Titulacin de bacterifagos

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I. Introduccin

Los virus son por lo general organismos muy, muy pequeos, por lo que contarlos no
sera tarea factible con los mtodos que usamos con las bacterias. En estos casos,
ms que buscar turbidez o colonias, tendremos usar mtodos indirectos, ms
concretamente la propia huella que deja el virus al matar bacterias.
Lgicamente esto slo es posible con virus que parasitan bacterias.

Los virus son parsitos intracelulares obligados, necesitan utilizar la maquinaria de
clulas vivas para poder multiplicarse. Los virus que infectan bacterias se llaman
bacterifagos o sencillamente fagos.

Para esta tcnica necesitamos preparar una suspensin de fagos virulentos que se
mezclarn en suspensin con bacterias susceptibles de ser infectadas,
preferiblemente en fase exponencial. Se mantendr el cultivo en suspensin para que
los fagos se multipliquen y luego se centrifugar para eliminar los restos celulares.
Para calcular el nmero de partculas virales se mezcla una determinada dilucin de la
suspensin fgica con un cultivo bacteriano en fase exponencial y se coloca sobre la
superficie de una placa de agar.
II. Objetivos.

Aprender el procedimiento de la titulacin de bacterifagos.
Determinar la concentracin de fagos de la dilucin obtenida.

III. Materiales y procedimiento.

Materiales
Mechero
Tubos de ensayo
Cultivo joven de E. coli
Agar sobrecapa
Suspensin de fagos (muestra)

Procedimiento:
Hay que preparar diluciones decimales seriadas desde 10
-1
hasta 10
-8
, adems
tambin prepararemos un control de la bacteria sin fagos y otro de fagos sin diluir.

Preparamos tubos con agar blando a los que aadimos 0'1 ml de la bacteria.

Luego aadimos 0'5 ml de cada disolucin de fagos a los tubos de manera que
tendremos un tubo con cada una de las disoluciones vricas, ms el control y otro
nicamente de fagos sin diluir. Luego aadiremos cada tubo a una palca con agar
nutritivo y dejaremos solidificar, para poner luego a incubar.

Al da siguiente se observan las placas de lisis, y se proceden a contar. Lo normal es
que en las diluciones bajas sea muy difcil contar, as que lo haremos a partir de
diluciones altas, cuando sea razonablemente posible.



IV. Resultados:
Placa control, que nos descarta la existencia de virus y confirma el crecimiento de
nuestra bacteria.







De las diluciones escogidas se ha observado la presencia del fago evidencindose en las placas
lticas.









V. Conclusin:
Confirmando que no se han producido saltos entre las diluciones ni contaminaciones,
podemos dar con concluido el experimento. Para los clculos finales usaremos
la ltima placa en la que aparezcan placas lticas. El ttulo corresponder al nmero
de calvas multiplicado por la dilucin total.

VI. Referencias bibliogrficas:
http://www.microgaia.net/2011/09/produccion-y-titulacion-de-fagos.html
http://es.scribd.com/doc/61405030/AISLAMIENTO-Y-TITULACION-DE-FAGOS