UNIVERSIDAD EL BOSQUE

FACULTAD DE BIOLOGA
DOCENTE: Edgar Palacios
ESTUDIANTES: Wendy Fajardo, Vctor Rodrguez y Tito Becerra
Informe de Laboratorio N 4

FOTOSNTESIS Y PIGMENTOS VEGETALES
1.2 Determinacin de un espectro de absorcin
Resultados y anlisis












El espectro de absorcin determina la cantidad de energa luminosa captada o absorbida
por una molcula especfica en funcin de la longitud de onda. En un extracto de
pigmentos de tejido foliar de plantas superiores, la absorcin de la luz en la regin del
espectro entre 600 y 700nm se debe a la sumatoria de absorbancias de las clorofilas a y
b (Rods, 2006).
El mtodo espectrofotomtrico es comn en la estimacin de la cantidad de clorofila en
una muestra debido a que en comparacin con otras tecnologas esta es mas accesible,
pero se considera que el resultado puede estar sesgado por el estado fisiolgico de la
clorofila, en la literatura encontramos diversos solventes (Metanol, etanol o acetona)
(Rivera, et al, 2005), en esta prueba se utiliz la acetona y el mtodo de extraccin; la
maceracin.
Grfica 1. Curva sobre los niveles de absorbancia de los pigmentos de clorofila segn las
longitudes de onda. Se presentan picos entre los 400nm y los 460 nm. En 640 se presenta
una elevacin en la curva.
La luz que se toma para el proceso fotosinttico es absorbida por dos tipos de pigmento:
clorofilas y carotenoides. En este caso, el inters son las clorofilas, ya que acta
directamente con el proceso de absorcin y conversin de la energa luminosa. Las
clorofilas son capaces de absorber radiacin luminosa en la regin azul y roja (Azcn,
2000), dando a las plantas el propio color verde. Hay varios tipos de clorofilas: las a,
colectan la energa luminosa (involucradas directamente en la transformacin de
energa) y las b, son las que poseen plantas y algas verdes (pigmentos accesorios que
absorben luz y transfieren energa de excitacin a la clorofila a). Estos pigmentos
absorben fotones para aumentar el nivel energtico del electrn y as poder sintetizar
carbohidratos (Salisbury, 1994).





Tabla1, Clculo de la energa de luz en varias longitudes de onda. Todo entre
700 y 400nm. eV (electrones voltio) [Azcn, 2000].
En el caso de los pigmentos fotosintticos, debido a las diferencias estructurales
existentes entre estos, tienen distintos espectros de absorcin de luz. En pruebas de
laboratorio las clorofilas a y b tienen mximos de absorcin en las zonas azul y roja del
espectro, es decir de 450nm a 500nm. (Azul) y despus de 600nm para el espectro rojo
(Redes & Collazo, 2006). La grfica1 que se gener de los resultados sobre la
absorbancias segn las diferentes longitudes de onda muestra un gran pico entre las
frecuencia 400nm y 460nm, posiblemente debido a la absorcin por parte de los dos
tipos de clorofila, adems de un inicio de elevacin en los 640nm; la ultima elevacin se
debe tericamente a la clorofila B, la cual absorbe las longitudes cercanas a los 650nm,
si los resultados hubieran sido positivos para las siguientes longitudes, el pico en la
grafica se mostrara hacia los 680nm donde la clorofila A absorbe.

Color Frecuencia
v X 10
-15
(s
-1
)
Longitud de
onda (nm)
Energa
(eV.fotn
-1
) (kJ. Mol fotones
-
1
)
Infrarrojo 0.300 1000 1.24 120
Rojo
Naranja
Amarillo
Verde
Azul
Violeta
0.428
0.484
0.517
0.566
0.638
0.749
700
620
580
530
470
400
1.77
2.00
2.14
2.34
2.64
3.10
171
193
206
226
255
299
UV cercano
UV lejano
1.000
1.500
300
200
4.14
6.21
399
599
Clorofila A= 12,7 (0,084nm) 2,69 (0,028nm) *
31 ml
(1000*1g)
= 0,03073
Clorofila B= 22,9 (0,028nm) 4,68 (0,084nm) *
31 ml
(1000*1g)
= 7,69048*10
-3
Segn los clculos sobre la cantidad de clorofila en 1 gr de muestra de pasto, se obtuvo
para la clorofila a un total de 0.03073 mg que es casi cuatro veces mayor a la cantidad
de clorofila b calculada.
El espectro de absorcin de la clorofila A indica aproximadamente la proporcin de la
produccin solar que es empleada por las plantas (Lodish & Berk, 2005). La clorofila,
induce el impulso de un electrn desde su estado fundamental hasta el excitado, la
absorcin en una zona azul del espectro, provoca una excitacin todava mayor, debido
a que esta regin es ms energtica. La energa captada por la clorofila se utiliza en
reacciones fotosintticas, otra, se disipa en forma de excitacin no radiante (LPEZ,
1991).
1.3 Medicin de las micromoles de CO
2
consumidos en la fotosntesis.
Resultados y anlisis
En la primeras titulaciones realizadas a los 20 ml de agua del estanque de Elodea sp y a
los 20 ml de agua soplada del mismo sitio, se obtuvo que la cantidad de Dixido de
Carbonopresente fue de 2 y 3 micromoles respectivamente (Ver tabla 1). Este valor fue
el resultado de la multiplicacin por 5 de los mililitros de Hidrxido de sodio requeridos
para la titulacin. La razn de multiplicar por 5 es porque cada mililitro de Hidrxido de
Sodio al 0,02 N puede combinarse con 5 micromoles de Dixido de carbono
(Fernndez y Jhonston, 1986).



En las titulaciones realizadas a los 8 tubos expuestos a las diferentes condiciones, se
registraron valores de CO
2
presente que oscilaban entre 0 y 2, siendo los tubos con agua
normal y elodea los que mayor CO
2
tenan (ver tabla 2).
Para la obtencin de las moles de CO
2
consumidas por el proceso de fotosntesis, se
realiz la resta entre los valores de CO
2
expuestos en la tabla 2 (concentracin antes del
experimento) y los expuestos en la tabla 2 (concentracin despus del experimento).
Hay que resaltar que las restas se hicieron teniendo en cuenta que tipo de agua tena
cada tubo. Los valores obtenidos se pueden ver en la tabla 3.
Tabla 2. Cantidad de CO
2
presente en 20 ml de agua normal y soplada.


El consumo de CO
2
, independientemente de las condiciones, fue mayor en las plantas
que estaban en los tubos con agua soplada ya que esta presentaba mayor cantidad de
este gas, el cual fue aprovechado por las plantas de Elodea sp.
Los valores de consumo de oxgeno de los dos tubos expuestos a 50 C con oscuridad
fueron los mayores en cada uno de los tratamientos (2 agua soplada y 0,5 agua normal)
si se les compara con los obtenidos en los tubos a la misma temperatura pero con
iluminacin (1,5 agua soplada y 0 agua normal). Esto muestra que a una temperatura de
50 C la oscuridad est favoreciendo el consumo de CO
2
por parte de las plantas. Este
resultado se puede atribuir al hecho de que Las intensidades de luz muy altas ejercen un
efecto inhibitorio de la fotosntesis, fenmeno llamado solarizacin. Los efectos de la
solarizacin parecen ser el resultado de la foto oxidacin, en la cual las hojas consumen
Oxgeno en presencia de luz y la utilizan en la oxidacin de varios compuestos celulares
mientras que se libera CO
2
durante el proceso, lo cual se puede evidenciar si se observa
los valores de cantidad de CO
2
presentes en los tubos en cuestin (Azcon y Talon,
2000).

Con respecto a la temperatura se evidenci, en trminos generales, que el consumo de
CO
2
no present mayores variaciones entre los tratamientos de 50 C oscuridad y solo
oscuridad en los dos tipos de agua (ver tabla 2). Algo que por cierto es raro pues se
esperara que la temperatura tuviera un efecto en la fotosntesis debido a que influye en
sus reacciones bioqumicas como por ejemplo la fijacin del CO
2
por Rubisco (Taiz y
Zeiger, 2006).

En los tratamientos de exposicin a iluminacin no se llego a comprobar el CO
2
debido
a que la titulacin no fue efectiva por una posible contaminacin de los tubos de ensayo.





Tabla 3. Magnitud de la fotosntesis en ramillas de Elodea sp

BIBLIOGRAFA
AZCONBIETO, J. y TALON M. 2000. Fisiologa y Bioqumica Vegetal.
Interamericana McGrawHill, Madrid, Espaa.
FERNNDEZ, G y JOHNSTON, M. 1986. Fisiologa vegetal experimental.
Primera edicin. Editorial IICA. Costa Rica. 57 p.
LODISH HARVEY & BERK ARNOLD (2005) Biologa celular y
molecular. Quinta edicin. Editorial Mdica Panamericana. Espaa. Pp. 973
LPEZ J (1991), Fijacin y Movilizacin Biolgica de Nutrientes, Vol I,
Nuevas Tendencias, Consejo Superior de Investigaciones Cientficas, Madrid,
Espaa.
REDES ROSA & COLLAZO MARGARITA (2006) Manual de practicas de
fotosntesis. Editorial UNAM. Mxico. Pp. 160
RIVERA CARLOS, ZAPATA ANGELA, PINILLA GABRIEL, DONATO
JHON, CHAPARRO BEATRIZ & JIMENEZ PAOLA (2005) Comparacin de
la estimacin de la clorofila-a mediante los mtodos espectrofotomtrico y
fluometrico Universidad Nacional de Colombia. Colombia.
SALISBURY B (1994), Fisiologa Vegetal, editorial Iberoamericana.
TAIZ, L y ZEIGER, E. 2006. Fisiologa vegetal. Tercera edicin. Publicaciones
Universitat Jaume. Espaa. 188-189 p.
ANEXO
Tabla anexa 1. Absorbancia de una muestra de pasto (1gr) segn las diferentes
longitudes de onda.
nm Absorbancia
340 0,104
360 0,081
380 0,068
400 0,085
420 0,115
440 0,106
460 0,076
480 0,042
500 0,009
520 0,001
540 0,001
560 0,002
580 0,009
600 0,011
620 0,021
640 0,024
660 0,082
680 0,01
700 -
720 -
740 -
760 -