Practica No.

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Prueba de Coombs

Objetivo: El alumno conocer los eritrocitos sensibilizados por anticuerpos incompletos,
que son capaces de ser aglutinados por la Antiglobulina Humana.


Generalidades: El suero de Coombs permite establecer la presencia de globulina y por lo
tanto de anticuerpos, ya que son de la misma naturaleza, los anticuerpos incompletos
como son los que producen la eritroblastosis fetal y la anemia hemoltica adquirida, se
absorben sobre la superficie del glbulo rojo; pero no los aglutinan, el suero Antiglobulina
permite reconocer estos glbulos sensibilizados al combinarse con los anticuerpos
globulnicos que ya cubren.

Es til reconocer estos globu1os sensibilizados al combinarse con los anticuerpos
globulnicos que ya cubren su superficie el suero de coombs es ideal pues tiene
anticuerpos contra las globulinas sricas humanas que abarcan cuatro grandes alfa1,
alfa2, beta y gamma, y dentro de estos grupos se en encuentran anticuerpos Anti Rh
incompletos, Anti-Duffi, Anti Kell el suero de Coombs se obtiene por inyecciones repetidas
de sueros humanos del grupo O a conejos el animal sensibilizado de esta manera
produce anticuerpos contra la fraccin globulinica de las protenas sricas y contra
anticuerpos incompletos que pueden encontrarse revistiendo a los hemates o bien es
suspensin en el plasma, por lo que se llama Antiglobulina Humana, se preparan
reactivos de amplio espectro mediante la mezcla de sueros obtenidos de distintos
animales.

La IgG no produce aglutinacin de los eritrocitos, pero se fijan sobre ellos y
permanecen sin soltarse, al agregar el suero de Coombs se forman puentes entre los
fragmentos cercanos y es posible ver la aglutinacin, revelando que esos eritrocitos
estaban en realidad cubiertos de anticuerpos.







Prueba de Coombs Directa.

Fundamento: La prueba directa se realiza cuando el Anticuerpo se ha fijado sobre el
eritrocito in vivo, permite establecer la sensibilizaci6n de los glbulos rojos que tuvo
lugar en el organismo. Se usa para el diagnstico de eritroblastosis fetal, anemia
hemoltica y reacciones hemolticas postrasfusionales por sangre incompatible

Material y equipo

1 gradilla
4 tubos de 13 x 100
2 tubos de 10 x 75
2 pipetas Pasteur c/bulbo
1 centrifuga Serofuge
1 bao mara 37C
Solucin salina en pizetas
Suero de coombs
Glbulos rojos problema
Glbulos rojos O Rh negativos

Tcnica

1. Para identificar los glbulos rojos sensibilizados es necesario remover la totalidad del
suero de los eritrocitos, mediante lavadas repetidas con suero salino. Este proceso es
importante, pues si se dejan residuos proteicos se neutraliza el suero de Coombs y se
obtendrn falsos negativos
2. Se prepara una suspensin de glbulos rojos al 5% de la cual se colocan dos gotas
en un tubo de ensaye y se procede al lavado por tres ocasiones
3. Despus del ltimo lavado se resuspenden los glbulos rojos nuevamente con una
gota de solucin salina, agregar dos gotas de suero de coombs y mezclar
4. Incubar por 30 minutos a 37C, extraer el tubo cuidadosamente y observar si existe
aglutinacin en el fondo del tubo con leves movimientos de inclinacin,
5. Se aconseja como testigo utilizar hemates de adulto no sensibilizados del mismo
grupo del paciente. El testigo se prepara en un tubo poniendo una gota de
sangre O Rh negativa y cuatro gotas de solucin salina ms una gota de suero anti
Rh, incubar media hora, lavar por tres veces estos glbulos y despus se adiciona
una gota de suero de Coombs

Interpretacin de resultados:

1. La aglutinacin en el tubo testigo no debe existir,
2. Si el tubo problema presenta aglutinacin, los glbulos rojos estn sensibilizados por
algn anticuerpo incompleto
Prueba de Coombs Indirecta

Fundamento: En esta prueba la sensibilizacin se realiza in vitro, en la primera etapa se
sensibilizan los glbulos rojos testigos con el anticuerpo que se desea investigar (Rh
negativo, factor Kell, Diego, etc.) y en la segunda etapa por medio de reactivo de Coombs
se hace visible la sensibilizacin por medio del fenmeno de aglutinacin macroscpica.

Tcnica

1. En tubo poner cuatro gotas del suero promema y una gota de glbulos rojos
sensibilizados, suspendidos en solucin salina al 5%, si se investigan anticuerpos Rh
se usan glbulos rojos tipo O Rh positivos
2. Se incuba a 37C por una hora, se centrifuga el tubo a baja velocidad 2500 rpm x 1
minuto
3. Se lavan los glbulos rojos sensibilizados tres veces con solucin salina, desechando
el sobrenadante completamente en el ltimo lavado, dejando solo el botn de
eritrocitos en el fondo
4. Agregar dos gotas de suero de Coombs, mezclar perfectamente y poner en bao
Mara a 37C, durante cinco minutos,
5. Centrifugar a baja velocidad 2500 rpm y buscar aglutinacin en el fondo del tubo

Interpretacin de resultados.

1. Si se encontr aglutinacin despus del paso nmero 2, indica la presencia de
aglutininas anti Rh en el suero problema
2. Si la prueba es negativa, se puede presumir la existencia de anticuerpos incompletos
o bloqueadores, y se comprueba prosiguiendo con la tcnica.
3. Se puede realizar diluciones del suero problema para conocer el ttulo del aglutininas
anti-Rh que existen en el paciente