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Red de Revistas Cientficas de Amrica Latina, el Caribe, Espaa y Portugal
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Clara E. Becquer Romagoza, Gisela Paredes Varela, Iala Rodrguez Calero, Osmara Rodrguez Cristobol, Ana
M. Snchez Hechavarra
Desarrollo y validacin del mtodo de cuantificacin de carbonato de calcio en Suplecal
Revista CENIC. Ciencias Qumicas, vol. 41, 2010, pp. 1-8,
Centro Nacional de Investigaciones Cientficas
Cuba
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Revista CENIC. Ciencias Qumicas,
ISSN (Versin impresa): 1015-8553
juan.araujo@cnic.edu.cu
Centro Nacional de Investigaciones Cientficas
Cuba
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Proyecto acadmico sin fines de lucro, desarrollado bajo la iniciativa de acceso abierto
1
Development and validation of the method for quantification of calcium
carbonate in Suplecal

Desarrollo y validacin del mtodo de cuantificacin de carbonato de calcio en
Suplecal

Clara E. Becquer Romagoza
1
, Gisela Paredes Varela
1
, Iala Rodrguez Calero
1
,
Osmara Rodrguez Cristobol
1
y Ana M. Snchez Hechavarra
1


1
Departamento de Gestin de la Calidad. Direccin de Qumica. Centro Nacional de
Investigaciones Cientficas

clara.becquer@cnic.edu.cu
2
Desarrollo y validacin del mtodo de cuantificacin de carbonato de calcio en
Suplecal

ABSTRACT
Introduction: Calcium carbonate, present as a fundamental component of Suplecal

(nutritional supplement), is an inorganic salt obtained in the aragonite variety from a
natural source, the exoskeleton of marine corals Porites porites. Calcium is a very
important element for various functions of the human body and essential for bone, teeth,
the nervous system, muscle activity and heart. The validation provides a high degree of
trust and confidence of the analytical method and it is made essential in the development
of a new product. Material and Methods: Was employed the method of titration using
EDTA solution as a titrant in a concentration of 0.05 N, as an indicator was use
hidroxinaftol blue and as a reference standard MERCK reactive calcium carbonate with a
certificate quality. Concentrated HCl was used in the dissolution of the samples and 1N
NaOH was used to ensure the basic medium in the titration. Results and Discussion:
Were determined certain parameters such as linearity, precision and accuracy. The
analytical method developed proved to be linear R = 0.9994, accurate (CV = 0.9%) and
precise in the selected concentration range (25-75 mg). It is shown that the method can
be applied in the formulation designed for this product. Conclusion: We developed and
validated the analytical method of titration for determining the calcium carbonate content
in the Suplecal

, technique described in the USP 27 for other pharmaceutical forms.

Keywords: Calcium carbonate; Validation; Titration; Suplecal

.

RESUMEN
Introduccin: El carbonato de calcio, presente como componente fundamental en el
Suplecal

(suplemento nutricional), es una sal inorgnica adquirida de una fuente natural,

el exoesqueleto de los corales marinos Porites porites variedad aragonito, de gran
reserva en nuestras costas y a su vez la de mayor contenido de calcio elemental. El
calcio es un mineral indispensable para la salud de huesos y dientes, adems juega un
papel importante en funciones del organismo como son la transmisin de seales del
sistema nervioso, la actividad muscular y del corazn. La validacin proporciona un alto
grado de confianza y seguridad de los mtodos analticos y se realiza con carcter
obligatorio cuando se desarrolla un nuevo producto. Materiales y Mtodos: En este
estudio se utiliz el mtodo de valoracin con EDTA, a una concentracin de 0,05N
utilizando como indicador el hidroxinaftol azul y como patrn de referencia el carbonato
de calcio reactivo MERCK con certificado de calidad. El HCl concentrado se emple en la
disolucin de las muestras y el NaOH IN para garantizar el medio bsico en la valoracin.
Fueron determinados parmetros como linealidad, precisin y exactitud. Resultados y
discusin: El mtodo analtico desarrollado demostr ser lineal R=0,9994, preciso
(CV=0.9%) y exacto en el rango de concentraciones seleccionado (25-75 mg).
Conclusiones: Se desarroll y valid el mtodo analtico de valoracin para la
determinacin del principio activo, tcnica descrita en la USP 27 para otras
presentaciones farmacuticas, demostrndose que puede ser aplicado en el Suplecal

.
Palabras claves: Carbonato de calcio, validacin, Titracin, Suplecal

.






3
INTRODUCCIN
La validacin es la confirmacin mediante el suministro de evidencias objetivas que se
han cumplido los requisitos para una utilizacin o aplicacin especfica prevista.
Proporciona un alto grado de confianza y seguridad del mtodo analtico y se realiza
con carcter obligatorio cuando se desarrolla un nuevo procedimiento, ya que permite
asegurar que el mtodo propuesto cumple con Buenas Prcticas de Produccin (1).
Las normas de Buenas Prcticas de Fabricacin y Control de la Calidad plantean que la
validacin debe aplicarse tanto a los procesos de fabricacin como a los mtodos
analticos (2).
El carbonato de calcio (CaCO
3
), presente como componente fundamental en el polvo
del Suplecal

, es una sal inorgnica adquirida de una fuente natural, el exoesqueleto de

los corales marinos Porites-porites variedad aragonito, de gran reserva en nuestras
costas y a su vez la de mayor contenido de calcio elemental.
El calcio, es un mineral abundante e importante en el cuerpo humano, niveles
adecuados del mismo, garantizan un ptimo funcionamiento del organismo y del
sistema nervioso. Las cpsulas de CaCO
3
presentan diversos usos en la medicina
moderna. Adems de su accin como alcalinizante urinario, son usadas como
anticido, como suplementos dietticos en pacientes con requerimientos aumentados
de calcio como son las embarazadas, las madres que lactan y los nios en etapa de
crecimiento. Tambin son empleadas en el tratamiento preventivo de la osteoporosis,
osteomalacia y raquitismo Este producto es indispensable para la salud de los
huesos, dientes y msculos (3,4).


El objetivo del presente trabajo es el desarrollo y la validacin del mtodo analtico
reportado en la USP 27 para la determinacin del contenido de CaCO
3
en las cpsulas
Suplecal

(5).

MATERIALES Y MTODOS
Los materiales y equipos que se emplearonn para llevar a cabo este estudio fueron los
establecidos en el PTAC. 32, Edicin 01 referido a la realizacin de la tcnica analtica (

6).
Las cpsulas de Suplecal

utilizadas fueron obtenidas del Lote 06001.

Reactivos
Se utiliz una disolucin de EDTA como agente valorante, a una concentracin de
0,05N; como indicador el hidroxinaftol azul y como patrn de referencia CaCO
3
reactivo
MERCK con certificado de calidad. El acido clorhdrico (HCl) concentrado se emple en
la disolucin de las muestras y el hidrxido de sodio (NaOH) IN para garantizar el
medio bsico en la valoracin.

Parte experimental y anlisis estadstico
Linealidad: Se analizaron tres curvas patrones en un rango de 25 a 75 mg a partir del
patrn de CaCO
3
para cinco valores de concentracin en un rango de 50-150 %, que
fueron preparadas de forma independiente en un mismo ensayo. La linealidad se
verific mediante el anlisis estadstico de los datos a travs de los coeficientes de
correlacin y de determinacin, la prueba de proporcionalidad y la de significacin de la
pendiente ajustada por el mtodo de los mnimos cuadrados.

Precisin intermedia: En el caso de la repetibilidad, este estudio se realiz por
sextuplicado a una muestra de concentracin nica que represent el 100,0 % de la
cantidad terica declarada; mientras que para la reproducibilidad, se analiz la misma
muestra homognea de concentracin nica que representa el 100 %, y se efectuaron
las valoraciones por 3 analistas en 3 das diferentes. La precisin se verific mediante
4
el coeficiente de variacin total (CV) que establece como requisito para los mtodos
qumicos un CV menor del 3 %.

Exactitud: Se realiz un anlisis repetitivo a 6 porciones de la misma muestra de
patrn de referencia de CaCO
3
de la Merck. Se pesaron 50 mg de CaCO
3
previamente
secado en la estufa a 200
0
C, por 4h. Se humedeci con agua destilada y se disolvi en
HCl 3N. Se llev a un erlenmeyer de 250 mL y se aadi agua destilada 50 mL
aproximadamente, se aadieron 15 mL de disolucin de NaOH 1N y 300 mg de
hidroxinaftol azul, para valorar posteriormente con disolucin de EDTA 0,05N.
Se calcul el contenido de CaCO
3
segn la ecuacin 1:
CaCO
3
mg/cps = (V
EDTA *
F
*
meq
*
PP)/P
muestra
(1)
Donde: V: mL de disolucin de EDTA consumido; F: factor de correccin de la
disolucin; P: pesada de la muestra: 5,004: Mequivalente gramo; PP: peso promedio
obtenido de la diferencia entre las cpsulas llenas y vacas en gr. El factor de
correccin es el valor obtenido de la relacin entre la normalidad Terica reportada y la
obtenida experimentalmente.

RESULTADOS Y DISCUSION
Linealidad del sistema: Los resultados del anlisis de linealidad son representados en
la Fig. 1. Como se puede observar la curva de calibracin result ser lineal en el
intervalo de concentraciones comprendidos entre 25 y 75 mg. Al aplicar el mtodo de
los mnimos cuadrados a los resultados registrados se obtuvo la ecuacin de la recta
que se expres:
V (EDTA)/ mL = 0.223502 + 0,19618. mg (CaCO
3
).
El coeficiente de correlacin lineal fue de 0,9994 y el valor de la t-student experimental
tiene asociado un valor de p mucho mayor que 0,05.
En el anlisis de ANOVA para la regresin, el valor obtenido para F indica la alta
significacin de la pendiente (b0) al ser la p< 0,05 e incluso p< 0,01, existiendo una
relacin estadsticamente significativa entre el volumen de disolucin de EDTA y la
concentracin de CaCO
3
con un nivel de confianza del 99 %.
c (Carbonato de Calcio)
V

(
E
D
T
A
)
160 180 200 220 240
32
35
38
41
44
47
50

Fig.1. Relacin entre la concentracin del volumen de EDTA consumido y la
concentracin de calcio.


Precisin del mtodo: En la Tabla I se exponen los resultados correspondientes al
estudio de la repetibilidad. Se considero aceptable el coeficiente de variacin al tener
un valor de 0,74 % para el lmite establecido de un 3 %.

5
Tabla 1. Resultados experimentales para evaluar la
repetibilidad
M(muestra)/mg V (EDTA)/mL (CaCO
3
)mg/cps
50.1
50,6
50,8
50,2
50,1
50,5
9,4
9,5
9,6
9,6
9,5
9,6
485,3
485,6
488,8
494,6
490,4
491,7
Xm=489,4 S= 3.60 CV=0,74

En el ensayo de reproducibilidad los resultados de la comparacin a travs del anlisis
de varianza (ANOVA) para los factores analistas y da; mostraron que no existen
diferencias significativas para un nivel de confianza del 95,0%, dado que ningn P-valor
es inferior a 0,05, (Tabla 2).

Tabla 2. Anlisis de Varianza para el %CaCO
3
. Factores: Analista y Da
Fuente Suma de
Cuadrados
gL Cuadrado
medio
F P
A: Analista
B: Da
Residual
Total (Corr)
0,708439
1,2374
5,47085
0,689687
2
3
30
31
0,354219
0,412467
0,182362
1,94 0,1610
2,26 0,1016

Se obtiene un CV
T
=0.9 % para la variable dependiente correspondiente a mg/cp de
CaCO
3
, que es un valor menor al 3 % segn lo establecido para este tipo de mtodo
(Tabla 3).






















6
Tabla 3. Resultados de los clculos estadsticos para evaluar la reproducibilidad
intermedia






























Exactitud: Las pruebas de hiptesis realizadas, (Tabla 4) mostraron que no existen
diferencias estadsticamente significativas entre el valor del contenido de CaCO
3

obtenido experimentalmente y el intervalo de valores asumido como verdadero
segn las especificaciones del patrn utilizado (%CaCO
3
= 98,5-100,5), con un
nivel de confianza de un 95%. Los resultados experimentales se muestran en la
Tabla 5.
Analista 1 Analista 2 Analista 3
Da mg/Cp. mg/Cp. mg/Cp.

1



2




3



4




Xm
S
CV

493
490
490

487
490
490

487
486
490


504
495
495


491
4.9005
1

489
500
497

492
490
489

498
495
496

499
496
502



495
4.41
0,9

489
486
488

495
496
496

488
489
490


492
489
491


491
3.12
0,6

Xm= 492,4 S=4.5 CV
T
= 0,9 %

7
Tabla 4. Prueba de hiptesis. Criterios de aceptacin y resultados
Criterio de aceptacin Resultados
Prueba de hiptesis
t
exp
<t
teo
; p>0,05
Hiptesis nula: media=98,5
Alternativa: menor que
t
exp
<t
teo
; p-valor=0,993662
Hiptesis nula: media=100,5
Alternativa: mayor que
t
exp
<t
teo
; p-valor= 0,00044353

Tabla 5. Resultados experimentales para evaluar la exactitud
m (muestra)/mg V(EDTA)/ mL % CaCO
3

50,8 10
99,5
50,1 9,8
98.9
50,6 9,9
98.9
50,6 10
99.9
50,2 9,8
98.7
50,4 9,9
99.3
Xm=99.2 S= 0,115 CV=0,45%


CONCLUSIONES
No se observaron diferencias significativas entre los factores analista y da, lo que
demostr que el mtodo presenta buena reproducibilidad.
El ensayo de exactitud demostr que no existen diferencias significativas entre el valor
obtenido experimentalmente y el terico reportado para el patrn de carbonato de
calcio.
Estos resultados indican que el mtodo complejomtrico reportado en la USP 27 para
la determinacin del contenido de CaCO
3
puede ser utilizado en el control de la calidad
de las cpsulas Suplecal
.


REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
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calidad Validacin de mtodos analticos. Monografa. Sept., 1989:1-94.
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Middlesex, http://www.vtt.fi/ket/eurachem
3. Federico Leighton e Ins Urquiaga Alimentacin, antioxidantes y envejecimiento.
Coleccin Adulto Mayor, Pontificia Universidad Catlica de Chile, 2000.
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human health; Health Digest Publishing Co.,Cannon Beach, OR, 1998.
5. United Stated Pharmacopoeia. 27.NF22. Inc Rockville. Mack Printing;vol.27 pag
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8
6. PTAC.32.Ensayo. Determinacin del contenido de carbonato de calcio en cpsulas
Suplecal