INTRODUCCION

Durante los procesos biolgicos y el constante intercambio con el medio, se generan

especies qumicas conocidas como radicales libres, se caracterizan por presentar un
electrn desapareado y por ser muy reactivas. Los radicales resultan de gran inters las
especies reactivas derivadas del oxgeno (EROS) debido a la estructura biradicalica de
esta molcula y al gran nmero de procesos que las generan y en los que puede verse
involucradas.
Los principales eros son anin superoxido (O2), radical hidroxilo (OH), oxigeno singlete y
el perxido de hidrogeno (H2O2). Estas especies radicalicas estn implicadas en el dao
celular de forma tal que la agresiones oxidantes pueden dirigirse hacia la carcinognesis,
enfermedades inflamatorias, senectud celular y enfermedades neurodegenerativas entre
otros proceso patolgicos.
En el organismo existe un sistema de proteccin antioxidante formado por enzimas y
compuestos de bajo peso molecular. Una de las enzimas que intervienen en la proteccin
y, en el mantenimiento del balance oxidante/antioxidante es la catalasa (CAT).
La catalasa se encuentra en las clulas de tejidos animales y vegetales. La funcin en los
tejidos es necesaria porque durante el metabolismo celular, se forma una molcula toxica
que es el PER-OXIDO DE HIDROGENO, H2O2 (agua oxigenada), la cata-lasa, lo
descompone en agua y en oxgeno.
La reaccin de la catalasa sobre el H2O2, es la siguiente,
2 H
2
O
2
2H
2
O + O
2

CATALASA
Su funcin es proteger a las clulas del efecto del perxido de hidrogeno (agua
oxigenada). Fue una de las primeras enzimas purificadas ms suficientes con una
velocidad de 200000 transformaciones/segundo/subunidad.
La protena es un tratamiento formado por cuatro subunidades idnticas. Cada monmero
contiene un grupo prosttico HEMO en el centro activo. En algunas especies tambin
contienen una molcula de NADP por subunidad cuya funcin es proteger a la enzima de
la oxidacin por su sustrato H2O2.
Es una enzima tetrametrica, con cuatro subunidades idnticas de 60 KDa contiene cuatro
grupos de ferroprotoporfirina por molcula no puede ser saturada por H2O2 a ninguna
concentracin, catalizando su conversin en agua y oxgeno, para proteger a la clula de
agua oxigenada. Con dadores de H (metanol, etanol, cido frmico, fenoles) presenta
actividad peroxidasa.
El H2O2 es catalizado enzimticamente en organismos anaerobios por la catalasa y otras
peroxidasas. En animales, el perxido de hidrogeno se destoxifica mediante las
actividades de la catalasa y la glutatin peroxidasa. La catalasa no es esencial para
algunos tipos de clulas en condiciones normales, tiene un importante papel en la
adquisicin de tolerancia al estrs oxidativa en la respuesta adaptativa de las clulas. La
catalasa captura el agua oxigenada de que pueda escapar de la clula y lo convierte en
oxigeno molecular.

IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
4.1 Reconocimiento
Formar una pila de tubo segn la muestra de tejidos vegetales con las que
cuente
Colocar las muestras de tejidos en cada tubo
Aadir 2 gotas de agua oxigenada al mismo tiempo
Observar la mayor o menor actividad, segn en el tejido que se realice la
experiencia
Identificar al ms reactivo

4.2 Desnaturalizacin de la catalasa
Rotular 3 tubos de ensayo de A-C. Medir el pH del suero de la muestra que
mostro mayor actividad en la experiencia anterior y registrar la lectura. Aada 1
ml de homogenizado a cada tubo de ensayo. Agregar 3 ml de HCl al 1M al
tubo A, 3 ml de NaOH al 1M y 3 ml de perxido de hidrogeno a cada tubo de
ensayo.
Repetir el mismo procedimiento para la muestra tomate.

4.3 Efecto de la temperatura.
Disponer de 5 tubos de ensayo y rotular desde el 1 5. Colocar en cada tubo
de ensayo 3 ml de muestra de hgado, Marcar la altura homogenizado en el
tubo de ensayo.
Someter cada tubo de ensayo a las temperaturas que se muestra en la
siguiente tabla. Despus de transcurridos 20 minutos. Adicionar a cada uno 2
ml de agua oxigenada. Registrar el tiempo y la altura alcanzada por el agua y
el oxgeno.
Realizar el mismo procedimiento para la muestra de tomate.

4.4 Efectos de los inhibidores.
Disponer de tres tubos de ensayo, colocar en cada uno de ellos 2 ml de
hgado. Adicionar 5 gotas de NaOH.
Agregar lentamente por las paredes de los tubos de ensayo, 1 ml de acetato
de plomo al primer tubo, segundo 1 ml de cloruro frrico y al tercero 1 ml de
acetato de plomo.
Agitar los tubos de ensayo. Adicionar a cada uno 1 ml de perxido de
hidrogeno y observar si hay presencia de catalasa.

V. RESULTADOS

Tabla 1. Reconocimiento de la catalasa

Homogenizado Reaccin al aadir gotas de perxido
Hgado +++
Carne ++
Tomate +
Cebolla +
Espinaca -
Papa -

Qu ocurri al aadir el perxido de hidrogeno?
- Al agregar el perxido de hidrogeno se produjo un burbujeo que es la
formacin de agua y oxgeno.

Ocurri lo mismo para todas las muestras?
-
Por qu se forman las burbujas?
- Se forman las burbujas debido a la presencia de las enzimas catalasas las
cuales reaccionan con el perxido de hidrogeno, degradndolo.

En qu otros organismos se pueden realizar el mismo experimento?
-
Qu homogenizado produjo ms gas?
- El homogenizado que produjo ms gas fue la muestra de hgado.

Qu sugiere la evidencia o los resultados de los experimentos realizados?
Contienen catalasa?.
-
Tabla 2. Influencia del pH sobre la actividad de la catalasa en muestra de Hgado.
Tubo Enzima pH inicial Adicin pH final Sustrato Reaccin
A Catalasa 6.76 HCl
3.85
Perxido de
hidrogeno
+++
B Catalasa 6.76 NaOH
12.05
Perxido de
hidrogeno
+++
C Catalasa 6.76 Agua
7.03
Perxido de
hidrogeno
+++




Tabla 3. Influencia del pH sobre la actividad de la catalasa en muestra de carne.
Tubo Enzima pH inicial Adicin pH final Sustrato Reaccin
A Catalasa 6.43 HCl
2.74
Perxido de
hidrogeno
-
B Catalasa
6.43
NaOH
12.60
Perxido de
hidrogeno
+
C Catalasa
6.43
Agua
6.00
Perxido de
hidrogeno
+

Tabla 4. Influencia del pH sobre la actividad de la catalasa en muestra de tomate.

Tubo Enzima pH inicial Adicin pH final Sustrato Reaccin
A Catalasa 5.86 HCl
2.81
Perxido de
hidrogeno
-
B Catalasa
5.86
NaOH
12.45
Perxido de
hidrogeno
-
C Catalasa
5.86
Agua
6.00
Perxido de
hidrogeno
-

Tabla 5. Influencia de la temperatura sobre la actividad de la catalasa en muestra de
hgado.

Tubo Temperatura Sustrato
Tiempo de
reaccin
Altura
Velocidad
de reaccin
1 0
Perxido de hidrogeno
20 min 12.2 cm 3
2 4
Perxido de hidrogeno
20 min 12.7 cm 3
3 Ambiente
Perxido de hidrogeno
20 min 13.1 cm 3
4 37
Perxido de hidrogeno
20 min 11.5 cm 3
5 80
Perxido de hidrogeno
20 min 1.2 cm 10

Tabla 6. Influencia de la temperatura sobre la actividad de la catalasa en muestra de
tomate.
Tubo Temperatura Sustrato
Tiempo de
reaccin
Altura
Velocidad
de reaccin
1 0
Perxido de hidrogeno
20 min 1.5 cm 1.47 min
2 4
Perxido de hidrogeno
20 min 1.6 cm 1.44 min
3 Ambiente
Perxido de hidrogeno
20 min 2.1 cm 1.40 min
4 37
Perxido de hidrogeno
20 min 1.4 cm 1.34 min
5 80
Perxido de hidrogeno
20 min 1.4 cm No reacciona






Tabla 7. Efecto de los inhibidores.

Muestra
Soluciones de compuestos inhibidores
Sol. Sulfato de cobre Sol. Acetato de plomo Sol. Cloruro frrico
Hgado +++ +++ +++
Papa - - -
Carne ++ ++ ++
Tomate + + +
Cebolla - - -
Espinaca - - -

VI. CUESTIONARIO
6.1. Cul es la relacin entre el pH y la actividad enzimtica?
- La relacin pH - actividad enzimtica, constituye un factor de regulacin
intracelular de la actividad enzimtica.
- Las enzimas poseen un pH caracterstico donde su actividad es mxima, por
encima o debajo de ese pH la actividad disminuye, es decir se modifique su
velocidad de reaccin y hace que sea ms lenta.
6.2. Las enzimas del estmago funcionan mejor con un pH de 2. Cmo afectara
un pH de 4 en el estmago a la digestin?
-
6.3. Mencionar ejemplos de otras enzimas que acten en nuestro cuerpo.
- En nuestro organismo actan enzimas como la amilasa, la pepsina, lipasa,
lactasa y ptialina.
6.4. Qu efecto podra tener una fiebre alta prolongada sobre el funcionamiento o
no funcionamiento de una enzima.
-
6.5. Mencione alguna condicin mdica que se debe al mal funcionamiento o no
funcionamiento de una enzima.
- La enzima ptialina de la saliva, convierte el almidn (del pan por ejemplo), en
maltosa, para que despus otra encima obtenga glucosa a partir de esa maltosa.
La ptialina slo acta en ambiente ligeramente alcalino y por eso con una sola
gota de cido se ver interrumpida su funcin, y el almidn llegar al intestino sin
ser procesado, donde otra enzima, la amilasa, intentar realizar la tarea que la
ptialina no pudo ni siquiera comenzar, pero en muchas ocasiones el almidn habr
comenzado ya su proceso de fermentacin y putrefaccin al intestino e
irremediablemente se producir gas y txicos.
6.6. Qu sucede cuando se pone perxido de hidrogeno en una herida? Qu
sugiere la evidencia?
-
6.7 Cul es la funcin biolgica de la amilasa salival?
- La amilasa es una protena que sirve para descomponer los carbohidratos
complejos en azcares simples, necesarios para que el organismo pueda absorber
los azcares y convertirlos en energa.
- La amilasa tambin ayuda a descomponer el almidn, la principal forma de
almacenamiento del azcar en los vegetales que ingerimos, para permitir su
digestin.
6.8 Cul es la composicin qumica de la amilasa salival?
-

VII. CONCLUSIONES
El cambio de pH si afecta la actividad enzimtica porque cuando se le agreg el
HCl disminuyeron las reacciones con las muestras, con el perxido de hidrogeno.
Ya que el HCl desnaturalizo a la catalasa ya que esta es una protena.
Comprobamos que existe la presencia de catalasa en el nuestro organismo, al
momento de experimentar con las muestras de carne y hgado (clulas animales)
a su vez que tambin existen el clulas vegetales.
Reconocimos que de todas las muestras experimentadas, la muestra de hgado
destaco en todos los ensayos, deduciendo la existencia y la alta concentracin de
enzimas catalticas.
La accin de la catalasa sobre el perxido de hidrogeno fue de degradarlo,
produciendo agua y oxgeno, ya que el perxido de hidrogeno es toxico para el
organismo.
VIII. RECOMENDACIONES
-




IX. FUENTES DE CONSULTA
http://www.arrakis.es/~rfluengo/enzimas.html
http://es.wikipedia.org/wiki/Catalasa
http://es.scribd.com/doc/20709625/practica-CATALASA
http://www.forest.ula.ve/~rubenhg/enzimas/index.html
http://www.uned.es/pea-nutricion-y-dietetica-I/guia/guianutr/enzimas.htm
http://www.lenntech.com/espanol/pH-y-alcalinidad.htm