Chlamydia Trachomatis

HIGA Pte Pern Avellaneda

Sergio Javier Cutufia R 3 Laura Isabel Bortolin R 2

Chlamydia Trachomatis - Descripcin

Microorganismo intracelular obligado que infecta principalmente las mucosas de cerviz, recto, garganta, uretra y conjuntiva, transmitidas por medio de secreciones infectadas. Es el patgeno de transmisin sexual ms comun y difundido en pases desarrollados y en desarrollo; y es la causa bacteriana ms frecuente de dichas enfermedades.

Taxonomia
NOMBRE ANTERIOR NOMBRE PROPUESTO

Chlamydia trachomatis
Biovar tracoma Biovar Linfogranuloma venreo Biovar Mopn (neumona murina) Cepa S45 de cerdos

Chlamydia trachomatis
Biovar tracoma Biovar Linfogranuloma venreo Chlamydia muridarum Chlamydia Suis

Chlamydia pecorum Chlamydia pneumoniae

Chlamydophila pecorum Chlamydophila pneumoniae Biovar TWAR Biovar Koala Biovar Equino Chlamydophila psittaci Chlamydophila felis Chlamydophila abortus Chlamydophila caviae
Simkania negevensis, Parachlamydia acanthamoebae, Neochlamydia hartmannellae

Chlamydia psittaci (cepas aviares) Chlamydia psittaci (cepas felinas) Chlamydia psittaci (cepas de abortos) Chlamydia psittaci (cepa GPIC) Otros

Ciclo de Vida: Formas de desarrollo

Ciclo bifsico: Existen distintas formas de desarrollo:
Cuerpo Elemental (CE) Infectivo No se replica Metablicamente inactivos Tamao 0,2-0,3 micrones La rigidez de su membrana permite la sobrevida fuera de la clula
Existe 3ra Forma, Persistente (In vitro): Cuerpos Reticulares anormales.

Cuerpo Reticulado (CR) No Infectivo Replicacin por fisin binaria Metablicamente activos 0,5-1,6 micrones

Ciclo de Vida
1) Unin del Cuerpo Elemental a la clula husped promoviendo la entrada en la vescula fagoctica de la clula del husped. 2) El CE sufre una reorganizacin morfolgica para dar un cuerpo reticular. Duracin 8-10hs 3) Replicacin del CR dentro del endosoma en crecimiento que se hace visible como una microcolonia (inclusin clamidial) 4) Luego de un perodo de crecimiento y replicacin los CR se reorganizan en CE. 5) Lisis celular o exocitosis. Duracin total del ciclo 48-72hs, segn la cepa, huesped y condiciones ambientales.

Ciclo de Vida
Entrada dentro de vacuola

Cuerpo Elemental

Ingreso

Diferenciacion a cuerpo reticulado (8 a 10 hs)

Nucleo Clula Husped

Vacuola Cuerpo Reticular

Replicacion por fisin binaria

1 Ciclo = 48 - 72 hs

Liberacin

Conversion de cuerpos reticulados en cuerpos elementales

Forma Persistente

Chlamydia Trachomatis: Serovares y asociacin con enfermedad

Serovares A, B, Ba y C D, Da, E, F, G, H, I, Ia, J, Ja, K Enfermedad Humana Tracoma Ocular Enfermedad Oculogenital Diseminacin Patologia Mano-Ojo, Conjuntivitis y escarificacin fomites y moscas conjuntival y de la cornea. Cervicitis, uretritis, endometritis, enfermedad inflamatoria plvica, Sexual y perinatal infertilidad tubal, embarazo ectopico, conjuntivitis neonatal y pneumona infantil Invasin de nodos linfticos y Sexual Submucosa, con granulomas necrticos y fibrosis

Ll, L2 y L3

Limfogranuloma venereo

Chlamydia Trachomatis - Clnica:

Las manifestaciones clnicas son determinadas por el mecanismo de accin de la cepa infectante. Clasificacin epidemiolgica: A) Tracoma B) Enfermedades de transmisin sexual. C) Infecciones perinatales oculares y del tracto respiratorio.

A) TRACOMA
Importante causa de ceguera en reas de condiciones sanitarias precarias y de escasa higiene personal. Transmisin entre nios por medio de DEDOS, FOMITES y MOSCAS. Comnmente asociado a los serovares A, B y C. Caracterizado por queratoconjuntivitis folicular crnica, cicatrices conjuntivales y panus (invasin Tardia de vasos Temprana Intermedia sanguneos en la crnea)

TRACOMA Cronologa de la Enfermedad

Inicio brusco con inflamacin de conjuntivas. Exudados y formacin de folculos blandos o necrticos debajo de la superficie conjuntival. Cicatrizacin espontnea completa en ausencia de reinfeccin. Infeccin bacteriana > prob. cicatrices Infeccin repetida: Progreso a PANUS. PANUS + cicatrices conjuntivales + infeccin bacteriana Ceguera. En zonas endmicas la conjuntivitis aguda es rara en adultos o lactantes. Alta cronicidad.

B) ENFERMEDADES DE TRANSMISIN SEXUAL

C. trachomatis es la causa ms frecuente de ETS en varios pases. Factores de riesgo: Edad menor a 25 aos. Iniciacin sexual temprana. Mltiples parejas. Raza negra. Antecedentes de ETS. Ectopa cervical. Causa el 40-60%, de las uretritis no gonocccicas. Origen del 70-90% infecciones endocervicales en mujeres asintomticas, pudiendo persistir de meses a aos. La bsqueda de Chlamydia, Ureaplasma y micoplasma muchas veces se inicia por Infertilidad causada por complicaciones de ETS

B1) Linfogranuloma Venreo:

Definicin: ETS endmica en frica, India, Sur Este Asitico, Amrica del Sur y Caribe. Es 3 veces ms frecuente en hombre que en mujeres y en personas de bajos recursos econmicos o homosexuales. Relacionado con serotipos: L1; L2 ; L3

Linfogran. Venreo - Etapas de la enfermedad

Fase Primaria:
Aparece vescula indolora, de pequeo tamao, en genitales externos entre los 3 das a 3 semanas del contagio, que luego desaparece sin dejar cicatriz. NO hay linfoadenopata. Puede aparecer infeccin anorectal en vez de la infeccin genital. La infeccin intrauretral produce URETRITIS SINTOMTICA

Linfogran. Venreo - Etapas de la enfermedad

Fase Secundaria: Inicia das a semanas despus de la fase primaria. Linfoadenopata inguinal dolorosa y unilateral en 2/3 de casos. Otros sntomas:
Fiebre. Escalofros. Anorexia Cefalea Mialgias Artralgias

Linfogran. Venreo - Etapas de la enfermedad

Fase Secundaria (cont.):
Laboratorio: Leucocitosis Eritrosedimentacin aumentada Prueba de Funcin Heptica Normal. Examen Histolgico: Ganglios linfticos con granulomas que rodean abcesos estrellados. Los abcesos sufren coalescencia y necrosis y, eventualmente, los ganglios supuran por mltiples fstulas, que cicatrizan en meses persistiendo las cicatrices y masas.

Linfogran. Venreo - Etapas de la enfermedad

Fase Terciaria:
Progresan aproximadamente 5% de los hombres con LGV genital. Como resultado de la fibrosis y el drenaje linftico anormal de la fase secundaria se produce estrechamiento uretral o rectal e induracin y edema del sistema linftico de los genitales. Puede existir compromiso ulcerativo o infiltrante crnico y progresivo en pene o vulva y uretra con fstulas, lceras y estenosis uretral.

B2) Cepas no LGV:

Son la infecciones por Chlamydia Trachomatis ms comnes en adultos en pases desarrollados Producido por serovares: D, E, F, G, H, I, J, K

Hombres
URETRITIS EPIDIMITIS PROCTITIS.

Mujeres
URETRITIS CERVICITIS ENDOMETRITIS SALPINGINITIS PROCTITIS EPI

Cepas no LGV - Signos

1/3 de pacientes SIN signos de infeccin en la exploracin fsica Signos ms comunes: exudado mucopurulento en el endocervix. Ectopa cervical e hipertrofia. En tracto genital inferior y uretral aumento del flujo vaginal disuria sangrado post-coital En tracto genital superior: sangrado irregular molestias abdominales o plvicas. La infeccin del tracto genital superior es generalmente silente.

Cepas no LGV - Complicaciones

Infeccin NO tratada: Graves complicaciones reproductivas
Infertilidad Embarazos ectpicos Dolor plvico crnico Enfermedad Plvica Inflamatoria

Efectos adversos durante la gestacin:

Parto prematuro. Ruptura prematura de membrana Bajo peso al nacer Muerte neonatal Endometritis post-parto Transmiticin durante el parto al recin nacido (50-75%)

Cepas no LGV Complicaciones (cont)

En el hombre:
Manifestacin ms frecuente es URETRITIS.
Perodo de incubacin de 7 a 21 das.

Sntomas
Disuria Exudado uretral mucopurulento Prurito uretral Epidimitis Proctitis aguda Conjuntivitis Sme de Reiter (uretritis-conjuntivitis-artritis-lesiones mucocutneas) Artritis reactiva

Secuelas
Infertilidad Proctatitis crnica Estenosis uretral

C ) Enfermedad Perinatal
C1) Conjuntivitis de Infeccin perinatal
Adquirido en canal de parto.
20- 50 % de nios nacidos de madres infectadas tendran conjuntivitis neonatal.

Incubacin de 5 a 12 das (incluso hasta 6 semanas).

Manifestaciones Clnicas:
Similares a las del adulto. Exudados progresivamente ms purulentos. Enrojecimiento y engrosamiento conjuntival. Folculos conjuntivales aparecen en la semana 3 a 6, pudiendo progresar a lesiones corneales o invasin de vasos sanguneos (PANUS). Resolucin en 3 a 12 meses, pero puede persistir subclnicamente y producir lesiones corneales. Asociado a la conjuntivitis puede haber: rinitis purulenta y, en nias, vulvovaginitis.

Tratamiento ERITROMICINA (10 das)

C2) Neumona del lactante

En el 10 al 20% de los nios de madre infectadas. Pueden presentarse entre los 4 a 17 das de nacido. 50% de los nios afectados padecieron conjuntivitis. + del 50% de nios afectados sufren alteraciones en el odo medio.

Manifestaciones Clnicas
Obstruccin nasal Mucosidad abundante Taquipnea y tos paroxstica Ausencia de fiebre (CARACTERSTICO) Infiltrados intersticiales bilaterales en rayos X En nios ms pequeos: Episodios de apnea e insuficiencia respiratoria. En algunos casos el cuadro es ms leve pero ms persistente (a nivel nasofarngeo, aparato urogenital o recto).

Tratamiento
Azitromicina Doxyciclina Eritromicina Ofloxacina 1 dosis 2 dosis/da 7 dias

Azitromicina se recomienda para pacientes con dificultades en el seguimiento para cumplir el tratamiento. Todas las parejas sexuales dentro de los ltimos 2 meses deben ser testeados y tratados. Abstencin sexual hasta 7 dias del tratamiento y hasta los 7 dias de tratamiento de todas las parejas sexuales (Reinfeccin). La reinfeccin es comn, por lo que debe re-testearse a los 3 a 4 meses postratamiento

Diagnstico - Muestras
Enfermedad Cervicitis Sndrome Uretral agudo en mujeres Endometritis Aguda Salpingitis Aguda Uretritis no gonococcica en Hombres Conjuntivitis de Inclusin Tracoma LGV Muestra de eleccin Hisopado cervical Orina (por PCR) Hisopado uretral Orina (por PCR) Aspirado Endometrial Biopsia de Trompa de Falopio Hisopado uretral Orina (por PCR) Hisopado o raspados conjuntivales Aspirado Ndulo Linftico Suero Biopsia de lesin ulcerosa Suero Aspirado traqueobronquial

Neumonitis (nios)

Los especimenes deben recogerse directamente de la superficie afectada y contener una muestra adecuada y representativa de las clulas epiteliales. Los hisopos de Dacron o Rayon sin mango de madera, ya que es txica para la bacteria.

Diagnstico Mtodos
A) Cultivo celular B) Mtodos no basados en cultivo B1) Fluorescencia directa con anticuerpos B2) EIA B3) Hibridacin de Acidos Nucleicos B4) Amplificacin de Acidos Nucleicos C) Pruebas serolgicas D) Citologia

Diagnstico Mtodos
A) Cultivo celular:
Mtodo de referencia para el diagnstico; pero de difcil aplicacin en el laboratorio diagnstico. Al ser parsito intracelular obligado se requieren lneas celulares eucariotas susceptibles. Lnea celular:
Mc Coy Mono verde Bfalo

Se debe mantener la cadena de fro de la muestra para que los CE mantengan su viabilidad e infectibidad. Cultivo por shell vial e IFD Duracin de la prueba 48-72hs

B) Mtodos NO basados en cultivo: B1) Fluorescencia directa con anticuerpos.

Permite la visualizacin directa de los CE en frotis de muestras clnicas Duracin de la prueba 30- 60 min. nico mtodo que permite determinar la calidad de especmenes:
Muestras con clulas columnares o metaplsicas escamosas son adecuadas. Muestras con excesiva cantidad de mucus o cl escamosas no son aceptables.

Interpretacin es subjetiva y lleva a gran fatiga del analista. Reactividad cruzada con otras clamidias y/u otras bacterias. Sensibilidad del 50-100% (segn poblacin en estudio). Especificidad superior al 95%.

B2) EIA
Detecta el LPS de la clamidia mediante Ac Mo marcados. Duracin: 1) Sistema de membranas 15-30min 2) Fase slida 1-3hs. Objetiva interpretacin de los resultados Facilidad de uso Sensibilidad 70-100% Especificidad 95% Falsos + pueden ser por infecciones urinarias bacterianas o contaminacin con moco cervical o secreciones vaginales.

B3) Hibridacin de Acidos Nucleicos

Detecta el ARNr de la clamidia mediante sonda de DNA marcada con ester de acridina. Permite la deteccin directa en muestras urogenitales y conjuntivales. Duracin 2-3hs. Sensibilidad 76-97% Especificidad 97% o ms.

B4) Amplificacin de cidos Nucleicos:

Los blancos moleculares son : RNA r 16s Secuencia 207 pb del plsmido crptico de la bacteria (Test Amplicor- ROCHE) Duracin 4-5hs Sensibilidad 90% Se puede realizar con el primer chorro de orina (menos invasivo) Mediante Nested-PCR mayor disponibilidad de tipos de muestras.

Deteccin de Clamidia por PCR es tanto o ms sensibles que el cultivo en clulas eucariotas siendo ms rpido y sencillo.

D) Pruebas serolgicas:
Muy poca utilidad para el diagnstico.
Anticuerpo para CT persisten durante bastante tiempo despus de remitida la infeccin: serologa positiva no implica infeccin activa. Muchas pruebas serolgicas no son especficas,(anticuerpo contra antgeno de gnero)

til para el diagnstico de LGV y neumonitis perinatal por CT En LGV, el largo perodo de latencia y el retraso en el diagnstico permite encontrar durante la fase aguda de la enfermedad anticuerpos pero no observar la seroconversin. Se usa para el diagnstico presuntivo de LGV un ttulo nico o estable de 1/64 o mayor por fijacin de complemento. Neumonitis: el diagnstico puede hacerse detectando Ig M especfica por IFI en un ttulo 1/32 o mayor

E) Citologia (Mayor aplicacin en veterinaria) Deteccin microscopa directa de las inclusiones intracitoplasmticas clamidiales en raspados celulares teidos con Giemsa (poco sensible y de difcil interpretacin) til en la conjuntivitis de inclusin y en el tracoma
Vacuola Clamidial (= Inclusion clamidial)

Sensibilidad y Especificidad
% S E Cultivo 40-60 100 EIA 65-75 90-95 IFD 70-75 90-97 AAN 90-98 98-99

Lmites de deteccin relativos de diferentes mtodos para el diagnstico de C. trachomatis. Los nmeros en la parte superior representan la cantidad de CE detectados.

Vidas Chlamydias - MiniVidas (BioMrieux)

Es un mtodo de inmunoensayo con deteccin final por fluorescencia ELFA (Enzyme Linked Flourescent Assay) Toma de muestra
La calidad de la muestra condiciona el resultado. La mayor cantidad de clulas epiteliales porque es un parsito intracelular Se utilizan equipos VIDAS Chlamydia Specimen Collection Kit

Mujeres: escobilln endocervical

Eliminar el exceso de moco con el primer escobilln (desecharlo). Insertar 2 escobilln en el cuello rotndolo durante 15-30seg (al retirar no tocar las paredes vaginales) Colocar el escobilln en el tubo de transporte

Hombres: escobilln uretral

El paciente no debe miccionar en la hora previa a la toma de muestra Rotar durante 10seg y retirar Colocar el escobilln en el tubo de transporte

Vidas Chlamydias - MiniVidas (BioMrieux)

Transporte de la muestra
Al llegar al laboratorio colocar la muestra a 2-8C No congelar. Analizar dentro de los 7 das siguientes.

Preparacin de la muestra
Incubar las muestras con tampn de extraccin (PBS en medio detergente) 15-30 min a temp ambiente. Vortexear los tubos 30 seg Eliminar escobillones Calentar los tubos a 15-30 min con calefactor elctrico a bao maria Analizar la muestra inmediatamente (se conserva 24 hs, sin congelar 2-8C) Agitar el extracto 10 segundos antes de cargar la muestra.

Vidas Chlamydias - MiniVidas (BioMrieux)

Cartucho Equipo MiniVidas Conos

Vidas Chlamydias - MiniVidas (BioMrieux)

METODOLOGA: Muestra en el cartucho en el 1 pocillo. El cono sirve como: - Fase slida - Sistema de pipeteo
Cono-LPS +Ac Mo Cono con Ag (LPS) fijado Cono-LPS +Ac Mo+Conjug Lavados

4 metil umbeliferona

350 l

UV 450 nm
a-Raton Lavados + FAL 4 metil umbeliferil fosfato Ac MoConjugado a-LPS (Raton) Cubeta de lectura + Sustrato

Duracin 60 min

Vidas Chlamydias - MiniVidas (BioMrieux)

Interpretacin de Resultados
VALOR < 60 60-80 > 80 INTERPRETACIN Negativo Dudoso Positivo

Ante un resultado dudoso, se repite la determinacin Si nuevamente resulta dudosa, se solicita una nueva muestra o puede realizarse la determinacin Vidas Chlamydia Blocking Assay con la muestra original.

Vidas Chlamydias - MiniVidas (BioMrieux)

Estadstica (HIGA Presidente Pern 2005-2006)
2005
Tipo de Endocervical muestra procesada N de muestras 11 procesadas N de muestras --positivas Uretral 5 3 Otro tipo de muestra procesada 1 ---

2006
Tipo de Endocervical muestra procesada N de muestras 27 procesadas N de muestras --positivas Uretral 2 --Otro tipo de muestra procesada -----

Agradecimientos
Bioq. Mabel Straccia Bioq. Lorena Vico Bioq. Diana Lanzetta A todos los Jefes y Niveles superiores Servicios Anatomia Patolgica Urologia Neonatologia

MUCHAS GRACIAS