Mtodos de estudo: Noes sobre tcnicas de microscopia de luz (ML) e Microscopia eletrnica (ME); e cultivo celular

UFJF

Prof Heder J. Ribeiro

Contedo programtico: dois mdulos

Histomorfologia e histofisiologia dos tecidos animais UFJF

Bases do desenvolvimento embrionrio

Termo de Responsabilidade:
O aluno responsvel pelo material didtico que utiliza nas aulas prticas da disciplina (bancada, caixa de lminas, microscpio). Todo aluno dever assinar um termo de responsabilidade comprometendo-se a zelar pelo material didtico de sua bancada e escaninho durante o curso. A reposio do material danificado ser de responsabilidade do aluno, conforme orientao do professor. LMINAS QUEBRADAS DEVERO SER TROCADAS IMEDIATAMENTE de modo que alunos de outras turmas no sejam prejudicados.

UFJF

1 - CONCEITOS INICIAIS - LIMITE DE RESOLUO

Poder de resoluo

distino de detalhes

Limite de resoluo: menor distncia que deve existir entre dois pontos para que eles apaream individualizados. LR = k x AN 1) Microscopia de luz 2) Microscopia eletrnica de transmisso 3) Microscopia eletrnica de varredura 4) Microscopia confocal
UFJF

2 - MICROSCOPIA DE LUZ PROCESSAMENTO

UFJF

2.1 - MICROSCOPIA DE LUZ PROCESSAMENTO - INCLUSO

Desidratao lcool 70% - 30 minutos* lcool 80% - 30 minutos lcool 90% - 30 minutos lcool 95% - 30 minutos lcool Absoluto I 30 minutos lcool Absoluto II 30 minutos lcool Absoluto III 30 minutos

Diafanizao

Xilol I - 30 minutos Xilol II - 30 minutos Xilol III 30 minutos

Infiltrao
Parafina I - 30 minutos Parafina II - 30 minutos UFJF

2.2 - MICROSCOPIA DE LUZ PROCESSAMENTO MICROTOMIA

- Obteno de fita com cortes

- Banho Maria 37 oC
-Secagem em estufa

- Colorao

UFJF

2.3 - MICROSCOPIA DE LUZ PROCESSAMENTO COLORAO

Hidratao Xilol I - 15 minutos Xilol II - 15 minutos lcool Absoluto - 5 minutos lcool 90% - 5 minutos lcool 80% - 5 minutos lcool 70% - 5 minutos gua corrente - 10 minutos Colorao Hematoxilina - 1 minuto gua corrente - 15 minutos Eosina - 30 minutos Passar na gua Desidratao lcool 70% - 5 minutos lcool 80% - 5 minutos lcool 90% - 5 minutos lcool Absoluto I - 5 minutos lcool Absoluto II - 5 minutos lcool Absoluto III - 5 minutos

UFJF Xilol II - 15 minutos

Xilol I - 15 minutos

1.1 ORIENTAO DE CORTES

Aumento 10x

Aumento 40x UFJF

3 COLORAO HISTOLGICA

1.1- Conceito e importncia:

basicamente procura associar o carter cido ou bsico do corante com o do tecido a ser corado. A colorao facilita a observao do tecido ao ML.
1.2- Etapas:

UFJF

3.1 COLORAO HISTOLGICA

1.3 Exemplos H.E.

Hematoxilina bsico Eosina - cido Hematoxilina Verde Luz Cromotropo 2R

Tricrmico de Gomori

UFJF

Organismo

Organismo

Sistemas

Sistemas

rgos

rgos

Tecidos

Tecidos

Clulas

Clulas

2 - MICROSCOPIA ELETRNICA
2.1 - MICROSCOPIA ELETRNICA
DE TRANSMISSO

(MET)

UFJF

2 - MICROSCOPIA ELETRNICA
2.1 - MICROSCOPIA ELETRNICA
DE TRANSMISSO

(MET)

UFJF

2.1 - MICROSCOPIA ELETRNICA

DE TRANSMISSO

(MET)

UFJF

2.1 - MICROSCOPIA ELETRNICA

DE TRANSMISSO

(MET)

UFJF

2.1 - MICROSCOPIA ELETRNICA

DE TRANSMISSO

(MET)

UFJF

2.1 - MICROSCOPIA CONFOCAL

UFJF

2.1 - MICROSCOPIA CONFOCAL

UFJF

3.2 COLORAO HISTOLGICA - HISTOQUMICA

2.1 Conceito e importncia

baseia-se em reaes qumicas especficas, permitindo a localizao de substncias.

Oxidao com c. peridico

2.2 - Exemplos
H H C C OH OH

+ HI04 =

H H C C O O

PAS (Periodic Acid-Schiff)

Glicognio,glicoprotenas neutras Glicoprotenas cidas ou sialomucinas

Tratamento com reativo de Schiff radicais aldedo reagem Cor bonina

UFMG

3.2 COLORAO HISTOLGICA - HISTOQUMICA

1 etapa - hidrlise com HCl Radicais aldedos

Feugen (DNA)

2 etapa - Tratamento com reativo de Schiff radicais aldedo reagem

Cor bonina

pH 0,5 Soluo de alcian blue a 1% em tampo a pH 0,5

Alcian blue

Glicoconjugados sulfatados

pH 2,5 Soluo a 1% de alcian blue em cido actico a 3%. UFMG Glicoconjugados carboxilados, sulfatados e sialomucinas

4 IMUNOHISTOQUMICA

revelador

conjugado

Anticorpo secundrio

Anticorpo primrio

antgeno

UFMG

4 IMUNOHISTOQUMICA

UFMG

4 CULTIVO CELULAR
Isolamento de clulas dos tecidos . Tripsina . Colagen ase Incubao com Meio de Cutura . Garrafas . Placas Crescimento celular

UFMG

LMINA 69: corte de fgado COLORAO HISTOLGICA: Hematoxilina-Eosina Hematoxilina: corante bsico (cor arroxeada) Eosina: corante cido (cor rseo/vermelha)

Detalhe da veia centro lobular (abaixo), ampliada 100x ( direita).

UFMG

Aumento 5x

Aumento 10x

LMINA 69: corte de fgado COLORAO HISTOLGICA: Hematoxilina-eosina Hematoxilina: corante bsico (cor arroxeada) Eosina: corante cido (cor rseo/vermelha)

Detalhe de uma fileira de hepatcitos, margeada por capilares sinusides Detalhe do hepatcito, mostrando citoplasma e ncleo.

UFMG

Aumento 40x

LMINA 33: corte de gnglio nervoso espinhal COLORAO HISTOLGICA: Tricrmico de Gomori Hematoxilina: corante bsico (cor arroxeada) Cromtropo 2R: corante cido (cor rseo/vermelha) Verde luz: corante cido (cor esverdeada) Aumento 10x Aumento 40x

Aumento 4x

Tecido conjuntivo UFMG

Anfcitos

Ncleo e Nuclolo

LMINA 3: corte de fgado COLORAO HISTOQUMICA: PAS contra-colorao com Hematoxilina

UFMG

Aumento 10x

a b
Figura 01 a) hepatcito corado pelo PAS visto microscopia de luz nesta imagem, o glicognio tem uma cor bonina intensa e est distribudo de forma homognea em todo o citoplasma; b) detalhe de parte do citoplasma do hepatcito em cujo citoplasma aparecem as rosetas de glicognio (estruturas negras) distribuidas entre vesculas de retculo endoplasmtico liso (estruturas vesiculares) no citoplasma da clula heptica. Observe ainda, a presena de duas mitocndrias com suas cristas mitocondriais.

UFMG