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Microbiologa General Facultad de Ciencias Exactas - UNLP LABORA OR!O " AN#L!$!$ M!CROB!OL%G!

CO &E MUE$ RA$ NA URALE$' (cnicas de aisla)iento* culti+o ,uro' Medios de culti+o selecti+os - di.erenciales' Los microorganismos se hallan ampliamente difundidos en la Naturaleza y uno de los procedimientos microbiolgicos fundamentales consiste en aislar los grmenes presentes en una determinada muestra. Las tcnicas utilizadas para realizar los aislamientos, dependen del tipo de muestra y de los microorganismos que pudieran estar presentes en la misma. As, el estado fsico de la muestra, su procedencia, la cantidad y tipos de bacterias presentes etc. determinarn los procedimientos a seguir. stos procedimientos incluirn una adecuada toma de muestra, su debido procesamiento pre!io al aislamiento "e#.$ dispersin de muestras slidas en medios acuosos adecuados% y la etapa de aislamiento en s. (cnicas de aisla)iento &i se coloca un solo microorganismo !iable sobre la superficie de un medio slido adecuado para su desarrollo se !er, luego de la incubacin, que ha tenido lugar un desarrollo macroscpico. ste desarrollo !isible se denomina colonia, y es el resultado de gran cantidad de di!isiones celulares a partir del organismo inicial. &upongamos que de una muestra lquida que contenga un gran n'mero de un medio slido contenido en una ca#a de (etri, de manera tal que las bacterias se )diluyan) en el rea sembrada. n alguna de las zonas, las bacterias habrn quedado lo suficientemente separadas como para formar colonias aisladas. n la figura puede apreciarse un esquema de una de las tcnicas ms utilizadas para el aislamiento de microorganismos. Los pasos a seguir se detallan a continuacin$ se toma parte de la muestra con una ansa, se disemina en un sector de la superficie del medio slido, se flamea el ansa y se !uel!e a tomar muestra de la superficie del medio. ste procedimiento se repite hasta que ya no queda espacio para realizar nue!as estras. n el esquema mostrado en la figura la muestra original se descarga inicialmente en las estras de la zona *, se flamea el ansa se toma muestra de un sector de la zona * y se disemina sobre la zona +. l procedimiento contin'a de la misma manera en otros sectores.

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+ 6 ,omo la finalidad del aislamiento es la obtencin de culti!os puros, es decir que estn compuestos por un solo tipo de microorganismos, es prctica com'n realizar sucesi!os aislamientos a partir de las colonias obtenidas en los distintos pasos. n algunas ocasiones, los microorganismos a aislar estn en una concentracin tan ba#a que es altamente improbable que al introducir un ansa en la misma se e-traiga alg'n microorganismo. &upongamos una muestra lquida con *. microorganismos/ml y perfectamente homogeneizada. &i tomamos el !olumen de un ansa en anillo "apro-imadamente 0 1l%, la probabilidad de no e-traer microorganismos ser p ".%2 e 3.,..0-*.2 .,40. s decir que la probabilidad de e-traer uno o ms microorganismos ser del 05. n el caso anteriormente descripto se hace necesario concentrar los microorganismos. sto puede lograrse mediante dos tcnicas$ * 7

Microbiologa General Facultad de Ciencias Exactas - UNLP a% 8iltracin con membranas$ 9n !olumen adecuado de la muestra lquida, se filtra a tra!s de una membrana de .,701m de dimetro de poro y luego se coloca la misma sobre un medio de culti!o slido, que permita el desarrollo de los microorganismos buscados. Luego de la incubacin se formarn colonias que pueden someterse a nue!os pasos de aislamiento. b% nriquecimiento en medios lquidos$ (ara muestras no filtrables se hace necesario recurrir a tcnicas de enriquecimiento en las que se busca aumentar la concentracin de los microorganismos a aislar. n los mtodos de enriquecimiento, se coloca en medio lquido una cantidad de muestra que contenga con seguridad uno o ms microorganismos !iables, se incuba para permitir el crecimiento y luego, cuando hay una cantidad suficiente de microorganismos, se e-trae una porcin con un ansa y se realizan estras sobre un medio slido. n general, suelen utilizarse medios de culti!o selecti!os para fa!orecer el desarrollo de la poblacin microbiana deseada. Los medios slidos utilizados luego del enriquecimiento pueden ser selecti!os o no. La utilizacin de diferentes medios para las tcnicas de aislamiento "selecti!os, diferenciales, etc.% permite obtener los microorganismos buscados independientemente de la comple#idad de la muestra. RABA/O E0PER!MEN AL Ob1eti+os2 - Anlisis cuantitati!o de poblaciones bacterianas de muestras naturales. 3 Aislamiento de microorganismos pertenecientes a los gneros y especie Pseudomonas aeruginosa, Bacillus cereus, Escherichia coli, utilizando las tcnicas de aislamiento directo y aislamiento con enriquecimiento pre!io. !ERRA (ara el anlisis cuanti y cualitati!o de la muestra de tierra proceder pesando *.g de tierra y suspender en *.. ml de solucin fisiolgica ".,:0g 5 de Na,l%. -traer en agitacin sua!e "*:. rpm% durante 6. min. ;etirar del agitador y de#ar sedimentar *. min. ;ealizar las siguientes determinaciones a partir del sobrenadante. a% ;ecuento de bacterias <etertrofas totales$ realizar diluciones seriadas de la muestra homogeneizada en solucin fisiolgica estril. Las diluciones a sembrar deben ser a#ustadas seg'n el origen de la muestra. (osteriormente, sembrar .,* ml de las diluciones adecuadas en superficie de agar nutriti!o, distribuir con la esptula de =rigals>y estril e incubar a 6?@, durante +737: hs. ;ealizar el recuento de las colonias desarrolladas en las correspondientes diluciones y calcular el n'mero de 98,/g de tierra. b% (ara el aisla)iento directo* sembrar con ansa, utilizando la tcnica de aislamiento, una placa de agar nutriti!o, una placa de agar cetrimide, una placa de agar Aossel y una de agar AB. Cncubar 7:hs a 6+@, y la ca#a de AB a 6?@,. c% (ara los enri3ueci)ientos, inocular los siguientes medios lquidos, seg'n las proporciones indicadas$ caldo nutriti!o suplementado con polimi-ina "*/*.%, caldo nutriti!o o agua peptonada "*/*.% y caldo Aac ,on>ey "*/*.%. Cncubar el enriquecimiento en caldo nutriti!o con polimi-ina a 6+@,, sobre el estante, el caldo nutriti!o a 6+@, con agitacin sua!e "*:.rpm% y el caldo Aac ,on>ey a 6?@, con agitacin sua!e "*:.rpm%. ;etirar todos los culti!os a las +7hs. d% Dbser!ar las placas de los aislamientos directos y seleccionar aquellas colonias que respondan a las caractersticas culturales de los microorganismos in!estigados. =e aquellas colonias +

Microbiologa General Facultad de Ciencias Exactas - UNLP seleccionadas, hacer obser!aciones microscpicas pre!ia coloracin de Eram. &eleccionar finalmente las colonias que re'nan las caractersticas macro y microscpicas de los microorganismos in!estigados. e% A ,artir de los enri3ueci)ientos , realizar los aislamientos en los medios selecti!os correspondientes a cada microorganismo. Cncubar +7 hs a 6+@, o a 6?@, seg'n corresponda. f% 8inalizada la incubacin, retirar las placas y obser!ar los desarrollos. &eleccionar aquellos correspondientes a los microorganismos in!estigados. Dbser!ar las caractersticas microscpicas pre!ia coloracin de Eram. g% ;eaislar en agar nutriti!o las colonias seleccionadas. Cncubar a 6+@,, durante +7hs. h% Luego de las incubaciones, obser!ar los desarrollos y !erificar la pureza de los aislados por obser!acin microscpica con coloracin de Eram. ;egistrar las caractersticas culturales y los resultados de la obser!acin microscpica para la posterior identificacin de los aislados. AGUA (ara el anlisis cuali y cuantitati!o de la muestra de agua, homogeneizar por in!ersin el recipiente. Las diluciones a sembrar deben ser a#ustadas seg'n el origen de la muestra. &eg'n referencias bibliogrficas el n'mero de bacterias hetertrofas totales oscila entre *0.. y F+.. 98,/ml y el n'mero de coliformes fecales entre *.. y *6.. cada *..ml "(rez y col., *446. ;e!ista Argentina de Aicrobiologa +0$ ?3*7%. a% ;ecuento de bacterias <etertrofas totales$ realizar diluciones seriadas de la muestra homogeneizada en solucin fisiolgica estril. (osteriormente sembrar .,*ml en superficie de agar nutriti!o, distribuir con la esptula de =rigals>y estril e incubar a 6?@, durante +737: hs. ;ealizar el recuento de las colonias desarrolladas en las correspondientes diluciones y calcular el n'mero de 98,/ml de agua. b% ;ecuento de la poblacin de coliformes fecales por la tcnica del N'mero As (robable "NA(%$ utilizar la muestra sin diluir, y dos diluciones seriadas de la misma "*. ., *.3*, *.3+%. Cnocular .,0 ml de cada dilucin en series de 6 tubos de caldo Aac ,on>ey con campanita de =urham "0 tubos de cada una de tres diluciones%. Cnocular 0..1l de las diluciones *.., *.3* y *.3+. Cncubar a 77@, durante +7hs. 8inalizada todas las incubaciones, registrar los tubos con desarrollo, !ira#e del indicador al amarillo y produccin de gas como 4 en cada dilucin, y calcular el tamaGo de las poblaciones "tabla NA(/programa NA(%. -presar los resultados como NA( de bacterias coliformes fecales/ml de agua. c% (ara el an5lisis cualitati+o, sembrar con ansa, directamente de la muestra de agua, utilizando la tcnica de aislamiento, una placa de agar nutriti!o, una placa de agar cetrimide y una de agar AB. Cncubar 7:hs a 6?@,. d% (ara los enri3ueci)ientos, inocular los siguientes medios lquidos con un !olumen de la muestra de agua, seg'n las proporciones indicadas$ caldo nutriti!o o agua peptonada "*/*.% y caldo Aac ,on>ey doble concentracin "*/*%. Cncubar los enriquecimientos a 6?@, con agitacin sua!e "*:.rpm%. ;etirar todos los culti!os a las +7hs. ,ontinuar seg'n los incisos e% hasta h% e-plicados para la muestra de tierra. Microorganis)o Pseudomonas aeruginosa Bacillus cereus Escherichia coli Staphylococcus sp. Medio de enri3ueci)iento ,aldo nutriti!o o agua peptonada "..*5% ,aldo nutriti!o con polimi-ina ,aldo Aac ,on>ey ,aldo nutriti!o salado "*.5 Na,l% Condiciones de incubaci6n A 6+@, con agitacin A 6+@, en estante A 6? @, con agitacin A 6? @, Medio de aisla)iento Agar cetrimide Agar Aossel Agar AB Agar Aanitol &alado

Microbiologa General Facultad de Ciencias Exactas - UNLP Medios de culti+o utili7ados en el aisla)iento de enterobacterias Caldo MacCon8e- 9g:l; (eptona de casena Lactosa Bilis de buey desecada ('rpura de bromocresol Agua destilada c.s.p. p< 2 ?,+ +. *. 0 .,.* *... ml

Agar Eosina A7ul de Metileno 9EMB; 9g:l; (eptona *. Lactosa 0 &acarosa 0 (D7H+< + osina .,7 Azul de metileno .,.F0 Agua destilada c.s.p. *... ml Agar *6,0 p< 2 ?,+ Medios de culti+o utili7ados en el aisla)iento de Pseudomonas s,,' Medio Mineral L3uido 9MML; 9g:litro; ,lNa 0 (D7H+< * (D7"N<7%<+ * &D7"N<7%+ * &D7Ag .,+ ND6H 6 Agua destilada c.s.p. *... ml. p< 2 ? Agar Cetri)ide 9g:l; (eptona de gelatina ,loruro de magnesio &ulfato de potasio Agar ,etrimida Elicerol p< final$ ?.+ I ..+ +... *.7 *... *6.F ..6 *. ml

Medios de culti+o utili7ados en el aisla)iento de Bacillus s,,' Caldo nutriti+o 9g:l; -tracto de carne 6.. (eptona 0.. p< final$ F.4 I ..+ Luego de esterilizar el caldo nutriti!o agregar aspticamente .,.* g de sulfato de polimi-ina B. 7

Microbiologa General Facultad de Ciencias Exactas - UNLP Agar selecti+o ,ara Bacillus cereus segn Mossel 9g:l; (eptona de carne *... Aanitol *... ,loruro de sodio *... -tracto de carne *.. ;o#o de fenol ...+0 Agar *7.. Luego de esterilizar el medio base agregar aspticamente al medio fundido y a 0.@,, .,.* g de sulfato de polimi-ina B y *.. ml de emulsin de yema de hue!o. p< final$ ?.+ I ..+ Agar nutriti+o 9g:l; -tracto de carne (eptona Agar p< final$ F,4 I .,+ 6 0 *0

$EM!NAR!O N<" An5lisis de una )uestra2 aisla)iento - obtenci6n de culti+os ,uros' Medios de culti+o' *. 8ormule cualitati!amente un medio de culti!o comple#o mencionando qu aporta cada componente. J,mo hara para transformarlo en un medio sintticoK +. J,ul es la funcin del agar en un medio de culti!oK J(or qu es el agente elegidoK J(odra utilizar gelatina en su reemplazoK Lustifique. 6. (roponga un medio de culti!o "cualitati!o% y condiciones de incubacin para un microorganismo hetertrofo, halfilo, termfilo y anaerobio facultati!o. 7. -plique mediante que mecanismos e#ercen accin selecti!a los siguientes agentes$ cloruro de sodio, antibiticos, o-geno, incubacin a 70M,, acidez, bilis. 0. J,ules de los siguientes agentes poseen funcin buffer$ glucosa, cloruro de sodio, fosfato cido de potasio, peptona, agar, cloruro de amonio e-tracto de carne, citrato de sodioK -plquelo mediante las correspondientes ecuaciones qumicas. F. &e tienen dos microorganismos, uno de ellos es capaz de utilizar manitol como fuente de carbono mientras que el otro no. 8ormule un medio de culti!o para poner en e!idencia ambos microorganismos al mismo tiempo. ?. Los medios listados a continuacin fueron utilizados en el laboratorio para la caracterizacin de Bacillus cereus y Staphylococcus aureus respecti!amente. Medio de Mossel peptona de casena e-tracto de carne Na,l ro#o de fenol sulfato de polimi-ina yema de hue!o manitol agar3agar *. g/l * g/l *. g/l ...+0 g/l 0..... 9C/l *.5 !/! *. g/l *+ g/l Agar-manitol-sal comn-rojo de fenol peptona de casena e-tracto de carne Na,l ="3%manitol ro#o de fenol agar3agar

*. g/l *.. g/l ?0 g/l *... g/l ...+0 g/l *+ g/l

a3 Cndique si se trata de medios selecti!os y/o diferenciales. Lustifique indicando qu componente/s da la selecti!idad y diferencialidad a cada medio. b3 Cndique cul/es componente aportan fuente de ,, energa, y factores de crecimiento. c3 n base a los caracteres diferenciales indicados en el inciso a, e-plique como obser!ara las diferentes colonias en ambos medios. :. JLos microorganismos anaerobios son capaces de crecer en los mismos medios que los aerobiosK Lustifique. 4. Cndique los principales componentes de un medio de culti!o para anaerobios seGalando la importancia de cada uno.

*.. JAsegurara anaerobiosis total poniendo sobre el culti!o una capa de !aselinaK J,mo me#orara el mtodoK **. n condiciones de incubacin anaerbicas, Jslo desarrollan microorganismos anaerbicos estrictosK Lustifique. *+. 9sted recibe en su laboratorio una muestra de un pol!o antimictico presuntamente contaminado con un bacilo esporulado. J,mo procedera para su aislamiento e identificacinK -plique y #ustifique bre!emente cada paso. *6. 9d. decide in!estigar la muestra de las aguas del ;o Negro y los canales de riego alimentados por l, en las inmediaciones de la ciudad de NiedmaO realizando los siguientes estudios$ a% Aislamiento de los microorganismos que se encuentran en la muestra de agua en mayor concentracin "suponga que son microorganismos anaerobios facultati!os, hetertrofos y nutricionalmente poco e-igentes%. b% =esea descartar la presencia de Vibrio cholerae en 0.. ml de una muestra que 9d. mismo tom. (ara ello cuenta con los siguientes medio de culti!o$ Agar CB$ "agar3tiosulfato3citrato3sales biliares3sacarosa%$ las ele!adas concentraciones de tiosulfato, citrato y el medio fuertemente alcalino inhiben a las nterobacterias. La bilis de buey inhibe a los nterococos. &olamente algunas cepas de (roteus sacarosa3positi!as pueden formar colonias amarillas seme#antes a las que forman los !ibrios. l indicador mi-to Azul de Pimol3 Azul de Bromotimol presenta un !ira#e al amarillo por la formacin de cido, incluso en medio fuertemente alcalino. -plique claramente como procedera para descartar la presencia de !ibrio. ;ecuerde la morfologa tpica que presentan las bacterias pertenecientes al gnero Vibrio. *7. Cndustrias de distintos orgenes !ierten en el ;o de la (lata aguas residuales que contienen compuestos t-icos inorgnicos tales como metales pesados con#untamente con compuestos orgnicos. =ichos elementos en!enenan los ecosistemas acuticos. ,on el fin de e!aluar la posibilidad de efectuar un tratamiento biolgico, usted desea demostrar que e-isten microorganismos capaces de utilizar fenol como 'nica fuente de carbono y que a su !ez tengan alta resistencia a los metales pesados tales como el cromo. a% J,mo realizara el aislamiento de bacterias capaces de utilizar fenol como 'nica fuente de carbono, a partir de una muestra de agua del ;o de la (lataK li#a adems, aquellas que sean capaces de producir halo de hemlisis en un medio de agar sangre. b% 9sted sabe que las bacterias aisladas son capaces de crecer en agar nutriti!o. -plique como hara si desea conocer si son capaces de desarrollar en presencia de 0.mg/l de cromo. *03 9sted traba#a en un laboratorio de control de calidad de una fbrica de medicamentos. Al realizar el anlisis microbiolgico de uno de los productos elaborados, encuentra que ste tiene un n'mero de microorganismos !iables de *.7/g y presencia de Sthaphylococcus aureus en * gramo. 9d. sabe que este microorganismo es un coco Eram positi!o, que se agrupa formando racimos, que tolera altas concentraciones de cloruro de sodio y utiliza el manitol. -plique detalladamente como procedera para aislar Sthaphylococcus aureus de esta muestra hasta la obtencin de un culti!o puro. *F3 n la Argentina, las enfermedades transmitidas por alimentos " PAs% producidas por Salmonella ocupan un lugar preponderante por la gra!edad del cuadro clnico. Los brotes de Salmonella se hallan asociados a di!ersos alimentos, entre ellos$ crneos, leche y sus deri!ados,

hue!os, tortas, cremas, etc. l ,AA e-ige, en determinados alimentos, ausencia de este microorganismo en +0 g de muestra. &e dispone de los siguientes medios de culti!o$ Caldo $elenito-Cistena n este medio de culti!o, el selenito de sodio inhibe flora Eram positi!a y la mayora de la flora entrica e-cepto Salmonella spp. La l3cistina es el agente reductor y fue propuesta por la 8=A para el aislamiento de &almonella en productos alimenticios incrementando la recuperacin por reduccin de la to-icidad del selenito. F6r)ula 9en gra)os ,or litro; (eptona 0.. Lactosa 7.. 8osfato de sodio *... &elenito de sodio 7.. L3,istina ...* p< final$ ?.. I ..+ !nstrucciones &uspender +6 g del pol!o en un litro de agua destilada. Aezclar bien y calentar ligeramente hasta disolucin completa. !ite el calentamiento e-cesi!o y no esterilice en autocla!e.

Agar $$ n este medio de culti!o la sales biliares y el !erde brillante inhiben el desarrollo de bacterias Eram positi!as, de la mayora de los coliformes y el desarrollo in!asor del Proteus spp. A partir del tiosulfato de sodio se puede e!idenciar las bacterias formadoras de cido sulfhdrico. Los pocos microorganismos fermentadores de lactosa capaces de desarrollar, acidifican el medio haciendo !irar al ro#o el indicador de p<, obtenindose colonias rosadas o ro#as sobre un fondo ro#izo. Salmonella, Shigella y otros microorganismos no fermentadores de lactosa, crecen bien en el medio de culti!o, y producen colonias transparentes. La produccin de cido sulfhdrico se e!idencia como colonias con centro negro debido a la formacin de sulfuro de hierro. F6r)ula 9en gra)os ,or litro; !nstrucciones (luripeptona 0.. -tracto de carne 0.. &uspender F. g del pol!o por litro de Lactosa *... agua destilada. ;eposar 0 minutos y Aezcla de sales biliares :.0 mezclar hasta homogeneizar. ,alentar ,itrato de sodio :.0 a ebullicin durante + o 6 minutos. ND &P ;CLCQA; N A9PD,LAN . Piosulfato de sodio :.0 nfriar a 7030.M, y distribuir unos +. ,itrato frrico *.. ml por placa. &ecar la superficie del Agar *6.0 medio unos minutos en la estufa. Nerde brillante .....66 ;o#o neutro ...+0 p< final$ ?.. I ..+ Agar nutriti+o2 g/litro (eptona de carne 0g -tracto de carne 6g Agar3agar *0 g Agua destilada *...ml

p<2 ?

a% ,lasifique los medios de culti!o empleados. Lustifique su clasificacin. :

b% -plique que aportan al medio de culti!o los siguientes componentes$ la pluripeptona, el e-tracto de carne y la lactosa. c% n el agar nutriti!o que componente/es aportan los micronutrientes y los factores de crecimientoK d% J,mo demostrara ausencia de Salmonella en este producto, si sigue las normas del ,AA . Cndique medios de culti!o, cantidades a procesar, diluciones, temperaturas y tiempos de incubacin. *?3 Los parmetros a testear en un control microbiolgico de una crema de en#uague para cabellos son los siguientes$ R ;ecuento de <etertrofas Aesfilas PotalesS *-*.6 98,/ml R ;ecuento de hongos y le!aduras S * - *.+ 98,/ml R Ausencia de E. coli en * gr. R Ausencia de Pseudomonas! aeruginosa en * gr. R Ausencia de Staphylococcus aureus en * gr. J,mo demostrara la ausencia de Pseudomona aeruginosaK *:3 ,on el propsito de conocer la calidad sanitaria de helados de fabricacin industrial y la presencia de especies patgenas se e-aminaron una serie de muestras procedentes de 0 establecimientos de &an Luis. &e in!estig la presencia de especies patgenas de Staphylococcus aureus y "ersinia enterocol#tica en * g. &e dispone de los siguientes medios de culti!o$ 3 Caldo GC$ peptona, e-tracto de carne, e-tracto de le!adura, ,lLi "inhibidor de Eram"3%%, manitol, ,lNa, glicina, piru!ato sdico y como aditi!o telurito potsico "inhibidor de Eram"T%%. l desarrollo de S. aureus se pone en e!idencia por ennegrecimiento del medio debido a la reduccin de telurito a teluro. 3 Caldo Mac Con8e-2 (eptona de casena, Lactosa, Bilis de buey desecada, ('rpura de bromocresol' 3 Agar nutriti+o2 (eptona de carne, -tracto de carne y Agar3agar. 3 Agar BP$ peptona, e-tracto de carne, e-tracto de le!adura, piru!ato de sodio, glicina, ,lLi y agar' Uema de hue!o y telurito de potasio, como aditi!os. a% ,lasifique el caldo E, y el agar B(, y e-plique que aportan al medio de culti!o cada uno de los componentes. b% =escriba el procedimiento para demostrar la ausencia de St. aureus por g de helado, indicando la tcnica, medios de culti!o y condiciones de incubacin. ;ecuerde que St. aureus es un coco EramT, anaerobio facultati!o, reduce las sales de telurito a teluro con ennegrecimiento del medio e hidroliza lecitina "fosfolpido%. *43 =urante un !uelo, se sir!i a los pasa#eros una comida que incluy #amn. =os horas despus de la comida, la mayora de los pasa#eros sufri nuseas y !mitos. &lo un tercio de estos indi!iduos padeci, adems, diarrea. A partir del anlisis de una muestra se obtu!o una colonia con caractersticas de S. aureus. Los pasa#eros haban ingerido un alimento contaminado con una de las muchas to-inas de este microorganismo. l S. aureus causa enfermedades muy !ariadas y de las enfermedades bacterianas transmitidas por los alimentos, slo la causada por Bacillus cereus tiene sntomas similares. S. aureus es un coco Eram "T%, inm!il, que crece en grupos o racimos y coloniza la parte e-terna de las fosas nasales del 6.5 de los indi!iduos normales. sta bacteria es productora de hemolisinas, y e-creta una enzima denominada coagulasa que es capaz de coagular el plasma normal y tiene gran utilidad para diferenciarlo de otras especies del mismo gnero que no son capaces de producirla. Adems, fermenta manitol, fermenta glucosa y algunas cepas generan !estigios de &<+. B. cereus es un bacilo Eram "T%, m!il, esporulante, fermentador de glucosa pero

no de manitol, productor de lecitinasa y hemolisina. Peniendo en cuenta las caractersticas de cada microorganismo, proponga un esquema de aislamiento que permita diferenciar ambos microorganismos. specifique la muestra o muestras de partida, los medios y condiciones de culti!o empleados y la metodologa utilizada.

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