Discusin Las muestras utilizadas en la tincin de gram se observaron claramente en el microscopio compuesto. En la primera muestra observada, de Bacillus sp.

, se observ que toda la poblacin en la muestra fij el cristal violeta y todas las clulas quedaron completamente teidas, adquiriendo una coloracin azul oscura, lo cual nos permite afirmar que de acuerdo a la base terica de la tincin gram Bacilus sp. es una bacteria gram positiva. De la misma forma, la muestra de las agrupaciones racimosas de Staphylocccus sp. fij el color azul oscuro, siendo por lo tanto una bacteria gram positiva. inalmente al seguir el procedimiento de la tincin gram y observar que la muestra de Escherichia coli fue teida de un rosado claro, el color de la safranina utilizada como colorante de contraste. !e determin que la especie es gram negativa. Debido a que nuestros resultados observados coinciden con la literatura revisada acerca de la naturaleza de la pared celular en Bacillus sp., Staphylococcus sp. y E. coli y su respuesta ante la tincin de gram, podemos confirmar que el procedimiento fue correctamente seguido y se respetaron los pasos y el tiempo requerido para que cada solucin act"e sobre las muestras fijadas. #lgunos factores pueden alterar los resultados de las observaciones en una tincin gram, factores como la edad del cultivo, el tiempo de coloracin, el p$ de los colorantes, el tiempo de decoloracin y de lavado, siendo los puntos cr%ticos la edad del cultivo y el tiempo de coloracin. Las muestras de Bacillus sp. y Staphylococcus sp. fijaron fuertemente el cristal violeta. &a que las paredes celulares de estos dos gneros poseen un grosor mayor que en bacterias gram negativas y presentan una mayor cantidad de enlaces entre subunidades de peptidoglucano, puede afirmarse que la fuerte fijacin del cristal violeta se debe al tipo de pared celular que poseen. 'or otra parte, observamos una tincin menos intensa de la safranina en la muestra de E. coli, si bien luego del lavado con el decolorante el color del cristal violeta no permaneci fijado en la muestra, esto es sabido por la poca abundancia de peptidoglucano en el espacio e(terno a la membrana citopl)smica de E. coli y la ausencia de enlaces transversales entre capas de peptidoglucano. Debido a que posterior a la aplicacin de safranina no *ubo lavado con decolorante alguno, puede considerarse que la poca intensidad del tinte podr%a deberse al tiempo de espera luego de colocar safranina en la muestra fijada de E. coli. #parte de las observaciones ya mencionadas, las muestras fueron visibles bajo el objetivo de inmersin de +,,,- y los materiales y procedimientos permitieron cumplir el objetivo de la pr)ctica de laboratorio. inalmente es importante mencionar que observar estos cultivos por separado es en cierta forma una limitacin a la tincin de gram. .na observacin que contraste muestras de cultivos gram positivos y gram negativos en una sola l)mina porta/objetos no fue realizada, este procedimiento podr%a permitirnos una pr)ctica m)s acorde al fin de la tincin de gram, que es en s% una tincin diferencial, "til para discernir en la observacin de una sola muestra la presencia de bacterias gram negativas entre una poblacin de bacterias gram positivas o viceversa.

0onclusin En funcin a los resultados obtenidos, la calidad de la tincin permiti una clara observacin de las muestras tratadas en la pr)ctica. De acuerdo con lo descrito en la discusin, podr%a *aberse descuidado el tiempo de aplicacin de safranina en la muestra de la especie gram negativa E. coli debido a la ligera intensidad observada, siendo el manejo de las soluciones para la tincin en las otras muestras, de Bacillus sp. y Staphylococcus sp., correcto ya que se observ una buena intensidad del colorante fijado. Esta ligera intensidad de coloracin en E. coli podr%a corregirse aplicando safranina por 1, segundos completos, lo cual ya fue considerado para pr)cticas futuras. Los materiales fueron suficientes para poder completar satisfactoriamente la tincin de gram de cada muestra fijada por separado a una l)mina porta/objetos en la pr)ctica de laboratorio, pero las especies utilizadas tambin podr%an *aberse diferenciado entre s% durante la observacin en el caso de que se *ubiese fijado m)s de uno de los cultivos de bacterias por l)mina porta/objetos.

2.30u)l es la influencia del p$ en la reaccin de 4ram5 En la tincin de gram se trabaja con cuatro soluciones principales6 un colorante primario, un mordiente, alco*ol/cetona, u otro agente decolorante, y un colorante secundario o colorante de contra tincin. 'ara una adecuada tincin gram la respuesta ante el colorante primario es importante, ya que es el colorante que diferenciar) a las bacterias que lo fijen a su pared celular 7gram positivas8 de las que lo pierdan despus de ser lavado con agua 7gram negativas8, por lo tanto es crucial conocer los factores que puedan alterar la respuesta de las muestra al cristal violeta. !eg"n estudios en pruebas de tincin gram bajo distintas condiciones para las soluciones, se sabe que el colorante primario, el cristal violeta, puede teir bacterias gram positivas cuando es de p$ alcalino, por lo tanto para una buena tincin se utiliza cristal violeta de p$ alto. 9ambin se conoce que cristal violeta a p$ bajo no puede teir bacterias o levaduras. #dem)s el cristal violeta, que puede teir bacterias gram positivas cuando se le utiliza a p$ alto, se pierde cuando la muestra es lavada con agua destilada a p$ bajo. Debido a esto es importante utilizar cristal violeta y agua destilada a un p$ controlado y siendo lo ideal trabajar con cristal violeta a un p$ alcalino. :ibliografia L#;#<<#, 0arl, ;#LLE99E, ;. . 9*e 0ytological :asis for t*e =ole of t*e 'rimary Dye in t*e 4ram !tain. >en l%nea? @*ttp6AABBB.ncbi.nlm.ni*.govApmcAarticlesA';01CD21EApdfAjbacter,,C2F/,,+F.pdfG >consulta6 ,H abril E,+2? 9*e 4ram !tain. >en l%nea? @*ttp6AABBB.life.umd.eduAclassroomAbsci2E2ALab;aterials;et*odsA4ram!tain.*tmG >consulta6 ,H abril E,+2?