PARTE II

Bioproteccin en el laboratorio

9. Conceptos de bioproteccin en el laboratorio

En ediciones anteriores, el Manual de bioseguridad en el laboratorio se ha centrado en las orientaciones tradicionales en materia de seguridad biolgica para los laboratorios. En ellas se haca hincapi en el uso de prcticas microbiolgicas correctas, el equipo de contencin apropiado, el diseo, la operacin y el mantenimiento de las instalaciones, y los aspectos administrativos para reducir al mnimo el riesgo de lesiones o enfermedades entre el personal. Con la aplicacin de esas recomendaciones, el riesgo para el medio ambiente y para la comunidad circundante tambin se reduce al mnimo. Sin embargo, los acontecimientos mundiales recientes han puesto de relieve la necesidad de proteger los laboratorios y los materiales que contienen de acciones que puedan perjudicar a las personas, el ganado, la agricultura o el medio ambiente. Antes de denir las necesidades de un laboratorio o un programa en materia de bioproteccin, es preciso denir claramente la distincin entre seguridad biolgica y proteccin biolgica. Seguridad biolgica (o bioseguridad) es el trmino utilizado para referirse a los principios, tcnicas y prcticas aplicadas con el n de evitar la exposicin no intencional a patgenos y toxinas, o su liberacin accidental. En cambio, la proteccin biolgica (o bioproteccin) se reere a las medidas de proteccin de la institucin y del personal destinadas a reducir el riesgo de prdida, robo, uso incorrecto, desviaciones o liberacin intencional de patgenos o toxinas. Un programa de bioproteccin debe apoyarse en un programa slido de seguridad biolgica. Mediante las evaluaciones del riesgo realizadas como parte integral del programa de bioseguridad de la institucin, se acopia informacin sobre el tipo de organismos utilizados, su localizacin, el personal que necesita tener acceso a ellos y las personas responsables de ellos. Esa informacin puede utilizarse para determinar si la institucin posee materiales biolgicos de inters para quienes puedan querer usarlos incorrectamente. Deben elaborarse normas nacionales que reconozcan y denan la responsabilidad que tienen los pases y las instituciones de proteger las muestras, patgenos y toxinas para que no sean utilizados de forma incorrecta. Debe prepararse y aplicarse un programa de bioproteccin especco para cada centro, teniendo en cuenta los requisitos del centro, el tipo de trabajo de laboratorio que se realiza y las condiciones locales. En consecuencia, las actividades de bioproteccin en el laboratorio deben ser representativas de las diferentes necesidades de la
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MANUAL DE BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO

institucin y tener en cuenta la informacin proporcionada por los directores cientcos, los investigadores principales, los funcionarios de bioseguridad, el personal cientco del laboratorio, el personal de mantenimiento, los administradores, el personal de tecnologa de la informacin y, cuando proceda, de los organismos responsables del cumplimiento de la ley y del personal de seguridad. Las medidas de proteccin biolgica del laboratorio deben basarse en un programa integral de rendicin de cuentas sobre los patgenos y las toxinas que incluya un inventario actualizado donde gure el lugar de almacenamiento, la identicacin del personal que dispone de acceso, la descripcin del uso, la documentacin de las transferencias internas o externas, dentro de un mismo centro y entre diferentes centros, y cualquier inactivacin y/o eliminacin de los materiales. Del mismo modo, debe instaurarse un protocolo institucional de bioproteccin en el laboratorio, destinado a identicar, noticar, investigar y corregir los incumplimientos de las normas de bioproteccin del laboratorio, incluidas las discrepancias en los resultados de los inventarios. La participacin y los papeles y responsabilidades de las autoridades de salud pblica y de seguridad en caso de infraccin de las normas de proteccin deben estar claramente denidas. Se proporcionar capacitacin especca en materia de bioproteccin, adems de la relativa a la seguridad biolgica, a todo el personal. Esa capacitacin ayudar al personal a comprender la necesidad de proteger esos materiales y los fundamentos de las medidas concretas de bioproteccin, y deber incluir un examen de las normas nacionales y de los procedimientos especcos de la institucin que sean pertinentes. Durante la capacitacin tambin se deben presentar procedimientos que describan los papeles y las responsabilidades del personal en lo relativo a la proteccin, en caso de infraccin de las normas. La idoneidad profesional y tica para trabajar con patgenos peligrosos por parte de todo el personal que disponga de autorizacin de acceso regular a materiales sensibles es otro componente fundamental de las actividades ecaces de bioproteccin en el laboratorio. En resumen, las precauciones relacionadas con la proteccin deben formar parte de la rutina de trabajo en el laboratorio, exactamente igual que las tcnicas aspticas y otras prcticas microbiolgicas seguras. Las medidas de bioproteccin no deben dicultar el intercambio eciente de materiales de referencia, de muestras clnicas y epidemiolgicas ni de la informacin conexa necesaria para las investigaciones clnicas o de salud pblica. Una gestin competente de la proteccin no tiene por qu interferir indebidamente con las actividades cotidianas del personal cientco ni ser un impedimento para la actividad investigadora. Se debe proteger el acceso legtimo a materiales clnicos y de investigacin importantes. La evaluacin de la idoneidad del personal, la formacin especca en temas de proteccin y el cumplimiento riguroso de los procedimientos de proteccin de los patgenos constituyen formas razonables de incrementar la bioproteccin en el laboratorio. Todas estas medidas deben ser establecidas y mantenidas mediante evaluaciones peridicas de los riesgos y las ame 50

9. CONCEPTOS DE BIOPROTECCIN EN EL LABORATORIO

nazas y mediante una revisin y actualizacin peridica de los procedimientos. Las comprobaciones del cumplimiento de estos procedimientos, con instrucciones claras sobre los papeles, las responsabilidades y las medidas correctoras, deben formar parte integral de los programas de bioproteccin del laboratorio y de las normas nacionales sobre la bioproteccin en el laboratorio.

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PARTE III

Equipo de laboratorio

10. Cmaras de seguridad biolgica

Las CSB estn diseadas para proteger al trabajador, la atmsfera del laboratorio y los materiales de trabajo de la exposicin a las salpicaduras y los aerosoles infecciosos que pueden generarse al manipular material que contiene agentes infecciosos, como cultivos primarios, soluciones madre y muestras de diagnstico. Los aerosoles se producen en cualquier actividad que transmita energa a un material lquido o semilquido, por ejemplo, al agitarlo, verterlo a otro recipiente, removerlo o verterlo sobre una supercie o sobre otro lquido. Las actividades como la siembra de placas de agar, la inoculacin de frascos de cultivo celular con pipeta, el uso de pipetas mltiples para dispensar suspensiones lquidas de agentes infecciosos en placas de microcultivo, la homogeneizacin y la agitacin vorticial de material infeccioso, y la centrifugacin de lquidos infecciosos o el trabajo con animales pueden generar aerosoles infecciosos. Las partculas de aerosol de menos de 5 mm de dimetro y las pequeas gotculas de 5 a 100 mm de dimetro no son visibles a simple vista. El trabajador no suele darse cuenta de que se estn produciendo esas partculas, que pueden ser inhaladas o provocar la contaminacin cruzada de los materiales que se encuentran sobre las supercies de trabajo. Las CSB, cuando se utilizan debidamente, han demostrado ser sumamente ecaces para reducir las infecciones adquiridas en el laboratorio y la contaminacin cruzada de cultivos por exposicin a aerosoles. Las CSB tambin protegen la atmsfera del laboratorio. A lo largo de los aos, el diseo bsico de las CSB ha sufrido varias modicaciones. Un cambio importante fue la adicin de un ltro HEPA. Los ltros HEPA retienen el 99,97% de las partculas de 0,3 mm de dimetro y el 99,99% de las partculas de tamao mayor o menor; esto les permite retener ecazmente todos los agentes infecciosos conocidos y garantizar que de la cmara slo sale aire exento de microorganismos. Una segunda modicacin del diseo consisti en dirigir hacia la supercie de trabajo aire que haya pasado por ltros HEPA, con el n de proteger de la contaminacin los materiales de esa supercie. Esta caracterstica a menudo se conoce como proteccin del producto. Estos conceptos de diseo bsicos han llevado a la evolucin de tres clases de CSB. En el cuadro 8 se explica el tipo de proteccin que ofrece cada una de ellas. Nota. Las cabinas de ujo de aire horizontal y vertical (bancos de trabajo de aire limpio) no son CSB y no deben emplearse como tal.
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MANUAL DE BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO

Cuadro 8. Seleccin de una cmara de seguridad biolgica (CSB) segn el tipo de proteccin necesaria
TIPO DE PROTECCIN SELECCIN DE LA CSB

Proteccin personal, microorganismos de los grupos de riesgo 1 a 3 Proteccin personal, microorganismos del grupo de riesgo 4, laboratorio para trabajar con cmara de guantes Proteccin personal, microorganismos del grupo de riesgo 4, laboratorio para trabajar con trajes especiales Proteccin del producto Proteccin contra cantidades mnimas de sustancias qumicas/ radionclidos voltiles Proteccin contra sustancias qumicas/ radionclidos voltiles

Clase I, clase II, clase III Clase III

Clase I, clase II

Clase II, clase III slo si incluye ujo laminar Clase IIB1, clase IIA2 ventilada hacia el exterior Clase I, clase IIB2, clase III

Cmaras de seguridad biolgica de clase I En la gura 6 aparece un esquema de una CSB de clase I. El aire de la sala entra por la abertura delantera a una velocidad mnima de 0,38 m/s, pasa por encima de la supercie de trabajo y sale de la cmara por el conducto de extraccin. La corriente de aire arrastra las partculas de aerosol que puedan generarse en la supercie de trabajo, alejndolas del trabajador y dirigindolas hacia el conducto de extraccin. La abertura frontal permite que los brazos del trabajador lleguen a la supercie de trabajo del interior de la cmara mientras observa la supercie a travs de una ventana de cristal. Esta ventana tambin puede levantarse por completo para tener acceso a la supercie de trabajo para limpiarla o con otros nes. El aire procedente de la cmara se evacua a travs de un ltro HEPA: a) al laboratorio y a continuacin al exterior del edicio a travs del sistema de evacuacin de aire del edicio; b) al exterior a travs del sistema de evacuacin de aire del edicio, o c) directamente al exterior. El ltro HEPA puede estar situado en la cmara de distribucin del extractor de la CSB o en la salida de aire del edicio. Algunas CSB de clase I llevan integrado un ventilador de extraccin, mientras que otras funcionan con el ventilador de evacuacin de aire del sistema general del edicio. La CSB de clase I fue la primera CSB reconocida, y debido a la sencillez de su diseo sigue teniendo un uso muy extendido en todo el mundo. Su ventaja es que proporciona proteccin tanto personal como ambiental y tambin puede utilizarse para trabajar con radionclidos y sustancias qumicas txicas voltiles. Como se hace pasar
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10. CMARAS DE SEGURIDAD BIOLGICA

Figura 6. Esquema de una cmara de seguridad biolgica de clase I. A: abertura frontal; B: ventana de cristal; C: ltro HEPA de salida; D: cmara de distribucin del extractor

aire de la sala, sin esterilizar, sobre la supercie de trabajo, se considera que no ofrece una proteccin able del producto. Cmaras de seguridad biolgica de clase II A medida que fue aumentando el uso de cultivos celulares y tisulares para la propagacin de virus y otros nes, dej de considerarse satisfactorio que el aire no esterilizado de la sala pasara por encima de la supercie de trabajo. Adems de proporcionar proteccin personal, las CSB de clase II protegen del aire contaminado del local a los materiales de la supercie de trabajo. Las CSB de clase II, de las que hay cuatro tipos (A1, A2, B1 y B2), dieren de las CSB de clase I en que slo permiten que entre en contacto con la supercie de trabajo aire que ha pasado por un ltro HEPA (aire estril). Las CSB de clase II pueden utilizarse para trabajar con agentes infecciosos de los grupos de riesgo 2 y 3, y tambin con agentes infecciosos del grupo de riesgo 4, siempre que se utilicen trajes presurizados.
Cmaras de seguridad biolgica de clase II tipo A1

Estas cmaras se representan en la gura 7. Un ventilador interno succiona aire de la sala (aire de entrada) hacia la cmara a travs de la abertura frontal y lo dirige hacia la rejilla frontal de entrada. La velocidad de esta corriente de aire debe ser de al menos 0,38 m/s a la altura de la abertura frontal. Ese aire pasa a continuacin por un ltro HEPA antes de dirigirse, descendiendo verticalmente, hacia la supercie de trabajo.
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C E B A

F vista frontal aire de la sala aire potencialmente contaminado aire filtrado por HEPA Figura 7. Esquema de una cmara de seguridad biolgica de clase II tipo A1. A: abertura frontal; B: ventana; C: ltro HEPA de salida; D: cmara de distribucin trasera; E: ltro HEPA de suministro; F: ventilador vista lateral

A medida que el aire desciende, se divide a unos 618 cm de la supercie de trabajo, de modo que la mitad pasa a travs de la rejilla de extraccin delantera y la otra mitad por la rejilla de extraccin trasera. Toda partcula de aerosol que se genere en la supercie de trabajo es inmediatamente capturada por esta corriente de aire descendente y pasa a travs de la rejilla de evacuacin delantera o trasera, con lo que se consigue el mximo nivel de proteccin del producto. A continuacin el aire se evacua a travs de la cmara de distribucin posterior hacia el espacio comprendido entre los ltros de suministro y de evacuacin situados en la parte superior de la cmara. Debido al tamao relativo de estos ltros, alrededor del 70% del aire vuelve a circular a travs del ltro HEPA de suministro y regresa a la zona de trabajo; el 30% restante pasa a travs del ltro de evacuacin hacia la sala o el exterior. El aire de salida de este tipo de cmara puede reciclarse en la sala o evacuarse al exterior del edicio a travs de un acoplador de tipo dedal conectado a un conducto destinado exclusivamente a este n o a travs del sistema de evacuacin de aire del edicio. El reciclaje del aire de salida hacia la sala tiene la ventaja de reducir los gastos de combustible del edicio, ya que no se evacua aire caliente o fro a la atmsfera exterior. La conexin a los conductos del sistema de evacuacin de aire tambin permite
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10. CMARAS DE SEGURIDAD BIOLGICA

Figura 8. Esquema de una cmara de seguridad biolgica de clase IIB1. A: abertura frontal; B: ventana; C: ltro HEPA de salida; D: ltro HEPA de entrada; E: cmara de distribucin de salida con presin negativa; F: ventilador; G: ltro HEPA para el aire de entrada. La salida de aire de la cmara debe estar conectada al sistema de evacuacin de aire del edicio.

utilizar algunas CSB para trabajar con radionclidos voltiles y sustancias qumicas txicas voltiles (cuadro 8).
Cmaras de clase II de tipo A2 con salida al exterior, y de tipo B1 y B2

Las CSB de clase IIA2 con salida al exterior, IIB1 (Figura 8) y IIB2 son variaciones del tipo IIA1. Sus caractersticas, junto con las de las CSB de las clases I y III, se indican en el cuadro 9. Cada una de esas variaciones permite utilizar la CSB para nes especcos (vase el cuadro 8). Estas CSB se distinguen entre s en varios aspectos: la velocidad de entrada del aire por la abertura frontal; la cantidad de aire que se vuelve a hacer pasar por la supercie de trabajo y que sale de la cmara; el sistema de extraccin de aire, que determina si el aire se evacua hacia la sala o al exterior por su propio sistema de evacuacin o por el sistema de evacuacin de aire del edicio; y las presiones en el interior de la cmara (en unas los conductos y las cmaras de distribucin cargados de aire biolgicamente contaminado estn bajo presin negativa, o estn rodeados por conductos y cmaras de distribucin bajo presin negativa).
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MANUAL DE BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO

Cuadro 9. Diferencias entre las cmaras de seguridad biolgica de las clases I, II y III
CSB VELOCIDAD EN LA ABERTURA FRONTAL (m/s)
a

FLUJO DE AIRE (%) RECIRCULADO EVACUADO

SISTEMA DE EVACUACIN

Clase I

0,36 0,380,51

0 70

100 30

Conducto rgido Extraccin a la sala o a un acoplador de tipo dedal Extraccin a la sala o a un acoplador de tipo dedal Conducto rgido Conducto rgido Conducto rgido

Clase IIA1

Clase IIA2 con salida al exteriora Clase IIB1a Clase IIB2 Clase III
a a

0,51

70

30

0,51 0,51 NA

30 0 0

70 100 100

NA: No aplicable. a Todos los conductos biolgicamente contaminados se encuentran bajo presin negativa o estn rodeados por conductos y cmaras de distribucin con presin negativa.

En las referencias 7 y 8 y en los prospectos informativos que proporcionan los fabricantes pueden encontrarse las descripciones completas de las distintas cmaras de clase IIA y IIB. Cmaras de seguridad biolgica de clase III Este tipo de cmaras (gura 9) es el que proporciona mayor nivel de proteccin personal y se utiliza para trabajar con agentes del grupo de Riesgo 4. Todos los oricios estn sellados para impedir el paso de gases. El aire de entrada es ltrado por HEPA y el aire de salida pasa por dos ltros HEPA. La corriente de aire se mantiene mediante un sistema de extraccin propio en el exterior de la cmara, que mantiene el interior de sta a una presin negativa (alrededor de 124,5 Pa). El acceso a la supercie de trabajo se hace mediante guantes de goma gruesa, conectados a unos oricios en la cmara. La cmara debe tener una caja de paso que pueda esterilizarse y vaya equipada con una salida de aire provista de un ltro HEPA. Puede ir conectada a una autoclave de doble puerta en la que se descontaminar todo el material que entre o salga de la cmara. Pueden unirse varias cmaras de guantes para ampliar la supercie de trabajo. Las CSB de clase III son idneas para los laboratorios de los niveles de bioseguridad 3 y 4. Conexiones de aire de las cmaras de seguridad biolgica Las CSB de las clases IIA1 y IIA2 con salida al exterior estn pensadas para tener conexiones mediante acopladores de tipo dedal o de tipo campana en dosel. El dedal
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10. CMARAS DE SEGURIDAD BIOLGICA

Figura 9. Esquema de una cmara de seguridad biolgica de clase III (cmara de guantes). A: oricios para guantes del largo de un brazo; B: ventana; C: dobles ltros HEPA de salida; D: ltro HEPA de entrada; E: autoclave de doble puerta o caja de paso; F: tanque de inmersin qumica. La salida del aire de la cmara debe estar conectada a un sistema independiente de extraccin de aire del edicio.

se ajusta a la salida de aire de la cmara dejando un espacio libre de unos 2,5 cm de dimetro. Este pequeo espacio permite succionar aire de la sala tambin hacia el sistema de evacuacin de aire del edicio. La capacidad del sistema de evacuacin del edicio debe ser suciente para captar aire procedente tanto de la sala como de la cmara. El dedal debe ser extrable o estar diseado para permitir las pruebas de funcionamiento de la cmara. En general, el rendimiento de una cmara conectada mediante un dedal no se ve muy afectado por las uctuaciones en la corriente de aire del edicio. Las CSB de las clases IIB1 y IIB2 estn conectadas por conductos rgidos, es decir slidamente conectadas sin abertura de ninguna clase, al sistema de evacuacin del edicio o, preferiblemente, a un sistema de conductos de extraccin propios. El sistema de evacuacin del edicio debe adaptarse con precisin a los requisitos de ujo de aire especicados por el fabricante tanto en relacin con el volumen como con la presin esttica. La certicacin de las CSB conectadas por conductos rgidos lleva mucho ms tiempo que la de las CSB que reciclan el aire hacia la sala o de las que llevan acopladores de tipo dedal.
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Eleccin de una cmara de seguridad biolgica La eleccin de una CSB depende primordialmente del tipo de proteccin que se necesite: proteccin del producto, proteccin del personal frente a microorganismos de los grupos de riesgo 1 a 4, proteccin del personal frente a la exposicin a radionclidos y sustancias qumicas txicas voltiles, o una combinacin de todas ellas. En el cuadro 8 se muestra qu CSB se recomienda para cada tipo de proteccin. No deben utilizarse sustancias qumicas txicas o voltiles en las CSB que reciclan el aire de salida hacia la sala, es decir las de clase I no conectadas al sistema de evacuacin de aire del edicio, o las de clase II A1 y A2. Las de clase IIB1 son aceptables para trabajar con cantidades muy reducidas de sustancias qumicas voltiles y radionclidos. Cuando est previsto utilizar cantidades importantes de radionclidos y sustancias qumicas voltiles es necesario utilizar una CSB de clase IIB2, tambin denominada cmara de extraccin total de aire. Uso de las cmaras de seguridad biolgica en el laboratorio
Localizacin

La velocidad del aire que ingresa en la CSB por la abertura frontal es de unos 0,45 m/s. A esta velocidad, la integridad del ujo direccional del aire de entrada es frgil y puede verse fcilmente perturbada por las corrientes de aire que generan el movimiento de personas en las proximidades de la cmara, las ventanas abiertas, los registros del suministro de aire y la apertura y cierre de puertas. Lo ms conveniente es situar la CSB en un lugar alejado de la circulacin del personal y de corrientes de aire que puedan provocar perturbaciones. Siempre que sea posible debe dejarse un espacio de 30 cm por detrs y a ambos lados de la cmara con el n de poder acceder fcilmente a todas las partes de la cmara para las labores de mantenimiento. Por encima de la CSB conviene dejar un espacio de 30 a 35 cm que permita medir debidamente la velocidad del aire a travs del ltro de salida y cambiar este ltro.
Trabajadores

Si las CSB no se usan correctamente, sus efectos protectores pueden verse gravemente disminuidos. Los trabajadores deben tener cuidado de mantener la integridad del ujo de entrada de aire por la abertura frontal al meter y sacar los brazos de la cmara. Los brazos deben moverse con lentitud, perpendicularmente a la abertura frontal. Es conveniente esperar aproximadamente un minuto despus de meter las manos y los brazos en la cmara antes de comenzar a manipular el material, con el n de permitir que la cmara se ajuste y el aire barra las manos y los brazos. El nmero de movimientos a travs de la abertura frontal tambin debe reducirse al mnimo colocando todo el material necesario en el interior antes de comenzar las manipulaciones.
Colocacin del material

La rejilla frontal de entrada de las CSB de clase II no debe estar bloqueada con papeles, instrumental ni otros objetos. La supercie de los materiales que haya que colocar en el interior de la cmara debe descontaminarse con alcohol al 70%. El trabajo puede
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10. CMARAS DE SEGURIDAD BIOLGICA

realizarse sobre paos absorbentes empapados de desinfectante con el n de que stos recojan las salpicaduras y los derrames. Todos los materiales deben colocarse lo ms dentro posible de la cmara, hacia el borde posterior de la supercie de trabajo, pero sin bloquear la rejilla posterior. El equipo que pueda generar aerosoles (por ejemplo mezcladoras, centrifugadoras) debe colocarse hacia la parte posterior de la cmara. Los artculos voluminosos, como las bolsas especcas para material biolgico peligroso, las bandejas de pipetas desechadas y los frascos de succin deben colocarse a un lado del interior de la cmara. El trabajo debe proceder desde las zonas limpias hacia las contaminadas a lo largo de la supercie de trabajo. Las bolsas de recogida de material biolgico peligroso para la autoclave y la bandeja de recogida de pipetas no deben colocarse fuera de la cmara. Los frecuentes movimientos de entrada y salida necesarios para utilizar estos recipientes perturban la barrera de aire de la cmara y puede poner en peligro la proteccin tanto del personal como del producto.
Operacin y mantenimiento

La mayora de las CSB estn diseadas para funcionar 24 horas al da; los investigadores han llegado a la conclusin de que el funcionamiento continuo ayuda a controlar los niveles de polvo y de partculas en el laboratorio. Las CSB de clase IIA1 y IIA2 que evacuan el aire a la sala o que estn conectadas por acopladores de tipo dedal a conductos de extraccin propios pueden apagarse cuando no estn en uso. Otros tipos, como las de la clase IIB1 y IIB2, que tienen instalaciones a base de conductos rgidos, deben mantener una corriente de aire en su interior en todo momento para contribuir a mantener el equilibrio del aire de la sala. Las cmaras deben encenderse al menos 5 minutos antes de comenzar el trabajo y despus de terminarlo para permitir que se purguen, es decir, dejar tiempo para que el aire contaminado sea eliminado del entorno de la cmara. Todas las reparaciones que se hagan en una CSB debe realizarlas un tcnico calicado. Cualquier fallo en el funcionamiento de la CSB debe comunicarse y repararse antes de utilizarla de nuevo.
Luz ultravioleta

Las CSB no necesitan lmparas de luz ultravioleta. Si se utilizan, las lmparas deben limpiarse una vez a la semana para quitar el polvo y la suciedad que puedan bloquear la ecacia germicida de la luz. La intensidad de la luz ultravioleta debe comprobarse cada vez que se vuelve a certicar la cmara para asegurarse de que la emisin de luz es apropiada. Las luces ultravioletas deben apagarse cuando la sala est ocupada, para proteger los ojos y la piel de exposiciones involuntarias.
Llamas desnudas

Deben evitarse las llamas desnudas en el entorno prcticamente libre de microorganismos creado dentro de la cmara. Esas llamas alteran las corrientes de aire y pueden ser peligrosas cuando se utilizan al mismo tiempo sustancias voltiles e inamables.
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MANUAL DE BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO

Para esterilizar las asas microbiolgicas, es preferible utilizar microincineradores u hornos elctricos.
Derrames

Se colocar en lugar visible una copia del protocolo del laboratorio para tratar los derrames, que debern leer y comprender todos los usuarios. Cuando se produzca un derrame de material de riesgo biolgico dentro de una CSB, debe procederse de inmediato a su limpieza, mientras la cmara sigue en funcionamiento. Debe utilizarse un desinfectante ecaz y aplicarse de modo que se reduzca al mnimo la formacin de aerosoles. Todos los materiales que entren en contacto con el agente derramado deben desinfectarse o tratarse en autoclave.
Certicacin

El funcionamiento y la integridad de cada CSB deben ser certicados en relacin con las normas de funcionamiento nacionales o internacionales en el momento de la instalacin, y despus de forma peridica, por tcnicos cualicados y de acuerdo con las instrucciones del fabricante. La evaluacin de la ecacia de contencin de la cmara debe incluir pruebas de la integridad de la cmara, fugas de los ltros HEPA, perl de velocidad del ujo de aire descendente, velocidad en la abertura frontal, tasa de presin negativa/ventilacin, caractersticas del ujo de aire, y alarmas e interruptores de interbloqueo. Tambin pueden realizarse pruebas facultativas en relacin con la instalacin elctrica y la intensidad de la iluminacin, la luz ultravioleta, los ruidos y las vibraciones. Para llevar a cabo estas pruebas se requieren capacitacin, conocimientos y equipos especiales; es sumamente recomendable que las haga un profesional cualicado.
Limpieza y desinfeccin

Todos los artculos que entren en una CSB, incluido el material de laboratorio, deben tener su supercie descontaminada y sacarse de la cmara una vez terminado el trabajo, ya que los medios de cultivo residuales pueden permitir la proliferacin de microbios. Las supercies internas de las CSB deben descontaminarse antes y despus de cada uso. Las supercies de trabajo y las paredes internas deben limpiarse con un pao empapado en un desinfectante que elimine los microorganismos que pudiera haber. Al nal del da de trabajo, la descontaminacin nal de las supercies debe incluir la limpieza de la supercie de trabajo, los laterales, la cara posterior y el interior de la ventana de cristal. Para los organismos sensibles se utilizar una solucin de leja o alcohol al 70%. Despus habr que pasar de nuevo un pao con agua estril cada vez que se utilice un desinfectante corrosivo, como la leja. Se recomienda dejar la cmara en funcionamiento. En caso contrario, antes de apagarla habr que dejarla funcionando durante 5 minutos para purgar la atmsfera interior.
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10. CMARAS DE SEGURIDAD BIOLGICA

Descontaminacin

Las CSB deben descontaminarse antes de los cambios de ltro y antes de cambiarlas de sitio. El mtodo de descontaminacin ms comn es la fumigacin con formaldehdo gaseoso. La descontaminacin de las CSB debe ser realizada por un profesional cualicado.
Equipo de proteccin personal

Siempre que use una CSB, el trabajador deber llevar prendas de proteccin personal. Las batas de laboratorio son aceptables para trabajar en los niveles de bioseguridad 1 y 2. En los niveles de bioseguridad 3 y 4 (salvo en los laboratorios diseados para trabajar con trajes especiales) deben usarse batas de frente cerrado, abrochadas por detrs, que protegen mejor. Los guantes deben estirarse bien por encima de las mangas de la bata, en lugar de meterlos por debajo. Pueden usarse mangas con elstico para proteger las muecas del investigador. Para algunos procedimientos pueden hacer falta mascarillas y gafas de seguridad.
Alarmas

Las CSB pueden ir equipadas con uno de los dos tipos siguientes de alarma. Las alarmas de abertura, que slo se encuentran en las cmaras que llevan ventanas de cristal correderas; indican que el trabajador ha colocado el cristal en posicin incorrecta, y se detienen cuando el cristal est debidamente colocado. Las alarmas de ujo de aire sealan perturbaciones de las caractersticas normales del ujo de aire en la cmara que representan un peligro inmediato para el trabajador o el producto. Cuando suene esta alarma, se interrumpir inmediatamente el trabajo y se avisar al supervisor del laboratorio. Los manuales de instrucciones del fabricante deben dar ms detalles. La capacitacin para el uso de CSB debe incluir este aspecto.
Informacin complementaria

La eleccin del tipo correcto de CSB, su instalacin y uso correctos y la certicacin anual de su funcionamiento son procesos complejos. Se recomienda que todos ellos se hagan bajo la supervisin de un profesional de la seguridad biolgica bien adiestrado y con experiencia. Este profesional debe estar bien familiarizado con las publicaciones pertinentes enumeradas en la seccin de Referencias y debe haber recibido capacitacin en todos los aspectos de las CSB. Los trabajadores deben recibir capacitacin formal sobre el funcionamiento y el manejo de las CSB. Si se desea ms informacin, consltense las referencias 5 y 7 a 16, y el captulo 11.

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11. Equipo de seguridad

Habida cuenta de que los aerosoles son importantes fuentes de infeccin, debe tenerse cuidado de reducir su formacin y dispersin. Muchas operaciones de laboratorio generan aerosoles peligrosos, como mezclar, triturar, agitar, remover, someter a ultrasonidos o centrifugar material infeccioso. Aunque se utilice equipo seguro, es preferible efectuar esas operaciones en una CSB siempre que sea posible. Las CSB, su uso y las pruebas a que deben someterse, se examinan en el captulo 10. El uso de equipo de seguridad no garantiza la proteccin, a menos que el trabajador est adiestrado en su uso y aplique las tcnicas apropiadas. El equipo debe probarse con regularidad para asegurarse de que sigue siendo seguro. En el cuadro 10 aparece una lista de comprobacin del equipo de seguridad diseado para eliminar o reducir ciertos peligros y se exponen brevemente las caractersticas que determinan la seguridad. En las pginas que siguen se ofrecen ms detalles sobre gran parte de ese material. En el captulo 12 puede encontrarse ms informacin acerca del uso apropiado de ese equipo. En el anexo 4 se ofrece informacin sobre el equipo y las operaciones que pueden entraar un peligro. Cmaras aislantes de material exible y presin negativa Las cmaras aislantes de material exible y presin negativa son dispositivos autoportantes de contencin primaria que ofrecen mxima proteccin frente a materiales biolgicos peligrosos. Pueden colocarse sobre un soporte mvil. El banco de trabajo est totalmente encerrado en una envoltura de cloruro de polivinilo (PVC) transparente, suspendida de un marco de acero. La cmara aislante se mantiene a una presin interna inferior a la atmosfrica. El aire de entrada pasa a travs de un ltro HEPA y el de salida a travs de dos ltros HEPA, lo que hace innecesario conducir el aire evacuado hacia el exterior del edicio. El aislador puede equiparse con una incubadora, un microscopio y otro material de laboratorio, como centrifugadoras, jaulas de animales o bloques trmicos, entre otros. El material se introduce y se extrae de la cmara aislante a travs de aberturas especiales, de modo que no se pone en peligro la seguridad microbiolgica. Las manipulaciones se realizan utilizando mangas largas con guantes desechables incorporados. La caja lleva un manmetro para vigilar la presin de la envoltura.
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11. EQUIPO DE SEGURIDAD

Cuadro 10. Equipo de bioseguridad

EQUIPO PELIGRO EVITADO CARACTERSTICAS DE SEGURIDAD

Cmaras de seguridad biolgica Clase I

Aerosoles y salpicaduras

Clase II

Aerosoles y salpicaduras

Clase III

Aerosoles y salpicaduras

Flujo mnimo de aire hacia el interior (velocidad frontal) en la abertura de trabajo. Filtracin adecuada del aire expulsado No protege el producto Flujo mnimo de aire hacia el interior (velocidad frontal) en la abertura de trabajo. Filtracin adecuada del aire expulsado Protege el producto Contencin mxima Protege el producto si se incluye ujo de aire laminar Contencin mxima

Cmaras aislantes de material exible y presin negativa Pantalla contra salpicaduras Dispositivos de pipeteo

Aerosoles y salpicaduras

Salpicadura de sustancias qumicas Riesgos propios del pipeteo por succin bucal, como la ingestin de patgenos, la inhalacin de aerosoles producidos por la succin bucal, expulsin de lquido o goteo de la pipeta, contaminacin del extremo bucal de la pipeta Salpicaduras procedentes de las asas

Establece una separacin entre el trabajador y el trabajo Facilidad de empleo Evita la contaminacin del extremo bucal de la pipeta, con lo que protege el dispositivo, el usuario y el circuito de vaco Posibilidad de esterilizacin Se evita el goteo del extremo inferior de la pipeta Proteccin mediante un tubo de vidrio o cermica, abierto por un extremo y calentado por gas o electricidad Desechables, no necesitan calentamiento Diseo hermtico, con tapa Duraderos Posibilidad de tratarlos en la autoclave

Microincineradores de asas, asas desechables

Recipientes hermticos Aerosoles, derrames y para recoger y transportar fugas material infeccioso destinado a la esterilizacin dentro del laboratorio

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MANUAL DE BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO

EQUIPO

PELIGRO EVITADO

CARACTERSTICAS DE SEGURIDAD

Recipientes para la eliminacin de objetos cortantes y punzantes Recipientes de transporte entre laboratorios e instituciones

Heridas punzantes

Posibilidad de tratamiento en autoclave Robustos, a prueba de perforaciones Robustos Recipientes primario y secundario estancos para evitar fugas Material absorbente para enjugar los escapes Diseo aprobado Esterilizacin trmica ecaz

Liberacin de organismos

Autoclaves, manuales o automticas

Material infeccioso (transformado en inocuo para su eliminacin o reutilizacin)

Frascos con tapn de rosca Aerosoles y derrames Proteccin del circuito de vaco

Contencin ecaz

Contaminacin del sistema Un ltro de tipo cartucho de vaco del laboratorio por impide el paso de aerosoles aerosoles o rebosamiento (tamao de las partculas: de lquidos 0,45 m) El matraz de rebosamiento contiene un desinfectante apropiado. Puede usarse una pera de goma para cortar automticamente el vaco cuando se llena el matraz colector Todo el sistema puede esterilizarse en la autoclave

Las cmaras aislantes de material exible se utilizan para manipular organismos de alto riesgo (grupos de riesgo 3 4) en el trabajo de campo cuando no es posible o apropiado instalar o mantener CSB convencionales. Dispositivos de pipeteo Para los procedimientos de pipeteo debe utilizarse siempre un dispositivo especial. El pipeteo con la boca debe estar estrictamente prohibido. No puede insistirse bastante en la importancia de utilizar dispositivos de pipeteo. Los riesgos ms comunes que entraa el uso de pipetas son resultado de la succin bucal. La aspiracin por la boca y la ingestin de material peligroso han dado lugar a numerosas infecciones en los laboratorios. Tambin pueden transferirse agentes patgenos a la boca si se coloca un dedo contaminado en el extremo de la pipeta por el que se hace la succin. Un riesgo menos
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11. EQUIPO DE SEGURIDAD

conocido del pipeteo con la boca es la inhalacin de aerosoles provocados por la succin. Los tapones de algodn no constituyen un ltro microbiano eciente sea la presin negativa o positiva, pues permiten el paso de las partculas durante la succin. Cuando el tapn est muy apretado, se necesita una succin muy enrgica, con el consiguiente riesgo de aspirar a la vez el algodn, el aerosol e incluso el lquido. El uso de dispositivos de pipeteo permite evitar la ingestin de patgenos. Tambin pueden generarse aerosoles cuando el lquido de una pipeta gotea sobre una supercie de trabajo; cuando se mezclan cultivos alternando succin y soplado, y cuando se sopla por la pipeta para que salga la ltima gota. La inhalacin de los aerosoles que inevitablemente se generan durante las operaciones de pipeteo puede evitarse trabajando en una CSB. Los dispositivos de pipeteo deben seleccionarse con cuidado. Es importante que ni su diseo ni su modo de empleo aumenten el riesgo de infeccin, y que sean fciles de esterilizar y limpiar. Deben utilizarse puntas de pipeta obturadas (resistentes a los aerosoles) cuando se manipulen microorganismos y cultivos celulares. Las pipetas que tengan los extremos de succin agrietados o astillados deben desecharse, ya que daan las juntas hermticas por las que se insertan en los dispositivos de pipeteo y crean un peligro. Homogeneizadores, agitadores, mezcladores y desintegradores ultrasnicos Los homogeneizadores domsticos (de cocina) no son hermticos y liberan aerosoles. Slo deben utilizarse aparatos diseados especialmente para el trabajo de laboratorio, que estn construidos de forma que se reduce al mnimo o se impide esa liberacin de aerosoles. Los homogeneizadores de tipo Stomacher, disponibles ahora para trabajar con volmenes grandes y pequeos, tambin pueden producir aerosoles. Los homogeneizadores utilizados para los microorganismos del grupo de riesgo 3 siempre deben cargarse y abrirse en una CSB. Los desintegradores ultrasnicos pueden liberar aerosoles. Deben manipularse en CSB o cubrirse con pantallas protectoras durante su uso. Los dispositivos protectores y la parte exterior de los desintegradores ultrasnicos deben descontaminarse despus de su utilizacin. Asas desechables Las asas desechables ofrecen la ventaja de que no necesitan ser esterilizadas, por lo que pueden utilizarse en CSB, en las que los mecheros de Bunsen y los microincineradores perturbaran la corriente de aire. Estas asas deben colocarse en un desinfectante despus del uso y desecharse como material contaminado (vase el captulo 3). Microincineradores Los microincineradores calentados con gas o electricidad llevan protecciones de cristal de borosilicato o de cermica que reducen al mnimo las salpicaduras y la dispersin de material infectado cuando se esterilizan las asas. Sin embargo, pueden perturbar la
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MANUAL DE BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO

corriente de aire y por consiguiente deben colocarse hacia la parte trasera de la supercie de trabajo de las CSB. Ropas y equipo de proteccin personal La vestimenta y el equipo de proteccin personal pueden actuar como barrera para reducir al mnimo el riesgo de exposicin a aerosoles, salpicaduras e inoculacin accidental. Las prendas de vestir y el equipo que se seleccionen dependen de la naturaleza del trabajo que se realice. En el laboratorio los trabajadores llevarn ropa protectora. Antes de abandonar el laboratorio, tendrn que quitarse las prendas protectoras y lavarse las manos. En el cuadro 11 se exponen algunos elementos de proteccin personal utilizados en laboratorios y la proteccin que ofrecen.
Batas, monos y delantales de laboratorio

De preferencia, las batas de laboratorio irn abotonadas hasta arriba. Sin embargo, las batas de manga larga y abertura trasera y los monos protegen mejor que las batas de abertura frontal y son preferibles en los laboratorios de microbiologa y cuando se trabaja en una CSB. Los delantales pueden llevarse por encima de las batas cuando se necesite mayor proteccin contra el derrame de sustancias qumicas o material biolgico como sangre o lquidos de cultivo. Los servicios de lavandera deben encontrarse en las instalaciones o cerca de ellas. Las batas, monos y delantales no deben usarse fuera de las zonas del laboratorio.
Gafas de seguridad y viseras

La eleccin del material para proteger los ojos y el rostro de salpicaduras e impactos de objetos depender de la actividad que se lleve a cabo. Pueden fabricarse gafas, graduadas o no, con monturas especiales que permiten colocar los cristales desde delante. Los cristales son de material irrompible y pueden ser curvos o llevar protecciones laterales (cristales de seguridad). Las gafas de patilla no protegen debidamente contra las salpicaduras ni siquiera cuando se utilizan con protecciones laterales. Las gafas de mscara para proteger contra salpicaduras e impactos deben llevarse sobre las gafas graduadas normales y las lentes de contacto (que no protegen contra los riesgos biolgicos o qumicos). Las viseras estn hechas de plstico irrompible, se ajustan al rostro y se sujetan a la cabeza mediante cintas o una capucha. Ninguno de estos elementos de proteccin debe usarse fuera del laboratorio.
Mascarillas respiratorias

La proteccin respiratoria puede utilizarse cuando se realizan procedimientos de alto riesgo, como limpiar un derrame de material infeccioso. El tipo de mascarilla respiratoria elegida depender del tipo de peligro. Existen respiradores con ltros cambiables para proteger contra gases, vapores, partculas y microorganismos. Es indispensable que el ltro est colocado en el tipo de mascarilla adecuado. Para que la proteccin sea mxima, las mascarillas respiratorias deben ajustarse al rostro de
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11. EQUIPO DE SEGURIDAD

Cuadro 11. Equipo de proteccin personal

EQUIPO PELIGRO EVITADO CARACTERSTICAS DE SEGURIDAD

Batas y monos de laboratorio

Contaminacin de la ropa Abertura trasera Cubren la ropa de calle

Delantales de plstico Contaminacin de la ropa Impermeables Calzado Gafas de mscara Impactos y salpicaduras Impactos y salpicaduras Puntera cerrada Lentes resistentes a los impactos (con correccin ptica o bien deben usarse sobre las lentes correctoras) Proteccin lateral Lentes resistentes a los impactos (con correccin ptica) Proteccin lateral Protegen todo el rostro Se retiran fcilmente en caso de accidente Varios diseos disponibles: desechables, de un solo uso; puricadoras de aire, de cara entera o de media cara; puricadoras de aire elctricas, de cara entera o con capucha; con suministro de aire De ltex, vinilo o nitrilo, aprobados para uso microbiolgico, desechables Proteccin de las manos De malla

Gafas de seguridad

Impactos

Viseras

Impactos y salpicaduras

Mascarillas respiratorias

Inhalacin de aerosoles

Guantes

Contacto directo con microorganismos Punciones o cortes

cada trabajador y probarse previamente. Los respiradores autnomos con suministro de aire integrado proporcionan proteccin completa. Para seleccionar el respirador correcto habr que solicitar el consejo de una persona debidamente cualicada, como un especialista en higiene laboral. Las mascarillas de tipo quirrgico estn diseadas exclusivamente para proteger a los pacientes y no ofrecen proteccin respiratoria a los trabajadores. Algunas mascarillas respiratorias desechables de un solo uso (ISO 13.340.30) estn diseadas para proteger de las exposiciones a agentes biolgicos. Las mascarillas respiratorias no deben usarse fuera del laboratorio.
Guantes

Las manos pueden contaminarse cuando se trabaja en el laboratorio. Tambin son vulnerables a las heridas producidas por objetos punzantes o cortantes. Los guantes
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desechables de ltex, vinilo o nitrilo de tipo quirrgico aprobados para uso microbiolgico son los ms extendidos para el trabajo general de laboratorio y para manipular agentes infecciosos, as como sangre y otros lquidos corporales. Tambin pueden usarse guantes reutilizables, pero hay que lavarlos, retirarlos, limpiarlos y desinfectarlos correctamente. Despus de manipular material infeccioso o trabajar en una CSB y antes de abandonar el laboratorio es preciso retirar los guantes y lavarse las manos concienzudamente. Los guantes desechables usados deben eliminarse junto con los residuos de laboratorio infectados. Se han noticado casos de reacciones alrgicas como dermatitis e hipersensibilidad inmediata despus de usar guantes de ltex, particularmente los que llevan polvo. Deber disponerse en el laboratorio de alternativas a ese tipo de guantes. Los guantes de malla de acero inoxidable se llevarn cuando haya posibilidad de exposicin a instrumentos cortantes o punzantes (por ejemplo, durante una autopsia). No obstante, esos guantes protegen contra los cortes pero no contra las punciones. Los guantes no deben usarse fuera de las zonas de laboratorio. Si se desea ms informacin, vanse las referencias 12, 17 y 18.

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