena liviana, or/ada de una cadena corta con cola citoplas/7tica, una regin trans/e/brana ! un corto do/inio extracelular, /ientras que la cadena pesada es total/ente extracelular- )a subunidad O de D20PD consiste en un polip*ptido de ?62 a/ino7cidos, con una breve cola citoplas/7tica, una 6nica regin trans/e/brana ! un gran do/inio extracelular- El calcio es necesario para /antener la estructura 9eterodi/*rica- )a segunda capa de la /e/brana es una bicapa os olip,dica co/puesta en su /a!or,a por 7cido araquidnico, en el proceso de activacin esta capa se carga negativa/ente para dar soporte a los actores de la coagulacin, ! el 7cido araquidnico trans/ite seCales a las partes e ectoras- Por 6lti/o est7 la tercera capa sub/e/branosa, que contiene ila/entos que or/an el citoesqueleto, aqu, las seCales que provienen del exterior se convierten en /ensa'es qu,/icos que intervienen en la activacin plaquetaria >El citoplas/a conocido ta/bi*n co/o &ona sol0gel, contiene estructuras plaquetarias, ele/entos qu,/icos ! el citoesqueleto, el cual es un con'unto de siste/as ibrilares que dan a la plaqueta su or/a discoide ! le per/iten la contraccin; 9a! dos tipos de citoesqueleto en la plaqueta, el pri/ero es el de /e/brana que est7 integrado por los ila/entos sub/e/branosos 4co/puestos por actina ! /iosina5 ! el citoesqueleto del citoplas/a que contiene /icrot6bulos ! /icro ila/entos 4co/puestos por actina ila/entosa ! /iosina5, all, se pueden encontrar part,culas dispersas de glucgeno que or/an los glucoso/as quienes se encuentran de or/a espor7dica, ! gotas lip,dicas constituidas por 7cidos grasos ! el Ca QQ14- El siste/a tubular denso es un siste/a de /e/branas que aparece cercano a los /icrot6bulos ! rodea los organelos, con apariencia ! unciones si/ilares a las del ret,culo endopl7s/ico liso de otras c*lulas; es un reservorio de calcio que regula la activacin plaquetaria /ediante el secuestro o liberacin de este, el cual es liberado al citoplas/a por di erentes est,/ulos co/o
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el inositol tris os atado ! el tro/boxano A 2, tras la esti/ulacin de os olipasas, de or/a si/ilar a los t6bulos del /6sculo esquel*tico ! por un /ecanis/o /7s r7pido que el de las /itocondrias12Entre los gr7nulos espec, icos de las plaquetas se encuentran los gr7nulos al a ! los gr7nulos densos- )os gr7nulos al a pueden ser es *ricos u ovalados teniendo una estructura di erenciada en = partes; la pri/era es un nucleoide exc*ntrico /7s denso ! que est7 separado por una segunda parte lla/ada la /atri& granular, por 6lti/o una &ona peri *rica que contiene estructuras tubulares- Estos gr7nulos al/acenan sustancias que son secretadas en la activacin co/o son $0 tro/boglobulina, PB4, ibringeno, alb6/ina, ibronectina, actor Jon Millebrand, actor J, entre otros1>- %uc9as de *stas sustancias tienen un sitio espec, ico de al/acena/iento por e'e/plo@ el actor Jon Millebrand en estructuras tubulares de la &ona peri *rica, $0 tro/boglobulina en el nucleoide, el ibringeno en /atri& granular ! la /ulti/erina en &ona electronluscente, la .P ::b0 :::a, la P0selectina, CD D, PECA%01 ! la osteonectina que est7n en la cara interna de la /e/brana granular son expresados en super icie cuando la plaqueta se activa- Estos gr7nulos se clasi ican en gr7nulos al a proangiog*nicos ! gr7nulos al a antiangiog*nicos ! est7n or/ados por p*ptidos ! prote,nas, sus /e/branas contienen .P ::b/:::a, pequeCas cantidades de .P:b, .P:E ! P selectina- )os proangiog*nicos contienen Bactor de Creci/iento Plaquetario e intervienen en la proli eracin de las c*lulas /usculares lisas dentro del vaso sangu,neo, Bactor de Creci/iento del Endotelio Jascular, Bactor de Creci/iento b7sico de los ibroblastos ! Bactor de Creci/iento Epid*r/ico- )os antiangiog*nicos contienen endostatina, PB4, tro/bospondina01, al a02 /acroglobulina, in9ibidor del activador del plas/ingeno ! angiostatina-> 4.r7 ica 15 )os gr7nulos densos tienen una &ona central /u! co/pacta que est7 rodeada por un 9alo transparente ! est7n li/itados por una /e/brana si/ple, *stos gr7nulos son la /a!or reserva de CaQQ ! en ellos ta/bi*n se encuentran en&i/as del /etabolis/o de las prostaglandinas, ADP, >#H 4serotonina5, al/acenan
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Piro os atos ! poli os atos; el calcio liberado por estos gr7nulos en el citoplas/a desencadena una serie de eventos unda/entales para la agregacin plaquetaria, que inclu!en la activacin de la Bos olipasa A 2 4con liberacin de 7cido araquidnico de los os olipidos de las /e/branas ! su conversin en #ro/boxano A25, ! desencadena la contraccin del co/ple'o actina0/iosina provocando ca/bios con or/acionales con centrali&acin de organelos ! or/acin de los seudpodos caracter,sticos de la plaqueta activada 12ESTRUCTURA PLA UETARIA

.r7 ica-1 Esque/a de la plaqueta /ostrando sus partes, entre ellas los gr7nulos al a ! densos ade/7s el siste/a canalicular abierto que est7 or/ado por canales ra/i icados, se conecta a la /e/brana externa ! posee caracter,sticas si/ilares a ella en cuanto a su co/posicin- A trav*s de este siste/a se transportan las .P::b/:::a ! la .P1b 9acia los gr7nulos a- 4#o/ado de- Bisiolog,a de la 9o/eostasia- Hospital general universitario de %urcia +eina "o ,a, servicio de cirug,a general ! digestiva- Albarrac,n %ar,n0$la&que& Antonio- 233>- %urcia EspaCa-51

+ECEP#1+E" DE %E%$+A8A P)ARSE#A+:1" Jarios receptores de /e/brana de las plaquetas se unen con actores

extracelulares en respuesta a la activacin de las plaquetas por di erentes situaciones- )a secuencia de aconteci/ientos en la activacin plaqueraria resulta en la ad9esin ! la agregacin plaquetaria- )as plaquetas reconocen ! se anclan sobre el subendotelio a trav*s de la interaccin del BJM 4Bactor Jon Millebrand5 con la .P:a- )a .P:$, receptor en la /e/brana plaquetaria se une el actor de von Millebrand 4BJM5 /ediador de la ad9esin 4El actor de Jon Millebrand ta/bi*n se puede unir a .P::b0:::a en la /e/brana que une el ibringeno ! /edia
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interacciones plaqueta0plaqueta5- )a .P:a ta/bi*n colabora en esta uncin interaccionando con el col7geno del subendotelio- )a activacin de las plaquetas ancladas sobre el subendotelio va a producir ca/bios con or/acionales en la .P::b0:::a que expondr7 receptores para el BJM ! ibronectina 4B85 que acilitar,a el proceso de ad9esinD- )as plaquetas se anclan a la pared del vaso daCado /ediante la i'acin a los receptores de col7geno 4C1)5 subendotelial- 1tros esti/ulantes plaquetarios de la sangre, co/o tro/bina 4#H+5 ! epine rina 4EP:5 se i'an a sus receptores respectivos- En respuesta a estos di erentes est,/ulos, las plaquetas ad9eridas se activan ! liberan tro/boxano A2 4#EA25 ! adenosina di os ato 4ADP5, que se i'an a sus receptores plaquetarios respectivos ! a/pli ican el proceso de activacin- )a esti/ulacin v,a 4AA5, con la liberacin de tro/boxano A2 4#EA25 esti/ula la agregacin A El acido araquidnico AA es /etaboli&ado por /ecanis/os oxidativos, ciclooxigenasa ! lipooxigenasa- )a v,a de la ciclooxigenasa da lugar a la or/acin, de endoperxidos c,clicos P..2/P.H2 productos inestables ! de capacidad agregante al actuar sobre receptores plaquetarios del tro/boxano- "e /etaboli&an 9acia productos estables inales las prostaglandinas@ P.D2, P.E2 ! P.B2 ! otros productos inter/edios inestables- Por e ecto de la tro/boxano sintetasa se or/a un potente agente agregante plaquetario, vasoconstrictor, broncoconstrictor ! que ta/bi*n au/enta la per/eabilidad de las /e/branas@ el tro/boxano 4#x A 25- )a plaqueta no tiene equipo en&i/7tico capa& de producir prostaciclina, por lo que constitu!e una estructura con capacidad exclusiva/ente agregante, el #x A 2; este ta/bi*n pro/ueve la liberacin de calcio por el siste/a tubular denso 16- )a agregacin plaquetaria es /ediada por la i'acin de ibringeno 4B:$5 a sus receptores en las plaquetas circundantes, que da lugar a la or/acin de puentes de ibringeno- El receptor B:$ se or/a /ediante el acopla/iento de .p ::b/:::a en la /e/brana de las plaquetas activadas El ADP ! los receptores de la tro/bina /uestran la relacin entre ADP ! el 7cido araquidnico AAA- 4.ra ico 25-

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4a5

4b5
.r7 ica 2- 4a5- Jarios receptores de /e/brana de las plaquetas se unen con actores extracelulares en respuesta a la activacin de las plaquetas por di erentes situaciones, lo que resulta en la ad9esin ! la agregacin plaquetaria- .P:$ en la /e/brana plaquetaria se une el actor de von Millebrand 4BJM5 ! /ediador de la ad9esin- El ADP ! los receptores de la tro/bina est7n ilustrados para /ostrar la relacin entre ADP ! el 7cido araquidnico AA esti/ulacin v,a 4AA5, con la liberacin de tro/boxano A2 4#EA25, lo que esti/ula la agregacin- 4b5- "e ilustra un segundo sitio en actor de Jon Millebrand que se une a .P::b0 :::a- En la /e/brana que une el ibringeno ! /edia interacciones plaquetas0plaquetas 4#o/ado de@ 4a5TTT-cardioaragon-co//doc-p9pUopVrevista=WidV11=; 4b5 #reist/an $ernardo, Hersc9i b- "ilber/an, Berguson Lai/e L- :::- Anticoagulacin en la angioplastia percutanea translu/inal coronaria ! +evista Peruana de Cardiolog,a@ "eptie/bre 0 Dicie/bre 1DD>- sisbib-un/s/-edu-pe/---/pagina162Bigura2b5

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CARACTERSTICAS FUNCIONALES DE LAS PLA UETAS )as plaquetas se caracteri&an por un consu/o /u! extenso de ox,geno, es seis veces /7s r7pido que en las c*lulas /usculares en reposo- )a uente de energ,a es la glucosa que se obtiene a partir del glucgeno ! la v,a unda/ental es la glicolisis anaerobia, que convierte la glucosa en lactato e iones de 9idrgeno, los cuales son captados por el acetato, que entra a las /itocondrias para su oxidacin en el ciclo del 7cido tricarbox,lico 4ciclo de Prebs5, lo que propicia la s,ntesis de A#P por la os orilacin oxidativa ! la estabili&acin del pH celular- :ncorporan a su interior 4por un /ecanis/o independiente de energ,a5 rag/entos de /e/brana que contienen .P::b/:::a ! ibringeno, ! otros que contienen .P:b 4por un /ecanis/o dependiente de energ,a5, esto per/ite la regeneracin de los receptores de /e/brana-4 PAPEL DE LAS PLA UETAS EN LA TROMBOG"NESIS )a participacin de las plaquetas en los procesos de 9e/ostasia ! tro/bosis depende de la ocurrencia de tres eventos@ ad9erencia a super icies 4Ad9esin plaquetaria5, ca/bio de or/a ! secrecin de gr7nulos 4reaccin de liberacin5 ! agregacin plaquetaria; acilitan las reacciones de activacin de la coagulacin alterando su super icie 4Actividad procoagulante5- El calcio procedente del l,quido extracelular 'unto al liberado del ret,culo endopl7s/ico al citosol act6a co/o /ensa'ero pro/oviendo seCales el*ctricas que inician la secuencia de las acciones tro/boc,ticas 4.r7 ica =5-

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TROMBOGENESIS

.r7 ica =- Bor/acin del tro/bo- #o/ado de Pereira, Lai/e- Bisiopatolog,a de la #ro/bosis ArterialDeparta/ento de He/atolog,a01ncolog,a- Ponti icia Sniversidad Catlica de C9ile- B- Alborno&; C8ora/buena-

ADHESI#N PLA UETARIA )as plaquetas tienen la capacidad de ad9erirse a super icies arti iciales, sobre las cuales se expanden- Stili&an co/o ligando al ibringeno, a trav*s de su unin a .P::b/:::a- #a/bi*n se ad9ieren al col7geno 4 unda/ental/ente de los tipos : ! :::5, vMB, ibronectina ! la/inina- En condiciones de ba'o lu'o sangu,neo, este evento es /ediado por la interaccin vMB0.P:b0:E, pero en condiciones de alto lu'o ta/bi*n se requiere la participacin de .P::b/:::a- "e or/an enlaces ir/es que dependen de la estructura ibrilar del col7geno ! de la cantidad de subunidades arginina0glicina0asp7rtico 4+.D5 ?- )a ad9esin plaquetaria al col7geno requiere de su interaccin con vMB del plas/a, .P:b, .P:a::a 4receptor de ibronectina, la/inina ! vitronectina5 de la /e/brana plaquetaria que durante la or/acin del co7gulo establecen enlaces plaqueta0 ibrina- "e produce la internali&acin de las /allas de ibrina o de col7geno, que son rodeados de /icro ila/entos?-

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REACCION DE LIBERACI#N )a pri/era /ani estacin ,sica de la activacin plaquetaria es el ca/bio de or/a de discocito a es erocito, que se aco/paCa de un incre/ento en la super icie desde A,32 //2 4en la plaqueta en reposo5 a 1=,3 //2 4en la plaqueta activada5Dis/inu!e la longitud del subesqueleto sub/e/brana, se produce la redistribucin de los /icrot6bulos ! la c*lula se de or/a e/itiendo seudpodos- )os /icrot6bulos que est7n en estrec9o contacto con el gel contr7ctil se trasladan 9acia el centro de la c*lula; se procede a la desintegracin del citoesqueleto ! se restitu!e a partir de la internali&acin de rag/entos de la /e/brana externa, es un proceso independiente de calcio 4cuando el est,/ulo es el ADP5 ! dependiente de energ,a?- )os agentes proagregantes co/o el ADP, col7geno, tro/bina, adrenalina, El actor de agregacin plaquetaria PAB ! tro/boxano A 2 per/iten que las plaquetas liberen los gr7nulos al exterior, existiendo principal/ente dos tipos@ al a que contienen PB4, $0tro/boglobulina, prote,nas co/o ibringeno, actor J, entre otros ! los gr7nulos densos que contienen ADP, serotonina ! CaQQ#odos estos agonistas intervienen en la s,ntesis de prostaglandinas per/itiendo la liberacin de tro/boxano A2-16 AGREGACI#N PLA UETARIA Est,/ulos isiolgicos para la activacin plaquetaria son la tro/bina, el col7geno, el ADP, la epine rina, el tro/boxano A 2 4#EA25- En el caso de la tro/bina, el ADP ! el #EA2, se trata de receptores acoplados a prote,nas enla&antes de nucletidos de guanina 4prote,nas .5- El de tro/bina es una integrina con siete do/inios trans/e/brana, de la cual 9a! de 1->33 a 2-333 copias que se desensibili&an r7pida/ente al producirse la activacin, las cuales no son recuperables- El receptor del ADP es purin*rgico, *l se caracteri&a por responder con activacin rente al ADP ! con in9ibicin rente al A#P- "u estructura no 9a sido identi icada ! por /uc9o tie/po se 9a deno/inado ar/acolgica/ente co/o receptor P2#- ?
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"e plantea que al /enos una integrina, la .PJ:, act6a co/o receptor para la ase de activacin inducida por el col7geno ! que su esti/ulacin es una seCal para una os olipasa C- Sn evento que sigue a la activacin es el incre/ento de la concentracin de calcio citoplas/7tica, cu!o /ecanis/o bioqu,/ico no 9a sido deter/inado total/ente en la /a!or,a de los casos- Con respecto a la tro/bina, el col7geno ! el #EA2, se 9a de/ostrado la ocurrencia de activacin de la os olipasa C, que da lugar a la or/acin de 1,4,> tri os ato de inositol 4que libera calcio del siste/a tubular denso ! activa una /iosina Iinasa5 ! 1,2 diacilglicerol 4que activa la prote,na Iinasa C, que desencadena una serie de os orilaciones de prote,nas que parecen i/portantes para el proceso de agregacin plaquetaria5- En el caso del #EA2 se cree que ta/bi*n 9a! entrada a la c*lula del calcio extracelular a trav*s de una intensi icacin del interca/bio 8aQ/HQ de lo cual depende /7s de la /itad del incre/ento del calcio citoplas/7tico- "e desconocen los /ecanis/os bioqu,/icos que llevan a la activacin de la .P::b/:::a ! el enlace del ibringeno, pero 9a! evidencias de que este 6lti/o es independiente del calcio?Despu*s de un est,/ulo uerte los gr7nulos al a ! densos se alargan ! e/iten seudpodos, se aproxi/an a la /e/brana plas/7tica 4lo que es posible debido a la disolucin del siste/a canalicular abierto5, se unden con la /e/brana, au/entan de volu/en debido a la entrada de agua ! esto propicia la liberacin de su contenido al /edio exterior, lo que se deno/ina secrecin- Sn ele/ento que distingue a los agentes inductores de agregacin plaquetaria es el peso relativo que tienen la s,ntesis de #EA2 ! la secrecin en el resultado inal- Por e'e/plo, la agregacin inducida por tro/bina, es resultado unda/ental/ente de la seCal dada por la activacin de su receptor, !a que no es a ectada por la in9ibicin de la s,ntesis del #EA2 por aspirina- El ADP produce una pri/era ase de agregacin reversible, de aproxi/ada/ente =3 segundos de duracin ! que es consecuencia de la seCal de activacin del receptor, a lo que sigue una segunda ase irreversible ! que depende de la s,ntesis de #EA2- El #EA2 parece requerir de la liberacin de
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ADP- )a captacin de CaQQ en el siste/a canalicular es A%Pc dependiente, el incre/ento de *ste reduce la /ovili&acin de CaQQ, la prostaciclina es un potente activador de adenilciclasa plaquetaria por lo que produce incre/ento de A%Pc e'erciendo e ectos antiagregantes e in9ibe la reaccin de liberacin 16- )a conocida susceptibilidad a la aspirina de la agregacin inducida por col7geno, sugiere la i/portancia de la liberacin de #EA2 en su /ecanis/o de activacin plaquetaria)a epine rina se considera un agonista d*bil que a/pli ica el e ecto de otros est,/ulos a trav*s del incre/ento de la concentracin de calcio intracelular, ! de la actividad adenilato ciclasaTRASTORNOS DE HIPERCOAGULABILIDAD )as plaquetas 'uegan un i/portante papel en la 9e/ostasis ! tro/bosis- En la 9e/ostasis las plaquetas tienen dos principales unciones@ )a pri/era debida a su 9abilidad para ad9erirse ! agregarse a sitios donde el endotelio se encuentra lesionado, or/ando as, la lla/ada pri/era 9e/ostasis- )a segunda uncin es la de proveer una super icie donde los actores de coagulacin se unir7n ! generar7n toda la cascada correspondiente- En la 9e/ostasia nor/al las plaquetas pueden ad9erirse a las ibras de col7geno expuestas, agregarse e iniciar 'unto con los actores tisulares la activacin del siste/a de coagulacin- Pero en algunos pacientes que no tienen lesiones vasculares identi icables se 9an presentado tro/bos arteriales, ! no es clara la isiolog,a antitro/btica o la relacin de la super icie endotelial que pueda contribuir con la or/acin del tro/bo A- Cuando la uncionalidad nor/al plaquetaria se ve alterada pueden surgir un evento tro/btico por alteraciones co/o las siguientes@ ",ndro/e de Plaqueta Pega'osa, ",ndro/e Anti os ol,pidos, Bactor J )eiden, De iciencia Prote,na C, )ipoprote,na A, entre otros-

SINDROME DE PLA UETA PEGAJOSA

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Hablado un poco de los diversos trastornos de 9ipercoagulabilidad ! las unciones 9e/ost7sicas de las plaquetas, nos centrare/os en el ",ndro/e de Plaqueta Pega'osaEn los pri/eros traba'os de %a//en se utili&aron pruebas de /icroscop,a electrnica para poner en evidencia la respuesta de las plaquetas a una super icie de contacto 4ad9esividad5, seg6n la t*cnica descrita por $arn9art et al- Con base en esta t*cnica, en un recuento de 133 plaquetas se clasi ican las or/as en@ +edonda o con /,ni/a /odi icacin en la or/a 4abortiva5 co/o inactiva Bor/a dendr,tica co/o activacin inter/edia Alteracin extendida ! dise/inada co/o /7xi/a activacin

El n6/ero de plaquetas que se agregan unas a otras ta/bi*n se cuenta ! se expresa en porcenta'e- En los pacientes con "PP usual/ente se encuentran 9asta 13< de or/as redondas o abortivas, A3< de or/as dendr,ticas ! 13< de or/as dise/inadas o extendidas, 9asta con un 2>< de agregados plaquetarios- En la actualidad esta t*cnica no se utili&a ! el diagnstico se 9ace por agrego/etr,a AEl ",ndro/e de Plaqueta Pega'osa se viene considerando co/o la segunda causa dentro de los proble/as 9ereditarios relacionados con en/enos tro/bticos, despu*s de la +esistencia a la prote,na C activada ! parece corresponder a la principal causa de tro/bosis arteriales- Cl,nica/ente en la poblacin adulta, se asocia con en/enos anginosos, in arto agudo del /iocardio, isque/ia cerebral transitoria, cuadros de apople',a, tro/bosis retiniana, entre otros, la /a!or,a de los eventos son de tipo arterial- "e 9a considerado que las situaciones de estr*s e/ocional pueden activar /ecanis/os de agregacin plaquetaria , /ientras que en la poblacin gestante presenta /ani estaciones tro/bticas a nivel del siste/a nervioso central, en/enos de tro/bosis peri *ricas arteriales o venosas, ! s,ndro/e de /uerte etal intrauterinaA19

"e 9a relacionado la agregacin plaquetaria con los ciclos circadianos, encontrando un predo/inio de aparicin en las 9oras de la /aCana- "e 9a descrito ta/bi*n que este s,ndro/e se puede asociar con otras anor/alidades cong*nitas de los /ecanis/os de anticoagulacin, co/o +esistencia a la Prote,na C Activada ! de iciencias de Prote,na "; el diagnstico se unda/enta en la de/ostracin de 9iperagregabilidad, /ediante pruebas de agrego/etr,a- "in e/bargo, se sabe que estas pruebas se 9an diseCado especial/ente para la de/ostracin de los de ectos en la agregacin ! no para la respuesta plaquetaria au/entada, se 9an descrito /uc9as patolog,as que cursan con 9iperagregabilidad plaquetaria, co/o diabetes /ellitus, s,ndro/e ne rtico, ibrosis qu,stica ! anorexia nerviosa, entre otras- En estos casos se 9a encontrado que los niveles de Bactor 4 plaquetario 4PB45, beta tro/boglobulina ! tro/boxano A 2, est7n elevados, sugiriendo la existencia de /ecanis/os intr,nsecos probable/ente secundarios de activacin plaquetaria en la circulacin- )as pruebas de agrego/etr,a se reali&an con epine rina en plas/a rico en plaquetas en concentraciones de 11, 1,1 ! 3,6 u%//l, ! con ADP se reali&an con concentraciones de 2,=, 1,2 ! 3,6 u%//l- )a agregacin se expresa en porcenta'e de trans/isin de la lu&; 133< es agregacin co/pleta ! 3< ausencia de agregacin- En los pacientes nor/ales, al diluir la epine rina ! el ADP, las curvas /uestran dis/inucin de la agregacin, /ientras que en el paciente que presenta el "PP, las curvas de agregacin per/anecen elevadas- "e deben descartar las patolog,as !a descritas que au/enten la agregacin plaquetaria A"e consideran tres tipos di erentes del ",ndro/e de Plaqueta Pega'osa #ipo :@ #ipo ::@ #ipo :::@ Hiperagregabilidad tanto con Epine rina co/o con ADP Hiperagregabilidad sola/ente con Epine rina Hiperagregabilidad sola/ente con ADP

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Sna circunstancia de /uc9o valor es la 9iperagregabilidad en las pruebas de agregacin de los padres, 9er/anos o par7/etros@ 1- )as pruebas se deben reali&ar en /7s de una oportunidad, con resultados si/ilares 2- )os 9alla&gos de laboratorio deben desaparecer durante el trata/iento con Aspirina =- )os Halla&gos deben reaparecer cuando se repiten las pruebas al suspender la Aspirina por lo /enos con 1> d,as de anticipacin 4- "e debe establecer un patrn a/iliar /ediante pruebas reali&adas a padres, 9er/anos ! otros a/iliares >- "e deben reali&ar todas las de/7s pruebas de Hipercoagulabilidad, por lo /enos las /7s recuente/ente descritas 6- "i las pruebas se 9an reali&ado durante el evento agudo, se deben repetir despu*s de 4 a D /eses suspendiendo la Aspirina por lo /enos 1> d,as antes CITOMETRIA DE FLUJO El principio de la cito/etr,a de lu'o se basa en que las c*lulas suspendidas en un l,quido son pasadas individual/ente al rente de una uente de lu& intensa 4general/ente un l7ser5 ! los datos de la lu& re le'ada, ! en la /a!or,a de los casos, de la luorescencia, son recogidos ! organi&ados en un arc9ivo- )os an7lisis posteriores de las poblaciones ! subpoblaciones se producen /ediante el uso de progra/as de c/puto especiali&ados, lo cual per/ite obtener in or/acin valiosa para el investigador o el cl,nico- Debido a su capacidad de recolectar in or/acin de /iles o /illones de c*lulas al /is/o tie/po, la cito/etr,a de lu'o acilita el an7lisis /ultipara/*trico co/o lo reali&an otras t*cnicas de laboratorio 4/icroarreglos o /icroarra!s, prote/ica5- Esta caracter,stica de anali&ar /illones
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a/iliares asinto/7ticos o con

antecedentes de tro/bosis, ! deben cu/plir alguno o algunos de los siguientes

de c*lulas ta/bi*n acilita la obtencin de datos estad,stica/ente signi icativos en un per,odo de tie/po corto- Ho! se consiguen en el /ercado siste/as con capacidad de anali&ar /7s de 1> par7/etros de /anera si/ult7nea con tasas de an7lisis superiores a ?3-333 c*lulas por segundo ! con la posibilidad de tener estaciones robticas auto/ati&ables para reducir los costos de los an7lisis e incre/entar la e iciencia operativa 22En la d*cada de los 63 co/en& a desarrollarse la t*cnica de cito/etr,a de lu'o, pero los pri/eros traba'os basados en esta t*cnica aplicados al estudio de las plaquetas, aparecieron a inales de la d*cada de los A3 del siglo pasado >- )os ensa!os de cito/etr,a de lu'o co/ple/entan e incluso pueden ree/pla&ar los estudios convencionales de uncin plaquetaria; co/o toda t*cnica presenta sus venta'as ! li/itaciones, ! puede ser utili&ada co/o a!uda diagnstica en estudios plaquetarios utili&ando /arcadores de activacin plaquetaria, en el estudio de de ectos gen*ticos de los s,ndro/es protro/bticos, tro/bopo!esis, terapia antitro/btica, estudios de tro/bocitopenias alo ! autoin/unes, ! en situaciones cl,nicas co/o el in arto agudo de /iocardio ! la angina inestable- )a incorporacin de la cito/etr,a de lu'o en el estudio de las plaquetas 9a tenido una i/portante repercusin no solo en el diagnstico, sino ta/bi*n en el an7lisis de la isiopatolog,a de un grupo de en er/edades relacionadas con el co/porta/iento plaquetario>- )a t*cnica de cito/etr,a de lu'o, e/pleada en aquella *poca era utili&ada casi exclusiva/ente para el recuento ! /edida del ta/aCo de las part,culas en laboratorios de investigacin b7sica; Actual/ente ta/bi*n se 9an basado los estudios para caracteri&ar los co/ponentes plaquetarios, entre estos los gr7nulos del citoplas/a co/o son los gr7nulos al a ! densos ade/7s de las integrinas receptores de /e/brana co/o son las integrinas de ad9esin ! agregacinEl traba'o de $artosova )enIa ! colaboradores en 233A, se reali& la caracteri&acin de receptores plaquetarios presentes en eventos tro/boe/blicos arteriales ! venosos2- En este estudio se evalu el grado de activacin plaquetaria
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por /edio de la expresin de las principales integrina de /e/brana que sirven co/o receptores de los inductores de plaquetas ! /arcadores de la activacin plaquetaria- Stili&ando /uestras de plas/a rico en plaquetas, se anali& la expresin ! coexpresin de la integrina de super icie ! receptores CD62P 4P0 selectina5, CD41, CD61/6=, CD=6/6=, CD>1 ! CD2D/4Db, con una previa incubacin con anticuerpos /onoclonales luorescentes se /arcaron con isotiocianato de luoresce,na 4B:#C5 o Bicoeritrina 4PE5- )a /uestra ue procesada por CellRuest 4$ecton DicIinson5- )os resultados ueron obtenidos en or/a de diagra/as- Sn grupo de pacientes con "PP se co/par con un grupo de 23 controles de donantes de sangre sanos ! voluntarios sanos, en la /uestra se diagnostic alguno de los tipos del s,ndro/e, ade/7s de tro/bopat,as arteriales 4in arto de /iocardio, accidente cerebrovascular, ataque isqu*/ico transitorio5 o venosas 4tro/bosis venosa pro unda ! / o e/bolia pul/onar5, abortos espont7neos en algunas de las pacientes estudiadas, entre otros signos 2En pacientes con "PP se detecta la expresin de los receptores plaquetarios .P CD62P, CD>1 ! en la coexpresin de CD61/6=; no se 9allaron di erencias signi icativas en la coexpresin de CD41, CD=6/6= ! CD2D/4Db- )a .P P0selectina soluble en el plas/a puede tener origen en c*lulas endoteliales P0selectina 4CD62P5 interviene en la ad9esin de las plaquetas activadas a /onocitos ! neutr ilos- "e trata de un neoant,geno de plaquetas expresado en su super icie slo despu*s de la liberacin de gr7nulos ! por lo tanto sirve co/o un /arcador de este aspecto de la activacin de las plaquetas- "e encontr expresin alta de CD62P, CD>1 ! una /a!or coexpresin de CD61/6=- 8o se con ir/o ninguna di erencia signi icativa en la expresin de CD2D/4Db 4.P:a / ::a 0 un receptor de col7geno de tipo :5, de CD41 ! de CD=6 4receptor de tro/bospondina que dese/peCa un papel en la estabili&acin del tro/bo5- El CD6= es un neoant,geno de gr7nulos lisoso/ales que sugiere ser otro /arcador de activacin de las plaquetas, expresado en la super icie de las plaquetas slo despu*s de la secrecin de gr7nulos- El CD>1 es un /arcador de activacin, as, se encuentra en la super icie de las plaquetas ! ta/bi*n en la /icropart,culas de plaquetas ! sirve co/o receptor de vitronectina223

)a expresin de la .P ::b / :::a es /uc9o /a!or despu*s de la activacin de las plaquetas- #a/bi*n /icropart,culas derivadas de las plaquetas se intensi ican en trastornos cl,nicos 4ataques isqu*/icos transitorios, s,ndro/es coronarios agudos ! de b!pass cardiopul/onar5- )as expresiones de CD62P, CD6= ! CD>1 pueden servir co/o predictores de tro/bo ilia, en pacientes con "PP2En cuanto a expresin, co0expresin de los /arcadores punto de co9orte 9allado en el estudio 4#abla 15T$%&$ '! Res(&t$)os )e &$ ex*res+,n tot$& )e Inte-r+n$s en *$.+entes .on SPP / .ontro&es se pudo observar en

pacientes con "PP ! controles seCalados, los siguientes porcenta'es, ade/7s del

)a tabla 1, /uestra los resultados de la expresin de /arcadores plaquetarios ! los puntos de co9orte en pacientes con "PP ! controles sanos- El pro/edio 9allado en los controles para CD41 ue de D?< ! para la co0expresin del /arcador CD61/6= es de ?<- 2

)a aplicacin cl,nica de los ensa!os de cito/etr,a de lu'o de la uncin plaquetaria en los trastornos asociados con un /a!or riesgo de tro/bosis pueden incluir la prediccin de eventos isqu*/icos ! la identi icacin de los pacientes que se bene iciar,an de la terapia antiplaquetaria adicionales 2-

AGREGOMETRIA LABORATORIOS HELENA

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)a agregacin plaquetaria se reali&a para evaluar la uncin anor/al de las plaquetas, cuanti icar la respuesta de estas ! supervisar la in9ibicin plaquetaria por terapia con /edica/entos- Jarios agentes de la agregacin de las plaquetas son la tro/bina, col7geno, ADP, 7cido araquidnico, co/ple'o ant,geno0 anticuerpo, la serotonina ! la vasopresina- Es 6til el estudio de estos agentes de la agregacin de acuerdo a su /odo de accin- ADP, epine rina, ! la vasopresina inducen directa/ente, /ientras que en la agregacin el col7geno ! la tro/bina act6an co/o sustancias esti/ulantes para inducir la liberacin de ADP ! tro/boxano A2- Este procedi/iento se reali&a en un agrego/*tro el cual se unda/enta en el principio de turbidi/*tria, que registra el ca/bio en la absorbancia de los di erentes anal,tos ! sus concentraciones, co/o lo es el plas/a rico en plaquetas ! en presencia de ADP o EP:- "eg6n lo describi $orn et al, se registra co/o plas/a rico en plaquetas se agita en una cubeta con concentracin de reactivos- )os reactivos de agregacin plaquetaria laboratorio Helena son estables ! sensibles-D :n0vivo, las plaquetas participan en la 9e/ostasia pri/aria, ad9esin ! agregacin en el lugar lesionado- Estos procesos se pueden /edir in vitro trav*s de la adicin de inductores, co/o el col7geno, ADP ! adrenalina en plas/a rico en plaquetas; el au/ento en la trans/isin de la lu& se registra co/o el agregado de plaquetas; el ca/bio de absorbancia 4D15 se /ide ! registra co/o tal agregacin- D El Agg+A% para la agregacin de plaquetas o rece una precisin inigualable,

7cil uso ! lexibilidad- Cuenta con cuatro canales de l7ser ptico con una inter a& de MindoTs de gran alcance- Hasta dos /dulos se pueden e'ecutar por el equipo re/oto Anal!&er, que proporciona 9asta oc9o canales para /ane'ar su carga de traba'o- A di erencia de la l7/para ptica de tungsteno de la antigXedad, el Agg+A% utili&a un diodo l7ser de precisin en todos los canales- Sna ve& puesto en /arc9a, Agg+A% reali&a una co/probacin para asegurar el equilibrio l7ser ! la reproducibilidad d,a a d,a- )a ptica avan&ada, 'unto con un algorit/o /e'orado para el c7lculo de la pendiente /e'oran en gran /edida la precisin para las
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pruebas ristocetina co actor- Calcula auto/7tica/ente la inclinacin ! la agregacin en porcenta'e de la /uestra ! la ase de latencia de i/presin calculando auto/7tica/ente las curvas-D A--RAM 0 Es*e.+1+.$.+ones

#ipo de prueba@ Agregacin plaquetaria %edicin de longitud de onda@ 6>3 n/ Cuatro c7/aras para la /edicin co/binada o individual Cubetas@ A // x 63 // 4vidrio recubierto de silicona5 #e/peratura de incubacin ! reaccin@ =? Y C Q / 01 Y C .r7 icos@ 023< a 113< de actividad 4Q / 0 3,><5 en uncin del tie/po +ango de te/peratura a/biente de 1> Y a =3 Y C 4>D Y a A6 Y B5 Potencia de entrada@ 113/223 Jac, >3/63 H&, 1233 vatios co/o /7xi/o Di/ensiones@ 6 Z41>,24 c/5 de alto x 13Z 42>,43 c/5 de anc9o x 1? Z44=,1A c/5 de pro undidad

Peso@ H1> libras 46,?> Ig5 Equipo@ A33 %H& o superior 4:ntel Pentiu/ / Celeron5 0 64 %$ de +A% 0 1,> .$ de espacio disponible en disco duro 0 "iste/a 1perativo %icroso t [ MindoTs [ 2333 0 Snidad de CD0+M K %onitor "uper J.A 4A33 x 6335- :/presora HP DesI'et 6122-

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DISE2O METODOL#GICO

DEFINICION

DEL

M"TODO:

#ipo

de

estudio

Descriptivo,

prospectivo,

correlacional !a que se describir7 c/o se co/porta el

en/eno de la

Hiperagregabilidad plaquetaria en su'etos nor/ales; ade/7s se inicia con la observacin de tal en/eno despu*s de i'ar el ob'etivo ! sus causas presu/ibles estableciendo el punto de corte- Por 6lti/o, se tiene co/o inalidad correlacionar los dos tipos de t*cnicas, Cito/etr,a de lu'o ! agrego/etr,a en /uestras obtenidas de voluntarios sanosPOBLACI#N Y MUESTRA: #odos los estudiantes universitarios entre 16 ! =3 aCos, quienes cu/plan los criterios de inclusin establecidos por los investigadores, aplicando la condicin de persona nor/al 4establecido por 9istoria cl,nica, 9istoria voluntariosCRITERIOS DE INCLUSI#N@ Ho/bres ! /u'eres entre 16 ! =3 aCos de edad, que cu/plan con los criterios establecidos en el :nstructivo donde se de ine qu* es una persona nor/al 4sin co/orbilidades o diagnstico dual, sin antecedentes de en er/edad tro/boe/bolica, :A%, accidente cerebrovascular, alco9ol, etc-5 CRITERIOS DE E3CLUSI#N@ Aquellos que no cu/plan con los criterios valorados en el :nstructivoINSTRUMENTO DE RECOLECCI#N DE DATOS: "e diseC un :nstructivo donde se consideran las caracter,sticas de su'eto sano 4Jer anexo 15PREPARACI#N DE LA COMUNIDAD @ Para la seleccin de los participantes solicita/os colaboracin a los decanos de cada acultad ! responsables de talento
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a/iliar ! criterios /*dicos5- "e seleccionaron 2=3 su'etos

a/iliares con

abortos repetitivos, /igraCa, diabetes /ellitus, obesidad, vida sana@ no drogas, no

9u/ano de cada e/presa a los cuales se les dirigi un docu/ento con el ob'etivo, no/bres de los investigadores ! la solicitud del per/iso para intervenir la co/unidad a cargo de ellos- "e i' una agenda con los voluntarios en la cual se proporcion in or/acin acerca del estudio, planteando la i/portancia de su reali&acin, con el in de obtener encuesta de inclusin ! las condiciones opti/as para la to/a de /uestra- "e dio a conocer a los su'etos de la co/unidad los ob'etivos ! principal in del pro!ecto, para poder incentivarlos a involucrarse ! solucionar sus inquietudesA los voluntarios se aplic el :nstructivo correspondiente para seleccionar aquellos que cu/pl,an con los criterios de inclusin, ! se les pidi diligenciar el or/ato de consenti/iento in or/ado por /edio del cual se autori& procesar sus /uestras- "e co/unic a la poblacin seleccionada ec9a, 9ora, lugar ! condiciones para la to/a de /uestra 4aclarando que su asistencia es de /anera voluntaria5; una ve& obtenida la /uestra se le in or/ que su resultado se enviar,a a vuelta de correo, v,a tele nica o personal/ente si es posibleCONSENTIMIENTO INFORMADO: 4Jer anexo 25 El consenti/iento in or/ado

es el procedi/iento que garanti&a que el su'eto 9a expresado voluntaria/ente su intencin de participar en el ensa!o cl,nico, despu*s de 9aber co/prendido la in or/acin que se le 9a dado acerca de los ob'etivos del estudio, bene icios, inco/odidades ! riesgos previstos, alternativas posibles, derec9os ! responsabilidades-

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METODOLOGIA

RECOMENDACIONES PARA LA TOMA DE MUESTRA: Sna ve& seleccionado el grupo de estudio que cu/ple con los requisitos establecidos, se procedi de la siguiente /anera@ Contactar a los pacientes 4v,a tele nica o v,a e/ail5, con ir/ando la cita Especi icar el lugar ! 9ora para la to/a de /uestra, que se reali&ar7 en el lugar /7s adecuado ! prxi/o al voluntario:n or/arle al paciente que debe presentarse en a!unas, cu/pliendo con los siguientes par7/etros@ D,a anterior con dieta suave, ba'a en grasa8o consu/ir aspirina ni alg6n /edica/ento que evite la agregacin plaquetaria o inter iera con la uncionalidad de *stas, /,ni/o durante 1> d,as antes de la prueba- Asignar cdigo 4o ingresar la in or/acin en el cdigo interno su/inistrado5 +otular los tubos con citrato de "odio 4= unidades5 a una concentracin de =-2< para el procedi/iento de agrego/etr,a ! Cito/etr,a de lu'o, para reali&ar la respectiva to/a de /uestra "e so/eter7 a desin eccin el 7rea de venopuncin)uego de colocar torniquete 4no /7s de un /inuto5 se proceder7 a la pr7ctica de venopuncin ! al co/en&ar a luir el pri/er 9ilo de sangre se retira el /is/o Sna ve& recolectada la /uestra el tubo se invertir7 seis veces suave/ente, se de'ar7 en reposo =3 /inutos ! se proceder7 a centri ugacin para posterior an7lisis, a un tie/po /7xi/o de tres 9oras para su procesa/iento-

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AGREGOMETRIA Para el procesa/iento de las respectivas /uestras utili&are/os la t*cnica de agrego/etria por /edio del Equipo Agg+A%- Este traba'a con el principio de turbidi/etr,a- )os reactivos a utili&ar son ADP ! epine rina, los cuales actuar7n co/o agonistas en la reaccin per/itiendo evaluar las di erentes /uestras a procesarTECNICA AGREGOMETRIA 1- Centri ugar las /uestras a 1333 rp/ por > /inutos para obtener P+P 4si las /uestras est7n sedi/entadas a >33 rp/ durante >\5 2- "eparar el P+P de los tres tubos con Citrato de 8a al =-2< en un tubo est*ril de pl7stico =- Centri ugar de nuevo a =>33 rp/ durante 13 /inutos para obtener PPP 4- +eali&ar la calibracin ptica despu*s de que se enciende el equipo ! este ate/perado a =?Y, con /,ni/o 2>3 ul de agua destilada >- "e e'ecuta el progra/a He/o.+A%@ 6- :r a arc9ivo ! reali&ar /anteni/iento ! a'uste 4tener en cuenta que las lecturas de las absorbancias entre canal ! canal no supere el 13< de di erencia5?- "e registran los datos arro'ados A- "e ingresa el paciente@ Datos :ngreso ! "AJE D- "e ingresa la )ista de traba'o, cdigo ! prueba 4#est ADP lote 11A3; #est EP: lote 11?35 13- :nicia la corrida@ 11- El PPP del su'eto a anali&ar se lee en todos los canales 4J+ 3-3103-15 12- P+P con i/7n servido 1=- Dispensar 2> ul de ADP 4o EP:5 en las concentraciones establecidas para este protocolo ! en el 6lti/o tubo 2>u de "" 4C18#+1) DE )A P+SE$A5

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14- P+PV 3-601-2 4si aparece una alar/a H 9a! que diluir; si aparece alar/a ) puede darse por dos casos@ +to Plq /enor de 1>3333 o %al centri ugacin ! obtencin de PPP5 1>- )ectura e interpretacin de los resultados CITOMETRIA DE FLUJO Esta t*cnica se basa en agregar anticuerpos /onoclonales con'ugados a un luorocro/o per/itiendo la identi icacin ! la nu/eracin de las poblaciones plaquetarias que expresan el ant,geno CD41 ! CD61 presentes en /uestras biolgicas 9u/anas por cito/etr,a de lu'o2=

Esta deter/inacin se basa en la capacidad de los anticuerpos /onoclonales espec, icos de unirse a plaquetas /ediante los deter/inantes antig*nicos que estos expresan- El /arca'e espec, ico de las plaquetas se reali&a incubando la /uestra con el reactivo- )as plaquetas son anali&adas por cito/etr,a de lu'oEl cit/etro de lu'o /ide la dispersin de la lu& ! la luorescencia de las c*lulasPer/ite acotar la poblacin de inter*s dentro de una ventana electrnica, de inida en un 9istogra/a que correlaciona la dispersin lateral de lu& 4Z"ide "catterZ o ""5 con la dispersin rontal de lu& 4FBorTard "catterG o B"5- )a luorescencia de las plaquetas se anali&a para distinguir los eventos con tincin positiva de los eventos no /arcados- )os resultados se expresan en porcenta'e de eventos positivos con relacin al con'unto de los eventos acotados en la seleccin electrnica por ventanasTECNICA A- %A#E+:A) 8ECE"A+:1 15 "angre anticoagulada con citrato
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25 P$" o :so loT ! "olucin de )isis =5 Anticuerpos /onoclonales CD61B:#C ! CD41PE 4$ecI/an Coulter5 45 #ubos de polipropileno 12 x ?> // >5 Cit/etro de Blu'o $- P+1#1C1)1 DE %A+CALE 15 #o/ar >3 ul de "angre total anticoagulada con citrato de 8a 25 Adicionar >ul de cada anticuerpo /onoclonal 4CD41 ! CD615 =5 :ncubar 1> /inutos a te/peratura a/biente ! en oscuridad 45 Agregar 2>3 ul de "olucin de )isis >5 :ncubar durante 13 /inutos en oscuridad 65 Agregar 2>3 ul P$" o :so loT para diluir la /uestra ?5 Al/acenar 9asta la lectura a 4]C en oscuridad A5 Adquirir las /uestras en el clit/etro de lu'o MARCADORES DE ACTIVACI#N PLA UETARIA El CD41 es la subunidad N del co/ple'o CD41/CD61 4.Pllb0llla5, un 9eterod,/ero asociado de or/a no covalente, dependiente del calcio- El CD41 es una /ol*cula de 1=> IDa que consta de 2 p*ptidos@ una cadena N de 123 IDa ! una cadena O de 2= IDa- )a cadena N ! la cadena O est7n unidas por un 6nico puente disul uro)a cadena N contiene cuatro lugares para la unin del calcio ! es entera/ente extracelular, /ientras que la cadena O presenta do/inios extracelulares, trans/e/branales ! citopl7s/icos- El CD61 es la integrina .P :::a con peso /olecular de 113 IDa, es la integrina O= la cual se expresa en plaquetas ! c*lulas endoteliales, esta asociada en or/a no covalente a la .P CD 41 2=- El co/ple'o CD41/CD61 aparece pronto en la /aduracin de los /egacariocitos- El co/ple'o CD41/CD61 activado act6a co/o receptor para el actor von Millebrand, el ibringeno soluble ! la ibronectina, ! 'uega un papel central en la activacin ! agregacin de las plaquetas- Est7 ausente, o aparece en or/a de ectuosa, en las
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plaquetas de los pacientes a ectados de tro/boastenia de .lan&/ann u otras patolog,as plaquetarias4%onoclonal %ouse Anti0Hu/an CD41, Platelet .l!coprotein llb, Clone >$12, DaIoC!to/ation Den/arI A/"- P7g- 20=5 Ant,genos plaquetarios relacionados con agregacin cuanti icables por Cito/etr,a de lu'oANTICUERPO MONOCLONAL CD41 CD61 ESTRUCTURA ANTIG"NICA .P::b .P:::a

FUNCI#N Agregacin Agregacin

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PRESUPUESTO VALOR MATERIALES P$*e&er6$ Tr$ns*orte T(%os )e M(estr$ B+o&,-+.$ Ins(;os *$r$ to;$ )e ;(estr$ Re$.t+=os C+to;etr6$ Re$.t+=os A-re-o;etr6$ A&>(+&er )e +nstr(;ento C+to;etr6$ )e F&(?o Pro.es$;+ento PF: A&>(+&er )e Instr(;ento )e Me)+.+,n A-re-o;etr6$ Tot$& 4M+&es )e Pesos5 7899!999 7899!999 7:99!999 7<89!999 7 <!999!999 7'!999!999 7'!@99!999 7'!999!999 7'<!A99!999 7<9!'89!999

RESULTADOS De acuerdo a los ob'etivos planteados en el estudio, con los cuales se busca deter/inar la prevalencia de Hiperagregabilidad plaquetaria en poblacin sana, se
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9a anali&ado una /uestra total de 2=3 su'etos, distribuidos en 1>> /u'eres 46?-4<5 ! ?> 9o/bres 4=2-6<5; con una ra&n de 2-1@1 /u'eres/9o/bres respectiva/ente- )a /uestra total ue to/ada en un intervalo de edad de 16 a =3 aCos con un pro/edio de 22-6 aCos, en individuos que cu/pl,an los criterios de inclusin de su'etos sanos establecidos por los investigadores; estos criterios se or/ularon teniendo en cuenta los datos cl,nicos ! los antecedentes personales o a/iliares de los participantes 4ausencia de antecedentes personales !/o a/iliares de diabetes, 9ipertensin arterial, alteraciones sangu,neas, 9istoria de abortos o estado de e/bara&o5 propuestos por los investigadores 4Jer anexo 15#abla 2- Brecuencia ! Porcenta'e de su'etos estudiados seg6n .*nero PORCENTAJE POR GENERO
INDIVIDUOS

MUJERES 1>>

B 6?,4

HOMBRES ?>

B =2,6

2=3

PROPORCION DE INDIVIDUOSS EGN GENERO

HOMBRE S 32%

68%

RACON %SLE+ @ H1%$+E: <!' @ '

.r7 ico 4- Proporcin de :ndividuos seg6n .*nero

Estos su'etos ueron escogidos aleatoria/ente de lugares co/o universidades ! centros de traba'o, para lo cual conta/os con la a!uda de los Decanos de las acultades ! Le es in/ediatos respectiva/ente- A los posibles su'etos incluidos en el estudio se les in or/ por /edio de una c9arla 4Conse'er,a pretest5 el ob'etivo general del estudio, sus bene icios co/o aporte a la investigacin, riesgos en la to/a de /uestra co/o des/a!o, 9e/ato/a ! dolor- )os participantes se a'ustaron a las condiciones de individuo sano; es decir, aquellos que no
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presentaron antecedentes personales ni

a/iliares, de obesidad, diabetes,

alteraciones sangu,neas, 9ipertensin; que su edad no estuviera por deba'o de los 16 aCos ni por enci/a de los =3 aCos de edad, no consu/ieran cigarrillo ni /edica/entos !a sean 9o/eop7ticos, sint*ticos o vita/inas; luego de seleccionados seg6n criterios anteriores, se les in or/ acerca de los requeri/ientos para la to/a de /uestra 4presentarse en a!uno estricto, no 9aber ingerido /edica/entos co/o@ A"P:+:8A, AlIa selt&er, "al de rutas, en cualquier presentacin, 9eparina ! de/7s que alteren la uncin plaquetaria los A d,as anteriores a la to/a de /uestra, no 9aber reali&ado e'ercicio extenuante antes de la to/a de /uestra, no presentar s,nto/as gripales co/o iebre, congestin nasal, /alestar general, etc-5, lugar, ec9a ! 9ora para la recoleccin ! se les in or/ que en el /o/ento que se obtuvieran los resultados se les entregar,a su respectivo an7lisis ! sugerencias, a vuelta de correo, v,a tele nica o a nivel personalAquellos que no cu/plieron con los requisitos establecidos se les agradeci por su colaboracin ! se descartaron d7ndoles la explicacin que para este estudio era necesario su'etos sin ning6n tipo de antecedentes)as /uestras seleccionadas ueron procesadas en una institucin privada de $ogota 0 Colo/bia en un periodo de tie/po de dos /eses por las t*cnicas de agrego/etr,a ! cito/etr,a de lu'o, cu/pliendo los est7ndares de calidad; durante la ase preanal,tica, se reali& la identi icacin del participante, se valid la in or/acin ! se procedi a obtener la /uestra; en la ase anal,tica se proces la /uestra por las dos t*cnicas para lo cual ue necesario obtener el plas/a rico en plaquetas 4P+P5 con un pro/edio de 3-6D Q/02< ! plas/a pobre en plaquetas 4PPP5 3-3?A Q/0=<- En la 6lti/a ase del control de calidad se anali& ! correlacion los datos obtenidos, as, co/o el in or/e de los resultados a cada uno de los individuos que participaron del estudioEl ingreso al /ercado de tubos pl7sticos de di erentes /arcas para la obtencin de /uestras de sangre en el laboratorio ! la o erta de los tubos que contienen citrato de sodio en concentracin de =-A< 9a ido en ascenso, por lo que se
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consider relevante reali&ar un pequeCo an7lisis a una /uestra aportada por un su'eto voluntario con las siguientes /arcas de tubo@ JACS#E"#, JACS#A:8E+ ! otro con concentracin de =-A< de/ostrando que la di erencia de los resultados con cada uno de ellos no es signi icativa, !a que los valores en porcenta'e son /u! si/ilares#abla =- Co/paracin de concentracin de Citrato de "odio ! di erentes /arcas co/erciales de tubo para to/a de /uestra

Co/o respuesta al ob'etivo general del estudio se calcul la Prevalencia que

COMPARACI#NDCONCENTRACIONES H1"0 JACS#E"# concentracin =-2 "#D0 JACS#A:8E+ concentracin =-A H1"0 JACS#E"# concentracion=,A ADP '!@ 9!< '' 3,2 3 1,A 2 2,1 3,D 3,6 1,1 41,? EPI '!' 2,A = 11 PRP PPP 3,? 3,? 3,? 3,1 3,1 3,1

<!E 1,= 3 2,>

9!@ 6,2 2,A 6,4

corresponde al 13<, la cual ue esti/ada seg6n los 9alla&gos de los datos con ir/atorios 4? individuos5, recon ir/acin de 9iperagregabilidad tipo :: 4> individuos5 9iperagregabilidad tipo : 41= individuos5 sobre la poblacin total evaluada- Estas con ir/aciones se obtuvieron entre las 4 a 6 se/anas siguientes a la pri/era to/a de /uestra validando ? de los ?2 casos sospec9osos8] de casos con 9iperagregabilidad plaquetaria #otal de poblacin

PV

PV

2> 2=3

V 3-13 V 13-3<

A continuacin se sustenta esta prevalencia con los 9alla&gos encontrados en las curvas de 9iperagregabilidad

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De la poblacin total que corresponde a 2=3 individuos el =1-2< 4?2 individuos5 9iperagregaron, consider7ndolos casos positivos sospec9osos teniendo en cuenta que son su'etos sanos; ! el 6A-?< 41>A individuos5 negativos- De ellos el 6A-?< eran /u'eres ! =1< 9o/bres, con una ra&n por g*nero de 2@1 /u'er/9o/bre respectiva/ente#abla 4- Porcenta'e de participantes que presentan o no 9,peragregacin B DE SUJETOS UE PRESENTAN HIPERAGREGACION B DE SUJETOS UE NO PRESENTAN HIPERAGREGACION

E'!<
?2

<
"SLE#1"

@F!G
1>A

<
"SLE#1"

.r7 ico >- Porcenta'e de casos no con ir/ados que presentan o no 9iperagregacin

)as concentraciones utili&adas por agonista ! los valores de re erencia para su clasi icacin se /uestran en la siguiente tabla- Per/itiendo la categori&acin de los individuos en los tipos de Hiperagregabilidad establecido para cada uno de ellos)os 4:-:: ^ :::5, se co/par los resultados ueron@ para resultados obtenidos con cada concentracin de agonista ! el valor de re erencia Hiperagregabilidad #ipo : 1= su'etos 4>-6<5, Hiperagregabilidad #ipo :: >A su'etos 42>-1<5, Hiperagregabilidad #ipo ::: 1 su'eto 43-4<5- Conclu!endo que se presenta /a!or 9iperagregabilidad tipo :: seguida de la : ! la :::- 4#abla 6538

#abla >@ Concentraciones de los agonistas ! valores de re erencia-

Re$.t+=o
EP8 11,3 _ 1306 EP8 1,1 _ 1306 EP8 3,6 _ 1306 ADP 2,= _ 1306 ADP 1,2_ 1306 ADP 3,6_ 1306 u%//l u%//l u%//l u%//l u%//l u%//l

V$&or )e re1eren.+$ 4B5

=D0A?< 1>0>>< D0=> < 2A0?>< 1>0>1< 130=6 <

#abla 6- Porcenta'e de Agregacin por tipo de 9iperagregabilidad plaquetaria B SUJETOS CON HIPERAGREGABILIDAD TIPO I B SUJETOS CON HIPERAGREGABILIDAD TIPO II B SUJETOS CON HIPERAGREGABILIDAD TIPO III >,6
1= su'etos

<

2>,1
>A su'etos

<

3,4
1 su'etos

<

El an7lisis reali&ado una ve& veri icado el nu/ero de casos positivos

ue el de

con ir/ar a los ?2 con una nueva curva de agregacin, por tal /otivo se procedi a citarlos pero no ue posible ubicarlos a todos debido a que algunos de ellos se re9usaron por@ poca disponibilidad de tie/po, o porque los n6/eros tele nicos no coincid,an con los escritos en el instructivo- Despu*s de /6ltiples intentos se con ir/aron 2A 41A /u'eres, 13 9o/bres5; de *stos 426 eran tipo :: ! 2 tipo :5 con los resultados de las nuevas curvas dieron nueva/ente positivos ? 4dos tipo : ! > tipo ::5- En conclusin los tipo : siguieron dando positivos ! de los 26 tipo :: solo > dieron positivos39

#abla ?- 8u/ero de individuos anali&ados ! con ir/ados por agrego/etria ! clasi icados seg6n tipo de 9iperagregabilidadTOTAL POBLACION 2=3 SOSPECHOSOS ?2 CONFIRMACION 2A 2 su'etos #:P1 : 4?,1<5 26 su'etos #:P1 :: 4D2,A5 TOTAL CONFIRMADO POSITIVOS A 2 su'etos #:P1 : 42><5 6 su'etos #:P1 :: 4?><5

A los oc9o pacientes con ir/ados se les reali&o actor 4 plaquetario para con ir/ar la 9iperagregabilidad utili&ando co/o controles a de/7s de los tra,dos por el Iit dos /uestras de individuos nor/alesEn cuanto a cito/etr,a de lu'o se procesaron 4A6 /uestras5 con los siguientes /arcadores 4``-5 que per/iten deter/inar activacin ! sobreexpresin de plaquetas; 44 ten,an curva de 9iperagregabilidad negativa para establecer con quienes presentaron positiva la curva de agregacin; la ellos el punto de corte lo que per/itir7 establecer si existe o no una di erencia con los 42 procesados 4Jer anexo =5expresin de los receptores /7s elevada corresponde a CD61 seguido por CD41-

#abla A- Porcenta'e de :ndividuos Anali&ados que presentaron agregacin, correlacin con expresin de /arcadores de cito/etr,a de lu'o ! estableci/iento del punto de corte para poblacin sana-

40

B PROMEDIO NO AGREGO PE+"18A" >1,23<

44

"SLE#1" "1%E#:D1" A E"#SD:1 F@ DE CD41 ( "SLE#1" CD61 P1+ =?,4< C:#1%E#+:A DE B)SL1

CD61 4=2,15 CD41 42=,A5 CD61/41 44,45

SI AGREGO PE+"18A" 4A,A3<

42

BVALOR MINIMO CD61 43,35 CD41 4=,6=5 CD61/41 43,35

B VALOR MA3IMO CD61 4A?,6>5 CD41 44=,=25 CD61/41 41>,6A5

41

DISCUSION )a 9iperagregabilidad plaquetaria es un evento que repercute en la salud de un individuo ! que puede desencadenar una serie de patolog,as tro/boe/blicas arteriales ! venosas- )a prevalencia en poblacin sana 9asta el /o/ento en Colo/bia no 9a sido establecida; este es el pri/er estudio que se reali&a a nivel nacional e internacional ! su relevancia esta dada por el aporte al c7lculo de la prevalencia en poblacin sana, el poder i'ar el punto de corte por cito/etr,a de lu'o 4CD41 K CD61 /arcadores de activacin ! sobreexpresin5 ! poder deter/inar si existe o no correlacin entre las t*cnicas de agregacin plaquetaria ! cito/etr,aEl ob'etivo principal de este estudio ue deter/inar la prevalencia de este evento en poblacin sin antecedentes personales !/o a/iliares, observ7ndose que por cada 133 9abitantes 13 presentan 9iperagregabilidad plaquetaria, siendo esta una tasa signi icativa en la poblacin en general, in iriendo con esto que el riesgo a padecer co/plicaciones tro/boe/blicas es alto, por lo cual se reco/ienda reali&ar estudios que pro undicen ! est*n en ocados a dar respuesta a los riesgos asociados con esta patolog,a, su trata/iento ! prevencin en estos su'etos )as t*cnicas utili&adas para el procesa/iento de las /uestras son gold standar en diagnostico, trata/iento ! segui/iento de pacientes en riesgo- )a agrego/etria es una de las t*cnicas que se utili&a en el diagnostico de patolog,as relacionadas con la 9,peragregacin plaquetaria; por otro lado, la cito/etr,a de lu'o es una t*cnica reciente en el estudio de activacin plaquetaria, que en este estudio evidencia una sobrexpresin de los /arcadores 4CD410 CD615 en los su'etos que presentaban 9iperagregabilidad en las curvas de agregacin"e co/prob que la concentracin de citrato de sodio no altera el resultado en agrego/etr,a, por lo tanto puede utili&arse cualquiera de estos teniendo en cuenta las garant,as de calidad, /arca ! concentracin42

En la experiencia de 13 aCos en los an7lisis a los pacientes que se les estudio 9iperagregabilidad plaquetaria se observa que la /a!or recuencia es de #ipo ::, ! esta tendencia continua present7ndose en su'etos sanos; las /enos co/unes ! /7s di ,ciles de reali&ar tro/bopro ilaxis son la 9iperagregabilidad tipo : ! :::- As, /is/o se puede evidenciar que de los ?2 casos positivos >D ueron tipo :: con ir/ados 26 con nueva curva, de los cuales dieron > positivos, in iriendo que si se 9ubieran con ir/ado los == restantes se 9ubiera encontrado aproxi/ada/ente > positivos, ! replaneando el c7lculo de la prevalencia del 13< esta podr,a alcan&ar el 1<De la poblacin de positivos sospec9osos se puede deducir que la cantidad de positivos con ir/ados es poca en co/paracin con el n6/ero de individuos positivos sospec9osos, esto pudo darse porque en el /o/ento de la to/a de /uestra el paciente pudo presentar 9iperagregabilidad isiolgica por actores co/o estr*s, ansiedad, agitacin, consu/o de alg6n tipo de ali/ento previo a la to/a de /uestra sin /encionarlo o que estuviera en el periodo de incubacin de un tipo de in eccin sin presentar s,nto/as en ese /o/entoCuando un paciente presente curva de agregacin positiva 4con ir/ada5, antecedentes personales !/o a/iliares ! diagnostico cl,nico que concuerde con la de inicin de caso, se diagnostica con ",ndro/e de plaqueta pega'osa ! se debe so/eter a trata/iento con antiagregantes plaquetarios, teniendo en cuenta la consideracin anterior aquellos pacientes que sola/ente presenten curva de agregacin positiva con ir/ada, sobreexpresin de CD41 K CD61 ! PB4 /a!or de 13 ng//l sin antecedentes se podr,a sugerir una pro ilaxis pri/aria con el in de atenuar el riesgo a uturo de desarrollar una co/plicacin- #odos los participantes recibieron la conse'er,a post test ! sus resultados-

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CONCLUSIONES Dando cu/pli/iento al principal ob'etivo planteado en esta investigacin original ! en consideracin a que ning6n estudio en el /undo 9a planteado la pregunta sobre la prevalencia de 9iperagregabilidad plaquetaria en poblacin sana, se vio la necesidad de ser pioneros en este te/a ! reali&ar este estudio con individuos colo/bianos ba'o las condiciones planteadas en este pro!ecto, conclu!*ndose que@ Por cada 133 9abitantes sanos 13 presentan riesgo de 9iperagregar; por esto es i/portante conocer los actores que desencadenan esta agregacin en la poblacin sin antecedentes"e observ que la prevalencia de 9iperagregabilidad plaquetaria es /a!or en /u'eres que en 9o/bres, una de las ra&ones que 'usti icar,a este 9ec9o es la presencia de una elevada carga 9or/onal en el g*nero e/enino, entre otros actores, aclarando que en este estudio la poblacin anali&ada seg6n genero ue 2@1 /u'er/9o/bre respectiva/enteAl anali&ar el co/porta/iento de los dos agonistas, la epine rina tiende a inducir una agregacin /7s alta con respecto al ADP, de/ostrando su elevada sensibilidad- El tipo de Hiperagregabilidad predo/inante corresponde al #ipo ::-

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RECOMENDACIONES

Sn uturo estudio podr,a en ocarse en el an7lisis del poli/or is/o gen*tico responsable de este evento to/ando un grupo de pacientes a los que se les realice si/ult7nea/ente curva de agregacin plaquetaria, cito/etr,a de lu'o, PB4 ! poli/or is/o, que aporte al avance de la b6squeda de actores 9ereditarios i/plicados en el desarrollo de esta patolog,a-

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