Universidad Nacional Autnoma de Mxico. Facultad de Qumica.

Qumica Orgnica IV. Buitron Cabrera Frida. Clave: 2

Identificacin de Carbohidratos.
Objetivo: Identificar distintos carbohidratos mediante reacciones de hidrlisis y reduccin, apreciar la actividad ptica de dichos azcares. Introduccin: Los carbohidratos son los compuestos ms abundantes de la naturaleza y algunos de los ms importantes, constituyen las paredes de celulosa vegetales, el cuerpo de muchos insectos y adems son la fuente de energa para todos los seres vivos. El trmino carbohidrato se debe a que casi todos los azcares tienen la forma Cn(H2O)m. Los azcares ms simples, llamados monosacridos, son carbohidratos que no pueden hidrolizarse a azcares ms simples, estos pueden contienen un grupo cetona, en cuyo caso son llamados cetosas, o aldehdo llamados aldosas. Un polisacrido, tal como su nombre lo indica, es la unin de varios monosacridos, y es susceptible de ser hidrolizado para formar azcares ms simples, es decir pueden degradarse, segn la convencin de Fischer-Rossanov, se designan con la letra D a los azucares que se degradan a (+)-gliceraldehdo y con L a los que se degradan a (-)-gliceraldehdo. Reacciones de identificacin de carbohidratos: Prueba de Benedict Identifica azucares reductores, es decir, aquellos con un grupo aldehdo o cetnico libre. Cu + + OH - Cu(OH) (precipitado amarillo) El hidrxido pierde agua 2Cu(OH) Cu2O (precipitado rojo ladrillo) + H2O La aparicin de un precipitado amarillo, anaranjado, o rojo ladrillo evidencia la presencia de un azcar reductor. Positivo para glucosa, nicamente. Prueba de Molisch Positivo para todo azcar, an cuando no sea reductor. Las pentosas y hexosas en presencia de cidos y calor sufren deshidrataciones de las cuales se generan furfurales (derivados de pentosas), o hidroximetilfurfural (derivados de hexosas) los cuales reaccionan con compuestos aromticos dando lugar a compuestos coloridos, estas pruebas son

especficas para monosacridos, pero debido a la hidrlisis cida de oligo y polisacridos, estos ltimos tambin dan positivo a la prueba.

Prueba de Fehling

Para la determinacin de azcares reductores. El reactivo de Fehling consiste en dos soluciones acuosas: Sulfato cprico cristalizado, 35 g; agua destilada, hasta 1.000 ml. Sal de Seignette (tartrato mixto de potasio y sodio), 173 g; solucin de hidrxido de sodio al 40%, 3 g; agua, hasta 500 ml. Ambas se guardan separadas hasta el momento de su uso para evitar la precipitacin del hidrxido de cobre (II).

Formacin de Osazonas. La reaccin puede ser usada para identificar monosacridos, la glucosa reacciona con la fenilhidrazina para producir glucosafenilhidrazona por eliminacin de una molcula de agua del grupo funcional. El siguiente paso involucra la reaccin de un mol de glucosafenilhidrazina con dos moles de fenilhidrazina . La fenilhidrazina est involucrada en la oxidacin del carbono alfa a un grupo carbonilo, y la segunda fenilhidracina involucra la remocin de una molcula de agua con el grupo formilo del carbono oxidado, y formando el enlace carbono-nitrgeno. El carbono alfa es atacado aqu porque es ms reactivo que los otros. Son compuestos altamente coloreados y cristalinos, y pueden ser detectados fcilmente.

D-glucosa reacciona con fenilhidrazina para producir la ozasona de glucosa.

Prueba de yodo-yoduro para deteccin de almidn (lugol) Si disolvemos yodo molecular, in yoduro y amilasa en agua, obtenemos un producto de intenso color azul oscuro. La prueba se basa en una reaccin fsica y no qumica, en la cual el almidn reacciona con el yodo para formar un complejo de color azul intenso. Bajo las mismas condiciones, el glucgeno da una coloracin caf.

Resultados Algunas pruebas se realizaron con todos los azcares mientras otras slo con alguno, esto debido a que se saba de antemano que algunas pruebas daran positivo nicamente a determinados azcares.

Tabla 1. Carcter de las pruebas de identificacin

Prueba Molisch Benedict ozasonas arabinosa maltosa sacarosa fructosa glucosa

X X

Tabla 2. Apreciacin del cambio de tonalidad de cada prueba. Prueba Molisch Benedict Ozasonas arabinosa Precipitado morado Naranja-rojizo NR-P maltosa Precipitado morado Naranja-rojizo amarillo sacarosa Precipitado morado Sin cambio NR-N glucosa Precipitado morado Naranjarojizo NR-P fructosa Precipitado morado Naranjarojizo NR-P

NR-P: la prueba no se realiz, pero se sabe que habra dado positivo. NR-N: la prueba no se realiz, pero se sabe que habra dado negativo.

Prueba de Molisch, Benedict y ozasona de maltosa.

Anlisis de Resultados. Estas pruebas podran no dar positivo a todas los azucares aqu indicados, por ejemplo Benedict es positivo slo para azucares reductores, los cuales contienen un carbonilo, pero al hidrolizarse los dems azucares y separarse en sacridos ms simples, la reaccin se lleva a cabo, incluso la sacarosa al separarse en fructosa y glucosa puede dar positivo para Benedict. Los azcares reductores, son aquellos que poseen en su estructura un grupo aldehdo libre o un grupo cetnico, son fcilmente transformables en n-dioles al calentarlos en soluciones alcalinas; dichos enedioles son altamente reactivos y se oxidan fcilmente en presencia de oxgeno u otros agentes oxidantes, por lo tanto, los azcares en solucin alcalina rpidamente reducen iones oxidantes como Ag+, Hg+, Cu2+ y Fe(CN)63- y los azcares se oxidan formando mezclas complejas de cidos. Esta accin reductora es la que se utiliza tanto en las determinaciones cualitativas como cuantitativas.

Al hidrolizarse la sacarosa (+) con cido acuoso diluido, se obtiene cantidades iguales de D (+)glucosa y D(-)fructosa, esta hidrlisis implica un cambio en el signo de la rotacin de positivo a negativo, la mezcla levgira de fructosa y glucosa es llamada azcar invertido. Al efectuar la prueba de Benedict en la sacarosa se espera no observar resultados positivos, pero al hacer reaccionar la sacarosa con HCl y calor y posteriormente volver a realizar Benedict, se obtendrn resultados positivos, esto debido a que despus de hidrolizar la sacarosa se han obtenido azucares reductores: glucosa y fructosa. Lo mismo ocurre con el almidn, el cual puede ser detectado con una solucin de yodo-yoduro, este dar positivo a Benedict pero al hidrolizarse, tambin dar positivo, la prueba del yodoyoduro puede efectuarse varias veces con intervalos de tiempo definidos para observar la cintica de formacin del almidn. Conclusiones Se efectuaron eficazmente las pruebas de identificacin de carbohidratos, mediante la hidrlisis de la sacarosa se constat la conformacin de un polisacrido, pues debido a la accin del medio cido y calor, pudo disociarse en azucares ms simples, se observ la actividad ptica de algunos azucares en el polarmetro.

Referencias Bibliogrficas: Carbohydrate Chemistry, R.J.Ferrier, The Royal Society of Chemistry, 31 vol., Cambridge,UK. pp:89-94.
http://www.uco.es/dptos/bioquimica-biolmol/pdfs/20%20REACCIONES%20COLOREAD AS%20DE%20AZ%C3%9ACARES.pdf http://www.medvet.una.ac.cr/carrera/mva5 05_Practica2.pdf

Anexo. Reacciones