Sunteți pe pagina 1din 21

Dr.

Mircea Leabu Funcionarea membranelor ca sistem integrat


1

FUNCIONAREA MEMBRANEI CA SISTEM INTEGRAT

Complexitatea din organizarea molecular a membranelor nu complic, ci eficientizeaz
funcionarea acestor structuri celulare. Ceea ce se complic este calea noastra de a elucida
mecanismele prin care membranele i ndeplinesc menirea.
Toate componentele membranare coopereaz n asigurarea funciei acesteia, iar aceast
colaborare asigur o combinatorie larg, ce permite celulei ci dintre cele mai diverse de a
comunica ntre ele, sau cu mediul extracelular. Complexitatea molecular a membranelor se
rsfnge ntr-o complexitate funcional care asigur, pe de o parte, investigarea a tot ceea ce se
afl mprejurul celulei i, pe de alt parte, declanarea rspunsurilor celulare adecvate adaptrii
sale la mediul nconjurtor. n toat aceast aciune, caracteristicile organizrii moleculare a
membranei (eterogenitate, asimetrie, comportament de fluid bidimensional) capt o deosebit
importan. Departe de a fi doar o structur sumativ, eterogen, coninnd o multitudine de
tipuri de lipide/glicolipide i proteine/glicoproteine, membrana celular se constituie ca un
sistem biologic ce integreaz marea diversitate de biomolecule exploatnd-o n scopul rezolvrii
problemelor pe care le impune existena celulei i supraveuirea ei n condiiile impuse de mediu.
Aadar, prin toat discuia referitoare la funcionarea membranei ca sistem integrat, cunotinele
referitoare la organizarea molecular a acestei structuri vor sta la baza nelegerii fenomenelor.
Cum menirea membranei este aceea de a separa, dar a i uni celula cu mediul, acestea implic
asigurarea unui schimb de substan i/sau informaie cu exteriorul riguros controlate.
Pentru o sistematizare a proceselor vom include ceea ce ine de schimbul de substane
dintre celul i mediu ntr-un subcapitol intitulat Transportul membranar, iar ceea ce ine de
schimbul de informaie sub titlul Semnalizarea celular. Trebuie subliniat faptul c n
realitate nu se poate face, de fapt, o separaie ntre cele dou tipuri de fenomene, ele coexistnd
i coopernd n realizarea eficient a funciilor membranelor. Mai concret spus, transportul
membranar este dependent (controlat i modulat) de fenomene de semnalizare celular, iar
semnalizarea celular implic adesea fenomene de transport membranar.
Aadar, nimic din ceea ce se ntmpl la nivelul membranei, nu poate fi scos din context,
ca de altfel tot ce se ntmpl n celul, n ansamblul su. Membrana asigur celulei informaiile
necesare pentru supravieuire i aciune n funcie de ce se ntmpl n jurul su. Astfel, simultan
celula primete informaii pe multiple ci, pe care pe prelucreaz i rspunde, innd cont de
toate, printr-un comportament adecvat. Aceast capacitate a celulei de a primi i analiza
informaii multiple culese prin diverse surse poart denumirea de diafonie (termenul n englez
folosit pentru a denumi aceste fenomene este cross-talk). Un exemplu de diafonie este cel ce
determin motilitatea celular. Pentru a decide s migreze dintr-un loc n altul n esuturi,
celulele utilizeaz informaiile primite prin receptori la factori chemotactici ca i prin integrine a
cror interaciune cu substratul din matricea extracelular i distribuie membranar le
moduleaz i adapteaz pentru a favoriza complexele procese ce nsoesc micarea celulei.
Analiza semnalelor ce vin de la receptori i integrine conduce la declanarea unor reorganizri
ale citoscheletului (vezi la capitolul Citoschelet) cu efecte asupra morfologiei celulare i
forelor necesare deplasrii.

Transportul membranar
n funcie de calea pe care substanele anorganice sau organice, ori unele materiale
pariculate o urmeaz pentru a ptrunde n interiorul celulei, transportul membranar poate fi
clasificat n dou categorii:

1. Transport prin membran, atunci cnd substanele strbat membrana (din exterior spre
interior, sau invers) fie direct printre lipidele bistratului, fie prin structuri specializate
organizate de proteinele transmembranare;
Dr. Mircea Leabu Funcionarea membranelor ca sistem integrat
2
2. Transport cu membran (transport vezicular), atunci cnd substanele sunt introduse n,
sau eliminate din celul prin intermediul unor vezicule delimitate de (endo)membrane
care se desprind de, sau fuzioneaz cu membrana celular.

Transportul prin membran este specific ionilor i moleculelor mici ( < 10; M < 800
Daltoni Da). Transportul cu membran realizeaz schimbul de molecule mari ( > 10; M >
800Da), marcomulecule, respectiv particule. Indiferent de direcia n care are loc schimbul,
aceast selectare rmne valabil ntre cele dou tipuri de transport. De remarcat c parametrii
referitori la gabaritul compuilor transportai sunt valori mediate i ar fi absolut valabile pentru
structuri sferice. n realitate, procesul de transport al moleculelor mici prin membran depinde i
de geometria acestora, molecule alungite, care depesc 800Da, putnd fi transportate prin aceste
mecanisme (spre exemplu prin jonciunile comunicante; vezi acolo).

Transportul prin membran
Moleculele mici (n limita de gabarit specificat mai sus) pot strbate membrana
strecurndu-se printre lipidele membranare. Acest lucru este uor de neles dac ne gndim ca
lipidele, aezate n bistrat i cu mobiliti de mare diversitate nu organizeaz o structur cu o
compactitate rigid lsnd n permanen spaii de dimensiuni i geometrii variabile. n aceste
spaii moleculele mici se pot insinua (dac dimensiunile le permit i n felul acesta pot trece mai
repede sau mai ncet dintr-o parte n cealalt a membranei. Acest tip de trecere se face fr a
necesita consum concomitent de energie i este numit transport pasiv. Calea transportului pasiv
printre moleculele lipidelor membranare poate fi urmat de moleculele nepolare, deci hidrofobe
(spre exemplu: O
2
, N
2
, CO
2
, NO, CO, benzen i asemntoare), dar i de moleculele polare mici
(cu masa molecular sub 100Da; de exemplu: H
2
O, etanolul, ureea, glicerina). Acest transport,
care se desfoar prin trecerea substanelor printre lipidele membranare, este numit i difuzie
simpl, sau difuzie pasiv.
Pentru moleculele polare mari (cu greutatea molecular ntre 100 i 800Da) ct i pentru
ioni transportul prin membran se face numai prin proteine membranare organizate n structuri
specifice. Aceste structuri poart denumirea de transportori (pentru molecule polare mari:
glucoz, aminoacizi, nucleotide) sau canale ionice (firete pentru ioni: H
+
, Na
+
, HCO
3
-
, K
+
,
Ca
2+
, Cl
-
, Mg
2+
). Transportorii i canalele ionice efectueaz tot un transport pasiv (fr consum
concomitent de energie). Transportul pasiv prin transportori sau prin canale ionice se numete i
difuzie facilitat. Difuzia facilitat poate fi transport singular numit i transport uniport, cnd
este transportat o singur entitate chimic (ion sau molecul), sau poate fi transport cuplat,
numit i co-transport, cnd sunt transportate simultan (adic ntr-un singur ciclu) dou sau mai
multe entiti chimice (ioni, molecule sau ioni i molecule). Cnd toate componentele sunt
transportate n aceiai direcie transportul cuplat este numit transport simport. Dac cel puin
una dintre componentele transportate este purtat n direcie opus celorlalte, co-transportul este
numit transport antiport.
Ca exemplu de transportor uniport, amintim transportorul de glucoz din membrana
eritrocitar (GLUT1) [1]. Este o protein multipas cu masa molecular ~45kDa, avnd 12 treceri
n -helix prin planul membranei, la nivelul crora alturi de aminoacizi hidrofobi gsim i Ser,
Thr, Asn i Gln implicate n interaciunea cu molecula de glucoz n timpul procesului de
transport. GLUT1 face parte dintr-o familie de transportori de glucoz cu 14 membri (GLUT1-
14) toi cu cte 12 treceri n -helix prin planul membranei i cu capetele N- i C-terminale n
endodomeniu. Transportorii GLUT sunt ntlnii i n membranele altor tipuri de celule animale,
nu numai n eritrocite sau n linia hematopoietic eritroid [2-5].
Ca exemplu de transportor simport, merit amintit co-transportorul de sodiu/glucoz
(SGLT1) din membrana apical a enterocitelor (celulele absorbante din intestin) [6, 7]. De
remarcat faptul c acest transportor folosete disiparea gradientului de Na
+
, pentru a transporta
glucoza din lumenul intestinal n citosolul enterocitelor mpotriva gradientului de concentraie a
glucidului. Un asemenea transport mai este numit i transport activ secundar, deoarece se
bazeaz practic pe energia consumat anterior pentru meninerea gradientului de Na
+
(12mM n
Dr. Mircea Leabu Funcionarea membranelor ca sistem integrat
3
celul, 145mM n exterior). Asta nseamn c glucoza este eficient absorbit din lumenul
intestinal ctre spaiul de sub epiteliu de unde este preluat n circulaia sanguin. SGLT1 este
protein transmembranar multipas cu 14 treceri n -helix prin planul membranei, dintre care
trecerile 10-14 au fost dovedite ca structurnd calea de trecere a glucozei. Lanul polipeptidic al
SGLT1 are 664 de aminoacizi i o mas molecular de ~73kDa. Un ciclu al mecanismului de
transport co-transport 2 ioni de sodiu i o molecul de glucoz. n membranele latero-bazale
ale enterocitelor se gsete un transportor uniport de glucoz (GLUT2) prin care glucoza
introdus n celul de SGLT1 este transportat n spaiul subepitelial.
Ca exemplu de transport antiport, readucem n atenie canalul de schimb anionic HCO
3
-
/Cl
-
din membrana eritrocitar [8, 9], cunoscut sub denumirea simbolic banda 3 (vezi detalii
structurale la subcapitolul Proteine membranare, seciunea Exemple de proteine
membranare). Schimbul anionic (1:1) poate fi reversat n funcie de concentraiile
bicarbonatului n celul, respectiv mediul extracelular. Proteine similare se ntlnesc i n alte
tipuri de celule, iar familia acestora poart denumirea de schimbtori anionici (prescurtat AE, de
la termenul englezesc anion exchanger). n celulele noneritroide au fost identificate AE2 i AE3
[10, 11].
Un alt antiport prezent n membrana celor mai multe celule excitabile sau secretoare [12],
este schimbtorul de Ca
2+
/Na
+
, care efectueaz tot un transport activ secundar, eliminnd un
ion Ca
2+
prin introducerea a 3 ioni Na
+
. (De fapt sunt raportate valori diferite de ioni Na
+

schimbai cu un ion Ca
2+
, astfel nct mai circumspect ar fi s spunem c stoichiometria
antiportului este mai mult de 2 Na
+
, pentru 1 Ca
2+
[13]). Familia de proteine transmembranare cu
aceast funcie este notat prescurtat cu NCX (de la Natrium-Calcium eXchanger), fiind
identificate la mamifere trei membri: NCX1, NCX2 i NCX3. NCX1 se afl n aproape toate
esuturile, dar este exprimat mai abundent n inim, creier i rinichi [14]. NCX1 are 938
aminoacizi (110kDa, mas deductibil din secvena de aminoacizi) i are 9 domenii
transmembranare n -helix [15]. Captul amino terminal al lanului polipeptidic se afl la
suprafaa membranei, aadar NCX1 este protein transmembranar tip I, iar ntre segmentele
transmembranare 5 i 6 se structureaz o bucl citosolic (adic pe faa intern a membranei) de
550 de aminoacizi (mai mult de jumtate din lungimea lanului polipeptidic) esenial pentru
reglarea activitii canalului. Activitatea schimbtorului Na
+
/Ca
2+
este dependent de
concentraiile extracelular, respectiv citosolic ale cationilor schimbai, dar i de concentraia
H
+
, a ATP i a fosfoinozitidelor dis-fosforilate [13]. n funcie de potenialul de membran i de
concentraiile de o parte sau de cealalt a membranei ale cationilor transportai, schimbul poate fi
reversat. De remarcat este faptul c, n celula muscular cardiac, unde contribuia de calciu
citosolic necesar contraciei se datoreaz ~70% eliberrii din reticulul sarcoplasmic, iar ~30%
invaiei de calciu extracelular, eliminarea procentelor de Ca2+ venite din afara celulei necesar
procesului de relaxare se face n principal prin NCX i nu prin pompa de calciu sarcolemal
(adic pompa de calciu din membrana celulei musculare). n cazul reintroducerii Ca2+ n
reticulul sarcoplasmic, contribuia revine n exclusivitate pompei de calciu din membrana
reticulului [16]. De regul NCX transport de 10, 15 ori mai mult Ca2+ n afara celulei dect
pompa membranar de calciu [14].
Transportul pasiv oricum s-ar desfura, se petrece n sensul de diminuare a gradientului
de concentraie al componentei transportate. De aceea se mai numete i transport disipativ, sau
transport entropic, sau transport la vale (de la concentraie mare la concentraie mic). Acest tip
de transport se poate desfura pn cnd concentraia componentei transportate se egalizeaz de
cele dou pri ale membranei prin care se desfoar.
Asupra canalelor ionice membranare se pot face comentarii suplimentare. Ele nu sunt
permanent deschise, iar celula poate controla funcionarea lor. n funcie de mecanismul prin
care este controlat regimul de deschidere a lor, canalele ionice se pot mpri n trei categorii:

1. Canale ionice controlate (operate) electric (prin voltaj), adic prin modificarea
potenialului de membran. Acestea sunt nchise atunci cnd potenialul membranei
Dr. Mircea Leabu Funcionarea membranelor ca sistem integrat
4
este cel normal (adic 50 70mV cu minus pe versantul citosolic). Canalele
controlate electric se deschid atunci cnd potenialul de repaus al membranei se
modific.
2. Canale ionice controlate (operate) chimic (prin liganzi), adic se deschid atunci cand
leag un compus chimic (ligandul) care schimb conformaia proteinei. Ligandul se
poate lega n ectodomeniul proteinei care sutructureaz canalul (sau a unei subuniti
daca este multimer) fiind ligand extracelular, sau la alte tipuri de canale la
endodomeniu (ligand intracelular, sau citosolic).
3. Canale ionice controlate mecanic, adic a cror stare deschis/nchis este
dependent de exercitarea unor tensiuni mecanice asupra membranei.

Trebuie menionat c activarea canalelor respect un mecanism ciclic. Acesta asigur
inactivarea lor chiar n condiiile care au determinat deschiderea, deoarece pot prezenta trei stri:

- starea nchis, de repaus, n absena stimulului (modificarea potenialului, sau legarea
ligandului, sau tensiunea mecanic);
- starea deschis, care permite trecerea ionilor, dup apariia stimulului;
- starea inactiv, nchis la prezena prelungit a stimulului (conformaie nchis sub
potenial de membran modificat, alta dect cea nchis de repaus; ocupat de ligand
dar nchis; nchis n prezena tensiunii mecanice care a determinat deschiderea).

Aceast trecere ntr-o stare refractar a canalelor ionice asigur meninerea homeostaziei
ionice intracelulare n condiiile de persisten a semnalelor, refacerea potenialului membranar,
desprinderea ligandului i, eventual, metabolizarea sa, adic revenirea celulei la starea bazal,
adic starea de neexcitaie.
Dintre cele trei tipuri de canale ionice cele controlate mecanic au fost ultimile descoperite
i sunt i cele mai dificil de investigat, ncepnd chiar cu stabilirea faptului c sunt controlate
mecanic. Dificultile se datoreaz urmtoarelo aspecte [17]:

(i) celulele mecanosenzitive nu sunt numeroase n organism i sunt mprtiate printre multe
alte tipuri celulare, spre deosebire de celulele care conin canale de celelalte tipuri;
(ii) numrul de canale controlate mecanic n membranele celulelor mecano-senzitive este de
cteva ordine de mrime mai sczut dect al celor comandate electric sau chimic (de
exemplu, eritrocitele 1,2x10
6
molecule de banda 3, membrana celulelor cu bastonae
conine aproximativ 4x10
7
molecule de rodopsin, celulele olfactive n jur de 1,7x10
7

receptori olfactivi, n timp ce celulele proase din organul lui Corti au 50 la 100 canale
controlate mecanic);
(iii) dovedirea proprietilor mecano-senzitive ale eventualilor candidai este dificil cu
tehnicile clasice.

n ciuda acestor dificulti interesul pentru studiul canalelor controlate mecanic este
deosebit de actual, atta timp ct dorim s cunoatem mecanismele celulare i moleculare ale
receptrii, controlrii i reglrii presiunii sanguine, ale senzaiilor tactile, ale percepiei sunetelor
gravitaiei i acceleraiei. Din ceea ce se cunoate pn n prezent canalele controlate mecanic
sunt mprite n patru tipuri [17]: degenerine/canale epiteliale de sodiu (abreviere DEG/ENaC,
de la DEGenerin/Epitelial Natrum Channel), canale receptor tranzient de potenial (prescurtat
canale TRP, de la Transient Receptor Potential), canale de potasiu cu doi pori (notate K
2P
) i
canale mecanosenzitive de conductan mic (abreviat MscS, de la Mechanosensitive channel of
Small conductance). O trastur comun a acestor canale controlate mecanic este aceea c
genereaz semnale electrice foarte rapide, cu o laten de sub 1ms.
Pentru nelegerea faptului c evenimentele celulare nu se petrec individual ci ntr-o
permanent cooperare i completare i c celulele se comport adecvat situaiilor n care sunt
puse numai datorit acestei conlucrri a componentelor lor, inclusiv ale componentelor
Dr. Mircea Leabu Funcionarea membranelor ca sistem integrat
5
mebranare, putem exemplifica prin ceea ce se petrece la nivelul jonciunilor neuro-musculare n
momentul stimulrii celulei musculare pentru contracie. Jonciunea neuro-muscular, numit i
sinaps neuro-muscular, reprezint o apoziie dintre membrana butonului terminal al unui axon
i un microdomeniu al membranei celulei musculare. ntre cele dou membrane aflate n apoziie
la nivelul sinapsei, n spaiu numit fant sinaptic, se creeaz un microclimat favorabil
transmiterii de semnale ntre celula nervoas i celula muscular. Ce se ntmpl la acest nivel
cnd un semnal nervos ajunge la butonul terminal al axonului? Propagarea semnalului nervos de-
a lungul axonului se materializeaz prin depolarizarea membranei axonale secvenial de-a lungul
acestuia. Cnd semnalul, deci depolarizarea membranei axonale ajunge la butonul terminal, are
loc deschiderea unor canale de Ca
2+
operate electric. Deschiderea acestor canale permite ionilor
de calciu din spaiul extracelular (concentraie mare, de ordinul 10
-3
M) s intre n citosolul de la
nivelul butonului axonal (concentraie mic, de ordinul 10
-7
M). Creterea concentraiei de Ca
2+

n butonul axonal induce secreia de acetilcolin depozitat n vezicule de secreie la nivelul
butonului axonal n fanta sinaptic. Acetilcolina secretat n fanta sinaptic se leag de canalele
de sodiu controlate chimic prezente n membrana sinaptic a celulei musculare pe care le
deschide. Ionii Na
+
ptrund n celula muscular depolariznd membrana acesteia la nivelul
jonciunii neuro-musculare. Depolarizarea membranei la nivelul sinapsei duce la deschiderea
unor alte canale de Na
+
comandate electric, extinznd depolarizarea membranei celulei
musculare. Aceast depolarizare extins duce la deschiderea unor canale de Ca
2+
operate electric
din membrana celulei musculare, ca i a unor canale de calciu din membrana reticulului
sarcoplasmic. Ptrunderea Ca
2+
(att din exteriorul celulei, ct i din reticulul sarcoplasmic) n
citosolul celulei musculare determin contracia celulei. Relaxarea celulei musculare presupune
eliminarea ionilor de Ca
2+
din citosol, prin aciunea unor pompe de Ca
2+
. Dup transmiterea
semnalului, la nivelul fantei sinaptice acetilcolina este fie matabolizat la colin i acid acetic,
fie reintrodus n vezicule de sectreie, n butonul axonal prin endocitoz. Scderea concentraiei
de acetilcolin n fanta sinaptic, alturi de relaxarea celulei musculare prin scderea
concentraiei citosolice de Ca
2+
asigur reluarea ciclului.
Pn aici am detaliat aspecte legate de transportul n sensul diminurii concentraiei
componentei/componentelor transportate, adic transportul pasiv, sau entropic. Celulele au ns
nevoie de transport de molecule mici i/sau ioni i mpotriva gradientelor de concentraie
existente la un moment dat, sau permanent la nivelul membranelor. Pentru rezolvarea acestor
nevoi, n membrane sunt organizate structuri proteice capabile s transporte molecule mici i ioni
mpotriva gradientului de concentraie al acestora, prin consum de energie provenit din
scindarea unor molecule macroergice (de regul ATP). Aceste structuri proteice membranare
poart denumirea de pompe. Transportul efectuat de ele se numete transport activ, sau
transport anti-entropic, sau transport la deal.
Ca exemplu de transport activ vom aborda pompa de Na
+
/K
+
, numit i Na
+
/K
+
-ATP-
az
1
. Pompa este o structur complex [18] organizat ca un tetramer format din dou subuniti
mari (care formeaz unitatea catalitic i transportoare), i dou subuniti mici
(glicoproteice, reglatoare, neimplicate direct n pomparea ionilor, dar necesare pentru
mpachetarea conformaional corect a subunitilor n reticulul endoplasmic, n momentul
biosintezei). n unele organe la aceast organizare se altur o a treia subunitate (un polipeptid
foarte mic, capabil s modeleze afinitatea pentru ionii transportai, i pentru ATP). Toate cele trei
tipuri de subuniti sunt proteine transmembranare.
Subunitile sunt neglicozilate, au o mas molecular de ~110kDa (1014 1028 de
aminoacizi), 10 treceri n -helix prin bistratul lipidic membranar (notate M1 M10) i ambele
capete amino- i carboxi-terminale ale lanului polipeptidic n endodomeniu [18]. Exist patru
izoforme de subuniti : 1, care are un lan polipeptidic format din 1024 aminoacizi, 2, cu

1
Pompa de sodiu a fost descoperit n 1950 de chimistul danez Jens Christian Skou, care peste 47 de ani (n 1997) a
fost distins cu Premiul Nobel n chimie cu urmtoarea motivaie a juriului: "for the first discovery of an ion-
transporting enzyme, Na
+
,K
+
-ATPase".
Dr. Mircea Leabu Funcionarea membranelor ca sistem integrat
6
1021 aminoacizi, 3, cu doar 1014 aminoacizi i 4, cu cel mai lung lan polipeptidic, coninnd
1028 de aminoacizi [18, 19]. Domeniul extracelular este minor i format din dou bucle mici
ntre domeniile transmembranare M1,M2 (cam 12 aminoacizi, responsabil de interaciunea cu
ouabaina, care inhib activitatea pompei) i M7,M8 (n jur de 39 de aminoacizi). Domeniul
citosolic este abundent format din poriunea N-terminal (primii 90-97 de aminoacizi ai lanului
polipeptidic), o bucl mic ntre domeniile transmembranare M2 i M3 (format din ~143 de
aminoacizi), o bucl mare ntre M4 i M5 (coninnd n jur de 439 de aminoacizi i unde se afl
acidul aspartic ce se fosforileaz n ciclul de activitate a pompei, ca i situl de legare a ATP), alte
dou bucle semnificativ mai mici ntre M6, M7 (28 de aminoacizi) i M8, M9 (27 de aminoacizi)
i captul C-terminal mic (format din ultimii 21 de aminoacizi ai lanului polipeptidic) [20].
Subunitatea este glicoprotein transmembranar unipas, tip II cu un endodomeniu mic
format dintr-o proiune scurt a captului N-terminal i un ectodomeniu mare format din mai
mult de jumtate din lanul polipeptidic cu captul C-terminal. Exist trei izoforme de subuniti
: 1 care are 304 de aminoacizi i trei situri de posibil N-glicozilare, b2 cu 290 de aminoacizi
n structur i 4 la 9 situri de glicozilare, depinznd de secie (4 la pasre, 7 la obolan, 8 la om, 9
la oarece) i 3 avnd 279 de aminoacizi [18]. Nu se cunoate dac toate aceste posibile situri
de glicozilare sunt utilizate ca atare, dar toate izoformele sunt, cu certitudine, mai puternic sau
mai slab glicozilate. Dei inhibarea glicozilrii cu tunicamicin nu blocheaz activitatea pompei
i nici sensibilitatea acesteia la ouabain este dovedit, pentru subunitile neglicozilate,
afectarea echilibrului de asamblare . Aceste rezultate experimentale sugereaz rolul
subunitii n corecta mpachetare a subunitii a n timpul biosintezei, la nivelul reticulului
endoplasmic i fromarea eficient a complexelor proteice ale pompei [18]. O alt caracteristic
structural important a subunitii este aceea de a forma trei puni disulfidice n ectodomeniu.
La obolan aceste puni, ce asigur mpachetarea corect a subunitii 1, se formeaz ntre
Cys
125
-Cys
148
, Cys
158
-Cys
174
i Cys
212
-Cys
275
. Chiar dac poziiile relative ale cisteinelor
implicate n formarea punilor nu sunt conservate la izoformele 2 sau 3, punile sunt prezente,
ceea ce sugereaz importana lor pentru formarea unei structuri corecte, funcionale. Desfacerea
celor trei puni disulfidice cu ageni reductori duce la pierderea funciei pompei, iar o singur
mutaie punctiform care elimin numai una dintre cisteinele n discuie mpiedic asamblarea
corect a heteromerilor [21].
Subunitatea este o protein transmembranar unipas tip I i au fost identificate 7
izoforme, cu mase moleculare ntre 8 i 14kDa [18, 22]. Toate aceste izoforme au fost dovedite a
se asocia cu pompele de Na
+
/K
+
[22] modulnd activitatea acestora, se exprim n special la
nivelul rinichiului avnd rol i n adaptarea, respectiv supravieuirea celulelor n condiii
hipertone [25].
Referitor la asamblarea complexelor proteice ale Na
+
,K
+
-ATPazei se cunoate c
subunitile au domeniul transmembranar n apropierea celor M7 i M10 ale subunitii i c
interacioneaz cu bucla dintre M7 i M8 a ectodomeniului subunitii catalitice [22]. Ct
privete asamblarea n complex a subunitii , domeniul transmembranar al acesteia se
localizeaz ntr-un an dintre M2, M6 i M9 al subunitii , cu subunitatea la nivelul
ectodomeniului i cu endodomeniul subunitii la nivelul buclelor dintre M6/M7 i M8/M9
[22-24]. Toate aceste interaciuni ce sunt nuanate prin asocierile diferite dintre cele 4 izoforme
de subuniti , trei izoforme de subuniti i apte izoforme de subuniti asigur modulri
de mare finee ale funciei pompei n diverse tipuri celulare [18, 22].
Ce se cunoate asupra mecanismului de aciune al Na
+
,K
+
-ATPazei? Ciclul de pompare
are 7 etape i duce la expulzarea a 3 ioni de Na
+
i introducerea a 2 ioni de K
+
n celul, pe baza
unor modificri de conformaie ntre dou forme: E1 cu acidul aspartic din situl catalitic
nefosforilat i E2 cu acidul aspartic fosforilat [26]. Etape ciclului de pompare sunt:

1. Legarea a trei ioni Na
+
pe versantul citosolic (endodomeniul) subunitii a pompei;
2. Legarea ATP pe endodomeniul subunitii ;
Dr. Mircea Leabu Funcionarea membranelor ca sistem integrat
7
3. Fosforilarea unui radical aspartat prin scindarea ATP la ADP (consumul energetic necesar
activitii pompei) i schimbarea conformaiei proteinei care duce la expunerea celor trei
ioni Na
+
pe ectodomeniul subunitii ;
4. Disocierea i expulzarea n exterior a ionilor Na
+
i legarea pe ectodomeniul subunitii a
doi ioni de K
+
;
5. Hidrolizarea aspartilfosfatului i schimbarea conformaiei subunitii ;
6. Internalizarea i expunerea ionilor K
+
pe endodomeniul subunitii ;
7. Disocierea ionilor K
+
i eliberarea lor n citosol cu nchiderea unui ciclu de pompare.

Pompa de Na
+
/K
+
este electrogenic, adic prin eliminarea a 3 ioni de Na
+
i introducerea
a numai 2 ioni K
+
, contribuie la realizarea i/sau meninerea potenialului membranar. Se
ntlnete n membranele tuturor celulelor animale. Importana prezenei i activitii sale poate
fi probat i de faptul c adesea ea consum jumtate din cantitatea celular de ATP. Inhibarea
activitii ei prin ouabain, duce la incapacitatea celular de a-i menine echilibrul Na
+
/K
+
, cu
afectarea potenialului membranar i complicaii asupra fiziologiei celulare ce rezult din asta.
Pompa discutat mai sus face parte din tipul P de ATPaze, alturi de pompa protonic
(H
+
-ATPaz), pompa H
+
/K
+
(H
+
,K
+
-ATPaz) i de pompa de calciu (Ca
2+
-ATPaz). P-ATPazele
au aceeai structur catalitic i mecanisme asemntoare celui descris pentru pompa de Na
+
/K
+
.
La nivelul endomembranelor a fost evideniat i tipul V de ATPaze (ATPaze de tip
vacuolar) care pompeaz protoni n endosomi sau lizosomi. Organizarea acestora este mult mai
elaborat, avnd nevoie de cel puin 11 subuniti ca s i ndeplineasc funcia, ceea ce duce la
formarea unor complexe proteice de ~1000kDa [27].
n sfrit, menionm c la nivelul celulelor eucariote mai exist tipul F de ATPaze, care
sintetizeaz ATP folosind energia rezultatt din disiparea unui gradient protonic existent la
nivelul membranei n care sunt organizate i tipul E de ATPaze care sunt enzime ale suprafeei
celulare cu rol n hidroliza diverilor nucleozidtrifosfai (inclusiv ATP) extracelulari, cu rol n
diferite fenomene de semnalizare i nu n transportul activ. V-ATPazele i F-ATPazele au
similitudini de organizare (complexe proteice cu numr mare de subuniti) i reprezint, pe baza
mecanismului de funcionare, ceea ce numim motoare moleculare [27, 28].
Pentru completarea imaginii cooperrilor dintre diversitatea de componente funcionale
ale membranei celulare revenim la prezentarea unor fenomene care se completeaz reciproc n
interesul bunei funcionri a celulei, exemplificnd colaborarea dintre diveri transportori la
nivelul celulelor absorbante intestinale, enterocitele. Enterocitele sunt celulele responsabile de
preluarea din hrana digerat a compuilor biochimici utili rezultai, ntre alii glucoza.
Enterocitele sunt celule polarizate, adic celule ale cror membrane au organizare molecular
(cel puin ca tipuri de proteine) diferit la nivelul lumenului intestinal (pol apical, unde suprafaa
membranei este mult sporit prin structurarea unor digitaii numite microvili) fa de zonele
dinspre esuturi (pol latero-bazal). La nivelul membranei apicale se afl transportorul simport
SGLT1, care introduce glucoza n citosolul enterocitului, alturi de 2 ioni Na
+
prin mecanismul
de transport activ secundar, prezentat mai sus. Acest proces de transport are o parte bun
(preluarea glucozei i Na
+
din alimente), dar i una periculoas (introducerea de Na
+
n exces n
citosolul enterocitelor cu afectarea potenialului membranar). Glucoza este mai departe expulzat
n spaiul subepitelial de transportorul uniport GLUT2 aflat n membrana latero-bazal, pentru a
fi preluat de circulaia sanguin i transportat acolo unde organismul are nevoie de ea. De
excesul de Na
+
se ocup pompa de Na
+
/K
+
aflat tot n membrana latero-bazal a enterocitului,
care eliminnd 3 ioni de Na
+
din i introducnd 2 ioni K
+
n enterocit asigur meninerea
homeostaziei ionice intracelulare a acestuia i potenialul membranar n limite normale. Prin
aceste cooperri ale transportorilor din membranele apical, respectiv latero-bazal ale
enterocitului se asigur prelularea glucozei din intestin chiar mpotriva gradientului de
concentraie, ceea ce conduce la creterea concentraiei de glucoz n citosolul enterocitului,
cretere care asigur funcionarea transportorului pasiv GLUT2, deoarece concentraia glucozei
n interstiiul peretelui intestinal este mai mic dect n enterocit, dar asigur i meninerea
Dr. Mircea Leabu Funcionarea membranelor ca sistem integrat
8
homeostaziei Na
+
n enterocit deoarece ceea ce introduce simportul SGLT1 este compensat de
expulzarea efectuat de pompa Na
+
/K
+
.
ncheiem discuiile referitoare la transportul prin membran, amintind de o clas de
transportori cu deosebit semnificaie fiziologic i, mai larg, medical, transportorii ABC (cu
ABC de la ATP-Binding Casette). Semnificaia fiziologic i medical a lor rezid din faptul c
aceti transportori induc rezisten multipl la medicamente (multidrug-resistance) fiind
capabili s elimine medicamentele din celul. Se gsesc att la procariote ct i la eucariote
permind primelor adaptare i rezisten la antibiotice, iar celulelor canceroase rezistena la
tratamente [29, 30]. Transportorii ABC sunt de o mare diversitate i au capacitatea de a
transporta a more diversitate de substane plecnd de la ioni, glucide, aminoacizi, vitamine,
lipide, antibiotice i medicamente (inclusiv xenobiotice) i ajungnd pn la oligozaharide,
oligopeptide, sau chiar proteine de mas molecular mare [29-33]. n ciuda acestei mari
diversiti de tipuri se pstreaz cteva reguli n organizarea acestor structuri proteice
transmembranare. n funcie de modul n care sunt respectate aceste reguli transportorii ABC se
pot mpri n: (i) sisteme importatoare mici, la care fiecare element de organizare structural
este asigurat de un alt polipeptid; (ii) sisteme importatoare mari, la care organizarea implic dou
subuniti proteice identice (homodimeri), sau diferite (heterodimeri); (iii) sisteme exportatoare
organizate ca dimeri (numite i hemi-transporteri, half-transporter n englez), sau monomeri
(numite i transportori ntregi, full-lenght transporter) [29, 30]. La om sunt identificate aproape
50 de tipuri de transportori ABC [33].
n ncercarea de a nelege cum funcioneaz transportorii ABC s revenim la modul cum
sunt ei structurai. Toate cele trei tipuri de sisteme de transportori ABC conin domenii
transmembranare (notate abreviat cu TMD, de la TransMembrane Domains) care realizeaz
canalul prin care trece substana transportat i domenii de legare a nucleotidelor (abreviat
NBD, de la Nucleo-tide-Binding Domains), pe faa citosolic a membranei, cu rol n legarea i
hidrolizarea catalitic a ATP. Alturi de aceste domenii sistemele importatoare mai conin
domenii de legare a soluilor transportai (abreviat SBD, de la Solute-Binding Domains), pe faa
extern a membranei, cu rol n preluarea i transferarea substanei transportate ctre TMD [29].
Complexele proteice funcionale conin dou TMD miez, a cror asociere sub forma unui V
rsturnat (adic avnd deschiderea ctre citosol) determin formarea canalului de transport a
solutului i dou NBD care leag dou molecule de ATP i le poziioneaz antiparalel [29, 30].
De regul sistemele importatoare mici au fiecare dintre domeniile menionate formate din
polipeptide independente ce se asociat ca homodimeri sau heterodomeri conducnd la formarea
complexului funcional [29, 30]. Sistemele importatoare mari i sistemele exportatoare sunt
formate fie din dou subuniti (formnd complexe homo- sau hetero-dimere la hemi-
transportori), fie dintr-o singur protein (la transportorii ntregi). La hemi-transportori cele dou
subuniti structureaz pe baza aceluiai lan polipeptidic att un TMD ct i un NBD, iar la
transportorii ntregi se structureaz n prima jumtate a lanului polipeptidic un TMD i un NBD,
iar n cea de-a doua jumtate a lanului a doua pereche TMD, NBD. TMD miez respect regula
organizrii cu 6 segmente transmembranare n -helix, dei exist i sisteme care au TMD
format din numai 5 segmente transmembranare, sau altele care au 10 segmente transmembranare
pentru fiecare TMD [29]. La transportorii cu mai mult de 6 segmente transmembranare pe TMD
exist dovezi experimentale care sugereaz rolul acestora n reglarea i modularea funciei.
Cum funcioneaz aceste complexe transmembranare n transport? Mecanismul de
aciune presupune modificri ciclice ale conformaiei i poziiei relative a celor dou TMD
datorate hidrolizei ATP legat la nivelul NBD [29, 30]. Etapele ciclului de transport pentru
sistemele importatoare sunt:

1. Legarea i acostarea la nivelul complexului transportor a solutului, prin SBD;
2. Legarea ATP la NBD i adoptarea con-formaiei acestor domenii care s plaseze n poziie
antiparalel cele dou mole-cule de nucleotid;
3. Modificarea poziiei TMD i inversarea deschiderii V ctre suprafaa membranei, datorit
interaciunilor de la nivelul NBD ocupate de ATP;
Dr. Mircea Leabu Funcionarea membranelor ca sistem integrat
9
4. Avansarea solutului n profunzimea deschiderii V a celor dou TMD;
5. Hidrolizarea ATP cu eliberarea de pe NBD a ADP rezultat i inversarea deschiderii V a
TMD cu eliberarea solutului n citosol, ceea ce readuce conformaia complexului la cea
iniial, capabil s intre ntr-un ciclu nou.

Pentru ciclul de aciune a sistemelor exportatoare, numrul de etape este mai mic:
1. Intrarea solutului n adncitura V a TMD;
2. Legarea ATP la NBD i interaciunea dintre cele dou NBD pentru aezarea antiparalel a
moleculelor de nucleotid;
3. Modificarea poziiei TMD cu inversarea deschiderii V i eliberarea solutului n spaiul
extracelular;
4. Hidroliza ATP i inversarea deschiderii V, cu formarea conformaiei iniiale a complexului
transportor.

n cele mai bine de trei decenii de cnd au fost identificai, transportorii ABC au
reprezentat structuri membranare pentru al cror interes tiinific a fost n permanent cretere.
Suntem departe de a cunoate suficiente detalii legate de funcionarea acestora, care s ne
permit s i exploatm eficient n medicin. Transportorii ABC rmn mai departe structuri ale
membranei celulare de mare i acut interes pentru ceea ce numim medicin translaional, adic
acele cercetri din bio-medicin care s duc la o ct mai eficient aplicare a rezultatelor n
clinic.

Transportul cu membran
Transportul cu membran este dependent de capacitate unor microdomenii membranare
de a se invagina sub forma unor vezicule, urmat de desprinderea (fisionarea) lor i introducerea
substanelor captate n volumul veziculei n celul, sau este dependent de capacitatea
endomembranelor veziculelor de secreie de a fuziona cu membrana celular i eliberarea n
spaiul extracelular a substanelor din interior. Transportul cu membran permite celulelor s
fac schimb de substan cu exteriorul, ca i transportul prin membran detaliat n subcapitolul
anterior, dar folosid mecanisme diferite, care implic microdomenii membranare (poriuni de
membran ce solidarizeaz structural i funcional anumite lipide/glicolipide i anumite
proteine/glicoproteine) i nu doar proteine ale acestora.
n funcie de direcia n care se efectueaz, transportul cu membran se mparte n trei
tipuri:

1. Endocitoz, atunci cnd componentele transportate sunt preluate din exterior i
introduse n celul;
2. Exocitoz, prin care se elimin componente din interiorul celulelor n afara ei;
3. Transcitoz, care este specific celulelor epiteliale ce structureaz epitelii
unistratificate i presupune preluarea de substane din exteriorul celulei pe unul din
versantele epiteliului (la polul apical, adic din lumenul delimitat de epiteliu, sau la
polul latero-bazal, adic din spaiul interstiial subepitelial), transportarea lor dintr-o
parte n celalt a celulei epiteliale i eliminarea substanelor astfel transportate trans-
epitelial n exteriorul celulei pe celalalt versant al epiteliului.

La rndul ei, endocitoza se mparte n dou categorii, funcie de caracteristicile
materialelor preluate de celul. Atunci cnd sunt endocitate materiale particulate (de exemplu
bacterii, fragmente celulare, virusuri) procesul este denumit fagocitoz. Cnd sunt endocitate
substane solubilizate fenomenul poart denumirea de pinocitoz. Diferena ntre cele dou tipuri
de endcitoz nu const numai n tipul de material transportat n celul ci i n mecanismul prin
care acestea se desfoar.
Dr. Mircea Leabu Funcionarea membranelor ca sistem integrat
10
Fagocitoza a fost descris de mai bine de un secol de Ilia Ilich Mechnikov
2
n 1882, iar
denumirea ei a aprut pentru prima dat ntr-un articol al acestuia din 1884. O scurt istorie a
evoluiei cunotinelor despre fagocitoz este prezentat ntr-un recent articol de sintez [34].
Fagocitoza presupune extinderea de pseudopode (prelungiri citoplas-matice delimitate de
domenii de membran ale cror dinamic este controlat de rearanjri ale citoscheletului actinic)
de-a lungul particulei care urmeaz s fie endo-citat. n acest proces rolul filamentelor de actin
este acela de a antrena, din interiorul celulei, membrana pentru formarea prelungi-rilor. La
nivelul membranei sunt implicai receptorii fagoci-totici care se ataaz de componente de pe
suprafaa particulei care urmeaz a fi endo-citate, componente care se numesc opsonine. De
regul aceste componente sunt anticorpi care recunosc proteine ale suprafeei structurii
fagocitate. Aceast decorare a particulelor fagocitate cu anticorpi poart denumirea de
opsonizare. n momentul n care particula fagocitat este complet mbrcat de prelunigirile
celulei care fogociteaz, membra-na fuzioneaz i particula este inclus ntr-o vacuol, n
interiorul citoplasmei celulei fagocitante. Vacuola poart denumirea de endosom, n general, sau
fagosom n cazul particular al fagocitozei. Fagosomul fuzio-neaz ulterior cu lizosomul, iar
componenta fagocitat este digerat.
Fagocitoza este un fenomen specific unor anumite tipuri de celule din organism cum sunt
macrofagele, dar i plimorfo-nuclearelor, numite i microfage. De menionat c la moartea
programat, corpii apoptotici care se formeaz declanaz procesul fagocitotic la celulele din jur,
fr ca acestea s fie neaprat macrofage profesio-niste, ducnd la o curare a esutului fr a se
produce inflamaii [35, 36].
Pinocitoza este mai divers din punctul de vedere al mecanismelor prin care se
realizeaz. De aceea se definesc mai multe tipuri de pinocitoz, pe baza acestor mecanisme.
O prim form este pinocitoza constitutiv. Aceasta presupune preluarea n vezicule de
endocitoz a unor volume de lichid extracelular, cu tot ce conine acesta solubilizat, printr-un
proces ce se desfoar de la sine, continuu, asemenea unui act reflex, cum ar fi respiraia
organismului. Evident, printr-un asemenea proces, cantitile de substane endocitate sunt
proporionale cu concentraiile n acre acestea se afl n mediul extracelular. Referitor la
intensitatea cu care se desfoar pinocitoza constitutiv, putem s gndim c aceasta poate fi
modulat de celul n conformitate cu nevoile ei concrete, fr a exista n momentul de fa
dovezi experimentale n aceasta direcie i fr s se schimbe caracterul ei constitutiv, dac
acest modulare a frecvenei s-ar ntmpla.
O a doua form este pinocitoza mediat de receptori, numit mai uzual endocitoz
mediat de receptori. Termenul a fost introdus n 1976 de Joseph L. Goldstein i Michael S.
Brown
3
preocupai de metabo-lizarea LDL i rolul acestuia n controlul i modularea
colesterolemiei i ateroscleroz [37]. Ei au descis preluarea LDL prin endocitoz mediat de
repeptor de ctre fibroblaste [38, 39]. Prin acest proces sunt internalizate de ctre celul proteine
(liganzi) care mai nti sunt recunoscute i legate de receptori specifici de pe suprafaa celulei.
Dup ce receptorul interacioneaz cu ligandul, complexele receptor-ligand sunt adunate n
adncituri ale membranei tapetate pe versantul membranar intern cu un complex de endoproteine
a crui component de baz este clatrina [40]. Aceste microdomenii adncite ale membranei
nvelite cu clatrin sunt denumite structuri cu nveli (n englez, coated pits). Pe msur ce
complexele receptor-ligand se aglomereaz n microdomeniul corespunztor al membranei, iar
nveliul de clatrin se formeaz adncitura membranei crete pn la definitivarea formei sale
sferice i desprinderea de membrana la nivelul creia s-a format, sub forma unei vezicule cu
nveli. Rolul clatrinei este acela de a controla adncirea microdomeniului membranar care
devine structur cu nveli i formarea veziculei cu nveli. Acest rol are la baz capacitatea
clatrinei de a se asambla n trimeri numii trischelioni [41], care mai departe pot forma ochiuri

2
Ilya Ilyich Mechnikov este laureat al Premiului Nobel n fiziologie sau medicin n 1908, premuil fiind mprit cu
Paul Erlich. Motivaia juriului a fost: in recognition of their work on immunity.
3
Joseph L. Goldstein i Michael S. Brown sunt laureai ai Premiului Nobel pentru fiziologie sau medicin n 1985,
iar motivaia juriului a fost: for their discoveries concerning the regulation of cholesterol metabolism
Dr. Mircea Leabu Funcionarea membranelor ca sistem integrat
11
hexagonale i pentagonale ntr-o geometrie asemntoare peticelor mingii de fotbal, care duc la
formarea veziculei. Trimerizarea clatrinei la trischelioni i nreelarea acestora se realizeaz prin
participarea unor molecule proteice ajuttoare, numite proteine adaptor, prescurtat AP (de la
numele englezesc Adaptor Protein). nveliul de clatrin al veziculelor de endocitoza mediat de
receptor se dezasambleaz imediat dup desprinderea veziculei de membrana celular devenind
endosom. Endosomul se transform adesea n lizosom prin fuzionarea cu organitul preexistent n
celul. Analiznd dinamica procesului de endocitoz mediat de receptori, deducem c acest tip
de transport cu membran este unul concentrativ, ceea ce o deosebete de pinocitoza constitutiv.
Ligandul este introdus n celul la o concentraie mai mare dect cea n care el se afl n mediu.
Aceast caracteristic se datoreaz faptului c, nainte de a fi endocitat, ligandul este acumulat i
concentrat la nivelul structurii de nveli prin complexele receptor-ligand. Endocitoza mediat de
receptori a fost descris pentru unele lipoproteine plasmatice, pentru transferin, sau pentru unii
factori de cretere.
Relativ recent a fost evideniat i o a treia form de pinocitoz, tot mediat de receptori,
dar pentru molecule mici. Acest proces de transport membranar a fost denumit potocitoz (de la
termenii greceti a bea + ky vas, recipient, celul + suffix pentru process,
fenomen). Ca i pinocitoza constitutiv, potocitoza se efec-tueaz prin intermediul caveolelor.
Potocitoza a fost evideniat pentru prima dat pentru acidul folic i denumit astfel n 1992 de
Richard G. W. Anderson [42, 43]. Procesul de potocitoz, dup legarea moleculelor mici, astfel
transportate, de receptori (ectoproteine cu ancor glicofosfatifdilinozitolic [44]) i seches-trarea
lor n caveole, permite trecerea acestora direct n citoplasm prin anumite canale din membrana
caveolar. Aceste canale se deschid n momentul n care caveolele i nchid comunicarea cu
exteriorul. n momentul de fa Anderson i ali cercettori care studi-az funciile caveolelor
ncearc s extind procesul de potocitoz la toate fenomenele de transport care sunt efectuate de
caveole prin evitarea cii ctre lizosom [45].
Exist n prezent o preocupare susinut pentru nelegerea la nivel molecular a diverselor
forme de pinocitoz ceea ce a condus la o clasificare a lor n endocitoz dependent de clatrin
i endocitoz inde-pendent de clatrin (ceea ce nseamn o difereniere la nivelul
mecanismelor ce erau incluse n pinocitoza constitutiv) [46, 47]. La rndul ei endocitoza
independent de clatrin poate fi endocitoz dependent de caveolin, sau endocitoz
independent de caveolin, dar dependent de alte tipuri de proteine care s asigure invaginarea
i fisiunea vesiculelor cu desprinderea lor de membran. Dac majoritatea tipurilor de endocitoz
sunt efectuate de structuri veziculare, au fost evideniate procese de endocitoz ce implic
invaginri membranare sub forma de structuri tubulare [46, 47].
Departe de a fi pentru celul doar o cale de a prelua materie din spaiu extracelular,
endocitoza este un fenomen care permite celulei s controleze funciile membranei, prin
modularea componentelor acesteia [48, 49]. Prin endocitoz, celula poate ascunde componente
ale organizrii membranei permind reciclarea acestora n funcie de nevoile celulei, sau le
poate elimina temporar degradndu-le, pentru a le biosintetiza din nou i expune la suprafaa
celulei atunci cnd este cazul [50]. Aa se ntmpl cu o mare parte dintre componentele
implicate n semnalizarea celular (vezi mai jos) iar aceast realitate este un alt exemplu de
cooperare ntre fenomenele ce definesc cele dou mai roluri ale membranei: schimbul de
substan (transportul membranar) i schimbul de informaie (semna-lizarea celular). Endosomii
care se formeaz dup desprinderea de membran a structurilor de endocitoz asigur sortri ale
componen-telor endocitate i chiar sunt implicai n continuarea proceselor de semnalizare [51].

Exocitoza
Procesul prin care celula elimin substane produse n diverse procese celulare (inclusiv
biosinteze de compui destinai secreiei) i acumulate temporar n structuri delimitate de
endomembrane numite vezicule sau vacuole de secreie poart numele de exocitoz. Din punct
de vedere al mecanismelor prin care este controlat, exocitoza poate fi constitutiv, sau semna-
lizat. Aceasta nseamn c unele produse destinate secreiei sunt eliminate din celul pe msur
ce se formeaz veziculele secretorii i acestea ajung la membrana celular unde are loc
Dr. Mircea Leabu Funcionarea membranelor ca sistem integrat
12
fuzionarea i secreia, n procesele constitutive. Pe de alt parte, anumite componente produse n
celul sunt acumulate i stocate n zone juxtamembranare pn cnd celula primete un semnal
care comanda secreia lor. Aceast exocitoz semnalizat este dependent de creterea
concentraiei de Ca
2+
din citoplasm n zona de stocare a veziculelor de secreie [52].
Mecanismul exo-citozei presupune urmtoarele etape [53, 54]:

1. Transportul veziculelor (n englez vesicle trafficking) de secreie din locul de formare
n locul de stocare din apropierea membranei din zona de secreie. Acest transport este
efectuat de aa-numitele motoare moleculare (izoforme de miozin pentru transportul pe
calea filamentelor de actin, sau dynein ori kinesin pentru transportul pe calea
microtubulilor);
2. Ancorarea veziculelor (n englez vesicle tethering) prin factori de ancorare de natur
rpoteic la o distan de ~25nm de membrana celular;
3. Acostarea veziculelor (n englez vesicle docking) la membrana celular, adic aducerea
acestora la o distan de 5 10nm (ct grosimea unei membrane) ntre cele dou
membrane: celular, respectiv vezicular;
4. Iniierea vezicular (n englez vesicle priming) care presupune o serie de evenimente
legate de rearanjrile dependente de ATP i de Ca
2+
ale proteinelor i lipidelor membranei
veziculare, rearanjri necesare efecturii ultimei etape. (n exocitoza constitutiv aceast
etap nu exist);
5. Fuzionarea veziculelor [55] cu membrana celular i expulzarea produilor de secreie.
Fuzionarea este realizat de nite proteine numite abreviat SNARE (de la Soluble N-
ethylmaleimide-sensitive Attachment protein REceptor) care sunt v-SNARE (n
membrana veziculelor) i t-SNARE (n membrana int, cu t de la englezescul target =
int). Se pare c fuzionarea (cel puin n unele tipuri de celule) se face la nivelul unor
structuri preexistente n membrana int care favorizeaz deschiderea veziculelor i au fost
denumite porosomi [56, 57].

Transcitoza
dei privit simplist ar prea o nsumare a endocitozei i exocitozei, lucrurile nu sunt aa.
Transcitoza este un proces al crui mecanism, chiar dac neelucidat n momentul de fa, este
departe de a nsemna o endocitoz urmat de o exocitoz. Termenul a fost introdus de Nicolae
Simionescu n 1979 [58] privitor la trecerea prin celulele endoteliale de macromolecule dinspre
plasm ctre esut i invers, prin structuri delimitate de membrane, numite la nceput, pentru
celulele endoteliale vezicule plasmalemale, ulterior fiind numite caveole n cazul tuturor tipurilor
celulare. Transcitoza este un proces specific celulelor epiteliale ale epiteliilor simple (monostra-
tificate). Celulele endoteliale de la nivelul capilarelor sunt exemplul clasic de celule care
efectueaz transcitoz. Procesul se petrece ns i la nivelul altor epitelii cum ar fi epiteliul
absorbant intestinal. Hepatocitele efectueaz i ele transcitoz pentru dimeri de IgA de la polul
sanguin la polul biliar. IgA astfel eliminat n bil ajunge n tubul digestiv unde au loc prime
activiti de aprare imun legate de alimentaie. Exemplul transportului trans-hepatocit al
dimerilor de IgA reprezint dup toate evidenele o transcitoz mediat de receptor [59].
De altfel transportul prin transcitoz al unor polimeri imunoglobulinici pare a fi o proprie-tate a
tuturor epiteliilor simple ce cptuesc organe cavitare, cu rol n iniierea aprrii imune nc din
aceste spaii echivalente topologic cu exteriorul organismului. Spre exemplu, acest tip de
transcitoz a fost dovedit i pentru epiteliul uterin [60].
Celor interesai de noutile referitoare la transcitoz sub aspectul diversitii epiteliilor la
nivelul crora se petrece i asupra mecanis-melor prin care se produce, recomandm cel mai
recent articol de sintez scris de Pamela Tuma i Ann Hubard, de la John Hopkins University,
Baltimore [61]. n acest articol se va vedea c, dei transcitoza a fost definit ca proces specific
celulelor epiteliale simple, ea se petrece i n sisteme neepiteliale.

Dr. Mircea Leabu Funcionarea membranelor ca sistem integrat
13
Semnalizarea celular
Semnalizarea celular, care mai general s-ar putea denumi semnalizarea intercelular
reprezint modalitatea esenial prin care celulele pot comunica ntre ele indiferent de distana la
care se afl. Aadar, semnalizarea celular presupune, de regul, cooperarea ntre dou celule;
una care trimite semnalul, celalt care l recepteaz. n funcie de distana la care se afl celulele
care semnalizeaz ntre ele, cile de semnalizare se mpart n:

- endocrine, atunci cnd celulele se afl la distan, iar molecula semnal trebuie s fie
transportat de umorile organismului (de regul de snge);
- paracrine, atunci cnd celulele se afl n imediata vecintate;
- autocrine, atunci cnd semnalul este transmis i receptat de aceeai celul;
- juxtacrine, cnd celulele sunt joncionate.

Pentru primele trei ci semnalizarea se face prin molecule secretate de celula semnalizatoare.
Acestea trebuie s se deplaseze prin spaiile intercelulare pentru a ajunge la int, alte celule (n
primele dou cazuri), sau aceeai celul pentru semnalizarea autocrin. Semnalizarea juxtacrin
presupune interaciunea unor molecule din structura membranelor celor dou celule
(semanlizatoare, respectiv int).
Oricare ar fi tipul de cale de semnalizare, la iniierea fenomenului particip dou
componente: (i) molecula semnal, numit i ligand (secretat, sau expus la suprafaa
membranei de celula semnalizatoare) i (ii) receptorul de la nivelul celulei receptoare.
Ca urmare a interaciunii receptorului cu ligandul, deci ca urmare a receptrii unui
semnal, celula int declanaz unele procese celulare ce se constituie ca rspuns la semnalul
receptat. Rspunsurile celulare sunt de o mare diversitate. Aceast mare diversitate de rspunsuri
are la baz diversitatea de molecule semnal. Exist sute de molecule semnal, care pot afecta
celulele. Cum simultan pot s se exercite diverse semnale (diverse molecule semnal receptate
simultan de aceeai celul) rezult c celulele pot rspunde la milioane de combinaii posibile.
Cum capacitatea unei celule de a recepta un semanl este dependent de prezena receptorului
corespunztor la nivelul celulei, rezult c diversitatea rspunsurilor celulare este dependent i
de setul de receptori disponibili. Dar tipul de rspuns pe care celula l creeaz este dependent i
de setul de proteine efectoare, adic acele proteine care preiau semnalul de la receptor i
contribuie la desfurarea proceselor intracelulare care constituie rspunsul. Acesta este motivul
pentru care acelai stimul (aceeai molecul semnal) poate duce la rspunsuri diferite n tipuri
diferite de celule. De exemplu, acetilcolina determin contracia la nivelul celulelor musculare
striate scheletale, dar conduce la relaxarea muchiului cardiac, pe cnd n celulele secretoare ale
mucoasei gastrice sau din medulosuprarenal duce la declanarea secreiei.
Oricare ar fi combinaia de semnale care acioneaz asupra unei celule la un moment dat,
rspunsul celular va determina unul dintre trei efecte posibile:

(iv) supravieuirea, care reprezint efectul cel mai des ntlnit;
(v) proliferarea, este declanat la anumite combinaii de semnale ce apar atunci cnd
este nevoie de sporirea populaiei celulare ntr-o anume zon a unui esut (ine de
capacitatea organismului de a-i menine homeostazia celular);
(vi) moartea celular programat (apoptoza), apare n lipsa oricrui semnal, sau n
prezena unor semnale specifice.

Indiferent de rspunsul celular pe care l determin, putem defini patru etape ale
procesului de semnalizare celular. Acestea sunt:

1. Iniierea semnalizrii prin legarea ligandului (moleculei semnal) de receptor.
Legarea ligandului de receptor presupune o interaciune afin, de mare specificitate,
caracteristic sistemelor biologice, care se bazeaz pe o multitudine de interaciuni
fizico-chimice dintre cele mai diverse exercitate simultan (puni de hidrogen,
Dr. Mircea Leabu Funcionarea membranelor ca sistem integrat
14
electrostatice, hidrofobe), interaciuni care contribuie la punerea n comun a suprafee
organizate de structurile teriare i/sau cuaternare ale celor dou molecule.
2. Transducia semnalului i activarea receptorului: Transducia semnalului are la
baz modificri conformaionale la nivelul moleculei receptorului, datorate
interaciunii cu ligandul. Pentru receptorii aflai la nivelul membranei celulare, cei
mai numeroi din cunotinele noastre de pn acum, modificrile se propag, prin
intermediul domeniului transmembranar al receptorului, la endodomeniu, atragnd
activarea receptorului.
3. Activarea efectorului i amplificarea semnalului: Receptorul activat activeaz, la
rndul su, proteina efectoare din pasul imediat urmtor al semnalizrii. O prim
amplificare a semanlului este efectuat chiar la acest nivel deoarece un receptor
activat poate activa un numr mai mare de molecule ale efectorului. innd cont de
faptul c un proces de semnalizare presupune un numr mai mare de tipuri de efectori
acionnd secvenial, fiecare prelund semnalul de la tipul anterior i transmindu-l
tipului urmtor (din amonte n aval), ampificarea semnalului crete la fiecare etap a
cii de semnalizare.
4. Atenuarea semnalului i desensibilizarea celulei: Aceast etap presupune
inactivarea efectorilor i desfacerea ligandului de receptor. Inactivarea efectorilor
poate nsemna cel mai adesea lizarea moleculelor activatoare (de exemplu scindarea
GTP la GDP), sau scoaterea funciunilor activatoare de pe molecula efectorului
(defosforilarea dac fosforilarea a presupus activarea, sau fosforilarea dac forma
activ presupune defosforilarea). Desfacerea complexului ligand-receptor se face de
regul dup internalizarea acestuia n sistemul endozomal, care poate fi urmat de
degradarea ligandului, sau chiar i a recptorului n lizosomi.

Marea diversitate a receptorilor cunoscui se poate clasifica n funcie de mai multe
criterii. Un prim criteriu l reprezint proprietile fizico-chimice ale moleculei semnal. n funcie
de acest criteriu mprim receptorii celulari n dou categorii:

1. Receptori pentru molecule semnal lipofile (hidrofobe);
2. Receptori pentru molecule semnal hidrofile.

Receptorii pentru liganzi lipofili sunt proteine citosolice care preiau hormonul dup
difuzia acestuia prin membran i dup formarea complexului ligand-receptor acesta este
transportat n nucleu, unde i ndeplinete funcia, aceea de a modula exprimarea genelor. Sunt
cunoscute 6 tipuri de receptori pentru liganzi lipofili: receptor la cortizol, receptor la estrogeni,
receptor la progesteron, receptor la vitamin D, receptor la hormoni tiroidieni i receptor la
acid retinoic. Oricare ar fi tipul de receptor din aceast categorie, ei prezint unele caracteristici
structurale i funcionale comune. Acestea sunt: un sit de legare a hormonului, un sit de legare la
molecula de ADN i un domeniu de activare a transcrierii. Similar este i mecanismul de
activare. n stare inactiv, n citosol, nainte de a interaciona cu ligandul, receptorul este cuplat
la un complex proteic inhibitor. n aceast stare complexat, inactiv, receptorul are mascate
situl de legare la ADN i domeniul de activare a transcrierii. Dup legarea ligandului, receptorul
se desprinde de complexul de inactivare i este translocat n nucleu unde, datorit expunerii
locului de legare la ADN, se ataaz n zone favorabile activrii genei a crei transcriere este
determinat i procesul de transcriere este declanat. Transcrierea genei i exprimarea acesteia
n celul, prin proteina codificat, determin producerea rspunsului specific perechii respective
receptor-ligand.
Receptorii pentru liganzi hidrofili sunt cei mai numeroi. Ei se pot mpri n funcie de
mecanismul de semnalizare pe care l declanaz n:

1. Receptori cu funcie de canal ionic;
2. Receptori cuplai cu proteine G heterotrimerice;
3. Receptori cu activitate guanilat-ciclazic;
Dr. Mircea Leabu Funcionarea membranelor ca sistem integrat
15
4. Receptori cu activitate tirozin-kinazic;
5. Receptori cuplai cu tirozin-kinaze citosolice;
6. Receptori cu activitate Ser/Thr-kinazic;
7. Receptori cu activitate fosfatazic.

Chiar din denumirile lor se deduce c mecanismele prin care receptorii la liganzi hidrofili
sunt activai se caracterizeaz prin mare diversitate.
Un exemplu de receptor cu funcie de canal ionic am prezentat deja mai nainte la
transportul prin membran. Este vorba de receptorul la acetilcolin de la nivelul sarcolemei
(membrana celulei musculare striate scheletale) din sinapsa neuro-muscular.
Receptorii cuplai cu proteine G heterotrimerice sunt proteine transmembranare
multipas tip I cu 7 treceri prin planul membranei, cu un ectodomeniu mare, structurnd situl de
lgare a ligandului i cu endodomeniul coninnd situl de interaciune cu proteinele G
heterotrimerice, ct i locuri de fosforilare necesare desensibilizrii. Au fost identificai 9
receptori activai prin adrenalin, 5 pentru acetilcolin i cel puin 15 pentru serotonin. Succint,
mecanismul de aciune al acestor receptori implic urmtoarele etape:

1. legarea ligandului i activarea receptorului;
2. interaciunea receptorului activat cu proteinele G trimerice i activarea acestora prin
eliberarea GDP, legarea GTP i disocierea trimerului n subunitatea i
heterodimerul ;
3. transmiterea semnalului la efectorul din aval (adenilat-ciclaz activnd-o sau
inhibnd-o, sau fosfolipaza C-).

Aadar receptorii cuplai cu proteinele G heterotrimerice au mecanisme diferite,
acionnd asupra unor efectori diferii i deci inducnd rspunsuri diferite n funcie de tipul de
protein G heterotrimeric implicat. Au fost identificate mai multe tipuri de proteine G
hetrotrimerice, cunoscndu-se cam 20 subuniti , cel puin 4 subuniti i 7 subuniti
pentru celulele mamiferelor. Amintim 6 dintre acestea:

1. proteine G stimulatoare (G
s
), care conin
s
activnd adenilat-ciclaza i canale de
Ca
2+
;
2. proteine G inhibitoare (G
i
), care conin
i
inhibnd adenilat-ciclaza i activnd canale
de K
+
;
3. proteine G
q
, care conin
q
i activeaz fosfolipaza C-;
4. proteine G olfactorii (G
olf
), care conin
olf
i activeaz adenilat-ciclaza n neuronii
olfactorii;
5. protein G
o
, care conin
o
inhibnd canale de Ca
2+
i activnd canale de K
+
i
fosfolipaza C-;
6. proteine G
t
(transducin), care conin
t
i activeaz GMPc-fosfodiesteraza n celulele
fotosensibile cu bastonae.

Din diversitatea de fenomene controlate de receptorii cuplai cu proteinele G
heterotrimerice putem aminti modularea glicolizei n muchiul striat scheletal. Proteinkinaza A,
activat de adenozin monofosfatul ciclic (AMPc), produs de adenilat ciclaz, un efector al
receptorilor cuplai cu proteine G heterotrimerice, intete enzimele implicate n metabolismul
glicogenului, inhibnd formarea acestuia i favoriznd eliberarea glucozei. Eliberarea glucozei se
face sub form de glucozo-1-fosfat, ca urmare a unui proces celular ce ncepe cu activarea
fosforilazkinazei prin fosforilarea indus de proteinkinaza A. Fosforilazkinaza fosforilat (aadar
n form activat), activeaz mai departe glicogen-fosforilaza, care elibereaz glucozo-1-fosfatul.
Glucoza astfel eliberat intr n procesul de glicoliz. Procesul de eliberarea a glucozei din
glicogen face parte din fenomenele de rspuns rapid induse de receptorii cuplai cu proteinele G
heterotrimerice.
Dr. Mircea Leabu Funcionarea membranelor ca sistem integrat
16
Un alt rspuns rapid se datoreaz activrii fosfolipazei C-. Aceast cale de semnalizare
duce la declanarea cascadei fosfoinozitidelor. Fosfatidilinozitolii sunt mai nti fosforilai
succesiv la hidroxilii din diversele poziii ale inozitolului (de exemplu la hidroxilii din poziiile 4
i 5). Apoi, fosfolipaza C-, specific pentru fosfoinozitide, scindeaz fosfatidilinozitol-4,5-
bisfosfaii la inozitol-1,4,5-trisfosfat (IP
3
) i diacilgliceroli. IP
3
difuzeaz rapid de la nivelul
membranei celulare n citosol, activnd canale de calciu comandate chimic din membrana
reticulului endoplasmic, determinnd eliberarea de Ca
2+
din lumenul organitului i creterea
concentraiei acestuia n citosol. Creterea concentraiei citosolice de Ca
2+
determin efecte
diverse n funcie de tipul celulei. n celulele musculare striate cardiace, IP
3
deschide canalul de
calciu activat chimic din membrana reticulului sarcoplasmic, determinnd contracia muscular.
Moleculele mici de tipul AMPc, sau IP
3
cu rol n transmiterea semnalelor dinspre
receptori ctre efectori sunt denumite mesageri secunzi.
Diacilglicerolul eliberat din fosfatidilinozitol-trisfosfai are, la rndul su, dou poteniale
roluri n semnalizare, acionnd i el ca mesager secund.
Pe de o parte, poate activa proteinkinaze C, efectori cu activitate serin/treonin-kinazic
dependent de Ca
2+
(de unde i numele de proteinkinaze C). Activarea proteinkinazelor C are loc
dup recrutarea acestora din citosol la nivelul feei citoplasmatice a membranei celulare. Aceast
recrutare este dependent de creterea concentraiei citosolice de Ca
2+
. Ajunse la nivelul feei
citoplasmatice a membranei, proteinkinazele C sunt activate prin efectul cumulat al Ca
2+
,
diacilglicerolului i fosfatidilserinelor (fosfolipide anionice prezente, n condiii normale, numai
n foia intern a bistratului). Activarea proteinkinazelor C este urmat de fosforilarea unei
diversiti de efectori, diferind de la un tip la altul de celul i declannd o diversitate de
rspunsuri.
Alt posibil rol al diacilglicerolului este acela de a elibera (sub aciunea fosfolipazelor A2,
alt efector al mecanismelor de semnalizare), acidul arahidonic din compoziia sa, care este apoi
metabolizat la alte patru categorii de mesageri secunzi:

(i) prostaglandine
(ii) prostacicline
(iii) tromboxani
(iv) leucotriene

Primele trei categorii sunt formate pe calea ciclooxigenazelor, cea de-a patra pe calea
lipooxigenazei. Toi fac parte din clasa eicosanoizilor i acioneaz n reaciile inflamatorii i n
producerea senzaiilor de durere. Medicamentele antiinflamatorii (aspirina, antiinflamatoarele
nesteroidice, sau cortisonul) acioneaz prin inhibarea producerii de eicosanoizi.
De remarcat c n exemplele mecanisme amintite mai sus am introdus noiunea de
efector. Se deduce c numim efector orice protein implicat n mecanismele de semnalizare
celular care primete mesajul din amonte, activndu-se i l transmite n aval activnd
urmtorul partener din proces. n amonte de un efector se poate afla receptorul nsui, un
mesager secund, sau un alt efector activat.
Mergem mai departe ncercnd s exemplificm i celelalte tipuri de receptori pentru
liganzi hidrofili.
Ca exemplu de receptor cu activitate guanilat-ciclazic menionm receptorul la
factorul natriuretic atrial. Acesta este glicoprotein protein transmembranar unipas, tip I, cu
masa molecular de ~135kD care, dup leagarea ligandului pe ectodomeniu, activeaz domeniul
guanilat-ciclazic din endodomeniu. De remarcat c endodomeniul receptorului conine i un
domeniu omolog kinazic a crui menire nu este cunoscut. Guanilat monofosfatul ciclic (GMPc)
format este mesagerul secund care transmite semnalul unor proteinkinaze dependente de GMPc
(G-kinaze) care fosforileaz specific la Ser sau Thr proteine efectoare din aval necesare crerii
rspunsului celular. Efectele factorului natriuretic atrial (se numete aa deoarece este secretat de
cardiomiocitele atriale) sunt: stimularea eliminrii de sodiu i ap la nivelul rinichilor i
Dr. Mircea Leabu Funcionarea membranelor ca sistem integrat
17
relaxarea celulelor musculare netede din peretele vascular, ambele conducnd la reducerea
tensiunii arteriale.
Receptorii cu activitate tirozin-kinazic sunt cei mai numeroi din datele de care
dispunem n acest moment. Ei se caracterizeaz printr-o mare diversitate structural acoperind
semnalizarea celular prin cea mai mare parte a factorilor de cretere cunoscui. Primul
identificat a fost receptorul la factorul de cretere epidermal (EGF). Ligandul acestui receptor
este un peptid de ~6kDa, cu 53 aminoacizi n structur.
De regul receptorii cu activitate tirozin-kinazic sunt protine transmembranare unipas,
tip I, care exist ca monomeri n stare liber (face excepie receptorul la insulin, aflat sub form
de dimeri, legai prin punte disulfuric), iar dup interaciunea cu ligandul dimerizeaz.
Domeniul transmembranar este structurat n -helix i conine ntre 28 i 35 de aminoacizi. n
ciuda diversitii lor, exist cteva trsturi comune reprezentate prin anumite domenii
structurale relativ bine conservate. O trstur comun la nivelul poriunii citosolice este
reprezentat de o zon cu activitate tirozin-kinazic (domeniu tirozin-kinazic). Ectodomeniul
(domeniul extracelular) reprezint o poriune semnificativ a lanului polipeptidic cu captul N-
terminal al acestuia i este glicozilat. La nivelul ectodomeniului se pot gsi domenii repetitive
bogate n leucin, domenii bogate n cisteine, domenii repetitive fibronectinice de tip III, sau
domenii de tip imunoglobulinic. Existena unor asemenea domenii reprezint o posibilitate de
clasificare a acestor receptori n familii i subfamilii. n acest moment exist o clasificare pe baza
tipului de ligand cu care receptorii interacioneaz. Pe de alt parte, pe baza asemnrilor
structurale receptorii tirozin-kinazici se pot include n superfamilii de proteine. Receptorii cu
domenii de tip imunoglobulinic sunt inclui n superfamilia imunoglobulinelor.
Mecanismul de principiu prin care aceti receptori funcioneaz ar putea fi sintetizat prin
urmtoarele etape:

1. Legarea ligandului atrage att activarea domeniului catalitic de la nivelul poriunii
citoplamatice ct i dimerizarea receptorilor datorit modificrilor conformaionale pe
care le induce (n cazul receptorului la factorul de cretere derivat din plachete, prescurtat
PDGF, de la platelet-derived growth factor, ligandul este dimer i dimerizarea
receptorului este atras de aceast caracteristic a factorului de cretere);
2. Activarea i dimerizarea realizeaz condiiile unor autofosforilri ncruciate la multiple
tirozine ale domeniilor citosolice ale receptorului;
3. Atragerea i interaciunea cu efectori care conin domenii omoloage Src de tip 2,
abreviate prin domenii SH2, cu SH de la Src homology, tirozinele modificate prin
fosforilare reprezentnd zonele de interaciune;
4. Activarea efectorilor legai prin SH2.

Exist patru tipuri de efectori mai bine cunoscui care respect mecanismul ale crui
etape au fost prezentate mai sus.
ncepem amintirea acestor efectori cu fosfolipaza C-, care are dou domenii SH2. Dup
legarea la receptorul activat, funcioneaz pe calea semnalizrii prin fosfoinozitide, aa cum a
fost prezentat mai sus n cazul fosfolipazei C-. Aadar, cascada fosfoinozitidelor poate fi
declanat att prin receptorii cuplai cu proteine G heterotrimerice, ct i prin receptorii tirozin-
kinazici.
O a doua categorie de efectori activai de receptor tirozin-kinaze este reprezentat de
protein tirozin-kinaze fr funcie de receptori de tip Src. Aceti efectori au funcii att de
diverse nct nu este locul de a ne ocupa de ei aici.
Alt efector este fosfatidilinozitol 3-kinaza (abreviat PI3K, de la numele englezesc). Are
tot dou domenii SH2, contribuie dup activare la formarea unor derivai de fosfatidilinozitoli
[fosfatidilinozitol 3-fosfat, fosfatidilinozitol (3,4)-bisfosfat, sau fosfoinozitol (3,4,5)-trisfosfat].
Dei PI3K este acceptat c acioneaz n reglarea proliferrii celulare, n dinamica morfologiei
Dr. Mircea Leabu Funcionarea membranelor ca sistem integrat
18
celulare i motilitate, detaliile mecanismelor acestor procese sunt departe de a fi pe deplin
elucidate.
Cea de-a treia categorie de efectori pe care o amintim este cea a proteinelor care
activeaz GTP-azele mici, notate simbolic cu GAP, de la GTP-ase-activating protein. GTP-
azele mici sunt proteine monomerice cu o mas molecular n jur de 25kDa care au proprietatea
de a lega GTP pe care l hidrolizeaz cu concursul GAP. GTP-azele mici sunt activate ct timp
conin GTP i se inactiveaz dup hidroliza acestuia. Datorit capacitii lor de a trece ciclic din
stare activ n stare inactiv sunt cunoscute i sub numele de comutatori moleculari. n ciclul de
activare-inactivare mai particip i un alt partener, factorul de schimbare a guanozin-
nucleotidului (abreviat de la numele englezesc, GEF). Cnd nu este nevoie de funcia lor GTP-
azele mici sunt localizate n citosol complexate cu o protein inhibitoare numit inhibitor de
disociere a guanozin-nucleotidului, prescurtat GDI, de la guanine nucleotide dissociation
inhibitor. Cel mai adesea activarea GTP-azelor mici este nsoit de recrutarea lor la nivelul
membranelor (plasmalem sau endomembrane), recrutare favorizat i de acilarea lor. Unul din
rolurile GTP-azelor este acela de a participa la controlul corectitudini traficului structurilor
membranare n celul (de exemplu traficul dintre reticulul endoplasmic i aparatul Golgi).
Receptorii cuplai cu tirozin-kinaze citosolice includ o mare diversitate de receptori
cum ar fi cei pentru hormonii de cretere, cei pentru citokine, receptorii specifici antigenelor
(receptorii pentru antigene) din limfocitele T i B devenite imunocompetente. Aceti recetori,
dup legarea ligandului, transmit semnalul prin tirozin-kinaze citosolice asociate. Mai bine
cunoscute sunt tirozin-kinazele citosolice din familia Src, n timp ce cele din familia Janus
relativ de curnd descrise sunt mai puin cunoscute. Tirozin-kinazele citosolice fosforileaz o
multitudine de efectori transmind mesajul primit de celul n aval pentru inducerea rspunsului
celular adecvat.
Receptorii cu activitate Ser/Thr-kinazic sunt reprezentai de receptorii la factorii de
cretere transformani . Factorii de cretere transformani reprezint o familie de peptide ce
mediaz, prin intermediu receptorilor lor, o multitudine de fenomene celulare n vertebrate.
Efectele difer de la un tip de celul la altul putnd inhiba proliferarea, stimulnd sinteza de
proteine de matrice extracelular inclusiv formarea de os, sau determinnd micarea celular
chemotactic.
Exemplul de receptor cu activitate fosfatazic estre glicoproteina transmembranar
unips CD45 din membrana limfocitelor T i B care particip n mod esenial la activarea prin
antigene (prescurtarea CD vine de la cluster of differentiation seminificnd tipuri de proteine
de pe suprafaa celular prin care sunt desemnate limfocitele n cursul diferenierii).
Pentru o imagine mai complet a diversitii fenomenelor pe care receptorii le pot
declana n celule trebuie menionat c aceasta sporete prin faptul c activarea lor se poate face
difereniat n diferite momente. Celula este determinat s se comporte astfel cum i impune
combinaia de semnale pe care le primete la un moment dat. Comportamentul ei ine de
echilibrul ntre rspunsurile sinergice la stimuli.
Un ultim aspect pe care l abordm n contextul semnalizarii celulare este semnalizarea
prin integrine i/sau molecule de adeziune celular (prescurtat CAM de la numele englezesc).
Aceste tipuri de semnalizare pot fi incluse n categoria semnalizrilor juxtacrine.
Integrinele sunt proteine transmembranare organizate ca heterodimeri . Fiecare
subunitate reprezint o protein transmembranar unipas, tip I. Dup datele cunoscute i
recunoscute n prezent de comunitatea tiinific a domeniului, exist 18 tipuri de subuniti i
8 tipuri de subuniti . Totui, numai 24 de integrine (adic de heterodimeri au fost
identificate pn n prezent. Integrinele sunt receptori celulari pentru proteinele de matrice
extracelular. Ele transmit semnale celulei despre starea ei de ataare i despre caracteristici ale
ambianei extracelulare. Celula se comport diferit dac este ataat la matrice sau nu. Mai mult,
integrinele sunt implicate n motilitatea celular. Motilitatea celular este un fenomen dependent
i de semnale primite de celul de la alte tipuri de liganzi, prin receptorii corespunztori. n
Dr. Mircea Leabu Funcionarea membranelor ca sistem integrat
19
aceast situaie este vorba de chemotaxie. Atunci cnd motilitatea este indus numai de
interaciunile celulei cu matricea extracelular poart numele de haptotaxie. Mecanismele
haptotaxiei sunt mai puin cunoscute n acet moment. Practic semnalele pe care celula le
primete prin integrine analizate simultan cu celelalte semnale influeneaz proliferarea celular,
diferenierea celular, apoptoza (tip de moartea celular programat). Apoptoza indus de
detaarea celulelor de substrat este denumit anoikis.
CAM sunt proteine transmembranare unipas implicate n adeziunea celulelor ntre ele.
Ele transmit semnale celulei dac sunt sau nu implicate n asemenea interaciuni, numite de
regul jonciuni celulare. Celula se comport diferit dac este aderat de alte celule sau este
liber.

Rezumat

Membranele celulare acioneaz ca sisteme integrate la nivelul crora componentele
moleculare, dei sunt de o mare diversitate, coopereaz pentru asigurarea schimbului de
substan i de informaie dintre celul i mediu. Fr aceste schimburi celula nu poate
supravieui i nici nu se poate adapta.
Puine sunt substanele care pot trece liber prin membran prin difuziune simpl.
Schimburile de substan se realizeaz cu concursul principal al proteinelor membranare,
fenomenele fcnd parte din ceea ce numim difuziune facilitat. Totui caracteristicile fizico-
chimice ale lipidelor membranare influeneaz funcia proteinelor. Fenomenele de schimb de
substan ntre celul i mediu poart denumirea de transport membranar. Pentru transportul de
ioni i molecule mici exist structuri proteice numite canale, pompe, respectiv transportori. Acest
tip de transport este numit transport prin membran.
Pentru macromolecule sau material particulat transportul se face cu implicarea unor
microdomenii de membran (caveole, vezicule cu nveli). Acest transport este numit transport
cu membran. n funcie de sensul transportului definim endocitoza (transport cu membran din
exterior, adic din mediul extracelular n interiorul celulei), exocitoza (transport cu membran
din celul n exterior). Exist i un al treilea fenomen specific celulelor epiteliale
monostratificate numit transcitoz. Transcitoza reprezint transportul cu membran prin care
celula preia substana de transportat de la un pol (apical sau latero-bazal) o traverseaz prin
corpul ei i o elimin la polul cellalt. n aceast excursie substana poate sau nu s fie
modificat de celul.
Schimbul de informaie este realizat de celul prin fenomenele de semnalizare celular.
Componentele ce asigur acest schimb sunt tot proteine denumite, n general, receptori
membranari. Receptorii sunt, de regul, proteine transmembranare unipas. Exist o mare
diversitate de tipuri de receptori care presupun o diversitate de mecanisme de semnalizare.
Totui, se pot puncta nite aspecte general valabile ale fenomenelor de semnalizare. Semnalele
sunt amplificate n interiorul celulei i de aceea nu este nevoie de concentraii ridicate de stimul
(ligand) pentru ca celula s rspund. Amplificarea se realizeaz prin mesageri secunzi i/sau
efectori. La unele mecanisme de semnalizare particip i lipide membranare a cror complexitate
structural este exploatat de celul. Lipidele sunt implicate n mecanisme cu mesageri secunzi.
n biologia celular noiunea de receptor este mbogit n coninut n comparaie cu cea
folosit n farmacologie. Astfel proteine membranare care sunt parteneri de interaciune ai altor
proteine din matricea extracelular (integrine) sau din membrana altor celule (molecule de
adeziune celular) au i rol de transmitere de semnale celulelor crora le aparin, deci rol de
receptor.

Bibliografie specific
1. Montel-Hagen A, Sitbon M, Taylor N. (2009) Erythroid glucose transporters. Curr Opin Hematol. 16: 165-
172.
2. Uldry M, Thorens B. (2004) The SLC2 family of facilitated hexose and polyol transporters. Pflugers Arch.
447: 480-489.
Dr. Mircea Leabu Funcionarea membranelor ca sistem integrat
20
3. Hou JC, Pessin JE. (2007) Ins (endocytosis) and outs (exocytosis) of GLUT4 trafficking. Curr Opin Cell
Biol. 19: 446-473.
4. Cheeseman C. (2008) GLUT7: a new intestinal facilitated hexose transporter. Am J Physiol Endocrinol
Metab. 295: E238-E241.
5. Mavros Y, Simar D, Singh MA. (2009) Glucose Tranporter-4 expression in monocytes: a systematic
review. Diabetes Res Clin Pract. 84: 123-131.
6. Wright EM, Turk E. (2004) The sodium/glucose cotransport family SLC5. Pflugers Arch. 447: 510-518.
7. Wright EM, Hirayama BA, Loo DF. (2007) Active sugar transport in health and disease. J Intern Med. 261:
32-43.
8. Williamson RC, Toye AM. (2008) Glycophorin A: Band 3 aid. Blood Cells Mol Dis. 41: 35-43.
9. Satchwell TJ, Shoemark DK, Sessions RB, Toye AM. (2009) Protein 4.2: a complex linker. Blood Cells
Mol Dis. 42: 201-210.
10. Alper SL. (1991) The band 3-related anion exchanger (AE) gene family. Annu Rev Physiol. 53: 549-564.
11. Jay DG. (1996) Role of band 3 in homeostasis and cell shape. Cell. 86: 853-854.
12. Barzilai A, Rahamimoff H. (1987) Stoichiometry of the sodium-calcium exchanger in nerve terminals.
Biochemistry. 26: 6113-6118.
13. DiPolo R, Beaug L. (2006) Sodium/calcium exchanger: influence of metabolic regulation on ion carrier
interactions. Physiol Rev. 86, 155-203.
14. Yang YC, Fann MJ, Chang WH, Tai LH, Jiang JH, Kao LS. (2010) Regulation of sodium-calcium
exchanger activity by creatine kinase under energy-compromised conditions. J Biol Chem. Jun 24. [Epub
ahead of print].
15. Ren X, Nicoll DA, Philipson KD. (2006) Helix packing of the cardiac Na+-Ca2+ exchanger: proximity of
transmembrane segments 1, 2, and 6. J Biol Chem. 281: 22808-22814.
16. Bers DM. (2000) Calcium fluxes involved in control of cardiac myocyte contraction. Circ Res. 87: 275-
281.
17. Arnadttir J, Chalfie M. (2010)Eukaryotic mechanosensitive channels. Annu Rev Biophys. 39: 111-137.
18. Blanco G, Mercer RW. (1998) Isozymes of the Na-K-ATPase: heterogeneity in structure, diversity in
function. Am J Physiol. 275(5 Pt 2): F633-F650.
19. Blanco G. (2005)Na,K-ATPase subunit heterogeneity as a mechanism for tissue-specific ion regulation.
Semin Nephrol. 25: 292-303.
20. Axelsen KB, Palmgren MG. (1998) Evolution of substrate specificities in the P-type ATPase superfamily. J
Mol Evol. 46: 84-101.
21. Beggah AT, Jaunin P, Geering K. (1997) Role of glycosylation and disulfide bond formation in the b
subunit in the folding and functional expression of Na,K-ATPase. J Biol Chem. 272: 1031810326.
22. Geering K. (2008) Functional roles of Na,K-ATPase subunits. Curr Opin Nephrol Hypertens. 17: 526-532.
23. Fzesi M, Gottschalk KE, Lindzen M, Shainskaya A, Kster B, Garty H, Karlish SJ. (2005) Covalent
cross-links between the gamma subunit (FXYD2) and alpha and beta subunits of Na,K-ATPase: modeling
the alpha-gamma interaction. J Biol Chem. 280: 18291-18301.
24. Lindzen M, Gottschalk KE, Fzesi M, Garty H, Karlish SJ. (2006) Structural interactions between FXYD
proteins and Na+,K+-ATPase: alpha/beta/FXYD subunit stoichiometry and cross-linking. J Biol Chem.
281: 5947-5955.
25. Berl T. (2009) How do kidney cells adapt to survive in hypertonic inner medulla? Trans Am Clin Climatol
Assoc. 120: 389-401.
26. Faller LD. (2008) Mechanistic studies of sodium pump. Arch Biochem Biophys. 476: 12-21.
27. Nelson N, Perzov N, Cohen A, Hagai K, Padler V, Nelson H. (2000) The cellular biology of proton-motive
force generation by V-ATPases. J Exp Biol. 203(Pt 1): 89-95.
28. Nakanishi-Matsui M, Sekiya M, Nakamoto RK, Futai M. (2010) The mechanism of rotating proton
pumping ATPases. Biochim Biophys Acta. 1797: 1343-1352.
29. Biemans-Oldehinkel E, Doeven MK, Poolman B. (2006) ABC transporter architecture and regulatory roles
of accessory domains. FEBS Lett. 580: 1023-1035.
30. Oldham ML, Davidson AL, Chen J. (2008) Structural insights into ABC transporter mechanism. Curr Opin
Struct Biol. 18: 726-733.
31. Huang Y, Sade W. (2006) Membrane transporters and channels in chemoresistance and -sensitivity of
tumor cells. Cancer Lett. 239: 168-182.
32. Oostendorp RL, Beijnen JH, Schellens JH. (2009) The biological and clinical role of drug transporters at
the intestinal barrier. Cancer Treat Rev. 35: 137-147.
33. Nagao K, Kimura Y, Mastuo M, Ueda K. (2010) Lipid outward translocation by ABC proteins. FEBS Lett.
584: 2717-23.
34. Tissires P, Pugin J. (2009) The role of MD-2 in the opsonophagocytosis of Gram-negative bacteria. Curr
Opin Infect Dis. 22: 286-291.
35. de Almeida CJ, Linden R. (2005) Phagocytosis of apoptotic cells: a matter of balance. Cell Mol Life Sci.
62: 1532-1546.
Dr. Mircea Leabu Funcionarea membranelor ca sistem integrat
21
36. Elliott MR, Ravichandran KS. (2010) Clearance of apoptotic cells: implications in health and disease. J
Cell Biol. 189: 1059-1070.
37. Goldstein JL, Basu SK, Brunschede GY, Brown MS. (1976) Release of low density lipoprotein from its
cell surface receptor by sulfated glycosaminoglycans. Cell. 7: 85-95.
38. Goldstein JL, Brown MS. (1976) The LDL pathway in human fibroblasts: a receptor-mediated mechanism
for the regulation of cholesterol metabolism. Curr Top Cell Regul. 11: 147-181.
39. Brown MS, Ho YK, Goldstein JL. (1976) The low-density lipoprotein pathway in human fibroblasts:
relation between cell surface receptor binding and endocytosis of low-density lipoprotein. Ann N Y Acad
Sci. 275: 244-257.
40. Pearse BM. (1976) Clathrin: a unique protein associated with intracellular transfer of membrane by coated
vesicles. Proc Natl Acad Sci U S A. 73: 1255-1259.
41. Ungewickell E. (1983) Biochemical and immunological studies on clathrin light chains and their binding
sites on clathrin triskelions. EMBO J. 2: 1401-1408.
42. Anderson RG, Kamen BA, Rothberg KG, Lacey SW. (1992) Potocytosis: sequestration and transport of
small molecules by caveolae. Science. 255: 410-411.
43. Matsue H, Rothberg KG, Takashima A, Kamen BA, Anderson RG, Lacey SW. (1992) Folate receptor
allows cells to grow in low concentrations of 5-methyltetrahydrofolate. Proc Natl Acad Sci U S A. 89:
6006-6009.
44. Anderson RGW. (1998) The caveolae membrane system. Ann Rev Biochem. 67: 199-225.
45. Mineo C, Anderson RG. (2001) Potocytosis. Robert Feulgen Lecture. Histochem Cell Biol. 116: 109-118.
46. Doherty GJ, McMahon HT. (2009) Mechanisms of endocytosis. Annu Rev Biochem. 78: 857-902.
47. Hansen CG, Nichols BJ. (2009) Molecular mechanisms of clathrin-independent endocytosis. J Cell Sci.
122(Pt 11): 1713-1721.
48. Grant BD, Donaldson JG. (2009) Pathways and mechanisms of endocytic recycling. Nat Rev Mol Cell Biol.
10: 597-608.
49. Doherty GJ, McMahon HT. (2009) Mechanisms of endocytosis. Annu Rev Biochem. 78: 857-902.
50. Masilamani M, Peruzzi G, Borrego F, Coligan JE. (2009) Endocytosis and intracellular trafficking of
human natural killer cell receptors. Traffic. 10: 1735-1744.
51. Murphy JE, Padilla BE, Hasdemir B, Cottrell GS, Bunnett NW. (2009) Endosomes: a legitimate platform
for the signaling train. Proc Natl Acad Sci U S A. 106: 17615-1722.
52. Barclay JW, Morgan A, Burgoyne RD. (2005) Calcium-dependent regulation of exocytosis. Cell Calcium.
38; 343-353.
53. Mayer A. (2002) Membrane fusion in eukarzotic cells. Annu Rev Cell Dev Biol. 18; 289-314.
54. Verhage M, Srensen JB. (2008) Vesicle docking in regulated exocytosis. Traffic. 9: 1414-1424.
55. Leabu M. (2006) Membrane fusion in cells: molecular machinery and mechanisms. J Cell Mol Med. 10;
423-427.
56. Jena BP. (2004) Discovery of the Porosome: revealing the molecular mechanism of secretion and
membrane fusion in cells. J Cell Mol Med. 8: 1-21.
57. Jena BP. (2008) Porosome: the universal molecular machinery for cell secretion. Mol Cells. 26: 517-529.
58. Simionescu N. (1979) The microvascular endothelium. Segmental diferentiation, transcytosis: selective
distribution of anionic sites.. In Advances in Inflammation Research. Editat de Gerald Weissmann,
Bengt Samuelsson i Rodolfo Paoletti. Raven Press, New York, 1979, vol. I, pp. 61-70.
59. Geuze HJ, Slot JW, Strous GJ, Peppard J, von Figura K, Hasilik A, Schwartz AL. (1984) Intracellular
receptor sorting during endocytosis: comparative immunoelectron microscopy of multiple receptors in rat
liver. Cell. 37: 195-204.
60. Richardson JM, Kaushic C, Wira CR. (1995) Polymeric immunoglobin (Ig) receptor production and IgA
transcytosis in polarized primary cultures of mature rat uterine epithelial cells. Biol Reprod. 53: 488-498.
61. Tuma PL, Hubbard AL. (2003) Transcytosis: crossing cellular barriers. Physiol Rev. 83: 871-932.

Bibliografie general
1. MOLECULAR BIOLOGY OF THE CELL, autori: B. Alberts, D. Bray, J. Lewis, M. Raff, K. Roberts,
J.D. Watson, Garland Publishing Inc., New York & London, 1989 (ediia a II-a), 1994 (ediia a III-a), Garland
Science, New York, 2002 (ediia a IV-a); autori: B. Alberts, A. Johnson, J. Lewis, M. Raff, K. Roberts,
P.Walter, Garland Science, New York, 2008 (ediia a V-a).
2. MOLECULAR CELL BIOLOGY, autori: H. Lodish, A. Berk, S.L. Zipursky, P. Matsudaira, D. Baltimore,
J. Darnell, W.H. Freeman and Company, New York, 2000 (ediia a IV-a).