PRINCIPIO La urea es el producto final mayoritario del metabolismo del nitrgeno proteico en los seres humanos. Constituye la fraccin ms abundante del nitrgeno no proteico. La urea se produce en el hgado y es excretada por la orina. Su elevacin es producto de trastornos en la funcin renal o heptica, problemas dietticos, diabetes y otros.
La urea presente en la muestra, es desdoblada a amonio por accin de la enzima ureasa, segn la proposicin de Faucet y Scott.
(NH2)2CO + 2 H20 UREASA 2NH3 + C02 + H20
El amonio producido reacciona con salicilato e hipoclorito en ambiente alcalino, formndose un complejo de color verde. La intensidad del color producido es directamente proporcional a la cantidad de urea presente en la muestra, y su absorbancia se lee a 578 nm (560-620).
CONTENIDOS
UREASA Suspensin Ureasa >50 mM Estabilizantes y preservantes no reactivos c.s.
REACTIVO SALICILATO Acido Saliclico 5 mM Nitroprusiato de Sodio 5 mM Tampn Fosfato pH 6.9 100 mmol/l
REACTIVO HIPOCLORITO Sodio Hidrxido 200 mM Sodio Hipoclorito 10 mM
PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS Conservado entre 2C y 8C y protegido de la luz, estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta. Los reactivos contienen menos del 0.1% de azida sdica. La azida sdica puede reaccionar con tuberas de cobre y plomo formando compuestos explosivos. Las regulaciones locales para el desecho de compuestos peligrosos deben ser respetadas, descartar con abundante agua.
MATERIALES ADICIONALES REQUERIDOS NO SUMINISTRADOS Bao termoregulado. Espectrofotmetro o foto colormetro de filtros capaz de medir absorbancia a 578nm. (rango 560-620 nm) Pipetas automticas. Cronometro y/o timer.
MUESTRAS Suero, Plasma u Orina (diluida 1:100). El plasma debe obtenerse utilizando anticoagulantes libres de amonio. No utilizar fluoruro pues inhibe la accin de la enzima ureasa. La urea es estable en el suero por lo menos 24 horas a temperatura ambiente, varios das entre 2 y 8C, y hasta 3 meses a -20C. La orina de 24 horas debe ser recogida en un frasco que contenga 2.0 ml de Acido Clorhdrico (HCL) Solucin al 50% y centrifugar antes de su uso como muestra.
PROCEDIMIENTO Llevar el reactivo a la temperatura que se realizar el ensayo. Las pipetas a utilizar deben estar limpias y libres de residuos para no contaminar el reactivo.
Para la determinacin de Urea en Orina, diluir la muestra de Orina 1:50 (0.1 ml Orina + 4..9 ml agua desmineralizada) Multiplicar el resultado por 50.
BLANCO PATRON MUESTRA Ureasa 50 l 50 l 50 l Reactivo Salicilato 1 ml 1 ml 1 ml Mezclar. Patrn -- 10 ul -- Muestra -- -- 10 ul
Incubar 3 minutos a 37C o 10 minutos a temperatura ambiente.
Reactivo Hipoclorito 1 ml 1 ml 1 ml
Mezclar, incubar 5 minutos a 37C o 10 minutos a temperatura ambiente.
Leer las absorbancias a 578 nm (560620nm) llevando a cero el espectrofotmetro con el blanco de reactivo. El color resultante es estable por lo menos 60 minutos.
CLCULOS
SUERO, PLASMA u ORINA
FACTOR = ____ 66 _______ Absorbancia Estndar
Urea (mg/dl)= Factor x Abs. Muestra
CONCENTRACION DE UREA EN ORINA DE 24 HORAS
Urea en Orina = mg/dl en Orina X Vol. De Orina en 24 horas X 0.01 (mg / 24 horas)
NOTA: Para expresar los valores obtenidos como Nitrgeno Ureico (mg/dl) multiplicar el valor obtenido por 0.455.
VALORES DE REFERENCIA
Suero o plasma: Urea: 10 a 50 mg/dl Nitrgeno Ureico: 4.5 a 22.7 mg/dl
Orina: Urea: 15 a 30 mg/24 hrs Nitrgeno Ureico: 7 a 14 mg/24 hrs
Nota: Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios intervalos de referencia.
UREA -S Reactivo para la determinacin Enzimtica de Urea en suero, plasma y orina.
2/2 2007-06v4.0 Cdigo Presentacin
05409 2x 50ml
CONTROL DE CALIDAD Pueden ser empleados todos los sueros con valores de Urea determinados por este mtodo. Nosotros recomendamos el uso de nuestro suero de origen animal IHR Diagnstica para verificar la funcionalidad del procedimiento de medida. Cada laboratorio debe establecer su propio programa de control de calidad interno, as como procedimientos de correccin en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias aceptables.
CARACTERISTICAS DE DESEMPEO
LINEARIDAD La reaccin es lineal hasta 300 mg/dl. Para valores superiores, diluir la muestra con suero fisiolgico y el resultado obtenido se multiplica por el factor de dilucin
LIMITE DE DETECCION El limite de deteccin fotomtrica hallado fue 0.001 Abs equivalente a 0.2 mg/dl.
EXACTITUD Una comparacin entre este procedimiento y un reactivo similar usando 110 muestras entre 8.0 y 55 mg/dl produjo un ecuacin de regresin lineal de y= 1.00x -0.47 con un coeficiente de correlacin (r) igual a 0.998.
INTERFERENCIAS Valores elevados de hemoglobina hasta 80 mg/dl, Bilirrubina hasta 32 mg/dl, triglicridos hasta 700mg/dl producen interferencias significativas (<5%) en este mtodo. Otros medicamentos y sustancias pueden interferir 4 .
BIBLIOGRAFA 1. Kaplan, A. and Teng, L.L. in Selected Methods of Clinical Chemistry, Vol. 9, Ed. By W.R. Faulkner and S. Meites, AACC, Washington, pp 357-363 (1982). 2. Tietz, N.W., textbook of Clinical Chemistry, W.B. Saunders Co., Philadelphia, p.1270-1271 (1986). 3. Morin, L.G., Clin. Chem. 20:51 (1974). 4. Henry, R.J., Clinical Chemistry, Principles and Technics. 2 Ed. Harper and Row Publisher. New York, 1974. 5 Young D.S., et al., Clin Chem. 21:1D 1975. 6.Young D.S. Effects of drugs on clinical laboratory tests, 4 th Ed AACC, 1995
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