A Continuación Se Presentan Una Serie de Diferentes Planes de Las Lecciones Que Pueden Ser de Interés para Los Profesores de Ciencias en La Actualidad La Enseñanza de La Ciencia Forense en La Clase
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A Continuación Se Presentan Una Serie de Diferentes Planes de Las Lecciones Que Pueden Ser de Interés para Los Profesores de Ciencias en La Actualidad La Enseñanza de La Ciencia Forense en La Clase
A continuacin se presentan una serie de diferentes planes de las lecciones que
pueden ser de inters para los profesores de ciencias en la actualidad la enseanza de
la ciencia forense en la clase. Implican una serie de dificultades y diferentes aspectos de la ciencia forense: Seleccione uno de los siguientes planes de estudio: -> Anlisis de sangre -> Notas para el profesor -> Notas de Estudiantes -> Anlisis de cabello -> Notas para el profesor -> Notas de Estudiantes -> Escenario Trabajo en equipo (para la aplicacin del Anlisis del pelo / de la sangre) -> Toma de huellas dactilares de ADN -> Notas para el profesor -> Notas de Estudiantes
Anlisis Bloodstain [Impresin de texto] Tomado con permiso de la Iniciativa de Ciencias Biolgicas, patrocinado por la Universidad de colourado. INSTRUCCIONES DE MAESTROS Objetivos 1. Introducir al alumno en algunas de las tcnicas utilizadas por los cientficos forenses para el anlisis de sangre. 2. Introducir al alumno en el concepto de grupo sanguneo. 3. Proporcionar oportunidades para que los estudiantes practiquen las habilidades de pensamiento crtico en el contexto de la investigacin cientfica. Materiales - Blood (pollo o de vaca, se pueden obtener de las instalaciones de envasado de carne) - Pintura roja - colorante alimentario rojo - tomates frescos - Fresh, remolacha cruda - Conservas de salsa de tomate o salsa de espaguetis - pequeos recipientes de plstico en los que alcuota de cada uno de los anteriores sustancias (6 por grupo de estudiantes) - Conjunto de sobres con las plazas de algodn con manchas de la escena del crimen (un juego por cada equipo de estudiantes) - Pequeas botellas con cuentagotas o tubos de plstico pequeos y pipetas o goteros - Perxido de hidrgeno - Solucin de fenolftalena (instrucciones para la preparacin inmediatamente debajo ) Solucin Stock Combine: - 2 g de fenolftalena (polvo) - 20 g de hidrxido de potasio (PRECAUCIN: custica base, fuerte) -. 100 ml de agua Homogeneizar. Aadir: -. 20 g de polvo de zinc Permita 48 horas para la solucin a ser incoloro. Almacenar en una botella de color marrn o botella envuelta con papel de aluminio. Solucin de trabajo: - 20 ml de solucin de stock - etanol 80 ml "Caso de la High Tech Lab Hacked" - 1 sobre con plaza de algodn seco teido con colorante rojo con la etiqueta "A" - 1 sobre con plaza de algodn seco manchada con sangre de vaca o pollo etiqueta "B"
NOTA:. En lugar de proporcionar a los estudiantes con las manchas para poner a prueba, es posible que tenga que probar las manchas reales que recogieron de la escena del crimen - Kit tipo de sangre simulada con muestras transferidas a nuevos tubos etiquetados como "sospechoso 1", "sospechoso 2", " sospechar 3 ", y" pruebas ". Coloque el lquido de la misma muestra en los dos tubos "sospechoso 1" y "evidencia" (por ejemplo, el Sr. Smith del kit Wards). Coloque el lquido de las personas con diferentes tipos de sangre en tubos de "sospechosos 2" y "3 sospechar". Instrucciones Esta actividad consta de dos partes. Primera Parte tiene la intencin de ensear a los estudiantes acerca de la prueba de catalasa para la presencia de sangre. Mientras que hay pruebas ms sensibles para detectar la presencia de sangre que un investigador podra utilizar, esto es, con mucho, el ms barato. Tras el folleto para estudiantes debera ser bastante sencillo. Los estudiantes a predecir si o no las sustancias previstas sern catalasa positivo o negativo, entonces ponen a prueba sus predicciones. Tambin prueban si cada sustancia pruebas positivas de la sangre mediante la prueba de la fenolftalena. Despus de este paso se abren los paquetes de las pruebas aportadas, y probar si cada mancha que se encontr es probable que sea la sangre. Parte Dos direcciones de grupo sanguneo. Una buena manera de evitar el uso de la sangre humana real para este ejercicio es la compra de un kit de tipificacin de sangre simulada a partir de una empresa suministradora. Su rango de precios es de aproximadamente $ 35 - $ 50. [ Volver al principio ] ------------------------------------------------------------------------------------------------- --------------- INSTRUCCIONES PARA ESTUDIANTES Los investigadores a menudo se encuentran manchas de sangre durante su examen de la escena del crimen. Tambin encuentran manchas que pueden ser ya sea de sangre o alguna otra sustancia similar, como la pintura de color marrn rojizo. Qu otras cosas se te ocurren que podran parecerse a la sangre? Cmo se podra probar una mancha para ver si se trata de sangre? Alguna vez ha utilizado el perxido de hidrgeno para limpiar un corte o un rasguo? Qu sucedi cuando el perxido de hidrgeno se puso en contacto con la sangre de la herida? La sangre contiene una enzima llamada catalasa, que descompone el perxido de hidrgeno en agua y gas oxgeno. 2H2O2 --- catalasa -> 2H2O + O2 Cuando se produce esta reaccin, el gas oxgeno se libera en forma de burbujas. La enzima catalasa realiza una funcin importante para los organismos vivos porque el perxido de hidrgeno es muy txica para las clulas vivas. Otros organismos, incluyendo plantas y algunas bacterias, tambin hacen catalasa. Si coloca unas gotas de perxido de hidrgeno en una sustancia que contiene catalasa, se formarn burbujas profusamente. Estas sustancias que la burbuja con la adicin de perxido de hidrgeno se dice que un resultado positivo para la catalasa. Los investigadores criminales no suelen utilizar la prueba de catalasa en escenas de crmenes. Otras pruebas sencillas son mejores para detectar concentraciones muy diluidas de sangre - a veces tan diluir el ojo humano ya puede ver la mancha. Estas pruebas (listados abajo), mientras ms fiables, requieren productos qumicos ms caros. - Bencidina - Leucomalaquita verde - Phenolphthalein - test Takayama - bezidine Tetra-metil - Luminol y pruebas espectrofotomtricas. La mayora de estas pruebas se basan en la actividad de las enzimas peroxidasa en sangre para reaccionar con una mancha qumica causando que cambie de color, o en el caso de luminol, brillan en la oscuridad. En esta actividad, se le comparando los resultados de la prueba de la catalasa utilizando perxido de hidrgeno con la prueba de la fenolftalena, para ver cmo cada uno reacciona con la sangre y otras sustancias. Cul de las siguientes sustancias crees que sera un resultado positivo para la catalasa?Haz una prediccin para cada uno, y explicar su razonamiento. Asegrate de hacer una prediccin para cada sustancia antes de realizar la prueba. Sustancia Es usted predice que ser catalasa positivo o negativo? Explique su prediccin. Resultado: La catalasa positivo o negativo? Pintura roja Tomate Fresco (aplastado)
Cocido salsa de tomate
Red Colorantes
, Remolacha fresca cruda
Sangre (pollo, vaca)
Pruebe cada uno de estas sustancias para ver si es catalasa positiva o negativa mediante la colocacin de unas pocas gotas de perxido de hidrgeno en una pequea cantidad de cada uno. Registrar los resultados de la tabla anterior. NOTA DE SEGURIDAD: A pesar de que no va a utilizar toda la sangre humana real en esta actividad, usted debe usar la proteccin adecuada, como guantes. Anlisis de la evidencia de la escena del crimen de prueba de las manchas de la escena del crimen que se sospecha puede ser manchas de sangre. Slo debe probar parte de cada muestra y no toda la muestra. Por qu? Anota los resultados de abajo. Mancha Catalasa + / - Phenolphthalein + / - La B Cul de estas manchas es probablemente la sangre? Podra ser cualquier otra cosa que no sea la sangre? Compruebe sus respuestas con la clave proporcionada. Una vez que sepa que una mancha de sangre, lo que ms se puede hacer como un cientfico forense?Hay una gran cantidad de informacin potencial en una mancha de sangre. Patrn y forma: La forma y el patrn de las gotas de sangre pueden revelar informacin importante acerca de la naturaleza de la herida de la que proceda la sangre. Fue la persona sangrado de pie quieto o caminando? Qu distancia se cay la gota de sangre?El salpicaduras de sangre en todas direcciones? Un buen investigador sera fotografiar cuidadosamente todas las manchas de sangre de diferentes ngulos tanto de modo que un cientfico forense podra examinar el patrn y para poder presentar las pruebas ante un jurado. ADN: La sangre contiene ADN, y dependiendo del tamao de la mancha y de su condicin (edad, nueva, seco, etc), un cientfico forense puede ser capaz de obtener suficiente informacin para obtener una coincidencia altamente probable de un sospechoso con la evidencia . Dos tcnicas son muy utilizados por los cientficos forenses en la evaluacin de las pruebas de ADN a partir de sangre o de otros tejidos del cuerpo - reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) y el nmero de repeticiones en tndem de variable (VNTR 's). Tipo: Determinacin del grupo sanguneo puede ser utilizado como una prueba inicial para excluir a algunos sospechosos de fuentes de una mancha de sangre. Por ejemplo, si una mancha de sangre en la escena del crimen contiene sangre del tipo A, pero el principal sospechoso tiene sangre tipo O, el sospechoso podra ser excluido como fuente de la mancha de sangre - lo que significa que l o ella definitivamente no sali de la mancha de sangre. Sin embargo, el tipo de sangre por s sola por lo general no puede identificar positivamente a un sospechoso, porque muchas personas comparten el mismo tipo de sangre. Los investigadores han recogido muestras de sangre de cada uno de los sospechosos en el caso. Las muestras y las pruebas estn etiquetados AD. Ser su trabajo para escribir cada muestra. Usted determinar tanto el tipo de sangre ABO de cada muestra, as como el tipo de factor Rh. Grupo sanguneo ABO: Hay tres alelos en el locus que determina el grupo sanguneo ABO del individuo, y hay cuatro posibles tipos -> A, B, AB y O. Tipo A tienen los individuos "A" antgenos en la sangre. Los antgenos son protenas que inmune del cuerpo sistema reconoce y, o bien monta una respuesta inmune a, si el antgeno es de una fuente externa, o ignora, si el antgeno es parte del cuerpo en s. Tipo individuos A no montan una respuesta inmune contra un antgeno. Si lo hicieran, el sistema inmune producira Un anticuerpos que se unen a los antgenos A y hacer que la sangre se espese y coagule. Las personas que son de tipo B no producen anticuerpos contra los antgenos B, pero s producen anticuerpos contra los antgenos A. Las personas que son de tipo O no tienen ni antgenos A o antgenos B, por lo que tienen anticuerpos contra ambos tipos. Los individuos que son tipo AB, tienen ambos antgenos y no tienen anticuerpos contra A o B. No hay antgenos O.Individuos del grupo O simplemente no producen antgenos en este grupo sanguneo. Tipo A Tipo B Escriba AB Escriba O Antgenos La B A y B ni A ni B Anticuerpos B La Ni A ni B A y B El factor Rh: Otro grupo de antgenos en la sangre comnmente evaluados es el factor Rh. Los individuos que producen antgenos Rh se denominan Rh positivo. Las personas que no producen antgenos Rh se denominan Rh negativo. Siga las instrucciones suministradas con el kit de determinacin del grupo sanguneo y determinar los tipos de sangre de las muestras etiquetadas A, B, C, y D. Recuerde usar guantes al manipular las muestras de sangre. Registre los tipos de sangre de cada individuo a continuacin. Consulte la clave para las etiquetas y escribir en la identidad de cada muestra. Etiqueta Tipo de sangre Identidad Evidencia Sospechoso 1
Sospechoso 2
Sospechoso 3
Conteste las siguientes preguntas con respecto a sus resultados: .? 1) Con base en los resultados del anlisis de grupo sanguneo, se puede excluir a ninguno de los sospechosos como de haber dejado la mancha de sangre encontrada en la escena del crimen . 2) En base a los resultados de la sangre anlisis de tipo, que sospechoso (s) podra haber dejado la mancha de sangre en la escena del crimen? 3.) Si se te permitiera realizar pruebas adicionales con esta mancha de sangre de la escena del crimen, qu recomendara usted? [ Volver al principio ] Top ^ Anlisis del cabello [Impresin de texto] Tomado con permiso de la Iniciativa de Ciencias Biolgicas, patrocinado por la Universidad de colourado. INSTRUCCIONES DE MAESTROS Objetivos 1. Introducir al alumno en el proceso de pensamiento implicados en el desarrollo de una tcnica para el anlisis forense. 2. Introducir al alumno en la estructura fsica del cabello. 3. Proporcionar oportunidades para que los estudiantes a mejorar sus habilidades en la observacin, el pensamiento crtico y la microscopa. Esta actividad consiste en dos partes, que se pueden realizar por separado o como una unidad cohesiva. La primera parte requiere que los estudiantes para examinar un conjunto de pelos. Usando sus habilidades de pensamiento crtico y de observacin, desarrollarn un procedimiento para identificar los pelos recogidos de la escena del crimen. La segunda parte tiene por objeto complementar cualquiera de los escenarios de la escena del crimen desarrollados por la Iniciativa Hughes UCB. En esta parte, los estudiantes examinan los pelos supuestamente recogidas de la escena del crimen, as como pelos de los sospechosos y sus mascotas. Van a utilizar la hoja de datos proporcionada para determinar que el sospechoso es el partido ms probable. Si tiene la intencin de utilizar las dos partes, se recomienda que las haces en el orden descrito anteriormente. Anlisis de cabello Actividad - Parte Uno Materiales - Pelos de diferentes especies e individuos (humanos, gatos, perros, caballos, ciervos, conejo, cobaya, chinchilla, etc) - Portaobjetos - Cubreobjetos - Agua y goteros - Microscopios Instrucciones Preparar un conjunto de etiqueta, diapositivas hmedas de montaje para cada grupo de 2-4 estudiantes. Los grupos ms pequeos son probablemente mejor, pero hacer lo que funcione mejor para su saln de clases. Cada conjunto debe contener una diapositiva con pelos o un solo cabello de cada individuo. De ocho a diez diapositivas total por conjunto es un buen nmero. Un conjunto hipottico podra incluir las siguientes diapositivas: 1.) Cabello humano (rojo, largo, rizado) 2.) el pelo de perro (negro, recto) 3.) pelo de gato (gris, largo) 4.) Ciervo pelo 5.) pelo de perro (blanco, nervudo) 6.) pelo de gato (beige, corto) 7.) cabello humano (marrn, recto, corto) 8.) pelo de conejo 9.) cabello (rubio, ondulado, largo) 10.) pelo de caballo En lugar de preparar las diapositivas usted mismo, usted puede optar por dar a cada equipo de estudiantes de un conjunto de sobres etiquetados que contienen los pelos y pedirles que preparar las preparaciones hmedas. Las instrucciones para la preparacin de preparaciones hmedas de pelo estn incluidos en el folleto para estudiantes de la segunda parte. Top ^ El caso del Laboratorio de Alta Tecnologa Hacked [Impresin de texto] Tomado con permiso de la Ciencia Biolgica Iniciativa del sitio. Julie Chen es programador de computadoras en una de alta tecnologa centro de investigacin militar, que est trabajando en una nueva tecnologa de satlites espas.Lleg a su oficina esta maana y descubri su puerta entreabierta, con el cristal roto. Un rpido anlisis de su computadora revel que alguien haba usado su terminal para hackear y descargar la informacin clasificada sobre el diseo del satlite. Ella report el incidente de inmediato. Mientras que la Sra. Chen tiene un rcord perfecto y una altura libre de seguridad, investigador principal del laboratorio sospecha que ella puede haber organizado el robo y descargar la informacin a s misma para que pudiera vender a un organismo extranjero. Usted y los othe r especialistas forenses de la Agencia de Seguridad Nacional (NSA) ha sido asignado a examinar la escena del crimen. Usted debe buscar pruebas fsicas, documentar todo lo que encuentres, y el paquete con cuidado y etiquetar cualquier evidencia retirado de la escena. A continuacin, el transporte de la evidencia al laboratorio y analizarla junto con las muestras tomadas de los posibles sospechosos. Por favor refirase a la "Gua de Anlisis de la escena del crimen" (o su libro de texto preferido) para procedimientos especficos. Usted ser responsable de documentar y reunir los siguientes tipos de evidencia de la escena del crimen: Fibras y / o el cabello Bloodstains Varios rastros de evidencia (pedazos de papel, artculos de los ladrones pueden havedropped, etc) Al llegar a la escena del crimen, que se lo indique el agente a cargo de que los investigadores han tratado de mantener el rea lo imperturbable posible. Le informan que el equipo de huellas digitales ya ha sacado el polvo del rea y levant huellas, y el patrn experto fractura de vidrio ya ha examinado la ventana rota. La NSA quiere informacin de la evidencia fsica tan pronto como sea posible para responder, a lo mejor de su conocimiento, las siguientes preguntas: 1.) Hay alguna evidencia que sugiere que una persona distinta de la Sra. Chen entr en su oficina recientemente? 2.) Hay alguna evidencia que sugiera que alguien que no sea la Sra. Chen ha trabajado en su terminal de computadora recientemente? 3.) Hay alguna evidencia fsica actual que podran vincular a un sospechoso potencial para el crimen o utilizarse para exonerar a la Sra. Chen? Proporcionar una respuesta detallada por escrito para cada una de estas preguntas. Sus supervisores pueden tener preguntas adicionales para usted ms tarde. Asegrese de que al entrar en la escena del crimen, que usted est usando la proteccin adecuada para evitar la contaminacin de las pruebas (guantes, botines, batas de laboratorio, cubiertas de pelo). Asegrese de que todos en su equipo de investigacin sabe que su / su papel: - Lder del equipo - fotgrafo y grabador de registros fotogrficos - bosquejo / mapa artistas - recuperacin de pruebas y el equipo de grabacin de pruebas ------------------------------------------------------------------------------------------------- --------------- Los agentes de la NSA han estado identificando e investigando posibles sospechosos de la descarga no autorizada de archivos de computadora de alta seguridad restringidas. Sus resultados preliminares de las pruebas fsicas de la escena han sido Top ^ Toma de huellas dactilares de ADN [Impresin de texto] Preparado por y basado en el uso de la Oficina de Biotecnologa de la Universidad del Estado de Iowa . PROFESOR DE PREPARACIN Y GUA DE INSTRUCCIONES PARA CAROLINA BLU MANCHA La preparacin y el desarrollo del laboratorio de huellas genticas de ADN se divide en las siguientes secciones: Preparacin de los materiales de los estudiantes El plsmido de ADN Preparacin Preparacin de restriccin de endonucleasa Migracin preparacin de tinte Preparacin, carga y ejecucin de un gel de agarosa Para uso con Carolina Blu Stain Montaje de la impronta gentica de ejercicio en perodos de 45 minutos Instrucciones de Estudiantes PREPARACIN DE LOS MATERIALES DE LOS ESTUDIANTES Los suministros pueden ser mejor siempre a la clase en grupos de cinco alumnos. Las muestras de ADN se deben mantener en el refrigerador hasta que la clase se establezca.En la Oficina de Biotecnologa, por ejemplo, es demasiado caro proporcionar ADN para todos los alumnos de una clase, de modo suficiente ADN, la endonucleasa de restriccin, y tampn de reaccin para un mnimo de dos grupos de cinco estudiantes o un grupo de cinco estudiantes de cada seccin de clase, se ofrece, lo que sea mayor. Para los restantes grupos de estudiantes, el agua destilada se utiliza para sustituir el ADN, endonucleasas de restriccin, y tampn de reaccin. Cada grupo de estudiantes debe ser proporcionada con el colorante azul de migracin. 1 tubo de microcentrfuga (1,5 ml) que contiene 17 l de un 0,025 g / l concentracin de ADN de pBR322 y la etiqueta "C". La etiqueta debe estar escrito en la tapa y el cuerpo del tubo con un rotulador. 4 tubos de microcentrfuga (1,5 ml), conteniendo cada uno 17 l de una de las cuatro muestras de ADN diferentes. El tubo con la etiqueta "1" debera contener 0,15 concentracin mg / l de l de ADN, el tubo etiquetado como "2" debe contener 0.075 concentracin mg / l de Ad-2 del ADN, el tubo con la etiqueta "3" debe contener 0.025 concentracin mg / l de pBR322 ADN, y el tubo con la etiqueta "4" deben contener 0.025 concentracin mg / l de ADN de pUC19. 1 tubo de microcentrfuga (1,5 ml) que contiene 18 l de una mezcla de 3 l de Bgl 1 y 15 l de tampn de reaccin El tubo debe ser etiquetado como "N". 1 tubo de microcentrfuga (1,5 ml) que contiene 40 l de tinte migracin azul y la etiqueta "D". 1-20 l pipeta 10 puntas de pipetas estriles de 200 l en un recipiente apropiado 1 recipiente para mantener las puntas de las pipetas usadas 5 copias de las instrucciones de laboratorio. Cada grupo debe tener una carta se le asigna en la esquina superior derecha de la hoja de instrucciones. El maestro debe tener disponibles para toda la clase: Gel de electroforesis Fuente de alimentacin de electroforesis 1-20 l pipeta y 1 caja de puntas de pipeta 200 l estriles para cada cuadro de gel Una incubadora a 37 C y la cremallera para sujetar los tubos de microcentrfuga de los estudiantes 1 Sharpie pluma de marca 1 hoja de papel para cada cuadro de gel que ha numerado las lneas o casillas correspondientes a los carriles en el gel. (Opcional) lo suficientemente pequeo, mediano, grande, y grandes guantes mdicos adicionales para los estudiantes. Los maestros deben pedir los siguientes suministros por lo menos una semana de antelacin. 6 cajas de puntas de pipeta (ya tratado en autoclave) 34 l de 0,025 mg / l por pBR322 seccin de clase (mnimo de 68 l por la escuela) 17l de 0.075 mg l Ad-2 DNA / por seccin de clase (mnimo de 34 l por la escuela) 17 l de 0,15 mg / l de ADN por seccin de clase (mnimo de 34 l por la escuela) 17 l de 0,025 g de ADN / l pUC19 por seccin de clase. (Mnimo de 34 l por la escuela) 3 l Bgl 1 por seccin de clase (mnimo de 6 l por la escuela) Tampn de reaccin de 15 l por seccin de clase (un mnimo de 30 l por la escuela) 144 l Carolina Blu Gel Stain por gel (un mnimo de 2 geles) 732 l Carolina Blu Buffer Stain por gel (un mnimo de 2 geles) 1 botella de Carolina Blu ADN de la mancha 0,7 g de agarosa por gel (un mnimo de 2 geles) 70 ml de 10X TBE por gel (un mnimo de 2 geles) 40 ml de colorante azul de migracin para cada grupo de cinco estudiantes de todas las secciones. 8 tubos de microcentrfuga para cada grupo de cinco estudiantes de todas las secciones (ya en autoclave) Identificacin gentica de instrucciones Una nota para enviar los no utilizados puntas de pipeta / cajas, botellas 10X TBE y Carolina Blu ADN de la mancha de nuevo a la Oficina de Biotecnologa cuando haya terminado. [ Volver al principio ] Plsmido de ADN PREPARACIN Lo mejor es que los guantes mdicos y la vajilla se usan en la preparacin de materiales para el laboratorio para evitar que los dedos del maestro de la contaminacin de las muestras de ADN. El ADN no daar el profesor, pero el profesor puede daar el ADN. Las muestras de ADN se preparan a partir de ADN plsmido, que en la Oficina de Biotecnologa, figure ya, a la concentracin apropiada. El ADN debe mantenerse refrigerado, excepto cuando se est utilizando para preparar y realizar el laboratorio.
Instrucciones de uso de la micropipeta
Los 17 l de la ADN plsmido se deben poner en tubos de microcentrfuga de 1,5 ml estriles para los estudiantes. Los tubos se pueden preparar hasta 24 horas de antelacin y se mantienen en el refrigerador hasta que el perodo de clase. El nmero de tubos de cada tipo para cada grupo de cinco estudiantes se ha descrito anteriormente en la preparacin de los materiales para los estudiantes. [ Volver al principio ]
PREPARACIN endonucleasa de restriccin La endonucleasa de restriccin utilizado para el laboratorio es Bgl 1, comnmente conocida como Bagel 1. La endonucleasa y el tampn de reaccin se pueden preparar para los estudiantes de hasta 24 horas de antelacin y se mantienen en el refrigerador hasta que el perodo de clase. La mezcla debe ser preparada en tubos separados para cada grupo de alumnos, es decir. una gran cantidad no debe ser preparado y subdividida en diferentes tubos. Para obtener 18 l de la mezcla para un grupo de cinco estudiantes, 3 l de Bgl 1 se aadi a un tubo estril de microcentrfuga de 1,5, a continuacin, 15 l de tampn de reaccin se aadieron al tubo. Para enjuagar la punta de la pipeta y mezclar el tampn Bgl 1 y la reaccin, llenar y descargar la pipeta con la muestra tres veces. El tubo debe estar claramente etiquetado como "N".
[ Volver al principio ] PREPARACIN DYE MIGRACIN Un colorante azul migracin se utiliza para supervisar el movimiento de la ADN durante la electroforesis. En la Oficina de Biotecnologa, se proporciona tal tinte migracin listo para su uso. Cada grupo de alumnos debe recibir el medio de contraste, incluso si se les da placebos de agua, en lugar de ADN, la endonucleasa de restriccin, y tampn de reaccin.
[ Volver al principio ] La preparacin, carga, y el funcionamiento de un gel de agarosa PARA USO CON CAROLINA BLU MANCHA El gel se puede preparar hasta dos das antes del perodo en el que el ADN se carga en l.Si se prepara con antelacin, 1) colocar el cuadro de electroforesis en el refrigerador con la tapa en su lugar o 2) la bandeja de fundicin y de gel pueden ser retirados de la caja de la electroforesis, sellado en una bolsa de plstico, y se almacenaron en un refrigerador.La siguiente descripcin se aplica a los 12 cm de ancho x 14 cm de la unidad de electroforesis de largo proporcionado en la Oficina de Biotecnologa de la Universidad del Estado de Iowa. Los procedimientos generales seran los mismos para cualquier aparato de gel, a excepcin de los volmenes de gel de tampn y que se utilizan. 1. Pngase un par de guantes mdicos y la vajilla y los usan durante todo el procedimiento, incluso durante el laboratorio y la limpieza. Ninguno de los productos qumicos utilizados son txicos, pero los guantes de proporcionar proteccin a las personas que tengan la piel sensible. 2. El cuadro de electroforesis vendr completamente montado. Para preparar el cuadro para la fundicin de un gel, followthe instrucciones a continuacin. o una. Para quitar la tapa de la caja, frente a la caja con los enchufes de electrodo apuntando a la parte posterior, y placefingers en cada extremo de la unidad mientras pulsa los pulgares contra el borde frontal de la tapa.Empuje thumbsagainst la tapa hacia la parte posterior de desconectar los cables de alimentacin de los enchufes. Ascensor toremove tapa del sistema. o b. Retire la bandeja de gel agarrando cada lado y levantar en un ngulo para facilitar la bandeja del sistema (Ver figura 1). Enjuague los peines, bandeja de gel y la caja de gel en agua destilada para eliminar cualquier residuo. No es necesario secar las piezas. o c. Vuelva a colocar la bandeja de gel en el sistema bajando cuidadosamente la bandeja en un ngulo tal que las juntas adapten al tamao de la parte delantera y trasera de la pared de la caja del gel (Ver figura 1). Esto debera proporcionar un sellado eficiente que evita la fuga de la agarosa caliente cuando se vierte en la bandeja. Si la junta se ha deslizado fuera de la ranura, empuje de nuevo en su lugar antes de bajar la bandeja en la caja. 3. Preparar 700 ml de tampn de electroforesis TBE 1X mediante la dilucin de 70 ml de TBE 10X solucin madre con 630 ml de agua destilada. 4. Pesar 0,7 g de agarosa y se vierte en un matraz de 250 ml o vaso de precipitados que contiene 45 ml de tampn de electroforesis 1X TBE preparados en la etapa 3.Agitar la suspensin de agarosa para dispersar el polvo. 5. Pngase un guante resistente al calor. Microondas de la suspensin hasta que hierva (aproximadamente 30 segundos a 1 minuto), agitar el frasco, y se alternan de ebullicin y arremolinndose en intervalos de 15 segundos hasta que la solucin haya hervido un total de 1 minuto o hasta que no hay slidos visibles. Figura 1
6. Se enfra la solucin de agarosa mediante la adicin de 45 ml del tampn 1X TBE desde el paso 3, con lo que el volumen en el recipiente a 90 ml. Agitar la solucin con cuidado para evitar que queden atrapadas burbujas de aire. 7. Aadir 144 l de Carolina Blu Gel Stain a la solucin de agarosa. En la Oficina de Biotecnologa, el Gel Stain se proporciona en un tubo de microcentrfuga. Para obtener toda la mancha fuera del tubo, enjuague el tubo con tampn TBE 1X o agua destilada y se vierte en la solucin de agarosa. Agitar la solucin de agarosa suavemente hasta que tenga un color azul claro uniforme. 8. Verter lentamente la solucin de agarosa en el gel bandeja con cuidado de no permitir la formacin de las burbujas en el gel. Si se forman burbujas, golpee con un dedo hasta que desaparezcan. 9. Lavar el matraz o vaso de precipitados de inmediato con abundante agua del grifo para evitar que la agarosa se endurezca en ella o el fregadero. 10. Inmediatamente coloque un peine (s) de eleccin en la ranura de la bandeja, tratando de evitar la formacin de burbujas de aire en los pozos. Deje que el gel repose a temperatura ambiente durante unos 30 minutos hasta que est slido (gel aparecer ligeramente lechoso). 11. Despus de que el gel se fija, retire el peine (s). Para eliminar un peine, sujete ambos extremos del peine y levantar suavemente hacia arriba con una ligera ida y vuelta movimiento de balanceo. Para orientar la bandeja de gel en la posicin de funcionamiento, sujete los lados de la bandeja y levante suavemente en un ngulo (Ver figura 1). Gire la bandeja de 90 grados a la posicin de los extremos abiertos hacia los electrodos de platino. ADN tiene carga negativa y migrar hacia el (rojo) positivo durante la electroforesis. Los pocillos del gel deberan ser ms cercana el electrodo negativo final (negro) de la caja de electroforesis. Baje con cuidado la bandeja en su posicin, y asegure la bandeja entre las pestaas de la bandeja de gel. Para verificar si la bandeja de gel est orientada correctamente, coloque la tapa sin apretar en la caja. Los pozos deben estar ms cerca del electrodo negativo (negro). 12. Cargar las muestras de ADN mediante la colocacin de la punta de la pipeta en la parte superior del pozo y liberar lentamente la solucin en el pozo (Ver figura 2). La pipeta se puede mantener constante manteniendo el can como un palo de billar y apoyndose en el cuadro de gel. Coloque la punta en el pozo lo ms verticalmente posible. No vaya demasiado profundo en el pozo para evitar perforar el gel. Figura 2
13. Despus de que los estudiantes han cargado sus muestras en los pocillos, aadir 732 l de Carolina Blu Buffer Stain a los 610 ml de tampn 1X TBE que quedaron despus del paso 6. En la Oficina de Biotecnologa de la Memoria de las manchas se proporciona en un tubo de microcentrfuga. Para obtener toda la mancha fuera del tubo, enjuague la sonda con agua destilada y se vierte en la memoria intermedia.Agitar el bfer hasta que quede un color azul claro uniforme. 14. Lentamente llenar la caja con gel de todo el tampn de electroforesis 1X TBE para cubrir el gel a aproximadamente una profundidad de 2 mm. No vierta el tampn directamente sobre el gel. 15. Asegrese de que el interruptor de la fuente de alimentacin est en la posicin "Off" antes de conectar la cmara de electroforesis. Cuando est listo para la electroforesis, coloque la tapa firmemente en la cmara y conecte los cables elctricos en las tomas de salida rebajadas de la fuente de alimentacin. Conecte el rojo (+) del en el conector rojo y el negro (-) del en el enchufe negro. 16. Para el funcionamiento de la fuente de alimentacin, siga las instrucciones que vienen con l. 17. Seleccione el voltaje deseado en la fuente de alimentacin. Un voltaje de 150 permitir la ejecucin de electroforesis que se completar en aproximadamente una hora. Tensiones ms bajas tambin se pueden utilizar. Cuanto menor sea la tensin, ms lento ser el ADN migrar. Por ejemplo, a una tensin de 10 se completar la carrera electroforesis en aproximadamente 24 horas. La banda de tinte migracin marca el borde de ataque de la DNA. La electroforesis se completa cuando el borde de ataque del colorante ha migrado 5 a 6 cm de los pozos. 18. Proceda con la electroforesis: Verifique que el colorante azul de migracin se est moviendo hacia el electrodo positivo (rojo). Si est migrando hacia el electrodo negativo (negro), apague la fuente de alimentacin, retire la tapa, levante la bandeja de gel, convertirlo 180E, y repita los pasos 16 y 17. PRECAUCIN: Nunca retire la tapa de la cmara de electroforesis, mientras que la fuente de alimentacin est encendido. 19. Cuando se completa la electroforesis, apague la fuente de alimentacin. 20. Para quitar la tapa de la caja, frente a la caja con los enchufes de electrodo apuntando a la parte posterior, y coloque los dedos en cada extremo de la unidad mientras pulsa los pulgares contra el borde frontal de la tapa. Empuje los pulgares contra la tapa hacia la parte posterior de desconectar los cables de alimentacin de los enchufes. Levante la tapa para retirarla de la caja. 21. Despus de la electroforesis es completa, algunas bandas de ADN ser visible. Para oscurecer las bandas y hacer ms visible de ellos, retire la bandeja de gel a partir de la unidad de electroforesis y coloque la bandeja en un recipiente de plstico. Deslice el gel fuera de la bandeja empujndola en un extremo de la misma. Agregue la Carolina Blu ADN Stain, asegurndose de que el gel est completamente inmerso. No verter la mancha directamente en el gel. 22. Teir el gel durante 15 minutos. Agitar suavemente, si es posible. 23. Vierta la mancha de nuevo en la botella. La mancha se puede reutilizar 6-8 veces. 24. Cubrir el gel con agua destilada para destain. (El agua del grifo contiene iones de cloruro que pueden eliminar parcialmente la mancha de las bandas de ADN y dar resultados inferiores.) Agitar suavemente, si es posible. Durante los 30 y 40 minutos de decoloracin, cambiar el agua cada 10 minutos, si es posible. Durante el proceso de decoloracin, las bandas de ADN se harn ms claras como la mancha se elimina del resto del gel. Es posible destain el gel durante un mximo de 24 horas. Si las bandas de ADN se vuelven demasiado claro, el gel puede ser teido y desteido de nuevo los pasos 21 a 24 repitiendo. 25. El gel se puede mostrar a la clase deslizndolo hacia un pedazo de plexigls y de colocarla sobre una hoja blanca de papel o en un negatoscopio de luz blanca. La Figura 3 ilustra los resultados esperados. Perro 3 es el culpable. Figura 3
26. El gel se puede guardar durante al menos un mes en el refrigerador por deslizamiento en una bolsa de plstico transparente y sellar la bolsa. El gel se puede ver en una hoja blanca de papel o una caja de visualizacin de luz blanca sin sacarlo de la bolsa. 27. Ninguno de los productos qumicos utilizados en el experimento son txicos. Las soluciones pueden ser vertido en el desage convencional. El gel se puede eliminar con el resto de basura. [ Volver al principio ] MONTAJE DEL EXPERIMENTO DE HUELLAS ADN en perodos de 45 minutos PERIODO 1: ensea a utilizar la pipeta y hacer que el gel de agarosa. Despus de que se hizo el gel, el profesor tiene dos opciones: a.) Coloque la caja de electroforesis en el refrigerador con la tapa en su lugar hasta el perodo 2 b) La bandeja de fundicin y el gel se puede quitar de la caja de la electroforesis, sellado en una bolsa de plstico, y se almacena en un refrigerador hasta que el periodo 2. El gel se puede mantener en el refrigerador por hasta dos das antes de su uso. PERIODO 2: Retire el recipiente con el gel de la nevera. Conducta pasos 1 (opcional) a 6 de las instrucciones estudiantiles. En el paso 3, la incubacin a 37 C se puede hacer hasta por 45 minutos, si se desea por el profesor. Si el ADN se incubaron no va a ser cargado por los estudiantes en el gel de inmediato, se puede almacenar en un refrigerador hasta que se aadi el colorante de la migracin y el gel se carga. Despus de que el ADN se carga en el gel por los estudiantes, la profesor tiene tres opciones: (a) Realizar la electroforesis. (b) Si los estudiantes en otra seccin se van a cargar el ADN en el mismo gel en el mismo da, coloque la tapa de la caja de la electroforesis y gurdelo en el refrigerador hasta la prxima perodo de clase. Despus de que el gel se carga por la ltima seccin, aadir el tampn de electroforesis y llevar a cabo la electroforesis. (c) Si hay otro gel se va a cargar en el mismo da por otra seccin de clase, coloque la tapa de la caja de la electroforesis con gel cargado y gurdelo en el refrigerador hasta que los dos geles se pueden ejecutar.Despus de que ambos geles estn listos, aadir el tampn de electroforesis y llevar a cabo la electroforesis. Una vez finalizada la electroforesis, hay dos opciones para la tincin: (a) Teir el gel inmediatamente y coloque en el refrigerador, como se describe en el paso 26 de la instrucciones. (b) Pour suficiente del tampn de electroforesis fuera de la caja electroforesis de manera que el gel no se sumerge en ella. Coloque la cubierta en la caja y gurdelo en el refrigerador hasta por un da hasta que sea conveniente para mancharlo. PERIODO 3: Teir el gel si an no se ha hecho, ver el gel y discutir los resultados.
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------------------------------------------------------------------------------------------------- --------------- INSTRUCCIONES PARA ESTUDIANTES Huellas genticas de ADN ____________ (Carta Group)
Un agricultor posea cuatro perros. Uno de los perros mordi el nuevo par de botas, lo que hizo que el granjero infeliz. Quera pluma hasta el culpable, pero no saba que el perro lo haba hecho. Afortunadamente, el culpable haba dejado algunos mechones de pelo en el arranque. El agricultor puso el pelo en una bolsa de plstico y lo etiquet "Hair del culpable". Ella tom el pelo de cada uno de los cuatro perros y etiquetado de las muestras "Dog 1", "Perro 2", "perro de 3", y "Dog 4". Ella tom las muestras a la Universidad Estatal de Iowa y pidi un cientfico para determinar qu perro haba masticado sus botas. El cientfico se extrae el ADN de la muestra de cabello llamado "pelo del culpable" y la calific de "C". El cientfico extrajo ADN a partir de muestras de pelo de cada perro y los etiquet con el nmero perro. El maestro que usted y sus colegas est proporcionando las muestras y quiere que usted pueda determinar qu perro era el culpable. Cada grupo de hasta cinco estudiantes tendrn muestras para analizar juntos. Paso 1. (opcional) Pngase los guantes mdicos y llvelas durante todo el experimento. Los guantes protegen las muestras de ADN de los contaminantes que pueden estar en sus manos.
Paso 2. Su grupo tiene una muestra del ADN culpable en un ml tubo de microcentrfuga de 1,5 C etiquetados y muestras de cada uno de los cuatro perros en tubos etiquetados con el perro nmero. Mantener los tubos en posicin vertical a lo largo de todos los pasos del experimento para mantener el ADN fuera de los lados del tubo. En cada uno de los cinco tubos, pipetas 3 l de la endonucleasa de restriccin Bgl l del tubo etiquetado N. Usar una punta de pipeta nueva al agregar Bgl 1 a cada tubo. Para enjuagar la punta de la pipeta y mezclar el ADN y BGL 1, llenar y descargar la pipeta con la muestra tres veces.Etiquetar los cinco tubos con la letra asignada a su grupo y por escrito en la esquina superior derecha de esta hoja de instrucciones.
Paso 3. Colocar los tubos en un bastidor provisto por el instructor y los incuban a 37E C durante 10 minutos. Bgl 1 es aislado de la bacteria Bacillus globigi. La endonucleasa de restriccin protege a las bacterias de ADN extrao, tal como de un virus, por que hasta el corte y hacindolo ineficaz. La endonucleasa corta el ADN ( ) en cada sitio donde ocurren las siguientes secuencias.
5'-GCCN NNN NGGC-3 ' 3'-CGGN NNN NCCG-5 ' N puede ser cualquier nucletido, pero la ubicacin y el orden de G (guanina) y C (citosina) es muy especfica.
Paso 4. Sacar los tubos de la incubadora y mantenerlos en posicin vertical. En cada uno de los cinco tubos, pipetas 4 l de colorante azul del tubo etiquetado D. Use una punta de pipeta nueva al agregar colorante a cada tubo. Para enjuagar la punta de la pipeta y mezclar el ADN y el colorante, llenar y descargar la pipeta con la muestra tres veces. El colorante azul se utiliza para controlar la migracin del ADN durante la electroforesis.
Paso 5. Ir a la caja de electroforesis y registrar la identidad de las muestras antes de cargarlas en el gel. El gel tiene carriles sobre los que se ejecutan las muestras individuales, por lo tanto, no se numeran las lneas en la hoja de papel. Registro en la hoja de la identidad de la muestra que se corresponde con el carril en el que se cargar la muestra.
Paso 6. Usando una pipeta fijado para 20 l, transferir la muestra en el pocillo del carril apropiado en el gel. Coloque la parte superior de la punta de la pipeta en la parte superior del pozo y dispensar los 20 l de solucin en ella lentamente. No deje que la punta de la pipeta toque el fondo del pozo, porque va a perforar el gel. Desechar la punta de la pipeta en el recipiente designado despus de una muestra se ha puesto en el pozo y utilice uno nuevo para la siguiente muestra. El gel se llevar a cabo por el instructor.
Paso 7. Despus de que se ejecute el gel, las bandas en que se puede ver. A partir de los patrones de ADN en el gel, determinar cul de los cuatro perros masticado las botas.