Coliformes Coliformes totales, totales, termotolerantes termotolerantes y y

Escherichia coli Escherichia coli por el mtodo por el mtodo

de filtracin de membrana ( FM ) de filtracin de membrana ( FM )
Biloga: Carmen Vargas G.
OPS / CEPIS
Curso sobre mtodos bacteriolgicos Curso sobre mtodos bacteriolgicos
para el anlisis de Agua Potable para el anlisis de Agua Potable
23- 27 de octubre del 2000 23- 27 de octubre del 2000
Lima - Per Lima - Per
Centro Panamericano de Ingeniera Sanitaria
y Ciencias del Ambiente
Enviromental Protection Agency
Coliformes totales
Coliformes
termotolerantes
RELACIN ENTRE COLIFORMES RELACIN ENTRE COLIFORMES
TOTALES, TERMOTOLERANTES Y TOTALES, TERMOTOLERANTES Y E. E. coli coli
Escherichia Escherichia coli coli
ORGANI SMOS COLI FORMES
3 Bacterias Gram-negativas, forma de bastoncillos
3Se desarrollan en presencia de sales biliares u otros
agentes tensoactivos
3Tienen propiedades de inhibicin.
3Fermentan la lactosa a 35-37C, produciendo gas,
cido y aldehdo en 24-48 horas.
3Son oxidasa negativa y no forman esporas.
3Presentan actividad a la -galactosidasa
DEFINICIN
GRUPO COLIFORME ( FM )
Bacterias aerobias y anaerobias facultativas,
gram negativas, no esporuladas y de forma alargada
que desarrollan una colonia roja con brillo metlico
en un medio tipo Endo que contiene lactosa a
inoculacin de 35 0,5C - 24 hrs.
GRUPO COLIFORME
GRUPO COLIFORME
GNEROS GNEROS FUENTE FUENTE
Escherichia Escherichia HECES ( HECES (humanos y animales humanos y animales) )
Klebsiella Klebsiella HECES, AMBIENTE HECES, AMBIENTE
Enterobacter Enterobacter HECES, AMBIENTE HECES, AMBIENTE
Citrobacter Citrobacter AMBIENTE AMBIENTE
Serratia Serratia AMBIENTE AMBIENTE
ORGANISMOS PATGENOS EN EL AGUA ORGANISMOS PATGENOS EN EL AGUA
MTODOS PARA COLIFORMES MTODOS PARA COLIFORMES
TOTALES TOTALES
Mtodo de filtracin por membrana (FM) Mtodo de filtracin por membrana (FM)
Un total de 100 ml de muestra en uno o ms filtros;
por ejemplo,1 filtro con 100 ml 4 filtros con 25 ml
cada uno.
Preparacin de diluciones decimales
Muestra de agua
cruda
Dilucin
10
- 1
Dilucin
10
- 3
Dilucin
10
- 2
10 ml
Agua de dilucin
amortiguada
10 ml 10 ml
90 2 ml 90 2 ml 90 2 ml
10 ml 10 ml
10 ml
1 ml
0,1 ml 0.01 ml
100 ml 25 ml
50 ml
100 ml
50 ml
10 ml
Volumen filtrado
Placas con AGAR m-
FC ALMOHADILLA
EMBEBIDA EN
CALDO m-FC
VOLUMEN DE MUESTRA
ORIGINAL FILTRADA
COLIFORMES TOTALES - VERIFICACIN DEL FM
Muestra
Agar mEndo 35 0.5C, 24 h
Crecimiento
+
, Gas
+
Caldo lactosado verde brillante
bilis 35 0.5 C, 24 - 48 h
Coliformes totales verificados
Crecimiento
+
, Gas
+
a) Seleccionar 5 colonias con brillo metlico, o
b) Trasladar las colonias con un hisopo del filtro a
Caldo lauril triptosa 35 0.5C, 24 - 48 h
DEFINICIN
Bacterias que forman parte del grupo
Coliforme, bacilos gram negativos,
no esporulados que fermentan la lactosa
con produccin de cido y gas a 44.5 0,2 C
dentro de las 24 2 hrs.
La mayor especie en el grupo de coliformes
termotolerantes es la E. Coli.
COLIFORMES TERMOTOLERANTES
(fecales)
MTODO PARA COLIFORMES
TERMOTOLERANTES
Se realiza a partir de colonias
positivas de coliformes totales en
placas con medio m Endo, las
cuales son transferidas en tubos
conteniendo medio EC, durante 24
hrs.
CONFIRMACIN DE COLIFORMES
TERMOTOLERANTES
MUESTRA
AGAR m-ENDO m-ENDO LES
35C 0,5 C / 24 HRS
SELECCINAR 5 COLONIAS VERDE DORADO Y CON
BRILLO METLICO
COLIFORMES TERMOTOLERANTES ( fecales)
CALDO EC 44,5 C 0,2 C / GAS (+) 24 HRS
PRUEBA PARA COLI FORMES
TERMOTOLERANTES POR MF SOLO CON
AGUA DE LA FUENTE
MUESTRA
COLIFORMES TERMOTOLERANTES
( fecales )
Medio m - FC
44,5 C 0,2 C / 24 hrs.
COLONIAS AZULES
DEFINICIN
Escherichia coli
Bacteria Coliforme que posee la enzima - d
Glucoronidasa y es capaz de romper el sustrato
4-metil umbeliferil glucornido ( MUG) con la
produccin de fluorescencia cuando crece en
los medios EC MUG a 44.5 0,2 C en 24 0,2
horas en Agar nutritivo con MUG a 35C 0,5 en
4 horas
E. coli
MTODO DE FILTRACIN DE MEMBRANA
MUESTRA
AGAR m-ENDO m-ENDO LES 35C 0,5 C / 24HRS
FLUORESCENCIA LUZ UV 366 nm
CALDO EC + MUG 44,5 C 0,2 C/ gas (+) 24 hrs
SELECCINAR 5 COLONIAS VERDE DORADO Y
CON BRILLO METLICO
E. coli
E. coli
FI LTRACI N DE MEMBRANA MEMBRANA FI LTRANTE
( MTODO DE MATES SHAFFER)
MUESTRA
AGAR m-ENDO m-ENDO LES 35C, 24 Hrs
E. coli
AGAR NUTRITIVO + MUG 35,5 C 0,2 C / 4 hrs
a) Seleccionar 5 colonias con brillo metlico.
b) Trasladar el filtro al
FLUORESCENCIA LUZ UV 366 nm
VENTAJ AS DEL MTODO DE
FI LTRACI N POR MEMBRANA
Proporciona recuentos directos.
Es ms preciso ( se obtienen
resultados ms reproducibles) que
la prueba de FTM o NMP.
Rpido y fcil de realizar.
Analiza mayores volmenes de
muestras con bajas concentraciones
de organismo.
Calculo de la densidad de coliformes por
el mtodo de filtracin de membrana
Colonias de coliformes/ 100 ml = Colonias de coliformes contados x 100
ml de muestra filtrada
Se expresa en UFC / 100 l
DESVENTAJ AS DEL MTODO DE
FI LTRACI N POR MEMBRANA
Intervienen los altos niveles de
turbiedad.
Los coliformes debilitados pueden
sobrevivir mejor en la prueba de FTM
o NMP.
Las altas concentraciones de no
coliformes interfieren en el recuento.
Efecto del tipo de filtro de membrana.
VERI FI CACI N
VERIFICAR TODAS LAS COLONIAS DE
COLIFORMES TOTALES SI HAY
IGUALDAD O MENOR A 5 COLONIAS EN
EL FILTRO.
VERIFICAR 5 COLONIAS ELEGIDAS
ALEATORIAMENTE DEL FILTRO CON
MS DE 5 COLONIAS EN EL FILTRO.
TASA DE VERIFICACIN TASA DE VERIFICACIN
mtodo de filtracin por membrana mtodo de filtracin por membrana
1. Porcentaje de verificacin =
(Nmero total de tubos positivos)
(Nmero total de tubos inoculados)
X 100
2. Recuento de coliformes totales verificados =
Fraccin % de verificacin x (Coliformes/100 ml)*
* Recuento en membrana
RECOMENDACIONES
Analizar 100 ml de muestra, independiente
del mtodo elegido.
*
La muestra debe analizarse dentro de las 30 horas
de recoleccin.
*
Usar etanol al 95% en medio m-Endo (alcohol no
desnaturalizado)
*
RECOMENDACIONES
(CONTINUACIN)
Realizar el control apropiado de esterilidad: agar,
caldo, amortiguador de fosfato y filtros.
*
Probar los nuevos lotes de filtros para la recuperacin
y efectos en la morfologa de las colonias.
*
No guardar el agar por ms de 2 semanas; desechar
las almohadillas humedecidas con el medio de cultivo
despus de 96 horas.
*