UNIVERSIDADE DE SO PAULO

FACULDADE DE CINCIAS FARMACUTICAS

VALIDAO DE PROCESSOS
ESTERILIZANTES
ESTERILIZING PROCESSES VALIDATION

Trabalho acadmico apresentado

professora Terezinha Pinto como
avaliao da disciplina de Controle
de
Qualidade
Microbiolgico,
perodo noturno, da Faculdade de
Cincias
Farmacuticas
da
Universidade de So Paulo.

So Paulo
2007

SUMRIO
Resumo____________________________________________________________3
O presente estudo refere-se validao de processos esterelizantes,
especificamente aplicados ao controle microbiolgico para produtos
farmacuticos. Aqui apresentam-se exemplos de processos a serem utilizados
assim como artigos referentes ao assunto proposto. ______________________3
Abstract____________________________________________________________3
The present study refers to the validation of sterilizing process, specially
applied to the microbiological control of pharmaceutical products. Here is
illustrated not only examples and explanations of actual processes but also
articles regarding the proposed subject._________________________________3
INTRODUO_______________________________________________________4
Definies__________________________________________________________6
Aspectos Gerais DOS PROCESSOS DE ESTERILIZAO E SUA VALIDAO_
_8
NORMA ISO 14937 Esterilizao de produtos para sade________________16
processos usuais para a esterilizao__________________________________18
ESTERILIZAO POR CALOR MIDO.................................................................................20
VALIDAO DO PROCESSO DE ESTERILIZAO POR CALOR SECO........................20
VALIDAO DE MTODOS ESTERILIZANTES POR RADIAO..................................21

Artigos referentes processos expostos_________________________________22

Esterilizao por radiao.............................................................................................................22
Validao de mtodos esterilzantes por eltrons..........................................................................24
Validao de mtodos esterilizantes por filtrao........................................................................26
Neste artigo, a validao da esterilizao de um processo de filtrao foi crtica considerando
que impossvel com tecnologia atualmente disponvel medir a esterilidade de cada recipiente
envazado; portanto, garantia de esterilidade do produto filtrado deve ser alcanada pela
validao do processo de filtrao. ...............................................................................................28

CONCLUSO______________________________________________________31
BIBLIOGRAFIA_____________________________________________________37

RESUMO
O

presente

estudo

especificamente

refere-se
aplicados

validao

ao

controle

de

processos

microbiolgico

esterelizantes,
para

produtos

farmacuticos. Aqui apresentam-se exemplos de processos a serem utilizados

assim como artigos referentes ao assunto proposto.

ABSTRACT
The present study refers to the validation of sterilizing process, specially applied to
the microbiological control of pharmaceutical products. Here is illustrated not only
examples and explanations of actual processes but also articles regarding the
proposed subject.

INTRODUO

Por definio, um processo de esterilizao deve ter capacidade de

inativar uma ampla variedade de microorganismos, incluindo os esporos bacterianos
resistentes. O processo de esterilizao se diferencia do de desinfeco por ser
capaz de destruir todas as formas de microorganismos.

Esterilidade ou nvel de segurana a incapacidade de desenvolvimento das

formas sobreviventes ao processo de esterilizao, durante a conservao e
utilizao de um produto. A manuteno do nvel de esterilidade conferido a um
produto garante o prolongamento da vida til de prateleira e depende das operaes
pr-esterilizao, de esterilizao e ps-esterilizao.
A funcionalidade de qualquer sistema de esterilizao deve ser medida pela eficcia
em exterminar organismos, e pela sua habilidade em no prejudicar, ou de no
afetar de forma negativa, as propriedades funcionais do produto em questo, ou do
dispositivo funcional.

A validao do processo envolve e pode ser medida por:

Indicador Paramtrico: relatrio emitido ao trmino de cada ciclo, onde so
apresentados os parmetros de controle de esterilizao.
Indicador Biolgico: Contagem de organismos muito resistentes

A validao de um processo esterilizante tem por base documentao clara e

completa e deve incluir relatrios de validao precisos e acessveis.

Primeiramente, todo o equipamento, instalaes, testes e pessoal envolvidos no

processo devem ser qualificados. Para tanto, planos de validao devem ser
minuciosamente elaborados e devem conter qualificao do esterilizador, validao
do processo e do produto.

O pessoal envolvido deve receber treinamento de qualidade e ter seus

conhecimentos especficos periodicamente renovados e medidos, auditorias nas
instalaes e checagem peridica dos equipamentos alm de constante validao
dos mtodos usados para medir a carga microbiana tambm so mandatrios. Os
instrumentos de medio devem estar calibrados e a condio para confiabilidade
deve ser demonstrada em 3 ciclos consecutivos Tudo isso deve ser corretamente
documentado e armazenado para considerar o processo de fato validado.

DEFINIES

Especificao de Processo de Esterilizao - o detalhamento da especificao do

processo de esterilizao qualificada para uma determinada famlia de produto.

Produto Inoculado - um produto normal ou simulado que possui um indicador

biolgico (IB) inoculado e que representa a maior dificuldade de esterilizao.

Nvel de Garantia de Esterilidade (SAL) - Representa a probabilidade de um

microrganismo vivel estar presente em um produto aps a sua esterilizao.
definido como o nvel de confiana requerido para operar o sistema de
esterilizao de forma eficiente.

IB Indicador Biolgico - Carreador impregnado com suspenso de microrganismo,

contendo o nmero de esporos viveis de resistncia conhecida ao processo de
esterilizao especificado. Esporos de Bacillus stearothermophilus ATCC 7953 so
recomendados para esterilizao por calor mido temperatura 121C. Esporos
de Bacillus atrophaeus ATCC 9372, anteriormente denominado Bacillus subtilis
varivel niger ATCC 9372, so recomendados para a esterilizao por xido de
etileno e para a esterilizao por calor mido temperatura inferior a 121C. Os
indicadores de endotoxina so usados para monitorar esterilizao por calor seco.

Validao - Exerccio de realizar testes programados e documentados para

demonstrar que um processo trabalha dentro de limites especificados e ir
consistentemente

produzir

produtos/processo

conforme

especificaes

pr-

determinadas.

Equipamentos - Os equipamentos usados no processamento de produtos estreis

devem ser estreis e capazes de serem esterilizados. Incluindo o cristalizador
(crystallizer), a centrfuga e o secador (dryer). A sanitizao como forma de substituir
a esterilizao do equipamento inaceitvel. Procedimentos de esterilizao e a
validao da esterilizao de peas suspeitas dos equipamentos e as linhas de
transferncia (transfer lines) devem ser revisadas.

ASPECTOS GERAIS DOS PROCESSOS DE ESTERILIZAO E SUA

VALIDAO

Considerando a validao do processo esterilizante, h vrios aspectos de

similaridade que independem do procedimento especfico adotado, sendo sempre
fundamental a sua documentao. Sem protocolos completos, incluindo relatrios de
validao com dados acurados e acessveis, virtualmente impossvel substanciar
que um processo tenha sido adequadamente validado. Em todos os casos, a
preocupao inicial deve ser com a qualificao do equipamento, utilidades e
instalaes a ele vinculadas.

Planos de Validao para Processos Esterilizantes

Para que haja coerncia no processo esterilizante, devem ser estabelecidos
planos de validao, incluindo os seguintes aspectos: qualificao do esterilizador,
validao do produto e validao do processo.

Qualificao do Esterilizador
Antes de ser introduzido em uso rotineiro, deve ser avaliado o correto
funcionamento do equipamento.

Qualificao da Instalao
Deve ser avaliada a correta instalao de todas as partes, calibrao de todos
os instrumentos de medio e conformidade com especificaes do equipamento a
serem demonstradas e certificadas. Isto normalmente feito pelo fornecedor, em

colaborao com o usurio do equipamento. A qualificao deve ser refeita, ao

menos parcialmente, quando alteraes tcnicas ocorrerem durante a manuteno
ou modificao do equipamento.

Qualificao de Operao
Para um dado tipo de carga, a condio de confiabilidade do equipamento
deve ser demonstrada ao menos trs ciclos consecutivos. Para autoclaves e outros
esterilizadores a calor, devem ser feitos estudos de distribuio do calor em
posies adequadas considerando a cmara e a carga. O nmero e posio dos
termopares so determinados pelo tipo e configurao da carga, bem como pelo tipo
de instrumento e de ciclo empregados.
Para esterilizadores a gs, a umidade relativa e a temperatura devem ser
medidas por sensores fsicos distribudos em posies adequadas. Indicadores
biolgicos ou monitores biolgicos distribudos na carga devem ser usados para
verificar condies esterilizantes em todas as posies. A penetrao da radiao
ionizante na carga mais confiavelmente monitorada pela distribuio de
dosmetros.

Validao do Produto/Compatibilidade do Produto com o Processo Esterilizante

Para cada produto a ser esterilizado, deve haver cuidadosas consideraes
quanto adequao do mtodo de esterilizao proposto. Para produtos estveis ao
calor, o processamento em autoclave no acondicionamento final usualmente o
mtodo de escolha. , porm, necessrio confirmar que todas as partes do material
de acondicionamento sejam igualmente resistentes ao processo de autoclavao e
que a estabilidade do produto no seja prejudicada. O tipo de autoclave tambm

deve ser considerado. Se gravitacional, com pr-vcuo ou mistura ar-vapor,

compatibilizando a profundidade do vcuo ao produto. Alm de se proceder
adequao do processo, durante o desenvolvimento do ciclo devem ser includos
estudos de inativao dos bioindicadores no prprio produto, elucidando possveis
interferncias.

Para esterilizao gasosa, deve ser dada ateno a possveis reaes do

produto com o agente esterilizante, bem como a reteno de gases txicos e seus
derivados de degradao no produto. Os procedimentos de degaseificao devem
ser validados e criteriosamente seguidos. Na esterilizao por radiao, possveis
produtos da radilise, provocados por reaes com radicais livres, devem ser
cuidadosamente investigados.

Alguns produtos podem apresentar riscos ao consumidor, enquanto outros,

causando descolorao, podem ser meramente estticos, mas ainda assim, exigir a
deciso quanto adequao do processo de esterilizao.

O mtodo de escolha para a esterilizao do equipamento e as linhas de

transferncia o vapor limpo sob presso (clean steam under pressure). Na
validao da esterilizao de equipamentos e sistemas de transferncia, Indicadores
Biolgicos (IBs) assim como sensores de temperatura (Thermocouple (TC) ou
Resistance Thermal Device (RTD)) devem ser estrategicamente localizados em
pontos frios onde o condensado pode se acumular.
O uso de formaldedo um mtodo bem menos desejvel de esterilizao de
um equipamento. No usado nos EUA, principalmente por causa dos nveis de

resduos tanto no ambiente quanto no produto. Geralmente em uma produo que

utiliza esse mtodo como sistema de esterilizao tem que rejeitar os lotes iniciais
vindo do sistema por causa da contaminao por formaldedo.
No importando o mtodo utilizado, os lotes produzidos devem ser revisados
para localizar possveis problemas de contaminao. Falhas na identificao e
isolamento na fonte de um contaminante podem resultar na retirada do lote de um
determinado produto do mercado.

Ambiente/Monitoramento
O programa de monitoramento do ambiente para o fabricante de produtos estreis
deve ser similar incluindo o controle dirio utilizando placas de Petri de superfcie e
monitoramento do pessoal. Alguns fabricantes utilizam lmpadas UV nas reas de
operao. Tais lmpadas tm valor limitado. Elas podem mascarar um
contamintante ou ainda contribuir na gerao de organismos resistentes.

Como discutido previamente, no incomum ver o mais alto nvel de

contaminao

nas superfcies dos equipamentos logo aps estes serem

vaporizados. Se isso ocorre a causa normalmente a remoo inadequada do

condensado.

No gerenciamento da operao de produtos estreis, relatrios peridicos

(semanais/mensais/trimestrais) do monitoramento do ambiente so gerados. A
reviso desses relatrios permite obter informaes sobre as situaes nas quais os
limites de alerta foram excedidos e as aes que foram tomadas.

Espera-se que os fabricantes sempre validem o processamento assptico de

produtos estreis. Tal validao deve englobar todas as partes, fases, passos e
atividades de qualquer processo onde os componentes, tubulaes, fluidos
envolvidos no processo, etc... que espera-se que permaneam estreis. Alm disso
a validao deve incluir todos os provveis potenciais de perda de esterilidade como
um resultado do processo efetuado. A validao deve tambm enumerar todas as
possveis vias de entrada de microorganismos associadas ao uso rotineiro do
processo.

O procedimento de validao deve se aproximar o mximo possvel de todos

os passos, atividades, condies e caractersticas do processo que podem ter
participao na possibilidade de entrada de microorganismos no sistema durante a
produo de rotina. Assim, essencial que o processo de validao seja o mais
prximo possvel da rotina de produo para garantir que os resultados obtidos da
validao sejam extrapolveis para a produo de rotina
.
O monitoramento do ambiente e do pessoal deve ser feito durante a validao
de modo que permita o estabelecimento de limites de monitorao apropriados para
produo de rotina. Pelo menos trs processos de validao so necessrios antes
do processo assptico ser considerado validado.

gua para injeo

Mesmo que a gua no seja um componente da frmula do medicamento
estril, ela pode entrar em contato com o equipamento ou entra na reao pode ser

uma fonte de impurezas (ex: endotoxinas). Assim, apenas gua para injeo deve
ser utilizada.

Esterilizao terminal
H alguns fabricantes que esterilizam ps depois do processamento, pelo uso
de xido de etileno ou calor seco. Alguns ps estreis podem resistir aos tempos
longos e altas temperaturas necessrias para uma esterilizao por calor seco. No
processo de validao para um ciclo de calor seco para um p estril, deve-se
atentar a alguns aspectos importantes como: penetrao do calor e sua distribuio,
quantas vezes so necessrias, temperaturas, estabilidade (em relao a
quantidade de calor recebido) e materiais particulados.

Uma grande parte da indstria de produtos estreis tem deixado de usar o

xido de etileno como um agente esterilizante, devido a consideraes com
segurana dos funcionrios, resduos de xido de etileno no produto e a falta de
capacidade de validar a esterilizao por xido de etileno. Como um meio primrio
de esterilizao, sua utilizao questionvel por causa da falta de segurana da
penetrao nos cristais de um p estril.

Mesmo assim o xido de etileno tem sido utilizado em esterilizao de

superfcie de ps como um modo de precauo contra contaminao microbiolgica
do p estril durante o manuseamento assptico. Alguns fabricantes de produtos
oftlmicos ainda utilizam esse meio de esterilizao em colrios e suspenses. Se
utilizado como um esterilizante primrio, dados sobre validao devem ser revisados

Reprocessamento
Assim

como

processo

principal

de

fabricao,

processos

de

reprocessamento (rework) devem ser validados. Lotes reprocessados e outros

dados devem ser utilizados para validar o processo. Relatrios detalhados de
investigao, incluindo a descrio, causa e ao corretiva deve estar disponvel
para o lote que est para ser reprocessado.

Testes de Laboratrio e Especificaes

O teste de esterilidade de produtos estreis deve ser observado.
Adicionalmente, quaisquer exemplos de falha de um teste inicial de esterilidade
devem ser investigados. A liberao de um lote, particularmente de um produto
estril, que falhar num teste inicial de esterilidade e passa num segundo teste
muito difcil de se justificar.

Material particulado outra grande preocupao com ps estreis.

Especificaes para material particulado devem ser mais rgidas que os limites
tradicionais estabelecidos para formas de dosagem estreis. O manuseamento,
transporte e acondicionamento de ps estreis aumentam o nvel de particulados.
importante tambm identificar os particulados para determinar sua fonte.

Quando alguns ps estreis so cristalizados a partir de solventes orgnicos,

baixos nveis desses solventes podem ser inevitveis como resduos. Na validao
desse processo, para assegurar que os nveis mnimos so estabelecidos, os dados
usados pela empresa para estabelecer um nvel de resduos devem ser consultados.

Obviamente, cada lote deve ser testado para estar de acordo com a especificao
de resduos.

Acondicionamento
Produtos estreis so acondicionados em diferentes embalagens, que
incluem bolsas plsticas ou latas estreis. Com ateno para as bolsas estreis, o
mtodo de escolha a esterilizao por irradiao, por causa da ausncia de
resduos. H alguns fabricantes que utilizam formaldedo. Uma grande desvantagem
e a presena de resduos de formaldedo no produto estril que podem contaminar o
produto.

Se vrias bolsas estreis so utilizadas, operaes so feitas em reas de

procedimentos asspticos. Como o fabricante da forma farmacutica espera q as
bolsas internas sejam estreis, bolsas externas devem ser utilizadas sobre as
primrias contendo o produto estril em uma rea de procedimento assptico.
Quanto as latas, uma preocupao so os particulados, que podem ser
gerados com batidas e movimento. Por causa de alguns traos de alumnio, as
companhias agora utilizam latas de ao inox.

Os dados para validao do sistema de acondicionamento deve ser revisado.

Aspectos importantes do sistema de bolsa estril inclui resduos, materiais estranhos
(particulados), esterilidade e endotoxinas. Aspectos importantes dos sistemas de
armazenamento rgido incluem umidade, particulados e esterilidade.

Conforme j exposto, para a validao da instalao deve ser avaliada a

correta instalao de todas as partes, calibrao de todos os instrumentos de
medio

conformidade

com

especificaes

do

equipamento

serem

demonstradas e certificadas. A qualificao de operao de confiabilidade do

equipamento deve ser demonstrada ao menos trs ciclos consecutivos. Para
autoclaves e outros esterilizadores a calor, devem ser feitos estudos de distribuio
do calor em posies adequadas considerando a cmara e a carga e para
esterilizadores a gs, a umidade relativa e a temperatura devem ser medidas por
sensores fsicos distribudos em posies adequadas. Indicadores biolgicos ou
monitores biolgicos distribudos na carga devem ser usados para verificar
condies esterilizantes em todas as posies.

Outro ponto importante a validao do produto, a compatibilidade entre o

produto e o processo esterilizante deve conter cuidadosas consideraes quanto
adequao do mtodo de esterilizao proposto.

NORMA ISO 14937 ESTERILIZAO DE PRODUTOS PARA SADE

Esta

norma

aponta

os

requisitos

gerais

para

caracterizao

desenvolvimento de um agente esterilizante, validao e controlo de rotina de um

processo de esterilizao de dispositivos mdicos.

Tem por objetivo definir o agente esterilizante, demonstrar a sua eficcia

microbicida, identificar fatores que influenciam essa eficcia, avaliar os efeitos nos
materiais da exposio ao agente esterilizante, e identificar os requisitos de
segurana das pessoas e proteo ambiental.

Caracterizao do Processo & Equipamento: Define todo o processo de esterilizao

e o equipamento necessrio para realizar o processo de forma segura e
reprodutvel.

Definio do Produto; Define o produto a ser esterilizado, incluindo a sua qualidade

microbiolgica antes da esterilizao e a forma como o produto embalado e
apresentado para a esterilizao.

Definio do Processo: O objetivo desta atividade obter a especificao detalhada

para o processo de esterilizao a ser aplicado ao produto definido, sem
comprometer a segurana, qualidade e desempenho desse mesmo produto.

Validao: O objetivo desta validao demonstrar que o processo de esterilizao

estabelecido na definio do processo pode ser atingido efetivamente e reproduzido
numa carga de esterilizao. A validao consiste num determinado nmero de
passos identificados: qualificao da instalao, qualificao operacional e
qualificao de desempenho.

Qualificao de Instalao (QI); Obteno e documentao da evidncia de que o

equipamento fornecido e instalado est em conformidade com a sua especificao.

Qualificao de Instalao (QI); Fornecida documentao do equipamento

Fornecidos os procedimentos de operao fornecida informao de localizao,
ambiente e segurana Instrumentos de calibrao verificados e documentados
atravs do relatrio completo da QI.

Qualificao Operacional (QO); Obteno e documentao da evidncia de que o

equipamento instalado opera dentro dos limites pr-determinados quando utilizado
de acordo com os seus procedimentos operacionais.

Qualificao de Desempenho (QD); Obteno e documentao da evidncia de que

com o produto o equipamento opera consistentemente em conformidade com o
critrio pr-determinado e que o processo produz produtos estreis e que cumprem
com os requisitos especficos. Estudos de QD microbiolgica devero incluir a
libertao do agente esterilizante sob condies designadas de modo a que a
extenso do tratamento reduzida ao do processo de esterilizao.

Qual o benefcio de estar em conformidade? Ter a garantia de que os DM so

devidamente esterilizados e qualificados pelos fabricantes, utilizadores e entidades
reguladoras. Possuir uma documentao de validao em ficheiros de dados e
registros grficos para ser apresentado em qualquer situao reguladora ou legal
que exija apresentao destes.

PROCESSOS USUAIS PARA A ESTERILIZAO

Esterilizao por calor, para produtos estveis ao calor, o processamento em

autoclave o mtodo de escolha mais frequentemente utilizado. O tipo de autoclave
tambm deve ser considerado.

Para esterilizao gasosa, deve se observar a possibilidade da ocorrncia de

reaes entre o produto e o agente esterilizante, assim como a reteno de gases
txicos e seus derivados atravs da degradao no produto.

Na esterilizao por radiao, existe a possibilidade da ocorrncia de

produtos da radilise, derivados de reaes com radicais livres, apresentando risco
ao consumidor ou no aspecto visual do produto. Este processo segue a norma EN
552:1994 que foi revogada e substituda pela norma EN ISO 11137-1: 2006.1

Os processos mais utilizados so:

esterilizao por pelo uso de xido de etileno ou outros agentes qumicos com
capacidade de liberar Oxignio, por exemplo, os perxidos e o formaldeido 2.
esterilizao por vapor mido;
esterilizao por calor seco.

Estes processos devem seguir a norma ISO 14937 3. Alm disso, tais
operaes tambm devem ser qualificadas o que implica na verificao e obteno
de documentao de que:
Equipamentos e instrumentos operam em conformidade com o planejado;
Procedimentos de operao, manuteno e segurana no manuseio dos
equipamentos estejam implementados e funcionando conforme previsto;

 Operadores treinados para os procedimentos de operao, manuteno e

segurana no manuseio de todos os equipamentos;

ESTERILIZAO POR CALOR MIDO

Os procedimento largamente utilizado vapor saturado sob presso,

realizado em autoclaves, onde os microrganismos so destrudos pela ao conjunta
da temperatura, presso e umidade que promovem a termocoagulao e a
desnaturao das protenas da estrutura gentica celular. Alm do rpido
aquecimento este processo possui rpida penetrao em tecido, destri esporos
microbianos em curto perodo de exposio, fcil controle de qualidade e letalidade.
Estes processos seguem a norma de esterilizao do EN 554:1994 de BS de
dispositivos mdicos - Validao e controle da rotina da esterilizao pelo calor
mido4.

VALIDAO DO PROCESSO DE ESTERILIZAO POR CALOR SECO

Utilizada para despirogenizar vidranias e matrias termoestveis. A validao

deste processo realizada atravs do estudo da distribuio do calor dentro da
estufa, sendo executado utilizando-se indicadores de endotoxinas bacterianas. Aps
o trmino do ciclo de despirogenizao, a reduo da concentrao de endotoxina

determinada comparando a concentrao de endotoxina dos frascos desafio contra

um controle no exposto ao ciclo (250oC/30 minutos).
Para quantificar os nveis de endotoxina presentes nos frascos, a endotoxina dos
frascos deve ser reconstituda com gua apirognica e submetida ao teste de
deteco de pirognio pelo mtodo LAL (lisado de amebcitos de lmulus) 5.

VALIDAO DE MTODOS ESTERILIZANTES POR RADIAO

A irradiao com raios gama uma importante forma de esterilizao de

materiais como mdico-hospitalares, cosmticos, frmacos e medicamentos,
alimentos, fitoterpicos e turfas.

O processo utilizado nesse tipo de esterilizao se utiliza uma fonte de

cobalto-60 (istopo radioativo do cobalto-59). importante mencionar que por seu
poder de penetrao o processo de esterilizao com raios gama pode ser feito com
os materiais j embalados e esses podem ser utilizados logo aps o processo.

Esse processo realizado a frio, o que o torna vivel e vantajoso para

materiais termossensveis. Alm disso temos que ressaltar a confiabilidade do
processo, o fcil monitoramento (uma vez que a nica varivel a ser controlada o
tempo), a possibilidade de validao do processo segundo normas internacionais
ISSO 11137 e EN 552, no h resduos (no necessita de quarentena). A radiao
penetra em qualquer tipo de material, no h manuseio dos produtos no processo, o

volume de produto no interfere no processo e no h necessidade de testes

microbiolgicos ps-esterilizao.

A Anvisa exige informao nas embalagens dos produtos quanto ao uso de

radiao. A Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria (Anvisa) informou, por meio da
assessoria de imprensa, que a fiscalizao de alimento irradiados pelas vigilncias
estaduais e municipais segue o mesmo fluxo dos demais alimentos. A agncia
informou ainda que as diferenas que existem so referentes concesso de alvar
sanitrio para os locais de operao de equipamentos de irradiao, que exigem,
alm da Vigilncia Sanitria Estadual ou Municipal, autorizao do CNEN (Comisso
Nacional de Energia Nuclear). Ainda de acordo com a Anvisa, na rotulagem dos
alimentos irradiados, alm dos dizeres exigidos para alimentos em geral, deve
constar no painel principal: "Alimento tratado por processo de irradiao". No h
limites na quantidade de radiao. "A legislao brasileira estabelece que a
irradiao, assim como qualquer outro processo de tratamento de alimentos, no
deve substituir as boas prticas de fabricao e/ou agrcolas, e as doses mnima e
mxima usada so auto-limitantes pois, a primeira deve ser suficiente para alcanar
o efeito desejado e a segunda no deve causar injrias s propriedades do
alimento", informou a Anvisa.

ARTIGOS REFERENTES PROCESSOS EXPOSTOS

ESTERILIZAO POR RADIAO

Validation and substantion of 25kGy as sterilization dose for lyophilized humam amnion
membrane

A membrana aminitica humana foi utilizada temporatiamente como

tratamento para queimaduras, e aps alguns estudos de aplicao clnicos mostrou
que esta membrana ajuda na cicatrizao.
Para que essa membrana fosse utilizada como tratamento, ela necessita de uma
esteriliao, esta esterilizao foi feita atravs de raios gamas originados do Co60.
Os mtodos propostos para esta esterilizao seguiram as resolues ISO 11137 e
ISO 13409.

Membranas amnioticas foram obtidas, essas membranas foram estocadas em

soluo com penicilina a 4 graus celsius, foram lavadas, liofilizadas e armazenadas
em polietileno. Dez membranas liofilizadas foram escolhidas para determinar o
bioburden (teste para determinaar o nmero de microorganismo em um produto),
20 membranas foram selecionadas para o teste de esterilidade de acordo com o ISO
13409.

Para estabelecer a dose necessria, necessrio conhecer o nmero de

bioburden de 10 produtos e o nmero de amostras a ser usado na verificao de
dose experimental.

Os resultados da mdia do bioburden de cada produto esto mostrados na

tabela abaixo:

Os resultados mostraram um grande coeficiente de variao entre esses

valores de bioburden. Os principais microorganismos encontrados foram:

De acordo com a tabela 2 do ISO 13409 foi calculada a dose mdia de

irradiao que essas amostras deveriam receber, 8,65kGy. O resultado do teste de
esterelidade mostrou uma amostra positiva, que de acordo com o ISO 13409
aceitavel, pois no mais que um teste positivo foi observado. Portanto a verificao
esperimental teve sucesso e consequentemente a dose de 25kGy pode ser
reduzido.

Pode-se concluir, portanto, que o resultado obtido est de acordo com a

exigncia de ISO 13409 e o dose de 25kGy poderia ser substanciadana esterilizao
da membrana amniotica humana liofilizada. A preparao e a condio do
tratamento em nossos laboratrios da membrana amniotica humana satisfem s
boas prticas manufaturamento e cuidados de sade.

VALIDAO DE MTODOS ESTERILZANTES POR ELTRONS

Electron beam process validation for sterilization of complex geometries

Um processo pouco utilizado na desinfeco e esterilizao de embalagens

utiliza um feixe de eltrons para esse fim. Esse processo pouco usado por
apresentar uma srie de problemas na sua aplicao, j que necessrio

equipamento especfico para esse fim, e o mesmo custa muito caro. Devido a alta
dose necessria para que o contedo da embalagem seja uniformemente atingida,
(principalmente o seu centro), podem ocorrer alguns problemas, e entre eles podese citar: o polmero que constitui as embalagens pode se degradar ou ser danificado
no local onde houver uma maior concentrao do feixe; o polmero tambm pode se
deformar e amolecer, ou mesmo afetar a aparncia da embalagem, o que
impossibilita a venda do produto. Assim, importante que se determine
corretamente as doses s quais as substncias sero submetidas, pois a durao do
processo de radiao de dcimos de segundo, e a escolha incorreta da dose pode
comprometer

embalagem

ou

seu

contedo

(no

esterilizando-o

adequadamente).

A seleo da quantidade de energia a ser usada um passo fundamental. Na

referncia usada (Douglas E. Weissa, Denise A. Cleghornb, Sam V. Nablo - Electron
beam process validation for sterilization of complex geometries), foi escolhida uma
voltagem de operao de 240 kV. Atravs de uma srie de clculos denominados
ITS (Integrated Tiger Series) foi possvel estimar a distribuio da radiao que
atinge o interior da embalagem para melhor adequar as doses aos produtos. Nesse
processo so usadas cepas de bactrias para calcular a quantidade de logaritmos
reduzidos (LCR Log Count Reduction), que devem ser da ordem de pelo menos 6
logaritmos (o que significa uma reduo de 10-6) bactrias em relao ao inicial,
para se garantir a qualidade do produto final.

VALIDAO DE MTODOS ESTERILIZANTES POR FILTRAO

Filter Validation

similar validao de qualquer outro processo de validao usado em

processos farmacuticos. Devido impossibilidade de se medir a esterilidade de
cada frasco com a tecnologia atual, a nica forma de se garantir a esterilidade do
produto filtrado atravs da validao do processo de filtrao. O processo de
validao de filtros para produtos farmacuticos composto basicamente por trs
itens: determinar o efeito do lquido sobre o filtro; determinar o efeito do filtro sobre o
lquido; e demonstrar que o filtro remove todos os microorganismos, garantindo que
o lquido obtido estril.

Existem vrias normas regulamentando a filtrao esterilizante, emitidas por

rgos como o FDA e a EMEA, presentes nas farmacopias americana (USP) e
europia, sempre relacionadas s Boas Prticas de Fabricao. Um dos primeiros
teste utilizados para determinar a reteno de bactrias pelos filtros foi o ASTM F
838-83. Nesse ensaio era usada a bactria Pseudomonas diminuta (conhecida como
Brevundimonas diminuta) para avaliar a membrana do filtro usado na esterilizao
do lquido. O teste estabelecia a concentrao das bactrias na soluo e, aps a
passagem pelo filtro, o nmero mximo de unidades formadoras de colnia (UFC)
no lquido filtrado. Atualmente este teste est obsoleto, pois o FDA exige
comprovao da esterilidade do produto ps-filtrao independentemente dos
parmetros usados no processo, das propriedades da soluo, etc, sendo sempre
que possvel usada a substncia que ser comercializada junto de solues com
bactrias em concentraes conhecidas (deve-se verificar a interferncia da droga

na bactria, como por exemplo com antibiticos). necessrio escolher o teste

adequado, pois pode haver interao da droga com a membrana filtrante ou mesmo
com a bactria que est sendo usada no teste (por exemplo, a bactria pode
encolher devido alta osmolaridade do produto ou mesmo devido a falta de
nutrientes no meio de cultura). O filtro tambm no pode mostrar sinais de
degradao pelo produto ou por qualquer processo a que ele venha a ser
submetido, tais como presso, variao de presso, taxa de fluxo ou mesmo tempo.
Existem tambm testes que visam determinar contaminantes originrios do
aquecimento do sistema de filtrao, que podem ser resultado da decomposio de
plsticos, membranas, borrachas, etc, e que podem estar presentes no produto final.
Para isso so usadas tcnicas tais como cromatografia gasosa, espectrofotometria
de massa, eletroforese capilar de alta presso, entre outras.

O teste da reao do filtro e do lquido feito mergulhando-se o filtro no

lquido por um perodo de sete dias ou mais; passado esse tempo, realizado outro
teste para verificar a integridade da membrana. Devem ser includos tambm nesse
teste os outros componentes do sistema de filtrao, tais como suportes, anis de
vedao, pois todos estaro em contato com o lquido que ser filtrado.

importante salientar que os testes devem ser feitos caso a caso, pois pode
haver interferncia entre os ingredientes da soluo e os componentes do sistema
de filtrao que devem ser levados em conta de forma a se atingir os critrios
estabelecidos pelas rgos regulatrios de cada pas, oferecendo um produto
seguro ao consumidor.

Neste artigo, a validao da esterilizao de um processo de filtrao foi crtica

considerando que impossvel com tecnologia atualmente disponvel medir a
esterilidade de cada recipiente envazado; portanto, garantia de esterilidade do
produto filtrado deve ser alcanada pela validao do processo de filtrao.

Validar um processo estril de filtrao usado para lquidos farmacuticos

essencialmente envolve trs coisas:

determinando o efeito do lquido no filtro,

determinando o efeito do filtro no lquido,

demonstrando que o filtro retira todosmicrorganismos do lquido sob

condies reais de processamento, resulta num filtrado estril.

Os guidelines e documentos utilizados para a filtrao estril para produtos

farmacuticos esto presentes em agncias regulatrias tais como FDA, EC
Enterprise Directorate-General e EMEA. Estas emitiram documentos guias dirigidos
a filtrao estril e prticas associadas de validao e requisitos.ASTM F 838-83
descreve um mtodo padro para determinar reteno bacteriana para filtros de
membrana usado para esterilizao na filtrao de lquidos

O teste utilizado foi o Bacteria Challenge Test.. J que o propsito de um filtro

de esterelizado de nvel remover microrganismos que podem estar na soluo
filtrada do filtrado. Com xito passagem que uma prova de integridade demonstra a
capacidade do filtro de remover (e ter removido) microrganismos da soluo filtrada,
mas na ausncia de dados de bacteria challenge test, os dados de prova de

integridade so meramente indicadores indiretos da capacidade do filtro produzir um

filtrado estril.

Outro fator importante do processo de validao quando se aplica a filtrao

na indstria farmacutica para determinar se existe qualquer substncia relacionada
ao sistema de filtro que pode ser liberado durante o processo. Tipicamente,
cartuchos de filtro so compostos de vrios polmeros de termoplsticos. Os
componentes destes materiais incluem o monmeros e polmeros de que os
materiais

so

compostos,

produtos

de

degradao

dos

compostos

de

termoplsticos, plsticos, anti-oxidantes e vrios adesivos, que podem ser usado em

fabricao de cartucho. Todos estes materiais, seus componentes e produtos de
degradao potencialmente podem ser extrados ou pode ser dissolvidos no produto
de droga durante o processo de filtrao.

Teste de compatibilidade qumica foi usado para determinar o efeito do lquido

no filtro e o efeito do filtro no lquido. A maioria dos fabricantes de filtro executam a
prova qumica de compatibilidade em seus filtros sobre um perodo de sete dias,
depois que que os elementos de filtro so verificados para desempenho e
integridade
.
Apesar dos testes executados pelo fabricante de filtro, prova qumica,
especfica adicional de compatibilidade deve ser executada assegurar o filtro
compatvel com a soluo a ser filtrada. Todos os componentes de sistema de filtro
sob investigao devem ser includos na prova qumica de compatibilidade. Alm da

membrana, estes incluem materiais de apoio de membrana, concha de cartucho e

local de armazenamento do material, e material para selar o cartucho e a caixa.
Incompatibilidades qumicas podem ser sutis e freqentemente so influenciados por
uma combinao de fatores relacionado composio da formulao de produto. O
objetivo de teste de compatibilidade qumica dectectar essas incompatibilidades
sutis, que podem ocorrer devido a uma mistura de componentes qumicos ou
condies especficas de processo. O teste com componentes individuais da
formulao de produto podem no revelar estas incompatibilidades.

Outros testes foram extrados da USP 27, que inclui um captulo geral, Testes
de reatividade biolgica, In Vitro, desenhado para avaliar o efeito de elastmeros e
materiais de polimricos em culturas de clulas mamferas. Trs provas so
descritas: a teste de difuso de agar, a teste de contato direto, e a teste de eluio.
O captulo requere uma deciso de qual o nmero de testes so exigidos baseado
no material, no produto e seu uso.

CONCLUSO

A validao o ato documentado que atesta que qualquer procedimento,

processo, equipamento, material, operao ou sistema, realmente conduz aos
resultados esperados.

parte integrante da Garantia da Qualidade, e envolve o estudo sistemtico

das instalaes, sistemas e processos com o objetivo de determinar se os mesmos
desempenham suas funes de forma adequada e consistente, conforme
especificado. Uma operao validada assegura a produo de lotes uniformes que
atendem s especificaes requeridas.

Ao contrrio de muitos outros requisitos das BPF, a validao por si s, no

melhora os processos. Ela apenas pode confirmar ou no, dependendo do caso, que
o processo foi adequadamente desenvolvido e que se encontra sob controle.

A validao permite :
1. Aperfeioar os conhecimentos dos processos produtivos e desta forma assegurar
que os processos encontram-se sob controle.
2. Diminuir os riscos de desvio de qualidade.
3. Diminuir os riscos da no conformidade aos requisitos estabelecidos.
4. Diminuir a quantidade de testes de controle de qualidade nas etapas de controle
em processo e no produto terminado. (referncia 11)

A validao de processos esterilizantes hoje exigida em diversas

orientaes fiscais, como a European Pharmacopeia, 1980; FDA, 1988 e British
Pharmacopeia, 1988. Os requisitos bsicos exigidos so: adequao, uniformidade
e reprodutibilidade do processo.

Devem ser estabelecidos planos de validao que devem incluir os seguintes

aspectos:
1. Qualificao do esterilizador: avaliar o correto funcionamento do equipamento.
Avaliar a correta instalao, calibrao e conformidade com as especificaes do
equipamento, alm de demonstrar a confiabilidade do equipamento em pelo
menos trs ciclos consecutivos.
2. Validao do produto: devem ser feitas cuidadosas consideraes quanto
adequao do mtodo de esterilizao proposto para o produto a ser esterilizado,
assim, deve-se, por exemplo avaliar sua estabilidade trmica ou reaes do
produto com o agente esterilizante.
3. Validao do processo: com base nos resultados da execuo dos itens
anteriores, elaborado o Protocolo de Validao do Processo, que contm as
especificaes dos parmetros para avaliao rotineira, alm da definio de
especificaes para o processo de revalidao. (referncia 12)

Para garantir a confiabilidade do Protocolo de Validao de Processos

Esterilizantes, necessrio executar a manuteno da validao do processo.
A revalidao necessria para assegurar que as mudanas intencionais ou no, no
processo de produo, equipamentos e no ambiente, no afetam adversamente as

caractersticas do processo e qualidade do produto. A revalidao pode ser dividida

em duas amplas categorias:

1. Revalidao aps qualquer mudana que pode alterar a qualidade do produto.

1.1. A revalidao deve ser realizada por ocasio da introduo de quaisquer

mudanas que afetem a fabricao e/ou o procedimento padro, com influncia
sobre as caractersticas de desempenho estabelecidas para o produto.

1.2. Cada mudana de matria-prima, material de embalagem, processo de

fabricao, equipamento, controles em processo, reas de fabricao e utilidades
(gua, vapor, etc.), deve ser avaliada pelo grupo de validao da empresa, que
decide se a mesma suficientemente significativa para justificar a revalidao e, sua
abrangncia.

1.3. A revalidao aps as mudanas pode estar baseada no desempenho dos

mesmos testes e atividades realizados durante a validao original, incluindo os
testes em processo e queles referentes aos equipamentos.

Algumas mudanas tpicas que requerem revalidao:

-Da

matria-prima:

mudanas

das

propriedades

fsicas

como:

densidade,

viscosidade, granulometria e tipo de cristal, que podem afetar adversamente o

processo ou o produto.

-Do material de embalagem: qualquer mudana do procedimento de embalagem que

possa afetar a estabilidade do produto, por exemplo, substituio do material de
envase de plstico por vidro.

-Do processo: qualquer mudana que pode afetar os passos subseqentes do

processo e a qualidade do produto, por exemplo, tempo de mistura, temperatura de
secagem e processo de resfriamento.

-Do equipamento, incluindo instrumentos de medio: qualquer substituio, reparo

e manuteno que possam afetar tanto o processo como o produto;

-Na rea de produo e utilidades: qualquer substituio, reparo e manuteno que

possam afetar tanto o processo como o produto, por exemplo: o reparo e
manuteno do sistema de ventilao podem mudar as condies ambientais e em
conseqncia, pode ser necessria sua revalidao, principalmente na fabricao de
produtos estreis.

-Quando so detectados desvios durante uma auto-inspeo ou auditoria, ou

durante a anlise contnua da tendncia dos dados de processo.

2. Revalidao peridica:
As mudanas do processo podem ocorrer gradualmente, mesmo quando operadores
experientes trabalham corretamente, de acordo com mtodos estabelecidos. De
forma semelhante, o desgaste do equipamento tambm pode causar mudanas
graduais. A revalidao em intervalos programados recomendvel, inclusive em

caso onde no tenham sido efetuadas mudanas, considerando os desgaste dos

equipamentos e possveis erros humanos.

2.1. A deciso de implementar a revalidao peridica deve estar baseada

principalmente na reviso de dados histricos, gerados durante os testes em
processo e do produto terminado, aps a ltima validao, tendo por objetivo
verificar se o processo se encontra sob controle. Durante a reviso dos referidos
dados histricos, deve ser avaliada qualquer tendncia dos dados coletados.

2.2. Em alguns processos produtivos, os seguintes pontos devem ser verificados por
ocasio da revalidao:

2.2.1. Se ocorreram qualquer mudana da frmula, procedimentos, tamanho do lote,

etc. Em caso positivo, se foi avaliado seu impacto sobre o produto.

2.2.2. Se as calibraes foram realizadas de acordo com a programao

estabelecida.

2.2.3. Se a manuteno preventiva foi realizada de acordo com a programao

estabelecida.

2.2.4. Se os Procedimentos Operacionais Padro (POPs) foram adequadamente

atualizados.

2.2.5. Se os POPs foram implementados.

2.2.6. Se foram realizados os programas de limpeza e higiene.

2.2.7. Se foi realizada qualquer mudana dos mtodos analtico de controle.

Como vimos, h diversos trabalhos que tratam de diferentes tipos de

validao de processos esterilizantes levando em considerao fatores bastante
especficos, como o estabelecimento de limites aceitveis de radiao na
esterilizao de materiais polimricos de geometria complexa por feixes de eltrons
(referncia 9), ou a avaliao dos efeitos exercidos pelo lquido no filtro, e viceversa, no processo de validao de esterilizao por filtrao (referncia 10).
Vimos tambm, que o estabelecimento de limites analticos especficos de resduos
fator determinante para a constatao de quo limpo deve ser o processo em
questo, e que o estabelecimento destes limites devem ter critrios de aceitao
cientificamente justificveis, sendo, inclusive, apresentadas frmulas para o clculo
dos limites aceitveis de resduos no processo produtivo. (referncia 1)
No entanto, independente do processo especfico adotado, fundamental a
documentao do processo com protocolos e relatrios de validao, pois somente
desta forma possvel garantir a adequao, uniformidade e reprodutibilidade do
mesmo.

A questo dos limites e critrios de aceitao bastante discutida, pois para

que um produto seja considerado estril, deve ser isento de microorganismos
viveis, porm, h numerosos problemas tcnicos para atingir tal objetivo quando
samos do plano terico para plano real.

Portanto, os critrios de aceitao para a validao de processos esterilizantes

continua sendo um assunto em estudo.

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