Disciplina de Medicina e Sociologia do Abuso de Drogas Departamento de Psicobiologia UNIFESP USO ABUSIVO DE SUBSTNCIAS PSICOATIVAS: Prevalncia Brasil Populao geral Fonte: CEBRI D, Levantamento domiciliar, 2005 Drogas mais experimentadas (uso na vida) so as que tm maior prevalncia de dependncia Dados da Organizao Mundial de Sade (2004)*: 2 Bilhes de pessoas consomem bebidas alcolicas Uso prejudicial/dependncia lcool: 76,3 milhes outras substncias psicoativas: 15,3 milhes No Brasil: - At 2001: poucos dados sobre a prevalncia de problemas associados ao uso de lcool e outras drogas na populao geral, restritos a determinadas cidades/regies ou populaes estudantis. - Segundo levantamentos realizados pelo CEBRID (Centro Brasileiro de Informaes sobre drogas psicotrpicas, setor do Departamento de Psicobiologia da Unifesp) entre 1987 e 1997 (Galdurz et el., 1997), em mdia, o uso freqente de lcool foi relatado por 6,4% dos estudantes e o de outras drogas por 3,1%. * Fonte:WHO Global Status Report (2004) www.who.int - Publications Problemas associados ao uso de substncias psicoativas Um espectro de problemas relacionados ao uso... considerando todos os indivduos com problemas e seus colaterais... CONSUMO ABUSO PROBLEMAS RISCO DEPENDNCIA SNDROME DE DEPENDNCIA DE DROGAS "Um conjunto de fenmenos fisiolgicos, comportamentais ou cognitivos, no qual o uso da substncia alcana uma prioridade muito maior para um determinado indivduo que outros comportamentos que antes tinham maior valor. Uma caracterstica descritiva central da sndrome de dependncia o desejo (freqentemente forte, algumas vezes irresistvel) de consumir drogas psicoativas (as quais podem ou no ter sido medicamente prescritas), lcool ou tabaco. Pode haver evidncia que o retorno ao uso da substncia aps um perodo de abstinncia leva a um reaparecimento mais rpido de outros aspectos da sndrome do que o que ocorre com indivduos no dependentes" (CID-10, Organizao Mundial de Sade, 1994). SNDROME DE DEPENDNCIA: CONCEITO CRITRIOS DIAGNSTICOS: 1. Estreitamento do repertrio; 2. Salincia do comportamento de busca; 3. Tolerncia; 4. Sndrome de Abstinncia; 5. Esforos mal-sucedidos em parar/controlar. 6. Fissura/Compulso 7. Reinstalao Porcentagens de dependentes no Brasil LCOOL 12,3 % TABACO 10,1 % BENZODIAZEPNICOS 0,5 % MACONHA 1,2 % SOLVENTES 0,2 % ESTIMULANTES 0,1 % II LEVANTAMENTO DOMICILIAR SOBRE O USO DE DROGAS PSICOTRPICAS NO BRASIL (CEBRID-SENAD 2006) ABSTMIOS OCASIONAIS REGULARES USO ABUSIVO DEPENDENTES Abuso/dependncia de lcool: responsvel por 90 a 94% das internaes por problemas associados ao uso de substncias psicoativas em hospitais psiquitricos brasileiros. (CARLINI & CARLINI-COTRIM, 1995) 19,5% homens 6,9% mulheres Por que algumas pessoas se tornam dependentes de substncias psicoativas e outras no? GENTICA Desenvolvimento maturao do SNC gnero, etc COMPORTAMENTO NEUROBIOLOGIA AMBIENTE As teorias diferem quanto ao peso que atribuem aos fatores que influenciam o estabelecimento da dependncia de drogas Por que nem todos os indivduos se tornam dependentes? Indivduo Droga vias de administrao fatores genticos uso prvio de drogas contexto social estresse Co-morbidades psiquitricas WEST (2001) classifica as teorias sobre dependncia em 5 grupos, de acordo com o foco principal ser: 1. O fenmeno como um processo geral 2. Os efeitos do estmulo gerador de dependncia 3. A suscetibilidade individual 4. Os fatores ambientais 5. A recada e a recuperao Teorias sobre a etiologia da dependncia de substncias psicoativas Teorias sobre a etiologia da dependncia de substncias psicoativas A existncia de tantas teorias indica que provavelmente nenhuma delas suficientemente abrangente para explicar o fenmeno, havendo muitas lacunas de conhecimento a serem preenchidas. Entre as teorias que procuram explicar porque algumas drogas tm alta propenso para desencadear dependncia, destacam-se os trabalhos de WIKLER (1973) e WISE & BOZART (1987) Segundo eles, as drogas de abuso seriam utilizadas por suas propriedades reforadoras positivas e negativas: - positivas: efeito prazeroso, euforia - negativas: evitao de: desconforto, estados ansiosos e/ou depressivos, sintomas de abstinncia Embora os mecanismos associados ao efeito reforador negativo variem, parece existir um mecanismo comum, compartilhado por todas as drogas de abuso, em relao aos efeitos reforadores positivos. Efeitos reforadores das drogas de abuso Teoria do incentivo-sensibilizao Como as drogas psicotrpicas agem como reforo positivo? Teoria do incentivo-sensibilizao ao efeito reforador positivo Os sistemas neurais envolvidos no desenvolvimento da dependncia de drogas seriam os mesmos do sistema de recompensa do crebro (principalmente vias dopaminrgicas mesolmbica e mesocortical) ativado por recompensas naturais (gua, comida, sexo, etc) reas cerebrais que estimuladas eletricamente causam prazer (humanos) que provocam auto-estimulao (animais).possuem stios de ligao (receptores ou canais inicos) aos quais se ligam as drogas psicotrpicas. Antagonistas destes receptores (ex. neurolpticos) reduzem os efeitos reforadores tanto de recompensas naturais, como da estimulao cerebral como do prazer decorrente da administrao de drogas Efeito reforador das drogas de abuso Reforo: Estmulo contingente a uma resposta comportamental, que aumenta a freqncia dessa resposta A dependncia seria mantida pelo desejo de obter prazer Teoria: o consumo da droga mantido devido aos efeitos reforadores da droga (~ prazer) Computador Bomba de infuso de droga Catter barra Intravenosa Animais consomem voluntariamente drogas de abuso: modelos de auto-administrao Roberts and Koob, 1997 Animais consomem voluntariamente drogas de abuso auto-administrao oral GABA lcool nicotina ACh lcool PCP Glu DA anfetamina cocana opiides maconha alucingenos 5HT Adaptado de Stahl S M, Essential Psychopharmacology (2000) Proposto mecanismo biolgico comum s drogas de abuso: aumento da liberao do neurotransmissor dopamina nas vias mesolmbica e mesocortical (por mecanismos diretos ou indiretos). Di Chiara & Imperato 1988; Nestler 2001 Mecanismo biolgico comum para as drogas MORFINA Stahl S M, Essential Psychopharmacology (2000) GABA lcool nicotina ACh lcool PCP Glu DA anfetamina cocana opiides maconha alucingenos 5HT Adaptado de Stahl S M, Essential Psychopharmacology (2000) O transportador de O transportador de dopamina dopamina DAT dopamina cocana receptor Cocana - inibe a ao do transportador, prolongando a disponibilidade sinptica de DA Mecanismos de ao das drogas de abuso Anfetamina e Cocana Anfetamina - aumenta diretamente a liberao de DA e NA. A DA liberada ativa a expresso de genes que fabricam RNAm, conhecido como CART (transcrito regulado por anfetamina e cocana). Em seguida ocorre a sntese de vrios peptdeos neurotransmissores CART. CAR T CART CART peptide Adaptado de Stahl S M, Essential Psychopharmacology (2000) GABA lcool nicotina ACh lcool PCP Glu DA anfetamina cocana opiides maconha alucingenos 5HT Adaptado de Stahl S M, Essential Psychopharmacology (2000) Mecanismos de ao das drogas de abuso Alucingenos Alucingenos, drogas "projetadas" (designer drugs) - as drogas psicodislpticas, ou psicodlicas, produzem alteraes na percepo, podendo gerar alunicaes e iluses visuais, tteis, auditivas ou at mesmo estados psicotomimticos. - Indolalquilaminas (LSD, psilocibina, dimetiltriptamina -DMT) possuem semelhana estrutural com a serotonina - Fenilalquilaminas (mescalina, 2,5,dimetoxi-4metilanfetamina - DOM), anfetaminas em altas doses -relacionadas estruturalmente com dopamina e noradrenalina. Drogas "projetadas"- destaca-se o MDMA (3,4 metilenodioximetanfetamina) - conhecido como"ecstasy" Podem atuar em vrios sistemas de neurotransmisso, mas em geral atuam como agonistas parciais dos receptores 5HT2A em stios serotoninrgicos ps- sinpticos e tambm em auto-receptores somatodendrticos 5HT1A. Psilocibina Mescalina MDMA LSD serotonina 5HT2A 5HT2A Adaptado de Stahl S M, Essential Psychopharmacology (2000) GABA lcool nicotina ACh lcool PCP Glu DA anfetamina cocana opiides maconha alucingenos 5HT Adaptado de Stahl S M, Essential Psychopharmacology (2000) Mecanismos de ao das drogas de abuso Fenilciclidina, Maconha Fenilcilidina - antagonista de glutamato, age como modulador aloestrico do receptor glutamtrgico NMDA, bloqueando-o e reduzindo o fluxo inico para o interior da clula. Maconha - o princpio ativo delta- 9-tetra-hidrocanabinol (THC) age em receptores canabinides CB1 (acoplado a protena G, modula adenilciclase e canais inicos) e desencadeia liberao de DA. PCP Glutamato stio de PCP THC Adaptado de Stahl S M, Essential Psychopharmacology (2000) GABA lcool nicotina ACh lcool PCP Glu DA anfetamina cocana opiides maconha alucingenos 5HT Adaptado de Stahl S M, Essential Psychopharmacology (2000) Mecanismos de ao das drogas de abuso Nicotina Nicotina- age diretamente em receptores colinrgicos nicotnicos (A e B) localizados nos neurnios dopaminrgicos mesolmbicos e desencadeia liberao de DA. acetilcolina receptor de nicotina Adaptado de Stahl S M, Essential Psychopharmacology (2000) GABA lcool nicotina ACh lcool PCP Glu DA anfetamina cocana opiides maconha alucingenos 5HT Adaptado de Stahl S M, Essential Psychopharmacology (2000) Mecanismos de ao das drogas de abuso- Opiides Adaptado de Stahl S M, Essential Psychopharmacology (2000) Prodinorfina Dinorfina POMC Beta Endorfinas Proencefalina Encefalina s receptores opiides POMC=pro-opiomelacortina Opiides endgenos - existem no organismo opiides endgenos, peptdeos derivados da pro-opiomelacortina (POMC), pr-encefalina e pr-dinorfina. oxicodona morfina hidrocodona metadona herona codena As drogas opiides como morfina, herona, metadona, codena e buprenorfina atuam sobre os receptores opiides (mu,delta e kappa). GABA lcool nicotina ACh lcool PCP Glu DA anfetamina cocana opiides maconha alucingenos 5HT Adaptado de Stahl S M, Essential Psychopharmacology (2000) Mecanismos de ao das drogas de abuso- Opiides Na ATV os neurnios so estimulados tonicamente pelas beta- endorfinas, que modulam o funcionamento do interneurnio gabargico. No ncleo accumbens as dinorfinas podem suprimir a liberao de DA. A ao dos dois sistemas de opiides endgenos necessria para manuteno da liberao basal de DA. (Figura adaptada de Spanagel et al., 1995) Adaptaes com uso repetido A repetio do uso repetido de drogas produz alteraes no sistema (tolerncia e/ou sensibilizao), que contribuem para aumentar a "salincia" do incentivo e o desejo de consumir mais drogas). Tolerncia: necessrio um aumento da dose para a obteno do mesmo efeito inicial ou aps uma mesma dose o efeito menor. Administrao crnica (mesma dose) DROGAS EFEITO TOLERNCIA Barbitricos Sedativo + Anticonvulsivante - Opiceos Euforignico + Miose - Analgsico + A tolerncia se desenvolve aos EFEITOS de uma droga e no droga em geral. Tolerncia Tolerncia "inata" Fatores genticos animais que preferem lcool desenvolvem tolerncia mais facilmente do que os que no preferem sob mesmos nveis de alcoolemia filhos de alcolatras apresentam menores efeitos subjetivos de intoxicao (efeito depressor) do que filhos de no alcolatras Tolerncia disposicional (metablica ou farmacocintica) se refere s mudanas adaptativas que resultam em menores concentraes da droga nos stios de ao Conseqncias das alteraes metablicas induzidas pela induo enzimtica devida ao uso crnico de lcool: tolerncia cruzada com benzodiazepnicos e barbitricos aumento da degradao de acetaminofem levando a acmulo de metablitos hepatotxicos Tolerncia aguda Durante uma administrao aguda o efeito observado na poro ascendente (A) da curva de concentrao da droga maior do que o observado na poro descendente (D), na mesma concentrao. concentrao da droga tempo A B Tolerncia funcional (tissular ou farmacodinmica) se refere a alteraes no local de ao fisiolgica: devida a alteraes no nmero de receptores na afinidade de receptores na composio da membrana Possveis alteraes na sensibilidade induzidas pela administrao de drogas supersensibilidade subsensibilidade Taquifilaxia: aps exposio crnica h reduo do efeito mximo atingido, mesmo aumentando a dose ( aps um perodo de abstinncia o efeito inicial pode ser obtido novamente) Ex: LSD, mescalina, psilocibina Tolerncia dependente do ambiente ou comportamentalmente aumentada Pessoas apresentam maior tolerncia se testadas em bares do que em escritrios. O desempenho repetitivo de uma tarefa de num determinado ambiente aumenta a velocidade de aquisio da tolerncia, mas esta no transferida quando a tarefa realizada em outro ambiente. imaginar a realizao da tarefa durante a intoxicao alcolica tambm acelera o desenvolvimento de tolerncia (Vogel-Sprott et. al 1984) (Chen 1968, LeBlanc et al. 1973 ratos que recebem lcool num ambiente e placebo em outro apresentam diferentes nveis de tolerncia aos efeitos sedativos e hipotermizantes somente no ambiente onde receberam lcool e no naquele em que receberam placebo. Mecanismos moleculares da Tolerncia Tolerncia comportamental, intrnseca e extrnseca Tolerncia comportamental - medida no nvel de atividade do animal (como um todo), resultante de interaes mtuas entre vrias estruturas cerebrais e com outros sistemas. Hoffman and Tabakoff (1989) classificam como: tolerncia intrnseca devida a alteraes nos neurnios que controlam o comportamento Tolerncia extrnseca devida a adaptaes comportamentais por meio de alteraes em circuitos neuronais compensatrios ( por ex. no tolerncia molecular em um circuito primrio) Velocidade de desenvolvimento A tolerncia tambm pode ser aguda, rpida ou crnica Aguda: dentro da mesma ocasio (minutos) Rpida: de 8 a 24 h - tem semelhana com a crnica Crnica: aps dias de uso contnuo ou intermitente Tolerncia Celular - avaliada no nvel do tecido neuronal - rede de alteraes em um neurnio ou conjunto de clulas, envolvendo alteraes em canais inicos, receptores, etc. Ainda no est completamente claro como levam s alteraes comportamentais. Perda de tolerncia: aps perodo de abstinncia a tolerncia pode ser perdida levando a overdoses acidentais. Reaquisio da tolerncia: aps o perodo de perda de tolerncia a reaquisio ocorre de maneira mais rpida que a aquisio inicial. As adaptaes levam a um novo estado de equilbrio, mas s custas de alteraes importantes em muitos sistemas, que so funcionais SOB a ao da droga. Sndrome de Abstinncia: Na AUSNCIA da droga muitas destas adaptaes se tornam disfuncionais e podem desencadear uma srie de sintomas, em geral opostos aos efeitos agudos da droga e que podem ser revertidos pela administrao de novas quantidades de droga. Reforo negativo da dependncia de drogas Segundo Way (1983) as drogas tambm podem ser usadas pelo seu efeito reforador negativo, isto sua capacidade de aliviar: sintomas da sndrome de abstinncia; sensaes subjetivas desagradveis como angstia, ansiedade e dor; outras sensaes que podem existir independentemente da exposio droga e que poderiam ser resultantes e desiquilbrios nos sistemas de neurotransmisso. Sensibilizao Para alguns efeitos (em geral depressores) ocorre tolerncia, mas para outros (estimulante da atividade locomotora por exemplo) ocorre sensibilizao Sensibilizao a mesma dose inicial passa a desencadear um efeito inicial maior Administrao crnica (mesma dose) Teoria do incentivo-sensibilizao ROBINSON & BERRIDGE (1993) propuseram a teoria do incentivo-sensibilizao como a base neural do desejo por drogas. O efeito estimulante da atividade locomotora em animais um modelo do efeito reforador positivo. Segundo KOOB et al. (1993) alm da capacidade das drogas de abuso de produzir reforamento condicionado positivo e negativo, fatores ambientais tambm contribuem para o desencadeamento do desejo (craving) de consumir drogas. Exposio repetida s drogas de abuso: alteraes permanentes no funcionamento das vias de recompensa cerebral, contribuindo para o estabelecimento da dependncia (Robinson & Berridge, 1993) Sensibilizao neural dos sistemas de recompensa a droga e os eventos a ela associados passam a ter valor emocional progressivamente maiores (salincia do incentivo) = Dopamina = Glutamato = GABA ATV Acc CPF Vias neurais da sensibilizao comportamental ao etanol aumento de dopamina no accumbens (Nestby et al., 1997; Brodie, 2002) antagonistas D1 reduzem: - sensibilizao ao etanol (Camarini, 1997) - sensibilizao a etanol + mazindol (Gevaerd & Takahashi, 1999) sensibilizao cruzada com cocana e aumento dos nveis de ligao de DAT no estriado (Itzhak & Martin, 1999) DOPAMINA Vias neurais da sensibilizao comportamental ao etanol etanol inibe transmisso glutamatrgica mediada pelos receptores NMDA e AMPA antagonistas de NMDA e AMPA bloqueiam o desenvolvimento e/ou expresso da sensibilizao a diversas drogas, inclusive ao etanol (Broadbent & Weitemier, 1999; Camarini et al., 2000; Broadbent et al., 2003) etanol facilita transmisso GABArgica mediada por receptores GABA A agonistas de receptores GABArgicos bloqueiam efeito estimulante e sensibilizao ao etanol GLUTAMATO GABA Circuito motivacional (simplificado) Vias neurais da sensibilizao comportamental Adaptado de Pierce & Kalivas, 1997 As linhas mais espessas representam aumento, enquanto que as linhas pontilhadas representam reduo da neurotransmisso. Circuito sensibilizado Estudos realizados no nosso departamento sobre sensibilizao ao lcool MASUR & BOERNGEN (1980) Ausncia de tolerncia ao efeito excitatrio do etanol Sensibilizao e variabilidade individual MASUR & BOERNGEN (1980): ausncia de tolerncia ao efeito excitatrio do etanol MASUR, DE SOUZA & ZWICKER (1986) Pharmacol. Biochem. Behav 24:1225-1228 Ratos Wistar no apresentavam efeito estimulante do etanol mas camundongos Albinos suos apresentavam O efeito estimulante depende da espcie e da variabilidade individual (MASUR & SANTOS,1988) Animais: camundongos suios albinos machos, aproximadamente 90 dias de idade no incio do tratamento, provenientes do biotrio do departamento de Psicobiologia, UNIFESP. Testes de atividade locomotora: 15 min em caixas de atividade Opto-Varimex. Deteco de movimentao por interrupo de feixes fotoeltricos O que diferencia animais sensibilizados e no sensilizados? Objetivo: Estudar alteraes comportamentais e neuroqumicas associadas ao desenvolvimento de sensibilizao em camundongos sensibilizados e no-sensibilizados ao efeito estimulante do etanol. Testes de atividade locomotora 48 h 7 dias 7 dias 7 dias 1) Tratamento e testes de atividade locomotora induo da sensibilizao comportamental Drogas: etanol (2,2 g/kg ou 2,4 g/kg), em concentrao de 15 % (p/v) em salina; salina (0,9 % NaCl). Tratamento para induo da sensibilizao ao etanol: 21 dias, administrao diria Administrao: via intraperitoneal 2 grupos de tratamento: etanol ou salina. Classificao dos animais tratados com etanol de acordo com a resposta locomotora no DIA 21: Sensibilizados (SENS) No-sensibilizados (NO-SENS) 0 1000 2000 3000 4000 5000 6000 A t i v i d a d e
l o c o m o t o r a NO-SENS Intermedirio SENS Tercil inferior Tercil intermdio Tercil superior VARIABILIDADE INDIVIDUAL Sensibilizao no uma conseqncia inevitvel da exposio repetida s drogas * Difere do salina e do no-sensibilizado no mesmo teste (p<0.04); # Difere do salina no mesmo teste (p<0.05); * # # * * * Resposta locomotora ao longo do tratamento de 21 dias, Sem e aps classificao em sensibilizados e no-sensibilizados * * * etanol ou salina * Difere do grupo salina no mesmo teste (p<0.01); difere do prprio grupo no teste agudo. 0 500 1000 1500 2000 2500 basal agudo 7 dias 14 dias 21 dias Testes A t i v i d a d e
L o c o m o t o r a salina (n=16) Etanol (n=64) 0 500 1000 1500 2000 2500 3000 3500 4000 4500 Basal Agudo 7 14 21 dias Testes A t i v i d a d e
l o c o m o t o r a Salina No-sensibilizado Sensibilizado Nveis de alcoolemia ao longo do tratamento de 21 dias No houve diferenas entre os grupos em nenhum dos testes. 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2 1,4 1,6 1,8 2 Agudo 7 14 21 dias Testes A l c o o l e m i a
( m g / m l ) No-sensibilizado Sensibilizado No houve correlaes significativas entre resposta locomotora ao etanol e nveis de alcoolemia em nenhum dos testes de atividade. 3) Anlise da densidade de ligao de receptores enceflicos: AUTO-RADIOGRAFIA QUANTITATIVA Receptor Ligante D1 [ 3 H] SCH 23390 DAT [ 3 H] Win 35,248 D4 [ 3 H] Nemonapride NMDA [ 3 H] MK-801 AMPA [ 3 H] AMPA BDZ [ 3 H] Flunitrazepam Radioligantes e deslocadores utilizados nos experimentos de auto-radiografia quantitativa: Autoradiografia receptores DA EPl CPU-A IL Acb core Acb shell CPU -DL CPU -VL CPU -DM CG 1 CG 2 LS D CA1- R CA3- R DG Amig med Amig lat Entorrinal Apenas camundongos sensibilizados ao etanol apresentaram aumento nos nveis de ligao de receptores D2 no caudado-putmen anterior e ventro-lateral (sistema nigro-estriatal) quando comparados aos no- sensibilizados e aos controles (Souza-Formigoni et al. (1999) Psychopharmacology) Animais com alta sensibilizao ao efeito estimulante apresentavam igual densidade de D1 e DAT em todas as regies estudadas e aumento de D4 em regies ligadas motricidade e sistema lmbico (tubrculo olfatrio e n. septal lateral e no caudado-putamen posterior) nos dois grupos, o que seria efeito da administrao repetida de lcool). QUADROS et al. (2001) Sistema dopaminrgico e sensibilizao Densidade de ligao de receptores dopaminrgicos D1 e DAT (Quadros et al., 2002) No houve diferenas significativas entre os grupos em nenhuma das regies analisadas, em relao densidade de ligao com o receptor D1 ou com o DAT SN CPU P CPU-A AcbC Tu CPU DM VP CPU DL CPU VM CPU VL SALINA SENSIBILIZADO NO-SENSIBILIZADO Sensibilizados e no- sensibilizados: maiores nveis de ligao de D4 no CPU posterior, em relao aos controles
a Valores representam mdias erro-padro em pmol/g tecido. Valores indicados com asterisco (*) so estatisticamente maiores do que os valores do grupo salina (p<0.02).
Densidade de ligao de receptores dopaminrgicos D4: Densidade de ligao de receptores glutamatrgicos AMPA
GD CA1R CA3 TLAMO ATV TU ACC ACC CPUa TU ACC core ACC shell CPUa Densidade de ligao de receptores glutamatrgicos NMDA (Quadros et al., 2002) No-sensibilizados apresentaram maiores nveis de ligao de NMDA que controles e sensibilizados no ncleo accumbens (core) e no crtex pr-frontal. 0 20 40 60 80 100 120 140 Prefrontal Cortex Nucleus Accumbens Core Regions b i n d i n g
d e n s i t y
( p m o l / u g
t i s s u e )Sensitized Non-sensitized Saline * * 0 1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000 Hab Acute Day 7 Day 14 Tests C r o s s i n g s high activity group low activity group Saline group Expresso da subunidade NR2A aumentada na ATV somente nos no sensibilizados (avaliada por hibridizao in situ) Paper em redao.. Densidade de ligao de receptores GABA A -BDZ ABM ABL GD CA1 CA3 TLAMO TU ACC core ACC shell CG1 CG2 ATV SN
D2 SENS>(NSENS=SAL) Caudado-putmen anterior e ventro-lateral D4 (SENS = NSENS) > SAL Caudado-putmen posterior, tubrculo olfatrio DAT -
NMDA NSENS > (SENS = SAL) Ncleo accumbens core e CPF AMPA NSENS > SENS CA1 hipocampal
GABA A -BDZ SENS > NSENS ATV
Resposta locomotora de animais sensibilizados e no-sensibilizados Grupo no-sensibilizado apresentou resposta locomotora ao MK-801 mais baixa que os grupos sensibilizado e salina (* p<0,05). DESAFIOS FARMACOLGICOS 0 200 400 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 A t i v i d a d e
l o c o m o t o r a * SENS diaz salina salina salina diaz NO-SENS diaz * Sensibilizados maior resposta locomotora que os demais grupos (p<0,05) Sensibilizao cruzada entre etanol e diazepam COM MK-801 (antagonista NMDA) DIAZEPAM (0,5 mg/kg) 0 200 400 600 800 1000 1200 Agudo 7 14 21 dias Testes de atividade A t i v i d a d e
L o c o m o t o r a salina (n=24) 0,5 mg/kg diazepam (n=24) 1,0 mg/kg diazepam (n=24) Resposta locomotora ao tratamento de 21 dias com diazepam (0,5 ou 1,0 mg/kg) O tratamento com diazepam no induziu sensibilizao comportamental. 0 100 200 300 400 500 600 700 800 A t i v i d a d e
L o c o m o t o r a Diaz 0,5 mg/kg etanol salina salina salina etanol Diaz 1,0 mg/kg etanol Resposta locomotora de animais pr-tratados com diazepam ou salina por 21 dias ao desafio com etanol (2,2 g/kg) O tratamento com diazepam no alterou a resposta locomotora ao etanol.
Sistema glutamatrgico e sensibilizao ao etanol: Diferenas nos nveis de ligao de NMDA: desafio com MK-801 corrobora a existncia de diferenas funcionais entre SENS e NSENS. Etanol inibe receptores NMDA maior inibio nos NSENS?
Stios receptores Diferenas observadas Estruturas cerebrais GABA A -BDZ SENS > NSENS ATV
Sensibilizao cruzada unidirecional entre etanol e diazepam Objetivos Comparar camundongos sensibilizados e no- sensibilizados ao etanol no desempenho de uma tarefa de condicionamento contextual de medo, realizada antes do incio do tratamento. Comparar camundongos sensibilizados e no- sensibilizados ao etanol quanto expresso da sensibilizao ao etanol em um ambiente de teste nunca antes pareado administrao de etanol. Associao entre sensibilizao e processos de memria Experimento consistiu de 3 etapas: I) Tarefa de aprendizagem: condicionamento contextual de medo II) Tratamento de 21 dias (etanol, salina) para classificao dos animais III) Desafio locomotor dos animais em campo aberto I II III 2 semanas 1 semana Treino (dia 1): 3 choques (0.3 mA, 1s) em intervalos de 30s (tempo total na caixa de contexto: 4 min) Teste (dia 2): 5 minutos na mesma caixa de contexto (sem choque) REGISTRO DO COMPORTAMENTO DE CONGELAMENTO (freezing) TRATAMENTO COM ETANOL OU SALINA Animais sensibilizados apresentaram maiores nveis de resposta de congelamento ao contexto do que os no-sensibilizados. Todos os animais receberam etanol e, aps 5 minutos, foram colocados no campo aberto para registro de atividade locomotora por 5 minutos. III) DESAFIO COM ETANOL (2,2 g/kg) NO CAMPO ABERTO CAMPO ABERTO Resposta de congelamento no condicionamento contextual de medo: SENS > NSENS Fatores que contribuem para maior susceptibilidade para a sensibilizao ao etanol tambm podem contribuir para a capacidade individual de aprendizagem Desafio com etanol no campo aberto: sensibilizados no apresentaram sensibilizao ao etanol (SENS = SALINA), mas SENS > NSENS. Memria/aprendizageme sensibilizao ao etanol:
SENSIBILIZADOS NO-SENSIBILIZADOS Estruturas cerebrais D2 CPU
NMDA Accumbens core e CPF
AMPA CA1 hipocampal
BDZ
ATV
D4 D4 CPU, Tub Olf
A sensibilizao ao etanol associada a processos de memria e aprendizagem Accumbens - participa na modulao do valor emocional de memrias codificadas no hipocampo Amgdala - importante no condicionamento aversivo Variability in the response to alcohol Sensitized and non-sensitized mice were also evaluated as to the gene expression of some enzymes and neurotransmitter receptors. Mice locomotor activity in the tests performed after acute administration and chronic ethanol (or saline) treatment. * differs from non-sensitized and saline groups; + differs from previous tests Differences between sensitized and non-sensitized DRD2 gene expression In the VTA, sensitized mice present increased expression of D2 mRNA when compared to controls and non-sensitized counterparts, corroborating data from autoradiographic and pharmacological studies Goeldner et al, submitted 0 1 2 3 4 controle baixa sensibilizao intermedirio alta sensibilizao D 2 / G A P D H
- C P F Perfil de atividade locomotora c,i c,i a 0 1 2 3 4 controle baixa sensibilizao intermedirio alta sensibilizao D 2 / G A P D H
- N a c Perfil de atividade locomotora c c c b 0 1 2 3 4 5 controle baixa sensibilizao intermedirio alta sensibilizao D 2 / G A P D H
- A T V Perfil de atividade locomotora i c 0 1 2 3 controle baixa sensibilizao intermedirio alta sensibilizao D 2 / G A P D H
- A M I Perfil de atividade locomotora i d PFC VTA Acc AMY Relative mRNA levels after normalization for GAPDH mRNA expression and relative protein levels after normalization for tubulin protein expression of D1 and D2 (long and short isoforms) receptors and DAT (part A) and 2A and 2B subunits of NMDA receptor (part B) in the amygdala of sensitized or non-sensitized sensitized mice after 21 days of treatment with saline or 2.2 g/Kg ethanol c differs from control group (p<0.05) D1 D2 DAT 5-HT3B 5-HT3A Amygdale NR2A NR2B No differences between sensitized and non- sensitized animals in mRNA or protein levels of receptors or subunits analyzed in total amygdale However, considering the amygdale is a complex structure composed of distinct subareas with different functions, the expression of receptors and subunits specifically in each region of the amygdaloidal complex may elucidate the participation of amygdale in the process of development of behavioral sensitization Animais sensibilizados: -consomem mais lcool -- tem menores nveis de receptores NMDA1 e expresso de protena no Nacc -apresentam maior razo AMPA/NMDA - Sensibilizao pode estar associada a reduo da funo do receptor NMDA ps- sinptico -Confirmados: - maiores nveis de expresso do gene do receptor DRD2 nos animais sensibilizados -maiores nveis de expresso do gene dos receptores do glutamato (NMDA2A and B) e GABA receptors nos animais no-sensibilizados - outras anlises em andamento Estudos em andamento Micro-array para anlise simultnea da expresso de vrios genes Diferenas nos nveis de ligao seriam pr-existentes ao tratamento, ou teriamsido induzidas pelo mesmo? Ausncia de diferenas nos estudos de auto-radiografia no exclui participao dos receptores no fenmeno (como no caso do D1, por ex.) outras abordagens neuroqumicas e eletrofisiolgicas Associao entre processos de memria e sensibilizao necessidade de se estudar outras tarefas de aprendizagem Entendimento dos fatores que podem facilitar ou criar resistncia sensibilizao ao etanol podem contribuir para o entendimento das bases neurobiolgicas da dependncia ao etanol, assim como da propenso individual para o desenvolvimento da dependncia. Implicaes Sensibilizao pode aumentar a vulnerabilidade dependncia de lcool Animais sensibilizados apresentam prejuzo da LTD mediada pelo receptor NMDA Os dados sugerem que este prejuzo poderia estar associado com diferenas individuais na vulnerabilidade dependncia de lcool. Implicaes GENTICA Desenvolvimento maturao do SNC gnero, etc COMPORTAMENTO NEUROBIOLOGIA AMBIENTE SOCIAL Estudo de fatores genticos SIONALDO FERREIRA, NILZA ARAJO, ISABEL QUADROS (1999), GABRIELA OLIVEIRA, DBORA HIPLIDE (atrs) DEBORAH SUCHECKI (1983), AGATHA TRINDADE (2003), MARIA LUCIA O. SOUZA-FORMIGONI (1979), SHIRLEY TAKAHASHI (2003), RAQUEL FORNARI, ANDREZZA KIM (2005) (PRIMEIRO PLANO) CAMARINI ((USP) NBREGA (CAMH) ROSELI BOERGEN- LACERDA 1978 JANDIRA MASUR PIRES ZWICKER SILVA-FILHO HELENA LODDER SANTOS TABACH GINA STRUFFALDI MORATO 1973 COLABORADORES DALMEIDA (PEDIATRICS/UNIFESP) FRUSSA-FILHO (PHARMACOLOGY UNIFESP) PLANETA (UNESP) Nesta linha de pesquisa muitos biomdicos (13) tm trabalhado: ELIANE DE LUCCA (1995) SYLVIA ENNS (1997) suzi Karina Abraho Gabriela Fujisaka Francine Goeldner ETANOL E NEUROTRANSMISSO Neurotransmissores de maior interesse: DA, 5HT, Glu, GABA, peptdeos opiides, adenosina 3 categorias: 1) Neurotransmissores excitatrios que ativam a clula ps- sinptica Ex: glutamato 2) Neurotransmissores inibitrios que deprimem a atividade da clula ps-sinptica Ex: GABA 3)Neuromoduladores que modificam a resposta da clula ps- sinptica a outros neurotransmissores Ex: adenosina 5) aumenta os nveis de serotonina Animais que preferem lcool (P) apresentam nveis de 5HT mais baixos do que os que no preferem (NP), (McBride et al.1995) e possuem menor quantidade de receptores 5HT1A (DeVry 1995) principalmente na regio do accumbens Hiptese: ingesto de lcool seria uma tentativa de normalizar baixos nveis de 5HT, desde que etanol agudamente aumenta os nveis de 5HT Inibidores seletivos de recaptao de serotonina (ISRS), como a fluoxetina, provocam reduo do consumo de etanol em animais e em alguns dependentes de lcool antagonistas dos receptores 5HT3 e 5HT1a reduzem o os efeitos teraputicos destas drogas podem estar associados aos efeitos sobre ansiedade e depresso, co-morbidades freqentemente associadas dependncia de lcool Mecanismos de ao das drogas de abuso - lcool 6) pode afetar a funo de neuromoduladores como a adenosina ETANOL E NEUROTRANSMISSO ADENOSINA A interao entre este modulador e receptores de adenosina localizados em superfcies de membrana pode facilitar ou dificultar a neurotransmisso Etanol afeta a funo do sistema adenosina, por alterar a funo de seus transportadores, provocando alterao nos nveis de mensageiros secundrios Estes efeitos estariam relacionados sedao, intoxicao e incoordenao motora induzidas pelo lcool ETANOL E NEUROTRANSMISSO SISTEMA GLUTAMATRGICO a importncia do aminocido Glutamato s foi reconhecida nas ltimas dcadas, sendo seus receptores identificados nas dcadas de 70 e 80 a ativao de seus receptores: acido 4 propil--amino-3 hidroxi-5- metil-ioxizol (AMPA), kainato ou n-metil-d-aspartato (NMDA) causa excitao da clula ps-sinptica, devido ao aumento da entrada de Na + ou Ca + , que causa despolarizao Primeiros estudos sobre interao de etanol com glutamato surgiram a partir de 1989, demonstrando em cultura de clulas que baixas concentraes de etanol apresentavam efeito inibidor do fluxo inico mediado pelo NMDA outros receptores do Glutamato tambm podem ser inibidos mas em concentraes maiores lcool altera a liberao de neurotransmissores (DA, Nor, Ach) induzida pela ativao do NMDA ETANOL E NEUROTRANSMISSO SISTEMA GLUTAMATRGICO parece ser necessria a presena da subunidade NR2B do receptor NMDA para que ocorra a ao inibitria do etanol as alteraes induzidas pela inibio do receptor NMDA esto na base de muitos dos efeitos farmacolgicos, comportamentais e conseqncias do consumo de lcool como: Sndrome Fetal pelo lcool (resultante da inibio do NMDA no perodo pr-natal) alteraes de memria e aprendizagem (devido a alteraes na LPT (long-term- potentiation + aumento da excitotoxicidade devida a aumento de receptores NMDA (decorrncia do consumo crnico de etanol). Antagonistas de NMDA reduzem a sintomatologia da sndrome de abstinncia estudos comportamentais sugerem que ratos reagem administrao de antagonistas do receptor NMDA da mesma forma que ao lcool * LTP processo atravs do qual neurnios formam conexes sinpticas estveis aps terem sido expostos repetidamente a padres especficos de estimulao Mecanismos de ao das drogas de abuso - lcool 2) Inibe a neurotransmisso mediada pelos receptores glutamatrgicos NMDA receptor NMDA outros receptores do Glutamato tambm podem ser inibidos mas em concentraes maiores lcool altera a liberao de outros neurotransmissores (DA, Nor, Ach) regulada pela ativao dos receptores NMDA 3) Aumenta a neurotransmisso do sistema GABA complexo receptor GABA Etanol aumenta o fluxo de Cl- para dentro das clulas, facilitando a ao do GABA (efeitos ansiolticos, sedativos e hipnticos atingidos com altas doses) ETANOL E NEUROTRANSMISSO SISTEMA GABA O GABA o principal neurotransmissor inibitrio do SNC, agindo atravs da interao com o receptor GABA A Etanol aumenta o fluxo de Cl - para dentro das clulas, facilitando a ao do GABA, produzindo inibio neuronal Estas aes esto associadas aos efeitos ansiolticos sedativos e hipnticos do lcool (altas doses) alteraes na funo do receptor GABA A esto associadas ao desenvolvimento de tolerncia aos efeitos depressores do etanol, assim como dependncia fisiolgica diferenas individuais na susceptibilidade ao efeito do lcool no sistema GABA poderiam estar associadas `a susceptibilidade para o desenvolvimento de dependncia do lcool agonistas gabargicos como os BDZ so eficazes no tratamento da sndrome de abstinncia ao lcool ETANOL E NEUROTRANSMISSO PEPTDEOS OPIIDES ENDGENOS So substncias neuromoduladoras que alteram as aes de neurotransmissores do SNC eles dificultam a excitao neuronal por alterarem as propriedades eltricas da clula nervosa induzem alvio da dor e euforia etanol pode ativar o sistema opiide, contribuindo para o efeito reforador. Antagonistas destes opiides reduzem a auto-administrao de lcool e a vontade de ingerir lcool em humanos h hipteses que um sistema opiide com responsividade aumentada poderia contribuir para a predisposio ao alcoolismo em alguns indivduos 4) aumenta a liberao de opiides e canabinides no sistema de recompensa cerebral Mecanismos de ao das drogas de abuso - lcool h hipteses que um sistema opiide com responsividade aumentada poderia contribuir para a predisposio ao alcoolismo em alguns indivduos Antagonistas de opiides reduzem ou eliminam os efeitos estimulantes ("high") do lcool, reduzem a auto- administrao de lcool e o desejo ("craving") de consumir lcool (em humanos)