Sunteți pe pagina 1din 97

IMUNOLOGIA TRANSPLANTULUI

IMUNOLOGIA TRANSPLANTULUI
ILEANA CONSTANTINESCU ILEANA CONSTANTINESCU
EDITURA UMF CAROL DAVILA EDITURA UMF CAROL DAVILA
2009 2009
1
2
PREFA
Atunci cnd m gndesc la o boal,
nu caut niciodat un leac pentru aceasta,
ci un miljoc de a o preveni.
LOUIS PASTEUR
Imunologia transplantului este o specialitate nou care i croiete drumul ntre
specialiti prin frumuseea abordrii noilor tehnologii de biologie molecular, prin
semnificaia rezultatelor i impactul acestora asupra deznodmntului transplantului.
Att genotiparea alelelor HLA ct i detecia i identificarea anticorpilor citotoxici
sunt investigaii imunologice de transplant care au nevoie de o interpretare extrem de
laborioas, iar expertiza imunologului este extrem de important n transplantul renal,
medular, cardiac, hepatic, pulmonar, pancreatic, etc.
Alturi de investigaiile imunologice pretransplant sunt foarte importante i
evalurile posttransplant care urmresc posibila apariie a reetului subclinic, apariia
neoplaziilor sau a altor complicaii imunologice legate de regimurile imunosupresoare
practicate, care sunt decisive n ceea ce privete evoluia pacienilor transplantai.
!entrul de Imunogenetic i "irusologie, #undeni, a fost nfinat n anul $%%% i are
ca domeniu de activitate imunologia transplantului, imunologia tumoral, diagnosticul
virusologic. Acest centru, este centru de referin metodologic n imunologia transplantului
pentru &omnia din anul $%%', n acelai an obinnd i acreditarea cu #ederaia
(uropean de Imunogenetic )(#I*. +eria acreditrilor a fost completat de acreditarea I+,
realizat n anul $%%-. .rin intermediul acestui centru, s/au organizat numeroase 0or1shop/
uri interne i internaionale, simpozioane, cursuri pentru toate centrele de imunogenetic din
ar i pentru comunitatea de transplant din (uropa.
.rin realizrile profesionale, centrul nostru, care este i primul centru de biologie
molecular n diagnosticul imunologiei de transplant din &omnia, are o activitate deosebit
de susinut pe toate tipurile de transplant care se efectueaz la noi n ar, monitoriznd
anual peste 2%%% de pacieni care au efectuat un transplant.
Avem sperana c aceast monografie va fi util tuturor rezidenilor care doresc s
aprofundeze aspectele imunologiei de transplant, de cercetare sau de practic clinic n
domeniul transplantologiei i s reprezinte o lucrare de referin pentru colegii notrii
imunologi din ntreaga ar.
Octombrie, 2009
Conf. r. I!e"n" Con#t"ntine#c$
3
ef$! Centr$!$i %e Im$no&enetic' i (ir$#o!o&ie, In#tit$t$! C!inic F$n%eni
irector$! e)"rt"ment$!$i %e *r"nt$ri i Cercet"re tiinific', U+F C"ro! ",i!"
4
CUPRINS CUPRINS
COMPLEXUL MAJOR DE
HISTOCOMPATIBILITATE.....................................................................................9
ORGANIZAREA GENELOR ANTIGENELOR LEUCOCITARE UMANE (HLA)
N COMPLEXUL MAJOR DE HISTOCOMPATIBILITATE (MHC)
..9
STRUCTURA MOLECULELOR
HLA
.13
STRUCTURA MOLECULELOR HLA DE CLASA
I13
STRUCTURA MOLECULELOR HLA DE CLASA A II-
A.14
EMERGENA DE NOI
ALELE
1!
LIN"AGE DISE#UILIBRIUM (LEG$TUR$ DEZECHILIBRAT$)
.1%
GENETICA
HLA
..1&
SEMNI'ICAIE
CLINIC$
...1&
METODE SEROLOGICE DE TIPIZARE
HLA
1(
TIPIZAREA HLA PRIN TESTUL DE
LIM'OCITOTOXICITATE.19
IZOLAREA
CELULELOR
.)*
PROTOCOL DE LUCRU PENTRU TESTUL LIM'OCITOTOXICIT$II DEPENDENTE DE
COMPLEMENT)1
+ARIABILITATEA REZULTATELOR DE TIPIZARE HLA
SEROLOGICE.))
TIPIZAREA HLA PRIN METODE DE BIOLOGIE
MOLECULAR$)3
5
INTRODUCERE
.)3
PRINCIPIILE METODELOR MOLECULARE DE LUCRU N
HISTOCOMPATIBILITATE..)!
AMPLI'ICAREA
GENELOR
..)%
GENOTIPAREA HLA
SSOP
)&
GENOTIPAREA HLA
SSP
)(
TIPIZAREA HLA BAZAT$ PE SEC+ENIERE (SBT)
3*
TEHNOLOGIA
MICROARRA,
3)
LIMITELE METODELOR DE BIOLOGIE
MOLECULAR$..34
E+ALUAREA ACURATEEI METODELOR DE TIPIZARE
HLA34
E+ALUAREA IMUNOLOGIC$ N TRANSPLANTUL
RENAL..........................................................................3!
STATUSUL CURENT AL TRANSPLANTULUI
RENAL...3!
'ACTORI DETERMINANI AI E+OLUIEI PE TERMEN
LUNG3%
E+ALUAREA ANTICORPILOR
CITOTOXICI
39
SCREENING-UL ANTICORPILOR CITOTOXICI PRIN METODA LIM'OCITOTOXICIT$TII DEPENDENTE DE
COMPLEMENT.39
SCREENING-UL ANTICORPILOR CITOTOXICI PRIN METODA
ELISA..39
IDENTI'ICAREA ANTICORPILOR CITOTOXICI PRIN METODA ELISA
.41
SCREENING-UL ANTICORPILOR CITOTOXICI PRIN METODA
LUMINEX.43
TESTUL
CROSSMATCH
..44
TESTUL CROSSMATCH PRIN METODA
LIM'OCITOTOXICIT$II4!
TESTUL CROSSMATCH PENTRU CELULA
T4!
6
TESTUL CROSSMATCH PENTRU CELULA
B4%
CROSSMATCH PRIN TEHNICA ELISA PENTRU CELULA T -I
B.4&
CROSSMATCH PRIN METODA
'LO.CITOMETRIEI.49
CROSSMATCHING PRIN TEHNOLOGIA
LUMINEX...............................................................................................................!*
CROSSMATCH-UL PENTRU
AUTOANTICORPI
!1
ALGORITMUL E+ALU$RII IMUNOLOGICE N TRANSPLANTUL RENAL CU DONATOR
+IU.!1
ALGORITMUL E+ALU$RII IMUNOLOGICE N TRANSPLANTUL RENAL CU DONATOR
CADA+RU..!)
E'ECTUL SURSEI DONATORULUI ASUPRA SUPRA+IEUIRII
ALOGRE'EI.............................................................................!!
MATCHING-UL IMUNOLOGIC/ CONCEPTUL DE MATCHING N TRANSPLANTUL
RENAL!&
TRANSPLANTURILE RENALE ABO
INCOMPATIBILE..!(
E+ALUAREA IMUNOLOGIC$ N TRANSPLANTUL
HEPATIC.......................................................................%)
COMPATIBILITATEA DONATOR 0 PRIMITOR N TRANSPLANTUL
HEPATIC.%4
BOALA ACUT$ DE GRE'$ CONTRA GAZD$ (G+HD) N TRANSPLANTUL
HEPATIC..%!
MONITORIZAREA PACIENTULUI POSTTRANSPLANT
HEPATIC.%%
E+ALUARE
IMUNOLOGIC$
%&
E+ALUAREA
+IRUSOLOGIC$
%&
E+ALUAREA IMUNOLOGIC$ N TRANSPLANTUL
MEDULAR......................................................................&3
STABILIREA COMPATIBILIT$II
HLA..&3
SELEC1IA DONATORULUI
NRUDIT
..&4
SELECIA DONATORULUI
NENRUDIT
..&4
7
SELECTIA DONATORULUI DIN BANCA DE S2NGE DIN CORDONUL
OMBILICAL..&%
APRECIEREA PROBABILIT$1II DE A G$SI UN DONATOR
NENRUDIT&%
GENELE "IR 3I TRANSPLANTUL DE CELULE STEM
HEMATOPOETICE..&&
IMUNOGENETICA NON-HLA 3I TRANSPLANTUL DE CELULE STEM
HEMATOPOETICE&9
POLIMOR'ISMUL GENELOR
CITO"INELOR
&9
ANTIGENELE MINORE DE
HISTOCOMPATIBILITATE
.(*
INCOMPATIBILITATEA ABO 3I SUPORTUL
TRANS'UZIONAL(*
RECONSTITUIREA SISTEMULUI IMUN DUP$ TRANSPLANTUL DE CELULE STEM
HEMATOPOETICE.(1
GLOSAR DE TERMENI - IMUNOLOGIA
TRANSPLANTULUI(!
IMUNOLOGIA TUMORAL$ A NEOPLAZIILOR
POSTTRANSPLANT...............................................................9)
INTRODUCERE
.9)
ONCOGENE -I
CANCER....................................................................................................................................................................9%
BAZA MOLECULAR$ A CANCERCINOGENEZEI N MAI MULTE
TREPTE.................................................................................................9%
BIOLOGIA CRE-TERII
TUMORALE
..9(
MECANISMELE IN+AZIEI -I
METASTAZ$RII.
99
MECANISME E'ECTOARE ANTI-
TUMORALE.1*1
IMUNOSUPRA+EGHEREA
.1*3
A456784898 5:;<=>98 :;>48 =8?:4<@?:58 A8 ?89:9898
T..........................................................................1*4
ANTIGENE TUMORALE
COMUNE....................................................................................................................................1*%
ANTIGENE DE
DI'ERENIERE..........................................................................................................................................1*(
8
PROTEINE
MUTANTE...................................................................................................................................................1*9
PROTEINE
SUPRAEXPRIMATE........................................................................................................................................11*
PRODUSE GENICE NORMALE
SUBGLICOZILATE..............................................................................................................111
ANTIGENE
+IRALE........................................................................................................................................................113
CONCEPTE
EMERGENTE...............................................................................................................................................................B.113
IDENTI'ICAREA ANTIGENELOR TUMORALE
UMANE.......................................................................................................................113
DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL
CANCERULUI................................................................................11&
MAR"ERI TUMORALI 0 APLICAII
CLINICE...................................................................................................................................11&
ANALIZA STATISTIC$ A DATELOR DE MONITORIZARE
IMUNOLOGIC$...........................................................................................1))
ROLUL IMUNOLOGULUI N MONITORIZAREA ANTITUMORAL$ A STUDIILOR
CLINICE....................................................1))
RECOMAND$RI PENTRU MANAGEMENTUL MAR"ERILOR
TUMORALI............................................................................................1)3
METODE DE LUCRU UTILIZATE N IMUNOLOGIA
TUMORAL$...................................................................1)9
TESTE
IMUNOENZIMATICE............................................................................................................................................................1)9
TESTE DE BIOLOGIE MOLECULAR$ N DIAGNOSTICUL IMUNOLOGIC
TUMORAL..131
+ACCINURI N
CANCER
.14*
IMUNIZAREA
GENETIC$................................................................................................................................................................144
MONITORIZAREA TERAPIILOR IMUNOLOGICE N
CANCER................................................................................................................14!
CONTROLUL DE CALITATE N MONITORIZAREA
IMUNOLOGIC$.........................................................................................14%
E+ALUAREA IMUNOLOGIC$ A NEOPLAZIILOR APARATULUI RENAL - POSTTRANSPLANT
RENAL14(
E+ALUAREA IMUNOLOGIC$ A TUMORILOR RENALE
PARANCHIMATOASE14(
E+ALUAREA IMUNOLOGIC$ A TUMORILOR +EZICII
URINARE.1!3
9
E+ALUAREA IMUNOLOGIC$ A ADENOCARCINOMULUI DE
PROSTAT$..1%%
GHID PRACTIC PRI+IND SELECIA TESTELOR IMUNOLOGICE PENTRU
MONITORIZARE N CANCERUL UROLOGIC POSTTRANSPLANT
RENAL.1&%
E+ALUAREA IMUNOLOGIC$ A DI'ERITELOR TIPURI DE CANCER - POSTTRANSPLANT
HEPATIC.1()
E+ALUAREA IMUNOLOGIC$ A DI'ERITELOR TIPURI DE CANCER -
POSTTRANSPLANT CARDIAC1(4
E+ALUAREA IMUNOLOGIC$ A DI'ERITELOR TIPURI DE CANCER POSTTRANSPLANT
MEDULAR.1(!
CANCERUL N +IITOR/ DIAGNOSTICUL MOLECULAR -I
PROGNOSTICUL.1(%
GLOSAR DE TERMENI - IMUNOLOGIA
TUMORAL$..1(&
10
COMPLEXUL MAJOR DE HISTOCOMPATIBILITATE COMPLEXUL MAJOR DE HISTOCOMPATIBILITATE
Ileana Consan!nes"#
O$%an!&a$ea %enelo$ an!%enelo$ le#"o"!a$e #'ane (HLA)
*n "o'+le,#l 'a-o$ .e /!so"o'+a!0!l!ae (MHC)
Complexul HLA ocup un segment de 1,5-2 centiMorgani pe braul scurt
al cromozomului !i conine gene care codi"ic moleculele de
#istocompatibilitate de clasa $, a%&nd 2''' (ilobaze )HLA*A, HLA*+, HLA*
C,, moleculele de #istocompatibilitate de clasa $$, de aproximati% 1''' (ilobaze
)HLA*-.+1, HLA*-/+1, HLA*-/A1, HLA*-0+1,, moleculele de clasa a
treia, de aproximati% 1''' (ilobaze )C2, C1, "actorul +, citocromul 0-15', 21-
#idroxilaza, 2234
5enele care codi"ic aloantigenele HLA de clasa $ !i clasa a $$-a sunt
apropiate unele "a de altele la ni%elul braului scurt al cromozomului uman 4
Aceast parte a genomului constituie sistemul ma6or de #istocompatibilitate
)MHC, !i este denumit complexul HLA 21,2734
Moleculele HLA de clasa $ sunt exprimate la ni%elul tuturor celulelor
nucleate !i al plcuelor sanguine, pe c&nd moleculele HLA de clasa a $$-a se
gsesc la ni%elul celulelor prezentatoare de antigen, cum sunt celulele dendritice,
lim"ocitele + !i macro"agele 28'34 .olul "undamental al moleculelor de clasa $ !i
clasa a $$-a este de a se lega la peptide proprii !i peptide non-proprii, pe care
apoi le transport la membrana plasmatic a celulelor pentru "enomenul de
recunoa!tere de ctre receptorul pentru antigen al celulei 9 21534
Ast"el, prezentarea peptidelor %irale !i bacteriene de ctre moleculele de
clasa $ !i clasa a $$-a antigenelor receptorilor pentru antigen ai celulelor 9,
conduce la un rspuns imun4
11
Moleculele HLA de clasa $ leag peptide "ormate din 7 - 1' aminoacizi,
peptide ce rezult din degradarea proteosomic a proteinelor citoplasmatice !i
prezint aceste peptide lim"ocitelor 9 citotoxice, C-7
:
4 Ast"el, moleculele de
clasa $ sunt primele care alerteaz celulele 9 "a de celulele in"ectate %iral4
Moleculele HLA de clasa a $$-a leag peptide "ormate din 18-25 de
aminoacizi, care rezult din degradarea endosomal a proteinelor exogene !i
endogene !i prezint aceste peptide lim"ocitelor 9 helper, C-1
:
4 Moleculele de
clasa a $$-a 6oac un rol important ;n stimularea rspunsului imun "a de
organisme cum sunt bacteriile piogene4 Acti%area celulelor 9 C-7
:
!i C-1
:
prin
aceste dou ci duce la di%iziune celular !i di"ereniere, rezult&nd un rspuns
imun celular !i respecti% umoral 21534
Complexul HLA conine aproximati% 14'''4''' de perec#i de baze de
A-< !i este de dimensiune comparabil cu genomul bacteriei (scherichia coli4
=n interiorul complexului HLA se disting trei regiuni )>ig41,4
F!%121 Ha$a s!'+l!3!"a4 a "o'+le,#l#! HLA1
G$#+a$ea "o'+le,#l#! HLA *n $e%!#n!le .e "lasa I5 a II6a 7! a III6a1
=n regiunile de clasa $ !i a $$-a sunt redate poziiile relati%e ale genelor
codi"ic&nd izotipurile "uncionale ale HLA clasa $ !i clasa a $$-a4 La
ni%elul regiunii clasei a $$$-a se obser% poziia relati% a genelor care
codi"ic componentele complementului C2, C1 !i "actorul +4 9oate
aceste trei regiuni conin !i alte gene4
=n apropierea centromerului cromozomului , exist regiunea clasei a $$-a
care conine genele de clasa a $$-a? pe c&nd ;n apropierea telomerului, braului
scurt al cromozomului , exist regiunea clasei $ care conine genele de clasa $
22134
12
=ntre regiunile clasei $ !i a $$-a este situat regiunea clasei a $$$-a4 Aceast
regiune conine o %arietate de proteine di"erite care codi"ic componentele
complementului C1, C2 !i >AC9@.AL +4 At&t regiunea clasei $ c&t !i regiunea
clasei a $$-a conin !i alte gene dec&t cele ale clasei $ sau clasei a $$-a care sunt
ne;nrudite structural cu acestea4
5enele care dau denumirea o"icial a HLA sunt cele din interiorul
complexului HLA care codi"ic aloantigenele de clasa $ !i clasa a $$-a, gene !i
pseudogene4
0rincipalele gene de clasa $ codi"ic lanurile grele denumite !i lanurile
al"a ale celor "orme de clasa $ , HLA-A, -+, -C, -B, -> !i -54 =n completare mai
exist !i HLA-H, -C, -D !i -L care sunt pseudogene ne"uncionale str&ns ;nrudite
din punct de %edere al sec%enei nucleotidice cu genele "uncionale de clasa $
)>ig42,
F!%121 Ha$a $e%!#n!! HLA "lasa I1
Aceast "igur ilustreaz genele HLA-H, -C, -D !i -L care sunt gene
complete de clasa $ neexprimate, respecti% pseudogene4 >amilia de
gene M$C conine 5 gene ;ntre care genele M$CA !i M$C+ sunt
exprimate, iar M$CC, M$C- !i M$CB sunt pseudogene4 5enele
nedenumite )barele %erticale scurte, sunt "ragmente de gene de clasa $4
H>B este o gen "uncional, asemntoare clasei $, la E1 Mb
telomeric de HLA->4 =n completarea genelor cunoscute din aceast
"igur mai exist ;nc E5' de gene care sunt rsp&ndite printre genele
clasei $ !i care nu sunt ;nrudite structural cu acestea4 =n populaia
uman toi cromozomii poart cele gene HLA de clasa $4 =n
contrast cu acest "apt, anumii cromozomi au deleii de E5' (b ;n
regiunea clasei $ care include !i pseudogena HLA-H 22134
13
5ena care codi"ic F
2
microglobulina, lanul u!or al moleculelor HLA de
clasa $, nu este situat ;n complexul HLA ci pe cromozomul uman 154 -in cauza
acestei localizri cromozomiale gena F
2
microglobulinei nu are o denumire ;n
nomenclatura HLA4
Moleculele HLA de clasa a $$-a sunt #eterodimeri compu!i din lanuri G !i
F de dimensiuni similare4 Bxist 5 izotipuri ale proteinelor HLA de clasa a $$-a
care sunt denumite HLA--M, --@, --0, --/ !i --.4
5enele pentru lanurile G !i F sunt localizate ;n regiunea HLA de clasa a
$$-a !i cele mai multe dintre acestea sunt organizate ;n perec#i de lanuri G !i F
genice care contribuie la acela!i izotip )>ig48,4
F!%181 Ha$a $e%!#n!! HLA .e "lasa a II6a
Hunt ilustrate 8 tipuri de categorii de geneI gene care codi"ic lanurile
!i ale moleculelor HLA de clasa a $$-a, pseudogene ;nrudite cu
genele lanurilor !i !i genele care codi"ic alte "uncii implicate ;n
procesarea !i prezentarea antigenelor de ctre HLA de clasa $4 -e
asemenea, sunt menionate genele LM02 !i LM0J care codi"ic
subuniti ale proteozomei, genele 9A01 !i 9A02 care codi"ic un
peptid transportor !i gena tapasinei care "aciliteaz eliberarea peptidelor
din 9A0 la ni%elul moleculelor de clasa $4
5enele care codi"ic lanurile G sunt denumite A )-MA !i -@A, iar
genele ce codi"ic lanurile genelor F sunt denumite + )-M+ !i -@+,4 Aceste
gene care codi"ic HLA--/ G !i F sunt HLA--/A1 !i respecti% HLA--/+14
0artea din regiunea HLA de clasa $$ care codi"ic moleculele HLA--. este mai
complicat deoarece are c&te%a gene "uncionale de lan F precum !i
14
pseudogene, numrul lor %ariind ;ntre di"erii cromozomi 22134 -i"eritele
aran6amente pentru genele lanului F sunt denumite #aplotipuri -.+4
S$#"#$a 'ole"#lelo$ HLA
S$#"#$a 'ole"#lelo$ HLA .e "lasa I
Moleculele HLA de clasa $ conin "iecare o copie a dou polipeptide !i
anumeI un lan greu, glicoprotein de E15(-a care este ancorat la membran,
!i un lan u!or, solubil ;n ap, de 12(-a )>ig41,4
F!%191 S$#"#$a s"/e'a!"4 a 'ole"#le! HLA .e "lasa I1
5enele care codi"ic lanurile grele HLA de clasa $ au o structur
caracteristic ;n care di"erite domenii proteice sunt codi"icate de exoni
separai4
=n total, exonii genelor lanurilor grele de clasa $ conin 1'7K-11'1
nucleotide )incluz&nd codonul terminator, !i codi"ic lanuri grele de 82-8
reziduri de aminoacizi4 )>ig45,
F!%1:1 O$%an!&a$ea e,on6!n$on a #ne! %ene HLA .e "lasa I1
La ni%elul lanului greu de clasa $, "iecare domeniu proteic este
codi"icat de exoni di"erii4 L codi"ic sec%ena conductoare, 9M
codi"ic regiunea trans-membranar, CL9 codi"ic coada
citoplasmatic !i 8MA9 este regiunea 8M netradus4 -i"erene mici ;n
lungimea lanurilor grele de clasa $ din di"erite alele sau locusuri,
pro%in din inserii !i deleii ;n regiunea transmembranar !i din
15
modi"icri de lungime ale cozii citoplasmatice datorit plasrii
di"ereniale a codonului terminator ;n interiorul exonilor , J sau 74
0olimor"ismul antigenic al moleculelor HLA-A, + !i C este datorat
di"erenelor ;n sec%enele de aminoacizi ale lanulului greu al HLA de clasa $4
Cele mai multe dintre aceste di"erene apar prin substituii nucleotidice la ni%elul
exonilor 2 !i 84 5enele lanului greu al HLA- A, + !i C sunt "oarte polimor"e ;n
contrast cu genele lanului greu al HLA-B !i 5, ce dez%olt un polimor"ism
limitat denumit oligomor"ism4 0entru HLA->, o singur alel este recunoscut ;n
prezent !i de aceea gena este considerat a "i monomor"4
S$#"#$a 'ole"#lelo$ HLA .e "lasa a II6a
Moleculele HLA de clasa a $$-a conin "iecare o copie a unui lant G !i F,
am&ndou "iind ancorate la membran )>ig4,4
F!%1;1 S$#"#$a s"/e'a!"4 a 'ole"#lelo$ HLA .e "lasa II1
Lanurile !i prezint "iecare dou domenii extracelulare, o regiune
trans-membranar !i o coad citoplasmatic4 -omeniile extracelulare
ale lanului sunt
1
!i
2
iar cele ale lanului sunt
1
!i
2
4
16
Lanurile au 88-85 (-a, iar lanurile au 2-27 (-a, di"erenele ;n
dimensiuni dator&ndu-se ;n principal glicozilrii4 @rganizarea exon * intron a
genelor de clasa a $$-a este asemntoare genelor de clasa $, ast"el exonii
codi"ic domenii separate ale proteinelor 22K34
5enele lanurilor !i au structur similar ;n care exonul 1 codi"ic
peptidul conductor !i exonii 2 !i 8 codi"ic cele dou domenii extracelulare4
La ni%elul genelor lanului exonul 1 codi"ic domeniul transmembranar
!i exonul 5 codi"ic coada citoplasmatic4 0rin contrast, la ni%elul genelor
lanului , at&t regiunea transmembranar c&t !i coada citoplasmatic sunt
codi"icate de exonul 1 )>ig4J,4
F!%1<1 O$%an!&a$ea e,on !n$on a %enelo$ "o.!3!"=n. lan>#$!le ? 7! @ ale 'ole"#lelo$
HLA .e "lasa a II6a1
Legend3 L - sec%ena conductoare? 9M - regiunea transmembranar?
CL9 - coada citoplasmatic? 8MA9 - regiunea 8M netradus4
0olimor"ismul moleculelor HLA de clasa a $$-a poate deri%a at&t de la
ni%elul lanurilor c&t !i de la ni%elul lanurilor , dar acest lucru depinde de
izo"orma clasei a $$-a4 0entru HLA--., lanul este monomor" !i toate
polimor"ismele deri% din genele lanurilor 4 Componentul cel mai polimor" al
genelor de clasa a $$-a este HLA--.+1 pentru care sunt de"inite 221 de alele
22134
0entru HLA--/ !i -0 at&t lanurile !i contribuie la polimor"ism, iar
genele corespunztoare sunt "oarte polimor"e4 =n contrast, izo"ormele HLA--M
!i HLA--@ sunt puin polimor"e4
E'e$%en>a .e no! alele
Micro%ariaii la ni%elul serotipurilor !i crearea de noi alele care sunt
c#imere a dou serotipuri distincte pot "i "enomene relati% dinamice4
17
Alelele noi emerg cu o rat ;nalt !i de%in "ixate ;n populaie, ;n teorie, dac au
un a%anta6 selecti% ;n prezentarea peptidelor pro%enite de la organisme
in"ecioase4
Alelele noi sunt generate via mutaii puncti"orme, recombinri !i
e%enimente asemntoare con%ersiei genice 2834
F!%191 No'en"la#$a s+e"!3!"!4>!lo$ HLA1
0re"ixul HLA precede antigenele sau alelele pentru a de"ini MHC-ul
speciei4 -enumirile A, +, C, -. etc, de"inesc locusul4 Acesta este
urmat de un numr care denot antigenul de"init serologic sau un
numr cu un asterix care denot alela de"init molecular4 =n anumite
cazuri, litera N este plasat ;naintea antigenului serologic indic&nd c
este o denumire de lucru, pro%izorie4
L!nAa%e D!seB#!l!0$!#' (Le%4#$4 .e&e"/!l!0$a4)
@bser%aia c alelele de la ni%elul di"eritelor locusuri genetice exist ;n
populaie ;n acela!i #aplotip, semni"icati% mai "rec%ent dec&t ar "i a!teptat, se
nume!te Lin1age 4ise5uilibrium. >rec%ena estimat a dou alele )"1, "2, a se
produce ;mpreun este produsul "rec%enei genei "iecrei alele din populaia
18
respecti% )2" a!teptat O "1 x "23, 21J34 >rec%ena obser%at este determinat din
studii "amiliale ;n cadrul acelea!i populaii4
Lin1age 4ise5uilibrium este un "enomen tipic pentru MHC uman !i se
extinde de la HLA-A p&n la HLA--/4 Cel mai cunoscut exemplu pentru acest
"enomen este #aplotipul din populaia caucazian A1, CNJ, +7, -.1J 213,
-.52, -/2 care este ;nt&lnit aproximati% de 1 ori mai "rec%ent dec&t este
estimat 21J34

Gene!"a HLA
Ana din consecinele conglomeratului de gene HLA de la ni%elul
cromozomului este c cei mai muli indi%izi mo!tenesc un set de alele HLA
nerecombinat de la "iecare printe4 Aceste gene sunt exprimate codominant4
Ast"el, dac tipurile HLA ale membrilor "amiliei sunt determinate, segregarea
tipurilor HLA ;n interiorul "amiliei poate "i utilizat pentru construirea tipurilor
HLA din "iecare cromozom4 Se#l alelelo$ HLA %4s! +e #n "$o'o&o' ese
.en#'! /a+lo!+4 -eterminarea #aplotipurilor este important pentru
identi"icarea persoanelor ;nrudite identice, deoarece purtarea de antigene din
#aplotipuri di"erite este "rec%ent4
>iecare indi%id mo!tene!te dou #aplotipuri MHC de la "iecare printe !i
ast"el are dou alele pentru "iecare dintre gene4 Aceste alele sunt exprimate
codominant4 Mo!tenirea genelor MHC urmeaz regulile segregrii ale lui
6endel4 =n cadrul unei "amilii, "iecare copil mo!tene!te un #aplotip MHC
de la mam !i unul de la tat 21J34 0rin con%enie, #aplotipurile paternale sunt
denumite a !i b !i cele maternale c !i d4 Ast"el, exist patru genotipuri posibile
MHC la ni%elul copiilorI ac, ad, bc !i bd4 0robabilitatea de a exista oricare dintre
cele patru %ariante de genotipuri este de 1I1 21J34 =ntr-o "amilie cu 5 copii, cel
puin doi dintre copii %or "i identici HLA )presupun&nd ca nu exist "enomen de
crossing over, )>ig47,4
19
F!%1C1 Se%$e%a$ea alelelo$ la n!Del#l #n#! lo"#s %ene!"1
Se'n!3!"a>!e "l!n!"4
Blementul c#eie, pentru transplantul renal de succes, este reprezentat de
abilitatea identi"icrii corecte a potri%irii #istocompatibilitii dintre primitori !i
donatori !i de a ;ncerca un prognostic de "uncionalitate, %indecare !i de %ia
pentru ace!ti pacieni a%&nd ;n %edere posibilitatea apariiei "enomenului de re6et
)gazd versus alogre" renal, sau ;n cazul transplantului medular alogre"
versus gazd,4
9ipizarea antigenelor leucocitare umane )HLA, 6oac un rol important
deoarece moleculele HLA sunt intele primare ale rspunsurilor imune ;n
transplanturile alogenetice, sunt critice pentru rspunsurile la stimuli antigenici
!i sunt implicate ;n susceptibilitatea genetic "a de anumite boli imune !i
autoimune4
Antigenele !i alelele complexului ma6or de #istocompatibilitate sunt
de"inite !i re%izuite de ctre @rganizaia Modial a Hntii, care organizeaz
periodic mani"estri !tiini"ice prin care se asigur o abordare comun a
nomenclaturii !i tipizrii4 Cea mai bun potri%ire HLA dintre toate %ariantele
este potri%irea ;ntre gemeni identici4
=n practic, acest lucru se ;nt&mpl "oarte rar !i marea ma6oritate a
transplantelor se e"ectueaz ;ntre donatori ne;nrudii !i receptori potri%ii din
punct de %edere al #istocompatibilitii4 Bste "oarte clar c, at&t pentru
transplantul renal c&t !i pentru transplantul de mdu%, cu c&t potri%irea este mai
bun cu at&t alogre"a %a "unciona ;n condiii bune iar complicaiile ulterioare
%or "i minore4 -ac potri%irea este redus primitorul %a necesita cantiti
considerabile de imunosupresoare pentru a pre%eni re6etul gre"ei4 Acest lucru
conduce la riscul unor maligniti secundare !i la apariia in"eciilor oportuniste4
Meo.e se$olo%!"e .e !+!&a$e HLA
Metodele serologice "urnizeaz "oarte rapid !i simplu rezultatele #isto-
compatibilitii4 Aceste metode "olosesc ser care conine anticorpi "a de
antigenele HLA4 Anticorpii anti HLA sunt "oarte speci"ici pentru determinanii
structurali indi%iduali care caracterizeaz antigene di"erite ale sistemului HLA4
20
Ast"el, c&nd serurile conin&nd anticorpi anti-HLA sunt puse ;n contact cu
lim"ocite, anticorpii se leag numai de antigenele speci"ice int4 C&nd
complexul antigen - anticorp este "ormat pe supra"aa celulei ;n prezena
complementului, acti%area complementului duce la liza celular4 Ast"el, moartea
celulei este un indicator de speci"icitate comun a antigenului !i a anticorpului !i
este un rezultat al testului Ppoziti%Q4 -etecia acestei speci"iciti ;ntre anticorp !i
antigen "urnizeaz rspunsul la c&te%a ;ntrebri "undamentale ;n testarea
#istocompatibilitiiI
2. !are sunt antigenele HLA ale unei celule particulare7 !nd este
cunoscut specificitatea anticorpului )a8a cum se ntmpl la reactivii de
tipizare HLA* 8i celula este de fenotip necunoscut, rezultatul testului
pozitiv cu anticorpi specifici identific antigenele celulei.
$. +unt anticorpi anti HLA ntr/un ser particular7
C&nd un ser este testat pentru prezena anticorpilor anti-HLA, un test
poziti% indic acti%itate anti lim"ocitar ;n ser4 -in modelul de reacii poziti%e !i
negati%e, cu un panel de celule tipizate HLA, poate "i gsit speci"icitatea
anticorpilor4 -ac serul pacientului reacioneaz cu celulele donatorului, cei doi
indi%izi sunt incompatibili4 Ast"el, printr-un proces !e$a!D5 de testare a serului
!i tipizare a celulelor, antigenele HLA sunt de"inite, panelul de lim"ocite tipizate
este generat !i sunt create coleciile de seruri tipizate anti-HLA de speci"icitate
cunoscut4
T!+!&a$ea HLA +$!n es#l .e l!'3o"!oo,!"!ae
9ipizarea HLA serologic este realizat prin expunerea celulelor
necunoscute la o baterie de antiseruri de speci"icitate HLA cunoscut4 Herurile
pentru tipizare sunt selectate pentru a rezulta scoruri poziti%e puternice care s
asigure reproductibilitatea4 -ac celulele sunt omor&te, ;n prezena antiserului !i
a complementului, celula se presupune a a%ea acela!i antigen HLA ca !i
speci"icitatea anticorpului4
An ser ideal pentru tipizare HLA ar trebui s "ie monospeci"ic, adic s
aib speci"icitate pentru un singur antigen HLA4
21
9otu!i, ;n realitate, aloanticorpii obser%ai ;ntr-un singur ser sunt ;n
general polispeci"ici4 An aloantiser poate conine anticorpi "a de multipli
determinani de pe antigenul imunizant4
Anumii determinani sunt clasici, adic, este %orba de speci"icitile HLA
pri%ate care caracterizeaz "iecare tip HLA4 Ali determinani sunt publici, adic,
sunt ;mpriti la c&te%a antigene care, ;n mod colecti%, constituie antigene cross
reactante de grup cross/reacting antigen group )C.B5 group,4 Ma6oritatea
antiserurilor HLA sunt seruri complexe obinute de la "emei multipare4 Lic#idul
placentar s-a do%edit a "i o surs secundar %aloroas de aloantiseruri pentru
tipizarea HLA4 Anticorpii anti-HLA sunt de asemenea gsii la pacieni expu!i la
antigene HLA prin trans"uzii de s&nge sau gre"e de organe4
9otu!i, aceste metode de obinere a antiserurilor HLA sunt di"icile !i de
aceea au "ost elaborate metode care s utilizeze anticorpi ne"ixatori de
complement !i care se bazeaz numai pe legarea antigenului, cum este BL$HA
sau citometria ;n "lux4
Muli anticorpi multiclonali reacioneaz cu mai mult de o speci"icitate
HLA ceea ce arat existena de determinani antigenici comuni la ni%elul
moleculelor HLA4
Mai nou, "olosirea metodelor moleculare de tipizare HLA a crescut, ast"el
c e"orturile prin metodele serologice au "ost reduse mult4
An numr "oarte mic de laboratoare mai menin ;nc metodele serologice
de tipizare HLA dar, !i ;n aceste situaii, acestea sunt completate obligatoriu de
metodele de biologie molecular pentru a rezol%a incertitudinile !i limitele
metodei serologice4
I-o!"re" ce!$!e!or
Lim"ocitele sunt tipul celular pre"erat pentru tipizarea HLA serologic,
screening-ul anticorpilor !i crossmatc#ing4 =n mod tradiional, lim"ocitele sunt
izolate din s&nge total peri"eric prin separare ;n gradient de densitate * c&nd
donatorul este %iu4 =n cazul donatorului cada%ru, lim"ocitele sunt separate din
splin sau ganglioni lim"atici4 Lucr&nd aceast metod, trebuie o gri6 deosebit
pentru a prepara o suspensie celular de %iabilitate "oarte bun !i care s nu
conin eritrocite !i trombocite4 9ipizarea HLA pentru clasa $$ de antigene HLA,
22
HLA *-. !i -/ este per"ormat pe preparate lim"ocitare ;mbogite cu
lim"ocite +4 0rocedurile de izolare speciale, per"ormate, sunt necesare, deoarece
aproximati% 7'R din lim"ocitele din s&ngele peri"eric sunt celule 9 inacti%e care
nu conin antigene HLA de clasa a $$-a pe supra"aa lor4
$zolarea lim"ocitelor 9 !i + cu a6utorul bilelor magnetice este ;n prezent
cea mai comun metod pentru tipizarea HLA !i crossmatc#ing4 +ilele, cptu!ite
cu anticorpi o"er %ersatilitate, %itez a re%enirii celulare !i o bun puritate a
preparatului celular "inal4 +ilele peliculizate cu anti-C-2 sau anti-C-7 sunt
"olosite pentru izolarea celulelor 9 !i anti-C-1K pentru celulele +4 +ilele
magnetice pot "i "olosite pentru obinerea numrului adec%at de celule din
s&ngele total, din di"erite tampoane sau din preparate de lim"ocite din s&ngele
peri"eric4
Celulele legate de aceste bile de%in mai sensibile ca inte posibil datorit
modi"icrii membranelor celulare !i ast"el testele necesit o perioad de incubare
mai redus ca timp, "a de metodele standard de citotoxicitate4
Protoco! %e !$cr$ )entr$ te#t$! !imfocitoto.icit'/ii %e)en%ente %e com)!ement
Antiseruri HLA indi%iduale sunt dispensate c&te 1 SL ;n godeuri
microtest, de speci"icitate desemnat, ;n plcue de plastic compuse din ' sau
J2 de godeuri a%&nd capacitatea de 15SL4 An model de seruri anti HLA este
ales cu speci"iciti care acoper toate posibilitile %ariantelor de tipuri HLA4
=n general, "iecare tip este reprezentat de cel putin doua antiseruri4 Astzi,
laboratoarele obin plcue de tipizare congelate, comerciale, gata de "olosit4
0entru tipizarea HLA, serurile dintr-o plcu de testare sunt dezg#eate !i
aproximati% 2''' de lim"ocite sunt dispensate ;n godeu4 Apoi plcua este
incubat 8' de minute la temperatura camerei pentru a permite anticorpilor anti-
HLA a se lega la antigenele lor HLA int speci"ice4 Complementul )5 SL, este
adugat ;n general ca ser de iepure !i plcua este incubat timp de ' de minute4
9estul de citotoxicitate dependent de complement pentru tipizarea HLA--. !i
-/ este per"ormat cu seruri corespunztoare de tipizare de clasa a$$-a, numai c
metoda este modi"icat pentru celule +I iniial are loc incubarea celulelor, iar
serul este ;nclzit la 8J
'
C sau 22
'
C pentru ' de minute? dup adugarea
complementului, amestecul este incubat timp de 12' de minute la temperatura
camerei4 Cre!terea temperaturii este "olosit pentru a e%ita reaciile "als poziti%e
23
care pot rezulta din legarea anticorpilor nespeci"ici, reacti%i la rece4 C&nd se
utilizeaz pentru tipizarea clasei a $$-a bile imunoabsorbante, timpii de incubare
sunt ;n general redu!i cu aproximati% 6umtate, posibil din cauza slbirii
membranei celulare datorit ata!rii bilelor4
0entru a %izualiza celulele moarte !i %ii este adugat un colorant, eozina L
urmat de "ormalin pentru a "ixa reacia, apoi se utilizeaz microscopul cu
contrast de "az4 Celulele %ii exclud colorantul !i apar luminoase !i re"ractante,
iar celule moarte conin colorant !i sunt u!or mrite de %olum !i ;ntunecate4
Bxist o metod alternati% de %izualizare care "olose!te "luorocromi, cum este
"luoresceina diacetat )%erde,, ;nainte de dispensarea ;n plcu4 C&nd celulele
sunt omor&te testul este poziti%, iar "luoresceina curge a"ar !i celulele PdisparQ4
.ezultatele poziti%e sunt comparate cu un godeu negati%, unde toate celulele
sunt %iabile4 He poate aduga un al doilea "luorocrom de culoare contrastant,
cum este ethidium bromide )ro!u,, pentru a %izualiza celulele moarte4
>iecare godeu este scori"icat indi%idual prin inspecie, not&nd procentul
celulelor moarte per godeu4 9estul este clar poziti% c&nd cel puin 6umatate din
celule sunt moarte4 9ipa6ul HLA rezult prin interpretarea modelului de
reacti%itate al unor seruri indi%iduale !i a speci"icitii lor4 =n "enotiparea unui
indi%id pentru HLA clasa a $-a se a!teapt s se gseasc modele de rezultate cu
dou antigene pentru, "iecare din locusurile A, + !i C4 C&nd numai un singur
antigen este identi"icat ;ntr-un locus, indi%idul poate "i #omozigot pentru acel tip
de antigen sau, laboratorul a e!uat ;n a identi"ica cel de-al doilea antigen
deoarece serurile pot s nu conin anticorpi pentru epitopii prezeni pe celulele
int sau e,!s4 o e,+$!'a$e $e.#s4 a 'ole"#lelo$ HLA pe lim"ocitele testate4
Va$!a0!l!aea $e&#laelo$ .e !+!&a$e HLA se$olo%!"e
Herurile de tipizare HLA nu sunt uni"orme deoarece complexitatea
polimor"ismului HLA "ace imposibil crearea un reacti% standard pentru "iecare
speci"icitate4 >iecare laborator de tipizare HLA are responsabilitatea de a obine
antiserurile adec%ate !i de a monitoriza per"ormana acestora, inclusi% a
produselor comerciale4
.ezultate obinute cu plcuele de tipizare ale laboratorului pot "i
comparate cu acelea ale altor colecii de seruri pentru con"irmarea unui anumit
"enotip HLA4 9oate laboratoarele de tipizare HLA sunt controlate de ctre
inspectorii >ederaiei Buropene de $munogenetic )B>$, sau de ctre Hocietatea
American pentru Histocompatibilitate !i $munogenetic )AHH$,, pentru a
24
%eri"ica calitatea reacti%ilor serologici !i a reacti%ilor celulari "olosii pentru
testarea clinic4
0rogramele de control de calitate naionale !i internaionale sunt
disponibile pentru tipizare, crossmatching !i anticorpi citotoxici, iar per"ormana
satis"ctoare este obligatorie pentru acreditarea B>$ !iTsau AHH$ a
laboratorului4
@ a doua %ariabil a tipizrii HLA serologice este complementul seric, un
reacti% disponibil comercial care cumuleaz practic serurile de la c&te%a sute de
iepuri4 Herul de iepure conine anticorpi #etero"ili cu acti%itate lim"ocitar
antiuman care ;i mre!te e"iciena ;n testele de citotoxicitate4 Hupraabundena
acestor anticorpi antiumani "ace ca !i complementul s "ie citotoxic !i ast"el se
produc rezultate "als poziti%e4 >iecare laborator trebuie s ;!i %eri"ice sursa de
complement pentru a gsi %arianta care promo%eaz reacii citotoxice intense
"r a produce toxicitate nespeci"ic4 -eoarece nu exist o surs standard de
complement, acela!i ser testat ;n di"erite laboratoare, are potenialul de a
produce rezultate discordante4
Alte %ariabile sunt metodele "olosite pentru a %izualiza celulele %ii !i
moarte, timpii de incubare !i de"inirea terminrii perioadei de lucru a testului,
precum !i interpretarea rezultatelor4
T!+!&a$ea HLA +$!n 'eo.e .e 0!olo%!e 'ole"#la$4
In$o.#"e$e
Hpeci"icitile serologice au "ost identi"icate prin modelul de legare al
anticorpilor ;n testele serologice !i din acti%area lim"ocitelor de ctre antigenele
distincte ale complexului ma6or de #istocompatibilitate )MHC, ;n testul culturii
mixte lim"ocitare )MLC,4
Cu a6utorul clonrii genice !i a sec%enializrii A-<, speci"icitile
antigenelor HLA sunt ;n prezent cunoscute a deri%a din di"erenele de sec%en
localizate ;n c&te%a regiuni #iper%ariabile de la ni%elul moleculelor MHC4
25
Cele mai multe dintre di"erene au aprut din e%enimentele de con%ersie
intragenic !i intergenic care au condus la polimor"ismul complex care
caracterizeaz sistemul HLA4
La ni%elul genelor HLA de clasa a$$-a, regiunile %ariabile se gsesc ;n
principal ;n exonul 2, iar la genele HLA clasa $? zonele polimor"e sunt
concentrate ;n exonul 2 !i 84
Aceste %ariaii de sec%en, sunt localizate ;n zona de legare a antigenului
!i la ni%elul regiunilor al"a#elix care ;nt&mpin receptorul celulei 94
Aceste localizri strategice sunt expuse abilitii sistemului imun de a
recunoa!te !i a rspunde la patogeni )!i posibil autoimunogeni, !i la antigeni
endogeni sau exogeni4
Alelele HLA poart multe din acelea!i moti%e sec%eniale dar ;n
combinaii di"erite4
=n consecin, antigenele de clasa $ !i clasa a$$-a, pot "i a!ezate ca un
pac#et de combinaii ale acestor polimor"isme sec%eniale, care au ca baz o
sec%en comun de nucleotide4
>enomenul obser%at al crossreacti%itii antiserurilor !i mai recent
"enomenul de cross#ibridizare al nucleotidelor marcate poate "i explicat de
"aptul c anumite antigene pot a%ea acelea!i sec%ene4
@ consecin important a acestor moti%e sec%eniale purtate ;n comun
este c anumite combinaii #eterozigote ale alelelor nu pot "i ;ntodeauna distinse
de o a doua combinaie di"erit4
9oate metodele de tipizare A-< trebuie s ia ;n considerare aceste
aspecte c&nd propun sc#emele pentru identi"icarea alelelor4
=n mod e%ident, cea mai per"ormant metod de tipizare HLA ar "i aceea
care ar putea per"orma o analiz complet sec%enial a A-<-ului de la ni%elul
genelor HLA pentru "iecare indi%id4
Hec%enierea nucleotidic automat este "olosit ;n mod curent ca !i
Ustandardul de aurQ pentru tipizarea HLA, dar aceast te#nologie este ;n general
mai restr&ns pentru Centrele de $munogenetic care sunt implicate ;n
programele de transplant de celule stem #ematopoetice care "olosesc "rec%ent
donatori ne;nrudii4
=n tabelul urmtor sunt redate comparati% caracteristicile metodelor de
tipizare HLA serologice !i moleculare4
26
Ta0el#l n$121 Co'+a$a>!e *n$e 'eo.ele .e !+!&a$e HLA
se$olo%!"e 7! 0a&ae +e ADN E2F1
Meo.e
SEROLO*ICE ADNG SSPHSSOP A01 S2T
<umrul de tipuri identi"icabile
HLA-A
HLA-+
HLA-C
HLA--.
HLA--/
HLA--0
21
18
1'
17
K
-
21-151
18-8'1
1'-78
17-272
K-18
-7J
151
8'1
78
272
18
7J
Materialul probei 2-8 milioane de lim"ocite
%ii
Cantiti in"ime de A-< Cantiti in"ime de
A-<
.eacti%i Aloantiseruri )"urnizare
limitat, c&te%a
monoclonale
@ligonucleotide sintetice
primeri T oligonucleotide
marcate )"urnizare
nelimitat,
@ligonucleotide
sintetice primeri
)"urnizare nelimitat,
0uterea de a
identi"ica noi alele
>oarte limitatI depinde
de disponibilitatea !i
speci"icitatea serurilor
LimitatI bazat pe
cuno!tina sec%enelor !i pe
noi modele de reacie
<elimitatI noi alele
identi"icate prin
sec%eniere
<i%elul de rezoluie
pentru alelele
cunoscute
<i%el generic -e la generic la ni%el alelic <i%el alelic
>actori importani Bxpresia HLA pe
supra"aa celular4
Viabilitatea celulelor
Calitatea !i cantitatea A-<-
ului genomic !i "actorii de
ampli"icare4
@bligati%itatea respectrii
cu strictee a protocolului
Calitatea !i cantitatea
A-<-ului genomic !i
"actorii de ampli"icare4
Metodele moleculare de tipizare o"er a%anta6e importante "a de
metodele serologice incluz&nd acurateea mult ;mbuntit, rezoluia ;nalt !i
"lexibilitatea probelor4 Metodele moleculare de tipizare pot "i ;n particular
a%anta6oase pentru tipizarea probelor conin&nd molecule HLA care sunt ;n
acela!i C.B54
27
C&te%a publicaii au documentat bene"iciul clinic al tipizrii moleculare
e%ideniind ;n special cele dou aspecte de6a menionate !i anume acurateea
mult ;mbuntit !i rezoluia ;nalt a tipizrii4
Menionm c datele de sec%eniere "urnizate de metodele moleculare
;mpreun cu cuno!tinele despre structura !i "uncia sistemului HLA sunt ;n mod
curent "olosite pentru ;nelegerea mai bun a bazei moleculare a alorecunoa!terii
!i a bolilor cu determinism genetic HLA4
P$!n"!+!!le 'eo.elo$ 'ole"#la$e .e l#"$# *n /!so"o'+a!0!l!ae
0rima metod de tipizare molecular a detectat lungimea polimor"ismului
"ragmentului de resctricie ).>L0, ;n A-<-ul genomic !i a "ost "olosit ;n
special pentru tipizarea HLA de clasa a$$-a4
-e asemenea o alt metod de biologie molecular utilizat "rec%ent este
metoda cu #ibridizare la matria A.< "olosind oligonucleotide marcate cu
sec%en speci"ic )HH@0,4 -up descoperirea reaciei de ampli"icare genic
)0C., au "ost dez%oltate rapid c&te%a metode "acile !i robuste de tipizare HLA
prin biologie molecular4 0rima metod utilizat a "ost HH@04 Aceast metod a
"ost urmat de dez%oltarea metodei cu primeri de sec%en speci"ic care se
bazeaz pe speci"icitatea ampli"icrii pentru a determina tipurile de HLA4
Cea mai recent dez%oltare ;n domeniul metodelor de biologie molecular
pentru tipizarea HLA este tipizarea bazat pe desci"rarea sec%enelor *
sec%eniere )H+9, care are a%anta6ul automatizrii !i a unei acuratei per"ecte4
Hec%enierea este urmat de dez%oltarea te#nologiei microarra9 pentru
genotiparea HLA4
=n tabelul 2 sunt prezentate cele mai "olosite metode de biologie
moleculare ;n tipizarea HLA4
Ta0el#l n$121 Te/n!"! 'ole"#la$e .e esa$e a /!so"o'+a!0!l!4>!! E2F1
NUME
REACTI(I
CARACTERISTICI
PROCESE
CARACTERISTICE
Pol!'o$3!s'ele .ee"ae
.>L0
Bndonucleaze bacteriene
de restricie
+outhern blotting Lungimea "ragmentului de
restricie
HH0
0rimeri 0C. de sec%en
speci"ic
0C.Tgel electro"orez -e la ni%el generic la ni%el de
alel
28
HH@0
@ligonucleotide cu
sec%en speci"ic,
marcate
0C.T#ibridizare a
oligonucleotidelelor
marcate la produsul 0C.
-e la ni%el generic la ni%el de
alel
H+9
0rimeri
etic#etaiTterminatori de
sec%eniere
0C.Tsec%enierea
nucleotidic a produsului
0C.
<i%el de alel
W=n prezent este ;n curs de in%estigare clinic !i te#nologia microarra9 pentru genotiparea
HLA4
Am)!ific"re" &ene!or
Ma6oritatea metodelor moleculare de genotipare HLA "olosesc reacia
0C. pentru a ampli"ica selecti% segmentele genelor HLA care sunt necesare
tipizrii4
Hpeci"icitatea ampli"icrii poate "i s+e"!3!"4 .e lo"#s )de exemplu, HLA-
A, HLA-+, HLA--.+1,, s+e"!3!"4 .e %$#+ )de exempluI -.+1-'1, -.+1-'2,
sau cu s+e"!3!"!ae alel!"4 )de exempluI -.+1W-'1'1, -.+1W'1'2,4
0entru 0C. speci"icitatea este determinat de sec%ena primerilor !i
condiiile de ampli"icare )cum sunt ciclurile de temperatur !i Mg
2:
,4
Cele mai multe sc#eme de tipizare necesit condiii care e%it co-
ampli"icarea pseudogenelor4
Geno!+a$ea HLA SSOP
Hibridizarea cu ol!%on#"leo!.e 'a$"ae .e se"Den>4 s+e"!3!"4 )sonde, a
"ost prima metod de tipizare HLA bazat pe 0C.4 Aceast metod simpli"ic
ampli"icarea selecti% a HLA int urmat de #ibridizarea cu un panel de
oligonucleotide marcate4
Cele dou "ormate mai "rec%ent "olosite suntI
ot sa# #!ot b!ot cu A-<-ul ampli"icat legat de un suport solid )cum este
membrana, !i #ibridizat cu substane de marcat ;n soluie
Re,er# %ot sa# #!ot b!ot cu substane de marcat legate de un suport solid,
#ibridizat cu A-<-ul ampli"icat ;n soluie4
29
>ormatul dot blot este "a%orabil pentru tipizarea unui numr mare de
probe4 Anele laboratoare cu %olum mare de lucru, "olosesc aceast metod
pentru tipizarea unor loturi de K sau 871 de probe4 Metoda revers dot blot este
"a%orabil pentru testarea unui numr mic de probe4 .eacti%ii pentru dot:slot/
blot sunt disponibili comercial, exist&nd (ituri standardizate a%&nd toate
componentele necesare lucrului incluse4
@ cantitate de 1-5 SL de A-< ampli"icat din "iecare prob este aplicat
pe o membran de nXlon4 -upa #ibridizarea cu oligonucleotidele marcate,
membranele sunt splate pentru a ;ndeprta legarea nespeci"ic4
He utilizeaz un substrat ast"el ;nc&t se dez%olt o reacie de culoare
rezult&nd un model al #ibridizrii poziti%e !i negati%e care este "olosit pentru a
desemna tipul HLA4
An a%anta6 ma6or al acestui procedeu este c, at&t controlul poziti% c&t !i
controlul negati% pot "i incluse pentru "iecare reacie4
In $e&#'a5 +$!n"!+!#l 'eo.e! ese 0a&a +e $eDe$s /!0$!.!&a$e4
Materialul A-< extras !i ampli"icat biotinilat este aport denaturat c#imic !i
separat ;n spire care sunt #ibridizate cu oligonucleotide speci"ice marcate
)sonde, imobilizate ca linii paralele pe benzi4
=n etapa urmatoare, de splare, are loc ;ndeprtarea materialului ampli"icat
nelegat4 -upa splare, este adugat con6ugatul cu strepta%idin !i "os"ataz
alcalin care se leag la #ibrizii biotinilai "ormai anterior4
$ncubarea cu o soluie substrat, conin&nd un cromogen, conduce la
obinerea unui precipitat griTmaro4
.eacia este oprit printr-o etap de splare !i modelul reacti%itilor
sondelor este ;nregistrat4
Ampli"icarea este e"ectuat prin 0C. )>ig41',4 -atele obinute sunt
introduse ;n calculator, iar programul interpreteaz !i red tipul alelic HLA4
9ipizarea 0C.-HH@0 reprezint o metod cu un ;nalt ni%el de rezoluie !i
acuratee4
Aceast metod este "oarte adec%at pentru analiza unui numr mare de
probe pe o perioad lung de timp, "iind "oarte e"icient pentru lucrul pacienilor
a"lai pe listele de a!teptare4 -eza%anta6ele acestei metode sunt durata mare a
timpului de lucru )K,5' ore, !i costul ridicat ;n cazul ;n care se utilizeaz pentru
un numr redus de probe4
30
F!%1201 Geno!+a$ea ADN HLA +$!n 'eo.a SSOP1
Geno!+a$ea HLA SSP
Ana din cele mai "rec%ente metode de biologie molecular utilizat pentru
genotiparea HLA este metoda de ampli"icare genic cu primeri cu sec%ena
speci"ic )HH0,4 0erec#ile de primeri sunt elaborate pentru a ampli"ica speci"ic
"iecare sec%en polimor" HLA care trebuie s "ie detectat, pentru a "urniza
ni%elul dorit de rezoluie al tipizrii4 9rebuie menionat c exist o perec#e de
primeri care ampli"ic un segment di"erit al A-<-ului !i care ;n mod curent este
inclus ;n acela!i tub ca !i control intern poziti% al ampli"icrii4 A-<-ul int
este adugat ;n reacie alturi de primeri !i celelalte componente de reacie
)A-< polimeraza, tamponul, Mg
2:
,apoi este per"ormat ciclizarea termic4
0rodusele de ampli"icare 0C. sunt uzual detectate prin separare pe un gel
de agaroz4 -up electro"orez, A-<-ul este marcat cu ethidium bromide !i
reacia este scori"icat pentru prezena produ!ilor de ampli"icare ai primerilor
controlul intern !i prezena sau absena produsului de ampli"icare speci"ic HLA4
Combinarea reaciilor HLA poziti%e !i negati%e este "olosit pentru a desemna
tipul HLA4 -ac nu sunt prezente produse de ampli"icare speci"ice HLA !i nu se
identi"ic nici produsul controlului intern, reacia este cotat ca e!ec !i trebuie
repetat4
<umrul de primeri inclu!i ;n test %ariaz ;n "uncie de locus !i de ni%elul
de rezoluie cerut4 0entru o rezoluie sczut HLA -.+ este ne%oie de 2'-8' de
31
reacii? pentru o tipizare A+C, ;n mod curent, este ne%oie de 1''-2'' de reacii4
Hetul de primeri pentru tipizare sunt "urnizai comercial4
Cum numrul de alele cunoscute este ;n continu cre!tere !i numrul
minim de reacii necesare pentru tipizarea HH0 cre!te de asemeni4
A%anta6ul ma6or al acestei metode este c dotarea cu ec#ipament este
minim, timpul necesar pentru testare este scurt, ceea ce "ace ca metoda s "ie
ideal pentru lucru ;n cazul donatorului cada%ru !i este u!or de per"ormat
)>ig411,4
-eza%anta6ele ma6ore sunt reprezentate de necesitatea unui numr mare
de reacii !i de ne%oia unei cantiti mari de A-< ;nalt puri"icat care s asigure
ca speci"icitatea reaciei nu este compromis4
Ana din slbiciunile "ormatelor de lucru actuale este c primerii de
tipizare HLA nu sunt ;ntodeauna controlai intern4 Ast"el, un rezultat "als negati%
poate "i obinut dac controlul intern )o perec#e di"erit de primeri, este poziti%,
iar primerii speci"ici HLA sunt dis"uncionali4
Mai nou, productorii acestor (ituri includ, de regul, !i controale interne
pentru "iecare reacie4
In $e&#'a5 'eo.a +a$"#$%e #$'4oa$ele ea+eI A-<-ul este extras
din prob !i amestecat cu primeri a%&nd speci"icitate pentru sec%enele
caracteristice ale "iecrui tip de HLA4 Ali5uote din prob sunt plasate ;n tuburi
separate "iecare conin&nd un set speci"ic de primeri !i apoi sunt ampli"icate ;n
termobloc4
0rodusele de ampli"icare sunt apoi %izualizate ;n electro"orez, gelul "iind
marcat cu ethidium bromide !i "otogra"iat ;n lumin AV4
0rezena benzilor indic "aptul c proba A-< a a%ut sec%ena
corespunztoare unui tip particular de HLA4
Absena ampli"icrii implic absena acelei sec%ene alelice particulare ;n
proba A-<4
9oate tuburile conin un primer suplimentar care ser%e!te ca !i control al
ampli"icrii 0C.4
32
F!%1221 Re&#laele 'eo.e! SSP ADN HLA1
T!+!&a$ea HLA 0a&a4 +e se"Den>!e$e (SBT)
9ipizarea HLA bazat pe sec%eniere )H+9, implic determinarea
sec%enei nucleotidice a unei segment ampli"icat aparin&nd unei gene HLA4
Aceasta se realizeaz "olosind un sec%enializator nucleotidic automat, iar
procedeul se des"!oar, pe scurt, dup cum urmeazI segmentul de gen HLA
este ampli"icat !i excesul de nucleotide !i primeri este ;ndep&rtat4 A-<-ul
ampli"icat este "olosit ca matri pentru reacia de sec%eniere iar produsele
reaciei de sec%eniere sunt puri"icate !i aplicate pe un gel de sec%eniere4
.eaciile H+9 conin un amestec de nucleotide normale !i nucleotide
modi"icate )dideoxinucleotide, care termin polimerizarea c&nd sunt ;ncorporate
;n spira replicati% a A-<4 An primer este "olosit pentru a iniia sinteza A-<
"olosind A-< polimeraza4 C&nd un dideoxinucleotid este ;ncorporat ;ntr-o nou
molecul A-< polimerizarea este terminat4 Ast"el, extensia primerilor este
generat ast"el ;nc&t se termin la "iecare poziie a moleculei A-<4
Mar(eri "luoresceni sunt utilizai pentru a distinge lanurile terminate de
"iecare baz )A, C, 5 sau 9,4 Mar(erii sunt ;ncorporai "olosind culori pentru
primeri sau culori pentru dideoxinucleotidele terminatoare4
33
Bxtensiile primerilor sunt separate pe un gel care rezol% di"erenele de
dimensiuni ale acestor sec%ene A-< p&n la ni%el de o singur baz4 5elul este
e"ectuat ;ntr-un sec%enializator ce conine laser care excit moleculele
mar(erilor !i un detector care ;nregistreaz emisia "iecrui mar(er4
Soft3"re6#l con%erte!te datele primare ;ntr-o cromatogram !i aliniaz
automat nucleotidele pentru "iecare poziie4 -atele sunt editate automat !i
sec%ena este comparat cu o baz de date conin&nd toate sec%enele cunoscute,
pentru a alinia alelele ;n prob4
An a%anta6 al acestei metode este c "iecare sec%en, din "iecare spir
A-< poate "i determinat pentru a con"irma tipul4 Acest lucru este recomandat
deoarece arte"actele te#nice pot determina c&teodat pierderea unui nucleotid
particular care poate conduce la o interpretare incorect a datelor de la
#eterozigoi4
In "on"l#&!e5 Da$!a>!!le '!"! *n se"Den>a %en!"4 +o 3! $eleDae n#'a!
+$!n se"Den>!e$e .!$e"4 "a$e "on3e$4 o a"#$ae>e +e$3e"4 $e&#laelo$1
In $e&#'a5 ea+ele 'eo.e! s#nI A-<-ul este izolat din prob !i
ampli"icat prin 0C. "olosind primeri speci"ici de locus, grup sau alel4
0rodusul de ampli"icare este apoi distribuit ;n 1 tuburi, "iecare conin&nd
polimeraz, dideoxinucleotide )d<90, !i amestecuri de sec%eniere4 >iecare din
cele 1 amestecuri este marcat cu un terminator de sec%ene "luorescentI tubul 1
cu citozina marcat )CW,? tubul 2 cu guanin marcat )5W,? tubul 8 cu t#Xmin
marcat )9W,, iar tubul 1 cu adenin marcat )AW,4
0rodusul este ampli"icat prin 0C. pentru a ;ncorpora terminatorii marcai4
Cele 1 tuburi cu probe sunt puse ;n electro"orez pentru a separa produsele de
extensie ale primerilor ;n "uncie de dimensiuni4
Hec%enializatorul detecteaz "luorescena ;n "iecare band !i soft0are-ul
con%erte!te datele ;n sec%ene nucleotidice4 -e asemenea, soft0are-ul compar
sec%enele cu o baz de date de sec%ene HLA !i desci"reaz tipul HLA4
Te/nolo%!a +icro"rr"4
0rincipiul de baz al #ibridizrii A-< microarra9 este legarea
complementar a sec%enelor de acizi nucleici simplu spiralate4 0e un
34
microarra9 )numit !i microcip,, sec%ene cunoscute denumite inte, sunt ata!ate
la locaii "ixe )puncte - spots, pe o supra"a solid cum este sticla, "olosind
punctarea robotic )>ig412,4
Cele 'a! 3$e"Den 3olos!e s#n .o#4 !+#$! .e ADN micro"rr"4G
a4 cA-< sau A-< genomic arra9, cu sec%ene lungi de A-<
complementar de 5''-54''' perec#i de baze imobilizate,
"iecare reprezent&nd o gen sau un "ragment speci"ic de
cromozom4
b4 ,ligo arra9, ale cror microcipuri au sec%ene A-< mai
scurte )oligo-nucleotide,, de 2'-1'' perec#i de baze
imobilizate ca inte? sec%enele necunoscute ;n soluie numite
sonde )cum este cA-< sau A.< marcat "luorescent,, se %or
lega la inte complementare imobilizate4
Acela!i principiu se poate aplica !i altor inte !i sonde caI proteine, glicani, etc4
0entru HLA, te#nologia microarra9 %a trebui s-!i do%edeasc e"iciena !i
per"ormana, deoarece sec%enierea este un concurent redutabil ;n ceea ce
pri%e!te sensibilitatea, speci"icitatea !i desci"rarea de alele noi4

F!%1221 +icro"rr"4 J '!"$o"!+ ADN HLA1
L!'!ele 'eo.elo$ .e 0!olo%!e 'ole"#la$4
35
Metodele care detecteaz sec%ene c#eie polimor"e, pentru a deduce un tip
HLA pot, uneori, elabora un tip incorect dac sunt prezente alele necunoscute4
Aceste metode nu pot detecta ;ntodeauna alele noi la ni%elul locusurilor
polimor"e testate4
Mai mult, probleme pot aprea cu di"erite interpretri ale datelor
depinz&nd de lista sec%enelor HLA "olosite pentru asamblarea tipului HLA4
Aceste circumstane "ac s "ie di"icil compararea tipizrilor per"ormate la date
di"erite4
=n completare, extrapolarea de la datele de sec%eniere, limitate la un
anumit tip HLA, poate determina uneori asamblarea de di"erite tipuri depinz&nd
de metoda !i reacti%ii "olosii pentru tipizare4
@ limitare ma6or, care a"ecteaz tipizarea ampliconilor #eterozigoi, este
c multiplele interpretri ale datelor sunt posibile pentru anumite combinaii de
alele4 Aceast situatie poate "i rezol%at prin per"ormarea tipizrii pe alele
ampli"icate selecti%4 C&teodat ambiguitile pot "i rezol%ate "olosind o
combinaie de date pro%enite de la dou metode cum ar "i de exemplu, HH@0 !i
HH0 sau H+9 !i HH04
-in aceste considerente, este obligatoriu ca toate centrele de
imunogenetic !i #istocompatibilitate s aib posibilitatea de a per"orma cel
putin dou metode de genotipare HLA4
@ limitare ma6or este dat de "aptul c interpretarea datelor este
in"luenat de baza de date de sec%ene "olosite pentru a interpreta rezultatele
obinute4 H+9, care determin sec%ena unui segment ce reprezint o poriune
substanial a genei HLA, este mai puin susceptibil la aceste probleme4 -ac
sec%ena este determinat pentru o alel ampli"icat selecti%, sec%ena este
precis4 -eoarece multe laboratoare nu determin sec%ena pentru ;ntreaga gen
HLA, polimor"ismul din a"ara regiunii sec%enei nu este detectat4
Multe laboratoare per"ormeaz metoda H+9 "olosind matrie #eterozigote
cum ar "i dou alele HLA-A care sunt co-ampli"icate4 Aceste date sunt tipic
interpretate compar&nd sec%ena determinat cu sec%enele pentru toate
combinaiile posibile de alele cunoscute4
Aneori aceste rezultate sunt ambigue, cum ar "i multiplele interpretri ale
rezultatelor de sec%eniere ale datelor #eterozigoilor4 -ac baza de date al
36
sec%enelor HLA este lrgit ca numr, atunci numrul ambiguitilor sau al
interpretrilor alternati%e ale datelor obinute cre!te4
EDal#a$ea a"#$ae>e! 'eo.elo$ .e !+!&a$e HLA
Complexitatea identi"icrii alelelor HLA necesit asigurarea unor
rezultate de ;nalt calitate4
Htandardele actualizate !i detaliate pentru tipizarea HLA bazat pe A-<,
sunt meninute de ctre Hocietatea American pentru Histocompatibilitate !i
$munogenetic )AHH$, 213 !i de ctre >ederaia Buropean de $munogenetic
)B>$,4
Centrele de $munogenetic !i Histocompatibilitate sunt obligate s
participe ;n sc#eme de control extern de calitate4
In !+!&a$ea HLA "al!aea ese o +$o0le'4 "/e!e1 Conceptul de control
de calitate ;n laborator asigur c testul adec%at este per"ormat cu o competen
te#nic de un standard ;nalt pe proba adec%at !i c rezultatul corect este trimis
cu interpretarea cali"icat ctre clinicianul care o cere4 9estele imunologice de
#istocompatibilitate au ne%oie de interpretarea expertului ast"el ;nc&t rezultatele
a6unse ;n clinic s poat "i ;nelese corect de ctre clinician4
Cu alte cu%inte, laboratorul "ace parte din ec#ipa de lucru a clinicii,
imunologul a%&nd un rol important ;n stabilirea gradului de potri%ire HLA dintre
donator !i primitor !i ;n a da %erdictul pentru transplant din punct de %edere
imunologic4
-e asemenea, e%aluarea imunologic post-transplant renal este la "el de
important, dozarea imunosupresiei !i determinarea anticorpilor anti-HLA
orient&nd terapia de ;ntreinere4
Centrele de imunogenetic !i #istocompatibilitate din Buropa sunt
obligate s se acrediteze cu >ederaia Buropean de $munogenetic )B>$,, care
documenteaz !i actualizeaz toate te#nicile de lucru ;n ceea ce pri%e!te
tipizarea HLA, determinarea anticorpilor citotoxici !i testul crossmatch4
>ederaia Buropean de $munogenetic )B>$, elaboreaz standardele de
per"orman ;n imunogenetic !i #istocompatibilitate4
37
EVALUAREA IMUNOLOGICK IN
TRANSPLANTUL RENAL
CCCCCCCCCC CCCCCCCCCCC
Ileana Consan!nes"#5 Ioanel S!nes"#5 Ana Mo!se
Sa#s#l "#$en al $ans+lan#l#! $enal
0rimul transplant renal de succes a "ost per"ormat la +oston ;n 1K51 ;ntre
gemeni genetic identici4 $n .omania, primul transplant renal a "ost e"ectuat de
ctre -omnul 0ro"esor -r4 Bugen 0roca ;n anul 1K7' la $nstitutul Clinic
>undeni4 =n anul 1KKJ s-a e"ectuat primul transplant renal de la cada%ru, dup
recoltare multiorgan4 =n anul 1KK7 a "ost per"ormat primul transplant renal la un
pacient diabetic4 =n acela!i an, s-a e"ectuat primul transplant renal la un adult cu
insu"icien renal cronic prin neoplasm4 Heria per"ormanelor continu, ;n
1KKK a%&nd loc primul transplant renal la copil, cu rinic#i prele%at de la cada%ru
iar ;n 2''5 realiz&ndu-se primul transplant renal la un copil ane"ric prin tumora
Yilms bilateral4
9ransplantul renal este tratamentul cel mai e"icient pentru marea
ma6oritate a pacienilor cu insu"icien renal cronic, ;mbuntind semni"icati%
calitatea %ieii, ;n anumite cazuri cresc&nd sperana de %ia4
$munosupresia actual per"ormant, a condus la o e%oluie ;n timp mult
;mbuntit, supra%ieuirea alogre"elor renale la un an !i respecti% la cinci ani
dup transplantul renal de la cada%ru "iind ;n prezent, de aproximati% K'R !i
respecti% J'R 2834
Acest succes a dus la "$e7e$ea n#'4$#l#! .e $ans+lane $enale care
nu pot "i susinute doar de donatori cada%ru, al cror numr rm&ne staionar4
38
=n prezent se utilizeaz din ce ;n ce mai mult rinic#i de la a!a numiii
donatori PmarginaliQ sau donatori cada%ru cu criterii de donare PextinseQ sau de
la donatori non/heart/beating4 -e asemenea se utilizeaz "oarte mult !i rinic#ii
pro%enii de la donatori %ii care acoper aproximati% 25R din transplanturile
renale ;n Marea +ritanie !i 5'R ;n Htatele Anite 2834
=n .om&nia, programul de transplant renal se bazeaz aproape exclusi% pe
donatori %ii, donatorii cada%ru "iind ;n medie de 2' pe an4
Actualmente, ;n transplantul renal, toate e"orturile se concentreaz pentru
;mbuntirea pe termen lung a e%oluiei pacienilor4
Fa"o$! .ee$'!nan>! a! eDol#>!e! +e e$'en l#n%
=mbuntirile supra%ieuirii pe termen lung sunt ;n principal rezultatul
unei e%oluii bune ;n primul an post-transplant 21234
.ata pierderilor alogre"elor renale dup un an a rmas, ;ns, relati%
nesc#imbat din anii 1K7', la 8 * 5 R pe an4 0ierderea alogre"elor se datoreaz
;n principal ne"ropatiei cronice a alogre"ei4 .ecurena bolii renale iniiale are loc
;n aproximati% 1'R din cazuri 2834
>actorii de risc imunologic pentru ne"ropatia cronic a alogre"ei includ
episoadele de re6et !i imunosupresia suboptimal4
6issmatch-urile ;ntre donatori !i primitori pentru locusurile HLA--., HLA-A
!i HLA-+ reduce de asemeni, supra%ieuirea pe termen lung ;n transplantul
renal4
>actorii non-imunologici care duc la ne"ropatia cronic a alogre"ei sunt
numero!i !i includ %&rsta ;naintat a primitorului, sexul masculin, #ipertensiunea
!i %&rsta ;naintat a donatorului4
-eoarece nu exist un tratament e"icient pentru ne"ropatia cronic a
alogre"ei, !i aceasta necesit retransplant, este important s se ;ncerce pe c&t
posibil a minimaliza "actorii de risc asociai4
LLLLL
0entru transplantul renal, din punct de %edere imunologic, trebuie
parcurse trei etape4 -ac pacientul cu insu"icien renal cronic se a"l ;nscris
pe lista de a!teptare de c&i%a ani, se e%alueaz periodic detecia !i identi"icarea
anticorpilor citotoxici4
39
0acienii pot dez%olta aloanticorpi ca rspuns "a de moleculele HLA
strine dob&ndite din sarcini, trans"uzii sau alogre"e anterioare4 Ace!ti anticorpi
pot "i cauza re6etului alogre"ei renale4
=n momentul ;n care se pune problema transplantului renal se e"ectueaz
tipizarea HLA, at&t pentru primitor c&t !i pentru donator, iar ;n etapa a treia se
e"ectueaz testul crossmatch4 !rossmatching-ul a "ost dez%oltat pentru a detecta
aloanticorpii donator * speci"ici ;n serul pacienilor care candideaz pentru un
transplant renal4 >olosirea te#nicilor de crossmatch sensibile, pentru a e%alua
compatibilitatea primitorilor !i donatorilor de rinic#i, a eliminat "enomenul de
re6et #iperacut al alogre"elor renale !i a a%ut o contribuie ma6or la
;mbuntirea supra%ieuirii alogre"elor !i a pacienilor4
9ipizarea HLA 6oac un rol "oarte important ;n transplantul renal4
Caracteristica moleculelor HLA este imensa lor di%ersitate la ni%elul populaiei
umane4 9ipizarea HLA detecteaz !i clasi"ic aceast di%ersitate4 -e-a lungul
anilor, odat cu progresele te#nicii, au "ost ;n mod continuu descoperite noi
molecule HLA, ast"el ;nc&t ;n 1KKK s-a trecut o"icial de numrul de 1''' de alele
HLA recunoscute 2234
$denti"icarea alelelor HLA este, cu siguran, problema actual cea mai
complex ;n diagnosticul molecular4
=n prezent se cunosc mai mult de 18'' alele ;n populaia din ;ntreaga
lume, la ni%elul celor 12 locusuri exprimate ale clasei $ !i clasei a $$-a 21'34
0olipeptidele codi"icate de ctre aceste alele di"er una de alta prin una
sau mai multe substituii aminoacidice care sunt de "apt mutaii cu sens gre!it
)missens, 28'34
<u exist alte locusuri genetice umane mai polimor"e dec&t locusurile
HLA4 -e exemplu, locusul HLA-+ are mai mult de 1'' de alele cunoscute 28'34
=n prezent este cunoscut sec%ena genomic complet a MHC 2234
MHC conine mai mult de 2'' de gene, iar dintre acestea mai mult de 2'
de locusuri codi"ic proteine implicate ;n legarea !i prezentarea produselor de
degradare peptidice ale proteinelor la receptorul antigenic al celulei 94
Ast"el, MHC particip la di"erite ni%ele ;n procesarea peptidelor
antigenice !i la prezentarea acestora 22134 =n completarea genelor HLA
exprimate, exist numeroase pseudogene de clasa $ !i clasa a $$-a care sunt
40
localizate ;n complexul ma6or de #istocompatibilitate4 Aceste pseudogene pun
probleme dez%oltrii metodelor moleculare de tipizare HLA, deoarece este
necesar a tipiza genele exprimate "r a "i posibil a se detecta !i pseudogenele
apropiat ;nrudite4 >oarte rar prezena unei pseudogene poate duce la ambiguiti
ale tipizrii moleculare HLA4
<umrul de alele cunoscute, coresunztoare unei speci"iciti particulare,
%ariaz de la 1 la mai mult de 5' 2234 A%anta6ul imens al metodelor de tipizare
HLA moleculare este c depisteaz alturi de alelele exprimate !i alelele nule,
silenioase sau puin exprimate4 .elaia ;ntre speci"icitile serologice !i tipurile
moleculare nu este ;ntodeauna direct )>ig4K,4 -e exemplu, multe alele recent
descoperite nu au "ost tipizate prin metode serologice !i de aceea nu au
speci"icitatea serologic de"init4
=n contrast "a de metodele de tipizare serologice, tipizarea HLA
molecular poate detecta orice sec%en nucleotidic polimor"4 Aceasta
"urnizeaz oportunitatea de a per"orma tipizare HLA la di"erite ni%ele de
rezoluie ;ncep&nd de la grupuri de alele p&n la alele idi%iduale4
9ipizarea care de"ine!te grupuri de alele, ;n mod curent aproxim&nd
speci"icitile serologice, este considerat de rezoluie 6oas sau generic )de
exemplu, HLA--.+1-'1,4 9ipizarea prin metode care rezol% toate alelele
cunoscute este considerat de ;nalt rezoluie )de exemplu, HLA--.+1
W
'1'1,4
9ipizarea care rezol% tipurile HLA dincolo de speci"icitile serologice, dar nu
atinge ni%elul alelic, este descris ca tipizare de rezoluie medie )de exemplu,
HLA- -.+1* '1'1T'KT18T1T21T2T88,4
Complexitatea deosebit este cauzat de di"erenele dintre tipizrile HLA
moleculare !i exist o ne%oie cresc&nd continu, de a actualiza interpretarea
datelor de tipizare moleculare ca !i numrul de alele HLA cunoscute4
C&te%a metode moleculare detecteaz sec%enele c#eie polimor"e !i
"olosesc aceste date pentru a depista alelele4 $nterpretarea acestor date este
in"luenat de baza de date a sec%enelor HLA "olosit pentru interpretarea
acestor rezultate4
0reponderena mare a polimor"ismului de la ni%elul genelor clasei $ !i a
$$-a are loc ;n exonii care codi"ic G1 !i G2 la clasa $ )exonii 2-8, !i G1 !i F1 la
clasa a$$-a, )exonul 2,, domenii care leag peptidele procesate 21734
41
Anumite poziii ale nucleotidelor la ni%elul acestor exoni sunt in%ariabile,
altele pot a%ea dou, trei sau c#iar patru din bazele existente ca posibiliti4
Ast"el, anumii codoni sunt constani pe c&nd alii expun %ariate grade de
%ariabilitate4 A%&nd ;n %edere c exonii polimor"i sunt relati%i scuri ;n lungime
)aproximati% 25' nucleotide, ei pot "i u!or ampli"icai ;n 0C. pentru studii de
diagnostic molecular4
-e exemplu, toate alelele -.+1 au codi"icat glicina la poziia 2' pe
c&nd alte alele pot codi"ica glicina, %alina sau acidul aspartic la ni%elul
codonului 74 Cele 27K de alele -.+1 apar din multiplele combinaii posibile
ale acestor polimor"isme 2834
EDal#a$ea an!"o$+!lo$ "!oo,!"!
S"$een!n%6#l an!"o$+!lo$ "!oo,!"! +$!n 'eo.a l!'3o"!oo,!"!4!!
.e+en.ene .e "o'+le'en
Hcreening-ul anticorpilor anti HLA este "olosit pentru a detecta prezena
acestora la pacienii care sunt candidai pentru transplant renal4 Hcreening-ul a
"ost ;n mod tradiional, per"ormat "olosind metoda lim"ocitotoxicittii
dependente de complement4
Cele mai multe laboratoare e%alueaz lunar, din punct de %edere al
screening-ului anticorpilor citotoxici, pacienii a"lai pe listele de a!teptare4
Herurile "iecrui pacient sunt testate pentru prezena anticorpilor ;mpotri%a unui
panel de celule care conin cele mai "rec%ente tipuri HLA ;n populaia donatoare,
prezent la ni%elul unor di"erite combinaii de HLA-A !i + )sau -. !i -/
pentru clasa $$,, pentru a permite determinarea speci"icitilor aloanticorpilor
21834 >ormatul poate "i ast"el g&ndit ca un test ;n mas pentru toi pacienii sau
un test pentru un singur pacient4 0rocentul de anticorpi ,ca panel )0.A,, este
calculat ca procent al numrului de celule poziti%e "a de numrul total de
celule din panel, multiplicat cu 1''4
0.A este indicatorul imunizrii pacientului "a de HLA4 9rebuie
menionat c speci"icitatea anticorpilor din serurile cu un 0.A ;nalt nu poate "i
determinat, de cele mai multe ori4 Anumite proceduri cum ar "i diluia serurilor
sau ambele, se pot utiliza pentru a determina identi"icarea anticorpilor4
42
S"$een!n%6#l an!"o$+!lo$ "!oo,!"! +$!n 'eo.a ELISA
.ecent a "ost dez%oltat o metod "oarte sensibil de "az solid pentru
detecia anticorpilor anti-HLA "olosind te#nica BL$HA4 0reparate puri"icate ale
antigenelor HLA sunt peliculizate pe plcue de plastic !i sunt utilizate pentru a
capta anticorpii anti-HLA din serul pacienilor4
=n acest "el se e%it "olosirea celulelor cu ;ntregul lor complex de mar(eri
de supra"a4 .eaciile "als poziti%e, datorate legrii anticorpilor la antigenele
non HLA, sunt e%itate prin "olosirea acestei te#nologii4 Antigenele HLA
puri"icate, cu a"initate, sunt izolate din plcue sanguine sau din liniile celulare
lim"oblastoide, cumulate !i "ixate la baza godeului din plcua de plastic ;n care
are loc testul4 Antigenele deri%ate din placuele sanguine sunt numai HLA de
clasa $, pe c&nd antigenele din liniile celulare lim"oblastoide pot "i de clasa $, de
clasa $$ sau combinaii ale ambelor tipuri de antigene 21K34
A%anta6ele testului BL$HA, "a de testul con%enional de lim"otoxicitate
dependent de complement, includ procesarea rapid !i u!oar a mai multor
probe, prin cititoare automate de plcue, !i eliminarea dependenei testului de
%iabilitatea lim"ocitelor !i a complementului 22234
Herul pacientului este incubat ;n godeul plcuei respecti%e unde orice
anticorp anti-HLA de a%iditate adec%at se leag de antigenul "ixat4 -up
;ndeprtarea anticorpilor nelegai este adugat un anticorp cuplat cu o enzim
care este direcionat ;mpotri%a $g5 uman4 Adugarea substratului enzimatic
conduce la dez%oltarea reaciei de culoare ;n cazul testelor poziti%e4
>ormatul de interpretare a citirii rezultatelor pentru detecia anticorpilor
citotoxici prin te#ica BL$HA poate "i, "ie poziti% )anticorpi prezeni ,, "ie negati%
)anticorpi abseni,4 <u se calculeaz 0.A, iar testul de identi"icare a anticorpilor
citotoxici ;n cazul reaciei poziti%e, se e"ectueaz tot prin te#nica BL$HA !i are o
%aloare diagnostic pretransplant deosebit de important4
-e exemplu, este important de !tiut dac primitorul a"lat pe lista de
a!teptare este imunizat !i dac anticorpii citotoxici identi"icai sunt identici cu
alelele HLA ale potenialului su donator de rinic#i4
=n acest caz, testul crossmatch %a "i clar poziti% iar pericolul unui re6et
acut, imediat ;n perioada post-transplant, este iminent4
43
9estul BL$HA este "ormulat numai pentru detecia anticorpilor HLA de tip
$g54 =n consecint, testul BL$HA standard nu poate detecta anticorpii citotoxici
de tip $gM !i anticorpii non-HLA dar detecteaz anticorpii $g5 ne"ixatori de
complement pe care testele de citotoxicitate ;i omit4
9estul BL$HA poate e!ua ;n a detecta un anticorp cu speci"icitate pentru
un antigen HLA rar, care poate "i absent sau la ni%ele "oarte sczute ;n cumulul
de antigene4 .ecent au "ost dez%oltate teste BL$HA capabile s identi"ice !i
anticorpii de tip $gM4
In $e&#'a5 +$!n"!+!#l 'eo.e! .e l#"$# pentru screening-ul anticorpilor
citotoxici de clasa $ !i a$$-a prin metoda BL$HA esteI serul pacientului este
adugat ;n godeuri cptu!ite cu glicoproteine HLA clasa $, respecti% clasa a$$-a,
permi&nd anticorpilor s se lege )dac sunt prezeni,4 Anticorpii nelegai
sunt apoi splai4 He adaug ;n godeuri un reacti% ce conine globulin anti-
uman )anti-$g5, cuplat cu "os"ataz alcalin !i se incubeaz4 Anticorpii anti-
$g5 nelegai sunt apoi splai !i se adaug substratul 0<00 )p-nitro"enil "os"at,4
-up 8' de minute de incubare reacia este oprit adug&nd soluie de #idroxid
de sodiu4 -ensitatea optic a probelor este msurat cu un spectro"otometru4
Ine$+$ea$ea $e&#laelo$ #creenin&5$!$i )entr$ A0TICORPII "nti56LA
c!"#" I 7i c!"#" AII5A e#te1
Re-$!t"te!e c$ "b#orb"n/' m"i m"re #"$ e&"!' %e 2 ori %ec8t me%i"
contro"!e!or ne&"ti,e #$nt PO9ITI(E.
0ot'1 %iferen/e!e %e citire :ntre "b#orb"n/e )entr$ %$)!ic"te!e re-$!t"te!or n$
treb$ie #' fie m"i m"ri %e 20;. Pentr$ " n$ interfer" citire", )e #)"te!e )!'cii
n$ TRE2UIE S e.i#te $rme %e re"cti,i #"$ $rme %e t"!c.
I.en!3!"a$ea an!"o$+!lo$ "!oo,!"! +$!n 'eo.a ELISA
Meo.a .e !.en!3!"a$e a anticorpilor anti HLA clasa $ !i a$$-a prin te#nica
BL$HA are, ca principiu de lucru urmtoarele etapeI
44
14 Herul pacientului este adugat ;n godeuri cptusite cu glicoproteine
HLA clasa $, respecti% clasa a$$-a, permi&nd anticorpilor s se lege
)daca sunt prezeni,4
24 Anticorpii nelegai sunt apoi splai4
84 He adaug ;n godeuri un reacti% ce conine globulin anti-uman
)anti-$g5, cuplat cu "os"ataz alcalin !i se incubeaz4
14 Anticorpii anti-$g5 nelegai sunt apoi splai !i se adaug substratul
0<00 )p-nitro"enil "os"at,4
54 -up 8' de minute de incubare reacia este stopat adug&nd
soluie de #idroxid de sodiu4
4 -ensitatea optic a probelor este msurat cu un spectro"otometru4
Ine$+$ea$ea $e&#laelo$ Pentr$ i%entific"re" "nticor)i!or "nti56LA c!"#"
I, ,"!i%"re" re-$!t"te!or e#te efect$"t' %"c'1
me%i" contro"!e!or ne&"ti,e < 0,22=
me%i" contro"!e!or )o-iti,e > 0,900
Pentr$ i%entific"re" %e "nti56LA c!"#" " II5", ,"!i%"re" re-$!t"te!or
e#te efect$"t' %"c'1
me%i" contro"!e!or ne&"ti,e < 0,22=
me%i" contro"!e!or )o-iti,e > ?,000
At&t pentru identi"icarea de anti-HLA de clasa $ c&t !i anti-#la clasa a$$-a,
rezultatele cu %aloarea densiti optice egal sau mai mare dec&t %aloarea prag
)cut off, sunt considerate poziti%e 22J34
45
$ clasa de HLA antigene continand godeuri de numZr
1'' poziti%e rezultate <umZr
0.A R

=
$$ clasa de HLA antigene continand godeuri de numZr
1'' poziti%e rezultate <umZr
0.A R

=
F!%1281 P$!n"!+!#l 'eo.e! ELISA +en$# .ee">!a an!"o$+!lo$ "!oo,!"!1
S"$een!n%6#l an!"o$+!lo$ "!oo,!"! +$!n 'eo.a L#'!ne,
@dat cu cre!terea numrului de pacieni de pe lista de a!teptare, se pune
problema identi"icrii anticorpilor citotoxici pentru a e%alua !ansele acestor
pacieni de a e"ectua transplantul renal ;n condiii imunologice de siguran4
Histemul multiplex Luminex poate "i "olosit at&t pentru screening-ul c&t !i pentru
identi"icarea anticorpilor citotoxici a%&nd o sensibilitate !i o speci"icitate
per"ormant4
0rincipiul acestei noi te#nologii este capacitatea de a msura simultan
analii multiplii ;ntr-un singur godeu de reacie4
Cu te#nologia Luminex, reaciile moleculare au loc pe supra"aa seturilor
de micros"ere colorate codi"icat, "olosind un amestec de 2 colorani "luoresceni
de intensitate di"erit4
Micros"erele acioneaz ca purttori moleculari care captureaz o prob !i
apoi sunt etic#etate cu un raportor "luorescent care se leag la proba capturat de
pe micros"er4 Micros"erele sunt apoi trans"erate ;ntr-un instrument care
"olose!te micro"luide pentru a le alinia ;ntr-un singur !ir care %a trece printre
dou lasere4 An laser lumineaz culorile din interiorul micros"erei, pentru a
46
identi"ica bila care %a "i citit, !i al doilea laser excit culoarea de pe supra"aa
bilei4 0rintr-o te#nic optic a%ansat sunt captate semnalele de culoare !i
procesarea digital a semnalelor este translatat, ;n timp real, ;n date cantitati%e
pentru "iecare reacie 22'34
F!%1291 Te/nolo%!a L#'!ne, .e !.en!3!"a$e a an!"o$+!lo$1
Compar&nd Luminex-ul cu alte metodologii "olosite pentru screening-ul
anticorpilor )cum sunt C-C-AH5, BL$HA !i "loNcitometrie,, a "ost rele%at
"aptul c sensibilitatea acestei metode este comparabil cu cea a "loNcitometriei
2113 )tabelul 8,4
Ta0el#l n$1 81 Co'+a$a>!e *n$e 'eo.ele a"#ale 3olos!e +en$# .ee">!a
an!"o$+!lo$ "!oo,!"!
Meo.4 An!"o$+! .ee"a>! H oal M
C-C-AH5 12 T 17
BL$HA 82 T 17
Luminex 11 T J
>loNcitometrie 17 T J8
47
0rin te#nica Luminex se pot lucra deodat K de probe, ast"el ;nc&t, se
poate "ace screening-ul !i identi"icarea anticorpilor pe o singur plac, ceea ce
;nseamn e"icien maxim ;n testarea pacienilor 21134
Tes#l "$oss'a"/
Hcopul testului crossmatch este de a detecta prezena, ;n serul pacienilor,
a anticorpilor direcionai ;mpotri%a antigenelor HLA ale potenialului donator
de rinic#i4 -ac sunt prezeni, anticorpii semnalizeaz c sistemul imun al
primitorului a "ost sensibilizat "a de alelele donatorului !i este susceptibil a
re6eta puternic orice alogre" ce poart respecti%ele antigene4
La ni%elul rinic#iului transplantat, inta principal a acestor anticorpi sunt
antigenele HLA de pe endoteliul %ascular al capilarelor !i arteriolelor4
Complexele antigen HLA * anticorp de pe endoteliu acti%eaz
complementul !i duc la distrugerea celular, apoi, plcuele agregate, e%entual
produc&nd c#eaguri de "ibrin care ;ngusteaz %asele, cauzeaz necroza
isc#emic4
C#iar !i titrul sczut de anticorpi, ;n particular cei direcionai ;mpotri%a
clasei $ de antigene, pot contribui la re6etul alogre"ei renale4
-e asemenea, un alt rol important al testului crossmatch este per"ormana
de sensibilitate !i speci"icitate pentru antigenele HLA4
Tes#l "$oss'a"/ +$!n 'eo.a l!'3o"!oo,!"!4>!!
An test crossmatch simplu poate "i per"ormat prin metoda citotoxicittii
clasice utiliz&nd drept int lim"ocitele din s&ngele peri"eric al donatorului4 Acest
tip de crossmatch este "olosit curent ca !i e%aluare preliminar pentru potenialii
donatori %ii ;nrudii pentru transplant de alogre" renal4 Lim"ocitele din s&ngele
peri"eric sunt aproximati% 7'R celule 9 care poart numai antigene HLA de
clasa $ !i 2'R celule + !i monocite care poart at&t antigene HLA de clasa $ c&t
!i de clasa a$$-a4
An rezultat crossmatch intens poziti%, prin citotoxicitate dependent de
complement )C-C, )5'R sau mai mult, celule moarte per godeu,, indic ;n mod
clar prezena anticorpilor anti-HLA de clasa $4
48
Ast"el, 1'-2'R din moartea celular poate rezulta dintr-un anticorp
speci"ic pentru clasa a$$-a sau se poat datora unui anticorp slab anti clasa $4
0entru a rezol%a speci"icitatea anticorpilor, crossmatch-ul este per"ormat apoi pe
preparate celulare ;mbogite at&t cu lim"ocite 9 c&t !i +4
Te#t$! cro##m"tc@ )entr$ ce!$!" T
!rossmatch-ul pentru celula 9 se per"ormeaz la temperatura camerei dar
!i la 8J
'
C ;n anumite laboratoare pentru a e%ita legarea anticorpilor reacti%i la
rece, presupu!i a "i autoreacti%i4 Un es cro##m"tc@ +o&!!D +e "el#la T5 +$!n
o$!"e 'eo.45 "on$a!n.!"4 $ans+lan#l $enal !n.!3e$en "= .e sla0 ese
n!Del#l .e $ea">!e1 Bxist c&te%a metode pentru ;mbuntirea sensibilitii
testului crossmatch prin C-C pentru celula 9I
14 $ncubaia extins pentru a cre!te sensibilitatea * cea mai simpl modi"icare a
testului de citotoxicitate este extinderea timpului de incubare al celulelor,
serului !i complementului4
24 Btapa de splare Amos * aceast metod intercaleaz o etap de splare dup
incubarea celulelor donatorului cu serul primitorului ;nainte de adugarea
complementului, pentru ;ndeprtarea "actorilor anticomplementari din ser4
84 5lobulina anti-uman - citotoxicitatea anumitor anticorpi poate "i
ampli"icat prin adugarea unui anticorp, ;ntr-o etap ulterioar, ;n mod
obi!nuit un reacti% policlonal tip imunoglobulin anti-uman )AH5,4
In $e&#'a5 es#l cro##m"tc@ pentru celula 9 prin metoda C-C prezint
urmtoarele etape de lucruI
1 SL din serul primitorului este dispensat ;n multiple godeuri ale
plcuei microtest? pentru pacienii imunizai sunt puse ;n reacie
seruri multiple cu 0.A cunoscut4
Hunt adugate celulele 9 ale donatorului )2-8 x 1'

, !i testul este
incubat pentru 8'-' de minute4
0entru a cre!te sensibilitatea testului, serurile sunt splate din
godeuri ;nainte de adugarea complementului4
Adugarea unui al doilea anticorp, cum este $g5-ul de capr anti-
uman cre!te !i mai mult sensibilitatea4
-up c&te%a minute de incubare cu AH5, este adugat
complementul !i testul este incubat pentru ;nc ' de minute4
49
$ncubarea de lung durat a complementului p&n la 8 ore, este
uneori per"ormat ;n loc de adaugarea AH54
-ac serul primitorului conine anticorpi care reacioneaz cu
celulele donatorului, celulele sunt omor&te !i colorantul )eozina sau
ethidium bromide, ptrunde ;n interiorul celulelor indic&nd un test
crossmatch poziti%4
Un es cro##m"tc@ +o&!!D +en$# "el#la T ese o "on$a!n.!"a>!e
+en$# $ans+lan#l $enal1
Te#t$! cro##m"tc@ )entr$ ce!$!" 2
9estul crossmatch pentru anticorpi cu speci"icitate "a de antigene HLA
de clasa a$$-a necesit "olosirea lim"ocitelor + ca !i inte !i aceia!i timpi de
incubare extins ca !i la tipizarea serologic HLA -. !i -/4 An test
crossmatch poziti% pe celula + poate apare datorit unor anticorpi care se leag
la antigene HLA de clasa $ sau de clasa a$$-a4
Mai mult, celulele + sunt un indicator mai sensibil pentru anticorpii slabi
de clasa $ deoarece ei poart molecule de clasa $ ;ntr-o mai mare densitate dec&t
celulele 94 !rossmatch-ul prin "loNcitometrie poate distinge ;ntre anticorpii +
ade%rai !i anticorpii slabi de clasa $ ai unui crossmatch citotoxic poziti% pe
celul +4
0entru e%oluia transplantului renal, anticorpilor pre"ormai "a de
antigenele HLA de clasa a$$-a nu este clar ;nc semni"icaia4
9ransplantul renal de succes la pacieni cu titru sczut de anticorpi anti
HLA clasa a$$-a "ost raportat, dup cum a "ost raportat !i "enomenul de re6et acut
al alogre"ei renale ;n cazul titrului crescut al anticorpilor anti-HLA clasa a$$-a4
Bste posibil ca pierderea gre"elor transplantate ;n cazul crossmatch-ului
negati% pe celula 9 !i poziti% pe celula + s "ie datorat componentelor anti-
HLA clasa $ ale acestor seruri aloreacti%e4
50
F!%12:
C$oss'a"/ +$!n e/n!"a ELISA +en$# "el#la T 7! B
BL$HA "olose!te anticorpi anti-HLA de clasa $ !i respecti% clasa a$$-a,
care sunt peliculizate ;n microgodeurile plcuei4 [ntr-o prim etap se pune
lizatul de lim"ocite extrase din s&ngele donatorului !i antigenul HLA %or "i
captate !i "ixate ;n godeu de ctre ace!ti anticorpi4 Alterior, este pus ;n reacie
serul primitorului, urmat de adugarea unui anticorp secundar anti $g5 uman
cuplat cu o enzim
0rin adugarea substratului rezult o reacie de culoare a crei intensitate
este masurata cu a6utorul cititorului BL$HA4 $nterpretarea rezultatelor testului
este bazat pe compararea densitilor optice ale godeurilor de testat "a de
godeurile de control poziti% !i negati%4 2534
0rincipalul a%anta6 const ;n "aptul c nu este ne%oie de lim"ocite %iabile
sau de "ixare de complement, iar testul imunoenzimatic nu este con"runtat cu
inter"erene ale medicamentelor citotoxice cum este globulina anti-timocite sau
muronomab @D98 2534
=n Centrul de $munogenetic !i Virusologie din $nstitutul Clinic U>undeniQ
crossmatch-ul este per"ormat printr-un test calitati% BL$HA ;n "az solid pentru
detecia anticorpilor $g5 direcionai ctre antigenele HLA din clasa $ !i a$$-a
speci"ice donatorului4
Princi)i$! meto%ei %e !$cr$
0repararea lizatului de lim"ocite ale donatorului
.eacia BL$HA propriu-zis )>ig41,
51
F!%12;1 Cro##m"tc@ J +$!n"!+!#l 'eo.e! ELISA1
5licoproteinele HLA sunt preparate din lim"ocite prin solubilizarea celulelor
cu un detergent neionic4 -up solubilizare, lizatele de lim"ocite se adaug ;n
godeurile ;n care au "ost imobilizai anticorpi monoclonali speci"ici pentru HLA
clasa $ !i clasa a $$-a4 5licoproteinele HLA sunt lsate s se lege de anticorpii
monoclonali !i apoi glico-proteinele nelegate sunt ;ndeprtate prin splare4
5odeurile conin&nd glicoproteinele legate sunt testate cu ser uman pentru a
detecta anticorpii anti-molecule HLA4 Anticorpii nelegai sunt ;ndeprtai prin
splare4
He adaug apoi ;n godeuri un reacti% anti-globulin uman )anti-$g5, marcat
cu "os"ataza alcalin !i godeurile se incubeaz4 Anti-$g5 nelegat se ;ndeprteaz
prin splare
He adaug substratul 0<00 )p-nitro"enil "os"at,)>ig4 1,4 -up 8' minute de
incubare reacia este oprit cu soluie de #idroxid de sodiu4
-ensitatea optic a culorii "ormate se masoar cu un spectro"otometru4
Ine$+$ea$ea $e&#laelo$ J C$!e$!#l .e +o&!!D!ae
He citesc absorbanele la 1'5 sau 11' nm "olosind "iltrul de re"erin de
1K' nm4
Con$ol ne%a!D 05800
Con$ol +o&!!D 25000
Con$ol l!&a 05900
52
Re&#laele "a$e a# 'e.!a a0so$0an>elo$ N 2X 'e.!a Dalo$!lo$
"on$oalelo$ ne%a!De5 s#n +o&!!De1
C$oss'a"/ +$!n 'eo.a 3loO"!o'e$!e!
Aceast te#nic de lucru este ;ntre 8' - 25' de ori mai sensibil dec&t
metodele serologice %izuale pentru detecia anticorpilor anti-HLA de tip $g54
Celulele 9 sunt separate electronic de celulele +, prin "olosirea unui anticorp
"a de antigene de supra"a ale celulelor 9,)cum ar "i complexul C-8-0C.,
marcat cu "luorescein,
@ poart electronic poate "i creat ast"el ;nc&t, numai celule 9 marcate cu
"luorescein sunt selectate4 Lim"ocitele donatorului sunt incubate cu serul
primitorului pentru a permite legarea oricror anticorpi anti-donator4 Anticorpii
legai la populaia de celule 9 selectat sunt detectai prin adaugarea unui
anticorp anti $g5 uman, anti >c speci"ic4
>)abM,
2
este cuplat cu un "luorocrom de culoare di"erit de cea a
anticorpului care marc#eaz celulele 9 )de exemplu %erde dac anti C-8 a "ost
ro!u,4 >loNcitometrul numr celulele 9 cuplate !i creaz o #istogram
proiect&nd numrul de celule versus intensitatea "luorescenei4 Celulele
necuplate rm&n l&ng origine iar celulele cuplate la dreapta originii pe axa \4
@ deplasare la dreapta a %&r"ului de celul 9, ;n comparaie cu controlul
negati%, indic "aptul c anticorpii anti-HLA de clasa $ din serul pacientului s-au
legat de celulele 9 ale donatorului4 >loNcitometria se poate per"orma !i pe celule
+ legate cu anticorpi speci"ici acestora4
>loNcitometria este ;n general per"ormat pe serul cel mai recent !i pe o
selecie de seruri istorice, reacti%e, pentru toi pacienii a"lai pe lista de a!teptare
pentru donatori cada%ru !i care au un risc crescut de re6et )cum ar "i alogre"a
re6etat anterior, 0.A ;nalt, donator %iu ;nrudit cu crossmatch serologic pe
celula 9 negati% !i pe celula + poziti%,4
C&teodat crossmatch-ul poziti% prin "loNcitometrie apare c&nd
crossmatch-ul serologic pe celula 9 !i + este negati%4 $ndicaiile pentru
transplant, ;n aceste cazuri, rm&n contro%ersate4 Bxist dou posibile explicaii
53
pentru aceste obser%aiiI existena prezenei anticorpilor anti-HLA care nu sunt
citotoxici sau exista prezenei anticorpilor blocani care inter"ereaz cu testarea4
C$oss'a"/!n% +$!n e/nolo%!a L#'!ne,
0rin aceast metod se poate lucra crossmatch cu sensibilitate !i
speci"icitate de per"orman comparabile cu cele obtinute prin "loNcitometrie4
9otu!i, la ora actual, utilizarea cea mai de succes a Luminex-ului, ca !i
costTe"icien !i acuratee este pentru detecia !i identi"icarea anticorpilor
citotoxici )>ig4 1J,4



F!%12<1 P$!n"!+!#l e/nolo%!e! L#'!ne,1
C$oss'a"/6#l +en$# a#oan!"o$+!
=n e%aluarea crossmatch a serului primitorului pentru compatibilitate cu
donatorul, cel mai important este s distingem anticorpii nespeci"ici,
antilim"ocitari numii autoanticorpi, de anticorpii speci"ici anti-donator4 0rezena
autoanticorpilor este detectat de testul auto crossmatch ;n care serul pacientului
!i lim"ocitele acestuia sunt combinate ;n testul standard de citotoxicitate4
54
Autoaticorpii pot da rezultate "als poziti%e ;ntr-un test crossmatch cu
lim"ocitele potenialului donator conduc&nd la descali"icarea eronat a acelui
donator4 Alternati%, anticorpii preexisteni pot masca prezena anticorpilor
speci"ici anti-donator4 Auto crossmatch-ul este per"ormat de rutin ;n cazul
tuturor crossmatch-urilor cu donatori %ii pentru "iecare ser care este testat4
Algoritmul corect de testare crossmatc# pentru un receptor a"lat pe lista
de ateptare pentru un transplant renal, const ;n punerea ;n reacie a
lim"ocitelor donatorului cu serul istoric de la data precedentei e%aluri i cu
serul din pre-ziua transplantului? concomitent se lucreaz i testul
autocrossmatc#4
9estarea pentru autoanticorpi prin "loNcitometrie este, de asemenea,
recomandat ;n particular ;n cazul unui crossmatch serologic negati% cuplat cu
un test crossmatch poziti% nea!teptat prin "loNcitometrie4
.ezultate de crossmatch "als poziti%e, prin te#nica "loNcitometric, se pot
produce c&nd pacientul are autoanticorpi de speci"icitate nedeterminat4 Ast"el
de autoanticorpi poziti%i prin "loNcitometrie nu sunt considerai a "i o
contraindicaie pentru transplantul renal4
Al%o$!'#l eDal#4$!! !'#nolo%!"e *n $ans+lan#l $enal "# .onao$ D!#
5rupele sanguine ale donatorului !i receptorului trebuie s "ie
compatibile4 9ipizarea HLA a6ut la selectarea celui mai adec%at donator %iu
c&nd sunt disponibili mai muli donatori4
=nainte de transplant se e"ectueaz testul crossmatch pentru e%itarea
"enomenului de re6et #iperacut4 An test crossmatch poziti% exclude transplantul
renal de la acel donator4
55

F!%12C1 EDal#a$ea !'#nolo%!"4 *n De.e$ea $ans+lan#l#! $enal .e la .onao$ D!#1
Al%o$!'#l eDal#4$!! !'#nolo%!"e *n $ans+lan#l $enal "#
.onao$ "a.aD$#
-onatorul cada%ru !i potenialii receptori trebuie s aibe grupe sanguine
compatibile4 Apoi este per"ormat tipizarea HLA !i gradul de compatibilitate
este "olosit pentru alocarea rinic#ilor de la cada%ru4
Anumite date sugereaz c prezena nepotri%irilor HLA care au "ost
prezente ;ntr-o alogre" anterioar );n special pentru locusul -.,, poate duce la
pierderea timpurie a alogre"ei renale4 Ast"el, ar "i ;nelept s e%itm ast"el de
nepotri%iri4
C&nd 0.A este ] 1'R este prudent s e"ectum teste pentru a determina
dac unii dintre anticorpi sunt mai mult autoreacti%i dec&t aloreacti%i4 Anticorpii
autoreacti%i nu cresc riscul de re6et dar cei aloreacti%i cresc riscul de pierdere a
alogre"ei renale4 9itrul mare de anticorpi aloreacti%i se datoreaz, de obicei,
sarcinilor anterioare, transplanturilor sau trans"uziilor de s&nge4
56
-eterminarea anticorpilor citotoxici poate "i util ;n e%itarea anumitor
antigene HLA4 La pacienii "oarte sensibilizai )0.A ] 5'R, poate "i "oarte
di"icil de gsit un donator crossmatch negati%4 B%itarea trans"uziilor poate a6uta
ca titrul anticorpilor citotoxici s scad ;n timp4
F!%1291 EDal#a$ea !'#nolo%!"4 *n De.e$ea $ans+lan#l#! $enal .e la "a.aD$#1
Ale%e$ea #n#! .onao$ D!# ,er#$# .onao$ "a.aD$# +en$# $ans+lan#l
$enal
57
F!%120 Donao$ D!# ,er#$# "a.aD$# +en$# $ans+lan#l $enal1
>olosirea donatorului %iu pentru transplantul renal este a%anta6oas
deoarece supra%ieuirea alogre"ei este mai bun !i este posibil transplantul
preempti% 234 Cel mai bun donator este, de obicei, un membru din "amilie4
on"tor$! m"r&in"!
-e!i nu este acceptat ;nc o de"iniie unanim, ace!ti donatori includ
persoane la %&rste extreme, cu #ipertensiune sau diabet sau indi%izi cu un risc
crescut de transmitere a di"eritelor boli4 =n mod surprinztor, transplantul de
rinic#i de la un ast"el de donator marginal duce ;n multe cazuri la o "uncie
renal bun la ni%elul receptorului4
H-a constatat c transplantul renal dual de la donatori marginali d
rezultate similare transplanturilor cu un singur rinic#i de la donatori non-
marginali 2134 9ransplantul dual nu pare s creasc rata complicaiilor
c#irurgicale 2134 Histemele de scori"icare care "olosec %ariabilele donatorului
cum suntI %&rsta, #ipertensiunea arterial ;n antecedente, "uncia renal,
rezultatele biopsiei renale !i missmatch-ul HLA, pot "urniza o abordare
cantitati% pentru "urnizarea rinic#ilor marginali 22834
on"tori non5@e"rt5be"tin&
58
0rincipala problem legat de transplanturile renale de la acest tip de
donatori este rata crescut de "uncie renal ;nt&rziat !i de ne"uncionare
primar comparati% cu rinic#ii pro%enind de la donatori cada%ru heart/beating
2734
E3e"#l s#$se! .onao$#l#! as#+$a s#+$aD!e>#!$!! alo%$e3e!
Comparaia ;ntre primitorii de rinic#i cu di"erite surse de donatori, la 8 ani
de supra%ieuire a alogre"elor renale, a artat c cea mai bun supra%ieuire a
"ost obser%at la cei cu donatori "rati, HLA identici 234
5re"ele pro%enite de la soi sau soii !i ali donatori %ii ne;nrudii au
supra%ieuit la "el ca !i gre"ele pro%enite de la prini, toate supra%ieuind mai
mult ;n comparaie cu gre"ele pro%enite de la donatori cada%ru 234
F!%1221 I'+a"#l s#$se! .onao$#l#! as#+$a s#+$aD!e>#!$!! alo%$e3e!
$enale .e la .ono$! D!! *n$#.!>!1
Aceste date au ;ncura6at centrele de transplant renal pentru a "ace c&t mai
multe transplanturi de la donatori %ii, ;n acest "el e%it&nd !i lunga a!teptare
pentru un donator de rinic#i cada%ru4
59
E3e"ele +o$!D!$!! HLA as#+$a
s#+$aD!e>#!$!! alo%$e3e! $enale +$oDen!e .e la #n .onao$ D!#
F!%1221 I'+a"#l +o$!D!$!! HLA as#+$a s#+$aD!>#!$!!
%$e3e! $enale .e la .onao$! D!! *n$#.!>!
)dup L.;. Lebec1 !i 6.&. <arovo9 * HistocompatibilitX testing and organ s#aring, c#apter 7,4
Hupra%ieuirea alogre"ei este cea mai bun pentru alogre"e HLA identice
de la "rai !i este urmat apoi de alogre"e cu un singur #aplotip nepotri%it4
$mportant este c timpul de ;n6umtire )9^, al gre"elor care supra%ieuiesc la
cel puin un an este proporional cu gradul de matching4 Aceast in"ormaie
poate "i "olosit ;mpreun cu ali "actori pentru a selecta cel mai adec%at
potenial donator de rinic#i 22J34
60
Ma"/!n%6#l !'#nolo%!"G "on"e+#l .e m"tc@in& *n $ans+lan#l $enal
$n"luena poziti% a potri%irii HLA asupra supra%ieuirii gre"ei renale a
"ost demonstrat timp de mai bine de 25 de ani 211, 81, 34 =n practic, gasirea
unui donator de rinic#i cu zero missmatch HLA este extrem de rar4 -e aceea,
e"orturile se concentreaz pentru gsirea unui donator cu minimum de
nepotri%iri HLA sau, se merge mai departe, p&n spre limita maxim de
nepotri%iri, ast"el ;nc&t s putem a%ea, totu!i, un matching HLA optim4
=n acest sens, de exemplu, ;ntre 1K77 !i 1KK programele de transplant
renal ale Burotransplant au mers pe minim potri%ire pentru cel puin un antigen
HLA-+ !i un antigen HLA--.4
C#iar !i ;n prezent, multe programe continu s "oloseasc aceste cerine
minime pentru potri%irea HLA a!a cum reiese din pro"ilul de matching HLA al
programului de alocare de rinic#i al Burotransplant 2K34
=n mod regretabil nu exist ;nc un consens general despre de"iniia a ceea
ce ;nseamn un donator inacceptabil HLA4
=n orice caz, anticorpii citotoxici detectai ;n serul actual al pacientului
identi"ic antigenele HLA de clasa $ inacceptabile ale donatorului !i
prognozeaz un crossmatch poziti% care este testul "inal ;nainte de transplant4
.ele%ana anticorpilor pentru urmatoarele aspecte este contro%ersatI
1, antigenele HLA de clasa a $$-a?
2, antigenele HLA de clasa $ care au "ost identi"icate numai ;n serurile istorice
ale pacientului?
8, antigenele HLA ale donatorului care au "ost nepotri%ite ;n cazul unui
transplant anterior, dac acest lucru este aplicabil4
9oate aceste restricii imunologice a"ecteaz aproximati% 8'R din
pacienii a"lai pe lista de a!teptare a Burotransplant 2K34
=n mod ideal ar trebui considerat un index de potri%ire !i pentru antigenele HLA
inacceptabile ale donatorului4
61
6atching-ul imunologic este rele%ant numai c&nd exist un numr
su"icient de mare de donatori 28134 Cu c&t sunt mai muli donatori cu at&t este
mai mare !ansa unui matching bun, prin aceasta ;neleg&nd o potri%ire de 5'R
pentru alelele HLA-A, + !i -.4
@rice politic de a maximiza numrul de zero missmatch-uri HLA-A, +,
-. ar trebui s acioneze pe un numr c&t mai mare de donatori posibili4 Acela!i
lucru trebuie s se aplice !i pentru pacienii ;nalt sensibilizai4
=n anii receni, progrese mari s-au e"ectuat prin potri%irea HLA la ni%el de
alel 2J34 -e asemenea, trebuie menionat c muli primitori de alogre" renal
cu nepotri%iri HLA continu s aib o "uncie bun muli ani dup transplant,
suger&nd c anumite nepotri%iri HLA sunt totu!i acceptate 2734
=n timpurile testrii serologice HLA un ser cu 0.A ;nalt era considerat a
"i compus din muli anticorpi anti-HLA4 Mai t&rziu s-a obser%at c serul
pacienilor ;nalt sensibilizai a!tept&nd un transplant renal era, ;n general,
compus dintr-un numr mic de anticorpi direcionai "a de antigenele publice,
denumite !i C.B5s !i mai puin din anticorpi multipli, "iecare reacion&nd cu un
antigen HLA speci"ic con%enional4 Mai mult, "rec%ena C.B5s era mult mai
mare, 85R p&n la 77R, "a de cele mai comune antigene HLA-A !i +4 0rin
inter"eren potri%irea pentru antigenele donatorului !i receptorului incluse ;n
acela!i C.B5, respecti% potri%irea C.B5, poate duce la un numr mai mare de
transplanturi potri%ite !i la un ni%el mai redus de sensibilizare a pacienilor
a%&nd gre"e repetate4 =n completare, datorit includerii unor antigene pri%ate
HLA-A !i + ;n cadrul acelea!i C.B5, un numr de antigene rare pot "i potri%ite
mult mai u!or, o"erind posibilitatea unei supra%ieuiri alogre"ei mult
;mbuntite pentru un numr mai mare de pacieni4
An studiu recent de potri%ire pentru PC.B5sQ )cross reactive groups,, a
sugerat c at&t donatorii c&t !i primitorii care sunt potri%ii pentru aceste grupuri
de antigene, pot a%ea mai puine teste crossmatch poziti%e !i pot bene"icia de o
alogre" renal cu o supra%ieuire de lung durat 2734
=n rezumat, e%aluarea imunologic pretransplant renal a pacienilor
cuprindeI genotipul HLA, anticorpii citotoxici-screening, dac este cazul
identi"icare !i testul crossmatch4
62
T$ans+lan#$!le $enale ABO !n"o'+a!0!le
=n mod tradiional, compatibilitatea de grup sanguin este considerat
esenial pentru transplantul renal de succes, deoarece rinic#ii A+@
incompatibili transplantai sunt rapid distru!i de "enomenul de re6et #iperacut
datorat anticorpilor anti-A !iTsau anti-+ care se leag de antigenele A !iTsau + de
pe endoteliul gre"ei, acti%&nd cascada complementului !i induc&nd agregarea
trombocitar !i tromboza intra%ascular 2734
=n 1K71, +lapa1 8i colaboratorii au obser%at c plasma"ereza rezol% rapid
re6etul la un transplant renal accidental incompatibil ,A+@ care s-a produs din
cauza unei erori de lucru a grupelor sanguine4
.ecent interesul pentru "olosirea rinic#ilor de la donatori %ii A+@
incompatibili a crescut "oarte mult, mai ales ;n ri unde din moti%e culturale nu
exist surs alternati% de donatori4
C#irurgii 6aponezi au raportat "aptul c subgrupe selectate de pacieni pot
atinge o e%oluie acceptabil dup transplantul renal A+@ incompatibil, dac
anticorpii anti-A+@ sunt redu!i pretransplant combinat cu splenectomie !iTsau
anticoagulante postoperator !i doze ;nalte de imunosupresoare4
9itrurile de anticorpi pretransplant sunt reduse prin sc#imbare de plasm
)plasma exchange, sau imunoabsorbie cu ;nlocuire ulterioar cu plasm tip A+4
Hplenectomia este per"ormat ;n ;ncercarea de a reduce capacitatea
primitorului de a produce anticorpi anti-ATanti-+ ;n cazul ;n care transplantul se
e"ectueaz de la un donator de rinic#i A+@ incompatibil4
9erapia anticoagulant cu in#ibitori ai agregrii trombocitare este utilizat
pentru a pre%eni iniierea coagulrii intra%asculare diseminate intrarenal, datorit
re6etului umoral4 Acest tip de transplant poate "i aplicat cu succes pentru
pacienii care primesc rinic#i de la donatori %ii !i nu este posibil ;n cazul
donatorilor cada%ru4
63
BIBLIOGRAFIE
1. American HocietX "or HistocompatibilitX and $mmunogenetics, #ttpITTNNN4as#i-#la4org
24 +axter-LoNe, L4A, and Colombe, +4Y4, HistocompatibilitX 9esting )1K,, in Lange
Medical $mmunologX, 9ent# Bdition, 2''14
84 Callag#an, C4 C4, and +radleX, C4 A4, Current status o" .enal 9ransplantation Cpt4 1 in
9ransplantation $mmunologX Met#ods and 0rotocols edited bX 0#ilip Horniclx, Marlene
.ose, Humana 0ress $nc4 2''4
14 Campbell, .4-4 and 9roNsdale, C4 $mmunologX 9odaX 17, 18, 1KKJ4
54 Cec(a, C4M4 and .eed >4B4, HistocompatibilitX 9esting, Cross-Matc#ing, and Allocation
o" DidneX 9ransplants in Handboo( o" DindeX 9ransplantation, >ourt# Bdition, 5abriel
M4 -ano%itc#, 2''5 bX Lippincott Yilliams _ Yil(ins4
4 Cec(a, C4M4, 9#e role o" HLA in renal transplantation4 Human $mmunologX 5I -1,
1KKJ4
J4 C#ua, M4H4, HarNal, M4 MicroarraXsI <eN tools "or transplantation researc#4 0ediatric
<ep#rologX, 17I81K-82J, 2''84
74 -ano%itc#, 54M4, Handboo( o" DindeX 9ransplantation >ourt# Bdition, Lippincott
Yilliams _ Yil(ins, 2''5
K4 -e Meester, C4, 0ersi6n, 5454, Claas, >4H4C4, >rei, AI $n t#e `ueue "or a cada%er donor
(idneX transplantI neN rules and concepts in t#e Burotransplant $nternational
>oundation4 <ep#rologX -ialXsis 9ransplantation 15,8, 888-887, 2'''4
10. Buropean +ioin"ormatics $nstitute, #ttpITTNNN4ebi4ac4u(TimgtT#la
114 5il(s, Y4.4, 5ore, H4M4, +radleX, +4A4, Matc#abilitX in (idneX transplantation4 9issue
Antigens? 82I121-12K, 1K774
124 Hari#aran, H4, Mc+ride, M4A4, C#eri(#, Y4H4, 9olleris, C4 +4, +resna#an, +4 A4, and
Co#nson, C4 04, 0osttransplant renal "unction in t#e "irst Xear predicts long-term (indeX
transplant sur%i%al4 Didnei $nt4 2, 811-817, 2''24
184 Harrison, C, <a%arrete, C4, Helection o" 0latelet -onors and 0ro%ision o" HLA Matc#ed
0latelets, in Histocompatibilitz 9esting4 $mperial Collage 0ress, 2'''? 8JK
114 HerczX(, Y4>4, Luminex, Vendor >orum, AHH$ /uarterlX, 1'1, 9#ird /uarter, 2''84
64
154 CaneNaX, C4A4, 9ra%ers 0I Antigen recognition bX 9 lXmp#ocXtes4 Bd 8 $mmunobiologX
11-1, 1KKJ, 5arland 0ublis#ing, <eN Lor( and London4
14 Cerius, C4 94, 9aXlor, .4 C4, Murillo, -4, and Leone, C4 04 -ouble renal transplants "rom
marginal donorsI 2-Xear results4 Cournal o" ArologX, 18, 128-125, 2'''4
1J4 Co#nson, A4H4, Dato%ic#, HurleX4 C4, Hartzman, .4C4, Yade, C4A4, Human LeucocXte
Antigen I 9#e Ma6or HistocompatibilitX Complex o" Man, 1', K2J-K1, in Clinical
-iagnosis and Management bX LaboratorX Met#ods, Co#n +ernard HenrX, M4-4, 2''1,
Haunders, 9Nentiet# Bdition4
174 Little, A-M4, 0ar#am, 0I 0olXmorp#ism and e%olution o" class $ and class $$ genes and
molecules4 .e%ieNs in $mmunogenetisc, 1a1'5-128, 1KKK4
1K4 Lucas, -404, 0aparounis, M4L4, MeXers, L4, Mart, C4M4, bac#arX, A4A4,I -etection o"
HLA class $ speci"ic antibodies bX t#e /ui(Hcreen BnzXme-Lin(ed $mmunosorbent
AssaX4 Clin Lab -iagn Lab $mmunol, 1KKJ?1I252
2'4 Luminex Corporation, 1KK7-2'''4 Luminex 1'' Aser Manual Version 14J .e% +4
214 Mars#, H454B4, 0ar#am, 04 +arber4, +arber L4-4, 9#e HLA >acts+oo(, Academic 0ress,
2'''4
224 Moore, H4+4, 0loeger, <4A4, -e5oeX, H4.4,I HLA antibodX screeningI Comparison o" a
solid p#ase enzXme-lin(ed immunoassaX Nit# antiglobulin augmented
lXmp#ocXtotoxicitX4 9ransplantation 1KKJ? 1I11J4
284 <Xberg, H4 L4, Matas, A4 C4, Dremers, Y4 D4, et4 al4 $mpro%ed scoring sXstem to assess
adult donors "or cada%er renal transplantation4 American Cournal o" 9ransplantation4 8,
J15-J21, 2''84
214 .#odes, -4A4, 9roNsdale, C4I 5enetics and molecular genetics o" t#e MHC4 .e%ieNs in
$mmunogenetics, 1I21-81, 1KKK4
254 .odeX 5lenn B4 HLA +eXond 9ears4 -e <o%o, $nc4 2'''?2184
26. Hanger Centre, #ttpITTNNN4sanger4ac4u(4TH50TC#rTMHCTs#tml
2J4 9#elan, -4, .odeX, 54, American HocietX o" HistocompatibilitX and $mmunogenetics
LaboratorX Manual, edn4 Lenxa, D4HI AHHL4
274 9roNsdale, C4 $mmunogenetics 11,1-1J,1KK54
2K4 9roNsdale, C4 $n HLA and MHCI 5enes, Molecules and >unction )+roNning, M4 And
McMic#ael, A4 Bds,, 1KK, +ios Hcienti"ic 0ublis#ers, @x"ord4
8'4 Yilliams, 94M4, Human LeucocXte Antigen 5ene 0olXmorp#ism and t#e
HistocompatibilitX LaboratorX, 9#e Cournal o" Molecular -iagnostics, 8, 8, 2''14
814 Yu6cia(, 94, @pelz, 54, Matc#abililtX as an important "actor "or (idneX allocation
according to t#e HLA Matc#4 9ransplantation 0roceedings? 2JI 11'8-11'5, 1KKJ4
824 bac#arX, A4A4, -elaneX, <4C4, Lucas, -404, La""ell, M4H4, C#aracterization o" HLA
Class $ Hpeci"ic Antibodies bX BL$HA Asing Holubilized Antigen 9argetsI $4 B%aluation
o" t#e 59$ /ui(-$- AssaX and AnalXsis o" AntibodX 0atterns4 Human $mmunologX
2''1? 2I8, 227-285
65
EVALUAREA IMUNOLOGICK IN
TRANSPLANTUL HEPATIC
CCCCCCCCCCCCCCC CCCCCCCCCCCCCCC
Ana Mo!se5 Ileana Consan!nes"#
0rimul transplant de "icat la om, a "ost realizat ;n 1K8 de ctre ec#ipa
c#irurgical condus de dr4 9#omas Htarzl, ;n -en%er, HAA4 =n ciuda
per"ecionrii continue a te#nicilor c#irurgicale, transplantul #epatic a rmas la
ni%el experimental, cu o rat a supra%ieuirii la un an de cca4 25R, p&n prin anii
M7' c&nd a "ost introdus Ciclosporina ca tratament imunosupresor4
ai ;n prezent, de!i rata supra%ieuirii la 1an a a6uns la 7' * 75R !i
continu s se ;mbunteasc, transplantul de "icat rm&ne o procedur
"ormidabil dar gre%at de complicaii "rec%ente4
=n general, a"eciunile #epatice care induc necesitatea unui transplant, pot
"i di%izate ;n dou grupeI
6 a3e">!#n! a"#eI cum ar "i #epatitele %irale "ulminante4
6 a3e">!#n! "$on!"eI #epatite %irale cronice, #epatite autoimune, #epatopatii
alcoolice )indicaie contro%ersat, condiionat de abstinena pretransplant,,
ciroz biliar primiti%, colangit sclerozant, boli metabolice )boala
Yilson ,4
9ransplantul #epatic este limitat de numrul de organe cada%erice
disponibile4 =n ultimii ani, numrul organelor disponibile de la cada%ru a rmas
66
relati% stabil, ;n timp ce numrul pacienilor ;nscri!i anual pe lista de a!teptare
pentru transplantul #epatic este ;n continu cre!tere4
Aceast discrepan ;ntre organele disponibile !i ne%oia de transplant a
condus la ree%aluarea continu a criteriilor de selecie !i includere pe lista de
a!teptare4 =n prezent, scorul MBL- )Model "or Bnd-Htage Li%er -isease, este
recomandat, deoarece se bazeaz pe 8 parametri bioc#imici obiecti%i, larg
disponibili !i reproductibili )bilirubina seric, creatinina seric !i $<.
protrombin,, iar pentru populaia pediatric se utilizeaz un model similar,
scorul 0BL- )0ediatric Bnd- Htage Li%er -isease, care "olose!te urmtoarele
%ariabileI %&rsta, albumina seric, bilirubina seric total, $<. !i retardul
statural4 21, 2, 8, 13
on"tori m"r&in"!i1
14 %&rst ] 5' aniI de!i %&rsta ;naintat a donatorului se poate asocia cu
"uncia de"icitar a gre"ei, lipsa de organe !i e%oluia "a%orabil post-
transplant par s 6usti"ice numrul ;n cre!tere al donatorilor ] 5' ani4253
24 steatoza #epaticI "icatul cu in"iltrare gras u!oar sau moderat poate "i
utilizat cu rezultate bune dac timpul de isc#emie rece este redus423
84 mar(eri poziti%i pentru %irusul #epatitic + sau CI gre"ele pro%enind de la
donatori cu mar(eri de in"ecie VH+ sau VHC pot "i utilizate la receptori
cu ciroz secundar in"eciei VH+, respecti% VHC, dac se administreaz
tratament pro"ilactic speci"ic42J,73
Tr"n#)!"nt$! c$ fic"t :m)'r/it (s+l! l!De$ $ans+lana!on ,G un "icat de
la cada%ru este ;mprit ;n dou gre"e "uncionale, lobul drept "iind "olosit pentru
un receptor adult, iar lobul st&ng )segmentele 2, 8 !i 1, sau segmentul lateral
st&ng )segmentele 2 !i 8, pentru un adult scund sau un copil4 Ma6oritatea
centrelor consider c ;mprirea in vivo este superioar celei ex vivo dac sunt
luate ;n considerare rezultatele !mediate !i pe termen lung4 0rincipalul
deza%anta6 al te#nicii cu "icat ;mprit const ;n supra%ieuirea mai mic a gre"ei
!i numrul crescut de complicaii biliare comparati%e cu transplantul #epatic
integral4
Tr"n#)!"nt$! @e)"tic :n %omino reprezint situaia ;n care un pacient
cu o a"eciune genetic !i "icat normal mor"ologic )de exemplu, amiloidoz
"amilial, prime!te un "icat de la donator cada%ru, iar "icatul pacientului cu
amiloidoz este transplantat unui receptor marginal a%&nd ;n %edere c apariia
mani"estrilor amiloidozei "amiliale apar dup o perioad lung )2'-8' ani,42K3
67
Tr"n#)!"nt$! @e)"tic c$ %on"tor ,i$ )li%ing donor li%er transplantation-
L-L9,4 Bste o metod bazat pe capacitatea remarcabil de regenerare a
"icatului4 -in punct de %edere istoric, metoda se adresa iniial prinilor ce a%eau
copii cu a"eciuni #epatice !i care erau dispu!i s le doneze o poriune din "icatul
lor sntos, dar ;n prezent se e"ectueaz si transplantul adult * adult4 >icatul
donatorului se regenereaz !i este "uncional 1''R ;n circa 1 * sptm&ni4
Avantaele L4L= sunt3 scurtarea perioadei de a!teptare? posibilitatea alegerii
momentului optim, ;nainte de apariia deteriorrii progresi%e a "unciei #epatice
!i condiiei pacientului? scderea timpului de isc#emie rece? cre!terea
rezer%orului de donatori?
4ezavantaul maor al L4L= este morbiditatea de aproximati% 1'R !i, ;n
cazuri rare )'42-'45R,, mortalitatea donatorului 21'-1834
Co'+a!0!l!aea .onao$ J +$!'!o$ *n $ans+lan#l /e+a!"
0otri%irea dintre donator !i receptor implic doi "actoriI
14 %r$)$! #"n&$in1 donatorul trebuie s aib grupul sanguin compatibil dar
nu neaprat identic cu al primitorului4 9otu!i, studiile au artat c un
transplant izogrup o"er o supra%ieuire mai bun dec&t un transplant cu
grup compatibil4
24 %imen#i$ne" cor)$!$i (0o.P s!&e)I este "oarte di"icil s introduci "icatul
unei persoane bine dez%oltate ;n corpul unei persoane de statur mic !i ca
urmare +o$!D!$ea .!'ens!#n!lo$ *n$e +$!'!o$ 7! .onao$ ese
esen>!al41
Hpre deosebire de transplantul de rinic#i sau de mdu% osoas, ;n
transplantul #epatic, compatibilitatea HLA nu este necesar cu toate c a "ost
raportat o relaie in%ers ;ntre compatibilitate !i supra%ieuire 21134 @ricum,
genotiparea HLA se e"ectueaz numai ;n scopuri !tiini"ice nu !i ;n scopul
alocrii alogre"elor #epatice4
5enotipul HLA -.+1W11 este asociat ;n J'R din cazurile de transplant
#epatic cu episoade de re6et acut !i cu cre!terea ni%elului seric al neopterinului,
$L-1F, $L-2., $L-74
68
5enotipul HLA -.+1W18 este asociat cu in"ecii VHC posttransplant !i
sepsis4
Crossmatc#-ul nu se per"ormeaz de rutin preoperator dar, ocazional,
poate "i realizat retrospecti%4 Au "ost raportate numai c&te%a cazuri de re6et
#iperacut datorate prezenei anticorpilor anti-donor4 Moti%ul acestei aparente
rezistene a "icatului la re6et #iperacut nu este ;nc pe deplin cunoscut4 H-a
sugerat c "icatul nu este sensibil la anticorpii pre"ormai sau c, datorit
dimensiunilor sale mari, rezult o diluie a anticorpilor la ni%ele la care ei nu mai
sunt noci%i4
@cazional, ;n cazul unor transplante combinate, "icat !i rinic#i,
crossmatc#-ul poziti% pretransplant s-a negati%at posttransplant4 -ou ipoteze au
"ost lansate ;n ce pri%e!te mecanismul prin care se produce aceast scdere a
ni%elului anticorpilor citotoxiciI 1, "ormarea de complexe imune solubile? 2,
pierderea de s&nge asociat operaiei de transplant #epatic ce determin o
scdere a titrului anticorpilor 21134

Boala a"#4 .e %$e34 "on$a %a&.4 (GVHD) *n $ans+lan#l /e+a!"
>icatul "ace parte din sistemul reticuloendotelial, este un organ mare cu o
reea %ascular ;ntins !i care conine ;n parenc#im un numr mare de celule
lim"oide4 He estimeaz c numrul lim"ocitelor din parenc#imul unei gre"e
#epatice este mult mai mare dec&t cel dintr-o gre" de mdu% osoas4
5VH- acut posttransplant #epatic apare c&nd lim"ocitele
imunocompetente ale donatorului, trans"erate odat cu "icatul, sunt acti%ate !i
su"er o expansiune clonal4 Mecanismul intim al acestui proces nu este ;nc
bine cunoscut4 Lezarea "icatului datorat mane%relor c#irurgicale ar induce o
stare de imunosupresie !i alterarea raportului cito(inelor 9H1T9H24 .ecent, o
mai mare atenie se acord lim"ocitelor 9 reglatoare C-1
:
C-25
:
, deoarece ele
6oac un rol important ;n imunoreglare !i imunotoleran, "iind capabile s
in#ibe "unciile lim"ocitelor 9 C-1
:
, C-7
:
!i a celulelor <D 21534
-iagnosticul precoce al acestei a"eciuni !i strategia terapeutic reprezint
o pro%ocare, ;ntruc&t rata de mortalitate este ;nc mare, ;n 6ur de 75R4 -in
"ericire incidena acestei boli este sczut, 1 * 2R, !i pare s "ie in"luenat de
69
mai muli "actori ce in at&t de donator c&t !i de primitorI compatibilitatea HLA,
%&rsta ;naintat a primitorului, imunode"iciena primitorului 21, 1J,1734
Legat tot de aceste lim"ocite imunocompetente ale donatorului, trans"erate
primitorului odat cu organul transplantat, se descrie a!a-numitul Qs!n.$o' al
l!'3o"!elo$ +asa%e$eQ (SLP) 21K34
Acest sindrom se re"er la "enomenul de #emoliz aloimun mediat de
complement, datorat produciei de anticorpi antieritrocitari de ctre lim"ocitele
+ cu memorie ale donatorului4 >aptul c aceti anticorpi pro%in de la donator a
"ost demonstrat prin teste de alotipizare a imunoglobulinelor4
-e obicei, speci"icitatea este "a de antigene eritrocitare ale sistemelor
A+@ i .# si doar ocazional "a de antigene aparin&nd altor sisteme
eritrocitare ) Didd, LeNis ,, situaie ;nt&lnit atunci c&nd donatorul a "ost
sensibilizat prin trans"uzii sanguine sau sarcin4 9ratamentul imunosupresor
administrat posttransplant 6oac un rol etiologic important4 Ciclosporina i
tacrolimusul permit proli"erarea rapid a lim"ocitelor + trans"erate, care %or
produce anticorpi4
Bste o complicaie raportat mai "rec%ent ;n cazul transplantelor cu
mismatc# minor A+@ si poate "i cauza unor #emolize cneexplicatec aprute ;n
perioada postoperatorie4 $ncidena HL0 bioc#imic )#aptoglobin sczut,
transaminaze i bilirubin indirect crescute, ;n transplantul #epatic este de circa
8' * 1'R 4
-e obicei apare ;n sptm&nile 1 * 8 posttransplant i are o e%oluie
autolimitat cu remisiune complet ;n circa 8 luni4 -intre "actorii ce
in"lueneaz se%eritatea #emolizei amintimI cantitatea de esut lim"oid
trans"erat, ni%elul izoaglutininelor eritrocitare la donator ;nainte de transplant,
capacitatea de clearence a acestor anticorpi de ctre primitor 22'-2834
=n cele mai multe cazuri tratamentul implic doar substituia cu mas
eritrocitar, izogrup cu donatorul, i numai rareori sunt necesare i alte mi6loace
terapeuticeI plasma"erez, $g intra%enos, corticosteroizi sau anticorpi
monoclonali anti C-2' ).ituximab, 22134
Mon!o$!&a$ea +a"!en#l#! +os$ans+lan /e+a!"
70
EDal#a$e !'#nolo%!"4
>enomene de re6et post transplant #epatic pot "i ;nt&lnite la peste 5'R din
pacienti i sunt tratate relati% uor i cu succes dac sunt diagnosticate precoce4
-in pcate, semnele i simptomele clinice )"ebr, dureri abdominale, ascit,
#epatomegalie, inapeten , i testele paraclinice )creterea ni%elelor serice ale
bilirubinei, transaminazelor, "os"atazei alcaline, sunt nespeci"ice4
Azual, diagnosticul se pune prin biopsie #epatic percutan aspectul
#istopatologic sugesti% "iind reprezentat de in"iltratul celular mixt ;n spaiul port,
cu epiteliul ductelor biliare i al %enei centraleTporte alterat4
@ pro%ocare continu pentru imunologii !i cercettorii ce acti%eaz ;n
domeniul transplantului, este descoperirea unor noi mar(eri, c&t mai speci"ici !i
c&t mai accesibili, care s permit un diagnostic c&t mai precoce !i prin metode
nein%azi%e, a "enomenelor de re6et4
Cito(inele 9H1 !i alte cito(ine proin"lamatorii, incluz&nd 9<>-G, $><-d,
$L-2, sunt mediatori primari ai re6etului alogre"ei 225,234 0e de alt parte
cito(inele 9H2, cum ar "i $L-1 sau $L-1', in#ib rspunsul 9H1 !i compromite
imunitatea gazdei, dar promo%eaz tolerena transplantului )2J,4
=n plus, lim"ocitele 9 #elper, sub aciunea 9rans"orming 5roNt# >actor
) 95>-F , !i a $L-, se pot di"erenia ;ntr-un subset de celule ce secret $L-1J,
cito(in recent recunoscut ca inductoare a rspunsurilor in"lamatorii4
$L-1F, $L-2., $L-, $L-7, 9<>-G !i neopterina seric reprezint indicatori
"ideli ai rspunsului imun mediat celular la pacienii cu transplant #epatic !i din
acest considerent sunt mar(eri imunologici prognostici pentru "enomenul de
re6et acut4
Algoritmul immunologic de e%aluare posttransplant trebuie s cuprind,
;n mod obligatoriu, cel puin determinarea $L-2., 9<>-G !i neopterinei pentru o
monitorizare imunologic de acuratee, care s o"ere o imagine c&t mai "idel
asupra rspunsului imun celular4
B%aluarea imunologic este cu at&t mai important ;n condiiile
imunosupresiei cu in#ibitor de calcineurin !i ;n cazul in"eciilor posttransplant
induse de %irusuri din "amilia #erpes%iridae care, la r&ndul lor, manipuleaz
rspunsul imun al gazdei4
71
EDal#a$ea D!$#solo%!"4
B%aluarea %irusologic pre i posttransplant este "oarte important pentru
monitorizarea pacienilor cu transplant #epatic4
.ecurena a"eciunii iniiale post-transplant este o pro%ocare ma6or pentru
#epatolog4
A"eciunea care ridic cele mai importante probleme legate de recidi%a
post-transplant este in"ecia cu VHC4 .ein"ecia gre"ei cu VHC este uni%ersal,
recurena #istologic "iind notat la 5'-7'R din pacieni la 1 an post-transplant4
@ proporie de 15-8'R dintre pacienii cu #epatit cronic C recurent
dez%olt ciroz #epatic la 5 ani post-transplant4
@ serie de "actori se asociaz cu riscul #epatitei VHC recurente post-
transplantI ;ncrctura %iral mare pre-transplant !i precoce posttransplant,
genotipul 1b !i 1, anumite antigene HLA ) HLA -.+1W18 ,, timpul de isc#emie
rece prelungit, steatoza se%er )] 8'R,, asocierea carcinomului #epatocelular,
%&rsta donatorului ] 5' ani, tipul de imunosupresie )utilizarea @D98,, numrul
episoadelor de re6et acut tratate cu bolusuri de metilprednisolon, tratamentul
re6etului cu anticorpi anti-lim"ocitari, in"ecia cu %irusul citomegalic, absena
coin"eciei VH+ pretransplant 2,K,27,2K34
.areori recurena in"eciei VHC se asociaz cu "orme agresi%e de #epatit
ce pot duce la pierderea gre"ei, iar c&te%a rapoarte recente sugereaz c incidena
i se%eritatea recurenei sunt mai crescute ;n cazul transplantului de "icat de la
donatori %ii 28134
Bradicarea in"eciei VHC pre-transplant reprezint modalitatea optim de
pro"ilaxie a in"eciei gre"ei4 .egimul anti%iral optim pentru tratamentul #epatitei
C recurente post-transplant este regimul combinat inter"eron, pre"erabil pegXlat,
plus riba%irin4 -urata !i doza optim a "iecrui agent anti%iral nu sunt ;nc
standardizate4 .etransplantarea pacienilor cu in"ecie VHC recurent rm&ne
contro%ersat datorit rezultatelor slabe4
0&n ;n urm cu aproximati% o decad, pacienii transplantai pentru
ciroz de etiologie VH+ prezentau cel mai ne"a%orabil prognostic dintre toi
pacienii transplantai pentru a"eciuni #epatice non-maligne cu o proporie de
J8R din decesele ;nregistrate ;n primele ' zile posttransplant4
72
.ein"ecia VH+ a gre"ei se poate produce cu particule VH+ circulante, cu
particule %irale pro%enind din sursele de replicare extra#epatice ale VH+
)sistemul #ematopoetic, pancreas, sau ambele4
>actorii asociai cu o rat de rein"ecie mai mic i cu ;mbuntirea
supra%ieuirii posttransplant includ 2813I
21 $e+l!"a$e D!$al4 a0sen4 (a0sena *n se$ a ADN6HBV !Hsa# A%HBe)R
21 +$o3!la,!a +e e$'en l#n% a /e+a!e! VHBR
81 /e+a!a HBV 3#l'!nan4R
91 "o!n3e"!a "# D!$#s .ela (VHD)R
Combinaia imunoglobulin speci"ic anti-VH+ )H+$5,-lami%udin
reprezint ;n momentul actual regimul pro"ilactic pre"erat ;n ma6oritatea
centrelor de transplant #epatic din lume, "iind asociat cu o rat de rein"ecie
cuprins ;ntre ' !i K45R 28', 823, iar rata de supra%ieuire la 5 ani a acestor
pacieni este asemntoare cu a pacienilor transplantai pentru alte a"eciuni
non-%irale4 Monoterapia cu H+$5 sau lami%udin se asociaz ;ns cu
dez%oltarea de mutaii ce con"er rezisten la tratament )mutaii ;n gena H
pentru H+$5 sau mutaii ;n gena 0 a polimerazei %irale * mutaii LM-- pentru
lami%udin,4
.etransplantare pacienilor cu in"ecie VH+ recurent poate "i realizat
cu succes dac se asociaz o terapie anti%iral i cu H+$5 ;n doze crescute4
C!o'e%aloD!$#s#l (CMV) este un patogen "rec%ent implicat ;n in"eciile
posttransplant, contribuind semni"icati% la creterea morbiditii i mortalitii
;n transplantul de organe solide4 An risc mai mare de a dez%olta in"ecie primar
simptomatic prezint primitorii seronegati%i care au a%ut un donator
seropoziti%4 Ali "actori de risc pentru acti%area CMV suntI tipul de organ
transplantat, mismatc#-ul HLA dintre donator i primitor, intensitatea terapiei
imunosupresoare, sexul "eminin4
0e l&ng e"ectul direct determinat de in%azia esuturilor, CMV este
implicat ;n patogeneza re6etului acut sau cronic i de asemenea crete riscul de
recuren al in"eciei VHC si scade supra%ieuirea global a pacientului i a
gre"ei 28834
73
@ do%ad a rolului 6ucat de CMV ;n re6etul alogre"ei este obser%aia c
terapia pro"ilactic i anti%iral ;mbuntete "uncia gre"ei i in#ib re6etul
acut4 -ei reacti%itatea imun ;n in"eciile CMV a "ost intens studiat ;n ultimii
ani, mecanismul imunologic prin care CMV induce re6etul alogre"ei rm&ne
contro%ersat4 Ana din ipoteze susine c lim"ocitele 9 CMV-speci"ice, cu
potenial citotoxic i productoare de cito(ine proin"lamatorii, cum ar "i 9<>-G,
pot reaciona direct cu anumite complexe CMHTpeptide alogene, proces
cunoscut sub denumirea de cimunitate #eteroloagc4 @ alt ipotez se re"er la
stimularea indirect a aloimunitii4 $n"ecia CMV induce producia local de
cito(ine proin"lamatorii, cum ar "i 9<>-G, $L-1, $L-, $L-7, sau c#emo(ine CC
i C\C, care determin recrutarea i acti%area leucocitelor din gre" )81,85,4
Bste de6a bine cunoscut rolul pe care ;l 6oac imunitatea celular ;n
controlul in"eciei4 Concentraiile crescute de neopterin re"lect rspunsul imun
mediat celular i ;n in"eciile produse de CMV sau B+V, "iind un mar(er
imunologic "oarte util ;n diagnosticul acestor in"ecii la pacienii cu transplant
#epatic, deoarece ni%elele serice de neopterin cresc ;n stadiile timpurii ale
acestor in"eci, de obicei c#iar ;nainte de serocon%ersie4
BIBLIOGRAFIE
14 >orman LM, LuceX M.4 0redicting t#e 0rognosis o" C#ronic Li%er -iseaseI An
B%olution >rom C#ild to MBL-4 Hepatolog9 2''1? 88I 1J8-5
24 5arcia-9sao 5, Bl"erin( .@4 MBL-I t#e end o" C#ild-0ug# classi"icatione >
Hepatol 2''2? 8I 111-5
84 Damat# 0H, Yiesner .H, Malinc#oc M et al4 A model to predict sur%i%al in patients
Nit# endstage li%er disease4 Hepatolog9 2''1? 88I 11-J'
14 Yiesner ., BdNards B, >reeman . et al4 9#e model "or end-stage li%er disease
)MBL-, and allocation o" donor li%ers4 <astroenterolog9 2''8? 121I K1-
54 Hoo"nagle CH, Lonbardero M, betterman .D et al4 -onor age and outcome o" li%er
transplantation4Hepatolog9 1KK? 21I 7K-K
4 Dee""ee B+4 Helection o" patients "or li%er transplantation4 $n =ransplantation of
the Liver, edited bX MaddreX YC, Hc#i"" B., Horrell M>4 Lippincott Yilliams _
Yil(ins 2''1? 5-81
74
J4 Vergas HB, Las(us 9, Yang L> et al4 @utcome o" li%er transplantation in #epatitis
C %irusin"ected N#o recei%ed #epatitis C %irus-in"ected gra"ts4 <astroenterolog9 1KKK?
11JI11K-58
74 -odson H>, +on#am CA, 5eller -A et al4 0re%ention o" de no%o #epatitis +
in"ection in recipients o" #epatic allogra"ts "rom anti-H+c positi%e donors4
=ransplantation 1KKK? 7I 1'57-1
K4 Yiesner .H, .a(ela C, $s#itani M+ et al4 .ecent Ad%ances in Li%er
9ransplantation4 6a9o !lin .roc 2''8? J7I 1KJ-21'
1'4 American HocietX o" 9ransplant Hurgeons5 Bt#ics Committee4 0osition paper on
adult-to adult li%ing donor li%er transplantation4 Liver =ranspl 2'''? I 715-71J
114 +roering -C, Hternec( M, .ogiers \4 Li%ing donor li%er transplantation4 >
Hepatol 2''8? 87I H11K-H185
121 .enz C>, .oberts C04 Long-term complications o" li%ing donor li%er transplan-
tation4 Liver =ranspl 2'''? ) suppl 2,I HJ8-HJ
181 5#obrial .M, Haab H, Lassman C et al4 -onor and recipient outcomes in rig#t lobe
adult li%ing donor li%er transplantation4 Liver =ranspl 2''2? 7I K'1-K'K
114 Mani((am H, Htoc( 0, et al4 Clinical transplantation, in 6edical Immunolog9,
tenth edition edited bX 0arsloN 95, Htites -0, 9err A$, $mboden C+4 Mc5raN-Hill
2''1? J1K-J12
154 Bdinger M5 Ho""man 0, Brmann C, et al4 C-1
:
C-25
:
regulatorX 9 cells preser%e
gra"t*%ersus-tumor acti%itX N#ile in#ibiting gra"t %s4 #ost disease a"ter bone marroN
transplantation4 ?at 6ed 2''8? KI1111 -5'
14 0erri ., Assi M, 9alNal(ar C, et al4 5ra"t %s4 #ost disease a"ter li%er
transplantation I a neN approac# is needed4 Liver =ranspl 2''J? 18I 1'K2-K
1J4 Hmit# -M, Agura B, <etto 5, et al4 Li%er transplant- associated gra"t %s4 #ost
disease4 =ransplantation 2''8? J5I117-2
174 C#an BL, Larson AM, 5erns#eimer 9+, et al4 Liver =ranspl 2''J? 18I 51-22
1K4 Audet M, 0anaro >, 0iardi 9, et al4 0assenger LXmp#ocXte HXndrome and Li%er
9ransplantation4!linical and 4evelopmental Immunolog9 2''7?
2'4 Lazer MH and 9riulzi -C $mmune #emolXsis "olloNing A+@-mismatc#ed stem
cell or solid organ transplantation Current @pinion in Hematolog9 2''J@11,
,1* J'4
214 Hternberg A C, Lee 5, Croxton 9, et al4 He%ere #emolXsis a"ter minor A+@
unmatc#ed (idneX transplantfa non-secrector transplanted "rom a donor Nit# #ig#
anti-A titre4 =ransfusion 6edicine2'''?1'?1, 7J*7K
75
224 Ho(ol .C, Htamps ., +oo(er -C, et al44 0osttransplant immune-mediated #emolXsis
=ransfusion 2''2 , %ol4 12, no4 2, pp4 1K7*2'1
284 H#ortt C, Yestall 50, .oxbX -, et al4 A gdangerousM group @ donorI se%ere
#emolXsis in all recipients o" organs "rom a donor Nit# multiple red cell
alloantibodies4 American >ournal of =ransplantation, %ol4 7, no4 8, pp4 J11*J11, 2''74
214 0anaro >, -eC#ristop#er 0C, .ondelli -, et al4 He%ere #emolXtic anemia due to
passenger lXmp#ocXtes a"ter li%ing-related boNel transplant !linical =ransplantation
2''1? 17, 8, 882*885
254 Amirzargar A, Lessanpezes#(i M, >at#i A, et al4 9H1T9H2 cXto(ine analXsis in
$ranian renal transplant recipients4 =ransplant .roc 2''5? 8J)J,I 2K75-J
24 Lessanpezes#(i M, Amirzargar A, >at#i A, et al4 Value o" pretransplantation
cXto(ine pro"iles "or predicting acute re6ection in renal transplant recipients4
=ransplant .roc 2''5? 8J)J,I 2K72-5
2J4 Moore DY, de Yaal Male"Xt ., Co""man .L, et al4 $nterleu(in-1' and t#e
interleu(in-1' receptor4 Annu &ev Immunol 2''1? 1KI78-J5
274 5#eorg#e L, 5#eorg#e C4 9ransplantul #epaticI indicaii, contraindicaii, selecia
pacienilor, e%aluare !i alegerea momentului optim4 &evista pentru (ducaAie 6edical
!ontinu 2''2? 1I 1'J-1114
2K4 0once M, +erenguer M, 0rieto M et al4 H#ould Ne discard old donors "or #epatitis
C candidatese 9#e importance o" donor steatosis4 Hepatolog9 2''8I 87I 22A4
8'4 Han HH, @"man C, Holt C et al4 An e""icacX and cost-e""ecti%eness analXsis o"
combination #epatitis + immune globulin and lami%udine to pre%ent recurrent
#epatitis + a"ter ort#otopic li%er transplantation compared Nit# #epatitis + immune
globulin monot#erapX4 Liver =ranspl 2'''? I J11-J174
814 $mperial CC, Dee""e B+4 Li%er transplantation in Handboo1 of liver disease,
second edition, edited bX LaNrence H4 >riedman, Bmmet +4 Dee""e, C#urc#ill-
Li%ingstone, 2''1? 1'1-115
824 .ao Y, Yu \, \iu -4 Lami%udine or lami%udine combined Nit# #epatitis +
immunoglobulin in prop#Xlaxis o" #epatitis + recurrence a"ter li%er transplantationI a
meta-analXsis4 =ransplant International 2''K? 22 )1,I 87J-8K5
884 .azonable ..4 CXtomegalo%irus in"ection a"ter li%er transplantationI current
concepts and c#allenges4 Borld <astroenterolog9 2''7? 11)81,I171K-'
814 .ein(e 0, 0rosc# H, Dern >4 Mec#anisms o" #uman cXtomegalo%irus )re,acti%ation
and its impact on organ transplant patient4 9ranspl $n"ect -is 1KKK? 1)8,I 15J-1
854 Adams A+, Yilliams MA, et al4 Heterologous immunitX pro%ides a potent barrier
to transplantation tolerance4 C Clin $n%est 2''8? 111)12,I 177J-K5
76
EVALUAREA IMUNOLOGICK IN TRANSPLANTUL
MEDULAR
CCCCCCCCCCCC CCCCCCCCCCCC
Ana Mo!se5 Ileana Consan!nes"#
77
=n prezent, transplantul autolog sau alogeneic de celule stem
#ematopoietice ) 9CHH ,, reprezint o opiune terapeutic bine*cunoscut,
a%&nd un loc bine stabilit ;n algoritmul de tratament al multor a"eciuniI a"eciuni
#ematologice congenitale sau dob&ndite, tumori solide, boli autoimune,
amiloidoz, anomalii ereditare de metabolism 2134 Hursele de celule stem sunt
reprezentate de mdu% osoas, s&nge peri"eric, s&nge din cordonul ombilical4
.ezultatele clinice obinute par s "ie similare, indi"erent de surs, iar alegerea
modalitii de recoltare depinde de %&rsta primitorului !iTsau donatorului,
indicaia de transplant, pre"erina donatorului, experiena !i dotarea centrului
unde se "ace transplantul4
.ezultatul unui 9CHH depinde ;n mare msur de urmtorii "actori de
riscI stadiul bolii, inter%alul de timp scurs de la diagnostic p&na la momentul
transplantului, %&rsta pacientului ) ;n general, se obin rezultate mai bune la copii
dec&t la aduli ,, #istocompatibilitatea donator-primitor, combinaia de sex
donator-receptor ) riscul de re6et este mai mare dac donatorul este "emeie iar
primitorul brbat, 4 -e asemenea, exist un risc potenial de transmitere a unor
boli, de la donator la primitor, cum ar "iI in"ecii, boli congenitale, boli
autoimune, cancere 2234
Sa0!l!$ea "o'+a!0!l!4>!! HLA
>ederaia Buropean de $munogenetic ) B>$ , este "orul european ce
de"ine!te standardele ;n laboratoarele de #istocompatibilitate !i stabile!te
criteriile minime pri%ind tipizarea HLA pentru 9CHH de la donator ;nrudit sau
ne&nrudit4
-ar, dac ;n transplantul de organe solide, putem %orbi de mismatc#-uri
HLA PacceptabileQ situaia este complet di"erit ;n cazul transplantului de
mdu% osoas sau de celule stem4 Acest tip de transplant implic c#iar celulele
sistemului imun !i orice nepotri%ire ;ntre donator !i receptor, c#iar i
modi"icarea unui singur aminoacid ;n situsul de recunoatere a antigenului,
poate determina "enomene gra%e de re6et, "ie ;n sensul unei boli gazd contra
gre" "ie ;n sens in%ers ca boal de gre" contra gazd4
-eterminarea unui potenial donator implic o apreciere riguroas a
disponibilitii i statusului de potri%ire HLA a membrilor "amiliei, i
identi"icarea unui donator ne;nrudit potri%it, dac nu exist donator ;nrudit
78
disponibil4 -eoarece antigenele HLA determin un rspuns aloimun, potri%irea
HLA 6oac un rol pre%enti% critic ;n reducerea riscului de a"ectare a gre"ei
i de apariie a bolii de gre" contra gazd4 0e de alt parte, e"ectul de gre"
contra leucemie, asociat cu mismatc#-ul HLA, reprezint un mi6loc imunologic
de a reduce riscul de recuren de boal la pacienii cu risc crescut4
Sele"D!a .onao$#l#! *n$#.!
Cel 'a! a.e"Da .onao$ este un "rate potri%it din punct de %edere al
genotipului HLA4
Con"orm recomandrilor B>$ este obligatorie tipizarea imediat a HLA *
A, +, -.+1 la toi membrii "amiliei disponibili4 $niial se poate "ace un
screening prin tipizare "enotipic dar ulterior, la perec#ile compatibile "enotipic,
tipizarea se de"initi%eaz prin metode de biologie molecular de rezoluie ;nalt
care permit descrierea alelelor HLA la ni%el de 1 digits4
9ipizarea A+-. poate con"irma identitatea genotipic pentru ;ntregul set
de gene HLA ) potri%ire 12T12 ,4 -in cauza unui slab Qdezec#ilibru de legareQ
;ntre locusul -0 !i locii -.T-/, ;n 1 * 2R din cazuri, datorit recombinrilor
pot apare mismatc#-uri -0 ;ntre "rai alt"el identici4 0robabilitatea ca un "rate s
"ie identic HLA este de 25R, ;n timp ce probabilitatea unui "rate #aploidentic
este de 5'R4
Sele">!a .onao$#l#! ne*n$#.!
-ac un "rate, identic din punct de %edere al genotipului HLA, nu este
disponibil, transplantul cu celule stem #ematopoietice potri%ite HLA * A, +, C,
-.+1T-/+1 de la un donator ne;nrudit are aceleai rate de supra%ieuire "r
boal, mai ales pentru pacienii cu risc sczut, dar se asociaz cu o "rec%en
crescut a complicaiilor posttransplant 28,134 Mismatc#-urile alelice de obicei
implic di"erene ;n situsul de legare al peptidului, ceea ce in"lueneaz
recunoasterea dependent de celulele 94
QHtandardul de aurQ este reprezentat de tipizarea cu rezoluie ;nalt a
locusurilor HLA * A, +, -.+1, -/+1, -0+14 -ac transplantul se "ace pentru
o a"eciune nemalign, nu este necesar e"ectul de gre" contra leucemie, mediat
prin incompatibilitatea -0, i potri%irea -0+1 poate "i luat ;n considerare c&nd
sunt disponibili mai muli donatori compatibili HLA * AT+TCT-.T-/ )5,4
79
.ealizarea ;n siguran a transplanturilor de celule stem de la donatori
ne;nrudii se datoreaz, ;n mare parte, progreselor obinute ;n domeniul
imunogeneticii4 La ;nceputul anilor hK', stabilirea compatibilitii tisulare era
st&n6enit de metodele de tipizare HLA de rezoluie slab ) metode serologice ,,
;n special pentru alelele HLA de clasa $4 Htudiile recente, bazate pe metode de
tipizare de rezoluie ;nalt ) metode moleculare ,, au artat c potri%irea la ni%el
de alel se asociaz cu rezultate mai bune oricare ar "i regimul de condiionare,
mieloablati% sau de intensitate redus 2834 @ricum, importana relati% a "iecrui
locus ;n parte rm&ne o problem discutabil4 =n timp ce e"ectul mismatc#-urilor
AT+TCT-.+1 a "ost bine documentat prin multiple studii retrospecti%e, rolul
incompatibilitii -/ sau -0 rm&ne contro%ersat4 -ate recente pri%ind
transplantul de celule stem cu depleie de lim"ocite 9, de la donator ne;nrudit,
arat c matc#ing-ul HLA- -0+1 se asociaz cu risc crescut de recdere
independent de statusul de compatibilitate a celorlalte locusuri 234
.ezultate di"erite au "ost raportate i ;n studii ce implicau pacieni de etnii
di"erite4 =n populaia 6aponez, mismatc#-urile AT+TCT-.+1 reprezint "actor de
risc semni"icati% pentru 5VH- acut de gradul $$$ sau $V, i numai di"erenele
A, + sau -.+1 se asociaz cu mortalitate crescut 2J34 An alt studiu din HAA
arat c nepotri%irile HLA-AT+TCT-.+1, dar nu i mismatc#-urile -/ sau -0,
se ;nsoesc de o scdere a ratei de supra%ietuire 2734
=n cazul potri%irii alelice HLA ;n proporie de 7'-K'R, ;n completarea
tipizrii HLA de ;nalt rezoluie se e"ectueaz i testul crossmatc#4 =n cazul ;n
care testul crossmatc# este poziti%, acest "apt nu reprezint o contraindicaie
absolut pentru transplantul medular, dar regimul imunosupresor trebuie
recon"igurat ;n totalitate4
=n concluzie, toate aceste aspecte legate de potri%irea sau nepotri%irea
alelelor HLA, trebuie luate ;n considerare, ;n "uncie i de particularitile
clinico-biologice ale cazului care urmeaz a "i transplantat medular4
Sele"!a .onao$#l#! .!n 0an"a .e s=n%e .!n "o$.on#l o'0!l!"al
=n general, ;n acest caz se "ace tipizare HLA-AT+ cu rezoluie 6oas i
tipizare HLA--.+1 cu rezolutie ;nalt i matc#ing-ul se stabilete la acest
ni%el, deoarece se pare c incompatibilitile HLA sunt mai puin duntoare i
80
cel mai important parametru, de care depinde rezultatul transplantului, este
cantitatea de celule stem coninut de unitatea de s&nge recoltat 2K34
A+$e"!e$ea +$o0a0!l!4!! .e a %4s! #n .onao$ ne*n$#.!
$denti"icarea unui donator ne;nrudit potri%it la ni%el de alele HLA, este un
proces mare consumator de timp i bani4 0e baza noilor cunotiine pri%ind
"rec%ena alelelor i #aplotipurilor ;n populaii di"erite, se apreciaz c urmtorii
parametri au un impact negati% )1',I
prezena unor alele rare la pacient ) +W11'5 ,?
un #aplotip HLA-A+-. care nu se numr printre cele 1' mai "rec%ente
#aplotipuri la populaia caucazoid?
asocieri +--. neobinuite ) ex4 +5--.+1W'1'1 ,?
asocieri -.--/ neobinuite ) ex4 -.+1W15'1--/+1W''8 ,?
prezena alelelor +W2J'5, +17, +W11'2, +W11'8, +51 ce se ;nsoesc de
un risc crescut de mismatc# HLA-C?
primitor i donator de etnii di"erite?
In "on"l#&!eG Histemul HLA, cu circa 1'' de speci"iciti de"inite
serologic i peste 25'' de alele, reprezint o barier ma6or ;n transplantul de
celule stem #ematopoetice4 Consensul actual este c, selectarea donatorilor
ne;nrudii pe baza genotiprii HLA prin metode moleculare de rezoluie ;nalt se
;nsoete de cele mai bune rezultate4
-ac sunt disponibili mai muli donatori HLA identici, se recomand
alegerea unui brbat, A+@ identic iTsau CMV negati%4
@ricum, importana "iecrui locus indi%idual rm&ne ;nc o problem
desc#is, ce necesit o de"inire mai clar i, ;n acest sens, o contribuie
important %or a%ea studiile multicentrice4 -e asemenea, mai rm&ne de stabilit
care este rolul pe care ;l 6oac ali "actori imunogenetici care pot "i implicai,
cum ar "iI antigenele sistemului minor de compatibilitate, genele cito(inelor i
c#emo(inelor, genele D$.4
Genele SIR ! $ans+lan#l .e "el#le se' /e'ao+oe!"e
81
.eceptorii D$. )Diller cell immunoglobulin-li(e receptors, sunt molecule
care "ac parte din "amilia imunoglobulinelor i care se gsesc pe supra"aa
celulelor <D4 Locusul genelor D$. se a"l pe cromozomul 1K i "ace parte dintr-
un complex mai mare numit Complexul .eceptorului Leucocitar )leu(ocXte
receptor complex * L.C,4 -in punct de %edere structural, receptorul D$. este
constituit dintr-o poriune extracelular, cu 2 sau 8 domenii imunoglobulinice
)2- sau 8-,, i o poriune intracelular, lung sau scurt, L )long, i H )s#ort,4
D$.-urile cu domeniul intracelular lung au o aciune in#ibitoare asupra celulelor
<D, pe c&nd cele cu domeniul intracelular scurt transmit semnale acti%atoare4
0rin interaciunea izotipurilor in#ibitoare cu anumite molecule HLA de
clasa $, celulele sntoase sunt prote6ate de aciunea citolitic a celulelor <D4
Ast"el, receptorii D$. par 6oace un rol semni"icati% ;n controlul
rspunsului imun, ceea ce explic asocierile obser%ate ;ntre anumite gene D$. i
boli autoimune )artrita reumatoid,, psoriazis, progresia in"eciei H$V 211,
12,1834
D$. 2-L1 au ca ligand alelele HLA-C de grup 2, caracterizate prin
prezena resturilor de lizin ;n poziia 7' i asparagin ;n poziia JJ )CN2, CN1,
CN5, CN,, pe c&nd D$. 2-L2 si 2-L8 recunosc alelele HLA-C de grup 1, cu
asparagin ;n poziia 7' si serin ;n poziia JJ )CN1, CN8, CNJ, CN7,4 D$.
8-L1 este receptor pentru alelele HLA-+N14
-eoarece sunt localizate pe cromozomi di"erii, genele receptorilor D$. i
liganzilor se transmit independent descendenilor4 5enotipul HLA clasa $
determin ;n "inal ce repertoriu de receptori D$. %a "i exprimat pe supra"aa
celulelor <D, ast"el ;nc&t "iecare celul <D "uncional s exprime cel puin un
receptor D$. in#ibitor pentru antigenele HLA proprii4 Coexpresia a dou sau
mai multe D$.-uri in#ibitoare este mult mai rar 21134
Celulele <D care exprim receptori D$. pentru propriul HLA de clasa $,
dac ;nt&lnesc celule cu un alt "enotip HLA )aa cum se poate ;nt&mpla ;n cazul
unui alotransplant ,, sesizeaz lipsa ligandului speci"ic i mediaz alloreaciile
)Qmissing sel"Q recognition, 21534
Aceste mismatc#-uri D$. - ligand apar deseori in transplantul cu donator
#aploidentic4 C&nd alloreacti%itatea <D se exercit ;n direcia donor * %ersus-
primitor pare s aibe un rol crucial ;n ;mbuntirea rezultatelor posttransplant
#aploidentic i se asociaz cu 213I
82
rat de recdere de boal, semni"icati% mai mic?
rat de supra%ieuire "r e%enimente mai bun, at&t la pacienii
transplantai ;n perioada de remisiune c&t i la cei cu recdere de boal?
reducerea riscului global de recdere sau deces?
=n ceea ce pri%ete receptorii D$. acti%atori, liganzii lor speci"ici nu sunt
pe deplin cunoscui4 He pare c exist o interaciune slab ;ntre D$.2-H1 i
moleculele HLA-C LXs7' i ;ntre D$.2-H2 i moleculele HLA-C Asn7'4 Hpre
deosebire de D$.-urile in#ibitorii, cele acti%atoare prezint o mare %arietate i
#eterogenitate ;n populaia general i ;n di%erse grupuri etnice4
Circa 25R din caucazieni, care sunt #omozigoi pentru aa-numitul
#aplotip A, nu posed receptori D$. acti%atori, restul, #omo- sau #eterozigoi
pentru #aplotipul +, prezint gene in#ibitorii i %ariate combinaii de gene
acti%atoare4
=n cazul unui transplant de la donator cu <D aloreacti%e, prezena
#aplotipului + la donator se asociaz cu scderea incidenei mortalitii legate
de transplant, mortalitate datorat ;n special in"eciilor4
.eceptorii D$. acti%atori stimuleaz secreia de cito(ine i citotoxicitatea
celulelor <D ;mpotri%a celulelor in"ectate, ;n contextul absenei sel"ului, i de
asemenea pot controla in"ecia printr-un mecanism indirect rezultat din
interaciunea celulelor <D cu celulele dendritice4 $n %i%o, aceast interaciune
conduce la o cretere a raportului 9#1T9#2 21J,1734
=n concluzie, creterea numrului de transplante de celule stem
#ematopoetice cu mismatc# HLA este "ezabil ;n prezent, ;n condiiile unei
;nelegeri c&t mai complete a mismatc#-urilor QpermiseQ i a rolului genelor
D$.4
I'#no%ene!"a non6HLA ! $ans+lan#l .e "el#le se'
/e'ao+oe!"e
83
-ei tipizarea HLA rm&ne elementul central ;n selecia donatorilor i
este un "actor determinant ma6or ;n ce pri%ete rezultatele obinute
posttransplant, sec%enierea genomului uman a rele%at existena a mii de
polimor"isme genice )single nucleotide polXmorp#isms, a cror semni"icaie i
importan ;n ce pri%ete transplantul autolog rm&ne ;nc a "i elucidat4
Pol!'o$3!s'#l %enelo$ "!oA!nelo$
Multe din polimor"ismele genelor cito(ine apar in regiunea reglatoare a
genei i ast"el este in"luenat cantitatea de cito(ine produs ca rspuns la un
stimul in"ecios sau allogeneic4
Htudiile iniiale s-au "cut ;n transplantul de organe solide i s-a
demonstrat c pacienii cu genotip #ig#-secretor de 9<>-G i loN-secretor de
$L-1' prezint risc mai mare de re6et al gre"ei4 Alterior studiile au "ost extinse i
;n transplantul de CHH4
5VH- acuta este rezultatul eliberrii de cito(ine proin"lamatorii )$L-1,
$L-, $L-7, 9<>-G, ;n timpul Q"urtunii de cito(ineQ consecuti% radioterapiei i
c#imioterapiei din regimul de condiionare4 La aceasta se adaug i acti%area
lim"ocitelor 9 i <D ale donatorului, acti%are urmat de secreia predominant
de cito(ine de tip 9#1 )$L-2, $><-d, 9<>-G ,4
Cito(inele in"lamatorii sunt de asemenea implicate ;n patogenia
pneumoniei interstiiale, bolii %enoocluzi%e, ;n susceptibilitatea la in"ecii sau ;n
metabolismul medicamentelor4
An studiu 6aponez, "acut pe pacieni transplantai de la donatori potri%ii,
ne;nrudii, a artat o asociere ;ntre polimor"ismul TNF6C;8 s! C:< la donator
iTsau primitor i o inciden mai mare a 5VH- grad $$$-$V i o rat mai mic
de recdere de boal 21K34 0olimor"ismele TNF6? (680C) s! TNF6@ (T20;9) s-au
asociat cu complicaii toxice 22'34
0olimor"ismele IL620 620C2 ! 6:92 determin apariia a trei posibile
#aplotipuri care sunt loN-, intermediate- sau #ig#-secretoare de $L-1'4
Haplotipul loN-secretor la primitor se asociaz cu 5VH- se%er la pacienii
tratai numai cu Ciclosporin sau Ciclosporin cu Met#otrexat i cu
supra%ieuire mai mic 22134
0olimor"ismul IL6; 62<9GHG la primitor se asociaz cu 5VH- acut i
cronic4
84
0olimor"ismul IL62? 6CC9 la donator sau la primitor se asociaz cu
;mbuntirea ratei de supra%ieuire i reducerea mortalitii legate de
transplant 22234
An!%enele '!no$e .e /!so"o'+a!0!l!ae
5VH- care apare dup un transplant de la "rate HLA identic este iniiat
de lim"ocitele 9 care recunosc antigene minore de #istocompatibilitate ) peptide
deri%ate din proteinele intracelulare, codate de gene de pe cromozomi
autozomali sau de pe cromozomul L ,4 Anele antigene )exI HA-1, HA-2, se
gsesc numai pe celulele sistemului #ematopoietic, iar altele )exI H-L, HA-8,
sunt exprimate ubicuitar pe esuturile normale4 Cele codate de gene de pe
cromozomul L sunt implicate ;n transplantul cu mismatc# de sex4 <epotri%irile
;ntre donator i primitor pentru HA-1, HA-2, HA-1, HA-5 se asociaz cu
creterea incidenei 5VH- 22834
Ale %ene !'+l!"ae *n a+a$!!a "o'+l!"a!!lo$ +os$ans+lan (5VH-,
episoade in"ecioase, includ "amilia supergenelor receptorilor #ormonilor
steroidieni )printre care receptorul pentru estrogen i receptorul pentru %itamina
-,, genele care regleaz rspunsul gazdei la microorganisme )mieloperoxidaza,
receptorul >cd,, genele 9L.s )9oll-li(e receptors care acti%eaz celulele
prezentatoare de antigen,, genele <@- )nucleotide-binding oligomerisation
domain, 221-234
In"o'+a!0!l!aea ABO E! s#+o$#l $ans3#&!onal
Aproximati% 15 * 25R din perec#ile primitor * donator "rate HLA-
identic, sunt incompatibile A+@4 =n transplantul mieloablati%, incompatibilitatea
A+@ se asociaz cu risc crescut de ;nt&rziere ;n gre"area celulelor roii, aplazie
eritrocitar pur, #emoliz4 Mismatc#-ul A+@ nu a"ecteaz gre"area
neutro"ilelor, incidena re6etului de gre", progresia bolii sau supra%ieuirea
global 22J34
Po#ttr"n#)!"nt #e "%o)t' $rm'to"re" )o!itic' tr"n#f$-ion"!'1
85
pentru incompatibilitate AC, maor )ex4 primitor grup '-donator grup A,
se utilizeaz mas eritrocitar de grup ', indi"erent de grupul sanguin al
donatorului sau receptorului, p&n c&nd anticorpii A+@-speci"ici ai
primitorului sunt nedetectabili i testul antiglobulinic este negati%?
pentru incompatibilitate AC, minor )ex4 primitor grup A-donator grup ',
se utilizeaz mas eritrocitar de grupul donatorului?
pentru incompatibilitate AC, maor i minor )ex4 primitor grup +-
donator grup A, se utilizeaz mas eritrocitar de grup ', p&n c&nd
anticorpii A+@-speci"ici ai primitorului sunt nedetectabili i testul
antiglobulinic este negati% i apoi se trece la grupul donatorului?
Re"ons!#!$ea s!se'#l#! !'#n .#+4 $ans+lan#l .e "el#le se'
/e'ao+oe!"e
9ransplantul de celule stem o"er un model unic de reconstituire imun
gradual i ilustreaz per"ect relaia dintre tipul imunode"icienei i in"eciile cu
anumii patogeni 22734
$mediat dup regimul de condiionare apare o "az de aplazie p&n la
regenerarea neutro"ilelor de la donator4 =n aceast "az exist un risc "oarte mare
pentru in"ecii bacteriene, "ungice )aspergiloz,, %irale );n special cu HHV,4
A doua etap, primele 8-1 luni, se caracterizeaz prin re"acerea celulelor
rspunsului imun ;nscut )granulocite, monocite, macro"age celule <D, i
printr-o de"icien a imunitii celulare4 $n"ecia CMV, datorat ;n special
reacti%rii, reprezint cea mai mare problem ;n aceast "az i, mai puin
"rec%ent apar in"ecii cu %irusuri respiratoriiTenterice sau adeno%irusuri4
=n a treia etap, dup 1 luni, ma6oritatea pacienilor prezint o de"icien a
imunoglobulinelor, ;n special $g524 .egenerarea lim"ocitelor +, C-1K: se
realizeaz, de obicei, ;n decursul primului an posttransplant4 0rimitorii de
transplant alogeneic sunt ;n mod particular %ulnerabili la in"ecii cu bacterii
;ncapsulate )H4 0neumoniae, H4 $n"luenzae,4
BIBLIOGRAFIE
86
14 L6ungman 0, Arbano-$spizua A, Ca%azzana-Cal%o M, et al4 Allogeneic and
autologous transplantation "or #aematological disease, solid tumors and immune
disordersI -e"initions and current practice in Burope4 Cone 6arro0 =ransplant
2''? 8JI 18K-11K
24 <iederNeiser -, 5entilini C, Hegenbart A, et al4 9ransmission o" donor illness bz
stem cell transplantationI s#ould screening be di""erent in older donorse Cone
6arro0 =ransplant 2''1? 81I 5J-5
84 0etersdor" BY4 .is( assessment in #ematopoietic stem cell transplantation4 Cest
.ract &es !lin Haematol 2''J? 2'I 155-1J'
14 HurleX CD, Yagner CB, Hetter#olm M$, Con"er -L4 Ad%ances in HLAI 0ractical
implications "or selecting adult donors and cord blood units4 Ciol Clood 6arro0
=ransplant 2''? 12I )1 Huppl 1,I 27-88
54 9iercX CM4 9#e rol o" HLA in HHC94 =he (C6= Handboo1, 5
t#
edition 2''7? 1-K2
4 H#aN +B, Mars# H5, MaXor <0, et al4 HLA- -0+1 matc#ing status #as signi"icant
implications "or recipients o" unrelated donor stem cell transplants4 Clood 2''?
1'JI 122'-122
J4 Moris#ima L, Hasazu(i 9, $no(o H, et al4 9#e clinical signi"icance o" HLA allele
compatibilitX in patients recei%ing a marroN transplant "rom serologicallX HLA-A,
+, -. matc#ed unrelated donors4 Clood $%%$@ KKI 12''-12'
74 >lomenberg <, +axter-LoNe LA, Con"er -, et al4 $mpact o" HLA class $ and class $$
#ig# resolution matc#ing on outcomes o" unrelated donor bone marroN
transplantation4 Clood $%%D? 1'1I 1K28-1K8'
K4 5luc(man B, .oc#a V4 -onor selection "or unrelated cord blood transplants4 !urr
,p Immunol 2''? 17I 55-5J'
1'4 9iercX CM, +u6an-Lose M, C#apuis +, et al4 +one marroN transplantation Nit#
unrelated donorsI Y#at is t#e probabilitX o" identi"Xing an HLA-
AT+TCTNT-.+1T+8T+5T-/+1- matc#ed donore Cone 6arro0 =ranspl 2''? 2I
18J-111
114 Yarrington DC, 9a(emura H, 5oronzX CC, YeXand CM4 C-1:,C-27- 9 cells in
r#eumatoid art#ritis patients combine "eatures o" t#e innate and adapti%e immune
sXstems4 Arthritis &heum 11I18? 2''14
124 Martin M0, <elson 5, Lee CH, 0ellett >, et al4 HusceptibilitX to 0soriatic Art#ritisI
$n"luence o" Acti%ating Diller $g-Li(e .eceptor 5enes in t#e Absence o" Hpeci"ic HLA-
C Alleles4 > Immunol 1KI2717? 2''24
87
184 Martin M0, 5ao \, Lee CH, <elson 5Y, -etels ., 5oedert CC, +uc#binder H,
Hoots D, Vla#o% -, 9roNsdale C, et al4 Bpistatic interaction betNeen D$.8-H1 and
HLA-+ delaXs t#e progression to A$-H, ?at <enet 81I12K? 2''24
114 LaNata M, LaNata <, -rag#i M, et al4 .oles "or HLA and D$. polXmorp#isms in
natural (iller repertoire selection and modulation o" e""ector "unction4 > (xp 6ed 2''?
2'8I 88-15
154 .uggeri L, A%ersa >, Martelli M>, Velardi A4 Haploidentical transplantation and
<D cells recognition o" missing sel"4 Immunol &ev 2''? 211I 2'2-217
14 .uggeri L, Mancusi A, Capanni M, et al4 -onor <D cell allorecognition o" missing
sel" in #aploidenrical #aematopoietic transplantation "or acute mXeloid leu(emia4
C#allenging its predicti%e %alue4 Clood 2''J? 11'I 188-11'
1J4 Hmit# H.C, Heusel CY, Me#ta $D, et al4 .ecognition o" a %irus-encoded ligand bX a
natural (iller cell acti%ation receptor4 .roc ?atl Acad +ci E+A 2''2? KKI 772-7781
174 -egli Bsposti MA, HmXt# MC4 Close encounters o" di""erent (indsI -endritic cells
and <D cells ta(e centre stage4 ?ature &evie0s Immunolog9 2''5? 5I 112-121
1K4 $s#i(aNa L, Das#iNase D, A(aza 9, et al4 polXmorp#isms in 9<>A and 9<>.2
a""ect outcomes o" unrelated bone marroN transplantation4 Cone 6arro0 =ransplant
2''2? 2KI 5K-5J5
2'4 Mullig#an C5, +ardX 054 Ad%ance in t#e genomics o" allogeneic #aematopoietic
stem cell transplantation4 4rug 4evelopment &esearch 2''1? 2I 2J8-2K2
214 Lin M9, Htorer +, Martin 0C, et al4 .elation o" an $L-1' promoter polXmorp#ism to
5VH- and sur%i%al a"ter #aematopoietic -cell transplantation4 ? (ngl > 6ed 2''8?
81KI 22'1-221'
224 Cullup H, Htar( 54 $L-1 polXmorp#ism and 5VH-4 Leu1 L9mphoma 2''5? 1I
51J-528
284 5oulmX B4 Human minor #istocompatibilitX antigens4 !urr ,pin Immunol 1KK?
7IJ5-71
214 Middleton 05, Cullup H, -ic(inson AM, et al4 Vitamin - receptor gene
polXmorp#ism associates Nit# 5VH- and sur%i%al in HLA-matc#ed sibling allogeneic
bone marroN transplantation4 Cone 6arro0 =ransplant 2''2? 8'I228-227
254 <apolitani 5, .inaldi A, +ertoni >, et al4 Helected 9oll-li(e receptor agonist
combinations sXnergisticallX trigger a 9 #elper tXpe 1-polarizing program in dendritic
cells4 ?ature Immunolog9 2''5? I JK-JJ
24 Holler B, .ogler 5, +renmoe#l C, et al4 0rognostic signi"icance o" <@-2TCA.-15
%ariants in HLA-identical sibling #aematopoietic stem cell transplantationI B""ect on
88
long term outcome is con"irmed in 2 independent co#orts and maX be modulated bX t#e
tXpe o" gastrointestinal decontamination4 Clood 2''? 1'JI 117K-11K8
2J4 Helbig 5, Htella-HoloNiec(a +, Yoinar C, et al4 0ure red cell apasia "olloNing ma6or
and bidirectional A+@-incompatible allogeneic stem cell transplantationI .eco%erX
donor-deri%ed erXt#ropoiesis a"ter long-term treatment using di""erent t#erapeutic
strategies4 Ann Hematol 2''J
274 9oubert A4 $mmune reconstitution a"ter allogeneic HHC94 =he (C6= Handboo1, 5
t#

edition 2''7? 2KJ-81
89
Glosa$ .e e$'en! 6 I'#nolo%!a $ans+lan#l#!

Alel4I %ariant a unei gene ;ntr-un locus genetic particular4 Cele dou alele, de
pe cei doi cromozomi omologi, pot "i identice, !i indi%idul este #omozigot sau
di"erite !i el este #eterozigot4
Alo%$e34I este tipul cel mai rspandit de gre" !i se re"er la situaia ;n care un
organ se transplanteaz unui indi%id aparin&nd aceleia!i specii, dar di"erit
genetic4
Alo$ea"!D!aeI descrie stimularea celulelor 9 de ctre moleculele MHC, altele
dec&t cele proprii? marc#eaz recunoa!terea moleculelor MHC alogenice4 Ast"el
de rspunsuri sunt numite aloreacii4
An!"o$+I este o protein care se leag speci"ic la o substan particular,
antigenul corespunztor4 >iecare molecul de anticorp are o structur unic care
;i permite s se lege speci"ic la antigenul su corespunztor, dar toi anticorpii au
acee!i structur !i sunt cunoscui ca imunoglobuline sau $g-uri4 Anticorpii sunt
produ!i de celulele plasmatice ca rspuns "a de in"ecie sau imunizare,
leg&ndu-se la patogeni, neutraliz&ndu-i !i ;i pregte!te pentru distrugere de ctre
"agocite4
An!"o$+! "!oo,!"!I anticorpi anti-HLA
An!%enG orice molecul care se leag speci"ic de un anticorp4 <umele lor
pro%ine de la abilitatea acestora de a genera anticorpi4 <u toate antigenele sunt
capabile s stimuleze producia de anticorpi? antigenele care induc producia de
anticorpi sunt denumite imunogene4
ASHII Hocietatea American de Histocompatibilitate !i $munogenetic4
A#o%$e34I c&nd un organ se transplanteaz aceluia!i indi%id, dar ;n alt parte a
organismului4
CDI !lusters of differentiation, sunt grupuri de anticorpi monoclonali care
identi"ic aceea!i molecul de la supra"aa celular4 Molecula de la supra"aa
celulei este desemnat C- urmat de un numar )de exempluI C-1, C-2 etc,4
Cel#lele +$e&enaoa$e .e an!%enI sunt celule ;nalt specializate care pot
procesa antigene ale cror "ragmente peptidice le proiecteaz pe supra"aa
celular ;mpreun cu moleculele necesare acti%rii celulelor 94 0rincipalele
90
celule prezentatoare de antigen pentru celulele 9 sunt celulele dendritice,
macro"agele !i celulele +4
Cel#lele T CD9 (@e!)er)G aceste celule a6ut celulele + pentru a produce
anticorpi ca rspuns la stimularea antigenic4 Cele mai e"iciente celule 9 helper
sunt cunoscute ca celule 9H2, care produc cito(inele $L1 !i $L54 Celulele C-1
sunt importante pentru recunoa!terea peptidelor antigenice legate la moleculele
MHC de clasa a$$-a4 Acioneaz ca !i co-receptori prin legarea la partea lateral
a moleculelor MHC de clasa a$$-a4
Cel#lele T CDCI sunt celule 9 care poart co-receptorul C-74 Aceste celule
recunosc antigenele, de exemplu antigenele %irale, care sunt sintetizate ;n
citoplasma celulei4 0eptidele deri%ate din aceste antigene sunt transportate de
ctre 9A0, asamblate cu molecule MHC de clasa $ ;n reticulul endoplasmatic !i
expuse ca complexe peptide MHC de clasa $ pe supra"aa celular4 Celulele 9
C-7 se di"ereniaz ;n celule 9 C-7 citotoxice4
Cen!'o$%anI unitate de msur a distanei dintre dou locusuri ;n lin(age,
stabilit prin "rec%ena recombinrilor ;ntre locusuri4 Bste egal cu o "rec%en de
recombinare de 1R ;ntre locusuri4 Are simbolul cM4 Anitate de recombinare4
Cen$o'e$I punct de unire a cromatidelor4 La om sec%enele centromerice sunt
di"erite4
C/!'e$aI coexistena la ni%elul unui singur indi%id sau la ni%elul esuturilor
sau celulelor a dou genotipuri di"erite4 -e exemplu, primitorul unui transplant
de madu% de la un indi%id genetic di"erit are celulele sanguine de origine ale
donatorului ca !i celulele autologe4 9ermenul pro%ine din mitologia greac,
re"lect&nd un monstru cu un cap de leu, un corp de capr !i coada unui dragon4
C!oA!neI polipetide secretate care a"ecteaz "uncia altor celule4 Cito(inele sunt
importante pentru interaciunile celulare din cadrul rspunsului imun4 Cito(inele
produse de "agocitele mononucleare se numesc mono(ine? cele produse de
lim"ocite se numesc lim"o(ine4
Co. %ene!"I triplete de baze din A-< !i A.< care poart in"ormaia genetic,
necesar sintezei proteinelor4 Bste un %eritabil dicionar care permite trecerea de
la un grup de 8 nucleotide )triplet sau codon, la un aminoacid speci"ic4
Co.onI sec%ene a trei nucleotide mA.<, care codi"ic un aminoacid speci"ic4
Co.on a'0!%##I care codi"ic mai muli aminoacizi cu sens gre!it )missens,!i
care ;n urma unei mutaii de%ine un codon terminator al sintezei lanului
polipeptidic4
91
Co.on !n!>!ao$I unul dintre cei 2 codoni AA5 sau 5A5 care marc#eaz
;nceputul sintezei proteice4
Co.on! s!non!'!I care codi"ic acela!i aminoacid4
Co.on! e$'!nao$!I care anun terminarea sintezei proteinelor4 C&nd
ribozomii a6ung ;n dreptul lor, sinteza se opre!te !i lanul polipeptidic este
eliminat4
ConDe$s!e %en!"4I ;nlocuire a materialului genetic de pe un sit particular al unei
cromatide, de ctre materialul genetic situat pe un punct exact corespunztor, de
pe o cromatid ne-sor? este o "orm particular de recombinare, care explic
apariia unor anomalii de segregri4
CREGsI !ross reactive groups )grupuri care reacioneaz ;ncruci!at, epitopi
publici care sunt responsabili pentru crossreacti%itatea serologic bine
cunoscut care este obser%at ;ntre aloantiserurile HLA4 Modelul
crossreacti%itii serologice a antiserurilor HLA au "ost utilizate pentru a
categorisi genele HLA de clasa $ ;n grupuri ma6ore crossreacti%e sau C.B5s4
+aza molecular a crossreacti%itii serologice este existena concomitent,
di"ereniat a epitopilor publici la ni%elul mai multor gene HLA4
C$o'a!n4I complexul de A-<, #istone, proteine ne#istonice !i puin A.<
care compune cromozomul4
C$o'o&o'I purttorul in"ormaiei genetice4
C$oss!n%6oDe$I ;ncruci!are, sc#imb de material genetic ;ntre cromatidele
cromozomilor omologi4
C$oss'a"/I test care e%ideniaz anticorpi direcionai "a de antigenele HLA
prezente la ni%elul lim"ocitelor 9 ale donatorului )clasa $, sau la ni%elul
lim"ocitelor + ale donatorului )clasa a $$-a, implicate ;n rspunsul imun? prin
acest test se pre%ine "enomenul de re6et ;n transplantul renal4
EFII >ederaia Buropean de $munogenetic
ELISAI (nz9me/Lin1ed Immunosorbent Assa9, este un test serologic ;n care un
antigen sau un anticorp legat este detectat utiliz&nd anticorpi cuplai cu o enzim
care con%erte!te un substrat incolor ;ntr-un produs colorat4 9estul BL$HA este
larg "olosit ;n biologie !i medicina ca !i ;n imunologie4
E+!o+I determinant antigenic de"init
E+!o+ +$!DaI iniial, un epitop pri%at a "ost considerat a "i unic la ni%elul unui
singur produs genetic alelic4 Astzi prin epitop pri%at ;nelegem epitopii care se
92
a"l la ni%elul unui grup limitat sau "amilii de alele str&ns ;nrudite, cum sunt
alelele A2 )AW'2'1-'22K,, sau alelele +8K )+W8K '1'11-W8K15,4 Bpitop de grup
este un termen !i mai adec%at pentru a descrie acest tip de epitop !i poate "i
intersc#imbat cu termenul de Ppri%atQ4
4
E+!o+! +#0l!"!I exist concomitent, di"ereniat ;ntre conglomeratele de gene
HLA care ;n mod normal aparin la grupuri di"erite de gene, str&ns ;nrudite, de
exemplu, existena concomitent a epitopului public ;ntre A2 !i moleculele +5J
sau 574
E,onI sec%en de nucleotide care codi"ic o sec%en de aminoacizi speci"ici4
=n medie, ei sunt constituii din 1''-8'' de nucleotide4 @ gen este, ast"el
constituit din mai muli exoni separai prin introni, iar "iecare exon poate "i
considerat un modul al unei proteine4
E,+$es!e %en!"4I mani"estare "enotipic a unei gene speci"ice? este condiionat
de natura genei, dominant sau recesi%, de interaciunea cu alte gene, condiiile
de mediu, penetran !i expresi%itate4
Feno!+I caracteristicile detectate ale unei celule sau organism? rezult din
interaciunile genotipului cu mediul4
Gen4I in"ormaia nucleotid care asigur sinteza unei sec%ene de aminoacizi !i
care ocup un locus speci"ic4
Geno'I set #aploid de cromozomi4 9otalitate a %ariantelor genetice de pe un
locus dat4 -ac pe un locus se gsesc n alele, atunci pot exista n #omozigoi !i
n)n-1,T2 #eterozigoi4 <umrul total al genotipurilor de pe acela!i locus este egal
cu n)n:1,T24 5enomul uman conine ,1 x 1'
-1'
g A-<, ec#i%alentul a 57'' de
milioane de baze, ;n timp ce al (scherichia !oli are numai 1 milioane4 <ucleul
diploid uman include milioane de gene4
Geno!+I constituia genetic a unui organism4
Ha+lo!+I setul de alele HLA gsit pe un cromozom4
H!so"o'+a!0!l!aeI identitate la ni%elul moleculelor de #istocompatibilitate
de clasa $ !i clasa a $$-a4 9ermenul este "olosit ;n sens operaional ;nsemn&nd
similaritate su"icient ;ntre moleculele HLA ale donatorului !i primitorului, ;n
transplantul de organe4
HLAI antigene leucocitare umane sau Pleucocite de #istocompatibilitateQ4
93
I'#no%ene!"4I ramura a geneticii care studiaz complexitatea proceselor ce
asigur aprarea !i integritatea organismului, ;n ipoteza ;n care ;n organism
ptrund antigene strine? controlul genetic al imunoglobulinelor, de"icienele
condiionate genetic, rspunsul imun, imunitatea celular etc, %ariabilitatea
genelor implicate ;n acest proces )A+@, .#, HLA, precum !i tulburrile
autoimune? imunogenetica a descoperit complexul ma6or de #istocompatibilitate,
a reu!it s cartogra"ieze regiunea cromozomial pe care este situat acest
sistem, a elucidat structura anticorpilor )imunoglobulinelor,, a explicat
"enomenele de compatibilitate !i incompatibilitate, a precizat existena
asociaiilor dintre genele sistemului HLA !i di%erse tulburri4
Ine$le#A!neleI sunt cito(ine secretate ;n principal de celulele mononucleare
)lim"ocitele !i "agocitele mononucleare, care induc cre!terea !i di"erenierea
lim"ocitelor !i a celulelor stem #ematopoietice pluripotente4
In$onI sec%en de 1''-1''' nucleotide situat ;n a"ara sau ;n interiorul genei
care separ exonii )sec%enele de nucleotide A-< care sunt transcrise, !i sunt
prezente ;n mA.<4 9oi intronii studiai p&n acum ;ncep cu sec%ene 59 !i se
termin cu sec%enele A54 Aneori, sec%enele de ;nceput !i de s"&r!it se repet
de numeroase ori4 $ntronii coordoneaz sinteza proteinelor !i diminueaz
"rec%ena mutaiilor sur%enite ;n cursul recombinrii4
I&o%$e34I c&nd un organ se transplanteaz ;ntre indi%izi ai aceleia!i specii, cu
con"iguraie antigenic identic )gemeni monozigoi,4
L!nAa%eI asociere a dou sau mai multe gene nealele ;n a!a "el ;nc&t se transmit
ca o singur unitate dac nu inter%ine "enomenul de crossing-o%er4
L!nAa%e .!seB#!l!0$!#' I legtur dezec#ilibrat * tendin a unor alele situate
pe locusuri di"erite de a aprea ;mpreun pe acela!i cromozom sau #aplotip, ;ntr-
o sec%en mai mare dec&t cea a!teptat teoretic4
MHCI complexul ma6or de #istocompatibilitateI regiune cromozomial "ormat
din locusurile care au rol "undamental ;n procesele imune4 La om MHC este
sistemul HLA, omolog cu complexul H2, la !oarece4
M!"$oa$$aPI te#nologie cu microcipuri, care are ca principiu de baz
#ibridizarea complementar a sec%enelor simplu spiralate ale acizilor nucleici4
=n genetica cancerului, A-< microarra9 este creat prin plasarea di"eritelor
A-<-uri pe un mic "ragment al unui microcip, "olosindu-le apoi, pentru a
e%alua expresia A.< ;n celulele normale sau maligne4
94
M#a>!eI modi"icare permanent !i transmisibil a structurii !i implicit a "unciei
unei gene4 -e obicei, termenul de mutaie se re"er la o singur gen4 0rin
lrgirea conceptului, ;n categoria mutaiilor au "ost incluse modi"icrile
numerice !i structurale ale cromozomilor, precum !i modi"icrile numerice ale
genomului )poliploidia,4
Neo+e$!naI pteridin seric secretat de macro"ag? %alorile serice crescute ale
neopterinei reprezint expresia acti%rii rspunsului imun celular4
Pol!'o$3!s'I ;nseamn existena ;ntr-o %arietate de "orme di"erite4
0olimor"ismul genetic este %ariabilitatea de la ni%elul locusului genei ;n care se
produc %ariante genice la o "rec%en mai mare de 1R4 Complexul ma6or de
#istocompatibilitate )MHC, este cel mai polimor" conglomerat de gene cunoscut
la om4
P$e&ena$ea an!%en!"4I descrie antigenul ca "ragmente peptidice legate la
moleculele MHC pe supra"aa unei celule4 Celulele 9 recunosc antigenul c&nd
este prezentat ;n acest "el4
P$o"esa$ea an!%en!"4G este degradarea proteinelor ;n peptide care se pot lega la
moleculele MHC pentru prezentare la celulele 94 9oate antigenele, cu excepia
peptidelor, trebuie s "ie procesate ;n peptide ;nainte de a putea "i prezentate de
ctre moleculele MHC4
Re-e#l %$e3e!I reacie imunologic direcionat "a de moleculele de
#istocompatibilitate din gre" care conduce la eliminarea sau re6etul gre"ei4
RT6PCRI reacie de ampli"icare genic "olosit pentru a ampli"ica sec%enele
A.<4 Bnzima re%ers-transcriptaza ).9, este "olosit pentru a con%erti sec%ena
A.< ;ntr-o sec%en de A-< complementar )cA-<,, care este apoi ampli"icat
prin 0C.4
Se%$e%a$eI separare a cromozomilor omologi ;n meioz, implicit, separarea !i
migrarea ;n gamei di"erii a celor 2 membri ai oricrei perec#i de alele4 =n acest
"el se disociaz !i caracterele materne !i paterne4 Bste prima lege a lui Mendel,
legea segregrii genelor4
S!se'#l "o'+le'enI este un set de proteine plasmatice care reacioneaz
;mpreun pentru a ataca "ormele extracelulare ale patogenilor4
S!se'#l %$#+elo$ san%#!ne ABOI antigene care sunt exprimate pe eritocite4
Ble sunt "olosite pentru tipizarea s&ngelui uman pentru trans"uzii4 $ndi%izii care
nu exprim antigenele A sau + pe eritrocitele lor, ;n mod natural "ormeaz
anticorpi care interacioneaz cu acestea4
95
S!G PpozitieQ, PlocalizareQ? 14 Cea mai mic unitate a unei gene care poate su"eri
o mutaie4 24 Hec%en de nucleotide recunoscut speci"ic de anumite proteine4
Ta+as!n (TAP J "##oci"te% )rotein)G este o molecul c#eie ;n asamblarea
moleculelor MHC de clasa $? o celul de"icient ;n aceast protein are numai
molecule MHC de clasa $ instabile pe supra"aa celular4 9A01 !i 9A02
)Ptransporters associated Nit# antigen processingQ, sunt proteine * caset care
leag A90, implicate ;n transportul peptidelor scurte din citosol ;n lumenul
reticulului endoplasmatic, unde se asocieaz cu moleculele MHC de clasa $4
TCR (UT6"ell $e"e+o$V)G receptorul celulei 9 este al lanurilor ;nalt %ariabile
!i #eterodimer legate disul"idic, exprimate de membrana celular ca un
complex cu lanurile C-8 permanente4 Celulele 9 care poart acest tip de
receptor "rec%ent denumite celule 9 4
Telo'e$I cromomer terminal situat la extremitile cromozomilor care au rolul
de a ;mpiedica "uziunea cromozomilor intaci4
Xeno%$e3aI este transplantul de organe ;ntre specii di"erite )de exempluI de la
porc sau de la babuin la om,4
96
97