Tema: Elaboracin del frotis bacteriano y posterior tincin simple.

Introduccin:
Justificacin: Se realizar la prctica, con el fin de aprender el correcto procedimiento en la
preparacin de un frotis bacteriano y tincin simple. Tambin se emplear correctamente el
microscopio segn lo aprendido en prcticas anteriores.
Objetivos: general: Elaborar un frotis bacteriano y realizar una tincin simple en aquel frotis.
Especficos: Aprender el procedimiento para realizar un frotis bacteriano conforme a las normas
de bioseguridad para evitar contaminacin.
Teir el frotis bacteriano y observarlo con el uso del microscopio.
Identificar morfologa y agrupacin bacteriana.
Hiptesis:
Al elaborar correctamente el frotis bacteriano, puede ser teido y colocado en el microscopio con
lo cual se puede observar bacterias.
Las bacterias, al ser teidas, son considerablemente ms visibles en el microscopio lo cual facilita
su caracterizacin.
Marco terico:
La mayora de clulas bacterianas no son visibles al ojo debido a su peque;o tamao (0.5
5.0 micrometres) , incluso observndolas en el microscopio ptico resulta complicado debido a que
dificilemente las bacterias absorben , reflejan , refractan o difractan una cantidad considerable de
luz. Considerando esto se han desarrollado varias tcnicas de tincin para que su absorbancia
aumente y puedan ser observadas al microscopio ptico (Tabo, ).
Se han desarrollado varias tcnicas de tincin; la tincin simple, la tincin negativa y la
diferenciada.
En la tincin simple se emplea un solo tnte , en esta tcnica se debe fijar a la muestra y permite
observar la morfologa de la clula.
En la tincin negativa al igual que la anterior se utiliza un solo tinte (tinta china o solucin acuosa
de nigrosina al 1%), pero esta tcnica nmo necesita fijacin y por lo tanto no necesita calor; esta
tcnica nos permite visualizar la morfologa bacteriana, presencia de capsula y algunas otras
caractersticas estructurales no observadas con la tincin simple.
En la tincin diferenciada se usan varios tintes en donde el ltimo es empleado como tinte de
contraste, nos permiten observar varias caractersticas de la bacteria como composicin de la
pared bacteriana, resistencia a decoloracin, entre otras (Granados , ).

En la tincin simple se aplica colorantes: cidos, bsicos o neutros dependiendo el tipo de bacteria
que se desee observar y la naturaleza electromagntica de su pared celular; el objetivo de la
tincin es destacar al organismo con respecto a su medio por lo tanto se aplica el tinte seguido de
un lavado; en el momento de la aplicacin del tinte se espera que este se fije a varias partes de la
clula pero en algunos casos se puede utilizar un agente mordiente que aumenta la afinidad de la
celula con el tinte. Los tintes simples de mayor uso en el laboratorio son: la safranina, cristal
violeta, carbolfucsina , azul de metileno. (Tortora , ).


Materiales y Mtodos:
El experimento se realiz el da jueves 5 de abril del 2012 en el laboratorio de microbiologa de la
ESPE, primero se lav el porta objetos con jabn y se lo sec; se coloc una gota pequea de agua
en el porta objetos; con el mechero encendido en llama azul se procedi a esterilizar el asa
bacteriolgica metindola en la llama hasta que el platino se torne rojo debido a que este material
se calienta muy rpidamente (reff) , tambin se pas por fuego al mango que sujeta al filamento
de platino; se abri el frasco que contiene al cultivo bacteriano sin contaminar al asa, una vez
abierto se pas la boca del frasco por el fuego y posteriormente se introdujo al asa y se rasp el
medio de cultivo; se cerr el frasco y se frot el asa en el portaobjetos. Una vez seco el frotis se lo
fij pasndolo rpidamente por el mechero. Se aplic crital violeta de tal manera que toda el area
del frotis qued cubierta por el colorante, se lo dejo reposar 1 min y se lavo con un chorro tenue
de agua para limpiar el colorante. Se sec el porta objetos por presin con papel toalla y se
observ en el microscopio a 4x, 10 x 40 x y 100 x.
Resultados:
Ver grfico 1
Discusin:
Las bacterias se observaron segn lo especificado y se vi que estas haban tomado la coloracin
del cristal violeta, ya que el colorante se asocia con las estructuras bacterianas; la tincin es
inespecfica ya que no nos permite conocer otras caractersticas de las bateras observadas a ms
de la forma y agrupacin bacteriana. (totora )
Se observ que las bacterias eran de forma cilndrica, por lo tanto son denominados bacilos; su
agrupacin era mnima, la mayora se encontraba de forma dispersa. ( totora
Conclusiones:
Al teir un frotis bacteriano es posible observar y caracterizar la forma de la bacteria ya que su
visibilidad aumenta; asimismo su aglomeracin disminuye, lo cual facilita su observacin
individual.
El procedimiento para realizar el frotis requiere prctica para ser realizado correctamente y para
evitar contaminacin o accidentes


Preguntas: