Facultad de Enfermera Carrera de Enfermera

Profesores:

Pablo Agusto Urquieta Marco Len Villalobos

Laboratorio Fisiologa Sistema Digestivo - Accin enzimtica

Una de las funciones fundamentales del aparto digestivo es transformar los alimentos ingeridos en estructuras sencillas capaces de ser absorbidas a nivel intestinal. La digestin de carbohidratos ingeridos (como es el caso del almidn comien!a en la boca a trav"s de la ptialina. #sta en!ima es una $%amilasa que hidroli!a enlaces $(&'( internos' pero no los $(&') pr*imos a las ramificaciones. Los productos de esta digestin en la boca son maltosa e isomaltosa + otros pol,meros que contienen de - a . mol"culas de glucosa. Aunque el alimento permanece en la boca un corto per,odo de tiempo' la accin de la amilasa salivar contin/a hasta que el p0 1cido del contenido estomacal la inactiva' de manera que hasta ese momento la en!ima hidroli!a de un -2 a un (23 de los almidones de la dieta. A nivel intestinal act/a otra $%amilasa de origen pancre1tico + con una actividad seme4ante a la salival' rindiendo productos de degradacin similares. #stos productos sufren finalmente la accin de otras carbohidrolasas (maltasa' lactasa' isomaltasa como glucosa o maltosa. #l almidn es el polisac1rido de reserva m1s abundante en los vegetales. #st1 formado por $% amilosa (lineal de unas 622 unidades de 7%glucosa unidas por enlaces $%(&'( glucos,dicos + por amilopectina (lineal de glucosa con enlaces $%(&'( + con ramificaciones mediante enlaces $%(&') % glucos,dicos . La $%amilosa en agua presenta una ordenacin espiral caracter,stica' con ) 8 residuos de glucosa por vuelta. #n esta h"lice los grupos hidro*ilos quedan hacia fuera' mientras que en el interior se disponen los grupos hidrofbicos. #n este interior es donde se inclu+e el +odo' formando un comple4o de intenso color a!ul que permite la identificacin positiva de tra!as de almidn. La temperatura + el p0 son dos factores que desempe9an un papel clave en la eficacia de las en!imas digestivas. Un aumento en la temperatura puede hacer que una reaccin se acelere' +a que las mol"culas se muevan m1s r1pidamente + entonces se incrementa el contacto con la en!ima: sin embargo' una temperatura demasiado alta alterar1 las uniones moleculares que estabili!an la configuracin de la en!ima' causando su desnaturali!acion (es decir' e*perimenta un cambio estructural que impide su funcin . Adem1s' cada en!ima tiene un p0 ptimo en el cual es m1s activa. 7entro del rango de p0 ptimo' la en!ima funcionar1 seg/n lo esperado: m1s all1 de este p0' la en!ima no tendr1 efecto. liberando los monosac1ridos que posteriormente son absorbidos. La prueba de 5enedict detecta la presencia de a!/cares tales

Actividad &.

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Amilasa salival + almidn La digestin del almidn comien!a en la boca con la accin de la amilasa salival' que es segregada por las gl1ndulas salivales. La amilasa salival rompe el almidn en maltosa' un disac1rido formado por dos mol"culas de glucosa. As,' la presencia de maltosa en una muestra e*perimental indicar,a que se ha producido la digestin del almidn. ;5<#=>V; Probar el efecto de la amilasa sobre el almidn' determinar el p0 ptimo al que act/a la amilasa + observar los efectos de la temperatura sobre la actividad en!im1tica. #n base al tiempo + la concentracin de almidos + la dilusin empleada' determinar cuantitativamente la concentracin amilasa salival (ptialina presente en la muestra donada por el compa9ero.. Muestra: reunir &mL de saliva de alg/n voluntario 7ilucin de amilasa: ?e toma & ml de saliva de la muestra del tubo de ensa+o + se lo dilu+ con . ml de agua destilada' me!clando por inversin para obtener una dilucin &@&2. Luego' tomar 6 ml de la dilusin anterior + diluirla en A mL de agua destilada de forma de lograr una concentracin de en!ima de &@B2 me!clando por inversin. Cinalmente volver a tomar &mL de la dilusin &@&2 + diluirla en .mL de agua destilada para la concentracin de &@&22 . ?e debe evitar que la solucin adquiera energ,a cin"tica + se produ!ca la desnaturali!acin de la en!ima de nuestro inter"s. Luego se debe colocar en hielo' por la misma ra!n antes e*puesta. Actividad Prctica Preparar un tubo con Bml de agua destilada + una gota de lugol ' a9adir seis gotas de almidn al &3 con pipeta Pasteur (tubo 2 Dqu" puede observarE 7e acuerdo a la indicacin del docente' utilice solo & de las dislusiones reali!adas para reali!ar las siguiente prueba: =iempo de referencia: =iempo en que la en!ima se demora en digerir el almidon. ?e a9ade &ml de amilasa en la dilusin asignada en dos set de tubos con tres p0 diferentes. Para preparar estos tubos se utili!ara 0cl + Fa;0 para a4ustar el p0 a B.2' 8.2 + &2. Gada tubo de prueba debe contener 8 mL de agua destila al momento de a4ustar el p0. #stos set de tubos se utili!aran en las pruebas a temperatura ambiente + a -8HG. (Para evitar errores en el procedimiento' se sugiere traba4ar una e*periencia a la ve! en lugar de todas simultaneamente

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a =ubos a temperatura ambiente: agregar die! gotas de almidn al &3 a cada tubo e incubar por -2 segundos' posteriormente' traspasar & ml del tubo a otro tubo de ensa+o con &ml agua destilada + lugol (tubos de revelado ' repetir cada -2 segundos' hasta observar la ausencia de almidon en el revelado. Gronometrar el tiempo desde la adicin de las gotas de almidon hasta la reaccin acrom1tica' decir sin color (6%A min . b =ubos a -8IG : colocar previamente los tubos por B minutos en el ba9o termoregulado a -8HG' luego repetir el procedimeito reali!ado a temperatura ambiente. Actividad 6: Jeccin de 5enedict ;b4etivo: ;bservar si ocurrio digestin en los tubos de ensa+o con almidon + amilasa.

A9adir gotas del reactivo de 5enedict a los tubo de ensa+o que contiene la me!cla incubada de almidon con amilasa + colocarlos a hervir en un baso presipitado con agua. #*amina los cambios de color de los tubos. Un color verde' naran4a o ro4i!o indican la presencia de maltosa' considerando positivo el resultado de la prueba de 5enedict. Un color a!ul indica que no ha+ maltosa + el resultado de la prueba de 5enedict se considera negativo. =areas &.% Gompletar los resultados en la siguiente =abla:

6.% Jesponda las siguientes preguntas: DGu1l es el p0 ptimo para la actividad de la amilasaE

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DLa amilasa act/a a p0 diferentes al p0 ptimoE DGu1l es el producto final de la digestin del almidnE D#n qu" tubos detectaste la presencia de maltosa al final del e*perimentoE DPor qu" la maltosa no estuvo presente en los otros tubosE La amilasa salival ser,a desactivada casi por completo en el estmago. ?ugiere una ra!n del porqu"' basada en lo que has aprendido en esta actividad.