PRACTICA 6

COPROPARASITOSCOPICO EN FRESCO
Y TINCIONES TEMPORALES

OBJETIVO DE LA PRACTICA.
Para fines para diagnsticos el alumno debe ser capaz de diferenciar los
parsitos (formas biolgicas) presentes en un examen directo, de formas no
biolgicas (artefactos), y que desarrolle tinciones temporales.


INTRODUCCION.
Un examen coproparasitoscpico es el estudio de material fecal, para la bsqueda
e identificacin de formas parasitarias intestinales. Puede ser cualitativo o
cuantitativo. Las muestras fecales son seriadas con un mnimo de tres y deben
colocarse en frascos de boca ancha, guardados en lugares frescos, mientras se
analizan, pues con el calor se aceleran los fenmenos de degradacion por
bacterias y con el fro se pueden destruir los quistes y trofozotos de protozoos. Los
mtodos qumicos permiten la conservacin durante un tiempo ms prolongado,
sin correr el riesgo de que los parsitos se deformen o se destruyan, por ejemplo
con soluciones que contienen formol, yodo-mertiolate, etc.

Examen microscpico directo: En este tipo de estudio, el material fecal ms
utilizado es el recin obtenido por expulsin natural del paciente, ya sean heces
bien formadas o evacuaciones disminudas de consistencia, con moco y/o sangre.
Los exmenes directos de heces son la forma ms rpida de hacer diagnstico
de parasitosis. Es importante tomar en consideracin algunas recomendaciones
que permitan tener xito en la bsqueda de parsitos. Con estas tcnicas
podemos observar trofozoitos o quistes de protozoarios, lo mismo que larvas o
huevos de helmintos, sin embargo, las diferencias importantes entre los tipos de
muestra establecen las diferentes resultados. Una muestra lquida diarreica o
una muestra de moco en exudado vaginal nos puede mostrar trofozoitos en
cambio una muestra de materia fecal formada mostrara quistes.

Un detalle importante es el tiempo de procesamiento de la muestra despus de
emitida. Una muestra aun fresca con menos de una hora de haberse tomado
puede conservar trofozoitos mviles, por ejemplo de E. histolytica. Si la muestra
tiene un tiempo mayor de haber sido emitida ( ej. 2 horas)es probable que
requiera aplicar un poco de calor, lo que es llamado platina caliente.
Para realizar un examen directo el tiempo es importante por lo que la muestra
debe mantenerse a 37 grados centgrados y procesarse en la siguiente hora.
Este mtodo es de gran utilidad para la deteccin en fresco de trofozotos. En la
suspensin teida con lugol se pueden identificar con facilidad quistes de
protozoarios como Entamoeba histolytica, Giardia lamblia, Balantidium coli, asi
como de huevos de helmintos.

- El examen directo (en fresco) es sencillo, rpido y econmico, pues requiere poco
material.
- Es excelente para la bsqueda de trofozotos y protozoarios.
- Es eficaz en la bsqueda e identificacin de quistes, huevos y larvas.
- Sin embargo, la muestra utilizada es muy pequea y poco representativa.
- Los montajes en solucin salina tienen la ventaja de que retienen la movilidad de
los trofozoitos, sin embargo, es difcil la observacin de las estructuras internas,
pues con frecuencia son poco definidas.
- El Yodo se emplea para destacar las estructuras internas de los parsitos
presentes, pero inmoviliza los trofozotos.

MATERIALES Y METODOS
- Cada alumno debe trabajar por lo menos con dos especmenes diferentes, una
muestra debe ser propia del alumno y una segunda puede ser de otra persona.
- Se debe observar una muestra control positiva, proporcionada por el profesor.
*Las heces son potencialmente infectantes. Se deben extremar las precauciones
durante todo el procedimiento.

Procedimiento.
1. Con un aplicador de madera se toma una pequea cantidad de materia
fecal y se coloca en el centro de un portaobjetos limpio, enseguida se le adiciona
una gota de solucin salina fisiolgica y con el mismo aplicador se hace una
mezcla lo ms homognea posible.
2. Hecha la mezcla, procurando que no hayan restos muy gruesos, se coloca un
cubreobjetos sobre ella, cuidando que no queden burbujas y de ser necesario, se
adiciona ms reactivo por un lado del cubreobjetos para no dejar secar la
preparacin. Se puede sellar con barniz de uas alrededor del cubreobjetos, para
evitar que se seque y prolongar el tiempo para la observacin.
3. Se observa al microscopio a 10 X y despus a 40 X. Con ayuda de un atlas de
Parasitologa, se aprende a diferenciar a los parsitos de los diferentes tipos de
residuos fecales (artefactos).
4. En otro portaobjetos se procede de la misma manera que los puntos 1 a 3,
substituyendo la solucin salina por Sol de yodo (Lugol). Los parsitos y sus
estructuras se tien de amarillo o de caf.
5. En otro portaobjetos se procede de la misma manera que los puntos 1 a 3
substituyendo la solucin salina por colorante de azul de metileno (colorante de
Nair), observando a los parsitos de color azul.

NOTA:
En el caso de E. histolytica, se cuenta con tcnicas inmunodiagnsticas
comercialmente disponibles, como las de ELISA (inmunoensayo-enzimtico)
para deteccin de antgenos fecales, para el diagnostico de la amibiasis
intestinal. El organismo patgeno E. histolytica y el no-patgeno Entamoeba
dispar son morfolgicamente idnticos cuando se observan l microscopio. En
dicha tcnica se utilizan anticuerpos monoclonales que detectan la protena de
adherencia que es inhibida por la galactosa en el patgeno E. histolytica. El
requisito para esta prueba es que las heces sean frescas sin conservadores.


RESULTADOS, DISCUSION Y CONCLUSIONES.
- Haga dibujos detallados de los parsitos encontrados en las heces
estudiadas.
- Hay posibilidad de que encuentren protozoarios y helmintos
- Compare con la literatura para identificarlos.
- Concluya cuales parsitos identific.
- Discuta las dificultades de la tcnica y dibuje los parsitos encontrados.


BIBLIOGRAFIA
DPDx Selection of Standard Techniques for Examination of Fecal Specimens
http://www.dpd.cdc.gov/DPDx/CEUs/Lab_tech_ceu.asp?body=Lab_Tech/body_l
abtech_stand7.htm

S.L. Marks, 2006. What Constitutes a Proper Fecal Examination?
BVSc, PhD, Dip. ACVIM (Internal Medicine, Oncology), Dip. ACVN
University of California, Davis, School of Veterinary Medicine
Davis, California, USA