MICOLOGA: LOS HONGOS

1. 2. OBJETIVOS Conocerla metodologa para diagnosticar micosis en el laboratorio. Reconocerlas principales caractersticas macro, microscpicas de los hongos. Identificar las diferentes especies de inters mdico-estomatolgico. INTRODUCCIN Los hongos son organismos eucariontes, sus paredes celulares estn compuestas por carbohidratos complejos tales como la quitina, glucano, manano, celulosa, etc. Son hetertrofos, no realizan fotosntesis por carecer de clorofila. Aproximadamente existen 50,000 especies de hongos, de ellos 300 ms o menos son patgenos, otros son no patgenos y un gran grupo son utilizados en diversas industrias (cervecera, panifacin, vitivincola, farmacutica, etc.). Desde el punto de vista celular los hongos pueden ser de dos clases: Unicelulares o levaduriformes y miceliales o pluricelulares.

3.

MATERIALES PARA LA PRCTICA: Placa petri con Agar Sabouraud y otro con Agar Sangre Hidrxido de potasio al 10 20% - Azul de Lactofenol Lminas montadas de hongos unicelulares, pluricelulares. Lminas cultivadas (microcultivos) - Cultivos de hongos Microscopio binocular.

4.

PROCEDIMIENTO: Muestras biolgicas de micosis superficiales: Piel, cabellos o uas. En micosis sistmicas que afecten rganos internos como pulmones, intestinos, ganglios linfticos, cavidad bucal, etc., la muestra ser SANGRE, esputo, biopsias, etc.

Coloracin y Microscopa: Las muestras de micosis superficiales deben ser desqueratinizadas con hidrxido de potasio al 10 al 20%, luego se colorean con Azul de Lactofenol; dependiendo del tipo de hongos que se busca..

Siembra Micolgica: Los medios de cultivo ms utilizados son: - Agar Sabouraud - Agar Sangre - Infusin de cerebro y corazn (BHI) - Agar Levadura - Mycobiotic Agar

- Agar Mycophil - Agar Mycosil - Agar Sangre - Glucosa cisteina - Agar Lctosado de Sabouraud -Czapeck

Los hongos unicelulares o levaduriformes se incuban a 37 C por 72 horas, mientas que los pluricelulares o miceliales se incuban a la temperatura ambiental de 5 a 7 das. Mtodos indirectos para diagnstico de micosis sistmicas o profundas.

A.

Intradermo - reacciones: - Histoplasmina - Paracoccidiodomicotina - Esporotriquina - Candidina.

B.

Reacciones Serolgicas: - Aglutinacin - Precipitacin - Fijacin de complemento - Inmunodifusin

C.

Pruebas anatmo - patolgicas.

DIAGNOSTICO DE ALGUNAS MICOSIS SISTMICAS 1. Candidiasis Muestras: Incluyen frots y raspado de lesiones superficiales, sangre, lquido cefalorraqudeo, biopsia de tejido, orina, exudados, material retirado del catter intravenoso. Microscopa: Buscando clulas en gemacin y seudohifas (lo que confirma la presencia de Candida albicans). Cultivo: En sabouraud se observan las colonias cremosas y pequeas. Se pueden hacer algunas pruebas bioqumicas (fermentacin de carbohidratos). Serologa: Estas pruebas tienen uso limitado, pudiendo usarse tambin intradermo reacciones como candidina.

2.

Histoplasmosis Muestras para cultivo: Esputo, orina, raspado de lesiones superficiales, aspirado de mdula sea. Coloracin y Microscopa: Los cortes histolgicos se colorean con Giemsa, se observan levaduras en forma de clulas ovoides dentro de las clulas del tejido afectado. Cultivo: En sabouraud (a 25 30C). Tambin puede emplearse Agar sangre glucosa cisteina a 37C (la incubacin es de cuatro semanas como mnimo). Serologa: Las pruebas se hacen positivas entre la segunda a quinta semana despus de la infeccin. Intradermo-reaccin: Esta prueba cutnea con histoplasmina se hace positiva despus de la infeccin y permanece positiva durante varios aos.

3.

Paracoccidioidomicosis Muestras Biolgicas: Esputo, exudado de las lesiones bucales, biopsia. Microscopa: En la microscopa directa de estas muestras, aparecen las levaduras. Cultivo: Los cultivos en Agar Sabouraud o en Agar estracto de levadura, se incuban a la temperatura ambiental, observndose formas miceliales, se confirman su dimorfismo, cuando se cultiva a 37C observndose levaduriformes. Serologa: La prueba ms rpida es Elisa.

HONGOS UNICELULARES

Paracoccidioides brasiliensis

Candida Albicans

Componentes del Agar Sabouraud:

- ph 5.6. - Neopeptona oTriptosa - Lactoglucosa o Maltosa - Agar - Agua Destilada

Agar para hongos muy patgeno (muestras muy contaminadas)

- Ideal para dermatofitos - Peptona de soya - Glucosa - Ciclo heximida - Cloranfenicol - Agar agar

Micosis Bucales
Candidiasis bucal: Es un estado inflamatorio, infeccioso; caracterizado por la presencia marchas blancas con aspecto de leche coagulada localizadas en comisuras labiales, lengua, enca, paladar, al ser removidos dejan una superficie sangrantes (agente causal: candida albicans).

Histoplasmosis: Micosis infecciosa inflamatoria afecta piel y mucosas de la cavidad bucal, lcera granulada rodeada de decoloracin purpurea (agente causal: histoplasma capsulatum).

Paracoccidiomicosis: Pulmonar, mucosa nasal, mucosa bucal son afectados por el hongo Paracoccidioides brosilicuis, las lesiones en lceras ropas con fondo amarillento granular.