I.

INTRODUCCIN
El calamar gigante o pota (Dosidicus gigas), es una especie pelgica ocenica que
realiza migraciones hacia la costa relacionadas con procesos de alimentacin y
reproduccin. Tiene una amplia distribucin en el Pacico !riental, desde "#$ico hasta
%hile, y las reas de mayor concentracin se ubican rente a las costas de Per& y "#$ico.
'a Pota, es un recurso hidrobiolgico de gran abundancia en nuestro Pas y de ba(o
precio en el mercado por lo que dierentes in)estigadores )ienen traba(ando en darle un
)alor agregado para poder generar mayores utilidades, adems de ser una e$celente uente
de protena animal que podra ayudar a me(orar los ni)eles de desnutricin de la poblacin
en pobreza total y pobreza e$trema.
'os dierentes gobiernos del Estado Peruano e instituciones de ayuda internacional,
han )enido desarrollando programas de asistencia alimentara en el marco de la lucha
contra la pobreza y la desnutricin. Estos programas tienen como una de sus principales
acti)idades el reparto de sustitutos lcteos (papillas lcteas) a sus beneiciarios, las mismas
que tienen a la leche en pol)o como principal uente de protena animal, lo cual hace que
estos productos tengan un ele)ado precio. *dems, considerando que estos programas )an
dirigidos a la poblacin que se encuentra en situacin de pobreza y de pobreza e$trema,
seg&n estadsticas del +,E+ (-../) al a0o -..-, el 12./ porciento de la poblacin peruana
era pobre, del cual el -/.3 por ciento se encuentra en pobreza e$trema (en la sierra el 43.3
por ciento de la poblacin es pobre y 2/ por ciento se encuentra en pobreza e$trema) y que
nuestro pas no cuenta con los suicientes recursos econmicos para lle)ar la ayuda a toda
esta poblacin (lo que obliga, en cierta medida, a minimizar los costos de esta clase de
programas) se debe buscar uentes de protena animal de ba(o costo para este tipo de
productos, de iguales o me(ores caractersticas nutricionales que la leche en pol)o.
-
Es por ello que la 5acultad de Pesquera de la 6ni)ersidad ,acional *graria 'a
"olina (6,*'"), )iene desarrollando estudios de un concentrado de protena de pota con
la inalidad de sustituir parcialmente las uentes de protena tradicional como son la leche
en pol)o y las protenas del hue)o. 7e han obtenido concentrado de protena de pota cuyos
)alores de protena alcanzan el 84 por ciento ('azo, -..4).
,o e$isten antecedentes de estudios de to$icidad del concentrado de protena de
pota por ser un producto nue)o, es por ello que antes de utilizar esta nue)a uente proteica
se decidi estudiar alg&n posible eecto to$icolgico del producto en su consumo por los
seres humanos como una medida de seguridad alimentara.
1.1 OBJETIVO PRINCIPAL

9eterminar la to$icidad a dosis repetidas (3. das) del concentrado de protena de
pota (Dosidicus gigas) elaborado en la 6,*'" en ratas Sprague Dawley.
1.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS
- 9eterminar la patologa clnica (anlisis bioqumico y hematolgico), con la
inalidad de determinar si e$isten cambios signiicati)os con respecto al grupo
control.
- E)aluar los resultados histopatolgicos con la inalidad de determinar si e$isten
cambios signiicati)os con respecto al grupo control.
- 9eterminar el eecto de la administracin del concentrado de protena de pota sobre
el peso )i)o en ratas.
II. REVISIN BIBLIOGRAFICA
2.1 ASPECTOS GENERALES DE LA POTA
2.1.1 Clasificaci !a"#$ica
%arrillo (:334), se0ala que la pota o calamar gigante presenta la siguiente
clasiicacin ta$onmica;
Phyllum ; "ollusca
%lase ; %ephalopoda
7ubclase ; %oloidea
!rden ; Teuthoidea
7uborden ; !egopsidae
5amilia ; !mmastrephidae
7ubamilia ; !mmanstrepinae
<enero ; 9osidicus
Especie ; Dosidicus gigas
,ombre com&n ; %alamar gigante
2.1.2 C#$%#sici &'($ica ) '!*ici#al
'a carne del calamar gigante es rica en protenas as como el pescado de carne
blanca. En su composicin tiene todos los aminocidos esenciales, adems de tener un alto
contenido de cidos grasos poliinsaturados, los cuales (uegan un rol importante en la dieta,
protegiendo a los adultos mayores de los problemas cardio)asculares (=reuzer, :382).
*simismo, el calamar gigante es recomendado en la dieta de ni0os debido a la
presencia de lisina, la cual es )ital para el crecimiento (>ra)o, -..:).
2
En el %uadro : se puede obser)ar los )alores de la composicin qumica pro$imal
de la carne de pota, seg&n dierentes autores.
C'a+*# 1, C#$%#sici &'($ica %*#"i$al +-l $a!# +- la %#!a
CO.PONENTES
./sc'l#
1
0
./sc'l#
2
0
Fil-!- c# %i-l
1
0
Fil-!- si %i-l
2
0
3'$-+a+ 8:.:. 8../4 81./. 82...
P*#!-(a c*'+a :4... :?.21 :-.:. :-.?.
G*asa c*'+a :.:. ..48 :.2. :.4.
C-i4a :.22 :.:. :.2.
Ca*5#6i+*a!#s ... ..1. ..:. ../.
Sal-s $i-*al-s :.?.
F'-!-, 1 I.ARPE - ITP 71889:; 2 B*a<# 72==1:; 1 ) 2 P-+*-sc6i 71881:.
En el cuadro - se pueden apreciar los aminocidos hallados en el manto de la pota.
C'a+*# 2, A$i#>ci+#s +-!-c!a+#s - -l $/sc'l# +-l $a!# +- la %#!a
A.INOACIDOS .USCULO
FRACCION
.IOFIBRILAR
FRACCION
SARCOPLAS.ATICA
*c, *spartico @ A A
7erina @ @ @
Treonina @ A A
*c. <lutmico @ @ @
Prolina @ A @
<licina @ @ @
*lanita @ @ @
%isterna @ A @
Balina A A A
"etionina @ A A
'eucina @ A @
+soleucina @ A A
Tirosina @ @ A
5enilalanina @ @ @
'isina @ A @
Cistidina A A A
*rginina @ @ @
Triptano @ A A
F'-!-, P-+*-sc6i 71881:.
1
+"*DPE A +TP (:334) airman que la carne de la pota posee los cidos grasos de
mayor importancia nutricional, el 9ocosahe$anoico (9C*) y Eicosapentanoico (EP*),
ambos omega A /.
En el %uadro / se muestran los cidos grasos presentes en la grasa de pota. %omo se puede
obser)ar, contiene altos porcenta(es de cidos grasos omega A /.
C'a+*# 1, C#!-i+# +- >ci+#s ?*as#s - -l $a!# +- la %#!a
ACIDO GRASO 0
%:2;. "irstico :.2.
%:1;. Palmitoleico ..1.
%:4;. Palmtico :3.3.
%:4;: Palmitoleico Traz.
%:?;. "argrico Traz.
%:8;. Esterico /.1.
%:8;: !leico 2...
%:8;- 'inoleico Traz.
%:8;/ 'inol#nico Traz.
%-.;. *raqudico 4.2.
%-.;: Eicosaenoico Traz.
%-.;/ Eicosatrienoico ..-.
%-.;2 *raquidnico Traz.
C2=,@ Eic#sa%-!a#ic# 19.A=
%--;/ 9ocosatrienoico ..-.
%--;2 9ocosatetraenoico ../.
%--;1 9ocosapentaenoico ..-.
C22,9 D#c#sa6-"a-#ic# 29.8=
F'-!-, I.ARPE - ITP 71889:.
En cuanto a los minerales, determinaron que el mayor contenido de #stos est dado por
el potasio, seguido del sodio, magnesio y calcio (%uadro 2).
C'a+*# 2, C#!-i+# +- $ac*#-l-$-!#s - -l $a!# +- la %#!a
.ACROELE.ENTOS
7odio (mgE:..g) :38.-.
Potasio (mgE:..g) /-:.3.
%alcio (mgE:..g) 3.:.
"agnesio (mgE:..) 21.4.
4
F'-!-, I.ARPE - ITP 71889:.
2.2 CONCENTRADO PROTEICO DE PESCADO
2.2.1 D-fiici
7uzuFi (:38?) deine a los concentrados proteicos de pescado de la siguiente
manera; harina de pescado, que )a a ser utilizada como alimento, se obtiene con m#todos
higi#nicos a partir de grandes cantidades de especies heterog#neas. Esto da como
resultados un producto nutriti)o e higi#nico para consumo humano, que se llama
Gconcentrado de protena de pescadoH, no e$trado con sol)entes (%PP tipo >). !tro tipo es
el concentrado de protena sometido a procesos de e$traccin con sol)entes. +ndica que es
as como se obtiene dos tipos de concentrado proteico de pescado; G%PP tipo *H, el cual es
ms puro que el G%PP tipo >H. 'os dos son altamente nutriti)os pero mientras el tipo >
carece de palatabilidad, el tipo * es demasiado caro para suplementar la deiciencia
proteica de las regiones del mundo ms pobres y carece de la aceptacin comercial para ser
usada con otros alimentos en pases a)anzados. 'os concentrados proteicos carecen de
capacidad de rehidratacin lo cual crea diicultades a la hora de ser procesados con otros
alimentos. 'a deinicin ms simple de concentrado proteico de pescado es la propuesta
por "adrid et al., (:332) que dice que los concentrados proteicos de pescado son
bsicamente harinas de pescado aptas para el consumo humano.
En el %uadro 1 se muestran las e$igencias t#cnicas para los concentrado proteicos
tipo * (sometidos a la e$traccin de grasas con sol)entes) y el tipo > (sin e$traccin de
grasas).
C'a+*# @, Es%-cificaci#-s !Bcicas %a*a l#s C#c-!*a+#s P*#!-ic#s +- P-sca+#
7CPP:
?
F'-!-, .a+*i+ et al. 71882:.
2.2.2 P*#c-s# +- fa5*icaci
'os principales procedimientos para la elaboracin de los %oncentrados Proteicos
de Pescado (%PP), ueron desarrollados entre :31. y :3?.. 'a mayor parte de estos
procedimientos incluye el empleo de un sol)ente orgnico o una mezcla de sol)entes. 'os
principales procesos de abricacin de %PP se eect&an con isopropanol, etanol,
dicloroetileno y he$ano. Por razones de seguridad se ha limitado el empleo de sol)entes
muy )oltiles (he$ano, #ter de petrleo), que por otro lado estn prohibidos en barcos de
captura. 7e han eectuado estudios con dodecilsulato de sodio (7.9.7), tambi#n llamado
laurilsulato de sodio, en %hile y Escocia (%aiozzi et al., :348 y %onnell, :343
mencionados por 'azo, -..4).
Doldn (-..-) elabor una harina precocida a partir de surimi de also )olador
(Prionotus stephanophrys). El producto obtenido ue de alto contenido de protenas y ba(o
en grasaI sin embargo, seg&n los resultados de la e)aluacin sensorial al que ue sometido,
DESCRIPCIN TIPO A TIPO B
P*#!-(a
3'$-+a+
G*asa
C-i4a
A*-a
Fl/#*
Lisia +is%#i5l- 7*-s%-c!# a la %*#!-(a:
Bac!-*ias,
- Bac!-*ias !#!al-sC?
- Bac!-*ias c#lif#*$-s !#!al-sC? 71ADC:
- Bac!-*ias c#lif#*$-s f-cal-sC? 722DC:
- E!-*#c#c#sC?
- SalmonellaC?
- Bac!-*ias +-s+#5la+#*as +- l-ci!iaC?
- Cl#s!*i+i#s s'lfi!# *-+'c!#*-sC?
Ol#* ) sa5#*
"n. ?1J
"$. :.J
"$. ..1J
"$. :1J
"$. ..1J
"$. -1. ppm
"n. 4.1J
"$. :.
2
*usencia
*usencia
*usencia
*usencia
*usencia
*usencia
+nodoro, inspido
"n. 4.J
"$. :.J
7in lmite
"$. -.J
"$. ..1J
"$. -1. ppm
"n. 4.1J
"$. :.
1
"$. :.
-
"$. :.
"$. :.
-
*usencia
"$. :.
-
"$. :.
-
*mplio margen
8
present ligero olor y sabor residual de pescado, lo cual lo podra catalogar como un
concentrado proteico de pescado de tipo >.
'azo (-..4) elabor un concentrado de protena a partir de pota precocida. 9icho
producto elaborado por la 5acultad de Pesquera de la 6ni)ersidad ,acional *graria 'a
"olina (6,*'"), ue el que se ha e)aluado en la in)estigacin. En el %uadro 4 se
muestran los resultados de la e)aluacin sensorial realizada al concentrado de protena de
pota. Estas caractersticas se mantienen inalterables hasta los 3. das de almacenamiento, a
temperatura ambiente.
C'a+*# 9, R-s'l!a+#s +-l a>lisis s-s#*ial +-l c#c-!*a+# +- %*#!-(a +- %#!a.
CARACTERESTICAS 1D DEA 8=D DEA
C#l#* >lanco lechoso >lanco cremoso
Ol#*
*gradable y sua)e,
sin olor a pota
*gradable y sua)e,
tenue olor a pota
Sa5#*
*gradable y neutroI
sin sabor a pota
*gradable,
tenue sabor a pota
T-"!'*a
7ua)e al tacto y
pul)erulenta
7ua)e al tacto y
pul)erulenta
F'-!-, La4# 72==9:.
2.1 CONCENTRADO DE PROTEINA DE POTA
Es una protena concentrada en pol)o, de consumo humano directo, con un )alor
biolgico del 3.J, con una concentracin de 84J de protena y /J de grasas (2.J de las
cuales son omega / y 4). 7e obtiene de la raccin muscular de la pota (Dosidicus gigas) y
en su proceso no se utiliza la piel, )sceras, cartlagos ni tentculos y se elabora sin el uso
de sol)entes ni agentes qumicos de ninguna especie (Doldan y 'azo, -..1).
El %uadro ? muestra la composicin qumica pro$imal del concentrado de protena de
pota. Estos resultados son similares, en cuanto al contenido de protena, ceniza y humedad, a
lo propuestos por el %omit# %onsulti)o sobre Protenas para el %oncentrado Proteico de
Pescado del tipo *. 'a mayor dierencia se dio en el contenido de grasas ('azo, -..4).
3
C'a+*# A, C#$%#sici &'($ica %*#"i$al +-l c#c-!*a+# +- %*#!-(a +- %#!a
CO.PONENTE 0
Protenas 84..2
<rasas -.?.
%enizas 2.34
Cumedad 4./.
F'-!-, La4# 72==9:.
'os resultados de los anlisis microbiolgicos realizados al concentrado de protena
de pota por 'azo (-..4) se muestran en el %uadro 8. 'os mismos indican que el producto en
mencin cumple con las e$igencia microbiolgicas de los concentrados proteicos de pescado
del tipo * y > reportados por "adrid et al. (:332).
C'a+*# F, R-s'l!a+#s +-l a>lisis $ic*#5i#l?ic# +-l c#c-!*a+# +- %*#!-(a +- %#!a
ANGLISIS .ICROBIOLOGICOS RESULTADOS
C#!-# +- a-*#5i#s - %laca K :. ucEg
E. coli *usencia
S. aureus *usencia
3#?#s 7$#6#s ) l-<a+'*as: K :. ucEg
Salmonella *usenciaE-1 g
F'-!-, La4# 72==9:.
En el %uadro 3 se muestran los cidos grasos presentes en el concentrado de protena de
pota. %omo se puede obser)ar, al igual que en el manto de la pota, contiene altos porcenta(es
de cidos grasos omega L / son cidos grasos esenciales (el organismo humano no los
produce internamente). 7e ha demostrado e$perimentalmente que el consumo de grandes
cantidades de omegaA/ 7H-1: aumenta considerablemente el tiempo de coagulacin de la
sangre, lo cual e$plica por qu# en comunidades que consumen muchos alimentos con
omegaA/ (esquimales, (aponeses, etc.) la incidencia de -f-*$-+a+-s ca*+i#<asc'la*-s es
sumamente ba(a y omega L 4 7H-9:, que son cidos grasos que tambi#n son esenciales, pero
tienden a consumirse en e$ceso en las +i-!as modernas, sobre todo por su inclusin en
productos de comida elaborada.
C'a+*# 8, C#!-i+# +- >ci+#s ?*as#s - -l c#c-!*a+# +- %*#!-(a +- %#!a.
:.
ACIDO GRASO NO.BRE RESULTADOS
%:4;. Mcido he$adecanoico -4.. J
%:4;: NA? Mcido he$adecenoico ../ J
%:?;. Mcido heptadecanoico :.. J
%:8;. Mcido octadecanoico ?.8 J
%:8;: NA3 Mcido octadecenoico :.2 J
%:8;: NA? :.2 J
%:8;- NA4 Mcido octadecadienoico ..2 J
%:8;/ NA4 Mcido octadecatrienoico ..- J
%-.;. *cido eicosanoico ..2 J
%-.;: NA:: @ -.;: NA3 *cido eicosenoico 8./ J
%-.;- NA4 ..- J
%-.;/ NA/ ../ J
%-.;2 NA/ *cido eicosatetraenoico :.1J
%-.;1 NA/ *cido eicosapentaenoico :-.3J
%-:;1 NA/ ..- J
%--;. *cido beh#nico ../ J
%--;: NA3 -.. J
%--;2 NA4 ..: J
%--;1 NA4 ..1 J
%--;1 NA/ *cido docosapentaenoico ..2 J
%--;4 NA/ *cido docosahe$aenoico /:./ J
%-2;: NA3 ..4 J
F'-!-, E'*#fis Da$a*I ACS +- Dia$a*ca 7R#l+> ) La4#J 2==@:.
En el cuadro :. se puede apreciar el contenido de aminocidos hallados en el concentrado
de protena de pota, de los cuales present una distribucin de los ocho aminocidos
esenciales similar a los presentados por la leche en pol)o y el hue)o deshidratado. 'a
cantidad de triptano, aminocido limitante en el concentrado de pota, ue similar al que
presenta la carne de res (5*!, :3?.).
C'a+*# 1=, C#!-i+# +- a$i#>ci+#s +-l c#c-!*a+# +- %*#!-(a +- %#!a
A.INOACIDOS ESENCIALES RESULTADOS
'isina ?.3 gE:.. g
Triptano ..32 gE:.. g
Treonina 2.: gE:.. g
Balina 2./ gE:.. g
"etionina /.. gE:.. g
+soleucina 2.8 gE:.. g
'eucina ?.3 gE:.. g
5enilalanina /.8 gE:.. g
Cistidina -.: gE:.. g
T#!al 1F.F2 ?C1== ?
NO ESENCIALES
::
*rginina 4.? gE:.. g
*cido asprtico 3.1 gE:.. g
7erina 2./ gE:.. g
*cido glutmico :2.1 gE:.. g
Prolina /.1 gE:.. g
<licina 2.. gE:.. g
*lanina 1.. gE:.. g
%isteina @ %istina :..4 gE:.. g
Tirosina /.- gE:.. g
T#!al a$i#>ci+#s
R K Es-cial-sCT#!al " 1==
8=.9 ?C1== ?
22.FA0
F'-!-, E'*#fis Da$a*I ACS +- Dia$a*ca 7R#l+> ) La4#J 2==@:.
2.2 FUNDA.ENTOS DE TOLICOLOGIA
7ilbergeld (-..:) deine a la to$icologa como el estudio de los )enenos o, en una
deinicin ms precisa, la identiicacin y cuantiicacin de los eectos ad)ersos asociados
a la e$posicin a agentes sicos, sustancias qumicas y otras situaciones. 'a to$icologa
abarca desde estudios de in)estigacin bsica sobre el mecanismo de accin de los agentes
t$icos hasta la elaboracin e interpretacin de pruebas normalizadas para determinar las
propiedades t$icas de los agentes. *porta una importante inormacin tanto a la medicina
como a la epidemiologa de cara a comprender la etiologa de las enermedades, as como
sobre la plausibilidad de las asociaciones que se obser)an entre #stas y las e$posiciones,
incluidas las e$posiciones proesionales.
7eg&n Depetto (:33?), un t$ico es una sustancia que puede producir alg&n eecto
noci)o sobre un ser )i)o, y como la )ida, tanto )egetal como animal, es una contin&a
sucesin de equilibrios dinmicos, los t$icos son los agentes qumicos, o sicos, capaces
de alterar algunos de estos equilibrios.
9e acuerdo con esto, cualquier sustancia puede actuar como t$ico, ya que tanto los
productos e$genos como los propios constituyentes del organismo, cuando se encuentran
en #l en e$cesi)as proporciones, pueden producir trastornos t$icos. 9ichos compuestos
e$genos se denominan $enobiticos.
:-
9e aqu que se deri)a que el concepto de to$icidad posea un carcter relati)o. ,o
hay sustancias at$icasI cualquier producto qumico actuar como t$ico, a unas
determinadas condiciones del su(eto, de la dosis y del ambiente. Este concepto ue
enunciado por Paracelso (siglo OB+), cuando airmo que Gtodo depende de la dosisH. 6na
sustancia que administrada en peque0as cantidades produzca da0o, ser ms t$ica que
otra sustancia que precisa de mayor dosis para originar el mismo da0o. Por e(emplo, el
agua es indispensable para la )ida, muchos organismos estn constituidos en ms de sus
dos terceras partes por aguaI sin embargo, un e$ceso de agua ingerida, o una enema rectal
de agua destilada, puede producir la muerte por into$icacin hdrica. El o$geno o la
glucosa son imprescindibles para la mayora de los organismos, pero sabemos que su
e$ceso conduce a gra)es trastornos y a la muerte. 9e la misma manera, la )ida se hace
imposible en una atmsera de o$geno puro, porque se consume rpidamente el cido
gammaaminobutrico, moderador de la transmisin ner)iosa central, y como consecuencia,
se producen gra)es alteraciones ner)iosas, con)ulsiones y la muerte (Depetto, :33?).
Depetto (:33?) deine a la to$icologa como la ciencia que estudia las sustancias
qumicas y los agentes sicos en cuanto son capaces de producir alteraciones patolgicas a
los seres )i)os, a la par que estudia los mecanismos de produccin de tales alteraciones y
los medios para contrarrestarlas, as como los procedimientos para detectar, identiicar y
determinar tales agentes y )alorar su grado de to$icidad.
'a to$icologa de los alimentos o tambi#n conocida como to$icologa
bromatolgica, es una especialidad de la to$icologa ambiental, cuyo inter#s esta
creciendo rpidamenteI en consecuencia, estn aumentando los programas acad#micos
que abarcan la ense0anza, el adiestramiento y la in)estigacin de esta materia
(7hibamoto y >(eldanes, :33/).
2.2.1 Fac!#*-s i$%lica+#s - la i!#"icaci
7eg&n Balle y 'ucas (-...) la accin de un agente t$ico sobre un organismo )i)o
denominado como into$icacin, es un proceso relati)amente comple(o, en el cual estn
in)olucrados muchos actores. 7in embargo, hay por lo menos cinco actores que estn
ntimamente ligados al enmeno de la into$icacin;
:/
a. Ca*>c!-* !"ic# +-l a?-!- "-#5i!ic#
*unque un agente que produce una into$icacin puede ser qumico o sico, en
to$icologa de alimentos se reiere e$clusi)amente a sustancias qumicas. 6n t#rmino muy
usado en el rea armacolgica para deinir cualquier sustancia e$tra0a al organismo en
cuestin, es la de agente $enobitico. ,o obstante como Paracelso mencion; Gno hay
sustancia que no sea )enenosaH, que indica que el eecto ben#ico y da0ino de una
sustancia depende de la dosis. 7in embargo, para cada sustancia qumica hay un
determinado grado de to$icidad.
5. Sis!-$a 5i#l?ic#
El sistema biolgico sobre el cual act&a el agente t$ico es de suma importancia, ya
que el eecto )ariar notablemente seg&n el organismo. 9icho actor debe ser tomado en
cuenta, ya que es bien conocido que entre las dierentes especies de animales y el hombre
hay una gran )ariacin en la sensibilidad hacia los agentes t$icos. El conocimiento del
origen, desarrollo y curso de una into$icacin en un animal particular debe ser establecido
para con bases cienticas, e$trapolarlo al hombre.
c. V(a # *'!a +- a5s#*ci
Es bien conocido que un mismo agente t$ico puede producir eectos muy
dierentes, dependiendo de la ruta por la cual el sistema biolgico lo absorba. %omo
e(emplo tenemos el caso del disol)ente he$ano, el cual si una persona adulta inhala sus
)apores, en un lapso de : a / minutos puede perder el conocimientoI sin embargo, esta
misma persona puede ser capaz de beber hasta algunas decenas de mililitros sin que se
obser)e eecto alguno de to$icidad aguda. 'o anterior se debe a que para que un agente
$enobitico produzca su eecto t$ico debe llegar a los receptores especicos,
atra)esando una o )arias membranas tisulares (5abre y Truhaut, :3?4).
Pa que histricamente la principal )a de administracin por la cual se absorbe un
agente $enobitico ue la oral, en la actualidad se reconocen dos grandes rutas de
:2
administracin, que son la enteral, se usa el tracto gastrointestinal, (oral, sublingual y
rectal) y la parenteral, se reiere a todas las )as en las que se e)ita el paso por el aparato
digesti)o como se obser)a en la igura :.
F'-!-, Vall- ) L'cas 72===:.
Fi?'*a 1, V(as +- a+$iis!*aci +- "-#5i!ic#s 7a5s#*ci:.
Para que un agente $enobitico pueda maniestar su eecto ben#ico (remedio) o
da0ino ()eneno), debe atra)esar y alcanzar los receptores especicos del rgano o te(ido,
por lo cual debe ser capaz de atra)esar las dierentes barreras biolgicas. *s tenemos que
de todas las anteriores )as o rutas de absorcin de un agente $enobitico su )elocidad de
absorcin es dierente como se puede obser)ar en el cuadro ::.
C'a+*# 11, V(as # *'!as +- a+$iis!*aci ) s' <-l#ci+a+ +- a5s#*ci
BQ* P!9ED 9E PE,ETD*%+R,
+ntra)enosa "uy alto
+nhalatoria "uy alto
+ntraperiotenal *lto
7ubcutnea *lto
+ntramuscular *lto
<astrointestinal >a(o
%utnea o tpica "uy ba(o
F'-!-, Pasc'44# 72==F:.
:1
+. Ti-$%# +- i!-*acci +-l a?-!- !"ic#
El eecto de un agente t$ico sobre un sistema biolgico se traduce en una
alteracin del equilibrio isiolgico (homestasis), por lo que una into$icacin es una
enermedad y como tal debe considerarse ba(o un criterio patocrnico, es decir
estimando su curso o e)olucin en uncin del tiempo, as podemos clasiicarla como
into$icacin aguda, crnica o subaguda.
'a into$icacin aguda se deine como la e$posicin hacia un agente $enobitico
que produce una maniestacin casi inmediata (en ocasiones en minutos) con una sola
administracin del t$ico, que puede lle)ar al into$icado a la muerte, o a una
recuperacin total o parcial, de la cual pueden quedar o no secuelas o lesiones
persistentes. En muchos de los casos de una into$icacin aguda se presenta un
enmeno de re)ersibilidad con e$cepcin de la muerte.
En general la into$icacin subaguda (llamada tambi#n subcrnica), no implica
un menor grado de gra)edad de la into$icacin aguda, sino que se presenta una
e)olucin de la into$icacin con trastornos subclnicos. *unque este tipo de
into$icacin requiere la administracin repetiti)a del t$ico, al inicio no se presentan
trastornos )isiblesI sin embargo, a corto plazo se pueden presentar e)idencias de la
into$icacin y algunos to$iclogos consideran que para que se presente #sta, se debe
e$poner el sistema biolgico al t$ico en un lapso que puede )ariar de un mes a tres
meses.
'a into$icacin crnica se presenta como consecuencia a la repetida e$posicin
hacia el agente t$ico. Esta absorcin se produce con cantidades relati)amente peque0as
del t$ico, que por s mismo no producen trastornos )isibles en un inicio, pero la
acumulacin del agente $enobitico en el organismo (normalmente en un rgano o te(ido
especico) y con el transcurso del tiempo, se presentan estados patolgicos, y en la
mayora de los casos son de carcter irre)ersible.
:4
-. E"c*-ci +-l a?-!- !"ic#
'a e$crecin de los t$icos se eect&a por medio de la orina, bilis, heces y una alta
proporcin de los compuestos )oltiles, por el aire e$pirado. "enores cantidades se
eliminan por la leche, el sudor y la sali)a, y que aunque cuantitati)amente no sean
rele)antes, en algunos casos cobra importancia, como es el caso de madres en
lactancia que sean umadoras, bebedoras o drogadictas.
El me(or sistema de e$crecin es la )a urinariaI ya que en un adulto, las arteriolas
precedentes de la arteria renal aportan un lu(o de :.- a :./ lEmin. (apro$imadamente el
-1J del gasto cardaco) as, la e$crecin urinaria es la ms importante para eliminar del
organismo las sustancias t$icas ingeridas en la dieta. El ri0n e$creta los t$icos por la
misma ruta que e$creta las sustancias endgenas.
'os capilares glomerulares tienen poros relati)amente grandes (2. *ngstroms), que
permiten el paso de sustancias de peso molecular de hasta ?.,...I por lo tanto, sal)o
protenas de alto peso molecular, se pueden iltrar en el glom#rulo. 'os &nicos t$icos que
no se iltran, son los que estn unidos a protenas de alto peso molecular. Todos los
compuestos que se encuentran en la orina tubular podrn e$cretarse con ella o reabsorberse
pasi)amente a la corriente sangunea. 'as sustancias polares o hidrosolubles generalmente
no se absorben y pasan a la orinaI sin embargo, los compuestos con alto coeiciente de
particin lpidoEagua sern reabsorbidos, pasi)amente a tra)#s de las membranas tubulares.
Pa que las sustancias con un alto grado de liposolubilidad no pasan al tubo renal o son
reabsorbidas, es necesario que el sistema biolgico para eliminarlas deba transormarlas
introduci#ndoles grupos uncionales a la mol#cula (especialmente hidro$ilos) para que se
aumente su polaridad o con(ugarlas con sustancias acarreadoras, que incrementen su
hidrosolubilidadI al primer ob(eti)o contribuye el ele)ado ni)el de enzimas o$idasas en el
te(ido renal. *dems, en este proceso de e$crecin renal es de suma importancia el pC, y
en este caso ser con)eniente que el compuesto ionizable se encuentre en su orma inica
para que se acilite su e$crecin (Codgson y 'e)i, :383).
:?
* tra)#s de la bilis, debido a sus cualidades tensoacti)as, el hgado elimina
sustancias de ele)ado peso molecular (S/..), ya sean polares o no polares y
ionizadas o no ionizadas. ,ormalmente, la e$crecin se realiza contra un gradiente de
concentracin. 'a )elocidad de ormacin de bilis es mucho menor que la de orinaI una
importante dierencia anatmica entre el hgado y el ri0n, es que el primero dispone de
una doble )a de aporte sanguneo constituido por la )ena porta y por la de la arteria
heptica. 'a sangre del hgado, contrariamente a la del ri0n, circula a una )elocidad
relati)amente lenta, lo que da tiempo para que las sustancias liposolubles penetren en los
hepatocitos y puedan ser secretadas por la bilis. ,o obstante que la bilis )ierte
directamente al intestino delgado, #stos compuestos son e$cretados con las heces o en
ocasiones son biotransormados por las bacterias intestinales de tal orma que se pueden
reabsorber, en el &ltimo caso se establece un ciclo que se conoce como %iclo
Enteroheptico (7hibamoto y >(eldanes, :334).
2.@ PROCESO DE BIOTRANSFOR.ACIN
'os humanos y muchos otros animales estn constantemente e$puestos en su medio
ambiente a una )asta )ariedad de agentes $enobiticosI los cuales pueden ser de origen
natural o ormados por inter)encin del hombres. En general los compuestos ms
lipolicos son ms cilmente absorbidos a tra)#s de la piel, pulmones o del tracto
gastrointestinal. 'a constante e$posicin a este tipo de sustancias podra resultar en su
acumulacin dentro del organismo, al menos que se presente un sistema eicaz de
eliminacin. %on e$cepcin de la e$halacin, para que un agente $enobitico pueda ser
eliminado del organismo, requiere que sea soluble en ase acuosa, lo anterior unciona para
compuestos no )oltiles y en consecuencia sern e$cretados por la orina y las heces, que
son las predominantes rutas de eliminacin. 7in embargo, los compuestos lipolicos que se
encuentran e los luidos de e$crecin tienden a diundir hacia las membranas y en
consecuencia son reabsorbidos, mientras que los compuestos solubles en agua son
e$cretados, lo que de(ara aparentemente una acumulacin de los agentes $enobiticos
lipolicos dentro del organismo (=laassen et al, :384).
:8
2.@.1 Pa#*a$a ?--*al
9e acuerdo a la estructura de la membrana celular, esta le coniere una selecti)idad
en la absorcin tanto de las sustancias endgenas como $enobiticas. Esta selecti)idad
permite que e$istan )as de absorcin especica para los nutrimientos hidrosolubles con un
gasto energ#tico (transporte acti)o), pero por otra parte aunque la mayora de los
organismos )i)os son casi impermeables a la gran mayora de las sustancias hidrosolubles
no deseables, no pueden pre)enir la absorcin de la mayora de las sustancias liposolubles.
En la igura - tenemos resumido en un esquema ilustrati)o, las principales )as de
absorcin y eliminacin tanto de compuestos endgenos como e$genos (7hibamoto y
>(eldanes, :334).
F'-!-, Vall- ) L'cas 72===:.
Fi?'*a 2, P*ici%al-s <(as +- -"c*-ci ) a5s#*ci +- "-#5i!ic#s.
:3
2.@.2 A5s#*ci
'os animales superiores han desarrollado un n&mero de sistemas metablicos que
con)ierten los agentes $enobiticos liposolubles en metabolitos hidrosolubles capaces de
ser e$cretados por las )as de eliminacin. * esta acti)idad bioqumica se le ha
denominado proceso de >iotransormacin, el cual se ha di)idido a su )ez en dos grandes
grupos de acti)idad enzimtica; reaccin de 5ase + y 5ase ++ (*nders, :381).
a. R-acci#-s fas- I.
'a uncin de este tipo de reacciones, es modiicar la estructura qumica de la
mol#cula, por introduccin de grupos uncionales como son hidro$ilo, amino, carbo$ilo
entre otros. Tambi#n, se puede obtener una mayor polaridad del agente $enobitico por
e$posicin de grupos uncionales como es el proceso de hidrlisis. Posiblemente la
o$idacin es la reaccin ms importante de las reacciones de ase +I en general estas
reacciones estn mediadas por el sistema de o$idacin microsomal que contiene el
citrocromo PA21., tambi#n conocido como Gsistema o$idasa de uncin mi$taH, el cual
requiere del coactor nicotinAadeninAdinucletidoAreducido (,*9PC) como donador inicial
de electrones y o$geno molecular como o$idante (Balle y 'ucas, -...).
5. R-acci#-s +- fas- II.
Este tipo de reacciones metablicas son de biosntesis por lo cual requieren de un
gasto energ#tico (ormacin de enlaces qumicos)I por lo tanto, son reacciones enzimticas
que aparte de requerir de ciertos coactores, necesitan de substratos de alta energa como es
el *TP.
'as reacciones de ase ++ tambi#n se denominan como reacciones de con(ugacin,
in)olucran la adicin a los compuestos $enobiticos de mol#culas endgenas, las cuales
generalmente son polares y de alta disponibilidad por parte del organismo. Estos grupos
endgenos son adicionados a grupos uncionales presentes ya en los compuestos
$enobiticos, o que ueron introducidos o e$puestos en la ase + del proceso de
biotransormacin. El propsito inal es de obtener mol#culas polares y con ba(o
coeiciente de particin lpidoEagua, para que se acilite su e$crecin al disminuir
substancialmente su carcter lipolico (=laassen et al, :384).
-.
2.9 DESCRIPCIN DE RGANOS FRECUENTE.ENTE EVALUADOS PARA
OBSERVAR DAMOS POR PRODUCTOS TOLICOS
2.9.1 L#s RiN#-s
a. G--*ali+a+-s
'os ri0ones (5igura /) son rganos grandes, ro(izos, con orma de habichuela que
estn situados en el retroperitoneo a ambos lados de la columna )ertebral. 7e e$tienden
desde la duod#cima )#rtebra torcica hasta la tercera )#rtebra lumbar y el ri0n derecho
est ubicado apenas ms alto que el izquierdo (Doss, -..1).
F'-!-, J'&'-i*a ) Ca*-i*# 72==@:.
Fi?'*a 1, C#*!- Es&'-$>!ic# +-l RiN.
5. La N-f*#a
'a nerona es la unidad estructural y uncional undamental del ri0n. %ada ri0n
esta constituido por entre : y 2 millones de neronas. %ada nerona est ormada por una
-:
parte delimitada, el corp&sculo renal o de "alpighi, por el t&bulo contorneado pro$imal,
por las partes delgada y gruesa del asa de Cenle, por el t&bulo contorneado distal y por los
t&bulos y conductos colectores (5igura 2). 'a nerona es la unidad uncional del ri0n. 'os
componentes de la nerona estn rodeados por una lmina basal, que se contin&a con el
escaso te(ido con(unti)o del ri0n (Tunqueira y %arneiro, -..1).
F'-!-, J'&'-i*a ) Ca*-i*# 72==@:.
Fi?'*a. 2. C#$%#-!-s +- 'a -f*#a.
c. C#*%/sc'l# *-al
El corp&sculo renal se orma cuando el con(unto de asas capilares o glom#rulo se
in)agina en el e$tremo dilatado re)estido de epitelio de la nerona, denominado cpsula de
--
>oUman. %omo consecuencia, la cpsula de >oUman adopta orma de copa y adquiere por
tanto doble pared, de manera que el epitelio re)iste las asas capilares y delimita la pared
opuesta de la cpsula. Por tanto, el corp&sculo renal est ormado por glom#rulo y de la
cpsula de >oUman. El epitelio que recubre cada capilar es el epitelio glomerular o la capa
)isceral de la cpsula de >oUman y el que re)iste la pared opuesta se llama epitelio capsular o
la capa parietal de la cpsula de >oUman. En el te(ido renal en )i)o el con(unto de capilares
glomerulares llena la cpsula, pero como consecuencia de la retraccin e$perimentada por el
procesado histolgico del rgano, queda generalmente un espacio entre los capilares y la
cpsula que se denomina espacio capsular o espacio de >oUman. Esta regin del corp&sculo
renal en la que se sit&an las arteriolas aerente y eerente se designa polo )ascular. !puesto al
polo )ascular se halla el polo urinario, en donde el epitelio capsular se contin&a con el epitelio
c&bico del t&bulo contorneado pro$imal (9ellman y >roUn, :3?4).
En la 5igura 1 se puede apreciar el corp&sculo renal.
F'-!-, J'&'-i*a ) Ca*-i*# 72==@:.
Fi?'*a @, C#*%/sc'l# *-al.
-/
+. C#*!-s 6is!#l?ic#s +- la c#*!-4a *-al
En los cortes histolgicos la distincin entre los t&bulos contorneados distales y los
pro$imales, ambos presentes en la zona cortical y ormados por epitelio c&bico, se sustenta
en los datos siguientes; sus c#lulas son ms peque0as (mayor n&mero de n&cleo en cada
corte trans)ersal), no poseen borde en cepillo y son menos acidilas (poseen menor
cantidad de mitocondrias). El t&bulo contorneado distal est situado (unto al corp&sculo de
"alpighi de la misma nerona y, en ese punto, su pared se modiica (Tunqueira y %arneiro,
-..1).
En las 5iguras 4 y ? se obser)a cortes histolgicos de la corteza renal.
F'-!-, J'&'-i*a ) Ca*-i*# 72==@:.
Fi?'*a 9, Vis!a %a#*>$ica +- la c#*!-4a *-alJ &'- -s!a c#s!i!'i+a %*ici%al$-!-
%#* !/5'l#s c#!#*-a+#s %*#"i$al-s 7P:J !/5'l#s c#!#*-a+#s +is!al-s 7D: )
?l#$B*'l#s 7G:. Tici +- %a*a**#sailia ) a4'l +- !#l'i+ia. P-&'-N# a'$-!#.
-2
F'-!-, J'&'-i*a ) Ca*-i*# 72==@:.
Fi?'*a A, R-?i c#*!ical +-l *iN &'- $'-s!*a l#s ?l#$B*'l#s ) l#s !/5'l#s *-al-s.
Tici +- 6-$a!#"ilia ) -#sia. P-&'-N# a'$-!#. 7J'&'-i*a ) Ca*-i*#J 2==@:.
2.9.2 El 3(?a+#
a. G--*ali+a+-s
El hgado es la ms grande de las glndulas y la )scera ms )oluminosa del
organismo. Pesa alrededor de :.1.. g corresponde ms o menos al -,1J del peso corporal
total del adulto. Est ubicado principalmente en la regin del abdomen llamada
hipocondrio derecho aunque tambi#n se e$tiende un poco hacia el hipocondrio izquierdo y
est protegido por la parrilla costal (Doss, -..1).
El hgado est di)idido anatmicamente por surcos proundos en dos lbulos
grandes (derecho e izquierdo y en otros dos ms peque0os (lbulo cuadrado y lbulo
-1
caudado o de 7piegel). Esta di)isin anatmica slo tiene importancia topogrica porque
relaciona los lbulos hepticos con otros rganos abdominales. 'a di)isin en segmentos
uncionalesEquir&rgicos que corresponden a la irrigacin sangunea y el drena(e biliar tiene
mayor importancia clnica (Doss, -..1).
5. El 6(?a+# +-?*a+a f>*$ac#s ) !#"ias
'os hepatocitos participan en la degradacin de rmacos, to$inas y protenas
e$tra0as al organismo ($enobiticos). "uchos rmacos y to$inas no son hidrosolubles,
por lo que no pueden eliminarse de la circulacin con eicacia por los ri0ones. El hgado
con)ierte estas sustancias en orma ms solubles en agua. Este proceso lo realizan los
hepatocitos en dos ases (Doss, -..1);
'a fase I, llamada oxidacin, comprende la hidro$ilacin (adicin de un grupo
AAA!C) y la carbo$ilacin (adicin de un grupo AAA%!!C) en un compuesto e$tra0o. Esta
ase ocurre en el retculo endoplasmtico liso y las mitocondrias de los hepatocitos.
%omprende una serie de reacciones bioqumicas con protenas que colecti)amente reciben
el nombre de citocromo P21..
'a fase II, llamada conjugacin, comprende la asociacin (con(ugacin) de la
sustancia e$tra0a con cido glucornico, glicina o taurina. Este proceso torna el producto
de la ase + toda)a ms hidrosoluble de modo que se pueda eliminar con acilidad por los
ri0ones.
c. L#5'lill#s 3-%>!ic#s
7eg&n 9ellmann y >roUn (:3?4) la estructura lobulillar puede interpretarse de tres
modos dierentes, dependiendo de las relaciones uncionales que se consideren. El
lobulillo heptico, llamado en ocasiones lobulillo clsico, es una unidad estructural
organizada alrededor de la )ena central. 'os contornos de los cortes trans)ersales de este
lobulillo tienen orma he$agonal apro$imadamente, con los sinusoides irradiando desde la
perieria a la )ena central en la que desembocan. 'as reas portales se hallan presentes en
apro$imadamente tres de los seis ngulos del lobulillo heptico. Estas zonas, de orma
triangular, de te(ido con(unti)o contienen ramas de la )ena porta, arteria heptica, )asos
linticos, uno o ms conductillos biliares y ner)ios. El lobulillo heptico est
especialmente bien delimitado en el cerdo, ya que se halla completamente rodeado por
-4
tabiques de te(ido con(unti)o. En otras especies los tabiques son menos )isibles y el
par#nquima de un lobulillo aparece mezclado con los lobulillos adyacentes, sin una lnea
de delimitacin clara.
El lobulillo portal es una unidad uncional centrada alrededor del canalculo biliar
del rea portal. 7e deine como un rea triangular compuesta de par#nquima de tres
lobulillos hepticos adyacentes, que desaguan por el canalculo biliar localizado en la zona
portal. 9e esta orma, el e(e del lobulillo portal es el canalculo biliar interlobulillar del
rea portal y la perieria se halla delimitada por tres )enas centrales.
*dems de las unidades uncionales tradicionales de la estructura antes descrita, se
ha propuesto una tercera unidad, el cino heptico. Este es apro$imadamente una zona
o)al del par#nquima, cuyo e(e gira alrededor de la rama terminal de la )ena porta y el
comienzo de los conductos biliares. 6na )ena central se halla en cada e$tremo del cino y
un rea portal en un lado. 7e hacen ostensibles tres zonas de di)ersa acti)idad metablica
entre el e(e y la )ena central, que se producen por la disminucin del aporte de nutrientes y
de o$geno conorme la sangre luye hacia la )ena central. 9e esta orma, las c#lulas de la
zona : reciben la mayor parte del o$geno y nutrientes, mientras que las de las zonas - y /
reciben progresi)amente menos.
7eg&n Doss (-..1), los hepatocitos en cada cido heptico se describen dispuestos
en tres zonas elpticas conc#ntricas que rodean el e(e menor;
'a zona : es la ms cercana al e(e menor y a la irrigacin pro)eniente de las ramas
penetrantes de la )ena porta y de la arteria heptica. Esta zona corresponde a la perieria de
los lobulillos clsicos. 'a zona / es la ms le(ana al e(e menor y la ms cercana a la )ena
centrolobulillar ()#nula heptica postsinusoidal). Esta zona corresponde al centro del
lobulillo clsico cuyos hepatocitos rodean la )ena centrolobulillar. 'a zona - est entre las
zonas : y / pero no tiene lmites ntidos.
'a descripcin en zonas es importante en la descripcin y la interpretacin de los
modelos de degeneracin, regeneracin y eectos t$icos especicos del par#nquima
heptico en relacin con el grado o la calidad de la perusin )ascular de los hepatocitos.
'as c#lulas de la zona : son las primeras en recibir o$geno, nutrientes y to$inas desde la
-?
sangre sinusoidal y son las primeras en e$hibir alteraciones morolgicas tras la
obstruccin de la )a biliar (estasis biliar). Estas c#lulas tambi#n son las &ltimas en morir si
hay trastornos de la circulacin y son las primeras en regenerarse. En cambio, las c#lulas
de la zona / son las primeras en surir necrosis isqu#mica (necrosis centrolobulillar) en las
situaciones en las que la perusin y las primeras en acumular lpidos.
En la 5igura 8 se obser)a cortes histolgicos de los lbulos hepticos.
F'-!-, J'&'-i*a ) Ca*-i*# 72==@:.
Fi?'*a F, .ic*#f#!#?*af(a +-l 6(?a+#. A: V-a C-!*al 7VC:. B: Es%aci# %#*!a
&'- c#!i-- 'a *a$a +- la a*!-*ia 6-%>!icaJ 'a *a$a +- la <-a %#*!a ) '
c#+'c!# 5ilia* *#+-a+#s %#* !-Oi+# c#O'!i<#. 7J'&'-i*a ) Ca*-i*#J 2==@:.
2.9.1 L#s P'l$#-s
'os pulmones derecho e izquierdo se subdi)iden en cierto n&mero de lbulos y
lobulillos caractersticos de cada especie. 'os conductos a#reos se componen de una parte
conductora de aire, los bronquios y los bronquiolos y de una parte respiratoria (intercambio
de gases), los bronquiolos respiratorios, los conductos al)eolares, los sacos al)eolares y los
al)eolos. 'os bronquios, macroscpicamente, se subdi)iden en bronquios lobares o
lobulares, segmentarios y subsegmentarios, denominados tambi#n bronquios e$tra e
intrapulmonares o bronquios primarios, secundarios y terciarios. 'as ramas de los
-8
bronquios intrapulmonares se dicotomizan, dando lugar a bronquiolos de dierentes
rdenes, designados con los nombres primarios, secundarios, terciarios o terminales y
bronquiolos respiratorios. Los conductos alveolares se e$tienden posteriormente a los
bronquiolos respiratorios y no son realmente ms que un conducto en los que se abren
numerosos al)#olos uno al lado del otro. 'as grandes estructuras sacciormes en las que se
abren los al)#olos que las rodean se llaman sacos alveolares. 'os intercambios de gases
tienen lugar a ni)el de los alvolos. En la 5igura 3 se puede apreciar las ramiicaciones del
aparato respiratorio (9ellman y >roUn, :3?4).
F'-!-, J'&'-i*a ) Ca*-i*# 72==@:.
Fi?'*a 8, P*ici%al-s *a$ificaci#-s +-l A%a*a!# R-s%i*a!#*i#.
-3
2.A RELACION DOSIS RESPUESTA
'a relacin dosisefecto es la relacin entre la dosis y el eecto a ni)el indi)idual. 6n
incremento de la dosis puede incrementar la intensidad de un eecto o su gra)edad. Puede
obtenerse una cur)a de dosisAeecto a ni)el de todo el organismo, de la c#lula o de la
mol#cula diana. Cay algunos eectos t$icos, como la muerte o el cncer, que no tienen
grados, sino que son eectos Gde todo o nadaH (Colmberg, -..:).
'a relacin dosisrespuesta es la relacin entre la dosis y el porcenta(e de indi)iduos que
presentan un determinado eecto. *l incrementarse la dosis lo normal es que aumente el
n&mero de indi)iduos aectados en la poblacin e$puesta. El establecimiento de las
relaciones dosisAeecto y dosisArespuesta es esencial en to$icologa. En los estudios
m#dicos (epidemiolgicos) suele utilizarse como criterio para aceptar una relacin causal
entre un agente y una enermedad el hecho de que el eecto o la respuesta sean
proporcionales a la dosis (Colmberg, -..:).
En la realizacin de un e$perimento donde se quiere determinar la relacin
GdosisArespuestaH de un determinado $enobitico sobre un deinido organismo, se
deben considerar como mnimo los siguientes actores; a) 7eleccin del tipo de respuesta
para ser monitoreada en t#rminos cuantitati)os. b) 9einicin del organismo de prueba
(sistema biolgico). c) Perodo de e$perimentacin o duracin del ensayo. d) 7erie
de dosis a probar; dosis simple (lo que generalmente implica un estudio de to$icidad
aguda)I dosis repetiti)a a corto plazo (estudio subagudo)I dosis repetiti)a a largo plazo
(to$icidad crnica). e) Ba de administracin (Balle y 'ucas, -...).
'a respuesta de un organismo hacia un agente $enobitico no )aria &nicamente con
las dierentes especies animales ()ariabilidad interespecie)I sino que #sta, normalmente
tambi#n puede )ariar dentro de la misma especie ()ariabilidad intraespecie (Balle y 'ucas,
-...).
/.
2.A.1 D#sis l-!al $-+ia 7DL
@=
:
'a 9'1. (dosis letal) es la dosis que produce una mortalidad del 1. J en una
poblacin animal. 'a 9'1. sola considerarse en la bibliograa ms antigua como una
medida de la to$icidad aguda de las sustancias qumicas. * mayor 9'1., menor to$icidad
aguda. 9e una sustancia qumica muy t$ica (con una 9'1. ba(a) se dice que es potente.
,o hay una correlacin necesaria entre la to$icidad aguda y la to$icidad crnica
(Colmberg et al., -..:).
En el cuadro :- se tiene una clasiicacin del grado de to$icidad de un agente
$enobitico, en el cual se aprecia que sustancias con )alores de 9'1. menores de : mgE=g
por )a oral de son sumamente t$icas, y de las cuales podemos encontrar presentes
en los alimentos.
C'a+*# 12, Ra?# +- !#"ici+a+ a?'+a
D-#$iaci
AD.INISTRACIN
9'1.
9osis oral &nica
(rata)
9'1.
9osis cutnea
&nica
(cone(o)
%'1.V
+nhalacin de
)apor 2 horas
(rata)
Posible dosis
oral letal a un
hombre adulto
E$tremadamente
t$ico
K : mgE=g K 1 mgE=g :. : gota, : grumo
*ltamente
t$ico
:A1. mgE=g 1A1. mgE=g :.A:.. : cucharita (2
ml)
"oderadamente
t$ico
1.A1.. mgE=g 1.A/1. mgE=g :..A:,... /. g
'igeramente
t$ico
..1A1 gE=g ../1A../ gE=g :,...A:.,... -1. g
Prcticamente no
t$ico
1A:1 gE=g /A-1 gE=g :.,...A:..,... : '
Delati)amente
inocuo
S :1 gE=g -1 gE=g S :..,... S : '
P %oncentracin letal media, e$presada en ppm
F'-!-, D-ic6$a ) G-*a*+- 71898:.
2.A.2 R-s%'-s!a Ac'$'la!i<a
En to$icologa, se e$presan los eectos de un t$ico en orma de porcenta(e
acumulati)o respecto a la concentracin del t$ico. Para esto, un grupo homog#neo de
/:
animales de prueba (por e(emplo, ratn), se les administra un compuesto a dierentes series
de concentraciones y en base a una ruta preestablecida. 'as dosis que se administren,
deben ser tales, que no todos los animales mueran, ni que todos sobre)i)an. *dems la
dosis inicial debe ser lo suicientemente ba(a para que no maniieste ning&n eecto
ad)erso o que interiera con la determinacin. En grupos subsecuentes la dosis, se
incrementa en base logartmica o e$ponencial. 'a dosis inal, debe causar la muerte en
todos los animales de prueba (Balle y 'ucas, -...).
7eg&n 9eshpande (-..-), los agentes t$icos pueden ser clasiicados en una
)ariedad de ormas. Por e(emplo, pueden ser clasiicadas en uncin de sus rganos diana
(hgado, ri0ones, pulmones, piel, sistema ner)ioso, sistema hematopoy#tico, etc.), su
utilizacin (pesticidas, disol)entes, aditi)os alimentarios, etc.), su origen (animal, )egetal,
microbiano, to$inas), y sus eectos (cncer, mutaciones, da0o heptico, etc.). Tambi#n
pueden ser agrupados en uncin de su estado sico (gas, pol)o, lquido), sus requisitos de
etiquetado (e$plosi)os, inlamables inlamabilidad, o$idante), sus propiedades qumicas
(aminas aromticas, hidrocarburos policclicos, hidrocarburos halogenados, etc.), o su
potencial t$ico, como se muestra en el cuadro :/.
C'a+*# 11, Clasificaci +- la T#"ici+a+
CLASIFICACION PROBABLE DOSIS ORAL LETAL
.EDIA PARA 3U.ANOS
Prcticamente no t$ico S :1 gEFg
'igeramente t$ico 1L:1 gEFg
"oderadamente t$ico ..1L1 gEFg
"uy t$ico 1.L1.. mgEFg
E$tremadamente t$ico 1L1. mgEFg
7upert$ico K 1 mgEFg
F'-!-, D-s6%a+- 72==2:.
2.F DOSIS LETAL .EDIA Q .RTODOS ALTERNATIVOS
/-
'a 6nin Europea parece decidida a acabar con la actual situacin de
desconocimiento sobre los riesgos reales que las sustancias y preparados qumicos suponen
para la salud humana y el medio ambiente. * partir de :38: se estableci un sistema de
notiicacin de sustancias nue)as para garantizar el control de los productos
comercializados. *unque para las Gnue)as sustanciasH se e$ige una e)aluacin bastante
completa, de las Ge$istentesH o comercializadas antes de :38: e$iste un absoluto
desconocimiento sobre sus caractersticas to$icolgicas (Depetto et al, -..2).
Para las ms de /.,... sustancias producidas en cantidades superiores a : T" ser
necesario conocer urgentemente sus propiedades to$icolgicas y ecoto$icolgicas
antes de -.:-. Para ello puede ser necesario utilizar ms de :- millones de animales
)ertebrados. 7in embargo, la nue)a estrategia pretende omentar los ensayos sin animales.
9e hecho, los ensayos de sustancias producidas entre : y :. T" deberan limitarse a
m#todos in !itro. ,os encontramos por tanto en un momento crucial y una oportunidad
para considerar la utilidad de los procedimientos que sern ms necesarios,
incluyendo los de to$icidad aguda, irritacin, corrosi)idad, ecoto$icidad, etc. (Depetto et
al, -..2).
E$isten protocolos de los dierentes ensayos to$icolgicos que se realizan in !i!o,
de acuerdo con los criterios de la "rgani#ation for $cono%ic &ooperation and
De!elop%ent (!E%9). En #stos se han introducido dierentes criterios de reduccin del
n&mero de animales y de reinamiento de las t#cnicas, si bien e$isten pocos m#todos de
reemplazo que hayan sido aceptados en el plano legislati)o.
'a armonizacin de los protocolos utilizados en todo el mundo ha reducido de
orma signiicati)a el uso de animales con estos ines. 9esde :38- la !E%9 ue la primera
organizacin internacional en establecer unos criterios de armonizacin de los ensayos
realizados en animales, siendo aceptados por todos los pases miembros de dicha
organizacin.
'a !%9E ha sustituido el ensayo de la determinacin de la toxicidad aguda por
va oral (9'1. seg&n T< 2.:) por sus tres alternati)as (2-., 2-/ y 2-1). Estos ensayos
//
reducen signiicati)amente el n&mero de animales empleados, y en muchos casos, el dolor
y estr#s asociado a los mismos. 9esde (ulio del -..:, la comunidad reguladora no usa ms
el ensayo de la 9'1..
E$iste un gran inter#s por conocer si es posible predecir la 9osis 'etal por )a oral
en Data a tra)#s de m#todos in )itro. Para ello, Calle y <ores (:388) prepararon una gran
base de datos denominada como Degistro de %itoto$icidad. En ella incluyeron :3:-
concentraciones inhibitorias de sustancias seleccionadas de centenares de estudios in )itro
y las 9'1. de /2? compuestos.
En la actualidad se estn lle)ando a cabo di)ersos estudios de )alidacin para
comprobar la utilidad de esta correlacin, siendo los resultados preliminares muy
esperanzadores. Por lo tanto es muy probable que en un uturo podr estimarse con
iabilidad la 9'1. con culti)os celulares, y que mientras tanto deberan usarse estudios in
)itro al menos para seleccionar las dosis de inicio de los ensayos para determinar la 9'1.
in )i)o.
*simismo, se ha considerado que el ensayo del ndulo lintico local ('',*) en
ratn est cienticamente )alidado y debiera usarse para la e)aluacin de la capacidad de
s-si5ili4aci +B*$ica en lugar del ensayo en cobayo, que es ms doloroso y estresante,
adems de emplear ms animales. Ca sido aceptado por 2 agencias norteamericanas (the
%onsumer Product 7aety %ommission, the En)ironmental Protection *gency, the
!ccupational 7aety and Cealth *dministration, 5ood and 9rug *dministration) como
alternati)a al ensayo en cobaya. E7*%EE%B*" tambi#n apoy la preerencia del '',*
sobre el m#todo en cobayo, que debera reser)arse para casos especiales.
En orma paralela la !E%9 (*ctualizacin de la 9irectriz 2.4) y la %omunidad
Economica Europea (%EE) permiten el uso de m#todos animales menos lesi)os para
detectar la capacidad sensibilizante sobre la piel. Para el ensayo de ma$imizacin pueden
usarse :1 en )ez de /. cobayos, e$cepto en casos de duda. %omo ensayo de criba puede
usarse el m#todo en ratn del '',* (=imber et al., :33:).
Tambi#n se propone el empleo del ensayo en la !re(a del Datn ("E7T), la
liberacin de +gE en culti)os e$puestos y la aplicacin de parches d#rmicos en humanos
/2
(%*,). 'os procedimientos ms prometedores in )itro son el culti)o de c#lulas dendrticas
humanas a partir de mononucleares peri#ricos e)aluando la liberacin de +'A:W o la
produccin de sus *D,m, (unto al empleo de modelos de piel humana reconstituida,
culti)os de c#lulas de 'angerhans, culti)os de queratinocitos y coculti)os de c#lulas T y
c#lulas dendrticas.
El %entro Europeo para la Balidacin de "#todos *lternati)os (E%B*") ha
propuesto una estrategia para e)aluar la capacidad de sensibilizacin d#rmica (Xorth
y >alls, -..-) que comenzara por la b&squeda de datos pre)ios sobre el compuesto,
seguida de la e)aluacin de las propiedades isicoqumicas del mismo y la estimacin
mediante sistemas predicti)os computacionales. * continuacin se realizara un estudio
de los parmetros de particin, un ensayo in )itro de sensibilizacin, y inalmente, si
no se han podido e$cluir los eectos, el ensayo de ndulo lintico local.
'a 9irectriz 2.? de la !%9E de estudio por dosis repetidas de -8 das ue re)isada
en :331 para permitir su uso como primera etapa para detectar eectos inmunot$icos
(>arloU et al., -..-). 7e incluy la pesada del timo y el estudio histopatolgico de las
placas de Peyer, timo, ndulos linticos y m#dula sea. Para una me(or e)aluacin se
sugiri posteriormente realizar un estudio histopatolgico especializado de las c#lulas y los
rganos linoides y linticos, y en caso de detectar alteraciones, aplicar un ensayo de
eritrocitos de carnero.
El estudio de 3. das, 9irectriz 2.8 de la !E%9, puede ser ms sensible, no slo
por el periodo de e$posicin, sino tambi#n por el empleo de mayor n&mero de animales.
'a 1-Y *samblea <eneral de la *sociacin "#dica "undial aprob el ? de octubre
de -... por unanimidad la 1Y re)isin desde que ueron adoptados por primera )ez en
:342 los principios #ticos para las in)estigaciones m#dicas en seres humanos, es decir, la
9eclaracin de CelsinFi. En la lnea de la propuesta eectuada en el / %ongreso
"undial de "#todos *lternati)os, ya no se e$ige realizar siempre ensayos con animales
pre)iamente a los humanos. En concreto, el *rtculo :: queda redactado as; G'a
in)estigacin m#dica en seres humanos debe conormarse con los principios cienticos
generalmente aceptados, y debe apoyarse en un proundo conocimiento de la bibliograa
cientica, en otras uentes de inormacin pertinentes, as como en e$perimentos de
/1
laboratorio correctamente realizados y en animales, cuando sea oportunoH. Por lo tanto,
los procedimientos alternati)os pueden proporcionar un considerable ahorro en el n&mero
de animales empleados (Depetto et al, -..2).
En la /:Z Deunin %on(unta de la !%9E en ,o)iembre de -... se decidi que
debe ser eliminado el ensayo actual de la determinacin de la to$icidad agua por )a oral
(9'1. seg&n T< 2.:). 6na decisin que en buena medida ue debida al intenso traba(o y
presin e(ercida durante largos a0os de negociacin y reuniones de e$pertos por los
miembros de la 6nin Europea y de la !E%9 (*sociacin Espa0ola de To$icologa,
-..:).
El -1 de Enero de -..: ue aprobada una 9irecti)a de la %omisin Europea que,
entre otras muchas cosas, decreta la eliminacin del m#todo >.: (equi)alente a la
determinacin de la 9'1. o T< 2.:) del *ne$o B de la 9irecti)a 4?E128 que contiene los
m#todos de test oiciales en la E6 para e)aluar las propiedades de las sustancias qumicas
(*sociacin Espa0ola de To$icologa, -..:).
2.8 ESTUDIOS DE TOLICIDAD DE DOSIS REPETIDAS
'os estudios de to$icidad de dosis repetidas tienen como ob(eti)o caracterizar el
peril to$icolgico de la sustancia tras la administracin repetida. 9e ellos es posible
obtener inormacin sobre los eectos t$icos, la identiicacin de los rganos blancos, los
eectos sobre las unciones isiolgicas, hematolgica, patolgica, histopatolgica, y la
determinacin del )alor ,!E'. Estos estudios pueden tener duraciones peque0as (por
e(emplo, :2 y -8 das) o in)olucrar un perodo ms e$tensi)o de la administracin de la
droga (por e(emplo, 3. das, :8. das). (7ouza, -..4)
<eneralmente realizados en ratas y perros (a )eces en los primates), debido a los
amplios conocimientos de isiologa y patologa de estas especies, el costo y la
disponibilidad en el n&mero de animales sanos. Tres dosis son generalmente empleados
para demostrar la relacin entre el eectoEdosis y para determinar el Balor ,!E' (7ouza,
-..4).
/4
El '"$( ('")$() es el ni)el sin eecto (ad)erso) obser)ado, o la dosis ms alta
que no produce eecto t$ico. Para establecer un ,!E' se necesitan m&ltiples dosis, una
poblacin amplia e inormacin complementaria para garantizar que la ausencia de
respuesta no es un mero enmeno estadstico. El '!E' es la mnima dosis eecti)a
obser)ada en una cur)a de dosisArespuesta, (es decir, la dosis mnima) que produce un
eecto. 6n factor de seguridad es un n&mero con)encional, arbitrario, por el que se di)ide
el ,!E' o el '!E' obtenidos en e$perimentos con animales para establecer una dosis
permisible pro)isional en los seres humanos. 7uele utilizarse en la esera de la to$icologa
alimentaria, pero puede emplearse tambi#n en la to$icologa laboral (Colmberg et al.,
-..:).
El -? de (ulio del -..4 el 59* (5ood *nd 9rug *dministration) termina de
elaborar la <ua para la industria ,Z :2? A Estudios para E)aluar la 7eguridad de Desiduos
de "edicamentos Beterinarios en *limentos Cumanos; Estudios de To$icidad de 9osis
Depetidas (3. das). El ob(eti)o de esta gua es recomendar estudios de to$icidad de dosis
repetidas por 3. das armonizados internacionalmente, es por ello que esta gua ue
desarrollada despu#s de considerar las prcticas )igentes para la e)aluacin de residuos de
medicamentos )eterinarios en alimentos para humanos en la 6nin Europea (6E), Tapn,
Estados 6nidos (E.E.6.6.), *ustralia, ,ue)a [elandia, y %anad. >sicamente
recomienda que los estudios de dosis repetidas (3. das), la necropsia y el e$amen
histopatolgico se realicen de acuerdo a las guas de !E%9 2.8 (Depeated 9ose 3.Aday
!ral To$icity 7tudy in Dodents) y 2.3 (Depeated 9ose 3.Aday !ral To$icity 7tudy in ,onA
rodents).
2.1= TOLINAS EN PECES Q .ARISCOS
El calamar gigante (Dosidicus gigas), presenta una dieta que cambia continuamente
durante su ontog#nia, presentando una gran adaptabilidad alimenticiaI es un carn)oro
oportunista, lo que le permite alimentarse de la presa ms accesible sin realizar una
b&squeda especica. 7u dieta puede ser muy )ariada que puede incluir pelgicos menores,
langostilla, mictoidos, camarn, plancton, peces peque0os, etc. *simismo, cuando la dieta
es escasa, puede llegar a practicar el canibalismo, una conducta com&n dentro de los
cealpodos, ya que en dierentes estudios sobre alimentacin se ha encontrado un
/?
porcenta(e considerable de picos y trozos de calamar gigante en el tracto digesti)o de
especies capturadas (+barra, -..4). Dazn por la cual puede alimentarse de especies que
pueden contener algunas to$inas marinas.
*lgunas de las into$icaciones de origen marino son causadas por ingerir pescados y
mariscos que se han alimentado con dinolagelados o algas productoras de to$inas. %on la
tendencia actual de consumo de productos marinos, se podran producir into$icaciones que
pueden ser le)es o de mayores consecuencias. Entre los mariscos que se alimentan con
algas estn los me(illones, alme(as, ostiones y los peces GciguateraH (%olUell, :38/).
Tambi#n pueden presentarse otros problemas y causas como las que se presentan en el
%uadro :2.
C'a+*# 12, I!#"icaci#-s +- #*i?- $a*i#
PROBLE.A ALI.ENTO .ICROORGANIS.OS OBSERVACIONES
Cistamina
%iguatera
Parlisis por
mariscos
,eurot$icos
9iarrea
Peces Sco%broide
(at&n, macarela,
bonito, etc.) otros
peces (sardina,
ancho)eta)
>arracuda
Cuachinango
Dbalo
"e(illones
*lme(a
%aracol, etc.
"ariscos
<olo "#$ico
"ariscos
*organela %organil
+lebsiella
9inolagelados
,a%bierdiscus toxicus
Prorocentru% conca!u%
P. %exicana
9inolagelados
,onyaulax catebella
,. ta%erensis
9inolagelados
Ptchodiscus bre!is
(,y%nodiu% bre!e)
marea ro(a, >rebeto$ina
* y > (poli#ter)
Dinophysis forti-
D. acu%inata
(%hile, pases nrdicos, Tapn)
*cumulacin de histamina en
pescado descompuesto,
minutos a horas.
<astrointestinal, neurot$icos,
dolores abdominales, nusea,
)mito, diarrea, dolor
muscular, aturdimiento,
sequedad de boca, ansiedad,
cianosis, escaloros, sudacin,
dilatacin ocular, )isin
nublada, ceguera temporal,
parlisis y muerte.
*dormecimiento de labios,
lengua, gargantaI dolor
muscular, problemas
gastrointestinales, raramente
atal.
Problemas gastrointestinales.
F'-!-, Vall- ) L'cas 72===:.
2.1=.1 T-!*#+#!#"ia
/8
* dierencia del resto de las bioto$inas que se acumulan en productos pesqueros, la
tetrodoto$ina no es producida por las algas. El mecanismo preciso de la produccin de esta
to$ina tan potente no est claro, pero al parecer inter)ienen bacterias simbiticas que estn
presentes con bastante recuencia (,oguchi et al. :38?).
'a tetrodoto$ina se encuentra undamentalmente en el hgado, o)arios e intestino
de )arias especies de peces sopladores (globo), siendo los ms t$icos los miembros de la
amilia .etraodontidae, aunque no todas las especies de esta amilia contienen la to$ina. El
te(ido muscular de los peces t$icos normalmente carece de la to$ina, pero e$isten
e$cepciones. 'a into$icacin por el pez globo produce sntomas neurolgicos de :. a 21
minutos despu#s de la ingestin. 'os sntomas son sensacin de hormigueo en la cara y en
las e$tremidades, parlisis, sntomas respiratorios y colapso cardio)ascular. En los casos
atales, la muerte sobre)iene en menos de 4 horas (Cuss, :33?).
2.1=.2. Ci?'a!-*a
'a into$icacin por ciguatera ocurre como consecuencia de la ingestin de pescado
que se ha )uelto t$ico al alimentarse de dinolagelado t$icos, que son algas planctnicas
marinas microscpicas. 'a principal uente es el dinolagelado bentnico ,a%bierdiscus
toxicus, que )i)e en las pro$imidades de los arrecies coralinos uertemente i(ado a las
macroalgas. 7e obser)a un aumento de la produccin de dinolagelados t$icos cuando los
arrecies se alteran ecolgicamente (huracanes, derribo de arrecies, etc.). 'a to$ina puede
detectarse en el intestino, en el hgado y te(idos musculares mediante ensayos con ratones y
por cromatograa. *lgunos peces son capaces de eliminar la to$ina de su organismo
(Taylor :388).
*unque la incidencia de into$icacin por ciguatera comunicada en los inormes es
ba(a (Taylor :388), se ha estimado que la incidencia mundial puede ser del orden de
1..... casosEa0o (Dagelis :382).
El cuadro clnico es )ariable, pero el tiempo de aparicin es unas pocas horas
despu#s de la ingestin de la to$ina. 'os sistemas gastrointestinales y neurolgicos son los
aectados ()mitos, diarrea, sensacin de hormigueo, ata$ia, debilidad). 'a duracin de la
/3
enermedad puede ser de -L/ das, aunque puede prolongarse durante semanas o incluso
a0os en los casos gra)es. 'a muerte sobre)iene como consecuencia de un colapso
circulatorio (Cuss, :33?).
2.1=.1 T#"ia %a*ali4a!- +- $#l'sc#s 5i<al<#s (P7P)
'a into$icacin despu#s del consumo de moluscos bi)al)os es un sndrome que se
conoce desde hace siglos, siendo la ms com&n la parlisis t$ica por ingestin de
moluscos (P7P). 'a P7P es causada por un grupo de to$inas (sa$ito$inas y sus deri)ados)
producidas por dinolagelados de los g#neros )lexandriu%- ,y%nodiniu% y Pyrodiniu%.
Cistricamente, se ha asociado la P7P con las prolieraciones de dinolagelados (S
:.
4
c#lulasElitro) que pueden causar una coloracin ro(iza o amarronada del agua. ,o
obstante, la coloracin del agua puede ser causada por la prolieracin de muchos tipos de
especies planctnicas que no siempre son t$icas, y no todas las prolieraciones de algas
t$icas dan color.
'a prolieracin dinolagelados es una uncin de la temperatura del agua, luz,
salinidad, presencia de nutrientes y otras condiciones ambientales. ,o obstante, se
desconoce la naturaleza precisa de los actores que ponen en marcha un clon t$ico. 'a
temperatura del agua debe ser S 1L8\% para que tengan lugar las prolieraciones. 7i las
temperaturas caen por deba(o de 2\%, los dinolagelados sobre)i)en en orma de quistes
enterrados en las capas superiores de los sedimentos.
'os me(illones, alme(as, berberechos y )eneras (conchas de abanico) que se han
alimentado de dinolagelados t$icos retienen la to$ina durante perodos de tiempo
)ariables que dependen del tipo de molusco. *lgunos eliminan la to$ina muy rpidamente
y son t$icos &nicamente durante el momento de la prolieracin, mientras que otros
retienen la to$ina durante un largo perodo, incluso a0o (7chantz :382).
2.1=.2 T#"ia +ia**-ica +- $#l'sc#s 5i<al<#s
2.
7e ha dado parte de miles de casos de enermedades gastrointestinales causados por
la into$icacin diarreica por ingestin de moluscos bi)al)os (97P) en Europa, Tapn y
%hile. 'os dinolagelados causantes de la produccin de las to$inas pertenecen a los
g#neros Dinophysis y )urocentru%. Estos dinolagelados estn ampliamente distribuidos,
lo que signiica que esta enermedad tambi#n puede producirse en otros lugares del mundo.
*l menos se han identiicado ? to$inas, incluido el cido oFadoico. 'a aparicin de la
enermedad se produce entre la media hora y unas pocas horas despu#s del consumo del
marisco que se ha estado alimentando de algas t$icas. 'os sntomas son desrdenes
gastrointestinales (diarrea, )mitos, dolor abdominal) y las )ctimas se recuperan en /L2
das. ,unca se ha registrado ninguna muerte (Cuss, :33?).
2.1=.@ T#"ia -'*#!"ica +- $#l'sc#s 5i<al<#s
'a into$icacin neurot$ica por ingestin de moluscos bi)al)os (,7P), se ha
descrito en personas que consumieron moluscos que haban estado e$puestos a Gmareas
ro(asH de dinolagelados (Ptychodiscus bre!e). 'a enermedad ha estado restringida al
<olo de "#$ico y otras zonas rente a la costa de 5lorida. 'as bre)eto$inas en general son
muy letales para los peces y adems las mareas ro(as de estos dinolagelados tambi#n estn
relacionadas con muertes masi)as de peces. 'os sntomas de la (,7P) son seme(antes a los
de la P7P, e$cepto que no tiene lugar la parlisis. 'a ,7P rara )ez es mortal (Cuss, :33?).
2.1=.9 T#"ia a$Bsica +- $#l'sc#s 5i<al<#s
El primer caso de into$icacin masi)a por esta to$ina se present en :38? en
%anad. 'a to$ina es producida por las diatomeas Pseudonit#chia pungens- for%a
%ultiserie Pseudonit#chia australis ('it#chia pseudoseriata)- 'it#chia pseudodelicatissi%a
. 7e caracterizan por ormar largas ilas de c#lulas dispuestas una sobre otra.
'a to$ina corresponde al cido domoico, que es un deri)ado del cido Fainico, el
cual es anlogo del cido glutmico. El cido domoico es un cido tricarbo$lico d#bil, con
2:
estructura rgida, soluble en agua y termoestable. %ompite con el cido glutmico por los
receptores de #ste, acti)ndolos y permitiendo la entrada de cloruro, calcio y agua, lo que
lle)a a la ruptura y muerte celular.
'os sntomas son gastrointestinales y neurolgicos; calambres, diarrea, )mitos, nuseas,
dolor abdominal, perdida de la concentracin, p#rdida del equilibrio, entorpecimiento,
debilidad, dolor de cabeza, )isin borrosa, conusin, )#rtigo, p#rdida de la memoria de
corto tiempo (da0a las c#lulas del hipocampo), coma y muerte. 'a dosis m$ima aceptada
internacionalmente es de -. ]gEg de marisco (Cuss, :33?).
2.1=.A 3is!a$ia
'a into$icacin por histamina es una into$icacin qumica debida a la ingestin de
alimentos que contienen altos ni)eles de histamina. Cistricamente, esta into$icacin se
denomin into$icacin por escmbridos debido a la recuente asociacin con peces de la
5amilia Sco%bridae, entre los que se incluyen el at&n y la macarela o caballa.
'a into$icacin por histamina es un problema de alcance mundial en los pases
donde los consumidores ingieren pescado que contiene altos ni)eles de histamina. Es una
enermedad benigna, su perodo de incubacin es muy corto (de pocos minutos a pocas
horas) y la duracin de la enermedad es corta (pocas horas). 'os sntomas ms comunes
son los cutneos, como el rubor acial o bucal, urticaria, o edema localizado, pero tambi#n
puede )erse aectado el tracto gastrointestinal (nuseas, )mitos, diarrea), o producirse
complicaciones neurolgicas (dolor de cabeza, hormigueo, sensacin de quemazn en la
boca) (Cuss, :33?).
III. .ATERIALES Q .ETODOS
1.1 LUGAR DE EJECUCIN
El presente estudio se lle) a cabo dentro de las instalaciones de los laboratorios de
Procesos de la 5acultad de Pesquera y en el >ioterio de la 5acultad de [ootecnia de la
6ni)ersidad ,acional *graria 'a "olina.
1.2 .ATERIA PRI.A
En el presente traba(o se utiliz como materia prima el %oncentrado de Protena de
Pota (Dosidicus gigas), la misma que ue elaborada en los 'aboratorio de Procesos
Pesqueros de la 5acultad de Pesquera de la 6,*'" seg&n la metodologa seguida por
'azo (-..4).
1.1 .ATERIALESJ ESUIPOS Q REACTIVOS
1.1.1 Pa*a la is!alaci +-l 5i#!-*i#
- 2. ratas de la cepa Sprague Dawley de ambos se$os.
- *limento balanceado cuya composicin cubre los requerimientos nutricionales.
- >alanza analtica.
- "ateriales de limpieza.
1.1.2 E la a+$iis!*aci %#* <(a #*#?>s!*ica +- %*#!-(a +- %#!a
- %nula metlica.
- Teringas desechables est#riles.
- Basos de precipitado
22
1.1.1 E -l sac*ifici# +- l#s *a!#-s
- Ceparina 7dica (inhibe la coagulacin de la sangre)
- ^ter.
- Teringas desechables est#riles.
- Ti(eras quir&rgicas
- %a(itas plsticas
- 5ormol al :.J.
1.1.2 Pa*a l#s -sa)#s 5i#&'($ic#s ) 6-$a!#l?ic#s
- Tubos capilares para microhematocrito.
- Espectrootmetro semiautomtico "etrolab_ :4...
- *nalizador hematolgico automtico 7ysme$ _:8...
- Deacti)os para la determinacin bioqumica de la concentracin de alb&mina,
creatinina y transaminasa glutamicopir&)ica (T<P).
1.1.@ E la %*-%a*aci +- C#*!-s 3is!#l?ic#s
- >istur.
- *lcohol etlico.
- Oilol.
- Cemato$ilina.
- Eosina al :J.
1.2 .ETODOS DE ANGLISIS Q PROCEDI.IENTO
1.2.1 P*-%a*aci +-l C#c-!*a+# +- P*#!-(a +- P#!a
7e prepar el concentrado de protena de pota seg&n la metodologa seguida por
'azo (-..4). El manto de la pota ue limpiado, cortado, la)ado en agua, precocido, molido,
la)ado nue)amente, centriugado, deshidratado y, inalmente, sometido a una molienda
ina. El producto obtenido presentaba buenas caractersticas organol#pticas. El olor y sabor
ueron agradables y neutrales, sin olor a pota. Estas caractersticas se mantu)ieron
inalterables durante los tres meses que duro el e$perimento, sin usar ning&n tipo de
preser)ante o antio$idante. El diagrama de lu(o del proceso de elaboracin de concentrado
de protena de pota se muestra en la 5igura :..
21



Pota Bsceras, piel.

"anto de pota Destos de piel, arena.
"anto limpio %ubos de / cm. de lado.

Producto, agua, hielo Eliminacin del olor y sabor.



"anto cortado TZ ` 81Z%. "anto con me(or te$tura.



"anto precocido %riba de 1 mm. "anto molido.
"anto molido Eliminacin de lquido residual.
Producto centriugado Producto seco. Casta humedad de 8J.

Producto seco Producto menor a :1. m.
Fi?'*a 1=, Dia?*a$a +-l fl'O# +-l %*#c-s# +- -la5#*aci +-l c#c-!*a+# +-
%*#!-(a +- %#!a
'*B*9! +
%!DT*9!
'*B*9! ++
PDE%!%+9!
'+"P+*9!
"!'+9! +
%E,TD+56<*9!
9E7C+9D*T*9!
"!'+9! ++
"*TED+* PD+"*
(Pota)
%!,%E,TD*9! 9E
PD!TE+,* 9E P!T*
24
9icho 9iagrama de lu(o ue elaborado en base a lo reportado por Doldn (-..-) y
'azo (-..4) con modiicaciones para el caso especico de la pota. 6na bre)e descripcin
del mismo es la siguiente;
a. R-c-%ci +- $a!-*ia %*i$a
'a pota entera e)iscerada ue recepcionada en ca(as de plstico con hielo. 7e realiz
el respecti)o anlisis organol#ptico para determinar el grado de rescura y posteriormente
se procedi a separar el manto, la aleta y la cabeza.
5. Li$%ia+#
El manto pre)iamente pelado ue abierto para su limpieza, se le retir los restos de
)sceras, la pluma y la piel delgada de la parte interna del manto.
c. La<a+# I
Este la)ado ue realizado con el ob(eti)o de eliminar los restos de piel, arena y otros
que est#n adheridos al manto.
+. C#*!a+#
El manto limpio ue cortado en cubos de / cm de lado con la inalidad de hacer ms
eecti)a la siguiente operacin ('a)ado ++).
-. La<a+# II
7e realiz con agua ms hielo a temperatura de -\ % durante :. minutos con la
inalidad de eliminar el olor y el sabor amargo caracterstico de la pota.
f. P*-c#ci+#
7e realiz en agua caliente a 81\ %, con proporcin agua ; manto cortado de :;:,
con la inalidad de conseguir una me(or te$tura del manto de la pota para el molido.
?. .#li+# I
7e utiliz una moledora de carne con criba de 1 mm de dimetro para acilitar el
la)ado inal
2?
6. C-!*if'?a+#
%on la inalidad de eliminar el lquido residual del la)ado y reducir el tiempo de secad#.
i. D-s6i+*a!a+#
%on aire caliente a 41 Z% hasta una humedad inal de 8J. 7e utiliz un secadero por
con)eccin.
O. .#li+# II
'a molienda se realiz en un molino de martillos hasta una granulometra promedio de
menos de :1. m.
1.2.2 A>lisis S-s#*ial +-l C#c-!*a+# +- P*#!-(a +- P#!a
Para el anlisis sensorial del %oncentrado de Protena de Pota, se emple el cuadro :1,
dise0ado por 'azo (-..4), el cual elabor dicho cuadro sensorial teniendo en cuenta las
caractersticas de color, olor, sabor y te$tura.
C'a+*# 1@, E<al'aci S-s#*ial %a*a -l C#c-!*a+# +- P*#!-(a +- P#!a
PUNTAJE
>lanco lechoso /
>lanco cremoso -
*marillo opaco :
7in olor a pota /
'igero olor a pota -
%on olor a pota :
7in sabor a pota /
'igero sabor a pota -
%on sabor a pota :
7ua)e al tacto y pul)erulenta /
*spero y pul)erulenta -
9uro y granuloso :
Calificaci
P'!'aci Cali+a+
:. a :- >uena
? a 3 Degular
Casta 4 "ala
5uente; 'enin 'azo (-..4)
Sa5#*
T-"!'*a
CARACTERESTICAS
C#l#*
Ol#*
28
1.2.1 C#$%#sici &'($ica %*#"i$al
'a composicin qumica pro$imal de la materia prima (%oncentrado de Protena de
Pota) se realiz seg&n los m#todos recomendado por ,agaFura (:3?-).
1.2.2 T#"ici+a+ a +#sis *-%-!i+as %#* 8= +(as
7e lle) a cabo seg&n lo establecido en las 9irectrices de la <ua 2.8 de la
!rganizacin para la %ooperacin y 9esarrollo Econmico (!E%9, :338) y en la <ua
para la +ndustria ,Z :2? del 59* (-..4) para este tipo de estudio. 7e emplearon 2. ratas
de la cepa Sprague Dawley de ambos se$os, con peso corporal entre -.. y /.. g. 'os
animales ueron adaptados a las condiciones del bioterio durante una semana pre)ia a los
e$perimentos. Todos procedentes del %entro ,acional de *limentacin y ,utricin
(%E,*,).
'os animales se mantu)ieron en una sala con temperatura controlada de -- a -Z% y
ciclo luz L oscuridad de :-E:- horas, permaneciendo - animales por (aula. 'a alimentacin
consisti en dieta estndar para ratas y ratones pro)eniente la Planta de alimentos
balanceados de la 5acultad de [ootecnia de la 6,*'". El agua era de calidad apta para
consumo humano. El acceso a los alimentos y al agua era ad libitu%. Todos los ensayos
ueron realizados de acuerdo a las >uenas Prcticas de 'aboratorio. 7e coneccionaron 2
grupos de tratamiento (%uadro ,Z :4) a razn de :. animales por grupo. 'os grupos
ueron; <rupo + tratado con 1.. mgEFgEda, <rupo ++ tratado con :... mgEFgEda, <rupo +++
tratado con -... mgEFgEda y <rupo +B control que no recibi tratamiento. *ntes de
comenzar el ensayo se realiz e$traccin sangunea del ple$o ocular para determinar
)alores basales hematolgicos y bioqumicos. 'a administracin se realiz por )a oral
mediante cnula intragstrica durante :/ semanas (equi)alente a 3. das), para lo cual se
reconstituy el concentrado de pota en agua destilada al -.J, y se administraron
diariamente .,4 L :, :,: L :,3 y -,: L /,1 m' para conseguir las dosis de 1.., :... y -...
mgEFgEda, respecti)amente. *l inalizar los 3. das de administracin, se eectu la
obtencin de muestras de sangre de los animales del ple$o ocular, pre)iamente
anestesiados con #terI empleando capilares para microhematocrito, con el ob(eti)o de
realizar el e$amen hematolgico y los anlisis de bioqumica clnica.
23
C'a+*# 19, D#sis A+$iis!*a+as a l#s G*'%#s
G*'%# NT +- Ra!as D#sis 7$?CU? %-s#:
<rupo + :. 1..
<rupo ++ :. :...
<rupo +++ :. -...
<rupo +B (%ontrol) :. .V
V 7e le administra a cada rata del grupo control solucin salina isiolgica.
a. E">$--s 6-$a!#l?ic#s
Para la realizacin de los e$menes de hematologa se emple un analizador
hematolgico automtico 7ysme$ :8.._. 'os parmetros medidos por el analizador
ueron; hematocrito, hemoglobina, recuento de leucocitos. Para el recuento dierencial de
blancos se procedi a la realizacin de e$tensiones sanguneas a partir de la sangre
conser)ada en E9T* a la llegada al laboratorio. 6na )ez realizada la e$tensin sangunea
se procedi a i(arla y te0irla con tincin panptica. 7e realiz el estudio microscpico del
rotis sanguneo, lle)ando a cabo un recuento celular de :.. c#lulas nucleadas, obteniendo
el recuento dierencial de las poblaciones leucocitarias; neutrilos, eosinilos, linocitos,
monocitos y basilos.
5. Bi#&'($ica cl(ica
7e utilizo un equipo de alta iabilidad el "etrolab :4.. 9D_ y se procedi a
utilizar el sistema de cubetas y la t#cnica ptica estndar de otocolorimetro con iltro ro(o
o )erde a 4-.A41. nm. 5ueron hechas pruebas para analizar alb&mina, creatinina y
transaminasa glutamicopir&)ica (T<P) (Xiener lab., -..1).
5.1. D-!-*$iaci +- Al5/$ia 7.B!#+# C#l#*i$B!*ic#:
7e utiliz el m#todo de Xiener lab. (-..1), introducido por DodFey en :341, el
cual consiste en la unin de alb&mina. 'a alb&mina reacciona especicamente (sin
preparacin pre)ia) con la orma aninica de la /,/b,1,1b tetrabromo cresosulon lateina
1.
(>%5), en presencia de un e$ceso de colorante en medio tamponeado a pC /.3. El aumento
de absorbancia a 4-1 nm respecto del >lanco de reacti)o, es proporcional a la cantidad de
alb&mina presente en la muestra.
5.2 D-!-*$iaci +- C*-a!iia 7.B!#+# C#l#*i$B!*ic# CiB!ic# # +- %'!# fial:
'a creatinina y otros compuestos de la muestra reaccionan con el cido pcrico en
medio alcalino dando un comple(o color ro(o que se cuantiica mediante lectura
otom#trica.
'a determinacin de creatinina puede lle)arse a cabo por medio de una t#cnica de
punto inal, o por una t#cnica cin#tica eliminndose en ambas el color que se debe a los
cromgenos no creatinina.
En el primer caso, la adicin de cido al medio, destruye el picrato de creatinina
pero no el color ormado por los dems compuestos. Por lo tanto la dierencia entre la
lectura otom#trica antes y despu#s del agregado de cido, permite cuantiicar la creatinina
en orma especica.
En la t#cnica cin#tica, los cromgenos no creatinina, reaccionan dentro de los
primeros /. segundos de iniciada la reaccin, que se comporta como cin#tica de primer
orden para la creatinina. 9e manera que entre los /. segundos y los 1 minutos posteriores
al inicio de la reaccin, el incremento de color se debe e$clusi)amente a la creatinina.
5.1. D-!-*$iaci +- la Ac!i<i+a+ T*asa$iasa
'a enzima alanina amino transerasa (<PT) cataliza la reaccin entre la 'Aalanina y
el -Ao$oglutarato, dando piru)ato y 'Aglutamato. El piru)ato ormado reacciona
inmediatamente con el ,*9C en presencia de la enzima lactato deshidrogenasa ('9C)
para dar 'Alactato @ ,*9
@
. 'a )elocidad de consumo del ,*9C se determina
espectrootom#tricamente a /2. nm y es proporcional a la acti)idad de la <PT en la
muestra (Xiener 'ab., -..1). Todo esto lo podemos )er en la siguiente reaccin;
'Aalanina @ -Ao$oglutarato piru)ato @ 'Aglutamato
Piru)ato @ ,*9C @ C
@
'Alactato @ ,*9
@
GPT
LD3
1:
c. A>lisis Aa!#$#%a!#l?ic#
*l da siguiente de la &ltima administracin se procedi a sacriicar por elongacin
cer)ical para eectuar la e$traccin de los siguientes rganos; ri0n, hgado y pulmn, los
cuales ueron e$aminados macroscpicamente y i(ados en solucin de ormol al :. J para
el posterior estudio histopatolgico. Tambi#n se determin el peso relati)o de rganos
(ri0n, hgado y pulmn). 'a metodologa a seguir ue la recomendada por %astillo et al
(-..4).
+. A>lisis 6is!#%a!#l?ic#
'as muestras e$tradas de las necropsias se conser)aron en ormol al :.J, se
incluyeron en paraina y se cortaron en un micrtomo con un grosor de 2 a 1 mm. 7e us la
t#cnica tradicional de coloracin con hemato$ilinaAeosina para la realizacin de los
estudios de histopatologa. 'a metodologa seguida ue la recomendada por %astillo et al
(-..4).
1.@ .ETODOLOGEA ELPERI.ENTAL
En la 5igura :: se muestra el dise0o e$perimental que se sigui en la presente
in)estigacin.
1.9 ANGLISIS ESTADESTICO
'os resultados se e$presarn con la media a des)iacin estndar. Para determinar
dierencias signiicati)as entre los grupos se emple el anlisis de )arianza (*,B*) para
un criterio de clasiicacin de una )a (!ne Xay) y se aplic la prueba de comparacin de
medias de TuFey (para e)aluar la signiicancia de todas las dierencias entre tratamientos)
y 9unnet (para comparar a cada uno de los tratamientos contra el control),, considerndose
un ni)el de signiicancia de cinco por ciento (1J). 7e utiliz el programa estadstico
"initab )ersin :1.
MATERIA
PRIMA
PRUEBA PILOTO EVALUACION PATOLOGICA LABORATORIO CLINICO
Grupos Dosis
(10 ratas*/grupo) (mg/kg)
I 500
II 1000
III 2000
IV Control
Factores a controlar
1. Anlisis sensorial !alua"i#n $e 1. %&ser!a"i#n $e la a"ti!i$a$ 1.- Dian!stico Anato"o # Patol!ico 1. An$lisis Bio%&'"icos
2. Composi"i#n 'u(mi"a. la )o*i"i$a$ + "omportamiento (!alua"i#n ,a"ros"#pi"a me$iante ne"ropsia) Creatinina- Al&.mina + )ransaminasa
agu$a oral 2. Control $el peso $iario glutami"opir.!i"a ()G/).
(. - Dian!stico )isto*atol!ico (. E+$"enes )e"atol!icos
(Colora"i#n "on 0emato*ilina1eosina para la 2emoglo&ina- 2emato"rito- 3e"uento $e
* 3atas "epa 4prague Da5le+ !alua"i#n "ortes 0istol#gi"os $e los #rganos).6eu"o"itos (lin7o"itos- mono"itos-
eosino7ilos- &as#7ilos- neutr#7ilos).
TO,ICIDAD A DO-I- REPETIDA- ./0
D1A-2
Fi&ra 113 Meto4olo'a E+*eri"ental
Con"entra$o
$e /rote(na
$e /ota
Anlisis Anatomo
/atol#gi"a
Anlisis
2istopatol#gi"o
Anlisis
8io'u(mi"o
*menes
2ematol#gi"os
IV. RESULTADOS Q DISCUSIN
2.1 DE LA .ATERIA PRI.A
2.1.1 E<al'aci S-s#*ial +-l C#c-!*a+# +- P*#!-(a +- P#!a
'os resultados de la e)aluacin sensorial del concentrado de protena de pota
utilizada como materia prima muestran como caractersticas lo siguiente; color blanco
lechosoI sin olor a potaI sin sabor a pota y sua)e al tacto y pul)erulenta. !bteniendo el
punta(e m$imo de :- puntos, caliicado como Gbuena calidadH seg&n el cuadro :1 de
E)aluacin 7ensorial dise0ado por 'azo (-..4). Estas caractersticas se mantu)ieron
inalterables durante los 3. das que dur la in)estigacin (5igura :-).
2.1.2 C#$%#sici &'($ica %*#"i$al
'a composicin qumica pro$imal del %oncentrado de Protena de Pota utilizado en
la presente in)estigacin se muestra en el %uadro :?.
C'a+*# 1A, C#$%#sici &'($ica %*#"i$al +-l C#c-!*a+# +- P*#!-(a +- P#!a
CO.PONENTE 0
Protenas 81.?.
<rasas /.3.
%enizas :.82
Cumedad ?.4.
12
'os resultados obtenidos son similares a los reportados por 'azo (-..4) y a lo
propuesto por "adrid ()er cuadro 1) para el %oncentrado Proteico de Pescado del tipo *
pero con la dierencia que no usamos sol)entes, por lo tanto es un producto con ms
aceptacin en el mercado.
Fi?'*a 12, C#c-!*a+# +- P*#!-(a +- P#!a.
2.2 TOLICIDAD A DOSIS REPETIDAS POR 8= DEAS
'a administracin del %oncentrado de Protena de Pota no demostr alteraciones en
el comportamiento, ni en el e$amen sico de los animales tratados durante el perodo de
e$perimentacin, adems de no producir mortalidad en ning&n grupo e$perimental. El
consumo de alimento y agua por los animales de ambos se$os se mantu)o similar tanto
para el grupo control, como para los tratados con dierentes dosis del producto.
'a administracin durante los 3. das de la dosis lmite de -... mgE=g no pro)oc
muertes de los animales o sntomas indicati)os de to$icidad. Este resultado enmarca al
concentrado de protena de pota (Dosidicus gigas) en la categora /sin clasificarH (-... K
9'1.) de acuerdo a las %lases de To$icidad de la %omunidad Europea ya que no se
11
obser) mortalidad ni signos t$icos atribuibles a la administracin de la sustancia de
prueba a la dosis de -... mgEFg que ue la dosis ms alta empleada (<rupo + tratado con
1.. mgEFg, <rupo ++ tratado con :... mgEFg, <rupo +++ tratado con -... mgEFg y <rupo
+B %ontrol).
El m#todo de la dosis i(a aceptado en la <ua 2-. de la !E%9 (-..:) plantea que si
a dosis de -... mgEFg no ocurren muertes, no es necesario realizar estudios a dosis mayores,
reduciendo el n&mero de animales el surimiento de los mismos.
9e acuerdo a este resultado podemos airmar que el concentrado de protena de
pota (Dosidicus gigas) no produ(o to$icidad signiicati)a a la dosis lmite en el ensayo de
to$icidad a dosis i(as.
7eg&n P#rez et al (-..8). *ctualmente se acepta desde el punto de )ista regulatorio
que no es necesario deinir un )alor puntual de 9'1. para una sustancia y que resulta
prcticamente suiciente ubicar dicha dosis en un rango. 'as regulaciones para la e(ecucin
de este tipo de estudio alternati)o de to$icidad aguda plantean que si no e$isten inormes
anteriores de to$icidad de la sustancia que se in)estiga es posible utilizar una dosis lmite
de -... mgEFg de masa corporal, lo que se a(usta a nuestro estudio dado que de la
sustancia en estudio no se ha se0alado to$icidad en su e$tenso uso tradicional. 'a
aplicacin de los m#todos alternati)os en el campo de la to$icologa es reciente y coincide
con la oposicin social al uso indiscriminado de animales de e$perimentacin, as como la
necesidad que tena esta ciencia de dar un paso de a)ance en la e)aluacin del riesgo de
to$icidad.
7eg&n >erm&dez et al. (-..?) en diciembre de -..- qued abolida por la !E%9
(!rganisation or Economic %oAoperation and 9e)elopment) la e(ecucin del test clsico
para la determinacin de to$icidad aguda y la dosis letal 1. (9'1.) que ue sustituido por
tres m#todos alternati)os cuyo ob(eti)o com&n es reducir el n&mero de animales
empleados y minimizar el surimiento de #stos, estos m#todos comprenden el test de
%lasiicacin T$ica *guda o "#todo de las %lases de To$icidad (To$ic %lass "ethod,
T%"), Procedimiento de 7ube y >a(a (6pAandA9oUn "ethod, 69P) y el Procedimiento
de 9osis 5i(as (5i$ed 9ose Procedure, 59P). El Procedimiento de 9osis 5i(as ue
14
adoptado en la <ua ,o. 2-. de la !E%9 como alternati)a a la prueba clsica aguda. El
m#todo se basa en la e)aluacin de dosis prei(adas (1, 1., /.. y -... mgEFg) para
discernir la clasiicacin t$ica de una sustancia seg&n el 7istema <lobal *rmonizado
(7<*). 'a dosis seleccionada debe ser no letal, no dolorosa y no estresante, adems de no
ser corrosi)a ni se)eramente irritante.
7eg&n Depetto (:33?) el m#todo de dosis i(a que ha sido admitida por la 6E en
:33. y por !E%9 en :33-, se basa en la aplicacin sucesi)a de cuatro ni)eles de dosis.
'as dosis estn comprendidas entre 1 mgEFg y -... mgEFg.
'a %omisin de las %omunidades Europeas (-..8) en el Deglamento (%E) ,Z 22.
reerente al "#todo >.-4. Ensayo de To$icidad !ral 7ubcrnica por *dministracin
%ontinuada (3. das) en Doedores menciona que se emplean al menos tres dosis de ensayo
y un lote de control, sal)o si se lle)a a cabo un ensayo lmite. En la <ua !E%9 2.8
Estudio de To$icidad !ral a 9osis Depetidas (3. das) en roedores dice respecto al ensayo
limite que si en un ensayo con una dosis equi)alente, al menos, a :... mg E Fg peso
corporal E da, utilizando los procedimientos descritos para el presente estudio, no produce
ning&n eecto ad)erso que se obser)e to$icidad y si no se espera sobre la base de datos de
compuestos relacionados estructuralmente, realizar un estudio completo con tres ni)eles de
dosis no pueden considerarse necesarias. El ensayo lmite es )lido e$cepto cuando la
e$posicin humana indique la necesidad de un mayor ni)el de dosis que se utilizarn.
Es por ello que nuestra dosis elegidas estn dentro del rango mencionado por
Depetto (<rupo + tratado con 1.. mgEFgEda, <rupo ++ tratado con :... mgEFgEda, <rupo
+++ tratado con -... mgEFgEda y <rupo +B control), utilizando las directrices de la <ua
!E%9 2.8.
9e los resultados se puede airmar que la administracin de la dosis lmite de -...
mgEFg de peso corporal no pro)oc muertes de los animales o sntomas indicati)os de
to$icidad ni las otras dosis.
*dems, antes de lle)ar a cabo estos estudios a dosis repetidas por 3. das se realiz
una prueba piloto en ratas y ratones del concentrado de protena de pota al :.J y -.J de
1?
concentracin con )alores limites hasta de 41.. mgEFg para ratones y 4... mgEFg para
ratas 7*ne$o :).
2.2.1 E<al'aci +-l P-s# C#*%#*al
En el %uadro :8 se obser)a que los animales tratados del grupo ++ (:... mgE=g) y
+++ (-... mgE=g), mostraron un menor incremento promedio del peso corporal con
respecto al grupo + (1.. mgE=g) y al grupo +B (%ontrol). 7in embargo, estas dierencias no
ueron estadsticamente signiicati)as (p S .,.1) (*ne$o ?:. En el anlisis estadstico
(*,B*) se obser) que no e$isten dierencias signiicati)as entre los tratamientos
e)aluados y de acuerdo a la prueba de comparacin de TuFey (pS...1) tampoco e$istieron
dierencias entre cada uno de los tratamientos.
C'a+*# 1F, Va*iaci +-l %-s# c#*%#*al +- las *a!as !*a!a+as c# +if-*-!-s +#sis +-l
C#c-!*a+# +- P*#!-(a +- P#!a 7$-+ia a*i!$B!ica V +-s<iaci -s!>+a*:
G*'%# 7$?CU?: NT Ra!as P-s# P*#$-+i#
Iicial 7?:
P-s# P*#$-+i#
fial 7?:
Ic*-$-!# P*#$-+i#
+- %-s# Wf-W# 70:
+ (1..) 8 -43.-a/-.1 //4./a13.2 -2.3a?.-
++ (:...) 8 -4?.-a/..1 /:4..a11.: :8./a8.?
+++ (-...) 8 -24.2a//.. -84.1a2?.2 :4./a8.2
+B (%ontrol) 8 -31.4a/1.: /43.3a43.? -1.:a::.-
VpK.,.1I VVpK.,.: y pS ...1 en los dems
'a administracin del producto debe realizarse todos los das, pues se obser) en
otras in)estigaciones que si slo se administra 1 das a la semana, en lugar de los ?, el
descanso de las 28 horas puede permitir la recuperacin de los eectos t$icos (Depetto,
:33?). Es por ello que el control del peso corporal ue diario y la administracin tambi#n
durante los 3. das. En dicho perodo se obser) que el incremento de peso )i)o diario de
todos los grupos, incluido el control, sigue un patrn de )ariacin ms o menos similar entre
la mayora de los animales.
18
En el cuadro :3 se muestra como ue la )ariacin semanal del peso corporal de las
ratas de todos los grupos. *l analizar el comportamiento semanal del incremento del peso
corporal y el consumo acumulati)o de alimentos se obser) un incremento similar en
todos los grupos de tratamiento respecto al control. En el *ne$o 1 se puede obser)ar
gricamente las comparaciones del grupo +, ++ y ++ )ersus el grupo +B (%ontrol).
C'a+*# 18, Va*iaci S-$aal +-l %-s# c#*%#*al +- las *a!as 7?: !*a!a+as c# -l
C#c-!*a+# +- P*#!-(a +- P#!a 7$-+ia a*i!$B!ica V +-s<iaci -s!>+a*J K1=:
D(as +'*a!- -l !*a!a$i-!#
G*'%# Peso +nicial ? :2 -: -8 /1 2- 23 14
+ -41.-a/... -??.2a/4.? -83.4a22.3 -88.2a1/.. -33.4a2?.2 /.:./a23.3 /.8.?a1/./ /:2..a1/.4 /-:.-a18..
++ -43.?a-8.1 -?:.3a/-.1 -?2.-a2:.: -?8.?a2/.: -88.-a28./ -88.1a1:.- -3/./a12.- -31..a18./ /...4a18.1
+++ -1:.1a//.4
V
-18.?a/4.2
V
-41.?a2..3 -4?.2a21.?
V
-?2.?a28.1
V
-??.1a24.- -8..-a28.8 -?:.2a24.3
V
-8-.4a22.:V
%ontrol -88.4a/8.8 /.-.2a24.2 /:4.-a12.2 /-?.3a13.: ///.3a42.2 //8.3a?..? /2/.?a43.. /1-.4a?-.- /1?..a?1.4
VpK.,.1I VVpK.,.: y pS ...1 en los dems
En las pruebas estadsticas para la )ariacin semanal del peso corporal de las ratas
de todos los grupos (*ne$o 8) se encontraron dierencias signiicati)as (pK...1) y de
acuerdo a la prueba de comparacin 9unnet se )eriica dichas dierencias entre el grupo
control y el grupo +++ (-... mgE=g) desde el inicio, semana :, /, 2, ? y 8. Ello se debe a
que las ratas del grupo : ueron las que inicialmente tu)ieron menos peso en promedio al
inicio de la in)estigacin y el grupo control por el contrario el grupo de mayor peso
promedio al inicio. Ello se debi a que por precaucin las ratas de menor peso seg&n los
clculos de dosiicacin del producto (ane$o :2) iban a necesitar menos )olumen de
dosiicacin y para e)itar problemas con la administracin del concentrado de protena de
pota se procedi a agrupar a las ratas de mayor peso en el grupo control ya que ellas no
iban a recibir el producto.
Para esta comparacin solo se tomo como datos los )alores de las primeras 8
semanas (14 das), debido a que en la semana 3 se presento un cuadro gripal ocasionado
por cambios climticos. Por ello se decidi traba(ar slo con esos datos..
13
2.2.2 Bi#&'($ica Cl(ica
'a media aritm#tica a des)iacin estndar de los datos de >ioqumica (*lb&mina,
%reatinina y *cti)idad Transaminasa <lutmico Pir&)ica A T<P) obtenidos para cada
grupo de tratamiento al inalizar el estudio se obser)an en la cuadro -., donde tambi#n se
aprecia los datos basales (e$amen inicial que ser)ir de base para controlar el desarrollo de
una enermedad o los resultados de un tratamiento), es decir que al inicio del e$perimento
se procedi a sedar a todas las ratas (2. animales) para obtener la muestra de sangre
(*ne$o 4) para los anlisis bioqumicos y hematolgicos iniciales (*ne$o -). *l inal del
e$perimento (3. das) se procedi a realizar el mismo procedimiento para obtener los datos
inales (*ne$o /).
C'a+*# 2=, I+ica+#*-s Bi#&'($ic#s %a*a ca+a !*a!a$i-!# al fiali4a* -l -s!'+i# )
+a!#s 5asal-s a!-s +-l !*a!a$i-!# 7$-+ia a*i!$B!ica V +-s<iaci -s!>+a*:
G*'%# 7$?CU?: NT Ra!as Al5/$ia 7?C+l: C*-a!iia7$?C+l
:
TGP 7UICL:
+ (1..) 4 /.1 a ..2 :./ a ..: :..3 a :.8
++ (:...) ? 2.. a ../ :./ a ..- :-.2 a /.8
+++ (-...) ? /.? a ..- :./ a ..- :-.2 a -.2
+B (%ontrol) 4 /.8a ../ :.- a ..- :../ a :.2
9atos >asales
(al inicio) 2.
/.4 a ../?
-.? L 2.- (Dango)
:.- a ..:4
..8 L :.? (Dango)
4.? a ..:4
/ L :2 (Dango)
VpK.,.1I VVpK.,.: y pS ...1 en los dems
En el anlisis estadstico (*,B*) se obser) que para los ndices bioqumicos
e)aluados (*lb&mina, %reatinina y T<P) no e$istieron dierencias signiicati)as (pS...1)
entre los tratamientos e)aluados y de acuerdo a la prueba de comparacin de TuFey
(pS...1) tampoco e$istieron dierencias entre cada uno de los tratamientos (*ne$o 3).
a. Al5/$ia
'a alb&mina es la protena ms abundante del plasma y es producida
e$clusi)amente por el hgado. 'a medicin de la alb&mina en sangre es un buen indicador
de la uncin sint#tica del hgado, es decir, de la capacidad del hgado de ormar las
protenas que normalmente produce. 'os ni)eles de alb&mina pueden descender
4.
rpidamente ante estr#s, trauma o septis. Esto puede deberse a una acelerada redistribucin
desde el espacio intra)ascular, una disminucin en su sntesis yEo un aumento en su
catabolismo ('e)it, -..8).
7eg&n 5ernndez (-..?) en los &ltimos a0os, la isiologa renal en relacin con las
protenas, y especialmente el comportamiento en relacin con la alb&mina, est
adquiriendo un gran inter#s en la in)estigacin renal bsica, a la )ez que gana una
creciente importancia en la nerologa clnica, as como en la medicina cardio)ascular. Por
e(emplo, la e$crecin de la alb&mina con la orina inal, que conocemos como albu%inuria,
est siendo reconocida, cada )ez ms, como un importante actor de riesgo de
enermedades renales y cardio)asculares. *unque es e)idente una clara correlacin
epidemiolgica, no e$iste a&n una e$plicacin racional para estas relacionesI recientemente
se ha sugerido que el da0o de los podocitos inducidos por la presin arterial
intraglomerular y mediada por los receptores de los mineralcorticoides podra ser la
e$plicacin de esta cone$in entre la albuminuria y el riesgo de las enermedades
cardio)asculares.
9omnguez et al (-..:) traba(ando con ratas Uistar traba(ando con dos grupos de
ratas <rupo * (desnutridas) y <rupo > (nutridas) encontr )alores iniciales de alb&mina
:.4: g J (<rupo *) y :.41 gJ (<rupo >) y al inal del e$perimento obtu)o )alores de
:.:? gJ (<rupo *, disminuyo) y /.18gJ (<rupo >, aumento). En general, la disminucin
de los ni)eles plasmticos de alb&mina puede ser signo de una enermedad heptica
crnica. 7in embargo, la disminucin de la alb&mina no es especica de las enermedades
hepticas. ,o se han descrito enermedades especicas que se asocien a ni)eles ele)ados
de alb&mina por lo que su hallazgo en e$menes de rutina no es indicador de anormalidad,
sino ms bien es un hallazgo relati)amente recuente de animales o personas bien nutridas.
En nuestros resultados (5igura :/ y ane$o - y /) hemos encontrado que nuestras medias de
los )alores de alb&mina al inicio (<rupo +; /.8 gEdlI <rupo ++; /.3 gEdlI <rupo +++; /.? gEdl y
<rupo +B; /.: gEdl) y al inal permanecen casi iguales (<rupo +; /.1 gEdlI <rupo ++; 2..
gEdlI <rupo +++; /.? gEdl y <rupo +B; /.8 gEdl)I adems de no haberse encontrado
dierencias estadsticas, por lo que podemos inerir que el tratamiento con el concentrado
de protena de pota no ha da0ado el hgado o ri0n (la creatinina es mas utilizada para
determinar alg&n da0o a este rgano). Esto se conirm cuando se analiz los cortes
histolgicos de los rganos.
4:
Fi?'*a 11, Val#*-s %*#$-+i# +- la al5/$ia al iici# ) al fial +- la i<-s!i?aci
5. C*-a!iia
Para e)aluar la uncin del ri0n se miden los ni)eles de creatinina en la sangre,
sustancia que se elimina por la orina como parte del proceso de depuracin normal en el
organismo. %uando el rgano alla, la eliminacin no se produce y la concentracin de la
sustancia en la sangre se )e aumentada.
Dodrguez et al (-..:) encontr en ratas 7prague 9aUley )alores de creatinina
entre ..2 L ..? mgEdl. y 'ausada et al (-..?) utilizando ratas de la cepa ratas Xistar sus
ratas controles tenan )alores de creatinina de :.:.a ...1 mgEdl.
En la 5igura :2 se obser)a que al inicio de las pruebas los )alores de creatinina
luctuaron entre :.: hasta :./ mgEdl y al inal de la prueba entre :.- hasta :./ mgEdl.
Prcticamente no hubo dierencias entre los datos basales y al inal de la in)estigacin.
Esto es )eriicado estadsticamente en el *ne$o 3 donde en el anlisis estadstico (*,B*)
se obser) que para los )alores de %reatinina no e$istieron dierencias signiicati)as
(pS...1) entre los tratamientos e)aluados y de acuerdo a la prueba de comparacin de
TuFey (pS...1) tampoco e$istieron dierencias entre cada uno de los tratamientos.
4-
Fi?'*a 12, Val#*-s %*#$-+i# +- la C*-a!iia al iici# ) al fial +- la i<-s!i?aci
c. Ac!i<i+a+ T*asa$iasa Gl'!>$ic# Pi*/<ica 7TGP:
'a transaminasa glutmico pir&)ica (T<P) tambi#n conocida como alanina
aminotranserasa (*'T) es una enzima citoplasmtica hepatocelular, con gran
concentracin en el hgado y en menor medida en los ri0ones, corazn y m&sculos. %uando
hay alguna lesin de estos rganos la T<P es liberada a la sangre y aparece ele)ada en los
anlisis. %omo es una aminotranserasa ms especicamente heptica que la *spartato
aminotranserasa (*7T) aparece ms ele)ada en las enermedades hepticas que en otras.
Porras (-..-) traba(o con la cepa de ratas Sprague Dawley que es la misma
que hemos usado en el traba(o y menciona que dicha cepa representa un modelo animal
usado para e)aluar el potencial terap#utico y t$ico de drogas y permite la elaboracin de
dise0os e$perimentales para estudiar rgano to$icidad, siendo el hgado uno de los rganos
mas estudiados. Porras determin en su traba(o como rango de reerencia de marcadores
hepticos para la *cti)idad Transaminasa <lutnico Pir&)ica (T<P) el rango de -/ L 2-
6+E' en ratas hembras y menciona que entre especies de animales e$isten )ariaciones en
los )alores normales s#ricos que estn relacionadas con dierencias de edad, se$o, hbitos
alimenticios, climticos, de cauti)erio e incluso con la t#cnica empleada para su
determinacin. 'o anterior pudiera e$plicar las seme(anzas y dierencias obser)adas entre
4/
los rangos de )alores reportados por otros autores. ,omura et al. (:3?1) reportan en ratas
hembras Xistar )alores de T<P --.1 a -.1 (-...A-1..). %zerUeF, (:38:), >erlanga et al.
(:338), por su parte, reportan T<P en ratas hembras 7prague 9aUley de :4.1 a -.8 (/) y
-/ a 3, respecti)amente. Tales )ariaciones pueden e)aluarse si se establece el rango de
reerencia de metabolitos para una determinada poblacin en estudio.
7eg&n P#rez (-..:) las ratas de la cepa Sprague Dawley que mane(a el +nstituto
,acional de !ncologa de la Cabana %uba presentan como datos normales para la T<P el
rango de 3.4 L 2-.4 6+E' y como media --.32 6+E' con una des)iacin estndar de :?./8
analizadas a /2 ratas. Estos )alores a dierencia de los encontrados por Porras (-..-) se
parecen ms a los hallados en nuestra in)estigacin.
En los resultados obtenidos (5ig. :1 y ane$o - y /) se han encontrado que las
medias de los )alores de la *cti)idad Transaminasa <lutmico Pir&)ica (T<P) al inicio
ueron <rupo +; ?./ mgEdlI <rupo ++; 1.? mgEdlI <rupo +++; 4.. mgEdl y <rupo +B; ?.8
mgEdl y al inal se incrementan en todos los grupos <rupo +; :..3 mgEdlI <rupo ++; :-.2
mgEdlI <rupo +++; :-.2 mgEdl y <rupo +B; :../ mgEdl. En el anlisis estadstico (*,B*) se
obser) que no e$istieron dierencias signiicati)as (pS...1) entre los tratamientos
e)aluados y de acuerdo a la prueba de comparacin de TuFey (pS...1) tampoco e$istieron
dierencias entre cada uno de los tratamientos (*ne$o 3).
7eg&n P#rez (-..4) algunas caractersticas de la ele)acin de las transaminasas
pueden tener un )alor orientador acerca de la causa que origina la lesin heptica. *s
ele)aciones superiores a :. )eces del lmite superior de la normalidad, slo se encuentran en
las lesiones t$icas, isqu#micas o )irales.
En la in)estigacin dichos )alores no se incrementaron diez )eces como menciona
P#rezI adems de no haberse encontrado dierencias signiicati)as en el anlisis estadstico,
por lo que se puede inerir que el tratamiento con el concentrado de protena de pota no ha
da0ado el hgado. Esto se conirm cuando se analiz los cortes histolgicos dicho rgano.
42
Fi?'*a 1@, Val#*-s %*#$-+i# +- la TGP al iici# ) al fial +- la i<-s!i?aci.
2.2.1 I+ica+#*-s 3-$a!#l?ic#s
'a media aritm#tica a des)iacin estndar de los indicadores hematolgicos por
grupo de tratamiento puede apreciarse en el cuadro -:, estos ueron comparados con los
)alores basales determinados en el muestreo inicial (a las 2. ratas Sprague Dawley) que
tambi#n se muestran en el mismo cuadro. En el anlisis estadstico (*,B*) se obser)
que para los ndices hematolgicos e)aluados slo en el caso de la hemoglobina y
hematocrito del grupo + se encontraron dierencias altamente signiicati)as (pK...:) y de
acuerdo a la prueba de comparacin TuFey y 9unnet se )eriica dichas dierencias entre el
grupo %ontrol y el grupo + (1.. mgE=g), donde se obser) una media aritm#tica menor de
dichos ndices hematolgicos en los animales tratados, aunque las disminuciones se
encuentran comprendidas dentro del rango normal calculados para la especie con relacin a
los )alores normales reportados en ratas pertenecientes a esta especie (P#rez et al, -..:). 'a
e)aluacin estadstica la podemos obser)ar en el *ne$o :..
41
C'a+*# 21, I+ica+#*-s 3-$a!#l?ic#s %a*a ca+a !*a!a$i-!# al fiali4a* -l -s!'+i# )
+a!#s 5asal-s a!-s +-l !*a!a$i-!# 7$-+ia a*i!$B!ica V +-s<iaci -s!>+a*:
<rupo Datas Cemoglobina Cematocrito 'eucocito %onta(e 9ierencial (J)
mgE=g n gEdl J %#lulasEmm
/
'inocitos 7egmentado *bastonados "onocitos
+ (1..) 4 :/.3a..4VV 2-..a:.?VV 8..8a31... 4:.1a:3.2 /2.8a:3.8 :.?a-.? :.8a:.4
++ (:...) ? :1.1a..1 2?..a:.4 8-.?a2-1.? 4?./a:..4 -3.4a3.. :.2a:.1 ..4a..8
+++ (-...) ? :2.3a..? 21.:a-.- ?8/4a::.2.2 14.4a--.. 2..2a-..8 :./a:.. :./a:.:
+B (%ontrol) 4 :1.4a..8 2?./a-./ ?8-1a:2/1.- ?...a4.8 -4..a4.- -./a-.: :.?a:.4
9atos
>asales
(al inicio)
2.
:1.1a:.4
11.2 X 21.@
7Ra?#:
1
24.8a2.3
2= X 9@
7Ra?#:
1
42/.a8/2.3
@=== X 82==
7Ra?#:
1
48.2a3.:
22 X F@
7Ra?#:
1
-3.-a8.3
12 X @@
7Ra?#:
1
..?a..3
= X @
7Ra?#:
1
:.2a:./
= X 1
7Ra?#:
1
VpK.,.1I VVpK.,.: y pS ...1 en los dems.
(Dango)
:
; 7e muestra el )alor mnimo y m$imo hallado por cada grupo al inicio de la in)estigacin.
a. 3-$#?l#5ia
En los resultados para la hemoglobina (5ig. :4 y ane$o - y /) se ha encontrado que
el promedio de los )alores de la Cemoglobina al inicio ueron para el <rupo +; :1.: gEdlI
<rupo ++; :1.- gEdlI <rupo +++; :2.3 gEdl y <rupo +B; :4.? gEdl y al inal <rupo +; :/.3 gEdlI
<rupo ++; :1.1 gEdlI <rupo +++; :2.3 gEdl y <rupo +B; :1.4 gEdl.
!bser)ando la igura :4 notamos un descenso del )alor de la hemoglobina del
grupo + y del grupo control. Dealizando el anlisis estadstico (*,B*) de la hemoglobina
se encontraron dierencias altamente signiicati)as (pK...:) y de acuerdo a la prueba de
comparacin TuFey y 9unnet se )eriica dichas dierencias entre el grupo %ontrol y el grupo
+ (1.. mgE=g).
El +nstituto ,acional de !ncologa y Dadiobiologa de la Cabana, %uba (P#rez et al,
-..:), mane(a )alores normales de Cemoglobina para la cepa de la rata Sprague Dawley de
:/.8 L :4.? gEdl y si se obser)a la igura :4 se )er que los )alores reportados se encuentran
en dicho rango.
'a 6ni)ersidad de [aragoza (-..1) menciona que hay que tener en cuanta que hay
inluencias considerables de raza, se$o y edad. 9icha 6ni)ersidad mane(a como )alores
44
normales de Cemoglobina el rango entre :- L :8 gEdl y el %anadian %ouncil on *nimal
%are (:382) )alores normales entre ::.1 L :4 gEdl.
7e puede airmar entonces que a pesar que e$iste una dierencia altamente
signiicati)a entre el grupo + y el control, los )alores de hemoglobina se encuentran dentro
de los )alores normales para esta especie.
Fi?'*a 19, Val#*-s %*#$-+i# +- la 3-$#?l#5ia al iici# ) al fial +- la i<-s!i?aci.
5. 3-$a!#c*i!#
En los resultados para hematocrito (5igura :? y *ne$o - y /) se ha encontrado que
el promedio de los )alores de Cematocrito (porcenta(e del )olumen de la sangre que ocupa
la raccin de los glbulos ro(os) en el inicio del estudio ueron para el <rupo +; 21.4JI
<rupo ++; 24..JI <rupo +++; 21.-J y <rupo +B; 1..2J y al inal del tratamiento ueron
<rupo +; 2-..JI <rupo ++; 2?..JI <rupo +++; 21.:J y <rupo +B; 2?./J. *l igual que en el
)alor de la hemoglobina se obser)a en la igura :? un descenso del )alor del porcenta(e de
hematocrito del grupo + y del grupo +B (control). Dealizando el anlisis estadstico
(*,B*) del hematocrito se encontraron dierencias altamente signiicati)as (pK...:) y de
acuerdo a la prueba de comparacin TuFey y 9unnet se )eriica dichas dierencias entre el
grupo +B (control) y el grupo + (*ne$o :.).
4?
El +nstituto ,acional de !ncologa y Dadiobiologa de la Cabana, %uba (P#rez et al,
-..:), mane(a )alores normales de hematocrito para la cepa de la rata Sprague Dawley de
2. L 1:J y la 6ni)ersidad de [aragoza (-..1) )alores de /1 L 21J y si se obser)a el cuadro
-: y la igura :? se )er que los )alores se encuentran en dicho rango. Podemos airmar
entonces que a pesar que hay una dierencia altamente signiicati)a entre el grupo + y el
control, los )alores de hematocrito hallados se encuentran dentro de los )alores normales
para esta especie.
Fi?'*a 1A, Val#*-s %*#$-+i# +- 3-$a!#c*i!# al iici# ) al fial +- la i<-s!i?aci.
c. L-'c#ci!#s
En los resultados para 'eucocitos (5igura :8 y ane$o - y /) se encontr que los
promedios de los )alores (c#lulas $ mm
/
) en el inicio del estudio ueron para el <rupo +;
4.?. c#lulasEmm
/
, <rupo ++; 4:-. c#lulasEmm
/
I <rupo +++; 4... c#lulasEmm
/
y <rupo +B;
?1/. c#lulasEmm
/
y al inal del tratamiento ueron <rupo +; 8..8 c#lulasEmm
/
I <rupo ++;
8-.? c#lulasEmm
/
I <rupo +++; ?8/4 c#lulasEmm
/
y <rupo +B; ?8-1 c#lulasEmm
/
. Dealizando
el anlisis estadstico (*,B*) de los leucocitos y de los tipos de leucocitos que e$isten los
granulocitos; ,eutrilos (abastonados y segmentados), eosinilos y basilos y los
agranulocitos; 'inocitos y "onocitosI se encontraron que no e$isten dierencias
48
signiicati)as (pS...1) y de acuerdo a la prueba de comparacin TuFey se )eriica que no
hay dierencias signiicati)as entre los grupos (*ne$o :.). 7in embargo, se obser) un
aumento de los leucocitos (glbulos blancos) en todos los grupos, estas son las encargadas
de la deensa contra la ineccin, bien como productoras de anticuerpos (linocitos), bien
participando en la destruccin de microorganismos (neutrilos, eosinilos, basilos y
monocitos).
El %anadian %ouncil on *nimal %are (:382) presenta )alores normales de
leucocitos para ratas entre los 2... a :.... c#lulasEmm
/
.
Fi?'*a 1F, Val#*-s %*#$-+i# +- l#s L-'c#ci!#s al iici# ) al fial +- la i<-s!i?aci.
*nalizando las )ariaciones dierenciales promedio de los leucocitos granulocitos y
agranulocitos (5igura :3) al inicio y inal del tratamiento de los <rupo + (1..mgE=g.),
<rupo ++ (:...mgE=g.) y <rupo +++ (-...mgE=g.) se obser) que hay una ele)acin de los
neutrilos segmentados (<rupo + de -?J a /1J, <rupo ++ de -1J a /.J y <rupo +++ de
/1J a 2:J) y una reduccin de los linocitos en dichos grupos.
43
7eg&n el +nstituto ,acional de salud (-..1) e$iste aumento de neutrilos en
inecciones bacterianas, abscesos y septicemias, procesos inlamatorios y necrosis tisular,
trastornos metablicos por into$icacin, hemorragias, etc. Este aumento de los neutrilos
segmentados es el que origina el aumento de los leucocitos ('eucocitosis). En el <rupo +B
(%ontrol) sucedi lo contrario.
El 'aboratorio 7er)et (-..3) presenta )alores promedio de neutrilos segmentados
para ratas que luct&an entre :. L /.J y los linocitos de 41 L 81JI comparndolo con los
)alores de la in)estigacin obser)aremos que no se ale(an de dichos rangos mencionados.
El neutrilo maduro (segmentado) tiene ms lbulos nucleares que las ()enes o
tambi#n llamadas en banda o neutrilos abastonados. 'as enermedades bacterianas
determinan generalmente un incremento en el n&mero de neutrilos abastonados
(9ellmann y >roUn, :3?4).
Es importante anotar que si aumenta el n&mero de abastonados la m#dula sea esta
liberando nue)as c#lulas para combatir la ineccin. Es un signo de pronstico a)orable.
Por el contrario una cantidad anormal de neutrilos segmentados puede ser un signo de
pronstico desa)orable o el sntoma de una ineccin crnica.
El 'aboratorio 7er)et (-..3) presenta )alores promedio de monocitos para ratas
que luct&an entre . L 1J. Dango que concuerda con nuestros )alores hallados. En general
los monocitos orman parte del sistema mononuclear agoctico.
7i bien se determin algunos resultados de los eosinilos (deensa contra helmintos
parsitosI modulacin del proceso inlamatorio) y basilos ('iberacin de histamina y
otros mediadores de la inlamacin) la mayora estu)ieron aba(o del :J razn por la cual
no los hemos considerado como datos reportados en el cuadro -:, debido a que el equipo
empleado no cuantiicaba )alores menores a :J. Pero si se ha reportado en el ane$o - y /.
?.
Fi?'*a 18, Va*iaci#-s +if-*-cial-s %*#$-+i# +- l#s L-'c#ci!#s ?*a'l#ci!#s )
a?*a'l#ci!#s.
?:
c.1 Lif#ci!#s
En los resultados para linocitos (5igura -. y ane$o - y /) se encontraron que el
promedio de los )alores al inicio ueron para el <rupo +; ?:JI <rupo ++; ?2JI <rupo +++;
41J y <rupo +B; 42J y al inal del tratamiento <rupo +; 4-JI <rupo ++; 4?JI <rupo +++;
1?J y <rupo +B; ?.J.
El 'aboratorio 7er)et (-..3) presenta )alores promedio de linocitos para ratas que
luct&an entre 41 L 81J. Dango que concuerda con nuestros )alores hallados. 7lo el grupo
+++ presenta un )alor de leucocito de 1?J al inal del e$perimento (5igura -.). Esto se debe
debera a una ineccin bacteriana aumentando como se )e los )alores de los neutrilos
segmentados de //J a 2:J (5igura :3). 9e los datos se obser)a que los linocitos
disminuyen en todos los grupos al inal del tratamiento a e$cepcin del grupo control. 7in
embargo, realizando el anlisis estadstico (*,B*) de los linocitos se encontraron que no
e$isten dierencias signiicati)as (pS...1) y de acuerdo a la prueba de comparacin TuFey
se )eriica que no hay dierencias signiicati)as entre los grupos (*ne$o :.).
Fi?'*a 2=, Val#*-s %*#$-+i# +- l#s Lif#ci!#s al iici# ) al fial +- la i<-s!i?aci.
?-
c.2 N-'!*fil#s S-?$-!a+#s 7$a+'*#s:
En los resultados para neutrilos segmentados (5igura -: y *ne$o - y /) se ha
encontrado que el promedio de los )alores al inicio ueron para el <rupo +; -?JI <rupo ++;
-1JI <rupo +++; //J y <rupo +B; /-J y al inal del tratamiento <rupo +; /1JI <rupo ++;
/.JI <rupo +++; 2.J y <rupo +B; -4J.
9e los datos se obser)a que los neutrilos segmentados aumentaron en todos los
grupos al inal del tratamiento a e$cepcin del grupo control. Esto puede ser un signo de
pronstico desa)orable o el sntoma de una ineccin crnica. * pesar que los anlisis
estadsticos (*,B*) de los neutrilos segmentados se encontraron que no e$isten
dierencias signiicati)as (pS...1) y de acuerdo a la prueba de comparacin TuFey se
)eriica que no hay dierencias signiicati)as entre los grupos (*ne$o :.). 'uego se hall
que al analizar los cortes histolgicos de todos los grupos, incluido el control, se
encontraron da0os en el pulmn y por ello se iniere que esto ue la causa del aumento de
los neutrilos segmentados.
Fi?'*a 21, Val#*-s %*#$-+i# +- l#s S-?$-!a+#s al iici# ) al fial +- la
i<-s!i?aci.
?/
c.1 N-'!*fil#s a5as!#a+#s 7O<--s:
En los resultados para neutrilos abastonados (5igura -- y *ne$o - y /) se
encontraron que el promedio de los )alores al inicio ueron para el <rupo +; :.-JI <rupo
++; ..-JI <rupo +++; ..4J y <rupo +B; ..?J y al inal del tratamiento <rupo +; :.8JI
<rupo ++; ..4JI <rupo +++; :./J y <rupo +B; :.?J.
'os neutrilos abastonados aumentaron en todos los grupos al inal del
tratamiento. 7eg&n 9ellmann y >roUn (:3?4) esto sucede cuando el organismo necesita
combatir una ineccin.
En los anlisis estadsticos (*,B*) de los neutrilos abastonados se encontr que
no e$isten dierencias signiicati)as (pS...1) y de acuerdo a la prueba de comparacin
TuFey se )eriica que no hay dierencias signiicati)as entre los grupos (*ne$o :.).
Fi?'*a 22, Val#*-s %*#$-+i# +- l#s A5as!#a+#s al iici# ) al fial +- la
i<-s!i?aci.
?2
c.2 .##ci!#s
En los resultados para monocitos (5igura -/ y *ne$o - y /) se encontraron que el
promedio de los )alores al inicio ueron para el <rupo +; ..8JI <rupo ++; ..?JI <rupo +++;
:.:J y <rupo +B; -.8J y al inal del tratamiento <rupo +; :.?JI <rupo ++; :.2JI <rupo
+++; :./J y <rupo +B; -./J.
'os monocitos aumentaron en todos los grupos al inal del tratamiento a e$cepcin
del grupo control que ms bien suri un descenso. El 'aboratorio 7er)et (-..3) presenta
)alores promedio de monocitos para ratas de .J L 1Jl. *rango et al. (-..1) encontr
)alores de -A 2.-J en sus ratas control y "oreno et al. (-..?) )alores de /.8:Ja:.?3. Por
lo tanto se puede decir que los datos hallados se encuentran dentro de los datos normales
hallados por otros in)estigadores.
En los anlisis estadsticos (*,B*) de los monocitos se encontr que no e$isten
dierencias signiicati)as (pS...1) y de acuerdo a la prueba de comparacin TuFey se
)eriica tampoco hay dierencias signiicati)as entre los grupos (*ne$o :.).
Fi?'*a 21, Val#*-s %*#$-+i# +- l#s .##ci!#s al iici# ) al fial +- la i<-s!i?aci.
?1
c.@ E#sifil#s
En los resultados para eosinilos (*ne$o - y /) se encontr que el promedio de los
)alores al inicio ueron para el <rupo +; ../JI <rupo ++; ../JI <rupo +++; ..2J y <rupo
+B; ..8J y al inal del tratamiento <rupo +; ..-JI <rupo ++; ..2JI <rupo +++; ..2J y
<rupo +B; .J.
7e decidi presentar los datos en los ane$os, pero se preiri no realizar el anlisis
estadstico porque los )alores son muy discutibles y porque los resultados hallados para los
eosinilos como se obser)a en los ane$os - y / presentan en muchos casos )alores de .J.
7eg&n Tunqueira y %arneiro (-..1) los eosinilos son grnulos especicos,
sustancias armacolgicamente acti)as cuyas principales unciones son la deensa contra
helmintos parsitos y modulacin del proceso inlamatorio. 'os eosinilos agocitan y
digieren comple(os de antgenos que aparecen en casos de alergia como, por e(emplo, el
asma bronquial.
9iaz et al. (:3?/) en un estudio del )alor del recuento de eosinilos en secrecin
nasal en el diagnstico dierencial de los cuadros bronquiales obstructi)os del ni0o
encontraron que hay una e)idente dierencia entre la gran magnitud de eosinoilia
encontrada en los ni0os asmticos y la escasa presencia de eosinilos en los ni0os sin
alergia demostrada, con o sin sintomatologa bronquial crnica. En un grupo de :- ni0os
con bronquitis crnica no al#rgica :: no tenan eosinilos o tenan slo hasta :J y slo
uno tena una eosinoilia importante de 3J. En el grupo de :1 ni0os normales :- no
presentaban eosinilos o presentaban hasta ..1J y los otros / que presentaban eosinilos
estos )alores estu)ieron siempre por deba(o de 1J. En cambio en el grupo de los ni0os
asmticos :- del grupo de :1 presentaban eosinilos por encima de 1J.
El 'aboratorio 7er)et (-..3) presenta )alores promedio de eosinilos para ratas
que luct&an entre .J L 4J. P "oreno et al. (-..?) encontr )alores de :J a..38 en sus
ratas control. 9atos que concuerdan con los )alores hallados.
?4
2.2.2 Es!'+i# Aa!#$#%a!#l?ic#
9urante las necropsias, se realiz la descripcin macroscpica de los rganos
e$trados y se registro su peso. 7e e$tra(eron el hgado, ri0n y pulmn. 'as muestras
e$tradas se conser)aron en ormol. 9urante la realizacin del ensayo se obser) el estricto
cumplimiento de las >uenas Prcticas de 'aboratorio.
'as obser)aciones anatomopatolgicas, que consistieron en la inspeccin e$terna y
macroscpica de los rganos, no mostraron la e$istencia de alteraciones que pudieran
relacionarse con el tratamiento con el concentrado de protena de pota. El anlisis de los
pesos relati)os de los rganos, tampoco mostr dierencias estadsticamente signiicati)as
entre los grupos.
En la igura -2 podemos obser)ar una rata del grupo +B (grupo control) que acaba de
ser sacriicada al inal de los 3. das para realizar el anlisis de sus rganos. Es muy
importante como se realiza el sacriicio para e)itar alg&n da0 de los rganos y e)itar el
surimiento de los animales. 'as ratas ueron sacriicadas por dislocacin cer)ical.
Fi?'*a 22, Ra!a c#!*#l +-s%'Bs +-l sac*ifici# %a*a *-ali4a* -l a>lisis +- l#s *?a#s.
??
'as muestras de Cgado, Di0n y Pulmn se colocaron en rascos separados, debidamente
rotulados por grupo, que contenan 5ormol al :.J (5igura -1).
Fi?'*a 2@, .'-s!*as +- 3(?a+#J RiN ) P'l$#-s +- l#s G*'%#s !*a!a+#s.
a. E<al'aci +-l P-s# +- l#s *?a#s
En el %uadro -- se obser)a los resultados del porcenta(e del peso de los rganos
(ri0n, hgado y pulmn) )ersus el peso del animal de todos los grupos. 9ichos datos
ueron analizados estadsticamente (*ne$o ::). En el anlisis estadstico (*,B*) se
obser) que no e$istieron dierencias signiicati)as (pS...1) entre los tratamientos
e)aluados y de acuerdo a la prueba de comparacin de TuFey (pS...1) tampoco e$istieron
dierencias entre cada uno de los tratamientos.
C'a+*# 22, P#*c-!aO- 70: +-l %-s# +- l#s *?a#s <-*s's -l %-s# +-l ai$al !*a!a+as
c# +if-*-!-s +#sis +-l C#c-!*a+# +- P*#!-(a +- P#!a 7$-+ia a*i!$B!ica V
+-s<iaci -s!>+a*J K@:
G*'%# 7$?CU?: Ra!a 7?:
L V S
3(?a+# RiN#-s P'l$#-s
7?:
L V S
70:
L V S
7?:
L V S
70:
L V S
7?:
L V S
70:
L V S
+ (1..) /-2.4a4..- :..4a:.4 /./a..2 -.?a..2 ..8a..- 2.-a:.. :.2a..4
++ (:...) -3?./a2-.4 :..-a-.: /.2a..1 -.1a..1 ..8a..: -./a..2 ..8a..:
+++ (-...) /:?./a4/.8 :..-a-.8 /.-a../ -.4a../ ..8a..: /.4a:.. :.-a..1
+B (%ontrol) /21.:a8-.4 ::./a-./ /./a../ -.1a..2 ..?a..: /./a..2 :..a..-
VpK.,.1I VVpK.,.: y pS ...1 en los dems.
En la 5igura -4 se aprecia el porcenta(e del peso del Cgado en relacin al peso del
?8
animal, se obser)a que no hay una mayor dierencia porcentual entre los grupos tratados y el
grupo control. *nalizado esto estadsticamente (*ne$o ::) se comprob que no e$isten
dierencias signiicati)as entre los grupos tratados y el grupo control (pS...1).
Fi?'*a 29, P#*c-!aO- +-l %-s# +-l 3i?a+# 7<-*s's -l %-s# +-l ai$al: %*#$-+i# +- l#s
?*'%#s.
En la 5igura -? se obser)a que el porcenta(e del peso del Di0on tanto de las ratas
control como de los otros grupos no presentan mayor dierencia porcentual con respecto al
peso total (apenas ..:J de dierencia entre los grupos tratados y el control). *nalizado esto
estadsticamente (ane$o ::) se conirmo que no e$isten dierencias signiicati)as entre los
grupos tratados y el grupo control (pS...1).
Fi?'*a 2A, P#*c-!aO- +-l %-s# +-l RiN# 7<-*s's -l %-s# +-l ai$al: %*#$-+i# +- l#s
?*'%#s.
?3
*l igual, que en el caso del hgado y los ri0ones, el porcenta(e del peso de los
pulmones en relacin al peso del animal (5igura -8) de los grupos tratados no present
dierencias signiicati)as entre ellos y el grupo control (ane$o ::).
Fi?'*a 2F, P#*c-!aO- +-l %-s# +-l P'l$ 7<-*s's -l %-s# +-l ai$al: %*#$-+i# +- l#s
?*'%#s
5. E<al'aci .ac*#sc%ica +- l#s *?a#s
En el cuadro -/ se puede obser)ar los resultados de las caractersticas
macroscpicas de los rganos para todos los grupos. Esta E)aluacin ue realizada con el
apoyo del "#dico %iru(ano 5abricio <amarra %astillo (%"P ,Z 2/4?1), 9ocente de la
5acultad de "edicina Cumana de la 6ni)ersidad 7an "artin de Porres.
9el cuadro -/ se puede obser)ar que los ri0ones en todos los grupos presentan
caractersticas macroscpicas normales con una presencia de una rata (:2J) de ri0ones
hipotrico (poco desarrollado) del grupo ++ y los ri0ones de una rata (:2J) con signos
hemorrgicos del grupo +++. Pero de la igura -4 y cuadro -- se obser)a que no hay una
dierencia signiicati)a en relacin a los dems grupos del peso de dicho rgano en relacin
al peso del cuerpo (e$presado en J).
8.
7eg&n el cuadro -/ el hgado en el ?-J de todos los casos es normal. Presentando
cierto cuadro congesti)o en el grupo +, y ++ e indicios de hepatomegalia (aumento del
tama0o del hgado) en el grupo ++ y +++ y +B y una rata del grupo +++ presentaba un hgado
hipotrico.
En relacin a los pulmones se obser)o que slo en el caso del grupo control se
encontraron animales con los pulmones normales en un 1.J (/ muestras). En general los
pulmones presentaban ibrosis y hemorragia pulmonar en todos los grupos, incluido el
grupo control.
C'a+*# 21, Ca*ac!-*(s!icas $ac*#sc%icas +- l#s *?a#s +- l#s ?*'%#s c# !*a!a$i-!#
) -l ?*'%# c#!*#l
*?a# Ca*ac!-*(s!icas .ac*#sc#%icas
G*'%# I
7 K 9:
G*'%# II
7 K A:
G*'%# III
7 K A:
G*'%# IV
7 K 9:
70: 70: 70: 70:
3(?a+# A,ormal.
A%ongesti)o hemorrgico
ACepatomegala ligera
ACepatomegala marcada
ACipotrico
1 (8/J)
: (:?J)
AAA
AAA
AAA
1 (?-J)
: (:2J)
: (:2J)
AAA
AAA
1 (?-J)
AAA
AAA
: (:2J)
: (:2J)
1 (8/J)
AAA
AAA
: (:?J)
AAA
RiN#-s A ,ormales.
ACipotricos
A 7ignos hemorrgicos
4 (:..J)
AAA
AAA
4 (84J)
: (:2J)
AAA
4 (84J)
AAA
: (:2J)
4 (:..J)
AAA
AAA
P'l$#-s A,ormales.
A5ibrosis pulmonar con presencia de
necrosis
A5ibrosis y hemorragia pulmonar
AAA
- (/2J)
AAA
2 (44J)
AAA
- (-8J)
AAA
1 (?-J)
AAA
AAA
AAA
? (:..J)
/ (1.J)
AAA
AAA
/ (1.J)
8:
2.2.@ Es!'+i# 3is!#%a!#l?ic#
7eg&n los resultados del estudio histopatolgico, no se obser)aron dierencias entre
el grupo control (+B) y los dems grupos de tratamiento grupo + (1.. mgEFg), grupo ++
(:... mgE=g) y el grupo +++ de la dosis m$ima del ensayo (-... mgEFg de peso).
En todos los grupos (incluido el grupo control), los cortes histolgicos del hgado y
ri0n no mostraron ning&n tipo de alteracin histolgica estructural en relacin a to$icidad
por la ingesta alimentara.
El estudio del pulmn en todos los grupos, incluidos el control, mostraron lesin
al)eolar intersticial diusa, da0o bronquial, cuadros neumnicos y broncoAneumnicos en
la mayora de los casos estudiados, esto no guarda relacin de to$icidad con la ingesta
alimentara y estara en relacin al habitad de las ratas (bioterio), la patologa respiratoria
sera por inhalacin )iral y compromiso bacteriano posterior y a posibles neumonas
durante la alimentacin de estas seg&n el "#dico %iru(ano *ntomo Patlogo 9aniel
%arrera Palao (%"P ,Z --43?), del 9epartamento de *natoma Patolgica del Cospital
,acional GEdgardo DeblagliatiH quien apoy en la interpretacin de las lminas de los
cortes histolgicos (*ne$o :-).
a. T-Oi+# R-al
7eg&n el "#dico %iru(ano *ntomo Patlogo 9aniel %arrera Palao (%"P ,Z
--43?), maniiesta que el estudio del ri0n de todos los grupos (incluido el control) no
muestran ning&n tipo de alteracin histolgica estructural en relacin a to$icidad por la
ingesta alimentaria. En general describe que las estructuras glomerulares son de caracteres
normales, las estructuras )asculares sin alteraciones histolgicas signiicati)as, las
estructuras tubulares asas de caracteres normales, el intersticio renal de caracteres normales
y que no se obser)a iniltrado inlamatorio en ninguna estructura (%uadro -2).
8-
C'a+*# 22, Ca$5i#s 6is!#%a!#l?ic#s +- l#s *iN#-s s-?/ +#sis +- c#c-!*a+# +-
%*#!-(a +- P#!a
Es!*'c!'*as Ca*ac!-*(s!icas .ac*#sc%icas
G*'%# I
7 K 9:
G*'%# II
7 K A:
G*'%# III
7 K A:
G*'%# IV
7 K 9:
70: 70: 70: 70:
Es!*'c!'*a
?l#$-*'la*-s
A,ormales.
A*normales
:..J
AAA
:..J
AAA
:..J
AAA
:..J
AAA
Es!*'c!'*as <asc'la*-s A 7in alteraciones signiicati)as
A %on alteraciones
:..J
AAA
:..J
AAA
:..J
AAA
:..J
AAA
Es!*'c!'*as !'5'la*-s
asas
A,ormales.
A*normales
:..J
AAA
:..J
AAA
:..J
AAA
:..J
AAA
I!-*s!ici# *-al A ,ormales.
A %on alteraciones
:..J
AAA
:..J
AAA
:..J
AAA
:..J
AAA
Ifil!*a+#
ifla$a!#*i# - al?'a
-s!*'c!'*a
A,o se obser)a
A7e obser)a
:..J
AAA
:..J
AAA
:..J
AAA
:..J
AAA
En las 5iguras -3*, -3> y -3% se obser)a el te(ido renal de aspecto normal de rata
del grupo + (9osis 1.. mgE=g) a dierentes aumentos. ,tese el corp&sculo renal (%D), el
glom#rulo (<'!) y la %psula de >oUman que estn conser)ados sin aparente da0o
histolgico.
En las 5iguras /.*, /.> y /.% se obser)a el te(ido renal de aspecto normal de rata
del grupo ++ (9osis :... mgE=g) a dierentes aumentos. ,tese el corp&sculo renal (%D),
el glom#rulo (<'!) y la %psula de >oUman que estn conser)ados sin aparente da0o
histolgico. 7e pueden apreciar tambi#n los t&bulos contorneados (T%).
En la 5igura /: se obser)a el te(ido renal de aspecto normal de rata del grupo +++
(9osis -... mgE=g). 7i bien las estructuras no han surido da0o se aprecia presencia de
eritrocitos. Tal )ez esto es causado por el corte.
En la 5igura /- se obser)a el te(ido renal de aspecto normal de rata del grupo +B
(%ontrol).
8/
Fi?. 28A. 72L 3E:. T-Oi+# *-al +- as%-c!# #*$al +- *a!a +- ?*'%# I
7D#sis @== $?CU?:. C#*%/sc'l# R-al 7CR:.
Fi?'*a 28B, 71=L 3E:. T-Oi+# *-al +- as%-c!# #*$al +- *a!a +- ?*'%# I
7D#sis @== $?CU?: a $a)#* a'$-!#. C#*%/sc'l# R-al 7CR:.
CR
CR
82
Fi?'*a 28C, 72=L 3E:. C#*%/sc'l# R-al 7CR: +- *a!a +- G*'%# I. D#sis
@== $?CU?. Gl#$B*'l# 7GLO:.
Fi?'*a 1=A, 72L 3E:.T-Oi+# R-al +- *a!a G*'%# II. D#sis 1=== $?CU?.
C#*%/sc'l# R-al 7CR:.
GLO
CR
%psula
>oUman
81
Fi?'*a 1=B, 71=L 3E:.T-Oi+# R-al +- *a!a G*'%# II. D#sis 1=== $?CU?.
C#*%/sc'l# R-al 7CR:.
Fi?'*a 1=C, 72=L 3E:. C#*%/sc'l# R-al 7CR: +- *a!a G*'%# II. D#sis
1=== $?CU?. Gl#$B*'l# 7GLO:; -s%aci# ca%s'la* # -s%aci# +- B#Y$a 7C:;
T/5'l#s c#!#*-a+#s 7TC:; E%i!-li# ca%s'la* 7EC:; E%i!-li# ?l#$-*'la*
7EG:.
CR
GLO
!)illo
<lomerular
C
TCC TC
C
%psula de
>oUman
GLO
EG
EC
84
Fi?'*a 11, 71=L 3E:.T-Oi+# R-al +- *a!a G*'%# III. D#sis 2=== $?CU?.
C#*%/sc'l# R-al 7CR:.
Fi?'*a 12, 71=L 3E:.T-Oi+# R-al +- *a!a G*'%# IV 7C#!*#l:.
C#*%/sc'l# R-al 7CR:.
CR
CR
8?
5. T-Oi+# 3-%>!ic#
7eg&n el "#dico %iru(ano *ntomo Patlogo 9aniel %arrera Palao (%"P ,Z
--43?), maniiesta que el estudio del hgado de todos los grupos (incluido el control) no
muestran ning&n tipo de alteracin histolgica estructural en relacin a to$icidad por la
ingesta alimentaria. En el cuadro -1 podemos apreciar los cambios histopatolgicos del
hgado de todos los grupos tratados y del control (grupo +B).
C'a+*# 2@, Ca$5i#s 6is!#%a!#l?ic#s +-l 6(?a+# s-?/ +#sis +- c#c-!*a+# +-
%*#!-(a +- %#!a
Es!*'c!'*as Ca*ac!-*(s!icas .ac*#sc%icas
G*'%# I
7 K 9:
G*'%# II
7 K A:
G*'%# III
7 K A:
G*'%# IV
7 K 9:
70: 70: 70: 70:
Es!*'c!'*a T*a5-c'la*
6-%>!ica
A Preser)ada.
A 9a0ada.
:..J
AAA
:..J
AAA
:..J
AAA
:..J
AAA
Vas#s C-!*# l#5'lilla* A %ongesti)os ligeramente
A ,o congesti)os
:..J
AAA
:..J
AAA
:..J
AAA
:..J
AAA
Si's#i+-s 6-%>!ic#s A %ongesti)os ligeramente
A ,o congesti)os
:..J
AAA
:..J
AAA
:..J
AAA
:..J
AAA
Es%aci#s %#*!a A ,ormales.
A %on alteraciones
:..J
AAA
:..J
AAA
:..J
AAA
:..J
AAA
Caal(c'l#s 5ilia*-s A ,ormales.
A %on alteraciones
:..J
AAA
:..J
AAA
:..J
AAA
:..J
AAA
En las 5iguras //*, //> y //% se obser)a el te(ido heptico de aspecto normal de
rata del grupo + (9osis 1.. mgE=g) a dierentes aumentos. ,tese los l#5'lill#s 6-%>!ic#s
7LB: que son descritos clsicamente como he$agonales, es decir, un polgono de seis lados,
es muy raro encontrar alguno que se )ea con esta orma e$acta, lo que tenemos que hacer
es buscar en espacios abiertos la <-a c-!*al 7VC: y tenemos q imaginarnos que en los
)#rtices o rodendola )amos a )er otras )enas que tienen te(ido conecti)o circundante
porque son )enas portales, cualquier alteracin de esta arquitectura es la base para
reconocer las enermedades hepticas. 7e puede apreciar, adems, los 6-%a!#ci!#s 73: que
es el componente estructural bsico del hgado. Estas c#lulas epiteliales se halan agrupadas
88
en tabiques interconectados. Entre los espacios de dichos tabiques contienen capilares que
son los si's#i+-s 6-%>!ic#s 7S:.
7eg&n Tunqueira y %arneiro (-..1) los sinusoides contienen macragos conocidos
como cBl'las +- U'%ff-*, cuyas principales unciones son; metabolizar hemates )ie(os,
digerir la hemoglobina, secretar protenas relacionadas con procesos inmunolgicos y
destruir bacterias que inalmente penetran en la sangre portal a partir del intestino grueso.
En las 5iguras /2*, /2> y /2% se obser)a el te(ido heptico de aspecto normal de rata
del grupo ++ (9osis :... mgE=g) a dierentes aumentos. ,tese la <-a c-!*al 7VC:
rodeada por las <-as %#*!as 7VP:.
En las 5iguras /1 (<rupo +++) y /4 (grupo control) se aprecia el te(ido heptico de las
ratas de aspecto normal igual que los anteriores grupos.
7eg&n Tunqueira y %arneiro (-..1) el hgado es un rgano poco com&n por el hecho
de recibir sangre de dos uentes distintas; un 8.J de la sangre deri)a de la )ena porta, que
transporta la sangre poco o$igenada y rica en nutrientes procedente de las )sceras
abdominales, mientras que el -.J restante deri)a de la arteria heptica, que aporta una
sangre rica en o$geno.
Por lo obser)ado en las lminas podemos concluir el te(ido heptico de todos los
grupos (incluido el control) no muestran ning&n tipo de alteracin histolgica a pesar que
en el e$amen macroscpico se indicaba que alrededor de un -.J de ratas en todos los
grupos presentaba un cuadro congesti)o y en algunos casos indicios de hepatomegalia.
83
Fi?'*a 11A, 72L 3E:.T-Oi+# 6-%>!ic# +- as%-c!# #*$al +- *a!a +- G*'%# I
7D#sis @== $?CU?:. O5sB*<-s- l#s L#5'lill#s 6-%>!ic#s 7LB: ) la <-a c-!*al
7VC:.
Fi?'*a 11B, 71=L 3E:. T-Oi+# 6-%>!ic# +- as%-c!# #*$al +- *a!a +- G*'%# I
7D#sis @== $?CU?:. O5sB*<-s- la <-a c-!*al ) l#s si's#i+-s 6-%>!ic#s 7S:.
LBB
LBB
VCB
VC
VCB
VCB
LBB
3.
Fi?'*a 11C, 72=L 3E:.T-Oi+# 6-%>!ic# +- *a!a +- as%-c!# #*$al +-l G*'%#
I. D#sis @== $?CU?. 3-%>!#ci!#s 73:; cBl'las +- U'%ff-* 7fa?#ci!a*ias:;
si's#i+-s 6-%>!ic#s 7S:.
Fi?'*a 12A, 72L 3E:.T-Oi+# 6-%>!ic# +- *a!a +- as%-c!# #*$al +- G*'%#
II. D#sis 1=== $?CU?. O5sB*<-s- -l Es%aci# %#*!al +#+- %'-+- a%*-cia*s-
la !*ia+a %#*!al 7c#+'c!# 5ilia*J <-a %#*!a ) la a*!-*ia 6-%>!icas.
3
U
S
S
S
VC
Espacio
portal
VC
VC
Espacio
portal
3:
Fi?'*a 12B, 71=L 3E:.T-Oi+# 6-%>!ic# +- *a!a +- as%-c!# #*$al +-
G*'%# II. D#sis 1=== $?CU?. V-a %#*!a a $a)#* a'$-!#J #5sB*<-s-
c#$# sal- l#s si's#i+-s - f#*$a *a+ia+a 7flechas:.
Fi?'*a 12C, 72=L 3E:.T-Oi+# 6-%>!ic# +- *a!a +- as%-c!# #*$al +-
G*'%# II. D#sis 1=== $?CU?. Si's#i+-s 7S: a $a)#* a'$-!#.
3
VP
S
3-
Fi?'*a 1@, 71=L 3E:.T-Oi+# 6-%>!ic# +- *a!a G*'%# III. D#sis 2=== $?CU?.
Fi?'*a 19, 71=L 3E:.T-Oi+# 6-%>!ic# +- *a!a +- as%-c!# #*$al +- G*'%#
IV 7C#!*#l:.
Bena
central
3/
c. T-Oi+# P'l$#a*
7eg&n el "#dico %iru(ano *ntomo Patlogo 9aniel %arrera Palao, maniiesta que
el estudio los pulmones de todos los grupos (incluido el control) presentan alteracin
histolgica estructural pero que esta no esta en relacin a to$icidad por la ingesta
alimentara (*ne$o :-). En el cuadro -4 podemos apreciar los cambios histopatolgicos de
los pulmones de todos los grupos tratados y del control (grupo +B).
C'a+*# 29, Ca$5i#s 6is!#%a!#l?ic#s +- l#s %'l$#-s s-?/ +#sis +- c#c-!*a+# +-
%*#!-(a +- %#!a
Es!*'c!'*as Ca*ac!-*(s!icas .ac*#sc%icas
G*'%# I
7 K 9:
G*'%# II
7 K A:
G*'%# III
7 K A:
G*'%# IV
7 K 9:
70: 70: 70: 70:
A*&'i!-c!'*a %'l$#a* APreser)ada.
A<rados )ariables de distorsin.
:..J
AAA
:..J
AAA
:..J
AAA
:..J
AAA
S-%!#s al<-#la*-s A+niltrado inlamatorio
linocitario %ongestin )ascular
APreser)ado
:..J
AAA
:..J
AAA
:..J
AAA
:..J
AAA
Al<-#l#s A <rados )ariables de atelectasia
A Preser)ado
:..J
AAA
:..J
AAA
:..J
AAA
:..J
AAA
Dis!*i5'ci
%-*i5*#&'ial
A%ompromiso inlamatorio
crnico y agudo )ariable, en
orma segmentaria.
A 7in alteraciones
:..J
AAA
:..J
AAA
:..J
AAA
:..J
AAA
En las iguras /?*, /?> y /?% se obser)a el te(ido pulmonar de rata del grupo +
(9osis 1.. mgE=g) a dierentes aumentos. !bs#r)ese que presentan alteraciones
estructurales. 7e obser)a congestin )ascular, neumonitis crnica multiocal. Esto )a a
ocasionar que se presente grados )ariables de atelectasia, que es la disminucin del
)olumen pulmonar. 'os sacos al)eolares estn llenos de e$udados compuestos por
leucocitos (sobretodo neutrilos), eritrocitos y ibrina. Esto es indicati)o de cuadros de
neumona y bronconeumona.
'o apreciado en el te(ido pulmonar del grupo +, se )a a repetir en los dems grupos,
incluido el grupo control.
32
En la igura /8% (rata grupo ++) podemos apreciar como en los septos al)eolares
iniltrado inlamatorio. *dems dicho septos se han engrosado.
En la igura /3 (rata grupo +++) se aprecia un cuadro de neumona crnica.
En la igura 2. (<rupo control) igualmente los espacios a#reos estn llenos de
leucocitos, eritrocitos y ibrina.
7eg&n P#rez et al (:333) la neumona al)eolar prolierati)a puede deberse a
enermedades sist#micas en estos animales. ,o obstante, esta lesin tambi#n puede
aparecer como respuesta a la inhalacin del #ter, que ue la sustancia empleada durante la
obtencin de muestras para los anlisis bioqumicos y hematolgicos.
Estas lesiones en los pulmones no ueron especicas de un grupo, sino que se
presentaron aleatoriamente en todos los grupos incluidos el control, sin preerencia por
alguno de ellos, por lo que se puede airmar que su aparicin no est relacionada con el
tratamiento del concentrado de protena de pota.
31
Fi?'*a 1AA, 72L 3E:.T-Oi+# %'l$#a* +- *a!a G*'%# I. D#sis @== $?CU?.
S- #5s-*<a c#?-s!i <asc'la*J a5'+a!- !-Oi+# l-'c#ci!a*i# ) s- #5s-*<a
&'- l#s al<-#l#s 6a %-*+i+# s' -s!*'c!'*a ca*ac!-*(s!ica.
Fi?'*a 1AB, 71=L 3E:.T-Oi+# %'l$#a* +- *a!a G*'%# I. D#sis @== $?CU?.
O5sB*<-s- &'- l#s -s%aci#s aB*-#s -s!> ll-#s +- -"'+a+# c#$%'-s!# %#*
l-'c#ci!#s 7s#5*-!#+# -'!*fil#s:J -*i!*#ci!#s ) fi5*ia.
34
Fi?'*a 1AC, 72=L 3E:.T-Oi+# %'l$#a* +- *a!a G*'%# I. D#sis @==
$?CU?. O5sB*<-s- -l c'a+*# +- 5*#c#-'$#(a.
Fi?'*a 1FA, 72L 3E:.T-Oi+# %'l$#a* +- *a!a G*'%# II. D#sis 1===
$?CU?. Dis!#*si +- la a*&'i!-c!'*a %'l$#a* c# ifil!*a+# lif#ci!a*i#.
B*#c#-'$#(a.
3?
Fi?'*a 1FB, 71=L 3E:.T-Oi+# %'l$#a* +- *a!a G*'%# II. D#sis 1===
$?CU?. C#$%*#$is# ifla$a!#*i# c*ic# 7B*#c#-'$#(a:.
Fi?'*a 1FC, 72=L 3E:.T-Oi+# %'l$#a* +- *a!a G*'%# II. D#sis 1===
$?CU?. O5sB*<-s- ifil!*a+# ifla$a!#*i# - l#s s-%!#s al<-#la*-s.
38
Fi?'*a 18, 71=L 3E:.T-Oi+# %'l$#a* +- *a!a G*'%# III. D#sis 2===
$?CU?. O5sB*<-s- la -'$#(a c*ica. L#s -s%aci#s aB*-#s ) l#s al<-#l#s
-s!> ll-#s +- l-'c#ci!#sJ -*i!*#ci!#s ) fi5*ia.
Fi?'*a 2=, 71=L 3E:.T-Oi+# %'l$#a* +- *a!a G*'%# IV 7C#!*#l:.
Dis!#*si +- la a*&'i!-c!'*a %'l$#a*. L#s -s%aci#s aB*-#s -s!> ll-#s
+- l-'c#ci!#sJ -*i!*#ci!#s ) fi5*ia.
V. CONCLUSIONES
- 'a administracin del concentrado de protenas de pota (Dosidicus gigas) elaborado
en la 6,*'" no caus alteracin histolgica estructural en el hgado ni en los
ri0ones.
- 'a 9'1. del concentrado de protena de pota elaborado en la 6,*'" se encontr
por encima de -... mgEFg de peso corporal, caliicndose seg&n el 7istema <lobal
*rmonizado (!E%9), como G,o clasiicadoH (H,o t$icoH).
- El peso corporal como indicador de to$icidad se comport en ascenso y estu)o
dentro de los parmetros establecidos para la cur)a de crecimiento de la especie y
lnea de estudio.
- 'os ndices bioqumicos y hematolgicos no muestran dierencias entre los grupos
de e$perimentacin que puedan ser atribuidas al producto. En los casos en que se
maniestaron dierencias signiicati)as, los )alores obtenidos nunca se ale(aron de
los )alores normales descritos para la especie.
- 'a alteracin histolgica estructural en los pulmones de todos los grupos tratados,
incluido el control, no esta en relacin a to$icidad y no es un eecto dosis respuesta
a la ingesta del concentrado de protena de pota.
- 9e acuerdo con los resultados obtenidos, se puede concluir inalmente que la
administracin a dosis repetida del concentrado de protena de pota elaborado en la
6,*'", no produce alteraciones que puedan atribuirse a eectos t$icos en ratas.
VI. RECO.ENDACIONES
- Dealizar las e)aluaciones en otra especie.
- 7i se desea replicar el e$perimento analizar otros parmetros bioqumicos y
posibles lesiones sobre otros rganos.
- * raz de la demostracin de que el concentrado de protena de pota no presenta
caractersticas t$icas se recomienda iniciar in)estigaciones en la elaboracin
de nue)os productos en base al producto. Por e(emplo papillas, panes, ideos,
etc.
- Dealizar estudios de to$icidad en productos elaborados a partir del concentrado
de protena de pota.
VII. BIBLIOGRAFEA
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VIII. ANELOS
:.8
ANELO 1. INFOR.E DE LA PRUEBA PILOTO REALIZADA EN
RATAS Q RATONES
INTRODUCCION
El ensayo de to$icidad aguda que se realiz esta su(eto a la dosis m$ima que
pueda soportar el animal y tambi#n la orma de administracin. E$istieron incon)enientes
respecto a la preparacin de la solucin en base a concentrado de protena de pota a
administrar debido a su poca capacidad de solubilizacin en agua y suero isiolgico por lo
que se pudo e$perimentar, en tal sentido se procedi a preparar dosis ascendentes a las
concentraciones de :.J y -.J y se administro aleatoriamente a los animales de
e$perimentacin. En el presente ensayo no se encontr mortalidad debido al producto.
'a To$icidad aguda por lo general se deine como el cambio ad)erso que ocurren
inmediatamente o poco tiempo despu#s de una &nica o bre)e perodo de e$posicin a una
sustancia o sustancias o eectos ad)ersos que ocurren dentro de un corto tiempo de
administracin de una dosis &nica de una sustancia o habida cuenta de dosis m&ltiples
dentro de las -2 horas.
O5O-!i<# G--*al
9einir los parmetros a utilizar en la in)estigacin.
O5O-!i<#s Es%-c(fic#s
o 9eterminar la 7eleccin de la 9osis.
o 9eterminar la cantidad m$ima a administrar a los animales.
o 9eterminar el "#todo a utilizar.
:.3
.ATERIALES Q .ETODOS
LUGAR DE EJECUCIN
'a prueba piloto se lle) a cabo en el >ioterio de la 5acultad de [ootecnia de la
6ni)ersidad ,acional *graria 'a "olina.
.ATERIA PRI.A
En el presente traba(o se utiliz como materia prima el concentrado de protena de
pota (Dosidicus gigas), elaborada por la 5acultada de Pesquera de la 6,*'".
.ETODOS DE ANGLISIS Q PROCEDI.IENTO
P*-%a*aci +- la s#l'ci s!#cI +-l C#c-!*a+# +- P*#!-(as +- P#!a al 1= 0
) 2=0
7e procedi a preparar soluciones stocF del %oncentrado de Protena de Pota (%PP)
al :.J inicialmente y luego al -.J. Para ello se peso :. -. gramos del %oncentrado de
Protena de Pota, en una balanza analtica, posteriormente, se diluyo en un )aso de prueba
con agua bidestilada, en razn de :.. ml. !bteniendo se una solucin stocF pE) de %PP al
:.J P -.J.
Esa)# +- la !#"ici+a+ a?'+a +-l c#c-!*a+# +- %*#!-(a +- %#!a
a: P*'-5a 1 c# *a!#-s
Para este ensayo, se traba(o con :. ratones albinos de /2.8 a -.- g de peso
adquiridos en el bioterio de la 5acultad de [ootecnia de la 6,*'". *ntes del ensayo se
mantu)o -2 horas a los animales con agua ad libitium, y se procedi a clasiicarlo en /
grupos de / ratones cada uno, y un ratn control.
::.
7e peso a cada animal, para calcular su dosiicacin, y dierenciacin indi)idual de
acuerdo a lo siguiente; <rupo :; /1.. mgE=gI <rupo -; 21.. mgE=gI <rupo /; 41..
mgE=g y <rupo 2; %ontrol.
'a mortalidad se e)alu, a :. minutos, /. minutos, : hora y -2 horas, despu#s de la
administracin del concentrado de protena de pota.
5: P*'-5a 2 c# *a!as
Para este ensayo, se traba(o con :. ratas albinas de 14.18 a :..2- g de peso
adquiridas en el bioterio de la 5acultad de [ootecnia de la 6,*'". *ntes del ensayo se
mantu)o -2 horas a los animales con agua ad libitium, y se procedi a clasiicarlo en 1
grupos de - ratones cada uno.
7e peso a cada animal, para calcular su dosiicacin, y dierenciacin indi)idual de
acuerdo a lo siguiente; <rupo :; 2... mgE=gI <rupo -; 21.. mgE=gI <rupo /; 1...
mgE=g I <rupo 2; 11.. mgE=g y <rupo 1; 4... mgE=g.
'a mortalidad se e)alu, a :. minutos, /. minutos, : hora y -2 horas, despu#s de la
administracin del concentrado de protena de pota.
RESULTADOS Q DISCUSION
a: PRUEBA 1 CON RATONES
7C# s#l'ci s!#cI al 1=0 +-l c#c-!*a+# +- %*#!-(a +- %#!a:
G*'%# 1
Datn 9osis
(mgE=g)
9osiicacin
( ml.)
Peso
( g.)
"ortalidad J
"ortalidad
: /1.. .,42 /4,4 .E/ .
- /1.. .,13 //,3 .E/ .
/ /1.. .,4- /1,3 .E/ .
:::
G*'%# 2
Datn 9osis
(mgE=g)
9osiicacin
( ml.)
Peso
( g.)
"ortalidad J
"ortalidad
2 21.. .,?/ /-,4 .E/ .
1 21.. .,?/ /-,? .E/ .
4 21.. .,?4 /2,: .E/ .
G*'%# 1
Datn 9osis
(mgE=g)
9osiicacin
( ml.)
Peso
( g.)
"ortalidad J
"ortalidad
? 41.. :,:? /4,- .E/ .
8 41.. :,-? /3,/ .E/ .
3 41.. :,.8 //,2 .E/ .
G*'%# 2 7C#!*#l:
Datn 9osis
(mgE=g)
9osiicacin
( ml.)
Peso
( g.)
"ortalidad J
"ortalidad
:. . . // ,! .
7e realiz el ensayo con una solucin stocF de concentrado de protena de pota al
:.J, y se obser) que no hubo ning&n incon)eniente en el momento de la administracin
por )a oral del producto. 7e calculo la dosis seg&n el peso de cada animal.
'a cnula empleada para la administracin oral de la solucin stocF del concentrado de
protena de pota debera ser rgida y de un calibre apropiado de tal manera que no sea un
actor de error en el momento de administrar el producto y ocasionar una lesin o muerte al
animal.
5: PRUEBA 2 CON RATAS
7C# s#l'ci s!#cI al 2=0 +-l c#c-!*a+# +- %*#!-(a +- %#!a:
G*'%# 1
::-
Data 9osis
(mgE=g)
9osiicacin
( ml.)
Peso
( g.)
"ortalidad J
"ortalidad
: 2... :.- /4,4 .E- .
- 2... :.2 //,3 .E- .
G*'%# 2
Data 9osis
(mgE=g)
9osiicacin
( ml.)
Peso
( g.)
"ortalidad J
"ortalidad
/ 21.. :.. 21.- .E- .
2 21.. :.: 23./ .E- .
G*'%# 1
Data 9osis
(mgE=g)
9osiicacin
( ml.)
Peso
( g.)
"ortalidad J
"ortalidad
1 1... :.8 ?-.1 .E- .
4 1... :.1 13./ .E- .
G*'%# 2
Data 9osis
(mgE=g)
9osiicacin
( ml.)
Peso
( g.)
"ortalidad J
"ortalidad
? 11.. :.1 12.1 .E- .
8 11.. :.: /3.- .E- .
G*'%# @
Data 9osis
(mgE=g)
9osiicacin
( ml.)
Peso
( g.)
"ortalidad J
"ortalidad
3 4... :.4 12.. .E- .
:. 4... :.8 4:.2 .E- .
7eg&n la %omisin de las %omunidades Europeas (-..8) se0ala que 'a especie idnea
para el estudio de to$icidad es la rata, si bien pueden emplearse otras especies de roedores
como el ratn. Dazn por la cual traba(amos en esta segunda prueba con la rata. Pero se
obser) que el estudio de la in)estigacin inal iba a durar 3. das, por lo tanto si bien al
inicio no iba a )er problemas con los animales con respecto a la administracin de las
dosiicaciones seg&n pasarn las semanas los animales iban a crecer y ganar peso por lo
tanto las dosiicaciones iban a aumentar en )olumen (m'). 'as soluciones podran alcanzar
)alores encima de 2 m' y podramos tener problemas con la recepcin del producto razn
por la cual se decidi preparar una solucin stocF al -.J para poder utilizar menos
::/
producto (no ue muy espeso) y reducir el )olumen de dosiicacin del concentrado de
protena de pota. Dealizada la administracin no presentaron problemas.
'os estudios de to$icidad aguda cuyo ob(eti)o es determinar el potencial t$ico de
una sustancia qumica tras una sola e$posicin. 'a clasiicacin de to$icidad aguda por
)a oral seg&n la 9'1. los clasiica en cuatro grupo; <rupo + "uy t$ica (9'
1.
k -1
mgE=g)I <rupo ++ T$ica (9'
1.
k -1. mgE=g)I <rupo +++ ,oci)a (9'
1.
k -... mgE=g)
y <rupo +B 7in to$icidad aguda (9'
1.
l 1... mgE=g). 9e dichos datos podramos decir
que el concentrado de protena de pota, al no causar muertes, en ni)eles encima de los
1... mgE=g. ,o presenta to$icidad aguda.
CONCLUSIONES DE LA PRUEBA PILOTO
:. 9e los resultados obtenidos se plantea realizar un Estudio de To$icidad con 9osis
Depetidas. El ob(eti)o de este estudio recomendado por la !E%9 (:338) es conocer los
eectos de las sustancias en animales de e$perimentacin tras administracin de dosis
repetidas y posible e$trapolacin al hombre. 7e plantea que dicho estudio sea de un
perodo de e$posicin de 3. das.
-. 'as condiciones que plantea la !E%9 (:338) para este tipo de estudios son; a) 2
lotes de animales b) / ni)eles de dosis (una que produzca to$icidad, una intermedia
y otra que sea ligeramente t$ica) c) administracin y obser)acin diaria. Es por ello
que se plantea para la in)estigacin inal 2 grupos; <rupo + (1.. mgEFg), <rupo ++
(:... mgEFg), <rupo +++ (-... mgEFg) y grupo +B (control).
::2
ANELO 2. RESULTADOS BIOSUE.ICOS Q 3E.ATOLGICOS INICIALES 7DATOS BASALES:
Al5'$ia C*-a!iia TGP 35 3!# L-'c#ci!#s A5as!#a+#s S-?$-!a+#s .##ci!#s E#sifil#s Basfil#s Lif#ci!#s
N[ Ra!a S-"# +nicio +nicio +nicio +nicio +nicio +nicio +nicio +nicio +nicio +nicio +nicio +nicio
: " /.4 :.: 8.. :2.1 22.. 1/.... ... -... ... :.. ... ?3..
- " /.4 :.: :/.. :1.1 2?.. 4..... :.. -?.. 2.. ... ... 48..
/ " /.2 :.. ?.. :4.- 23.. 42.... ... -4.. :.. ... ... ?/..
2 " /.8 :.- :2.. :2.3 21.. 4-.... :.. --.. ... :.. ... ?4..
1 " 2.. :.. 1.. :2.1 22.. 4/.... /.. //.. ... ... ... 42..
4 " /.3 :.- 2.. :1.1 2?.. 42.... :.. /-.. ... ... ... 4?..
? C /.8 :.- 4.. :2.3 21.. 4-1... ... -?.. ... ... ... ?/..
8 C /.3 :./ 4.. :2.3 21.. 4.1... :.. -4.. /.. :.. ... 43..
3 C /.? :./ 4.. :1.- 24.. 4..... /.. -3.. ... ... ... 48..
:. C 2.. :.: 2.. :2.1 22.. 18.... -.. -3.. ... ... ... 43..
/.8 :.: ?./ :1.: 21.4 4.?... :.- -?.: ..8 ../ ... ?..4
:: " /.2 :.. 4.. :1.1 2?.. 4-.... ... -1.. :.. ... ... ?2..
:- " 2.. :.. 2.. :1.1 2?.. 4:.... -.. -... :.. :.. ... ?4..
:/ " /.? :.- 1.. :1.- 24.. 42.... ... /... ... ... ... ?...
:2 " 2.. :.- /.. :/.3 2-.. 42.... ... --.. ... ... ... ?8..
:1 C 2.- :.2 ?.. :/.3 2-.. 4:.... ... :2.. :.. ... ... 81..
:4 C /.3 :.: 4.. :1.- 24.. 4/.... ... :1.. -.. ... ... 8/..
:? C 2.. :./ 1.. :1.1 2?.. 18.... ... 2:.. ... ... ... 13..
:8 C 2.. :./ ?.. :1.- 24.. 4..... ... -... :.. ... ... ?3..
:3 C /.1 :./ 1.. :?.1 1/.. 14.... ... /-.. :.. ... ... 4?..
-. C 2.. :./ 3.. :2.1 22.. 4/.... ... -8.. ... -.. ... ?...
/.3 :.- 1.? :1.- 24.. 4:-... ..- -2.? ..? ../ ... ?2.:
-: " /.? :.: 1.. :1.1 2?.. 4..... ... 11.. :.. -.. ... 2-..
-- " /.? :./ ::.. :1.8 28.. 4-.... :.. -/.. /.. ... ... ?/..
-/ " /.? :.2 4.. :1.- 24.. 4.1... :.. /2.. :.. ... ... 42..
-2 " /.? :.. 1.. :1.- 24.. 1?.... :.. :3.. :.. ... ... 8...
-1 C /.8 :.4 1.. :2.- 2/.. 48.... ... 1-.. ... ... ... 28..
-4 C /.3 :.: 1.. :1.1 2?.. 131... :.. -1.. ... :.. ... ?/..
-? C /.4 :.2 :... :1.8 28.. 4:.... ... -1.. -.. ... ... ?/..
-8 C /.1 :./ /.. :/.3 2-.. 18.... ... /2.. -.. ... ... 42..
-3 C /.1 :./ 2.. :/.- 2... 1/.... ... /-.. ... ... ... 48..
/. C /.8 :./ 4.. :2.3 21.. 4:.... -.. /... :.. :.. ... 44..
/.? :./ 4.. :2.3 21.- 4..... ..4 /-.3 :.: ..2 ... 41.:
1: " /.. :./ 2.. :1.. 24.. ?4.... -.. --.. /.. :.. ... ?-..
1- " /.8 ..3 3.. :4.3 1..? ?/.... :.. -1.. -.. :.. ... ?:..
1/ " -.8 :.. /.. :2.8 22.. 13.... :.. /2.. /.. :.. ... 4:..
12 " /.- :.: ::.. :4.. 23.. 48.... -.. :3.. /.. :.. ... ?1..
11 " /.. :./ 3.. -:.. 41.. 43.... ... 2/.. -.. ... ... 11..
14 " -.? ..8 ?.. :2.1 2/.4 8/.... ... 2... /.. -.. ... 11..
1? C /.- :./ 1.. -:.1 42.1 3-.... ... -3.. 2.. ... ... 4?..
18 C /.- :.2 8.. :1.4 2?.. ?8.... ... //.. -.. ... ... 41..
13 C /./ :.- :-.. :1.. 21.. 82.... ... //.. /.. :.. ... 4/..
4. C /.. :.- :... :4./ 23.. ?:.... :.. 2:.. /.. :.. ... 12..
/.: :.- ?.8 :4.? 1..2 ?1/... ..? /:.3 -.8 ..8 ... 4/.8











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PD!"E9+!
PD!"E9+!
BIOSUI.ICOS 3E.ATOLOGICOS














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::1
ANELO 1. RESULTADOS BIOSUE.ICOS Q 3E.ATOLGICOS FINALES 78= DEAS TRATA.IENTO:
Al5&"ina Creatinina TGP )5 )to Le&cocitos A5astona4os -e"enta4os Monocitos E#sifil#s Basfil#s Lin6ocitos
N7 Rata :inal :inal :inal :inal :inal :inal :inal :inal :inal :inal :inal :inal
1 ;.2 1.; <.0 19.0 92.0 =500.0 1.0 >9.0 1.0 1.0 0.0 2;.0
2 ;.> 1.; 12.0 19.2 9;.0 >?00.0 1.0 29.0 0.0 0.0 0.0 >5.0
; ;.0 1.5 12.0 19.2 9;.0 ?>50.0 2.0 2;.0 1.0 0.0 0.0 >9.0
9 ;.5 1.2 11.0 1;.2 90.0 ?<00.0 1.0 ;9.0 0.0 0.0 0.0 =5.0
5 ;.> 1.2 1;.0 1;.2 90.0 ?>00.0 1.0 ;2.0 1.0 0.0 0.0 ==.0
= 9.0 1.; ?.5 19.5 99.0 >900.0 5.0 22.0 >.0 0.0 0.0 ==.0
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D. estn$ar 0.: 0.1 1.; 0.= 1.< /90.0 1.= 1/.; (.< 0.: 0.0 1/.:
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2 ;.< 1.2 =.0 15.? 9?.0 ><50.0 1.0 22.0 9.0 0.0 0.0 >;.0
; ;.< 1.1 1>.0 15.5 9>.0 ?200.0 1.0 ;1.0 2.0 0.0 0.0 ==.0
9 9.0 1.5 11.0 15.2 9=.0 >?00.0 2.0 ;5.0 0.0 0.0 0.0 =;.0
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9 ;.< 1.; 10.0 19.2 9;.0 >=50.0 0.0 22.0 0.0 0.0 0.0 >?.0
5 ;.9 1.; 1;.0 1=.2 9<.0 ?500.0 2.0 ;;.0 1.0 1.0 0.0 =;.0
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Des! estn$ar 0.( 0.( (.: 0.< (.( 110:.: 1.1 (0.; 1.0 0.; 0.0 ((.0
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; ;.< 1.; <.9 15.? 9?.0 10000.0 0.0 2>.0 1.0 0.0 0.0 >2.0
9 ;.? 1.2 ?.1 15.? 9?.0 =>00.0 2.0 1>.0 0.0 0.0 0.0 ?1.0
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D. estn$ar 0.8 0.( 1.: 0.; (.8 1:89.( 1.= =.( (.1 0.0 0.0 =.;
3E.ATOLOGICOS





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BIOSUI.ICOS
::4
ANELO 2. INCRE.ENTO DE PESO CORPORAL
N[ Ra!a Trat :\ da 6ltimo da XAXo (J)
: T: /...4 /?../ -/.-J
- T: -34.- /32.. //..J
/ T: -?4.1 //3.: --.4J
2 T: /.-.8 /88.4 -8./J
1 T: -12.3 /--.2 -4.1J
4 T: -?2.1 /4/.2 /-.2J
? T: -:2.- -28.? :4.:J
8 T: -//.3 -4/.? :-.?J
PD!"E9+! 298.2 119.1 22.80
9es) estndar 12.@ @2.8 A.20
: T- /.?.2 /4?.- :3.1J
- T- -32.. /?/.: -4.3J
/ T- -3..- /11.? --.4J
2 T- -8/.2 /43./ /../J
1 T- -1-.- -?4.2 3.4J
4 T- -23.3 -48.8 ?.4J
? T- --/.- -2:.2 8.-J
8 T- -/?.. -?4.- :4.1J
PD!"E9+! 29A.2 119.= 1F.10
9es) estndar 1=.@ @@.1 F.A0
: T/ -81.? //2./ :?..J
- T/ -4:.. /1-./ /1..J
/ T/ -33.? //4.: :-.:J
2 T/ -/..? -2/.4 1.4J
1 T/ -.3.. -/3.- :2.2J
4 T/ -22./ -8/.4 :4.:J
? T/ --2.4 -18.: :2.3J
8 T/ -:4.: -22.1 :/.:J
PD!"E9+! 229.2 2F9.@ 19.10
9es) estndar 11.= 2A.2 F.20
: T2 /.-.3 /?..4 --.2J
- T2 -32.8 /2?.3 :8..J
/ T2 /2-.8 2/1.. -4.3J
2 T2 /.1.. /44.4 -..-J
1 T2 /:1.2 222.. 2..8J
4 T2 /:4./ 221.. 2..?J
? T2 -/3.3 -?:.: :/..J
8 T2 -2?./ -?8.4 :-.?J
PD!"E9+! 28@.9 198.8 2@.10
9es) estndar 1@.1 98.A 110





















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200
220
240
260
280
300
320
340
360
380
1 7 14 21 28 35 42 49 56
PESO (g)
DIASDURANTEEL TRATAMIENTO
ANELO @. VARIACION DEL PESO CORPORAL 7?: DE
LAS RATAS
Grupo I
Grupo II
Grupo III
Grupo IV (Control)
::8
ANELO 9. FOTOS DE ELTRACCIN DE LA SANGRE DE LAS RATAS
PARA LOS ANGLISIS BIOSUE.ICOS Q 3E.ATOLGICOS

F#!#?*af(a +-l %*#c-s# +- a+#*$-ci$i-!# +- las *a!as c# B!-*.
F#!#?*af(a +- la E"!*acci +- $'-s!*a +- sa?*- +-l s-# <-#s# #*5i!al. El
ai$al s- *-c'%-*a *>%i+a$-!- +-l a+#*$-ci$i-!#.


::3
F#!#?*af(a +- las c>'las c# 6-%a*ia 7-<i!a la c#a?'laci: c#!-i-+# la
sa?*- +- '# +- l#s ?*'%#s !*a!a+#s 7$'-s!*a +- +i-4 *a!as:.
F#!#?*af(a +-l i<-s!i?a+#* <-*ifica+# &'- i?'a $'-s!*a s- 6a)a
c#a?'la+# ) la ca!i+a+ a+-c'a+a +- $'-s!*a +- sa?*-.


:-.
ANELO A
EVALUACIN ESTADESTICA DEL INCRE.ENTO DE PESO
A: A>lisis +- Va*ia4a +-l Ic*-$-!# +- P-s#
F'-!- G*a+#s +-
Li5-*!a+
S'$a +-
C'a+*a+#s
C'a+*a+#
.-+i#
F
Calc'la+#
F
Ta5'la*
Si?ificacia
Tratamientos / 24..82:8.3 :1/.4:/3/4 :.3. -.31 n.s.
Error E$perimental -8 --42.1?/44- 8..8??4/:
Total /: -?-1.2:12?-
%.B.J; -/.4J
` 1J
C#$%a*aci +- las $-+ias +- !*a!a$i-!# $-+ia!- la %*'-5a +- T'I-) +-l Ic*-$-!#
+- P-s#
T*a!a$i-!# .-+ias A?*'%aci +- T'I-)
T1 -2./42 *
T2 -2./-2 *
T2 :?.4/1 *
T1 :4..2: *
"edias con la misma letra no presentan dierencias signiicati)as.
L-)-+a,
T1 7G*'%# I K @==$?CU?:
T2 7G*'%# II K 1===$?CU?:
T1 7G*'%# III K 2===$?CU?:
T2 7G*'%# IV K C#!*#l:
Dunnett's comparisons with a control
Family error rate = 0.05
Individual error rate = 0.0193
Critical value = .!"
Control = level #$!% o& C1
Intervals &or treatment mean minus control mean
'evel 'ower Center (pper ))))*)))))))))*)))))))))*)))))))))*)))))
$1 )11.1+ 0.0!0 11.0+ #))))))))))))),)))))))))))))%
$ )1-."5! )+.+"9 !.!-- #))))))))))))),)))))))))))))%
$3 )19.!!" )"." .""3 #))))))))))))),)))))))))))))%
))))*)))))))))*)))))))))*)))))))))*)))))
)1+.0 )".0 0.0 ".0
:-:
:--
ANELO F
EVALUACIN ESTADESTICA DE LA VARIACION SE.ANAL DEL PESO
CORPORAL DE LAS RATAS
A: P-s# iicial 7+(a 1:
C'a+*# ANVA - -l A>lisis Es!a+(s!ic# %a*a -l %-s# iicial 7%*i$-* +(a:
F'-!- G*a+#s +-
Li5-*!a+
S'$a +-
C'a+*a+#s
C'a+*a+#
.-+i#
F
Calc'la+#
F
Ta5'la*
Si?ificacia
Tratamientos / 44-. --.? -..1 -.88 n.s.
Error E$perimental /1 /?4:: :.?1
Total /8 22-/:
%.B.J; :-.--J
` 1J
C#$%a*aci +- las $-+ias +- !*a!a$i-!# $-+ia!- la %*'-5a +- T'I-) %a*a P-s# iicial
T*a!a$i-!# .-+ias A?*'%aci +- T'I-)
T2 -88.4/ *
T2 -43.?. *
T1 -41.:8 *
T1 -1:.4- *
"edias con la misma letra no presentan dierencias signiicati)as.
P*'-5a D'-! %a*a -l P-s# iicial,
Dunnett's comparisons with a control
Family error rate = 0.05
Individual error rate = 0.0195
Critical value = .!5
Control = level #$!% o& C1
Intervals &or treatment mean minus control mean
'evel 'ower Center (pper *)))))))))*)))))))))*)))))))))*)))))))))
$1 )+0.35 )3.!5 13.!! #)))))))))))))),)))))))))))))%
$ )55."3 )1".93 1-.9+ #))))))))))))),))))))))))))))%
$3 )-3.91 )3-.01 )0.1 #)))))))))))))),))))))))))))))%
*)))))))))*)))))))))*)))))))))*)))))))))
)-5 )50 )5 0
:-/
G,o hay dierencia signiicati)a entre el Tratamiento T2 (%ontrol) con respecto a los
tratamientos T: (1..mgE=g) y T- (:...mgE=g), pero si e$iste dierencia signiicati)a con el
tratamiento T/ (-...mgE=g)H.
B: P-s# S-$aa 1 7+(a A:
C'a+*# ANVA - -l A>lisis Es!a+(s!ic# %a*a -l %-s# +-l +(a A
F'-!- G*a+#s +-
Li5-*!a+
S'$a +-
C'a+*a+#s
C'a+*a+#
.-+i#
F
Calc'la+#
F
Ta5'la*
Si?ificacia
Tratamientos / 32// /:22 -.:? -.88 n.s.
Error E$perimental /1 1.?32 :21:
Total /8 4.--8
%.B.J; :/.?1J
` 1J
C#$%a*aci +- las $-+ias +- !*a!a$i-!# $-+ia!- la %*'-5a +- T'I-) %a*a %-s#
s-$aa 1
T*a!a$i-!# .-+ias A?*'%aci +- T'I-)
T2 /.-.2/ *
T1 -??./3 *
T2 -?:.32 *
T1 -18.48 *
"edias con la misma letra no presentan dierencias signiicati)as.
Dunnett's comparisons with a control
Family error rate = 0.05
Individual error rate = 0.0195
Critical value = .!5
Control = level #$!% o& C1
Intervals &or treatment mean minus control mean
'evel 'ower Center (pper )))))))))*)))))))))*)))))))))*)))))))))*
$1 )+-.91 )5.0! 1-."! #)))))))))))))),)))))))))))))%
$ )-3.3- )30.!9 1.3" #))))))))))))),)))))))))))))%
$3 )"+.+ )!3.-5 )0."- #))))))))))))),))))))))))))))%
)))))))))*)))))))))*)))))))))*)))))))))*
)+0 )30 0 30
:-2
G,o hay dierencia signiicati)a entre el Tratamiento T2 (%ontrol) con respecto a los
tratamientos T: (1..mgE=g) y T- (:...mgE=g), pero si e$iste dierencia signiicati)a con el
tratamiento T/ (-...mgE=g)H.
C: P-s# S-$aa 2 7+(a 12:
C'a+*# ANVA - -l A>lisis Es!a+(s!ic# %a*a -l %-s# +-l +(a 12
F'-!- G*a+#s +-
Li5-*!a+
S'$a +-
C'a+*a+#s
C'a+*a+#
.-+i#
F
Calc'la+#
F
Ta5'la*
Si?ificacia
Tratamientos / :/81. 24:? -.-2 -.88 n.s.
Error E$perimental /1 ?-.8. -.13
Total /8 813/.
%.B.J; :1.88J
` 1J
C#$%a*aci +- las $-+ias +- !*a!a$i-!# $-+ia!- la %*'-5a +- T'I-)
T*a!a$i-!# .-+ias A?*'%aci +- T'I-)
T2 /:4.-- *
T1 -83.4. *
T2 -?2.:? *
T1 -41.?2 *
"edias con la misma letra no presentan dierencias signiicati)as.
Dunnett's comparisons with a control
Family error rate = 0.05
Individual error rate = 0.0195
Critical value = .!5
Control = level #$!% o& C1
Intervals &or treatment mean minus control mean
'evel 'ower Center (pper )))))))))*)))))))))*)))))))))*)))))))))*
$1 )--.-0 )+.+ !.!5 #))))))))))))),))))))))))))))%
$ )93.13 )!.05 9.0 #)))))))))))))),))))))))))))))%
$3 )101.5+ )50.!" 0.59 #)))))))))))))),)))))))))))))%
)))))))))*)))))))))*)))))))))*)))))))))*
)-0 )35 0 35
:-1
G,o hay dierencia signiicati)a entre el Tratamiento T2 (%ontrol) con respecto a los
tratamientos T: (1..mgE=g), T- (:...mgE=g) y T/ (-...mgE=g)H.
D: P-s# S-$aa 1 7+(a 21:
C'a+*# ANVA - -l A>lisis Es!a+(s!ic# %a*a -l %-s# +-l +(a 12
F'-!- G*a+#s +-
Li5-*!a+
S'$a +-
C'a+*a+#s
C'a+*a+#
.-+i#
F
Calc'la+#
F
Ta5'la*
Si?ificacia
Tratamientos / :3/:1 42/8 -.12 -.88 n.s.
Error E$perimental /1 88?.. -1/2
Total /8 :.8.:2
%.B.J; :?./8J
` 1J
C#$%a*aci +- las $-+ias +- !*a!a$i-!# $-+ia!- la %*'-5a +- T'I-)
T*a!a$i-!# .-+ias A?*'%aci +- T'I-)
T2 /-?.3. *
T1 -88.2- *
T2 -?8.?- *
T1 -4?.2/ *
"edias con la misma letra no presentan dierencias signiicati)as.
Dunnett's comparisons with a control
Family error rate = 0.05
Individual error rate = 0.0195
Critical value = .!5
Control = level #$!% o& C1
Intervals &or treatment mean minus control mean
'evel 'ower Center (pper )))*)))))))))*)))))))))*)))))))))*))))))
$1 )9+.1! )39.!" 1-.1" #))))))))))))))),)))))))))))))))%
$ )105."! )!9.1" -.!" #))))))))))))))),)))))))))))))))%
$3 )11-.13 )+0.!- )3."1 #))))))))))))))),)))))))))))))))%
)))*)))))))))*)))))))))*)))))))))*))))))
)105 )-0 )35 0
:-4
G,o hay dierencia signiicati)a entre el Tratamiento T2 (%ontrol) con respecto a los
tratamientos T: (1..mgE=g) y T- (:...mgE=g), pero si e$iste dierencia signiicati)a con el
tratamiento T/ (-...mgE=g)H.
E: P-s# S-$aa 2 7+(a 2F:
C'a+*# ANVA - -l A>lisis Es!a+(s!ic# %a*a -l %-s# +-l +(a 12
F'-!- G*a+#s +-
Li5-*!a+
S'$a +-
C'a+*a+#s
C'a+*a+#
.-+i#
F
Calc'la+#
F
Ta5'la*
Si?ificacia
Tratamientos / :?33- 133? -.-. -.88 n.s.
Error E$perimental /1 3114: -?/.
Total /8 ::/11/
%.B.J; :?.1-J
` 1J
C#$%a*aci +- las $-+ias +- !*a!a$i-!# $-+ia!- la %*'-5a +- T'I-)
T*a!a$i-!# .-+ias A?*'%aci +- T'I-)
T2 ///.84 *
T1 -33.1? *
T2 -88.:8 *
T1 -?2.43 *
"edias con la misma letra no presentan dierencias signiicati)as.
Dunnett's comparisons with a control
Family error rate = 0.05
Individual error rate = 0.0195
Critical value = .!5
Control = level #$!% o& C1
Intervals &or treatment mean minus control mean
'evel 'ower Center (pper )))))))))*)))))))))*)))))))))*)))))))))*
$1 )93.09 )3!.9 !.5 #))))))))))))),))))))))))))))%
$ )10!.!" )!5.+" 13.13 #)))))))))))))),)))))))))))))%
$3 )11-.9- )59.1- )0.3+ #))))))))))))),))))))))))))))%
)))))))))*)))))))))*)))))))))*)))))))))*
)"0 )!0 0 !0
:-?
G,o hay dierencia signiicati)a entre el Tratamiento T2 (%ontrol) con respecto a los
tratamientos T: (1..mgE=g) y T- (:...mgE=g), pero si e$iste dierencia signiicati)a con el
tratamiento T/ (-...mgE=g)H.
:-8
F: P-s# S-$aa @ 7+(a 1@:
C'a+*# ANVA - -l A>lisis Es!a+(s!ic# %a*a -l %-s# +-l +(a 12
F'-!- G*a+#s +-
Li5-*!a+
S'$a +-
C'a+*a+#s
C'a+*a+#
.-+i#
F
Calc'la+#
F
Ta5'la*
Si?ificacia
Tratamientos / -..:2 44?: -.-- -.88 n.s.
Error E$perimental /1 :.1.48 /..-
Total /8 :-1.8-
%.B.J; :8.-/J
` 1J
C#$%a*aci +- las $-+ias +- !*a!a$i-!# $-+ia!- la %*'-5a +- T'I-)
T*a!a$i-!# .-+ias A?*'%aci +- T'I-)
T2 //8.3. *
T1 /.:.// *
T2 -88.1/ *
T1 -??.2? *
"edias con la misma letra no presentan dierencias signiicati)as.
Dunnett's comparisons with a control
Family error rate = 0.05
Individual error rate = 0.0195
Critical value = .!5
Control = level #$!% o& C1
Intervals &or treatment mean minus control mean
'evel 'ower Center (pper )*)))))))))*)))))))))*)))))))))*))))))))
$1 )99.3 )3-.5- !.09 #))))))))))))))),))))))))))))))%
$ )11.03 )50.3- 11.9 #)))))))))))))),)))))))))))))))%
$3 )13.09 )+1.!3 0.3 #))))))))))))))),))))))))))))))%
)*)))))))))*)))))))))*)))))))))*))))))))
)10 )"0 )!0 0
G,o hay dierencia signiicati)a entre el Tratamiento T2 (%ontrol) con respecto a los
tratamientos T: (1..mgE=g), T- (:...mgE=g) y T/ (-...mgE=g)H.
:-3
G: P-s# S-$aa 9 7+(a 22:
C'a+*# ANVA - -l A>lisis Es!a+(s!ic# %a*a -l %-s# +-l +(a 12
F'-!- G*a+#s +-
Li5-*!a+
S'$a +-
C'a+*a+#s
C'a+*a+#
.-+i#
F
Calc'la+#
F
Ta5'la*
Si?ificacia
Tratamientos / -::./ ?./2 -.-: -.88 n.s.
Error E$perimental /1 :::1.- /:84
Total /8 :/-4.1
%.B.J; :8.2?J
` 1J
C#$%a*aci +- las $-+ias +- !*a!a$i-!# $-+ia!- la %*'-5a +- T'I-)
T*a!a$i-!# .-+ias A?*'%aci +- T'I-)
T2 /2/.?. *
T1 /.8.48 *
T2 -3/./. *
T1 -8..-2 *
"edias con la misma letra no presentan dierencias signiicati)as.
Dunnett's comparisons with a control
Family error rate = 0.05
Individual error rate = 0.0195
Critical value = .!5
Control = level #$!% o& C1
Intervals &or treatment mean minus control mean
'evel 'ower Center (pper ))*)))))))))*)))))))))*)))))))))*)))))))
$1 )9".5! )35.0 ".50 #))))))))))))))),)))))))))))))))%
$ )113.9 )50.!0 13.1 #)))))))))))))),)))))))))))))))%
$3 )1+.9" )+3.!+ 0.0+ #))))))))))))))),)))))))))))))))%
))*)))))))))*)))))))))*)))))))))*)))))))
)10 )"0 )!0 0
G,o hay dierencia signiicati)a entre el Tratamiento T2 (%ontrol) con respecto a los
tratamientos T: (1..mgE=g), T- (:...mgE=g) y T/ (-...mgE=g)H.
:/.
3: P-s# S-$aa A 7+(a 28:
C'a+*# ANVA - -l A>lisis Es!a+(s!ic# %a*a -l %-s# +-l +(a 12
F'-!- G*a+#s +-
Li5-*!a+
S'$a +-
C'a+*a+#s
C'a+*a+#
.-+i#
F
Calc'la+#
F
Ta5'la*
Si?ificacia
Tratamientos / ///-/ :::.8 /.-3 -.88 V
Error E$perimental /1 ::8.:2 //?-
Total /8 :1://?
%.B. J; :8.3:J
` 1J
V 9ierencia signiicati)a
C#$%a*aci +- las $-+ias +- !*a!a$i-!# $-+ia!- la %*'-5a +- T'I-)
T*a!a$i-!# .-+ias A?*'%aci +- T'I-)
T2 /1-.13 *
T1 /:/.3? *
T2 -31..2 *
T1 -?:./4 >
"edias con la misma letra no presentan dierencias signiicati)as.
Dunnett's comparisons with a control
Family error rate = 0.05
Individual error rate = 0.0195
Critical value = .!5
Control = level #$!% o& C1
Intervals &or treatment mean minus control mean
'evel 'ower Center (pper )))))))))*)))))))))*)))))))))*)))))))))*
$1 )103.9- )3".+ +.-3 #)))))))))))),))))))))))))%
$ )1.90 )5-.55 -."0 #)))))))))))),)))))))))))))%
$3 )1!+.5" )"1.3 )15."" #)))))))))))),))))))))))))%
)))))))))*)))))))))*)))))))))*)))))))))*
)100 )50 0 50
G,o hay dierencia signiicati)a entre el Tratamiento T2 (%ontrol) con respecto a los
tratamientos T: (1..mgE=g) y T- (:...mgE=g), pero si e$iste dierencia signiicati)a con el
tratamiento T/ (-...mgE=g)H.
:/:
I: P-s# S-$aa F 7+(a @9:
C'a+*# ANVA - -l A>lisis Es!a+(s!ic# %a*a -l %-s# +-l +(a 12
F'-!- G*a+#s +-
Li5-*!a+
S'$a +-
C'a+*a+#s
C'a+*a+#
.-+i#
F
Calc'la+#
F
Ta5'la*
Si?ificacia
Tratamientos / -881. 34:? -.?: -.88 n.s.
Error E$perimental /1 :-2/84 /112
Total /8 :1/-/4
%.B. J; :8.3?J
` 1J
V 9ierencia signiicati)a
C#$%a*aci +- las $-+ias +- !*a!a$i-!# $-+ia!- la %*'-5a +- T'I-)
T*a!a$i-!# .-+ias A?*'%aci +- T'I-)
T2 /1?..2 *
T1 /-:.:8 *
T2 /...11 *
T1 -8-.4: >
"edias con la misma letra no presentan dierencias signiicati)as.
Dunnett's comparisons with a control
Family error rate = 0.05
Individual error rate = 0.0195
Critical value = .!5
Control = level #$!% o& C1
Intervals &or treatment mean minus control mean
'evel 'ower Center (pper ))))))))*)))))))))*)))))))))*)))))))))*)
$1 )10.9+ )35."+ 31.3 #))))))))))))),))))))))))))%
$ )13.59 )5+.!9 10.+0 #))))))))))))),))))))))))))%
$3 )1!1.53 )-!.!3 )-.3! #)))))))))))),)))))))))))))%
))))))))*)))))))))*)))))))))*)))))))))*)
)100 )50 0 50
:/-
G,o hay dierencia signiicati)a entre el Tratamiento T2 (%ontrol) con respecto a los
tratamientos T: (1..mgE=g) y T- (:...mgE=g), pero si e$iste dierencia signiicati)a con el
tratamiento T/ (-...mgE=g)H.
ANELO 8
EVALUACIN ESTADESTICA DE LOS INDICADORES BIOSUE.ICOS
A: Al5/$ia
C'a+*# ANVA - -l A>lisis Es!a+(s!ic# %a*a Al5/$ia
F'-!- G*a+#s +-
Li5-*!a+
S'$a +-
C'a+*a+#s
C'a+*a+#
.-+i#
F
Calc'la+#
F
Ta5'la*
Si?ificacia
Tratamientos / ..4?2/??-3 ..--2?3-2/ -.8/ /..1 n.s.
Error E$perimental -- :.?1.-/8:. ...?3114-8
Total -1 -.2-24:1/8
%.B.J; ?.1:J
` 1J
C#$%a*aci +- las $-+ias +- !*a!a$i-!# $-+ia!- la %*'-5a +- T'I-) %a*a Al5/$ia
T*a!a$i-!# .-+ias A?*'%aci +- T'I-)
T2 /.3?:2 *
T2 /.?44? * >
T1 /.?-84 * >
T1 /.1:4? >
"edias con la misma letra no presentan dierencias signiicati)as.
P*'-5a D'-! %a*a la Al5/$ia,
Dunnett's comparisons with a control
Family error rate = 0.05
Individual error rate = 0.019-
Critical value = .5
Control = level #$!% o& C1
Intervals &or treatment mean minus control mean
'evel 'ower Center (pper )))))))))*)))))))))*)))))))))*)))))))))*
$1 )0.+59- )0.500 0.159- #))))))))))),)))))))))))%
$ )0.1900 0.0!" 0.5995 #)))))))))),))))))))))%
$3 )0.!39 )0.03"1 0.35+- #)))))))))),))))))))))%
)))))))))*)))))))))*)))))))))*)))))))))*
)0.35 0.00 0.35 0.-0
://
G,o hay dierencia signiicati)a entre el Tratamiento T2 (%ontrol) con respecto a los
tratamientos T: (1..mgE=g), T- (:...mgE=g) y T/ (-...mgE=g)H.
B: C*-a!iia
C'a+*# ANVA - -l A>lisis Es!a+(s!ic# %a*a C*-a!iia
F'-!- G*a+#s +-
Li5-*!a+
S'$a +-
C'a+*a+#s
C'a+*a+#
.-+i#
F
Calc'la+#
F
Ta5'la*
Si?ificacia
Tratamientos / ...14--?:: ...:8?2-/? ..1. /..1 n.s.
Error E$perimental -- ..8--4:3.1 .../?/3:??
Total -1 ..8?8824:1
%.B.J; :1.-8J
` 1J
C#$%a*aci +- las $-+ias +- !*a!a$i-!# $-+ia!- la %*'-5a +- T'I-) %a*a la C*-a!iia.
T*a!a$i-!# .-+ias A?*'%aci +- T'I-)
T2 :./... *
T1 :./... *
T1 :.-?:2 *
T2 :.:8// *
"edias con la misma letra no presentan dierencias signiicati)as.
C: T*asa$iasa 7TGP:
C'a+*# ANVA - -l A>lisis Es!a+(s!ic# %a*a T*asa$iasa 7TGP:
F'-!- G*a+#s +-
Li5-*!a+
S'$a +-
C'a+*a+#s
C'a+*a+#
.-+i#
F
Calc'la+#
F
Ta5'la*
Si?ificacia
Tratamientos / --.1.84334 ?.1.-8333 :.:: /..1 n.s.
Error E$perimental -- :28.8?2?4:3 4.?4?./24
Total -1 :?:./8/24:1
%.B.J; --.1:J
` 1J
C#$%a*aci +- las $-+ias +- !*a!a$i-!# $-+ia!- la %*'-5a +- T'I-) %a*a
T*asa$iasa 7TGP:
T*a!a$i-!# .-+ias A?*'%aci +- T'I-)
T2 :-.2-3 *
T1 :-./1? *
T1 :..3:? *
T2 :..-1. *
"edias con la misma letra no presentan dierencias signiicati)as.
L-)-+a,
T1 7G*'%# I K @==$?CU?:
:/2
T2 7G*'%# II K 1===$?CU?:
T1 7G*'%# III K 2===$?CU?:
T2 7G*'%# IV K C#!*#l:
:/1
ANELO 1=
EVALUACIN ESTADESTICA DE LOS INDICADORES 3E.ATOLGICOS
A: 3-$#?l#5ia
C'a+*# ANVA - -l A>lisis Es!a+(s!ic# %a*a 3-$#?l#5ia
F'-!- G*a+#s +-
Li5-*!a+
S'$a +-
C'a+*a+#s
C'a+*a+#
.-+i#
F
Calc'la+#
F
Ta5'la*
Si?ificacia
Tratamientos / ::.2-4334/2 /.8.8338?8 8.3/ /..1 (1J)
2.8- (:J)
V
VV
Error E$perimental -- 3./8-4:3.1 ..2-428-48
Total -1 -..8.34:1/8
%.B.J; 2./1J
` 1J o :J
V (` ...1) dierencia signiicati)a
VV (` ...:) hay dierencia altamente signiicati)a
C#$%a*aci +- las $-+ias +- !*a!a$i-!# $-+ia!- la %*'-5a +- T'I-) %a*a
3-$#?l#5ia 7(` ...:)
T*a!a$i-!# .-+ias A?*'%aci +- T'I-)
T2 :1.4... *
T2 :1.1... *
T1 :2.3-84 *
T1 :/.88// >
"edias con la misma letra no presentan dierencias signiicati)as.
P*'-5a D'-! %a*a la 3-$#?l#5ia,
Dunnett's comparisons with a control
Family error rate = 0.01
Individual error rate = 0.003-
Critical value = 3.!
Control = level #$!% o& C1
Intervals &or treatment mean minus control mean
'evel 'ower Center (pper ))))*)))))))))*)))))))))*)))))))))*)))))
$1 ).9399 )1.-1+- )0.!935 #))))))))),)))))))))%
$ )1.-"- )0.1000 1.0-"- #))))))))),)))))))))%
$3 )1."501 )0.+-1! 0.50-3 #)))))))),)))))))))%
))))*)))))))))*)))))))))*)))))))))*)))))
).! )1. 0.0 1.
G,o hay dierencia signiicati)a entre el Tratamiento T2 (%ontrol) con respecto a los
tratamientos T- (:...mgE=g) y T/ (-...mgE=g), pero si e$iste dierencia altamente
signiicati)a con el tratamiento T: (1..mgE=g)H.
:/4
B: 3-$a!#c*i!#
C'a+*# ANVA - -l A>lisis Es!a+(s!ic# %a*a 3-$a!#c*i!#
F'-!- G*a+#s +-
Li5-*!a+
S'$a +-
C'a+*a+#s
C'a+*a+#
.-+i#
F
Calc'la+#
F
Ta5'la*
Si?ificacia
Tratamientos / ::..:114??? /4.?:8113- 3./? /..1 (1J)
2.8- (:J)
V
VV
Error E$perimental -- 84.:3.2?4- /.3:??283
Total -1 :34./24:1/8
%.B. J; 2./4J
` 1J o :J
V (` ...1) dierencia signiicati)a
VV (` ...:) hay dierencia altamente signiicati)a
C#$%a*aci +- las $-+ias +- !*a!a$i-!# $-+ia!- la %*'-5a +- T'I-) %a*a 3-$a!#c*i!#
T*a!a$i-!# .-+ias A?*'%aci +- T'I-)
T2 2?./// *
T2 2?.... *
T1 21.:2/ *
T1 2-.... >
"edias con la misma letra no presentan dierencias signiicati)as.
P*'-5a D'-! %a*a la 3-$a!#c*i!#,
Dunnett's comparisons with a control
Family error rate = 0.01
Individual error rate = 0.003-
Critical value = 3.!
Control = level #$!% o& C1
Intervals &or treatment mean minus control mean
'evel 'ower Center (pper ))))))*)))))))))*)))))))))*)))))))))*)))
$1 )9.0!1 )5.333 )1.++ #)))))))))),)))))))))%
$ )3.90+ )0.333 3.39 #))))))))),)))))))))%
$3 )5.-+3 ).190 1.3" #))))))))),)))))))))%
))))))*)))))))))*)))))))))*)))))))))*)))
)-.0 )3.5 0.0 3.5
G,o hay dierencia signiicati)a entre el Tratamiento T2 (%ontrol) con respecto a los
tratamientos T- (:...mgE=g) y T/ (-...mgE=g), pero si e$iste dierencia altamente
signiicati)a con el tratamiento T: (1..mgE=g)H.
:/?
C: L-'c#ci!#
C'a+*# ANVA - -l A>lisis Es!a+(s!ic# %a*a L-'c#ci!#s
F'-!- G*a+#s +-
Li5-*!a+
S'$a +-
C'a+*a+#s
C'a+*a+#
.-+i#
F
Calc'la+#
F
Ta5'la*
Si?ificacia
Tratamientos / 4124.4.-/ -:8-.-..8 ..-: /..1 n.s.
Error E$perimental -- -/-:412?.4- :.11-3?.4-
Total -1 -/8?::1/.81
%.B.J; :-.88J
` 1J
C#$%a*aci +- las $-+ias +- !*a!a$i-!# $-+ia!- la %*'-5a +- T'I-) %a*a L-'c#ci!#s
T*a!a$i-!# .-+ias A?*'%aci +- T'I-)
T2 8-.?.: *
T1 8..8./ *
T1 ?8/1.? *
T2 ?8-1.. *
"edias con la misma letra no presentan dierencias signiicati)as.
D: A5as!#a+#s 7N-'!*fil#s O<--s:
C'a+*# ANVA - -l A>lisis Es!a+(s!ic# %a*a A5as!#a+#s
F'-!- G*a+#s +-
Li5-*!a+
S'$a +-
C'a+*a+#s
C'a+*a+#
.-+i#
F
Calc'la+#
F
Ta5'la*
Si?ificacia
Tratamientos / 4.--83/??/ -..?4/:-18 :.-- /..1 n.s.
Error E$perimental -- /?./.31-/8: :.43188?21
Total -1 2/.1/824:12
%.B.J; :3.18J
` 1J
C#$%a*aci +- las $-+ias +- !*a!a$i-!# $-+ia!- la %*'-5a +- T'I-) %a*a L-'c#ci!#s
T*a!a$i-!# .-+ias A?*'%aci +- T'I-)
T1 :.8/// *
T2 :.444? *
T1 :.-81? *
T2 ..1?:2 *
"edias con la misma letra no presentan dierencias signiicati)as.
:/8
E: S-?$-!a+#s 7N-'!*fil#s $a+'*#s:
C'a+*# ANVA - -l A>lisis Es!a+(s!ic# %a*a S-?$-!a+#s 7N-'!*fil#s:
F'-!- G*a+#s +-
Li5-*!a+
S'$a +-
C'a+*a+#s
C'a+*a+#
.-+i#
F
Calc'la+#
F
Ta5'la*
Si?ificacia
Tratamientos / ?8-./3:32: -4..?3?/:2 :.:. /..1 n.s.
Error E$perimental -- 1-/8.-4:3.1 -/8.:.-8:2
Total -1 4.-..41/824
%.B.J; -4.3-J
` 1J
C#$%a*aci +- las $-+ias +- !*a!a$i-!# $-+ia!- la %*'-5a +- T'I-) %a*a N-'!*#fil#s
T*a!a$i-!# .-+ias A?*'%aci +- T'I-)
T1 2..2-3 *
T1 /2.8// *
T2 -3.1?: *
T2 -4.... *
"edias con la misma letra no presentan dierencias signiicati)as.
F: Lif#ci!#s
C'a+*# ANVA - -l A>lisis Es!a+(s!ic# %a*a Lif#ci!#s
F'-!- G*a+#s +-
Li5-*!a+
S'$a +-
C'a+*a+#s
C'a+*a+#
.-+i#
F
Calc'la+#
F
Ta5'la*
Si?ificacia
Tratamientos / ?:-.8314.2 -/?.4/:848 ..3- /..1 n.s.
Error E$perimental -- 14?4.42-81? -18..-3--:
Total -1 4/83.1/824-
%.B.J; -1.--J
` 1J
C#$%a*aci +- las $-+ias +- !*a!a$i-!# $-+ia!- la %*'-5a +- T'I-) %a*a Lif#ci!#s
T*a!a$i-!# .-+ias A?*'%aci +- T'I-)
T2 2..2-3 *
T2 /2.8// *
T1 -3.1?: *
T1 -4.... *
"edias con la misma letra no presentan dierencias signiicati)as.
L-)-+a,
T1 7G*'%# I K @==$?CU?:
T2 7G*'%# II K 1===$?CU?:
T1 7G*'%# III K 2===$?CU?:
T2 7G*'%# IV K C#!*#l:
:/3
ANELO 11
EVALUACIN ESTADESTICA DEL PESO DE LOS RGANOS
A: P'l$#-s
C'a+*# ANVA - -l A>lisis Es!a+(s!ic# %a*a P'l$#-s
F'-!- G*a+#s +-
Li5-*!a+
S'$a +-
C'a+*a+#s
C'a+*a+#
.-+i#
F
Calc'la+#
F
Ta5'la*
Si?ificacia
Tratamientos / ..3/. ../:. :.?/ /.-2 n.s.
Error E$perimental :4 -.84- ..:?3
Total :3 /.?3:
%.B.J; -8.33J
` 1J
C#$%a*aci +- las $-+ias +- !*a!a$i-!# $-+ia!- la %*'-5a +- T'I-) %a*a l#s P'l$#-s
T*a!a$i-!# .-+ias A?*'%aci +- T'I-)
T1 :./14- *
T1 :.-:./ *
T2 ..38-. *
T2 ..?3:4 *
"edias con la misma letra no presentan dierencias signiicati)as.
B: 3(?a+#
C'a+*# ANVA - -l A>lisis Es!a+(s!ic# %a*a 3(?a+#
F'-!- G*a+#s +-
Li5-*!a+
S'$a +-
C'a+*a+#s
C'a+*a+#
.-+i#
F
Calc'la+#
F
Ta5'la*
Si?ificacia
Tratamientos / ..:4. ...1/ ../1 /.-2 n.s.
Error E$perimental :4 -.213 ..:12
Total :3 -.4:3
%.B.J; ::.8?J
` 1J
C#$%a*aci +- las $-+ias +- !*a!a$i-!# $-+ia!- la %*'-5a +- T'I-) %a*a -l 3(?a+#
T*a!a$i-!# .-+ias A?*'%aci +- T'I-)
T2 /.2//2 *
T1 /./:11 *
T2 /.-3/2 *
T1 /.:8:/ *
"edias con la misma letra no presentan dierencias signiicati)as.
:2.
C: RiN#-s
C'a+*# ANVA - -l A>lisis Es!a+(s!ic# %a*a RiN#-s
F'-!- G*a+#s +-
Li5-*!a+
S'$a +-
C'a+*a+#s
C'a+*a+#
.-+i#
F
Calc'la+#
F
Ta5'la*
Si?ificacia
Tratamientos / .../8. ...:-? ..88 /.-2 n.s.
Error E$perimental :4 ..-/.8 ...:22
Total :3 ..-488
%.B.J; :2.88J
` 1J
C#$%a*aci +- las $-+ias +- !*a!a$i-!# $-+ia!- la %*'-5a +- T'I-) %a*a l#s *iN#-s
T*a!a$i-!# .-+ias A?*'%aci +- T'I-)
T2 ..8/?8 *
T1 ..8//: *
T1 ..8--3 *
T2 ..?/:2 *
"edias con la misma letra no presentan dierencias signiicati)as.
L-)-+a,
T1 7G*'%# I K @==$?CU?:
T2 7G*'%# II K 1===$?CU?:
T1 7G*'%# III K 2===$?CU?:
T2 7G*'%# IV K C#!*#l:
:2:
ANELO 12
CONCLUSIONES DEL INFOR.E 3ISTOPATOLOGICO DEL .EDICO
DANIEL CARRERA
:2-
ANELO 11
CO.POSICIN NUTRICIONAL PARA ALI.ENTO DE RATAS
N'!*i-!-s Ali$-!# %a*a Ra!as
Ca*5#6i+*a!#s
7? C1== ? +- $'-s!*a #*i?ial:
9= - 92
E-*?(a T#!al
7Ucal C 1== ? +- $'-s!*a #*i?ial:
1@= - 19=
C-i4as T#!al-s
7? C1== ? +- $'-s!*a #*i?ial:
2 - @
G*asa C*'+a
7? C1== ? +- $'-s!*a #*i?ial:
1.= - 1.@
3'$-+a+
7? C1== ? +- $'-s!*a #*i?ial:
1= -11
P*#!-(a C*'+a
7? C1== ? +- $'-s!*a #*i?ial:
2= - 22
Fi5*a C*'+a
7? C1== ? +- $'-s!*a #*i?ial:
2.@ X 1.=
PROGRA.A DE INVESTIGACION Q PROQECCION SOCIAL EN ALI.ENTOS. UNAL.