Especialista de Produto Especialista de Produto PerkinElmer do Brasil PerkinElmer do Brasil Introdu Introdu o Te o Te rica rica Hist Hist rico rico Primeiro Primeiro postulado postulado por por Smekal Smekal em em 1923 1923 Dr. Dr. Chandrasekhara Chandrasekhara Venkata Venkata Raman Raman Primeiro Primeiro a a observar observar o o espalhamento espalhamento Raman Raman em em 1928 ( 1928 (junto junto com K.S, com K.S, Krishnan) Krishnan) Raman Raman ganhou ganhou o o pr pr mio mio Nobel de Nobel de F F sica sica em em 1930 1930 Raman Raman Quando uma molcula irradiada, a energia pode ser transmitida, absorvida, ou espalhada. A espectroscopia Raman baseada na deteco da luz espalhada. No espalhamento Rayleigh (elstico), a interao da molcula com o fton no provoca mudanas nos nveis de energia vibracional e/ou rotacional da molcula. Assim as freqncias da luz incidente e espalhada so as mesmas. O efeito Raman pode ser explicado pela coliso no-elstica entre o fton incidente e a molcula. Isto muda os nveis das energias vibracional e/ou rotacional da molcula por um incremento ( E). Pela lei de conservao de energia, isto significa que as energias dos ftons incidente e espalhado sero diferentes, ou seja incidente
espalhada . Se a molcula absorve energia, E positiva, incidente > espalhada ., estas so as linhas Stokes do espectro (regra de Stokes de fluorescncia, incidente > fluorescncia ). Se a molcula perde energia, E negativa, incidente < espalhada , linhas anti Stokes do espectro. O O que que os os eletrons eletrons fazem fazem O O que que espalhamento espalhamento Raman? Raman? Raman Raman As linhas Stokes e anti-Stokes correspondem a vibrao molecular da amostra em estudo Raman Raman O espectro de Raman plotado em cm -1 , mas esta unidade no um valor absoluto como no IR e as medidas no so feitas no MID-IR. O espectro Raman o comprimento de onda da radiao espalhada em relao ao da radiao de excitao (laser). As leituras so feitas na regio do visvel e do NIR. OBS: laser = 785nm 1600cm 1600cm - -1 1 898nm = 11139cm 898nm = 11139cm - -1 1 1000cm 1000cm - -1 1 852nm = 11739cm 852nm = 11739cm - -1 1 0cm 0cm - -1 1 785nm = 12739cm 785nm = 12739cm - -1 1 Espectro Raman Espectro Raman Radia Radia o Detectada o Detectada Linhas Linhas Stokes e Anti Stokes e Anti- -Stokes Stokes Espectro Espectro Raman do Raman do Cyclohexano Cyclohexano Perda Perda de de energia energia Ganho Ganho de de energia energia Sem Sem mudan mudan a a de de energia energia Energy Energy Loss Loss Energy Energy Gain Gain No No Energy Energy Change Change Espectro Espectro Raman Raman Linhas Linhas Stokes e Anti Stokes e Anti- -Stokes Stokes Espectro Espectro Raman do Raman do Cyclohexano Cyclohexano O O espalhamento espalhamento da da luz luz esta esta ao ao nosso nosso redor redor .. .. O sol O sol a fonte de todos os comprimentos de onda da luz vis a fonte de todos os comprimentos de onda da luz vis vel. vel. A luz azul A luz azul espalhada pelas mol espalhada pelas mol culas da atmosfera mais que a luz vermelha, culas da atmosfera mais que a luz vermelha, porque essas mol porque essas mol culas so menores que os comprimentos de onda da luz. culas so menores que os comprimentos de onda da luz. Isso explique o porque o c Isso explique o porque o c u u azul e que no por do sol vemos uma luz vermelha. azul e que no por do sol vemos uma luz vermelha. H H part part culas grandes de culas grandes de gua nas nuvens que promovem um espalhamento gua nas nuvens que promovem um espalhamento igual em todos os comprimentos de onda e com isso dando um efeit igual em todos os comprimentos de onda e com isso dando um efeito branco o branco a nuvem. a nuvem. Efeito Efeito dos dos comprimentos comprimentos de de onda onda Intensidade Intensidade de de espalhamanto espalhamanto = Kl(Pol) = Kl(Pol) 2 2 v v 4 4 K K uma uma constante constante l l o o caminho caminho ptico ptico Pol Pol a a polarisabilidade polarisabilidade da da mol mol cula cula e e nica nica para para cada cada mol mol cula cula. . V V a a freq freq ncia ncia da da radia radia o o incidente incidente. . Isso Isso significa significa que que o laser o laser azul azul d d um um sinal sinal mais mais intenso intenso que que o o vermelho vermelho ou ou NIR. NIR. No No entanto entanto, a , a fluorescencia fluorescencia compete com o compete com o espalhamento espalhamento e se e se estiver estiver presente presente ser ser mais mais forte forte que que o o espalhamento espalhamento e e ir ir mascarar mascarar o o espectro espectro Raman. Raman. Esse Esse o o motivo motivo do do porque porque alguns alguns laborat laborat rios rios usam usam NIR FT NIR FT- -Raman. Raman. Fluorescncia Fluorescncia Red laser Green laser 785nm laser Espectro Espectro de de uma uma tampa tampa de de caneta caneta 532 nm 532 nm 785 nm 785 nm 1064 nm 1064 nm Lasers Lasers usados usados pela pela PE PE O laser de 785nm O laser de 785nm aceito como o melhor, porque: aceito como o melhor, porque: a) bom espalhamento Raman a) bom espalhamento Raman b) alta sensibilidade com o detector CCD b) alta sensibilidade com o detector CCD c) redu c) redu o ou sem efeito da fluorescncia o ou sem efeito da fluorescncia Quando a fluorescncia Quando a fluorescncia um problema usa um problema usa- -se o NIR laser se o NIR laser (1064nm). (1064nm). a) pouco ou nenhum efeito de fluorescncia a) pouco ou nenhum efeito de fluorescncia b) por b) por m, fraco espalhamento e detectores menos sens m, fraco espalhamento e detectores menos sens veis. veis. Outras Outras t t cnicas cnicas: RR, SERS and SERRS : RR, SERS and SERRS RR: RR: Resonance Resonance Raman Raman Ocorre quando a energia de um f Ocorre quando a energia de um f ton do laser coincide com o de ton do laser coincide com o de uma transi uma transi o eletrnica de um grupo crom o eletrnica de um grupo crom foro do sistema em foro do sistema em estudo. estudo. SERS: Surface Enhanced Raman Spectroscopy O espectro Raman de uma molcula que absorvida sobre uma superfcie de ouro ou prata pode ter o sinal significamente aumentado. SERRS: Surface Enhanced Resonance Raman Spectroscopy Similar ao SERS, mas usa um laser com energia que coincide com o grupo cromforo da molcula em estudo. SERS / SERRS podem aumentar o sinal em at bilhes de vezes. 1000 1200 1400 1600 1800 Raman Shift cm -1 1000 1200 1400 1600 1800 Raman Shift cm -1 80 fmol 0.8 fmol Rhodamine labelled oligonucleotide (SERS) Resonance Raman Resonance Raman Espectrmetros Dispersivos Espectrmetros Dispersivos Czerny Czerny- -Turner Turner Sistema requer cerca de 10s para 1s de aquisio do espectro. Diferentes partes do espectro so adquridas em diferentes tempos. Grande problema para anlise de sistemas dinmicos. Exemplo Exemplo Espectro Espectro Raman Raman adquirido adquirido em em 7 7 etapas etapas. . Echelle Echelle Aquisio do espectro instantaneamente. Todos os comprimentos de ondas analisados simultaneamente sem movimentao de nenhuma parte ptica.. 3500 cm -1 1500 1000 500 95 cm -1 500 1000 Grating #1 CCD Detector Grating #2 Espectrmetros Dispersivos Espectrmetros Dispersivos Exemplo Exemplo 3000 2500 2000 1500 1000 500 3000 2500 2000 1500 1000 500 NH O S O O OH N N N N S H FT FT- -Raman Raman Ocasionalmente a amostra pode apresentar fluorescncia. Ocasionalmente a amostra pode apresentar fluorescncia. Neste caso, para um espectro limpo usa Neste caso, para um espectro limpo usa- -se um laser se um laser Nd Nd:YAG (NIR :YAG (NIR 1064nm). 1064nm). Para sistemas YAG usa Para sistemas YAG usa- -se detectores se detectores InGaAs InGaAs ou ou Germanio Germanio. Estes . Estes possuem uma sensibilidade de at possuem uma sensibilidade de at 20x menor que o de s 20x menor que o de s lica. lica. Para compensar a baixa sensibilidade usa Para compensar a baixa sensibilidade usa- -se lasers de 1 se lasers de 1 - - 2w de potncia. 2w de potncia. Por Por m, deve m, deve- -se tomar cuidado para no queimar a amostra. se tomar cuidado para no queimar a amostra. Benef Benef cios cios A espectroscopia Raman A espectroscopia Raman uma t uma t cnica complementar ao Infravermelho. cnica complementar ao Infravermelho. Assim como o infravermelho, o espectro Raman pode ser usado par Assim como o infravermelho, o espectro Raman pode ser usado para a identifica identifica o ( o (finger finger print print). ). Fornece informa Fornece informa es sobre vibra es sobre vibra es homo es homo - - nucleares sim nucleares sim tricas como tricas como os estiramentos os estiramentos - -C=C C=C- - e e S=S S=S- - que so fracas ou inativas no infravermelho. que so fracas ou inativas no infravermelho. Os an Os an is arom is arom ticos possuem bandas fortes. ticos possuem bandas fortes. As amostras precisam de pouca ou nenhuma prepara As amostras precisam de pouca ou nenhuma prepara o. o. uma t uma t cnica no destrutiva. An cnica no destrutiva. An lise lise in in situ situ . . O vidro O vidro um bom material para ser usado como janelas para medidas por um bom material para ser usado como janelas para medidas por Raman. Raman. No requer acess No requer acess rios especiais rios especiais No h No h interferncia de umidade. interferncia de umidade. Raman Raman Espectro Espectro de IR e Raman do de IR e Raman do cido cido Benz Benz ico ico IR IR Raman Raman Aromatic Ring Stretch Carbonyl Ring Stretch in !R Aromatic Stretch in Raman Compara Compara o o Raman, Mid IR, e Near IR Raman, Mid IR, e Near IR Low wavenumber no problem Libraries +000 - 16000 B!G!! ATR..not bad Raman Raman Raman Raman Raman Raman Raman Raman Touch Button Compartimento para vrios tipos de amostras Raman Raman Raman Raman Raman Raman Raman Raman Raman Raman RamanMicro RamanMicro 200 200 785nm laser 785nm laser 95 95 3200 cm 3200 cm - -1 1 range range 10cm 10cm - -1 1 FWHM resolution, 3cm FWHM resolution, 3cm - -1 1 pixel resolution. pixel resolution. 10 micron spot 10 micron spot CT CT RamanMicro 200 RamanMicro 200 Raman Optical Head Spectrometer Raman / Visible Image selector 100W Halogen Lamp Fiber Optic Connectors RamanMicro RamanMicro 200 200 Sample Holder Sample Holder RamanMicro 200 Laser Spot Size RamanMicro 200 Laser Spot Size 200 m 100 m 20 m 10 m Spot Size 600 m 5x 250 m 20x 40 m 50x 20 m 100x Depth of Field Objective 5X 5X 10X 10X 40X 40X 100X 100X 50 Micron Pinhole Laser Spot Compara Compara o o de de Resolu Resolu o o 10cm 10cm - -1 1 4cm 4cm - -1 1 Compara Compara o o de de resolu resolu o o 10cm 10cm - -1 1 4cm 4cm - -1 1 RamanMicro RamanMicro 400 400 785nm laser 785nm laser 95 95 3200 cm 3200 cm - -1 1 range range 4cm 4cm - -1 1 FWHM resolution, 1cm FWHM resolution, 1cm - -1 1 pixel resolution. pixel resolution. 10 micron spot 10 micron spot ECHELLE ECHELLE Raman Microscope Raman Microscope Laser Spectrograph High Performance TE cooled CCD Detector Optical Head, detailed block diagram below Objective Lens Dentro Dentro do do RamanMicro RamanMicro 200 & 400 200 & 400 Objective Lens RamanMicro 200F e 400F com Fibre Probe RamanMicro 200F e 400F com Fibre Probe Laser Spectrograph Laser Switch Optical Head, detailed block diagram below Objective Lens Optical Head, detailed block diagram below Objective Lens RamanMicro 200F e 400F com Fibre Probe RamanMicro 200F e 400F com Fibre Probe Laser Spectrograph Laser Switch Objective Lens Laser Optical Head Motorized XYZ Stage Video Head Spectrograph Laser Switch Optical Probe Head, detailed block diagram below Objective Lens Objective Lens Dentro Dentro do do RamanStation RamanStation 400F 400F Aplica Aplica o o Auto subtrao do espectro do frasco An An lise lise num num frasco frasco ambar ambar de 4L de 4L Spectrum of Bottle Raw Material (Liquid) Spectrum with glass removed Micro Raman Micro Raman Mapeamento Mapeamento de um comprimido de 18mm x 8mm. Raman Raman Imagem Imagem Qu Qu mica mica 3000 2500 2000 1500 1000 500 3000 2500 2000 1500 1000 500 As cores representam a composio qumica Acetoaminophen Caffeine Aspirin Imagem Imagem Qu Qu mica mica e e Mapeamento Mapeamento RamanStation RamanStation 400 400 ou ou MicroRaman MicroRaman Opes de amostragem: - 1. Single point, - 2. Super-Macro (large spot), - 3. Grid sampling, - 4. Line scan, - 5. Depth profile. 1 2 5 4 3 Passo Passo da da XYZ stage < 1micron XYZ stage < 1micron Tintas Tintas de de uma uma brochura brochura comercial comercial Identificao de narcticos e substncias de abuso Raman Raman Raman Raman Amphetamine Methamphetamine Cocaine Heroin Raman Raman Raman Raman Anlise de leos e gorduras Polimorfismo Polimorfismo Polimorfismo so diferentes formas cristalinas para uma mesma substncia. O espectro Raman espcies de polimorfismo so similares, mas diferenas pode ser observadas. Form A Form B Raman Raman 3000 2500 2000 1500 1000 500 3000 2500 2000 1500 1000 500 C+ (Plastic Explosive) 3000 2500 2000 1500 1000 500 3000 2500 2000 1500 1000 500 Gasoline (Nolotov Cocktail) 3000 2500 2000 1500 1000 500 3000 2500 2000 1500 1000 500 Sodium Nitrate (Fertilizer bomb) 3000 2500 2000 1500 1000 500 3000 2500 2000 1500 1000 500 TNT (Dynamite) Raman de Tecido Canceroso Raman de Tecido Canceroso 3000 2500 2000 1500 1000 500 3000 2500 2000 1500 1000 500 Diferen Diferen as as Canceroso Canceroso Tecido Tecido saud saud vel vel Alimentos Alimentos Sem interferncia da Sem interferncia da gua gua Raman de Pol Raman de Pol meros meros PVC PEAD Nylon 11 PET Hidrogenao do Fenil Acetileno A hidrogenao do Fenil Acetileno para a formao do Estireno e do Etil Benzeno um reao que envolve altas presses e altas temperaturas. A tcnica tradicional de anlise por CG. O que necessrio uma amostragem de tempos em tempos provocando uma alterao da presso e uma alterao do equilbrio da reao. Com Raman isso no ocorre, uma vez que a reao monitorada atravs de uma probe. Raman Raman O reator consiste de: Uma roda de ao inoxidvel impregnada de catalisador Uma soluo de reao: Heptano (solvente) e Fenil Acetileno Alta presso de H 2 Raman Raman A cada 10 minutos foi coletado um espectro Raman Mais de 50 espectros foram coletados durante todo o experimento Atravs dos espectros visvel o consumo de Fenil Acetileno atravs da queda da tripla ligao em 2115 cm -1 Raman Raman CC C=C Hidrogenao Raman Raman Starting Material CC Desired Product C=C Reaction Overshoot C-C Correla Correla o o entre entre Raman e CG Raman e CG 0 10 20 30 40 50 60 70 80 Time / mins 0 20 40 60 80 100 %
C o m p o s i t i o n Solido - CG Sem preenchimento - Raman Raman Raman Estudo da cristalinidade de polmeros A rigidez e a resistncia ao impacto de um polmero esta diretamente associada ao seu grau de cristalinidade. Um melhor entendimento do processo de cristalizao do polmero pode resultar em frascos de menor espessura e de mesma resistncia. Menos material mais economia e menor o impacto sobre o meio ambiente. Raman Raman Estudo da cristalinidade de polmeros Amostras cristalinas apresentam um pico em 1096 cm -1 . Material amorfo apresenta apenas um ombro em 1119 cm -1 . Raman Raman Estudo da cristalinidade de polmeros Amostras cristalinas apresentam um pico estreito em 1730 cm -1 . Raman Raman Estudo da cristalinidade de polmeros O grfico abaixo mostra a variao da cristalinidade (1096/1119) em funo do comprimento do frasco. O material essencialmente amorfo no topo e na base do frasco e apresenta uma certa cristalinidade no resto do frasco. PerkinElmer do Brasil Ltda. PerkinElmer do Brasil Ltda. Obrigado pela aten Obrigado pela aten o! o! Thiago Fatobene Especialista de Aplicao thiago.fatobene@perkinelmer.com PerkinElmer PerkinElmer do Brasil do Brasil Perdizes Perdizes - - So Paulo So Paulo